薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究
电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究唐玉海,靳菊情,刘 芸,郑晓晖,刘宏浪(西安交通大学理学院应用化学系,陕西西安710061)摘要:基于发现的白藜芦醇苷对L um ino l电化学发光强烈的抑制作用,建立了电化学发光法测定白藜芦醇苷含量的新方法。
白藜芦醇苷浓度在0105～1216m g・L-1范围内与发光减少值分段呈良好的线性关系。
检出限为0105m g・L-1。
对0125m g・L-1白藜芦醇苷平行测定11次,其相对标准偏差为2125%。
该法具有简便、快速、灵敏的特点,应用于中药虎杖中的白藜芦醇苷的测定,结果满意。
关键词:电化学发光分析法;虎杖;白藜芦醇苷中图分类号:R92712 文献标识码:A 文章编号:100422407(2002)0120006203 白藜芦醇(resveratro l)存在于多种植物中,目前报道的从葡萄等植物中提取分离较多。
我们从中药虎杖(P oly g onum.C usp id a tum Sieb.E t Zucc)中提取分离得到一种白色针状结晶体,经结构测定为白藜芦醇苷。
白藜芦醇苷分子中存在2个酚羟基,从化学结构上看具有较强的抗氧化性;文献报道〔1～3〕,白藜芦醇具有抗肿瘤、抗炎和防治心血管疾病等作用。
对白藜芦醇苷的测定,已有H PL C、质谱、气相色谱、毛细管电泳等方法报道〔4,5〕;化学发光法和电化学发光法测定法还未见报道。
白藜芦醇苷在磷酸盐中性介质中,在016V(vs A g A gC l)左右,白藜芦醇苷对L um ino l在铂电极上的电化学发光有强烈的抑制作用,基此建立了测定白藜芦醇苷电化学发光新方法,并成功地测定了中药虎杖中的白藜芦醇苷含量,该法具有简便、快速、灵敏的特点。
1 仪器与试药111 仪器 M EC212B型多功能电化学分析仪(江苏电分析仪器厂);B PCL超微弱化学发光测量仪(中国科学院生物物理研究所);工作电极为铂片电极(4mm ×5mm),对极为铂电极(7mm×10mm),参比电极为A g A gC l电极。
对心血管起保护作用的天然药物白藜芦醇的研究概述
对心血管起保护的天然药物白藜芦醇的研究概述摘要:白藜芦醇是一种具有重要生理活性的多酚类化合物。
本文就天然药物白藜芦醇的理化性质、主要资源来源、生物活性、提取、分析检测及其在心血管保护方面的作用机制等进行了全方面阐述，并对白藜芦醇的发展前景进行了展望。
关键词：白藜芦醇；心血管保护；生物活性；提取检测引言白藜芦醇(resveratrol，Res)具有芪类结构的一种非黄酮类多酚化合物，它[1]是植物受到应激时自身合成的一种抗毒素。
分子式为CHO，分子量为228.25，14123白藜芦醇的纯品外观为无色针状结晶，无味，难溶于水，易溶于有机溶剂，溶解性顺序大致为：丙酮>乙醇>甲醇>乙酸乙酯>乙醚>氯仿；在366 nm的紫外光照射下产生紫色荧光，遇氨水等碱性溶液显红色，遇镁的甲醇溶液显粉红色，并能和三氯化铁一氰化钾起显色反应；利用此性质可以鉴定白藜芦醇。
在低温、避光条件下较为稳定，碱性环境中不稳定。
熔点256～258℃，升华温度261℃。
天然的白藜芦醇有顺反两种结构，自然界中主要以反式构象存在，两种结构可以分别与葡萄糖结合，形成顺式和反式白藜芦醇糖苷，而顺式和反式的白藜芦醇糖苷在肠道中糖苷酶的作用下可以释放出白藜芦醇。
在紫外光线照射下，反式白藜芦醇[2]能够转化为顺式异构体白藜芦醇及其糖苷分子式见图1。
图 1 白藜芦醇及其糖苷分子式1 白藜芦醇来源的主要资源植物白藜芦醇( Resveratrol) 及其衍生物主要存在于葡萄属、蓼属、花生属、藜芦属21个科、31个属的至少72种植物中，其中包括虎杖、决明、桑树等常见的药用植物，以及葡萄、花生等农作物。
目前天然白藜芦醇的主要来源植物是葡萄Vitis、虎杖Polygonumcuspidatum 和花生peanut。
葡萄是葡萄科葡萄属落叶藤本植物，我国长江流域以北各地均有种植。
湖南、贵州等地野生及人工栽培的刺葡萄Vitis davidii Foex中的白藜芦醇的含量比较高。
TLC法测定虎杖中白藜芦醇的含量_周国海
板 (日本) ,定量毛细管点样器 (DRUMMOND U. S. A) , RE540 薄膜 ,旋转蒸发仪 (日本大和公司) ,FD —230 红外水份测定仪 (日本大和公司) ,10 万分之一天平 (日本岛津) 。 1. 2 方法 1. 2. 1 薄层层析展开剂条件的摸索 首先采用纸层析做预 备实验 ,摸索层析展开剂条件 ,然后利用此展开条件在硅胶 G板上展开 ,具体做法为 : 取硅胶 G 板 ,于 105 ℃活化 0. 5 h 后点样 ,置于展开剂中直立上行展开 17 cm 取出 ,60 ℃烘干 ,
is 0. 548 % .
Key Words : TLC ; Polygonum cuspidatum ; resveratrol ; content test
虎杖 ( Polygonum Cuspidatum Sieb et Zucc) 为蓼科蓼属小灌 木 ,广泛分布于华东 、中南 、陕西 、甘肃 、四川等地区 ,为我国 传统中 药[1] 。其 根 茎 具 有 活 血 、清 热 利 湿 、止 咳 化 痰 等 作 用[2] 。现代药学研究证明其具有多种药理作用 ,发现其所含 主要活性成分白藜芦醇 ( Resveratrol) ,其化学名称为反式 3 , 5 ,4 ′—三羟基 1 ,2 —二苯乙烯 (trans —3 ,5 ,4 ′—trihydroxystilbene) , 具有抗癌[3] 、抗高血压和冠状动脉血管扩展活性 ,可以降低 大鼠的血清中总胆固醇 ,还有降血脂等作用 ,可有效地抑制 血管细胞中组织因子 TF 和细胞质的异常表达 ,防止心血管 疾病发生等方面的功能[4] 。目前至少已在 21 个科 ,31 个属 的多种植物中发现了白藜芦醇 ,在这些植物中 ,虎杖 ( Poly2 gonum cuspidatum Sieb et Zucc) 白藜芦醇的含量是最高的[5] 。 目前国内主要采用 HPLC 法进行白藜芦醇含量测定 ,没有统 一测定标准[6] 。而薄层扫描法 ( TLC 法) 广泛用于中药检测 中 ,具有精度高 、速度快 、成本低等特点 。而 TLC 法测定虎杖
高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量 (2)
高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量本文采用高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量。
测定条件: Hypersil ODS2-C18柱（4.6×250mm, 5μm）,流动相为甲醇：水( 40：60) ,检测波长: 303 nm，流速：1.0ml/min。
结果表明:白藜芦醇在0. 4~2. 0μg 范围内具良好的线性关系, 相关系数= 0. 9998,平均回收率为98. 19%（n=3）。
结论：本方法操作简便快速，结果准确可靠，适于虎杖提取物中自藜芦醇的测定。
标签：白藜芦醇；虎杖提取物；高效液相色谱法Determination Of resveratrol In Polygonum Cuspidatum ExtractBy High Performance Liquid ChromatographyLiu De-zhiZhejiang huisong Pharmaceutical Co. Ltd, Hangzhou 310018Abstract: In this paper, the determination of resveratrol in Polygonum cuspidatum extract by hplc. Determination of conditions: Hypersil ODS2-C18 column ( 4.6 × 250mm, 5 μ m ), mobile phase of methanol: water ( 40:60 ), the detection wavelength: 303nm, flow rate: 1.0ml·min. Results: resveratrol has good linear relationship in t he 0 4~2. 0 μg range, correlation coefficient = 0.9998, the average recovery rate was 98.19% ( n=3 ). Conclusion: the method is simple and rapid, accurate and reliable, and is suitable for determination of resveratrol from Polygonum cuspidatum extract.Key words: Resveratrol; Polygonum cuspidatum extract; High performance liquid chromatography虎杖提取物是由虎杖经一定的提取工艺提取而成。
综述白藜芦醇
不同砧木葡萄组织中白藜芦醇含量的差异摘要：用HPLC 法测定由不同砧木嫁接的葡萄果肉、叶柄、种籽、叶片、果皮及果穗轴中白藜芦醇的含量, 发现葡萄各组织中白藜芦醇含量的差异很大。
其中葡萄果穗轴和果皮中的含量较高，其次是叶片、种子和叶柄，葡萄果肉中白藜芦醇含量最低，这一发现从而为应用优选砧木制作高白藜芦醇含量的葡萄酒, 进行为葡萄皮渣的综合利用提供了依据。
关键字:白藜芦醇、葡萄皮渣、果穗轴、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气质联用法、薄层扫描法、示波分析法一、白藜芦醇的简介：目前，已知白藜芦醇及其衍生物存在于葡萄属、蓼属、桑树、花生、买麻藤、朝鲜槐等12科、31个属的72种植物中，然而就其含量而言，葡萄属、蓼属最高，并且人类日常生活中摄入白藜芦醇的方式主要有两种：一是饮用红葡萄酒、服药片和保健品等药用方式，二是来自于葡萄皮和葡萄籽以及中药虎杖等。
白藜芦醇（resveratrol, 3,4’,5-三羟基二苯乙烯），存在于葡萄、虎杖、花生、桑葚等许多植物中，其中葡萄，尤其是葡萄皮中含量较高，分子式为C14H12O3，相对分子量为228.25 。
它是葡萄属植物在抵御真菌侵染、机械、紫外线和臭氧等伤害时产生的植保素次生代谢产物，对人类健康特别是预防心血管疾病等方面具有显著功效。
白藜芦醇是一类在多种植物中存在的天然有机化合物，多以单体和其糖苷形式存在，每一种形式又存在顺、反两种异构体，故一般有4 种存在形式：顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、顺式白藜芦醇苷和反式白藜芦醇苷,在自然界中主要以反式存在，为无色针状结晶，熔点为256℃~257℃，升华温度为261℃，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂。
从大量的研究结果发现，白藜芦醇及其糖苷异构体是生物活性物质，对人体具有保健作用[1] ，它是一种对人类健康有显著作用的天然活性物质，在国际上已引起了广泛的关注。
由于其特殊的保健功能而备受消费者的青睐。
据报道，白黎芦醇除了可以治疗皮炎、癣等过敏性急病外，还能降低血清和肝脏的脂质、减少血小板凝聚、预防动脉硬化、防止冠心病、保护肝脏。
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎 杖 中 自藜 芦醇 和 白藜 芦 醇 苷 的提 取及 含 量 测定
刘仁 旺， 滕增辉 ， 张邦乐， 宦梦蕾， 杨 茜， 周四元 （ 军医 第四 大学药学系 药理学教 研室， 西安 ７ ０３ 陕西 １ ３） ０
【 摘 要 】目的 ： 建立同时测定 白藜芦醇和 白藜芦 醇苷含量 的
Ｅｘ ｒ ｃｉ ｎ ｆｒ ｓ ｅ ａ ｒ ｌａ ｄ ｏ ｙ ａ ｉ ｔ ａ ｔｏ ｏ ｅ ｖ ｒ ｔ ｏ ｎ ｐ ｌｒ ｔｎ ｄ ｆ ｏ ｇ ａ ｋ ｔ ｅ ｒｍ ｉｎｔ ｎｏ ｗｅ ｄ ｒ ｉｏ ｅ ｎ ｉｓ ｈ ｚ ｍ ａ ｄ ｔ ｄ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｅ ｅ ｍ ｎａ ｉ ｎ
ｄ ｓ ｎ（ ａｔ ｄ ３ ｌ ｅ ） ｗ ｓｉ ｒ ｕｅ ｐｉｉ ｈ ｅｉ ４ ｆ ｏ ａ ｅ ｌ ｇ ｃｒ ｎ ｓ ｖ ｓ ａ ｎ ｏ ｃｄ ｔ ｏｔ ｚ ｔｅ ｔｄ ｏ ｍ ｅ
ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｆｅ ｔ ｃｉｎ． ｅ ｈ ｏｏ ｏ ｘ ａ ｔｏ ｙ ｒ ｔ ｅ ｔ ｔ ｏ ｔ ｎ ｆｒ ｓ ｅ ａｒ ｌａ ｄ Ｉ ｔ ｏａ ｃ ｎ ｅ ｔｏ ｅ ｖ ｒ ｔ ｌｈ ｌ ｏ ｎ ｐ ｌｄ ｔ ｓ ｔ ｅ ｅ ａ ｕ ｔ ｎ ｉ ｄ ｘ ＲＥＳ ｏｙ ａ ｉ ａ ｖ ｌ ａｉ ｎ ｅ ． ｎ ｈ ｏ ＵＬＴＳ：Ｕｎ ｅ ｈ ｐｉ ｄ ｒｔｅ ｏ ｔ — ｍｉ ｄ ｃ ｒ ｍａｏ ａ ｈ ｃ ｃ ｎ ｉ ｏ ｚ ｈ ｏ ｔｇ ｐ ｉ ｏ ｄｔ ｎ， ｔ ｅ ｒ ｔｎ ｉ ｆ ｒ ｓ ｅ ａｒ ｌ ｅ ｒ ｉ ｈ ｅｅ ｔ ｔ ｍｅ ｏ ｅ ｖ ｒｔｏ ｎ ｏｙ ａ ｉ ｗａ ６ ８ ｍｉ ． ｎ，ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ，ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｄ ｐ ｌｄ ｔ ｓ ． ｎ ａ ｄ ４ ７ ｍｉ ｎ ｎ ｅ ｐ ｃ ｉ ｌ ｎ ｈ ｙ ｖ ｃ ｕ ｄ ｂ ｅ ａ ａｅ ｅｌ ｗ ｔ ｎ ｅ ｅ ｅ ｃ ．Ｔ ｅ ｅ ａｉｎ ｏ ｉ ｅ ｒ ｏ ｌ ｅ ｓ ｐ ｒ ｔ ｄ ｗ ｌ ｉ ｈ ｉｔ ｒ ｒ ｎ ｅ ｈ ｑ ｔ ｆｌ ａ ｆ ｕ ｏ ｎ ｅ ｒ ｓ ｉ ｏ ｅｅ ｎｉ ｔ ｆ ｅ ｖ ｒ ｔ ｏｙ ａｉ ｗｅｅ Ｙ ｒｇ ｅ ｓ ｎ ｆｒｄ ｔ ｒａ ａｉｎ ｏ ｓ ｅ ａｒ ｌａ ｄ ｐ ｌｄ ｔ ｒ ＝ ｏ ｎ ｏ ｒ ｏ ｎ ｎ
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定一、本文概述本文旨在探讨虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法及其含量测定技术。
虎杖作为一种具有广泛药用价值的天然植物，其中含有的白藜芦醇和白藜芦醇苷是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，研究虎杖中这两种成分的有效提取和准确测定方法对于深入理解虎杖的药理作用以及优化其临床应用具有重要意义。
本文将综述当前虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取技术，包括溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等，并评价其优缺点。
本文还将介绍含量测定的常用方法，如高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等，并探讨其准确性和可靠性。
通过本文的综述，旨在为虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的深入研究和应用提供有益的参考。
二、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法虎杖，作为一种具有丰富生物活性的中草药，被广泛用于传统医学中。
其内含的白藜芦醇和白藜芦醇苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，因此，对这两种成分的提取和含量测定具有重要的意义。
以下将详细介绍虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法。
我们需要新鲜的虎杖根茎，确保其来源清洁、无污染。
随后，将虎杖根茎进行清洗、干燥和粉碎，以便后续的提取操作。
由于白藜芦醇和白藜芦醇苷均具有一定的极性，因此，我们常选用极性溶剂如甲醇、乙醇等进行提取。
这些溶剂能够有效地溶解并提取出虎杖中的目标成分。
常用的提取方法包括浸泡提取、回流提取和超声波辅助提取等。
考虑到效率和提取效果，我们通常采用回流提取法。
具体操作如下：将粉碎后的虎杖粉末与提取溶剂混合，置于回流装置中，加热回流一定时间，使溶剂充分与原料接触，从而充分提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
提取完成后，需要对提取液进行处理，以去除其中的杂质，提高目标成分的纯度。
常用的处理方法包括过滤、浓缩和干燥等。
通过以上步骤，我们可以有效地从虎杖中提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
这为后续的含量测定和进一步研究提供了基础。
虎杖白藜芦醇的提取工艺及检测方法的研究进展
虎杖白藜芦醇的提取工艺及检测方法的研究进展【摘要】介绍了虎杖中白藜芦醇的提取以及检测方法的研究进展，为进一步开发利用提供了依据。
【关键词】虎杖白藜芦醇提取工艺检测方法Abstract:In this paper，the advances in the research of extraction technology and determination of resveratrol from Polygonum cuspidatum were introduced，which provided references for more exploitation in the future.Key words:polygonum cuspidatum; Resveratrol; Extraction technology; Determination白藜芦醇(3，4，5，-三羟基二苯乙烯；trans-resveratrol)是一种活性多酚物质，在虎杖、葡萄、花生、毛穗藜芦、毛脉酸模等植物中存在。
白藜芦醇被认为是一种植物抗毒素，在植物受到病原性进攻和环境恶化时产生的。
其药理作用为：抗菌、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝聚、保护肝脏、雌激素作用、防辐射、免疫调节、抗艾滋病活性等［1～3］。
白藜芦醇已被喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药物，它在食品、医药等方面应用也越来越广。
在日本，已将含白藜芦醇植物提取物作为食品添加剂使用；在我国，也有将白藜芦醇植物提取物制成降脂、美容、减肥和抗癌天然保健食品及胶囊［4］。
本文回顾了近年来虎杖白藜芦醇的提取工艺以及检测方法的研究进展。
1 提取方法1.1 酶提取法虎杖中除了含有白藜芦醇外，还含有白藜芦醇苷、蒽醌类、二苯乙烯类、多糖、氨基酸等物质，白藜芦醇苷在一定的条件下可以通过酶解脱去葡萄糖基而转化为白藜芦醇，酶解可以通过加入生物酶或利用植物内微生物进行，采用酶法从虎杖中提取白藜芦醇已有专利报道［5～8］，向海艳等［9］用纤维素酶酶解后提取，虎杖中白藜芦醇苷在纤维素酶作用下，转化成白藜芦醇，使白藜芦醇得率大大提高。
虎杖中白藜芦醇测定方法的比较研究
叶秋雄,黄 苇3(华南农业大学食品学院,广东广州510642)摘 要:虎杖中有效成分白藜芦醇经提取、分离纯化后,用HP LC 法、一阶导数光谱法、紫外分光光度法测其含量。
结果表明:HP LC 法分离度好,测定结果稳定、准确,相对标准偏差小;样品未经分离纯化时,干扰组分较多,一阶导数光谱法、紫外分光光度法测定结果与HP LC 法相关性不显著,相对标准偏差较大;分离纯化可消除背景干扰,提高检测结果的准确性。
一阶导数光谱法操作简单,测定结果较紫外分光光度法准确;可替代HP LC 法用于白藜芦醇的测定。
关键词:白藜芦醇,超声波,HP LC 法,一阶导数光谱法,紫外分光光度法Com p a ra ti ve s tudy o n m e tho d s fo r de te r m i na ti o n o f re sve ra tr o l fr om po l ygo tnum cu sp i da tumY E Q i u -x i ong,HUANG W e i3(College of Food Science,South China Agricultural University ,Guangzhou 510642,China )Ab s trac t:Th re e a na lys is m e thod s w e re us e d i n th is s tud y to a na l yze the c on te n t of re s ve ra tro l a nd the e ffe c tive c om p one n tsi n p o lyg o tnumc usp id a tum ,name l y,HPLCm e thod,firs t -d e ri va ti vesp e c tra m e thoda ndUV -Sp e c trop ho tom e tric m e thod 1It i s s ug g e s te d tha t the HPLC m e thod ha d g ood s ep a ra tion e ffe c t a nd a c c u ra te m e a s u rem e n t 1The re s u lts s how e d tha t s om e i n te rfe ring c om p one n ts s e em e d p re s e n t i f the s am p le s ha d no t s ep a ra te d a ndp u rifie d 1B e c a us eofthes e ve reb ac kg roundi n te rfe re nc e,thete s t c ond uc te db ytheUV -Sp e c trop ho tom e tric m e thod s how e d a re s u lt h ig he r tha n the a c tua l va l ue 1The firs t -d e riva ti ve sp e c tra m e thod c ou ld e li m ina te the b a c kg round i n te rfe re nc e a nd a l s o ha d a n a d va n ta g e of s i m p lic ity a s w e ll a s a c c u ra c y 1Key wo rd s:re s ve ra tro l ;u ltra s on ic;HPLC m e thod;UV -sp e c trop ho tom e tric m e thod;firs t -d e riva tive sp e c tra m e thod中图分类号:TS20713 文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2010)05-0359-04收稿日期:2009-05-15 3通讯联系人作者简介:叶秋雄(1983-),男,在读研究生,研究方向:食品加工、保藏与包装。
川产虎杖中自藜芦醇与虎杖苷的含量测定
［ 文献标识码 】 Ｂ
学科分类代码 ： ３ ２ ０ ２ ４
近几年 ， 由于 白藜芦醇和虎杖苷在治疗心血管疾病有 着 独特的疗效 而备受关 注 ， 且 两者 又是虎杖 的主要 有效 成分 ， 所 以虎杖作 为提取 白藜芦 醇与 虎杖 苷 的原料 亦受 到 关注 。 文献报道 中多 以 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法对 虎杖 中 自藜 芦醇 与虎杖 苷 的含 量进行测定 ， 但是在报道 中对 四川地 区虎杖 的质量 的评 价研 究 尚未见报道 ， 所 以本实 验根据 实际境 况 ， 采集 了来 自四川 １ Ｏ个不同地区 的虎杖药材 ， 用Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法对其 中的自藜芦 醇与 虎杖苷含量进行 了测 定。 １ 川产虎杖 中自藜芦醇的含量测定 １ ． １ 实验材料 ： 虎杖 ， 经中药品种质量鉴定实验室万德 光教 授鉴 定 为 蓼 科 植 物 虎杖 Ｐ ｏ ｌ ｙ ｇ ｏ ｎ ｕ ｍ ｃ ｕ ｓ ｐ ｉ ｄ ａ ｔ ｕ ｍ Ｓ ｉ ｅ ｂ ．ｅ ｔ
—
１ ． ４ 色谱条件： 色谱 柱 为 依 利 特 Ｈ ｙ ｐ ｅ ｒ ｓ ｉ ｌ Ｏ Ｄ Ｓ Ｃ １ ８柱 （ ５ ｍ， ４ ． ６×１ ５ ０ ｍ ｍ） ； 流 动相 为 乙腈 一水 （ ２ ３ ： ７ ７ ） ， 检测 波长 为３ ０ ６ ａ ｍ； 流速 １ ． ０ ｍ Ｌ ／ ａｉ ｒ ｎ ； 柱温 ２ ９℃ 。 １ ． ５ 供试品溶液 的制备 与测定 １ ． ５ ． １ 供试品溶液 的制备 ： 取本 品粉末 Ｏ ． １ ｇ （ 精 密称定 ） ， 精密加入 ９ ５ ％ 乙醇 ２ ５ ｍＬ ， 称定重量 ， 超声处 理 ３ ０ ａｉ ｒ ｎ ， 取 出 冷却 ， 再称定 重量 ， 用９ ５ ％ 乙醇补 足减失 的重量 ， 摇匀 ， 取 上 清液 ， 过 滤即得供试品溶液 。（ 注意 ： 在提取过程避光 ） １ ． ５ ． ２ 样品 的测定 ： 分 别精 密吸取 供试 品溶液 各 ｌ ０ Ｌ注 入液相色谱仪 ， 测定 ， 即得 。ＨＰ Ｌ Ｃ色谱 图见 图 ｌ 、 图 ２， 试 验 结果见表 ２ 。
虎杖中白藜芦醇的含量TLCS法测定
虎杖中白藜芦醇的含量 TL CS 法测定
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傅红 王金龙 安徽省合肥市第二人民医院 230011
摘 要 目的 :建立一种虎杖中白藜芦醇的含量测定方法 。方法 : TL CS 法测定 ,以石油醚 - 乙酸丁酯 - 甲醇 - 冰醋酸 (4 :1 :0. 7 :0. 02) 为展开剂 ,293mm 紫外光为扫描波长 ,超声震荡法提取白藜芦醇 。结果 :乙醇为白藜芦醇的最佳溶媒 ,白藜芦醇的标准 曲线为 : A = 2292. 2 C + 87. 768 ,γ= 0. 999 ,平均回收率 101. 6 % , RS D = 2. 66 % 。结论 :该方法简单易行 ,精确度和重视性良好 ,可 用于虎杖的质量控制 。 关键词 虎杖 ;白藜芦醇 ;含量测定 ,薄层扫描法
制备工艺
处方 :大 黄 100g , 黄芩 100g , 黄 柏 100g 。抢水 洗 净 ,于 80～90 ℃烘干 。将以上药材粉碎成细粉 ,过 6 号 筛 ,备用 。另取黄凡士林 700g ,经 150 ℃1h 干热灭菌 , 过滤 ,放冷至 100 ℃,投入粉碎好的药粉 ,混匀 ,不断搅 拌至凝固 。分装成 30g/ 盒即得 。
4 周建军 ,张宏杰 ,杨培君 ,等. 汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及苷元 含量的测定. 中草药 ,2002 ,33 (5) :414
5 陈雷 ,杨福全 ,张天佑 ,等. 虎杖中白藜芦醇甙的调整塑流色谱分 离提纯及分析. 分析测试学报 ,2000 ,19 (4) :60 收稿日期 :2006 - 06 - 29
1. 3 扫描波长的确定 取硅胶 G 薄层板 ,105 ℃活化 1h ,点样对照品溶液 2μL ,以上述展开剂饱和 15min 后 展开 ,取出 、晾干 ,在紫外光下定位 ,在 200～370mm 范 围内分别进行样品及空白硅胶板光谱扫描 ,以样品扫 描结果减去空白吸收 ,发现白藜芦醇在 293nm 有最大 吸收 ,所以选择 293nm 为扫描波长 。
南昌大学科技成果——一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法
南昌大学科技成果——一种从虎杖中提取纯化白藜
芦醇的新方法
技术原理
白藜芦醇，具有抗癌、抗衰老、抗血小板聚集等重要的生理活性。
主要存在于葡萄、虎杖、藜芦等植物中。
研究表明，虎杖及葡萄中白藜芦醇及其白藜芦醇甙的含量最高。
该新方法将虎杖提取物中白藜芦醇甙通过酸催化水解反应富集出来，而后将富集产物以一定配比上预先处理好的大孔吸附树脂柱进行分离纯化，用水和乙醇洗脱，以薄层色谱法跟踪检测，进而实现纯度好、收率高的一种从虎杖中提取白藜芦醇的方法。
技术特点
1、以水为提取溶媒，成本低廉、操作简单、污染少；
2、通过酸催化水解反应可大大提高虎杖中白藜芦醇的含量，此原料可以通过进一步分离、纯化得到白藜芦醇，大大提高了资源的利用率；
3、应用大孔吸附技术分离纯化白藜芦醇，分离效果理想，有机溶剂使用少，工艺简单，树脂可重复再生利用，成本低，设备简单、投资少、工业化前景较好。
合作方式
技术转让、技术入股。
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定【摘要】目的：建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法，优化虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺. 方法：采用梯度法建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱方法，以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标，设计以乙醇浓度、溶剂倍数及醇提温度等为影响因素的4因素3水平的正交实验，确定虎杖中上述有效成分的最佳提取工艺. 结果：在选定的色谱条件下，虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷可以达到基线分离. 检测白藜芦醇及其苷的线性回归方程分别为Y=0.0006X-0.183 （r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）；线性范围分别为0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L. 日内、日间精密度都小于5%，回收率在90%～105%之间，样品分析时间小于7 min. 虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的最佳提取工艺为乙醇浓度80％，溶剂倍数15，醇提温度70℃，提取时间2 h. 结论：建立了准确可靠、分析速度快可同时检测虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方法，优化了质量可控的提取工艺.【关键词】虎杖；白藜芦醇；白藜芦醇苷；高效液相色谱0引言虎杖(polygonum cuspidtum sieb)为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖的干燥根茎，主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份［1］. 白藜芦醇(3，4′，5�踩�羟基�捕�苯乙烯)和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分，具有保护心脏、抗血栓、降血脂［2］等药理作用. 白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近，但其极性却相差较大. 本研究探讨一种兼顾白藜芦醇及白藜芦醇苷的提取工艺，并建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），旨在为虎杖的药理作用研究以及科学合理利用提供试验依据.1材料和方法1.1材料白藜芦醇苷和白藜芦醇的对照品均由中国药品生物制品检定所提供；虎杖的干药材购自西安市胡家庙药材市场. 2695型高效液相色谱仪，2996型二极管阵列检测器(美国Waters公司)；调温式电热套(北京科伟永兴仪器有限公司)；色谱纯乙腈，甲醇(美国TEDIA公司)，其他试剂均为国产分析纯.1.2方法1.2.1工作曲线的建立分别精密称取白藜芦醇苷及白藜芦醇对照品10 mg 置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成100 mg/L的白藜芦醇苷和白藜芦醇对照品混合储备液，备用. 分别精密吸取两对照品储备溶液0.05，0.2，1，2， 4 mL 配制成浓度为0.5，2，10，20， 40 mg/L的混合对照品的标准溶液，依次取20 μL进样. 色谱条件为：色谱分析柱：C18(250 mm×4.6 mm，5μm，美国Phenomenix公司)；流动相：乙腈和水，梯度洗脱如表1所示. 检测波长：315 nm；流速：1 mL/min；柱温为30℃. 按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度值为横坐标绘制工作曲线，应用Excel 软件采用最小二乘法计算回归方程.表1HPLC流动相梯度表时间(min)〖〗乙腈(％)〖〗水(％)〖〗流速(mL/min)〖〗梯度类型0〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗67〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗69〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗620〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗11.2.2精密度和准确度测定分别精密吸取白藜芦醇及白藜芦醇苷储备液0.1，0.5，3 mL，配成浓度为1，5，30 mg/L混合对照品的标准溶液. 每个浓度6个样本，连续测定3 d，与标准曲线的建立同时进行. 代入当日的回归方程计算标准溶液的浓度，将结果进行方差分析，即得到本方法的精密度. 将1，5，30 mg/L 三个浓度标准溶液的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定浓度值与标准溶液的标示浓度相比，即得方法回收率.1.2.3虎杖有效成分提取工艺的优化在本生产工艺研究中，根据药物有效成分、药理作用及理化性质特点，选择醇提法进行正交试验，以提取时间（A 1，2，3 h），乙醇浓度（B 70%，80%，90%），醇提温度（C 50，60，70 ℃）和溶剂倍数(D 10，15，20)作为考察因素，选择3个水平，综合评价提取工艺，选用L9(34)正交表，安排正交实验.取虎杖10 g，按L9(34)正交表设计的顺序，各加入设定的乙醇量，加热煎煮规定时间和次数，滤过，合并滤液，将滤液用甲醇稀释10倍后取样20 μL，用HPLC法测定白藜芦醇及白藜芦醇苷的峰面积，带入回归方程中，计算出白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量.2结果2.1HPLC检测方法的特异性在本实验选定的洗脱及检测条件下，白藜芦醇和白藜芦醇苷的保留时间分别为6.8 min和4.7 min. 白藜芦醇及白藜芦醇苷峰和杂质峰能实现基线分离，样品峰的测定不受杂质峰的干扰（图1）.2.2白藜芦醇苷及白藜芦醇标准曲线回归方程以白藜芦醇和白藜芦醇苷的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标建立标准曲线. 应用Excel软件采用最小二乘法得到白藜芦醇和白藜芦醇苷的工作曲线回归方程： Y=0.0006X-0.183（r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）. 结果表明，白藜芦醇及其苷分别在0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L范围内呈良好的线性关系.2.3精密度和准确度测定1，5，30 mg/L浓度的白藜芦醇苷的日内精密度分别为4.0%，2.6%和2.0%；日间精密度分别为4.2%，4.3%和2.6%；方法回收率分别为（101±3.4）%，（94±2.3）%和（95±1.3）%.白藜芦醇的日内精密度分别为5.0%，3.0%和2.0%；日间精密度分别为4.8%，3.9%和1.1%；方法回收率分别为（96±5.1）%，（95±2.6）%和（95±1.6）%. 结果显示本方法准确、重复性好.2.4虎杖有效成分提取工艺的优化将测得值进行方差分析（表2），因素B差异具有统计学意义（P<0.01 ). 由表3中进行直观分析可知，A 因素中各水平试验结果的和比较为：K2>K1>K3，平均含量以第2水平为高；B 因素中各水平试验结果的和比较为：K1>K2>K3，平均含量以第1水平为高；C 因素中各水平试验结果的和比较为：K3>K1>K2，平均含量以第3水平为高；D 因素中各水平试验结果的和比较为：K2>K1>K3，平均含量以第2水平为高. 选择最佳的提取工艺为提取时间2 h，乙醇浓度为70%，醇提温度为70℃，溶剂倍数15.表2白藜芦醇及其苷含量方差分析结果3讨论近年来有较多关于虎杖有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷提取及含量研究的报道，多采用单因素、正交试验及大孔吸附树脂吸附法研究白藜芦醇的提取条件［3-4］；正交试验法及乙醇回流法优选白藜芦醇提取工艺［5-7］；以白藜芦醇苷为指标，研究虎杖的提取条件等［8］，这些方法均以白藜芦醇或白藜芦醇苷单个成分为指标. 由于虎杖中的活性成分白藜芦醇和白藜芦醇苷都具有保护心脏、抗血栓、降血脂等药理作用，因此我们在本实验中测定样品中的白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量并以此作为评价指标是合理可行的. 我们的实验结果表明，正交试验及方差分析结果虎杖醇提取工艺最大影响因素为乙醇浓度B，其次为溶剂倍数D，再次为醇提温度C和提取时间A. 最佳工艺乙醇浓度为80％，溶剂倍数为15，醇提温度为70℃，提取时间为2 h.目前对虎杖中白藜芦醇或白藜芦醇苷的测定方法很多［9-10］，但是同时对白藜芦醇及其苷测定的报道较少［11］，主要存在诸如样品处理方法复杂、分析时间较长等问题. 本研究建立的同时测定虎杖中白藜芦醇及其苷的方法选用315 nm作为检测波长，使检测方法获得了较高的灵敏度. 采用乙腈和水作为流动相，白藜芦醇和白藜芦醇苷与其他化合物达到基线分离. 白藜芦醇和白藜芦醇苷分别在6.8 min和4.7 min出峰，快速有效地实现了分离检测.综上所述，本研究建立的虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的HPLC检测方法具有灵敏、准确、迅速和工艺稳定、经济等特点，可用于虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量测定以及有效成分提取的质量控制.【参考文献】［1］肖凯，宣利江，徐亚明，等. 虎杖的化学成分研究［J］. 中国药学杂志，2003，38(1):12-15.［2］黄永洪，史若飞. 虎杖的活性成分及其在心血管方面的研究进展［J］.牡丹江医学院学报，2006，27(1):58-60.［3］朱立贤金征宇.虎杖中白藜芦醇提取分离工艺的研究［J］. 安徽农业科学，2005，33(1):77-78.［4］许汉林，付宜和，高鹏，等. 虎杖中白藜芦醇的提取与分离工艺研究［J］. 时珍国医国药，2006，17(8):1424-1425.［5］余淑娴，郑湘娟，余祖兵，等. 正交实验法优选虎杖中自藜芦醇的提取工艺［J］. 时珍国医国药，2006，17(4):594-595.［6］江曙，朱蓉蓉，张芳，等.虎杖中白藜芦醇提取方法及工艺的优化［J］. 南京中医药大学学报， 2006，22(3):197-199.［7］耿艳辉，李梦青，刘桂敏，等. 从虎杖中提取白藜芦醇的工艺研究［J］. 应用化工，2005，34(11):708-710.［8］许汉林，孙芸，邵继征，等. 正交法优化虎杖中白藜芦醇苷提取工艺的研究［J］. 湖北中医学院学报，2006，8(2):29-30.［9］曾建国，候团章，张胜.高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量［J］.中国中医药科技，2000，7(3):175-177.［10］朱鸿津. HPLC法测定虎杖中白藜芦醇的含量［J］.药学进展，2001，25(1):110.［11］周春山，向海燕，肖建波，等.高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇及其苷的含量［J］.药物分析杂志，2005，25(5):534-536.。
虎杖不同组织部位及其愈伤组织中白藜芦醇含量的测定
０ ４ ５１％ ，ｈ ｏｔｎ ｉ ａｒｗｉ０ ２ ６ ．２ ｔｅｃｎｅｔｎｍ ｒ ．６ ｏ ｓ ４％．ｎｔｅｓｍ ａ ｈｏ ｌ ｓｓｉ ｄ ｅｅｔ ｏｏ ．ｈ ｉ ｅｔ ｏｔｎ ｏ ｓｅａ Ｉ ａ ｅｂｔ ｆ ａ ｕｅ ｎ ｉ ｒｎ ｃｌ ｔｅ ｇ ｓｃｎｅｔ ｆｅｖｔ－ ｈ ｃ ｃｌ ｆ ｒ ｓ ｈｈ ｒ
ＬＥＩＹｏ ｇ ｎ ‘ ＣＡＯ ｎ ，ＣＨＥＮ ｅ ｘａ ｇ Ｙｏ ｇ Ｘｕ － ｉｎ ，Ｌ ｅ ＩＷ ｉ
，
（ ．Ｃ ｌ ｇ ｆ ｏｄＳｉ ｃ ，ｏｔ ｈｎ ｇｉ ｌ ｒ Ｕ ｉ ｒｔ，Ｇ ａｇｈｕ５ ０ ４ ，Ｃ ｉ ； １ ｏｌ ｅｏ ｏ ｃ ｎｅ Ｓｕ Ｃ ｉａＡ ｒ ｕｔ ｅ ｎｖ ｓｙ ｕｎ ｚｏ １６ ２ ｈｎ ｅ Ｆ ｅ ｈ ｃ ｕ ｅｉ ａ
０４ ５１ ， 中白藜芦醇质量分数为 ０ ２ ６ ．２ ％ 髓 ．６ ４％。在 同一批根 状 茎芽诱导的不 同颜 色愈伤组织体 系中， 棕褐 色愈 伤组织
中白藜芦醇质量分数最高为 ０ ０ ５ ．５ ， ０％ 淡黄绿 色愈伤组 织中仅 为 ０ ００５％ 。光照培 养条件 下的愈 伤组 织中 白藜芦醇 ．０ 质量 分数 为 ００ ０４％ ， ．１ 黑暗培养条件 下为 ０ ０ ７ ．０ ５％。不 同外植 体诱 导的愈 伤组 织 中白藜 芦醇质量 分数依 次为 ： 状 根
中图分类号 ：Ｑ １ Ｔ ９
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ：２ ３—２ １ （０ ７４
Ｄｅｅ ｍｉ ａｉｎ ｏ ｓ ｅａｒｌＣｏ ｔｎ ｎ Ｄｉ ｅ ｅ ｔＰ ｒｓ ａ ｄ Ｃａｌ ｓ ｓｏ ｔｒ ｎ ｔ ｆＲｅ ｖ ｒ ｔｏ ｎｅ ｔｉ ｆ ｒ ｎ ａｔ ｎ ｌ ｅ ｆ ｏ ｆ ｕ Ｐｏｙ ｏ ｕ ｃ ｓ ｉｔ ｍｓＳｅ ． ｔＺ ｃ ． ｂ Ｌ ｌｇ ｎ ｍ ｕｐ ｄ ｕ ｉｂ ｅ ｕ ｃ ｙ ＨＰ Ｃ
虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素等有效成分的提取
１： ２ ０ ，ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ７ ０℃ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍｅ ２ ． ０ ｈ ，Ｕｎ ｄ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｒａ ｔ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｓ ｏ ｆ ｒ ｅ ｓ ｖ ｅ ｒ ａ ｒｏ ｔ ｌ ， ｐ ｉ ｃ ｅ ｉ ｄ ，ｅ ｍｏ ｄ ｉ ｎ ，ｕ ｎ ｋ ｎ ｏ ｗｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｎ ｅ ｎ ｔ ｌ ，ｕ ｎ ｎｏ ｋ ｗｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｎ ｅ ｎ ｔ ２ ， ｗｅ ｒ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ５ ． ５ ７ ％， １ ０ ． ７ ４ ％， ２ ， ６ ７ ％， ８ ． ８ ７ ％，
１ ． ４ ． １试剂配制 Ａ 、 Ｔ ｒ ｉ ｓ（ 三羟 甲基氨基 甲烷）一 Ｈ Ａ Ｃ 缓冲溶液的配制：用双蒸水配制 ０ ． ０ ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的 Ｔ ｒ ｉ ｓ 溶液 ，再用 ６ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的 Ｈ Ａ Ｃ调 ｐ Ｈ为 ８ ． ２ ０ ． Ｂ ． 邻苯三酚溶液 的配制：用 １ ０ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的盐 酸溶液配制成 １ ０ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的邻苯三酚溶液，此溶液使用时
目 前从虎杖 中提取 白藜芦醇或大黄素等单 一成分物质的研究较多 ， 但有关 综合提取 白藜芦醇、白藜 芦醇苷 、 大黄素等有效成分的研究相对较少，为了提 高虎杖 的综合利用价值 ， 本 实验 同时对虎杖中活性
成分 白藜芦醇 、白藜芦醇苷 、大黄素等的提取进行优化 ，为合理利用虎杖资源提供理论依据 ．
收稿 日期：２ ０ ０ ７ ． ０ ７ ０ ９ 作者简 介：聂媛 （ １ ９ ８ ２ ． ） ，女 （ 汉族 ） ，硕士生
薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
赵瑞芝
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2005(27)5
【摘要】虎杖为蓼科植物虎杖(Polygoum cuspidatum Sieb.Zucc)的根茎和根，具有祛风、利湿、破瘀、通经等作用，为临床常用中药。
虎杖中含有游离蒽醌衍生物及二苯乙烯类化合物白藜芦醇、白藜芦醇苷、蒽苷类成分等。
【总页数】2页(P605-606)
【作者】赵瑞芝
【作者单位】广州中医药大学第二临床医学院中药制剂学实验室,广东,广
州,510120
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定虎杖中的白藜芦醇含量
2.反相高效液相色谱法测定中药材虎杖中白藜芦醇含量
3.反相高效液相色谱法测定虎杖根中白藜芦醇及其苷的含量
4.
高效液相色谱法测定复方虎杖紫草油中虎杖苷和白藜芦醇的含量5.RP-HPLC紫外、荧光检测法测定虎杖中白藜芦醇及其苷含量的比较研究
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606
101. 6 2. 66
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0. 1882
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99. 0
图 2 虎杖药材薄层扫描图
2. 1. 3 扫描波长的确定 :取硅胶 G薄层板 , 105 °C活化 1 h, 点样对照品溶液 2μL ,以上述展开剂饱和 15 m in后展开 ,取 出 ,晾干 ,在紫外光下定位 ,在 200～370 nm范围内分别进行 样品及空白硅胶板光谱扫描 ,以样品扫描结果减去空白吸 收 ,发现白藜芦醇在 293 nm 有最大吸收 ,所以选择 293 nm 为扫描波长 。 2. 1. 4 标准曲线的制备 :分别精密吸取 ( 1)液 0. 5, 1, 2, 3, 4 μL点于同一硅胶 G薄层板上 ,以上述展开剂饱和 15 m in后 展开 ,展距 8 cm ,取出 ,晾干 ,扫描 ,以峰面积对浓度回归 ,得 白藜芦醇的标准曲线为 : A = 2292. 2C + 87. 768, r = 0. 999。 2. 1. 5 稳定性 :精密吸取对照品 1. 0 μL ,点样 ,展开 ,取出 , 晾干 ,每隔 10 m in扫描 1次 ,结果白藜芦醇斑点在 2 h内稳 定 , RSD 为 2. 52 。
G
14. 0
12. 5
12. 0 13. 0 11. 0 11. 5 15. 6 13. 0 12. 0
A:丙酮对照 B:乙酸乙酯 C:丙酮 D: 95 乙醇 E:甲醇 F: 水 G: 1 盐酸
表 2 鬼灯檠丙酮提取物急性毒性试验结果
组别剂量 ( g·kg - 1小) 鼠数 (只 ) 死亡数 (只 ) 存活数 (只 ) 死亡率
A
11. 0
11. 5
11. 0 11. 0 11. 0 11. 5 11. 5 11. 5 11. 5
B
17. 0
19. 0
16. 5 22. 0 17. 0 14. 0 13. 0 17. 0 14. 0
C
19. 0
18. 0
17. 5 21. 0 14. 0 12. 5 22. 0 16. 0 15. 0
关键词 :虎杖 ; 白藜芦醇 ; 含量测定 ; 薄层扫描法 中图分类号 : R284. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 100121528 (2005) 0520605202
虎杖 为 蓼 科 植 物 虎 杖 ( Polygonum cuspida tum Sieb. et Zucc)的根茎和根 ,具有祛风 、利湿 、破瘀 、通经等作用 ,为临 床常用中药 。虎杖中含有游离蒽醌衍生物及二苯乙烯类化 合物白藜芦醇 、白藜芦醇苷 、蒽苷类成分等 。其中白藜芦醇
1
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10
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0
100
2
12. 000
10
8
2
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5
50
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10
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5
2. 587
10
0
10
0
(组间剂量比为 1∶0. 6) LD50及其 95 的可信限为 7. 200 ±1. 841 g·kg- 1 表 3 鬼灯檠乙酸乙酯提取物急性毒性试验结果
组别剂量 ( g·kg - 1小) 鼠数 (只 ) 死亡数 (只 ) 存活数 (只 ) 死亡率
D
15. 5
15. 0
16. 0 20. 0 15. 0 11. 5 15. 0 15. 0 15. 0
E
16. 0
15. 5
16. 0 21. 0 16. 0 11. 0 15. 0 15. 0 15. 0
F
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ13. 5
11. 0
12. 0 14. 0 12. 0 11. 0 14. 0 12. 0 13. 0
∶0. 02)饱和 15 m in后展开取出 ,晾干 ,扫描 ,以外标两点法 定量 ,结果见表 1。
2. 4 回收率实验 :分别精密称取已测定含量的虎杖药材约 0. 1 g,分别精密加入对照品溶液 ,按样品处理方法处理并测
定 ,结果见表 2。
表 1 虎杖药材中白藜芦醇含量测定结果 ( n = 5)
[ 3 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生 出版社 , 1993. 1122118.
[ 4 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生 出版社 , 1993. 1182119.
薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
赵瑞芝 (广州中医药大学第二临床医学院中药制剂学实验室 ,广东 广州 510120)
1
23. 148
10
10
0
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2
13. 889
10
6
4
60
3
8. 333
10
4
6
40
4
5. 000
10
3
7
30
5
3. 000
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0
10
0
(组间剂量比为 1∶0. 6)
LD50及其 95 的可信限为 ( 9. 215 ±2. 574) g·kg- 1。 4. 2 本实验证明鬼灯檠具有显著的抑菌作用 ,从表 1中可 知鬼灯檠对肺炎链球菌的抑菌效果最佳 ,对金黄色葡萄球 菌 、支气管炎博德特氏菌也有一定的抑菌活性 。 4. 3 从抑菌试验结果可知对主要病原菌的抑菌强度由大到 小为 :醋酸乙酯的提取物 >丙酮提取物 >甲醇提取物 > 95 乙醇提取物 > 1 HCl提取物 >水提取物 ,所以选用丙酮和 乙酸乙酯提取液 (提取的收率分别为 9. 3 和 3. 5 )进行毒 理学评价 。 4. 4 高剂量组小鼠给药后 10 m in内即出现竖尾 、痉挛 、打 嗝 ,持续约 10 m in,以后活动减少 ,安静 ,翻正反射逐渐消失 , 死亡 ,多数小鼠于给药后 24 h内死亡 。经解剖发现部分死 亡小鼠胃肠胀气 ,多数为肝脏和肺部发生变化 ,提示该药可 能在肺部的分布浓度较大 ,这与岩白菜素治疗哮喘 、慢性支 气管炎的作用一致 。 致谢 :中国农科院兰州畜牧兽药研究所胡振英 ,罗永江 ,尚若 峰同志帮助完成了抑菌试验 。
硅胶 G (青岛海洋化工厂 ) ,白藜芦醇对照品购自 Sigmag 公司 。其它试剂为分析纯 。
虎杖购自广州药材公司 ,经本实验室鉴定为蓼科植物 Polygonum cuspida tum 的根及根茎 ,粉碎成细粉备用 。 2 方法 2. 1 分析条件确定 2. 1. 1 色谱条件 :以硅胶 G薄层板进行薄层色谱分析 ,经过 系统比较最后选定石油醚 2乙酸丁酯 2甲醇 2冰醋酸 ( 4 ∶1 ∶0. 7 ∶0. 02)为展开剂 ,白藜芦醇可和其它成分基线分离 。薄层扫 描结果见图 1, 2。
样品称 样量 ( g)
0. 1174
含量 (mg·g - 1 )
平均值 RSD ( )
(mg·g - 1 )
1. 76, 1. 73, 1. 75, 1. 74, 1. 71
0. 1058 1. 89, 1. 87, 1. 85, 1. 83, 1. 88 1. 813
3. 60
0. 1038 1. 89, 1. 87, 1. 76, 1. 79, 1. 87
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2005年 5月 第 27卷 第 5期
中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
M ay 2005 Vol. 27 No. 5
法 [3, 4 ] ,采用乙睛 2水系统作为流动相 ,测试成本较高 ,本研究 建立了白藜芦醇的薄层扫描测定方法 ,方法简单易行 ,精确 度和重现性良好 ,可用于虎杖的质量控制 。 1 仪器与试药 : CS9301薄层扫描仪 日本岛津公司 。
3 结果与讨论 3. 1 白藜芦醇对光 、热均较敏感 ,因此其提取过程应尽可能 缩短提取时间 。白藜芦醇在乙醇中溶解度较好 ,因此 ,本文 选择乙醇为提取溶媒 ,与文献方法 (3) 相比 ,可降低成本并保 护环境 ;采用超声震荡法提取 ,则可大幅度缩短提取时间 。 3. 2 白藜芦醇与大黄素极性相近 ,根据文献报道的展开系 统 (4)尚不能使其基线分离 ,本实验经过多次试验 、摸索 ,最后 确定的四元系统可有效分离两者 。
具有调节脂质代谢 、抑制血小板聚集 ,保护心血管 ,抗炎 ,抗 肿瘤等多项生物活性和药理作用 [1, 2 ] ,是虎杖治疗心脑血管 疾病的物质基础之一 ,其研究正越来越受到重视 。
文献报道白藜芦醇含量测定方法主要为高效液相色谱
收稿日期 : 2004203216 基金项目 :广东省教育厅及广州中医药大学总体规划资助课题 ,课题编号分别为 Z02016和 GH0237。 作者简介 :赵瑞芝 (1968～) ,副研究员 ,硕士 ,研究方向 :中药新剂型及其相关技术 ,电话 : 021281887233237403。
参考文献 :
[ 1 ] 周建军. 虎杖中二苯乙烯类化合物药理作用研究进展 [ J ] ,西 北药学杂志 , 2002, 15 (2) : 86.
[ 2 ] 吕秋军 ,吴祖泽 ,等. 白藜芦醇的雌激素活性及其分子机制研 究进展 [ J ] ,中国药学杂志 , 38 (9) : 651.
[ 3 ] 周建军 ,张宏杰 ,杨培君 ,等. 汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及其 苷元含量的测定 [ J ] ,中草药 , 2002, 33 (5) : 414.
图 1 对照品薄层扫描图 2. 1. 2 对照品溶液的配置 :精密称取白藜芦醇对照品约 8 mg,以乙醇定容于 50 mL 量瓶中 ,作为对照品溶液 (1) 。