超声提取虎杖白藜芦醇及其液质联用分析
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究虎杖中白藜芦醇苷是一种具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等多种生物活性的天然产物。
本文通过对虎杖中白藜芦醇苷的提取分离工艺进行研究，旨在寻找一种高效、经济、环保的提取方法，为进一步开发利用虎杖资源提供科学依据。
我们需要选择适宜的提取溶剂。
根据文献报道，乙醇是一种常用的提取溶剂，具有良好的溶解性和萃取效果。
因此，我们选择乙醇作为虎杖中白藜芦醇苷的提取溶剂。
我们需要确定合适的提取方法。
常用的提取方法有浸提法、超声波提取法、微波提取法等。
经过比较，我们选择了浸提法进行实验。
具体操作步骤如下：取一定量的虎杖粉末，加入适量的乙醇溶液中，与溶剂充分接触，反复搅拌一段时间，使白藜芦醇苷充分溶解于乙醇中。
然后，用滤纸过滤得到提取液。
提取液中的乙醇可以通过旋转蒸发或冷冻浓缩等方法进行回收利用，以提高经济效益。
同时，为了进一步提高提取效果，可尝试不同浓度的乙醇溶剂、不同提取时间和不同提取温度等条件进行优化。
接下来，我们需要对提取液进行分离纯化。
常用的分离纯化方法有固相萃取、薄层色谱、高效液相色谱等。
根据白藜芦醇苷的理化性质，我们选择了高效液相色谱进行分离纯化。
通过调整流动相组成、流速和检测波长等参数，可以实现白藜芦醇苷的有效分离。
我们对提取得到的白藜芦醇苷进行结构鉴定和质量分析。
常用的鉴定方法有紫外-可见光谱、红外光谱、质谱等。
这些方法可以帮助我们确定白藜芦醇苷的化学结构和相对分子质量，从而确保提取分离的物质具有一定的纯度和活性。
虎杖中白藜芦醇苷的提取分离工艺研究是一项重要的科研课题。
通过选择合适的提取溶剂、优化提取条件，以及采用适当的分离纯化方法，可以获得高纯度、高活性的白藜芦醇苷制剂。
这对于虎杖资源的开发利用具有重要的意义，也为相关药物的研发提供了有力支持。
希望本研究能为虎杖资源的深度开发与利用提供一定的参考和指导。
虎杖中白藜芦醇的提取及分析检测技术研究进展
虎杖中白藜芦醇的提取及分析检测技术研究进展宋海南;钱善军;刘玮【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2014(000)021【摘要】Resveratrol was a natural antioxidant and free radical clearance agent. From 18 articles was reviewed, extract and detection technology of resveratrol from Polygonum cuspidatum are summarized. The advantages and disadvantages of various extraction and analyze technology was comprised on the resveratrol yield, process complexity, operational safety, extraction time and reproducibility etc, an important reference for the further research and application of resveratrol was provided.%白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂和自由基廓清剂。
通过查阅近期发表的18篇文献，本文对近年来虎杖中白藜芦醇的提取、分析检测技术等方面的研究进展进行了综述，以白藜芦醇得率、工艺复杂性，操作安全性、提取时间、重现性等为指标，比较各种提取、分析检测技术的优缺点，为白藜芦醇的进一步研究和应用提供了非常重要的参考。
【总页数】3页(P18-19,82)【作者】宋海南;钱善军;刘玮【作者单位】安徽医学高等专科学校，安徽合肥230601;安徽医学高等专科学校，安徽合肥 230601;安徽医学高等专科学校，安徽合肥 230601【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷提取工艺的研究 [J], 庄彦;袁经权;周小雷;王硕;樊溪源;缪剑华2.虎杖中白藜芦醇提取工艺的研究进展 [J], 袁敏;王平;张贞丽3.响应面法优化虎杖中虎杖苷和白藜芦醇的匀浆提取 [J], 周军;徐雷涛;熊曼;董兰改;李湘洲;;;;;;4.响应面法优化虎杖中虎杖苷和白藜芦醇的匀浆提取 [J], 周军;徐雷涛;熊曼;董兰改;李湘洲5.虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的提取工艺研究 [J], 张玉千;张宇;龚赛男;许瑾;杨阳春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定一、本文概述本文旨在探讨虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法及其含量测定技术。
虎杖作为一种具有广泛药用价值的天然植物，其中含有的白藜芦醇和白藜芦醇苷是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，研究虎杖中这两种成分的有效提取和准确测定方法对于深入理解虎杖的药理作用以及优化其临床应用具有重要意义。
本文将综述当前虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取技术，包括溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等，并评价其优缺点。
本文还将介绍含量测定的常用方法，如高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等，并探讨其准确性和可靠性。
通过本文的综述，旨在为虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的深入研究和应用提供有益的参考。
二、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法虎杖，作为一种具有丰富生物活性的中草药，被广泛用于传统医学中。
其内含的白藜芦醇和白藜芦醇苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，因此，对这两种成分的提取和含量测定具有重要的意义。
以下将详细介绍虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法。
我们需要新鲜的虎杖根茎，确保其来源清洁、无污染。
随后，将虎杖根茎进行清洗、干燥和粉碎，以便后续的提取操作。
由于白藜芦醇和白藜芦醇苷均具有一定的极性，因此，我们常选用极性溶剂如甲醇、乙醇等进行提取。
这些溶剂能够有效地溶解并提取出虎杖中的目标成分。
常用的提取方法包括浸泡提取、回流提取和超声波辅助提取等。
考虑到效率和提取效果，我们通常采用回流提取法。
具体操作如下：将粉碎后的虎杖粉末与提取溶剂混合，置于回流装置中，加热回流一定时间，使溶剂充分与原料接触，从而充分提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
提取完成后，需要对提取液进行处理，以去除其中的杂质，提高目标成分的纯度。
常用的处理方法包括过滤、浓缩和干燥等。
通过以上步骤，我们可以有效地从虎杖中提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
这为后续的含量测定和进一步研究提供了基础。
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究虎杖中白藜芦醇苷是一种具有多种生物活性的天然化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。
为了充分利用虎杖中的白藜芦醇苷并满足市场需求，研究人员进行了白藜芦醇苷的提取和分离工艺研究。
白藜芦醇苷是一种存在于植物中的多元醇类化合物，具有较低的溶解度，因而在提取和分离过程中需要采用适当的方法。
目前常用的提取方法有超声波辅助提取、浸泡提取、水蒸气蒸馏提取等。
其中，超声波辅助提取是一种较为高效的提取方法，它利用超声波的机械作用和热效应来破坏细胞壁，促进白藜芦醇苷的释放。
在超声波辅助提取过程中，首先需要将虎杖样品粉碎成适当的颗粒大小，以增加提取效率。
然后将虎杖样品与适量的溶剂（如乙醇、甲醇等）混合，放入超声波提取仪中进行提取。
超声波的作用下，虎杖中的白藜芦醇苷会逐渐释放到溶剂中。
提取时间和温度是影响提取效果的重要因素，一般来说，提取时间越长、温度越高，提取效果越好。
但是过长的提取时间和过高的温度可能会导致白藜芦醇苷的降解，因此需要找到适当的提取条件。
提取完成后，需要对提取液进行分离和纯化。
常用的分离方法有溶剂萃取、硅胶柱层析、凝胶渗透层析等。
其中，硅胶柱层析是一种常用的分离方法，它可以根据样品中化合物的亲疏水性来进行分离。
在硅胶柱层析过程中，首先需要将硅胶填料充分膨胀，然后将提取液加入硅胶柱中。
根据白藜芦醇苷和其他成分在硅胶上的亲疏水性差异，通过溶剂梯度洗脱的方法，将白藜芦醇苷从其他杂质中分离出来。
最后，通过溶剂的挥发或其他方法将白藜芦醇苷纯化得到。
还可以利用高效液相色谱（HPLC）等技术进一步提高白藜芦醇苷的纯度。
HPLC是一种基于溶液动力学的色谱技术，可以对复杂样品进行分离和检测。
在HPLC分离过程中，需要选择合适的色谱柱和流动相，通过控制流速和梯度洗脱的方法，将白藜芦醇苷从其他成分中分离出来。
最后，通过检测器对分离得到的白藜芦醇苷进行检测和定量。
虎杖中白藜芦醇苷的提取和分离工艺研究是为了充分利用这一天然药物资源并满足市场需求。
虎杖中白藜芦醇提取工艺研究
（ １ ． Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｌ ｉ ｃ ｅ ｎ ｓ ｅ Ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｓ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ｅ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ６ １ ０ ６ ４ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） （ ２ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ６ １ ０ ６ ４ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
现代食 品科技
Ｍｏ ｄ ｅ ｒ ｎ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｏ ｇ ｙ
２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ９ ， Ｎｏ ． ６
虎杖 中白藜芦醇提取工 艺研 究
叶秋雄 ，黄苇 （ １ ． 广东省生产许可证审查服务中心，广东广州 ５ １ ０ ２ ２ ０ ） （ ２ ． 华南农业大学食品学院，广东广州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ）
ｎｄ ａ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｒ ｅ ｓ ｖ ｅ ｒ ａ ｒ ｔ ｏ ｌ ｎ ｉ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｇ ｏ ｎ ｕ ｍ ｃ ｕ ｓ ｐ ｉ ｄ ａ ｔ ｕ ｍ． ｈ ｅ Ｔ ｅｓ ｒ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｈａ ｔ ｔ ｈｅ ｔ ｂ ｅ ｓ ｔ ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｎ ｔ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｐ Ｈ ５ ，
虎杖中白藜芦醇的超声提取条件优化
效成分已进行了深入研究 ， 白藜芦醇 、 蒽醌类化合物和黄酮类 成分为其主要有效成 分 ， 白藜芦醇含量 最高。现代药理 学 以 实验证明 ， 白藜芦醇具有抗 菌消炎 ， 降血脂 ， 预防心血管病 ， 抗
肿瘤 ， 抑制血小板活性 等生理 作用 。本试验采 用超声 波 辅助有机溶剂提取虎杖 中的活性物质 白藜芦醇 ， 对提取条 件 进行 了系统研究 ， 在单 因素试验 的基础上 ， 过正交试验优化 通 提取条件 ， 并对其含量进行荧光分析法检测 。
１ 材 料 和 方 法
１ １ 材 料 ．
后用粉碎机粉碎成粉末 ， ２ 过 ｏ目筛 ， 备用。用电子天平准确称
量 ５０００ｇ虎杖粉末 ， ．０ 放入 ２０ｍ ５ Ｌ圆底烧瓶 中， 入一定量 加 的溶剂 超 声萃 取 ， 后 采用 ３００ ｒｒ ｎ的 转速 离 心 分 离 然 ０ ／ ｉ ａ
液。料 液比筛选 ： ８ ％ 乙醇 和 ８ ％丙酮 为 １： （ 在 ０ ０ ２ 体积 比） 做提取 液 ， 超声提取 １ ｉ， ０ｍ ｎ 超声提取温度 ５ ０℃ 的条件下 ， 料
虎杖 （ 购于河北安 国药材市 场 ） 白藜 芦醇标准 品 （ 国 ； 中 药品生物制品检定 所提供 ） 乙醇 、 酮、 ； 丙 乙酸 乙酯、 氯仿 、 硝 酸铝等试剂均为分析纯。 主要仪器设备 ： ４ ０ Ｆ一 ５０荧光分光光度计 （ 日本 日立公 司
（． １ 石家庄学 院化工学院 ， 河北石家庄 ００ ３ ； ． ５０ ５ ２ 石家庄市第 ３ ８中学 ， 河北石家庄 ０ ０ ０ ） ５ ０ ０
摘要 ：以中药虎杖粉末为原料 ， 利用超声波强化提取 白藜芦醇化合物 ， 用荧光分析法分析其含量 。在单 因素试验 的基础上 ， 采用 正交试验 ， 考察了溶剂、 料液 比、 温度、 时间对 白藜芦醇提取率 的影响 。试验结果表明 ， 虎杖 中白藜芦醇 的最佳提取条件为 ８ ％乙醇 ： ０ ０ ８ ％丙酮 Ｉ： （ ３ 体积 比） 为提取液 、 液比 １ ６ 质量体积 比， ｍ ） 超声温度 ７ 料 ：（ ｇ： Ｌ 、 ０℃ 、
超声波-酶法提取虎杖中白藜芦醇的工艺研究
供试 中药材虎杖购 自吉林 市中药房 ； 纤维 素酶 由江 苏锐阳生物科技有 限公 司提供 （ 酶活 ５万 Ｕ ／ ｇ ） ； 乙醇 为 分析纯 。 供试仪器 ： 超声波提 取 器 （ 上 海宁商 超声 仪器 有 限 公司 Ｓ Ｙ － ３ ６ ０ ） ； ＵＶ － １ １ ０ ０紫外可 见分光光度计 （ 上海美谱 达仪器有限公司） ； 电热鼓风 干燥箱 （ 上海源长 实验仪器 设备厂 Ｄ Ｈ ９ ０ ３ ５ Ａ） ； 电子天平 （ Ａ Ｌ ２ ０ ４ ） （ 梅特勒一 托利多 仪器（ 上海 ） 有限公 司） ； 旋转蒸 发仪 （ 上海亚龙 生化仪器 厂Ｒ ２ ｃ ｓ ） ； 离心机 （ 上海 安亭科 学仪 器厂 ８ ０ ０ Ｂ ） ； 电热 恒温水浴锅（ 上海精宏实验设备有限公 司 Ｄ Ｋ 一 ￥ ２ ４ 型） 。
１ ． ２ ． １ 工艺路线 １ ． ２ ห้องสมุดไป่ตู้ ２ 原料制取
虎杖一烘 干一粉碎一 酶解一 超声波 将虎杖用清水 洗净装入载物盘 ， 放人
化、 抗休克和 强心 、 扩 血管 等方 面都 有很好 的功效 。毛
永芬等 研究 表 明 ， 这些 药理 作用 均 与 白藜芦 醇苷 、 白 藜芦醇有关 ， 而 在众 多植 物 中， 虎杖 中白藜芦 醇 和 白藜
性［ ２ 及降血脂 、 抗 血栓 、 预防动脉硬 化 、 增强免 疫功 能等
重要调节 作 用 ， 是 一种 极 具 开发 价值 的天 然 多酚 类 物
１ 材料 与方 法
１ ． １ 试验材料
质 。刘涛 等Ｌ ３ ］ 研究表明 ， 法 国人冠 心病发病率 低与 长期 饮 红葡萄酒有关 ， 因为红葡 萄酒 中富含 白藜芦 醇。在 日 本， 已将含 有 白藜 芦 醇植 物提 取 物作 为 食 品 添加 剂 使 用； 在我 国 ， 也 有将 白藜 芦醇 植 物 提取 物 制 成 降脂 、 美
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定【摘要】目的：建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法，优化虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺. 方法：采用梯度法建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱方法，以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标，设计以乙醇浓度、溶剂倍数及醇提温度等为影响因素的4因素3水平的正交实验，确定虎杖中上述有效成分的最佳提取工艺. 结果：在选定的色谱条件下，虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷可以达到基线分离. 检测白藜芦醇及其苷的线性回归方程分别为Y=0.0006X-0.183 （r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）；线性范围分别为0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L. 日内、日间精密度都小于5%，回收率在90%～105%之间，样品分析时间小于7 min. 虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的最佳提取工艺为乙醇浓度80％，溶剂倍数15，醇提温度70℃，提取时间2 h. 结论：建立了准确可靠、分析速度快可同时检测虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方法，优化了质量可控的提取工艺.【关键词】虎杖；白藜芦醇；白藜芦醇苷；高效液相色谱0引言虎杖(polygonum cuspidtum sieb)为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖的干燥根茎，主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份［1］. 白藜芦醇(3，4′，5�踩�羟基�捕�苯乙烯)和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分，具有保护心脏、抗血栓、降血脂［2］等药理作用. 白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近，但其极性却相差较大. 本研究探讨一种兼顾白藜芦醇及白藜芦醇苷的提取工艺，并建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），旨在为虎杖的药理作用研究以及科学合理利用提供试验依据.1材料和方法1.1材料白藜芦醇苷和白藜芦醇的对照品均由中国药品生物制品检定所提供；虎杖的干药材购自西安市胡家庙药材市场. 2695型高效液相色谱仪，2996型二极管阵列检测器(美国Waters公司)；调温式电热套(北京科伟永兴仪器有限公司)；色谱纯乙腈，甲醇(美国TEDIA公司)，其他试剂均为国产分析纯.1.2方法1.2.1工作曲线的建立分别精密称取白藜芦醇苷及白藜芦醇对照品10 mg 置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成100 mg/L的白藜芦醇苷和白藜芦醇对照品混合储备液，备用. 分别精密吸取两对照品储备溶液0.05，0.2，1，2， 4 mL 配制成浓度为0.5，2，10，20， 40 mg/L的混合对照品的标准溶液，依次取20 μL进样. 色谱条件为：色谱分析柱：C18(250 mm×4.6 mm，5μm，美国Phenomenix公司)；流动相：乙腈和水，梯度洗脱如表1所示. 检测波长：315 nm；流速：1 mL/min；柱温为30℃. 按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度值为横坐标绘制工作曲线，应用Excel 软件采用最小二乘法计算回归方程.表1HPLC流动相梯度表时间(min)〖〗乙腈(％)〖〗水(％)〖〗流速(mL/min)〖〗梯度类型0〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗67〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗69〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗620〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗11.2.2精密度和准确度测定分别精密吸取白藜芦醇及白藜芦醇苷储备液0.1，0.5，3 mL，配成浓度为1，5，30 mg/L混合对照品的标准溶液. 每个浓度6个样本，连续测定3 d，与标准曲线的建立同时进行. 代入当日的回归方程计算标准溶液的浓度，将结果进行方差分析，即得到本方法的精密度. 将1，5，30 mg/L 三个浓度标准溶液的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定浓度值与标准溶液的标示浓度相比，即得方法回收率.1.2.3虎杖有效成分提取工艺的优化在本生产工艺研究中，根据药物有效成分、药理作用及理化性质特点，选择醇提法进行正交试验，以提取时间（A 1，2，3 h），乙醇浓度（B 70%，80%，90%），醇提温度（C 50，60，70 ℃）和溶剂倍数(D 10，15，20)作为考察因素，选择3个水平，综合评价提取工艺，选用L9(34)正交表，安排正交实验.取虎杖10 g，按L9(34)正交表设计的顺序，各加入设定的乙醇量，加热煎煮规定时间和次数，滤过，合并滤液，将滤液用甲醇稀释10倍后取样20 μL，用HPLC法测定白藜芦醇及白藜芦醇苷的峰面积，带入回归方程中，计算出白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量.2结果2.1HPLC检测方法的特异性在本实验选定的洗脱及检测条件下，白藜芦醇和白藜芦醇苷的保留时间分别为6.8 min和4.7 min. 白藜芦醇及白藜芦醇苷峰和杂质峰能实现基线分离，样品峰的测定不受杂质峰的干扰（图1）.2.2白藜芦醇苷及白藜芦醇标准曲线回归方程以白藜芦醇和白藜芦醇苷的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标建立标准曲线. 应用Excel软件采用最小二乘法得到白藜芦醇和白藜芦醇苷的工作曲线回归方程： Y=0.0006X-0.183（r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）. 结果表明，白藜芦醇及其苷分别在0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L范围内呈良好的线性关系.2.3精密度和准确度测定1，5，30 mg/L浓度的白藜芦醇苷的日内精密度分别为4.0%，2.6%和2.0%；日间精密度分别为4.2%，4.3%和2.6%；方法回收率分别为（101±3.4）%，（94±2.3）%和（95±1.3）%.白藜芦醇的日内精密度分别为5.0%，3.0%和2.0%；日间精密度分别为4.8%，3.9%和1.1%；方法回收率分别为（96±5.1）%，（95±2.6）%和（95±1.6）%. 结果显示本方法准确、重复性好.2.4虎杖有效成分提取工艺的优化将测得值进行方差分析（表2），因素B差异具有统计学意义（P<0.01 ). 由表3中进行直观分析可知，A 因素中各水平试验结果的和比较为：K2>K1>K3，平均含量以第2水平为高；B 因素中各水平试验结果的和比较为：K1>K2>K3，平均含量以第1水平为高；C 因素中各水平试验结果的和比较为：K3>K1>K2，平均含量以第3水平为高；D 因素中各水平试验结果的和比较为：K2>K1>K3，平均含量以第2水平为高. 选择最佳的提取工艺为提取时间2 h，乙醇浓度为70%，醇提温度为70℃，溶剂倍数15.表2白藜芦醇及其苷含量方差分析结果3讨论近年来有较多关于虎杖有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷提取及含量研究的报道，多采用单因素、正交试验及大孔吸附树脂吸附法研究白藜芦醇的提取条件［3-4］；正交试验法及乙醇回流法优选白藜芦醇提取工艺［5-7］；以白藜芦醇苷为指标，研究虎杖的提取条件等［8］，这些方法均以白藜芦醇或白藜芦醇苷单个成分为指标. 由于虎杖中的活性成分白藜芦醇和白藜芦醇苷都具有保护心脏、抗血栓、降血脂等药理作用，因此我们在本实验中测定样品中的白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量并以此作为评价指标是合理可行的. 我们的实验结果表明，正交试验及方差分析结果虎杖醇提取工艺最大影响因素为乙醇浓度B，其次为溶剂倍数D，再次为醇提温度C和提取时间A. 最佳工艺乙醇浓度为80％，溶剂倍数为15，醇提温度为70℃，提取时间为2 h.目前对虎杖中白藜芦醇或白藜芦醇苷的测定方法很多［9-10］，但是同时对白藜芦醇及其苷测定的报道较少［11］，主要存在诸如样品处理方法复杂、分析时间较长等问题. 本研究建立的同时测定虎杖中白藜芦醇及其苷的方法选用315 nm作为检测波长，使检测方法获得了较高的灵敏度. 采用乙腈和水作为流动相，白藜芦醇和白藜芦醇苷与其他化合物达到基线分离. 白藜芦醇和白藜芦醇苷分别在6.8 min和4.7 min出峰，快速有效地实现了分离检测.综上所述，本研究建立的虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的HPLC检测方法具有灵敏、准确、迅速和工艺稳定、经济等特点，可用于虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量测定以及有效成分提取的质量控制.【参考文献】［1］肖凯，宣利江，徐亚明，等. 虎杖的化学成分研究［J］. 中国药学杂志，2003，38(1):12-15.［2］黄永洪，史若飞. 虎杖的活性成分及其在心血管方面的研究进展［J］.牡丹江医学院学报，2006，27(1):58-60.［3］朱立贤金征宇.虎杖中白藜芦醇提取分离工艺的研究［J］. 安徽农业科学，2005，33(1):77-78.［4］许汉林，付宜和，高鹏，等. 虎杖中白藜芦醇的提取与分离工艺研究［J］. 时珍国医国药，2006，17(8):1424-1425.［5］余淑娴，郑湘娟，余祖兵，等. 正交实验法优选虎杖中自藜芦醇的提取工艺［J］. 时珍国医国药，2006，17(4):594-595.［6］江曙，朱蓉蓉，张芳，等.虎杖中白藜芦醇提取方法及工艺的优化［J］. 南京中医药大学学报， 2006，22(3):197-199.［7］耿艳辉，李梦青，刘桂敏，等. 从虎杖中提取白藜芦醇的工艺研究［J］. 应用化工，2005，34(11):708-710.［8］许汉林，孙芸，邵继征，等. 正交法优化虎杖中白藜芦醇苷提取工艺的研究［J］. 湖北中医学院学报，2006，8(2):29-30.［9］曾建国，候团章，张胜.高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量［J］.中国中医药科技，2000，7(3):175-177.［10］朱鸿津. HPLC法测定虎杖中白藜芦醇的含量［J］.药学进展，2001，25(1):110.［11］周春山，向海燕，肖建波，等.高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇及其苷的含量［J］.药物分析杂志，2005，25(5):534-536.。
用不同方法提取虎杖中白藜芦醇的比较 (1)
第41卷第2期2007年3月生 物 质 化 学 工 程B iomass Che m ical Eng i n eeringV o.l 41N o .2M a r .2007用不同方法提取虎杖中白藜芦醇的比较收稿日期:2006-08-20基金项目:湖南省发改委基金项目([2004]951)作者简介:谢磊(1982-),男,湖南郴州人,硕士,研究方向:植物功能成分纯化与应用 *通讯作者:李志光,男,教授,博士生导师;E -m ai:l a -08888@163.co m 。
谢磊,李志光*,周军,黄琼(湖南农业大学理学院,湖南长沙410128)摘 要:以虎杖为原料用乙醇浸提法、碱提酸沉法、超声波萃取法、CO 2超临界萃取法4种方法提取白藜芦醇,采用高效液相色谱法检验虎杖中白藜芦醇含量。
以白藜芦醇收率为考察标准,进行提取方法的比较。
综合比较分析得出超声波萃取法是以上4种方法中最好的。
关键词:虎杖;白藜芦醇;提取方法;高效液相色谱中图分类号:TQ91 文献标识码:A 文章编号:1673-5854(2007)02-0028-03Co mpari son of D ifferentM et hods f or ResveratrolExtracti on fro m Polygonu m c us p i dat u mX I E Le,i LI Zh-i guang ,ZHOU Jun ,HUANG Q i o ng(Co llege o f Sc ience Instit u te ,H unan A g ricu lt ura lU n i versity ,Chang sha 410128,Ch i na)Abstrac t :Four m ethods such as ethano l extrac tion ,alka li ne ex trac ti on ,u ltrasonic ex tracti on and SFE -CO 2we re used f o r ex trac -ti on of resveratro l from Polygonu m cusp idatu m .The content o f resve ratro l i n Po l ygonu m cusp i dat um was deter m i ned by HPLC .T he extraction m et hods we re co m pared based on the y i e l d of resve ratro.l T he results show ed that the u ltrason ic ex trac ti on w as the bestm ethod f o r ex tracti on of resve ratro.lK ey word s :P olygonum cusp i dat um ;resveratro;l ex tracti on m e t hod ;H PLC虎杖(P olygonum cus p i d atum S ieb .et Zucc)为蓼科蓼属小灌木,为传统中药,被历版《中国药典》收载[1]。
高效液相色谱法同时测定虎杖中五种活性成分
2.1 HPLC 分离条件优化
快速、精密度高，为科学客观评价虎杖的质量提供依
据。
1 材料与方法
1.1 主要仪器和试剂
HPLC 系统为 Waters 1525 系统，配备双波长检测 器及在线脱气系统。色谱纯甲醇、乙腈购自国药集团 化学试剂有限公司（沃凯牌），水为超纯水。虎杖苷、 白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄 素甲醚标准品购自上海同田生物有限公司，具体化学 结构见图 1。10 批虎杖购自南昌市不同中药店，粉碎 后过 40 目筛。
1.2 色谱条件
色谱柱为 Agilent Zorbax SB C18 柱（4.6×250 mm，5 μm），流动相为纯乙腈（A）和水（B），流 速为 1 mL /min，进样量为 10 μL，检测波长为 290 nm， 柱温为 40 ℃。线性梯度洗脱程序为：0~40 min， 15.0~50.0% A；40~60 min，50.0~90.0%A。
收稿日期：2013-10-14 基金项目：江西省自然科学基金资助项目（20122BAB214005）；江西农业大 学青年基金资助项目（QN201108） 作者简介：张清峰（1983-），男，博士，讲师，研究方向为功能性食品成分， 天然产物开发与利用
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苷、大黄素、大黄素甲醚等。大黄素-8-O-β-D-葡萄糖 苷在体内脑缺血再灌注损伤模型中有保护神经的功能 [4]。大黄素具有抗病毒、抑菌、扩张血管及利尿等多种 作用[5]。白藜芦醇是虎杖苷的苷元，属于多羟基芪类化 合物，具有降血脂、抗肿瘤、促进健康和延长生命等 多种生物活性[6~7] 。
Agriculture University, Nanchang 330045, China)
Abstract: Five bioactive compounds namely polydatin, resveratrol, emodin-8-O-β-D-glucoside, emodin and physcion in Polygonum cuspidatum were determined by HPLC. An Agilent Zorbax SB C18 column (250 mm×4.6 mm i.d., 5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile (A) and water (B) with linear gradient program of 15.0~50.0% (A) in 0~40 min and 50.0~90.0% (A) in 40~60 min. The column temperature, detection wavelength and flow rate were set at 40 ℃, 290 nm and 1.0 mL/min respectively. The calibration curve of each analyte was constructed under six concentrations. The correlation coefficients were all more than 0.999, and the RSD of tR ranged from 0.14% to 1.67%, while RSD of the peak area was from 0.96% to 2.96%. The spike recovery of the five analytes was 96.8~104.7%. The extraction condition was optimized, and ultrasonic extraction with 60% ethanol for 30 min was chosen. The method was successfully applied for analysis of ten Polygonum cuspidatum samples. The results showed that polydatin and emodin-8-O-β-D-glucoside were the two most dominant constituents in Polygonum cuspidatum with contents ranges of 9.80~20.42 mg/g and 5.56~24.45 mg/g, respectively. The method has good repeatability and high precision, and can be used for simultaneous analysis of the five constitutes in Polygonum cuspidatum.
虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素等有效成分的提取
１： ２ ０ ，ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ７ ０℃ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍｅ ２ ． ０ ｈ ，Ｕｎ ｄ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｒａ ｔ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｓ ｏ ｆ ｒ ｅ ｓ ｖ ｅ ｒ ａ ｒｏ ｔ ｌ ， ｐ ｉ ｃ ｅ ｉ ｄ ，ｅ ｍｏ ｄ ｉ ｎ ，ｕ ｎ ｋ ｎ ｏ ｗｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｎ ｅ ｎ ｔ ｌ ，ｕ ｎ ｎｏ ｋ ｗｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｎ ｅ ｎ ｔ ２ ， ｗｅ ｒ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ５ ． ５ ７ ％， １ ０ ． ７ ４ ％， ２ ， ６ ７ ％， ８ ． ８ ７ ％，
１ ． ４ ． １试剂配制 Ａ 、 Ｔ ｒ ｉ ｓ（ 三羟 甲基氨基 甲烷）一 Ｈ Ａ Ｃ 缓冲溶液的配制：用双蒸水配制 ０ ． ０ ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的 Ｔ ｒ ｉ ｓ 溶液 ，再用 ６ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的 Ｈ Ａ Ｃ调 ｐ Ｈ为 ８ ． ２ ０ ． Ｂ ． 邻苯三酚溶液 的配制：用 １ ０ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的盐 酸溶液配制成 １ ０ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的邻苯三酚溶液，此溶液使用时
目 前从虎杖 中提取 白藜芦醇或大黄素等单 一成分物质的研究较多 ， 但有关 综合提取 白藜芦醇、白藜 芦醇苷 、 大黄素等有效成分的研究相对较少，为了提 高虎杖 的综合利用价值 ， 本 实验 同时对虎杖中活性
成分 白藜芦醇 、白藜芦醇苷 、大黄素等的提取进行优化 ，为合理利用虎杖资源提供理论依据 ．
收稿 日期：２ ０ ０ ７ ． ０ ７ ０ ９ 作者简 介：聂媛 （ １ ９ ８ ２ ． ） ，女 （ 汉族 ） ，硕士生
虎杖分离实验报告
一、实验目的1. 掌握虎杖的分离技术。
2. 学习并掌握利用色谱法对虎杖中的有效成分进行分离纯化的方法。
3. 了解虎杖有效成分的性质及其应用。
二、实验原理虎杖（Polygonum cuspidatum），又称活血丹、红芽大戟等，为蓼科虎杖属植物。
虎杖中含有多种有效成分，如白藜芦醇、虎杖苷、虎杖酸等，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。
本实验采用色谱法对虎杖进行分离，以提取其中的有效成分。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：虎杖药材、甲醇、正己烷、氯仿、硅胶、薄层色谱板、大孔树脂等。
2. 实验仪器：色谱柱、高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、真空泵、恒温水浴锅、超声波清洗器、电子天平等。
四、实验方法1. 虎杖药材的提取（1）将虎杖药材粉碎，过40目筛，备用。
（2）取5g虎杖药材，加入50ml甲醇，超声提取30min，过滤，滤液备用。
2. 虎杖总提取物分离（1）将滤液减压浓缩至约5ml，加入适量的正己烷，摇匀，静置分层。
（2）取下层正己烷相，加入适量的氯仿，摇匀，静置分层。
（3）取下层氯仿相，减压浓缩至干，得虎杖总提取物。
3. 虎杖总提取物分离纯化（1）将虎杖总提取物用大孔树脂进行吸附，以甲醇为洗脱剂，收集洗脱液。
（2）将洗脱液减压浓缩至干，得虎杖有效成分。
4. 虎杖有效成分的鉴定（1）采用高效液相色谱法对虎杖有效成分进行鉴定。
（2）以甲醇为流动相，检测波长为280nm，流速为1ml/min，柱温为30℃。
五、实验结果与分析1. 虎杖药材的提取实验中，超声提取30min后，虎杖药材的提取率较高，可达90%以上。
2. 虎杖总提取物分离通过正己烷和氯仿的萃取，可得到虎杖总提取物，其得率约为30%。
3. 虎杖总提取物分离纯化通过大孔树脂的吸附和洗脱，可得到虎杖有效成分，其得率约为10%。
4. 虎杖有效成分的鉴定通过高效液相色谱法对虎杖有效成分进行鉴定，结果显示，分离得到的物质与标准品具有相同的保留时间和峰面积，表明分离得到的物质为虎杖有效成分。
虎杖中白藜芦醇的提取工艺
收稿日期:20200513㊂基金项目:贵州省中医药管理局中医药㊁民族医药科学技术研究专项课题(Q Z Y Y 2017-065)㊂作者简介:崔 霖(1994),男,辽宁瓦房店人,沈阳化工大学在读硕士研究生;通信作者:张万忠(1968),男,安徽宿州人,沈阳化工大学教授,博士㊂第38卷 第4期2020年 8月沈阳师范大学学报(自然科学版)J o u r n a l o f S h e n y a n g N o r m a lU n i v e r s i t y (N a t u r a l S c i e n c eE d i t i o n )V o l .38N o .4A u g.2020文章编号:16735862(2020)04036507虎杖中白藜芦醇的提取工艺崔 霖1,朱建星1,张万忠1,于海龙2(1.沈阳化工大学制药与生物工程学院,沈阳 110142;2.松桃苗族自治县民族中医院,贵州铜仁 554100)摘 要:虎杖属于蓼科草本植物,具有多种药理作用㊂虎杖中的有效成分,具有改善血液微循环㊁强心㊁止咳平喘㊁防氧化㊁保肝㊁降三高的作用,对细菌和病毒也有抑制作用㊂为有效提取虎杖中白藜芦醇,采用乙醇回流法和超声波法进行研究,并进行溶剂(乙酸乙酯)萃取初步纯化和吸附树脂纯化条件筛选,考察不同单因素对虎杖中提取白藜芦醇的影响,并采用正交法对提取工艺进行优化,确定最佳提取工艺㊂结果表明:乙醇回流法优化提取工艺条件下白藜芦醇的提取率为1.30%,超声波辅助法最优提取条件下白藜芦醇的提取率为1.36%㊂针对超声波辅助工艺的溶剂萃取初步纯化,得到纯度为74.98%的白藜芦醇,经过大孔树脂分离纯化后,纯度达89.07%,收率为95.09%㊂经过萃取和大孔树脂吸附后,白藜芦醇的纯度明显提高㊂关 键 词:虎杖;白藜芦醇;提取;回流;超声波中图分类号:R 284.2 文献标志码:Ad o i :10.3969/j .i s s n .16735862.2020.04.014E x t r a c t i o no f re s v e r a t r o lf r o m p o l yg o n u mc u s pi d a t u m C U IL i n 1,Z HUJ i a n x i n g 1,Z HA N G W a n z h o n g 1,Y U H a i l o n g2(1.C o l l e g eo fP h a r m a c e u t i c a la n d B i o l o g i c a l E n g i n e e r i n g ,S h e n y a n g U n i v e r s i t y o f C h e m i c a l T e c h n o l o g y,S h e n y a n g 110142,C h i n a ;2.N a t i o n a l a n dT r a d i t i o n a lC h i n e s e M e d i c a lH o s p i t a l i nS o n gt a o M i a oA u t o n o m o u s C o u r t y ,T o n gr e n554100,C h i n a )A b s t r a c t :P o l y g o n u m c u s p i d a t u m b e l o n g st o p o l y g o n a c e a ea n di t se f f e c t i v ec o m po n e n t sh a v e m a n yp h a r m a c o l o g i c a le f f e c t si n c l u d i n g i m p r o v i n g b l o o d m i c r o c i r c u l a t i o n ,s t r e n g t h e n i n g he a r t ,r e l i e v i n g c o u g h a n d a s t h m a ,p r e v e n t i n g o x i d a t i o n ,p r o t e c t i n g l i v e r ,r e d u c i n g t h r e e h i gh ,a n d i n h i b i t i n g b a c t e r i a a n d v i r u s .I n o r d e r t o e f f e c t i v e l y e x t r a c t r e s v e r a t r o l f r o m p o l y go n u m c u s p i d a t u m ,t h ee x t r a c t i o no fr e s v e r a t r o lw a ss t u d i e d b y e t h a n o lr e f l u x m e t h o da n d u l t r a s o n i c m e t h o d ,a n dt h e p r e l i m i n a r y p u r i f i c a t i o no fs o l v e n t (e t h yla c e t a t e )e x t r a c t i o na n d p u r i f i c a t i o n c o n d i t i o n so fa d s o r p t i o nr e s i n w e r es c r e e n e d .T h ei n f l u e n c eo fd i f f e r e n ts i n g l ef a c t o r so nt h e e x t r a c t i o no f r e s v e r a t r o l f r o m p o l y g o n u mc u s p i d a t u m w a s i n v e s t i g a t e d .T h e o r t h o g o n a lm e t h o dw a s u s e d t oo p t i m i z et h ee x t r a c t i o n p r o c e s sa n dd e t e r m i n et h eb e s te x t r a c t i o n p r o c e s s .T h er e s u l t s s h o w e d t h a t t h e e x t r a c t i o n r a t e o f r e s v e r a t r o l i s 1.30%u n d e r t h e c o n d i t i o no f e t h a n o l r e f l u x .T h e e x t r a c t i o nr a t e o fr e s v e r a t r o li s 1.36%u n d e rt h e o p t i m a lc o n d i t i o n s o f u l t r a s o n i c a s s i s t e d e x t r a c t i o n ,t h i sm e t h o d i s b e t t e r .T h e p u r i t y o f r e s v e r a t r o l i s 74.98%a f t e r p r e l i m i n a r y p u r i f i c a t i o n o f u l t r a s o n i c a s s i s t e d s o l v e n t e x t r a c t i o n p r o c e s s .A f t e r s e p a r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o nw i t hm a c r o po r o u s r e s i n ,t h e p u r i t y i su p t o 89.07%,a n d t h e y i e l d i s 95.09%.A f t e r e x t r a c t i o na n da d s o r p t i o nw i t h m a c r o p o r o u s r e s i n ,t h e p u r i t y o f r e s v e r a t r o l i s o b v i o u s l y i m pr o v e d .K e y wo r d s :p o l y g o n u mc u s p i d a t u m ;r e s v e r a t r o l ;e x t r a c t i o n ;r e f l u x ;u l t r a s o u n d0引言虎杖(P o l y g o n u mc u s p i d a t u m),又名山茄子,金锁王等[1],是人们比较熟悉的中草药,可入药的部分主要是根和茎㊂因其中含有黄酮类㊁二苯乙烯类等许多成分[23],具有很高药用价值㊂白藜芦醇(R e s v e r a t r o l,以下简称R e s),是其中含量最多化合物之一,属于二苯乙烯类化合物[4]㊂具有复杂的生物成分,能抑癌㊁防氧化㊁消炎㊁抑菌[5]㊁降脂减肥㊁预防心血管和肝脏损伤,普遍用于食品药品㊁补充剂㊁外用护肤品范围,用途十分广泛㊂现在从虎杖中提取并纯化R e s的工艺比较繁多[612],提取方法主要有溶剂提取法㊁超声波辅助提取法㊁酶解提取法㊁微波辅助提取法㊁超临界C O2萃取等,纯化方法主要有溶剂萃取法㊁大孔树脂吸附法㊁双水相萃取法㊁柱层析法㊁高速逆流色谱法等,结合实验环境和实验室条件,综合考虑本实验采用乙醇回流法和超声波辅助法从虎杖中提取R e s,用R e s的提取率为响应变量,开展单因素实验和正交实验,分析并作出工艺条件的改进㊂R e s粗品通过乙醚溶剂萃取进行初步纯化,比较纯化前后R e s的含量,再以其含量及回收率为研究对象,对大孔树脂吸附法纯化R e s的工艺作改进实验㊂1实验材料与设备虎杖(优质,西安善益堂药业有限公司)㊁称量纸(10c mˑ10c m郑州中天实验仪器有限公司)㊁无水乙醇(分析纯,无锡三合化工有限公司)㊁R e s标准品(分析纯,中国药品生物制品鉴定所)㊁A B-8树脂(河北树脂工艺品生产厂)㊂电子天平(F A22048沈阳拓宇衡器有限公司)㊁高速万能粉碎机(F W100武汉华威化工仪器有限公司)㊁紫外∕可见分光光度计(U V1100翱艺仪器(上海)有限公司)㊁循环水式多用真空泵(S H B-Ⅲ武汉华威化工仪器有限公司)㊁旋转蒸发器(R E-2000B郑州生化仪器有限公司)㊁恒温水浴锅(HH-4辽宁赛亚斯科技有限公司)㊁数控型超声波清洗器(K Q5200D E郑州生化仪器有限公司)㊂2方法2.1乙醇回流法单因素实验将虎杖粗品经粉碎机打碎㊁筛滤得虎杖粉末㊂通过单因素实验,探究不同因素对提取率的作用,然后以4种不同因素作为变量:1)乙醇浓度:取5份5.0g虎杖粉末,对应放入烧瓶中,分别加入质量浓度为50%㊁60%㊁70%㊁80%㊁90%的50m L乙醇,配置料液比为1ʒ10的虎杖-乙醇溶液,并充分摇匀㊂再在85ħ水浴下,热回流2次,时间为2h,合并2次的提取液,迅速利用循环水式真空泵抽滤后,得到提取液㊂将其分别用各自浓度乙醇定容至100m L,取1m L稀释1000倍,在波长306n m处测定R e s的吸光值,以此计算R e s浓度和提取率㊂2)料液比:以料液比作为唯一变量,分别加入质量浓度为80%的乙醇25㊁50㊁75㊁100㊁125m L,即原料与溶剂比例1ʒ5㊁1ʒ10㊁1ʒ15㊁1ʒ20㊁1ʒ25㊂再按如上方法测定计算R e s浓度和提取率㊂3)回流时间:加入质量浓度为80%的乙醇溶液50m L(原料与溶剂比例为1ʒ10),在85ħ水浴下热回流2次,回流时间分别为1㊁2㊁3㊁4㊁5h,再按如上方法测定计算R e s浓度和提取率㊂4)回流次数:加入质量浓度为80%的乙醇溶液50m L(原料与溶剂比例为1ʒ10),分别在85ħ水浴下热回流1㊁2㊁3㊁4㊁5次,回流时间均为2h,再按如上方法测定计算R e s浓度和提取率㊂设计正交实验,如表1所示㊂表1乙醇回流法提取R e s正交实验因素水平T a b l e1H o r i z o n t a l d e s i g no f o r t h o g o n a l e x p e r i m e n t a l f a c t o r s f o r e x t r a c t i n g R e sb y e t h a n o l r e f l u xm e t h o d水平因素A(乙醇浓度/%)B(回流时间/h)C(回流次数)D(料液比)1651.511ʒ82702.021ʒ103752.531ʒ122.2超声波辅助提取法单因素实验通过单因素实验,探究不同因素对提取率的作用,以4种不同因素作为变量:663沈阳师范大学学报(自然科学版)第38卷1)乙醇浓度:取5份5.0g 虎杖粉末,对应放入250m L 锥形瓶中,加入质量浓度分别为50%㊁60%㊁70%㊁80%㊁90%的乙醇溶液100m L (原料与溶剂比例为1ʒ20),并充分摇匀㊂在超声波清洗器中进行提取,温度恒定设为60ħ,功率140W ,提取60m i n ,计算R e s 的浓度和提取率㊂2)料液比:加入原料与溶剂比例分别为1ʒ15㊁1ʒ20㊁1ʒ25㊁1ʒ30㊁1ʒ35的虎杖-乙醇溶液,并充分摇匀,按2.1(1)方法计算R e s 浓度和提取率㊂3)超声功率:设定超声功率分别为80㊁100㊁120㊁140㊁160W ,按原料与溶剂比例1ʒ20加入质量浓度为80%的乙醇溶液(100m L ),充分摇匀,温度恒定设为60ħ,提取60m i n ㊂按2.1(1)方法计算R e s 浓度和提取率㊂4)提取时间:设定提取时间分别为40㊁50㊁60㊁70㊁80m i n ,按原料与溶剂比例1ʒ20加入质量浓度为80%的乙醇溶液(100m L ),充分摇匀,温度恒定设为60ħ,功率140W ㊂按2.1(1)方法计算R e s 浓度和提取率㊂设计正交实验,如表2所示㊂表2 超声波辅助法提取R e s 因素水平T a b l e2 F a c t o r l e v e l d e s i g no f R e s e x t r a c t i o nb y ul t r a s o n i ca s s i s t e dm e t h o d 水平因 素A (乙醇浓度/%)B (提取时间/m i n)C (超声波功率/W )D (料液比)175551001ʒ22280601201ʒ25385651401ʒ282.3 白藜芦醇提取率的计算提取率P 的计算,如计算公式(1):P (%)=n ˑC ˑV106ˑWˑ100%(1)式中,n 为稀释的倍数;V 为提取液的体积(m L );C 为提取液的R e s 含量(μg /m L );W 为虎杖粉末的质量(g)㊂2.4 虎杖中白藜芦醇的纯化2.4.1 溶剂萃取纯化先采用醇沉除杂对R e s 提取液进行预处理,再用旋转蒸发器将其进行浓缩,以浓缩液无醇味为提取终点㊂向浓缩液中加入等体积比乙醇,将p H 调节至2.0,静置15h 后,减压抽滤,得R e s 的粗提液[1314]㊂再用盐酸将R e s 粗提液的p H 调至中性,减压浓缩,将经乙酸乙酯萃取3次的浓缩液上层液合并,经活性炭脱色㊁真空干燥,得到R e s 粗品,计算R e s 含量与收率㊂ω=C ˑn ˑ1000(2)式中,ω为R e s 含量(m g /m L );C 为R e s 质量浓度(μg /m L );n 为稀释倍数㊂α%=m 1m 2ˑ100%(3)式中α为R e s 纯度%;m 1为纯化后粗品溶解液中R e s 质量(m g );m 2为纯化后R e s 粗品质量(m g )㊂η%=m 3m 4ˑ100%(4)式中,η为Re s 收率%;m 3为纯化后R e s 的质量(m g );m 4为纯化前R e s 的质量(m g )㊂2.4.2 大孔吸附树脂纯化将超声波清洗器制备的R e s 提取液萃取干燥,成品加蒸馏水溶解,得上柱液㊂先把A B -8树脂进行预处理[15],再把准备好的液上柱进行吸附(流速1m L /m i n,循环2h )㊂结束后,洗脱至中性,然后用70%质量浓度乙醇,将R e s 从柱上洗脱下来,隔5m i n 收集1次,测其吸光度值,作R e s 解析曲线,合并洗脱,并液,测量R e s 含量㊂然后进行减压浓缩,烘干即为R e s 化合物㊂3 结果与分析3.1 白藜芦醇标准曲线的绘制称量5m g 的R e s 标准品,用无水乙醇定容至25m L ,可得质量浓度为0.2m g/m L 的溶液㊂然后吸763第4期 崔 霖,等:虎杖中白藜芦醇的提取工艺图1 R e s 标准曲线F i g.1 R e s s t a n d a r dc u r v e 取1m L ,定容至25m L ,即可得到标准品溶液(0.008m g/m L )㊂再依次吸取其溶液0㊁1㊁2㊁3㊁4㊁5m L 用无水乙醇溶解,定容至10m L ,得到质量浓度分别为0㊁0.0008㊁0.0016㊁0.0032㊁0.0040m g /m L 的R e s 标准品溶液㊂用无水乙醇做比对,测定每份样品在波长为306n m 处的吸光值,做2组平行实验,取2组实验平均值㊂建立吸光度A 对样品浓度C (m g/m L )的线性回归标准曲线,如图1和表3㊂回归方程为表3 实验数据T a b l e3 E x pe r i m e n t a l d a t a 标准品溶液浓度μg ㊃m L -1吸 光 度 值一组二组平均0.80.4560.4580.4571.60.5370.5390.5382.40.6200.6240.6223.20.7100.7060.7084.00.7710.7690.770A =0.0995C +0.3802㊁R 2=0.9973(5)3.2 乙醇回流法不同因素对提取率的影响3.2.1 单因素对白藜芦醇提取率的影响1)乙醇浓度:按照2.2.1(1)的方法进行处理,结果如图2㊂2)回流时间:按照2.2.1(2)的方法进行处理,结果如图3㊂3)回流次数:按照2.2.1(3)的方法进行处理,结果如图4㊂4)料液比:按照2.2.1(4)的方法进行处理,结果如图5㊂图2 乙醇浓度的影响F i g .2 E f f e c t o f e t h a n o l c o n c e n t r a t i o n 图3 回流时间的影响F i g.3 E f f e c t o f r e f l u x t i m e 图4 回流次数的影响F i g .4 E f f e c t o f r e f l u x t i m e s 图5 料液比的影响F i g .5 E f f e c t o fm a t e r i a l l i qu i d r a t i o 由上图分析得,浓度70%时提取率达到波峰,其他值皆不理想㊂提取率与回流时间正相关,2h 后863沈阳师范大学学报(自然科学版) 第38卷斜率突然变小㊂线性曲线变化趋势为先上升,提取2次后曲线趋于平稳㊂只有1ʒ10的原料与溶剂比例才可以将R e s 充分提取出来,除此之外效果都不理想,乙醇用量越多,溶解的杂质越多,导致提取率下降㊂由此可得,原料与溶剂比例1ʒ10,提取的R e s 最多㊂3.2.2 正交实验结果以提取率为响应参考,设计正交实验,正交实验结果如表4,方差分析表见表5㊂表4 正交实验结果T a b l e4 R e s u l t s o f o r t h o g o n a l e x pe r i m e n t 实验号因 素ABCD吸光度值A 提取率/%111110.5061.01212220.4941.14313330.4771.16421230.4851.26522310.5401.29623120.5061.27731320.5031.23832130.4841.25933210.4951.24k 11.1031.1671.1771.180k 21.2731.2271.2131.213k 31.2401.2231.2271.223R0.1700.0600.0500.043表5 正交实验方差分析表T a b l e5 A n a l y s i s o f v a r i a n c eo f o r t h o g o n a l e x pe r i m e n t 因素方 差 来 源偏差平方和自由度F 比F 临界值显著性A0.04923.1114.460*B 0.00720.4444.460C 0.00420.2544.460D 0.00320.1904.460误差0.0608注:方差分析表*表示差异显著,P <0.05㊂由表4得,各变量对R e s 的提取率都有一定的作用,但强弱不一:A>B>C>D ,其中最优条件为A 2B 2C 3D 3,即用70%浓度乙醇,1ʒ10的原料与溶剂比例时,每次2h 的回流3次㊂采用最优条件验证结果,其提取率达1.30%,好于之前结果,证明此工艺优化良好㊂3.3 超声波提取不同因素对提取率的影响3.3.1 单因素对白藜芦醇提取率的影响1)乙醇浓度:按照2.2.3(1)的方法对虎杖中R e s 进行超声浸提,测所得提取液吸光度值,计算R e s 提取率,绘制坐标图,结果见图6㊂2)提取时间:按照2.2.3(2)的方法对虎杖粉末进行超声浸提,测提取液吸光度值,计算R e s 提取率,绘制坐标图,结果见图7㊂3)超声波清洗器功率:按照2.2.3(3)的方法对虎杖粉末进行超声浸提,测提取液吸光度值,计算R e s 提取率,绘制坐标图,结果见图8㊂4)料液比:按照2.2.3(4)的方法对虎杖粉末进行超声浸提,测提取液吸光度值,计算R e s 提取率,绘制坐标图,结果见图9㊂由图6可知,线性曲线趋势先升后降,也为提取率变化趋势,浓度低时,效果不理想,过高也不利于R e s 溶出,最佳条件80%㊂由图7可知,线性曲线变化趋势是先增大,提取时间60m i n 后曲线趋于平稳㊂由图8可知,功率120W 时提取率达到波峰,其他值皆不理想㊂由图9可知,原料与溶剂比例为1ʒ25时R e s 提取率接近峰值㊂3.3.2 正交实验结果以提取率为响应参考,设计正交实验,正交实验结果如表6,方差分析表见表7㊂963第4期 崔 霖,等:虎杖中白藜芦醇的提取工艺图6乙醇浓度的影响F i g.6E f f e c t o f e t h a n o l c o n c e n t r a t i o n图7提取时间的影响F i g.7E f f e c t o f e x t r a c t i o n t i m e图8超声功率的影响F i g.8E f f e c t o f u l t r a s o n i c p o w e r图9料液比的影响F i g.9E f f e c t o fm a t e r i a l l i q u i d r a t i o 表6正交优化实验结果T a b l e6E x p e r i m e n t a l r e s u l t s o f o r t h o g o n a l o p t i m i z a t i o n实验号因素A B C D吸光度值A提取率/%111110.4291.09 212220.4301.26 313330.4241.24 421230.4281.35 522310.4411.34 623120.4321.31 731320.4301.24 832130.4261.29 933210.4351.22 k11.1971.2271.2301.217k21.3331.2971.2771.270k31.2501.2571.2731.293R0.1360.0700.0470.076表7正交优化实验方差分析T a b l e7A n a l y s i s o f v a r i a n c eo f o r t h o g o n a l o p t i m i z a t i o ne x p e r i m e n t因素方差来源偏差平方和自由度F比F临界值显著性A0.02822.3334.460*B0.00720.5834.460C0.00420.3334.460D0.00920.7504.460误差0.0508注:*表示差异显著,P<0.05㊂073沈阳师范大学学报(自然科学版)第38卷通过上表的分析,实验中选定的变量对R e s 提取率影响存在差异,强弱为:A>D>B>C ㊂当变量为A 2B 2C 2D 3时最佳,此时乙醇质量分数为80%,原料与溶剂比例1ʒ28,在超声波清洗器的功率为120W 的条件下提取60m i n ㊂其中变量A 的影响效果显著,即乙醇浓度为影响作用最强的变量,符合正交结果㊂在A 2B 2C 2D 3因素下验证其结果,结果R e s 的提取率可以达到1.36%,好于之前结果,该工艺优化良好㊂3.4分离纯化实验图10 R e s 洗脱曲线F i g.10 R e s e l u t i o n c u r v e 3.4.1 溶剂萃取法分离纯化分别使用以上2种方法确定的最佳优化工艺进行萃取㊂乙醇回流法得粗品88.25m g,纯度60.04%;超声波辅助法得粗品76.37m g ,纯度74.98%㊂3.4.2 大孔吸附树脂分离纯化经减压后所得浓缩洗脱液中的R e s 含量为1.65m g /m L ,纯度由51.02%升至89.07%,纯化后得到干燥的R e s 化合物61.13m g ,收率95.09%㊂R e s 洗脱曲线如图10所示㊂4 结 论室温条件下,用乙醇回流法提取白藜芦醇,最佳工艺条件为70%浓度乙醇,原料与溶剂比例1ʒ10,回流3次,每次2h ,此时白藜芦醇提取率达1.30%㊂室温条件下,用超声波辅助法提取白藜芦醇的最佳工艺条件为80%浓度乙醇,原料与溶剂比例1ʒ28,在超声功率120W 的条件下浸提60m i n ,此时白藜芦醇提取率达1.36%㊂经过萃取和大孔树脂吸附后,能够使目标产物纯度提高明显,表明应用大孔树脂可对虎杖中白藜芦醇进行有效的纯化㊂参考文献:[1]刘力铭.虎杖中白藜芦醇的纯化工艺研究[J ].农产品加工(学刊),2014(21):2930.[2]朱春霞,韩彬.虎杖的化学成分与抗痛风作用研究进展[J ].深圳中西医结合杂志,2016,26(8):191193.[3]夏海武,战克勤,许娜,等.正交设计法优选虎杖中白藜芦醇水提取工艺[J ].中国医院药学杂志,2011,31(2):123125.[4]时圣明,潘明佳,王文倩,等.虎杖的化学成分及药理作用研究进展[J ].药物评价研究,2016,39(2):317321.[5]鲍云惠,吕锁忠.H P L C 法测定去炎酊中游离大黄素和大黄酚的含量[J ].中国民族民间医药,2019,28(7):4749.[6]刘炜,丁小霞,雷绍荣,等.白藜芦醇的提取及检测方法研究进展[J ].山西农业科学,2017,45(8):13841388.[7]谢兵,刘凤魁.用乙酸乙酯提取虎杖中的白藜芦醇[J ].广东化工,2015,42(16):3335.[8]陈志翔,刘琴,杨鹏.虎杖中白藜芦醇超声波提取工艺[J ].广东化工,2017,44(7):7879.[9]郝新才,金明,明东坡,等.酶解法提取虎杖中白藜芦醇苷的工艺研究[J ].湖北医药学院学报,2018,37(4):346348.[10]路飞,吴梦博,李哲,等.蒜蓉菠菜饼干的配方及工艺优化研究[J ].沈阳师范大学学报(自然科学版),2019,37(6):524528.[11]魏娜,王画,赵震.MO F s 在催化C O 2环加成反应中的催化位点类型[J ].沈阳师范大学学报(自然科学版),2020,38(2):132139.[12]王兰兰,宋晓卉,杨笛,等.环境条件对植物有机酸影响研究进展[J ].沈阳师范大学学报(自然科学版),2019,37(3):236239.[13]J A N G M ,C A IL ,U D E A N IG ,e t a I.C a n c e r c h e m o p r e v e n t i v e a c t i v i t y o f r e s v e r a t r o l ,aa t u r a l p r o d u c t d e r i v e d f r o m g r a p e s [J ].S c i e n c e ,1997,275:218220.[14]X I A O K ,X U A NLJ ,Y M ,e t a l .C o n t i t u e n t s f r o mP o l y g o n u mc u s p i d a t u m [J ].C h e mP h a r mB u l l ,2002,50(5):605.[15]王利洁.虎杖中白藜芦醇的提取纯化研究[D ].成都:成都中医药大学,2014.173第4期 崔 霖,等:虎杖中白藜芦醇的提取工艺。
虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的提取工艺研究
的含量较高ꎬ且具有一定的生物活性. 本实验在提取白藜芦醇的同时考虑到对虎杖苷的提取ꎬ采用正交试
验法ꎬ以乙醇为提取溶剂ꎬ辅助以超声提取装置ꎬ对白藜芦醇和虎杖苷的提取工艺参数进行优化ꎬ为虎杖的
１.２ 仪器与设备
ＫＱ － １００ＤＥ 型数控超声波清洗仪( 昆山市超声仪器有限公司) ꎻＦＡ１００４ 电子分析天平( 上海天平仪器
厂) ꎻＨＨ － ２ 数显恒温水浴锅( 常州国华实验仪器厂) ꎻＥｐｐｅｎｄｏｒｆ 离心机( Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５４１５Ｄ) ꎻ安捷
伦 １２６０ 高效液相色谱仪( 美国安捷伦公司) .
ｓｔｕｄｉｅｄ. Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎬａｎｄ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｕｓｅｄ
ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅｉｒ ｃｏｎｔｅｎｔｓ. Ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔꎬｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎꎬｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉｓ ８０％
应用项目( ＮＹ－０１１－２０１５) .
通讯作者:张玉千ꎬ硕士ꎬ讲师ꎬ研究方向:天然产物的分离纯化及微生物转化研究. Ｅ￣ｍａｉｌ:ｚｑｗｌ２０００＠ １６３.ｃｏｍ
— ８８ —
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
张玉千ꎬ等:虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的提取工艺研究
ｄｏｉ:１０.３９６９ / ｊ.ｉｓｓｎ.１６７２－１２９２.２０２０.０２.０１３
虎杖中白藜芦醇发酵和提取工艺
甲醇(分析纯)、乙腈(色谱纯)；超纯水 自制；白 藜芦醇苷对照品、白藜芦醇对照品 中国生物制品研究所。
收稿日期：2010-06-23 作者简介：曹亮(1984 —)，男，硕士研究生，研究方向为植物资源开发与利用。E-mail：phas0614@ * 通信作者：周建军(1953 —)，男，教授，硕士，研究方向为生物资源开发利用。E-mail：jjzhou01@
图 1 样品液相色谱图 Fig.1 Chromatogram of the sample
1.3.2 试验设计
1.3.2.1 发酵条件的选择 根据瞿卫林[13]的报道和曹庸[14]的专利，选择发酵时
间、温度、料液比为考察因素，设计正交试验进行发 酵条件的选择，并根据最优条件进行验证性实验。因 素水平见表 1 。
208 2010, Vol. 31, No. 22
食品科学
※工艺技术
1.2 仪器与设备 高效液相色谱仪 美国 Waters 公司；302 型电热鼓
风干燥箱 山东潍坊医药集团股份有限公司医疗器械厂； FW-177 型中药粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司； AB204 型电子天平 瑞士 Mettler Toledo 公司；恒温气 候箱、SHH421-420 型恒温水浴锅 河北航天仪器厂。 1.3 方法
中原有白藜芦醇的损失，但操作繁琐，成本较高。也 有报道[10]利用虎杖中微生物产生的酶进行发酵，但对于 发酵后的提取工艺报道各异。本实验先将虎杖进行自然 发酵，然后重点对提取工艺进行研究，通过优化发酵 条件及提取工艺，为白藜芦醇工业化生产提供依据。
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文章编号:1000-582X(2002)07-0053-04超声提取虎杖白藜芦醇及其液质联用分析X曾 里1,2,连春霞2,夏之宁2(1.重庆职工医学院,重庆400050;2.重庆大学化学化工学院,重庆400044)摘 要:超声波对中药有效成分提取有明显作用,超声波的频率、强度、作用时间对中药有效成分提取的影响的研究已有很多,但超声波另一重要参数)占空比对中药有效成分提取的影响的研究还未见报道。
用超声波辅助提取中药虎杖中白藜芦醇,探讨超声波的占空比改变对白藜芦醇有效成分含量的影响。
用HPLC-M S 分析提取物并比较其化学成分。
发现不同占空比的超声波辅助提取白藜芦醇,对其含量有一定影响。
占空比较小的超声波辅助提取,有利于保持较高的白藜芦醇的相对含量。
关键词:虎杖;白藜芦醇;超声波;占空比中图分类号:R28412文献标识码:A白藜芦醇是蓼科植物中药虎杖根茎的有效成分之一。
白藜芦醇(3,4c ,5-三羟基二苯乙烯)的相对分子质量为228,其结构式为:近年来,白藜芦醇对人体的活性作用日益受到重视。
据报道,白藜芦醇除了可以治疗皮炎、癣等过敏性疾病外[1],还能降低血清和肝脏的脂质,减少血小板凝聚,预防动脉硬化,防止冠心病,保护肝脏[2];另外,白藜芦醇对癌变过程中细胞和组织变异的诱导、起始和发展3个主要阶段都有抑制作用,是治疗组织癌变和抑制肿瘤发生最有前途的药物之一[3-4]。
超声技术对中药有效成分提取分离有许多优点,可提高提取率、缩短提取时间。
低温条件下,以超声波提取有效成分还有利于维持原药中有效成分的性质[5]。
超声波的频率、强度、作用时间对药物提取的各种影响均有报道,尚未见超声占空比对中药有效成分提取率,很少见超声参数对中药提取物中有效成分的影响的报道。
超声波的固定频率振荡如图1(a)所示,振荡的脉冲幅值在空化域值以上,使超声波在溶液中产生空化效应。
如果超声波连续作用一小段时间,如图1(b)中的U 段,而/脱气0)))停止作用的一小段时间,就是D 时间段。
在图1(b)中占空比较大,而占空比较小的情况如图1(c)所示。
所以,超声波的占空比是具有超声时间与间隙时间(脱气时间)之比,占空比这个参数对于控制液体中由超声波产生的空化现象及其附加作用,有明显影响。
笔者探索了超声波辅助提取虎杖化学成分,尤其对不同占空比的超声波从虎杖中提取白藜芦醇的情况进行了考察,结合HPLC-M S 检测,发现超声波占空比对成分组成有明显的影响。
(a)普通固定单频超声波形(b)占空比较大的超声波形(c)占空比较小的超声波形图1 超声波占空比示意图2002年7月重庆大学学报Jul.2002 第25卷第7期Jo urnal of Cho ngqing UniversityV ol.25 No.7X收稿日期:2002-03-11基金项目:国家自然科学基金资助项目(20175038)作者简介:曾里(1963-),女,重庆职工医学院讲师。
主要从事中药有效成分提取研究。
1 仪器与药品虎杖(购于重庆市桐君阁药房),乙醇、乙醚均为分析纯,甲醇、甲酸均为色谱纯。
A S3120A 超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司),频率为40kHz 。
美国PE SCI EX API 150M C A 液相色谱-单级四级杆质谱联用仪,PE series 200液相色谱泵,Ion Spary 接口。
2 实验部分1)称取虎杖粗粉(~80目)30g 2份,加70%乙醇150mL 、100mL 。
第1份,在占空比为1B 1的超声波作用下提取2次,每次5min(共10min)。
第2份,在占空比为1B 2的超声波作用下提取2次,分别为7min 和8min,共作用15min 。
所以,2份样品的实际超声作用时间相同,都为5min,具体参数见表1。
表1 虎杖中提取白藜芦醇的超声参数(频率40kHz)样品实际超声时间P s 脱气时间P s 占空比时间P mi n A 0.20.21B 110B0.20.41B 215然后进行过滤,得醇提滤液。
将醇提液水浴加热,浓缩至膏状,加水10m L,用乙醚100mL 振摇,静置,倾出醚层,再加50mL 乙醚,振摇,静置,倾出醚层,重复6次,除去蒽醌类成分,剩余物浓缩成含白藜芦醇的膏状物,烘干备样。
将2份试样分别标为样品A 和样品B 。
2)M S 测量:用90%甲醇水溶液分别溶解样品,直接进样,以(M +H)和(M -H)为检测对象进行M S 检测。
3)HPLC-M S 测量:选择高效液相色谱柱,Supelcosil AB Z+Plus,15cm @4.6mm ID 分析柱;流动相,V(0.1%甲酸甲醇液)B V(0.1%甲醇水溶液)=4B 6;流速,0.6mL P min 。
对A 、B 2个样品分别进行分离后,再经质谱检测,试验得出检验白藜芦醇适合的M S 条件为:正离子扫描,选择离子[M+H]检测,电喷雾电压5800V,扫描范围m P z 为50.0~450.0。
3 结果1)色谱分离总离子流M S 检测。
样品经色谱柱分离后,正离子扫描,得到A 、B2个样品的总离子流图(TIC),如图2。
从图2可看出,当保留时间t R 为2min 左右时,有离子流峰出现。
但由于图谱的基线太高,造成离子峰不太明显。
同时,2个试样的色谱图也无明显的区别。
几乎未检测出白藜芦醇。
说明样品不经采用选择离子流M S 检测,组分和杂质相互干扰,难以评价提取过程。
(a)样品A (b)样品B色谱条件:色谱柱,Supelcos il AB Z +Plus,15c m @4.6m m ID 分析柱;流动相,V (0.1%甲酸甲醇液)B V (0.1%甲醇水溶液)=4B 6;流速,0.6m L P m in图2 白藜芦醇提取物的总离子流图(TIC)2)图3为A 、B 2个样品在色谱的0~5min 时间段的[M+H ]+=229的选择离子图(X IC)。
从图中可看出,当流出时间为2min 左右时,不仅出现有效成分白藜芦醇峰,还存在其它杂质峰与之重叠。
比较而言,A 样品的离子峰重叠较多,且在3min 之前,还有一个含量较多的杂质峰。
B 样品在2min 处的谱图简单,表明组分单一,杂质峰少,在3min 之前也无明显杂质峰出现。
54重庆大学学报 2002年(a)样品A (b)样品B色谱条件:色谱柱,S upelcosil AB Z+Plus,15c m @4.6m m ID 分析柱;流动相,V (0.1%甲酸甲醇液)B V (0.1%甲醇水溶液)=4B 6;流速,0.6m L P m in,选择[M+H]+=229离子检测,电喷雾电压5800V图3 白藜芦醇提取物的选择离子图(XIC)3)图4为t R =2min 时,A 、B 2个样品的质谱图。
从质谱图可知,由于白藜芦醇的相对分子量为228,因此判断m P z =229.2的分子离子峰应为白藜芦醇的[M+H]+峰,此外,在m P z 为242、225.5、211、207有一定的丰度。
图(a)占空比为1B 1,超声时间10min 白藜芦醇提取物的质谱图,其杂质峰与白藜芦醇的峰比较,杂质峰较多且较高,m P z =225.5的杂质峰几乎与白藜芦醇一样高。
图(b)占空比为1B 2,超声时间15min 白藜芦醇提取物的质谱图。
其杂质峰明显减少,峰高降低。
说明在超声频率、时间相同的情况下,减小占空比,会使白藜芦醇提取物中杂质含量减少,占空比的改变对中药有效成分的提取起很重要的作用。
即使通过HPLC 分离的样品A 中的杂质也较样品B多。
(a)样品A(b)样品Bt R =2m in,正离子扫描,电喷雾电压5800V,扫描范围m P z 为50.0~450.0。
图4 白藜芦醇提取物的质谱图4 结论采用HPLC )M S 方法可以判断超声参数占空比对提取物白藜芦醇的影响。
在超声波的频率和作用时间相同情况下,脱气率增大,占空比减小,提取物中白藜芦醇的纯度增高,其作用更好。
质谱图中杂质峰的出现可能是由虎杖中的糖、甙及一些可溶于乙醇的其它杂质引起。
为进一步研究占空比对药物提取的影响,还应对提取物进行M S 定量分析,并增加超声波占空比变化因数,以及占空比结合其它参数变化对中药提取的效率、杂质含量影响的研究。
探讨占空比的变化对有效成分提取率的影响,占空比较小是否有利于维持有效成分的化学结构等等。
从虎杖中提取白藜芦醇,除考虑超声参数对提取物纯度的影响外,提取物还需经色谱柱分离提纯后,才能通过M S 检测出有效成分,否则由于杂质干扰太多,将掩盖有效成分,在质谱图上不会出现有效成分白藜芦醇的分子离子峰。
55第25卷第7期 曾 里等: 超声提取虎杖白藜芦醇及其液质联用分析参考文献:[1]韩雅珊,陈雷,戴蕴青.高效液相色谱法测定葡萄酒中的白藜芦醇[J].色谱,1999,11(4):364-366.[2]张喜云.虎杖的化学成分、药理作用与提取分离[J].天津药学,1999,11(3):13.[3]J A N GME I2S HIA N G,C AI L I2N IN G,et al.Cancer chemopreventiveactivity of resveratrol,a natural product derived fro m grapes[J].Science,1997,275(1):218-220.[4]FR AN K EL E N,B O SA N K C A,ME YER A S,et al.Co mmercialgrape juices inhibit in the vitro o xidatio n o f hu man lo w-density-lip oproteins[J].J A gric Foo d Chem,1998,46(3):834.[5]季大洪,苏瑞强,王颖.高新工程技术在中药提取分离中应用[J].时珍国医国药,2000.11(4):369-370.[6]王昌利,杨景亮,朱周才,等.超声提取芦丁得率的实验研究[J].中成药,1993,15(2):7-8.[7]郭孝武.超声强度对提取益母草总碱的影响[J].陕西师大学报(自然版),1999,27(3):57-59.Extracting Resveratrol from the Polygonum Cuspidatum Sieb under Ultrasonic Wave and Its Analysis by High Performance Liquid ChromatographyZENG Li1,2,LIAN Chun2xia2,XIA Zhi2ning2(1.Chongqing Medical Staff College,Chongqing400050,China;2.College of Chemistry and Chemical Engineering,Chongqing University,Chongqing400044,China)Abstract:It is efficient to e xtract active components from traditional Chinese medicine(TC M)by using ultrasonic wave.There has been many studies of the strength,frequency and action time of ultrasonic w ave influencing extract active components from TC M.There is no report about the research of another parameter)ultrasonic action on-off ratio which influences the process of extrating effective composition from TC ing ultrasonic wave to extract resveratrol f rom the Polygonum c uspidatun sieb, the influence of ultrasonic on-off ac tion ratio on the purity of resveratrol e xtrac ts f rom the Polygonum c uspidatum sieb is compared by analyzing the resveratrol with high perf or mance liquid chromatography.The extracts from herbs under different ultrasonic action conditions have dif ferent impurities.The impurity of the extracts is increasing along with decreasing of on_of f ratio of ultrasonic.Key words:polygonum c us pidatum sieb;resveratrol;ultrasonic w ave;acting on-off ration(责任编辑张苹) 56重庆大学学报2002年。