家禽坏死性肠炎疫苗的基础研究进展

收 稿 日期 ： Ｏ 卜０ — ９ ２ ｌ ３ ２
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４ ． 专题综述
家禽坏死性肠炎疫苗的基础研究进展一辜新贵 ，等
性肠 炎 是一个 不错 的选 择 。
３２ 弱 毒疫 苗 ．
具有 毒力 和保 护性抗 原 的蛋 白， 别 是 ： 气 夹膜 分 羧菌 溶 素 、 果糖 二 磷酸 醛 缩 酶 （Ｂ ） 延伸 因子 Ｇ ＦＡ 、 、
单 链 多肽 ， 子 量 约 为 ４ Ｄ 分 为 ２个 结 构 功 能 分 ３ｋ ，
区 ， 基端 具有 磷脂 酶 Ｃ活性 ， 基端 具有 鞘 磷脂 氨 羧 酶 活性 。 毒素 分为 １ Ｂ２毒素 。３ 、 １１毒素 是一 种 强毒 素 ， 具有 细胞 毒性 和致 死性 。 中 １２毒素 其 ３ 是近 年 来确 认 的 由 Ｃ型产 气 荚膜梭 菌 产生 的 一种
Ｐ Ｃ 抗 体 ， 析 了母源 抗体 与母 鸡 日龄之 问 ， Ｌ） 分 以及
株和 无毒 力菌株 与 免疫原 性 的关系 ， 果表 明： 结 用 有毒株 口服感 染免 疫 肉鸡 ，肉鸡可 以抵 抗 强毒 攻 击 ； 肉鸡用 无 毒株 免疫则 不 能产生 免疫保 护 。 而 在 另外 一个 试验 中 ， 无 ａ 毒 素基 因缺 失 的突 变 ２株
菌 产 生 的 ， ａ 毒 素 为 主 的外 毒 素 ， 次 是 Ｃ型 以 其 产 生 的 １ 素 。 ａ 毒 素 为 ３ ０个 氨基 酸 组 成 的 ３毒 ７
和 死亡 增 多 ： 临床 坏 死性 肠 炎也十 分 普遍 ， 可 亚 它 以减缓 生 长速度 ， 降低饲 料 转化 率 ， 至 引起继 发 甚 感 染 。 向饲 料 中添 加抗 生素 促 生长 剂 在一 定程 度 上 可 以控 制该病 ， 常用 的抗 生 素添加 剂 有杆 菌肽 、
在 导致 家禽坏 死 性肠 炎 的 Ａ型 产气 荚膜 梭 菌 中被 发现 。这一 新发 现为 家禽 坏死 性肠 炎疫 苗 的研 制
提供 了新 的思路 。 仅 围绕 ａ 毒 素研 究疫 苗是 不 仅 能有 效控 制家 禽坏 死性 肠 炎 的，必 须 同时 防止 不
苗载 体在 不 断尝试 ，坏死 性肠 炎 防控 问题 必将 通
证实其 毒 力与质 粒 上 ｐ２毒 素基 因无 关 。随后 通 过菌株 口服 感染 ２周龄 的 肉仔 鸡 ，研 究有 毒力 菌
毒 素类 毒素 可 以刺 激机 体产 生保 护性 抗体 。
随后 Ｈ ｉｒ等 用酶 联 免疫 吸 附试验 检测 ６ ｅｅ ｚ １
群 肉仔 鸡体 内抗 产气 荚 膜 梭 菌 ａ 毒 素 （ 脂 酶 磷
甘油 三磷 酸脱 氢酶 （Ａ Ｄ ） 假 想 蛋 白、 酮酸 ： ＧＰ Ｈ 、 丙 铁
产气 荚膜 梭菌 的磷脂 酶 Ｃ即 ｎ 毒素 ，是导致
氧化 还 原 酶 。这 些蛋 白能够与 感染 后获 得免 疫 的 肉仔鸡体 内的血清和肠 道抗体发 生反应 。 已知溶
素在产气荚 膜梭菌 中是一种 毒力 因子 ， 其它 ５种蛋 白抗原 多数 是产气 荚膜梭菌 糖酵解 中 的重 要的酶 。 它们 在其 它细菌或 寄生虫 （ 球菌 、 炎球 、 链 肺 血吸
广 东畜牧兽 医科技 ２１年 （ ３ 卷） ３ ０１ 第 ６ 第 期
专题综述 ・ ３・
家禽坏 死性肠 炎疫 苗的基础研 究进展
辜新 贵 ，郑 露 ，袁建 丰 。
（１常州 立 华畜 禽有 限公 司生 产技 术部 ，江 苏 常 州 ２ ３ ６ ；２ 湖 北省孝 感 市畜牧 局 ， ． １ １８ ． 湖 北 孝感 ４ ２ ０ ；３ 广 东省 农业 科 学 院兽医研 究所 ，广 东 广 州 ５ ０ ４ ３ １０ ． １ ６ ０）
Ｔ ｏ ｐ ｏ ［ 从 临床发 生坏 死性 肠 炎 的 肉仔 鸡 ｈ ｍ ｓ ｎｍ
Ｆ ｋｔ ｕ ａａ等 ∞在 １８ 分 别 用 产 气 荚 膜 梭 菌 ９８年
肉汤 培 养 物上 清 液 和 纯化 的 Ｇ 毒 素对 无 菌 鸡 进
行 攻 毒保护 试验 ，攻 毒后 鸡只 出现 死 亡并 产生 坏
摘 要 ：家禽 坏死性肠炎是 由产气 荚膜梭 菌引起 的家禽最重要 的梭 菌性肠 炎。坏 死性肠 炎的主要致 病
因子 、重要毒 素成分 的分 子结构及毒株 的免 疫学特性研 究是开发新 型疫苗的基础 ，本 文就家禽坏死性肠
炎疫 苗 的 基础 研 究 进展 进行 综 述 。
关键词：产 气荚膜梭菌；坏死性肠炎； 。 毒素；疫苗 【
家禽 坏死 性肠 炎 的产 生是 由于产 气 荚膜梭 菌 可 以产 生多种 外 毒素和 内毒素 导致 的 。多种菌 株 能够 导致 人类 、 畜和 家禽 疾病 ， 每 个菌 株只 能 家 但 产 生 ４种主 要 的毒 素 （ 一毒 素 ， ａ Ｂ一毒 素 ， ｓ一毒
因子产 生 。Ｋ ｌａｎ ｕ ｋｒ ｉ等 应 用免 疫 印迹和 质 谱技 术 ，从具有 毒 力 的产 气 荚膜 梭菌 分析 鉴 定 出 ６种
Ｌ ｖａ ｄ等 擒 了 ３个 实验 ， 现 给父 母代 种鸡 肌 ｏ ｌｎ 做 发 肉注射 Ｃ型和 Ａ型产 气 荚膜 的类 毒素氢 氧 化 针： 佐 剂苗后， 肉种鸡 体 内 ＩＧ抗体成 分 迅速 升 高 ， 体 ｇ 抗 还 可 以通 过 卵黄 传递 给 商 品代 。３个 试 验 中商 ＾ 代 获得 Ｃ型毒株 母源 抗体 后 ， 与对 照组 相 比 ， 生 发 亚 临床 症状 肠 炎概率 分 别 为 ：． ３０ ３ 、．６ 获 ０ ２ 、．３０ ５ ； 得 Ａ型 毒 株 母 源 抗 体 发 生 的概 率 分 别 为 ：． １ ０４ 、
活性 抗原 ， 有广泛 的保 护作 用 ， 具 分泌 的主 要 抗体 成分 有重要 的作用 。Ｌ ｖ ａ ｄ等 嘲 ｏ ｌｎ 发现 Ｉ Ｇ （ｇ ） ｇ ＩＹ 是坏 死性 肠炎 疾病 发生 过程 中免 疫应 答 的重 要成 分 。Ｋ ｌａ ｎ 等 ［ 现抗 原免 疫 后肠 道粘 膜 中 占 ｕｋ ｒ ｉ ７ Ｊ 发 主导 地位 的是特 异 性抗 体 Ｉ Ｙ ｇ ，推 断粘 膜 抗体 中 的 Ｉ Ｙ 在 产气 荚膜 梭 菌 免疫 应 答 中可 能更 重 要 。 ｇ
３ 疫 苗
３ １ 类毒素 疫 苗 ．
胺、 苯丙 氨酸或 亮氨 酸取 代后 的突 变株 ， 它们 的溶 血性 只 有野 毒 株 的 ｌ％ ３ ， 胞 毒性 只 有野 毒 １～７％ 细 株 的百分 之一 到万 分之 一 。综上所 述 ， ｑ 毒 素 对 分子 结构 和功 能 的解析 可 以为毒 素 的致病 机理 和 疫 苗开发 提供 新 的思路 。
过有 效 的疫 苗免 疫加 以解 决 。
同毒 素 的致病 作用 。
２ 保 护 性 抗 原
除 了研 究 致病 菌 的致病 成分 外 ，更 为重 要 的 是研 究致 病菌 入侵 机理 及保 护性 抗 原成 分 。通 过 保 护 性抗 原成 分 阻断病 原菌 的定 植 、增殖 及 毒力
１ 致 病 毒 素
的发生 ， 导致 该病 发生 的 因素十 分 复 杂 ， 须 有 但 必 更简 单 更便 宜 的控制 方式 。疫苗 免疫 在 疾病 控 制
新 的毒 素 。ｅ ｂｒ 等 ∞ 用基 因敲 除技术 构 建 了 Ｋ ｙｕ ｎ 利
无 ａ 毒 素 的突 变 体 ， 以诱 发 坏死 性 肠 炎 ， 可 因此 通 过实 验推翻 了过去 的传 统观 点 ： ａ 毒 素是 致 即 病性 必 不可 少 的因素 。 外 ， 此 他们 还 发现 了新 的与 坏死 性 肠 炎密 切 相 关 的毒 素 Ｎ ｔ ， 且 该毒 素 仅 ｅＢ 而
株 毒力 减弱 后 口服感 染 肉鸡 ，也可 以保 护 肉鸡 不 发生坏 死性 肠 炎， 由此 表 明保护 性抗 原 除 了 ａ 毒 素外还有 更 重要 的抗 原 。该研 究为 开发 口服 弱 毒 活 疫苗提 供 了 良好 的实验基 础 ， 同时也验 证 了 口 服 感染 免疫 是弱 毒疫 苗很好 的评 价方 式 。 外 ， 另 在 其研 究 中 肉仔 鸡 的最 早免疫 日龄 可 以是 ７日龄 。
中起 着 重 要 的作 用 ，ｅｅ Ｈ ｉｒ等 晗发 现 母源 Ｑ 毒 素
抗体 可 以保 护 肉仔鸡 不发 生 坏死 性肠 炎 ，却 没 有 验证 ｎ 毒素 是否 是 唯一 的保 护性 抗 原 。 随着 对 产 气 荚膜 梭 菌 （１ｓｒｄｕ ｅｆｉｇｎ）及 其 毒 素 ｃ０ ｔｉｉｍ ｐｒｒｎｅｓ 的 反复研 究 ， 的保护 性抗 原不 断被 发现 ， 型 疫 新 新
刘 家森 等 克 隆表 达 ａ 毒 素 的羧基 末 端 的
蛋 白序列 ， 并缺 失 去掉位 于氨 基末 端 内对 ａ 毒素
起 重 要 作用 的 Ｔ ｐ 、 ｉ ｌ 、 ｓ ５ 、 ｉ６ 等 氨 基 ｒ ｌ Ｈ ｓ １ Ａ ｐ ６ Ｈ ｓ８ 酸残 ，研 究结果 表 明表 达 的 蛋 白具 有 良好 的反
中图 分 类 号 ：￥ ５ ．４７ ２ ８ １３ ． 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１０ — ５ ７ ２ １） ３ ０ ０ －４ ０ ５ ８ ６ （０ １０ － ０ ３ ０
家禽 坏 死 性 肠 炎 （ｅｒｔｃｅｔｒｔｓⅣ 每 ｎｃｏｉ ｎｅｉｉ，Ｄ
年 给 全 球 的养 殖 业 造 成 的损 失 达 到 数 百 万 美 元
死 性肠 炎 的特 征性病 变 ， 抗 ａ 毒素血 清 可 以保 而
护 无菌 鸡不 受产 气荚 膜梭 菌 的侵 袭 ，从而 证 明 了
ａ 毒 素是 导 致 无菌 鸡 死 亡 的主 要 因 素 ， 同 时 ａ
的肠 道 中分离 了 ６株产气 荚膜 梭菌 ，通过 回 归试 验证 实其 中 ４株具 有毒 力 。通 过 分子 生物 学技 术
维 吉尼 霉 素 、 阿伏 帕星 、 林可 霉 素等 。然 而 耐药 性
和 药物 残 留 问题 使 抗生 素在 饲料 中的使 用 逐渐 受 到 限制 ， 以寻 找新 的控 制 途径 就显 得 更加 重要 。 所