薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
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[ 4 ] 陈雷 ,杨福全 ,张天佑 ,等. 虎杖中白藜芦醇甙的高速塑流色谱 分离提纯及其分析 [ J ] ,分析测试学报 , 2000, 19 (4) : 60.
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图 2 虎杖药材薄层扫描图
2. 1. 3 扫描波长的确定 :取硅胶 G薄层板 , 105 °C活化 1 h, 点样对照品溶液 2μL ,以上述展开剂饱和 15 m in后展开 ,取 出 ,晾干 ,在紫外光下定位 ,在 200～370 nm范围内分别进行 样品及空白硅胶板光谱扫描 ,以样品扫描结果减去空白吸 收 ,发现白藜芦醇在 293 nm 有最大吸收 ,所以选择 293 nm 为扫描波长 。 2. 1. 4 标准曲线的制备 :分别精密吸取 ( 1)液 0. 5, 1, 2, 3, 4 μL点于同一硅胶 G薄层板上 ,以上述展开剂饱和 15 m in后 展开 ,展距 8 cm ,取出 ,晾干 ,扫描 ,以峰面积对浓度回归 ,得 白藜芦醇的标准曲线为 : A = 2292. 2C + 87. 768, r = 0. 999。 2. 1. 5 稳定性 :精密吸取对照品 1. 0 μL ,点样 ,展开 ,取出 , 晾干 ,每隔 10 m in扫描 1次 ,结果白藜芦醇斑点在 2 h内稳 定 , RSD 为 2. 52 。
G
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12. 0 13. 0 11. 0 11. 5 15. 6 13. 0 12. 0
A:丙酮对照 B:乙酸乙酯 C:丙酮 D: 95 乙醇 E:甲醇 F: 水 G: 1 盐酸
表 2 鬼灯檠丙酮提取物急性毒性试验结果
组别剂量 ( g·kg - 1小) 鼠数 (只 ) 死亡数 (只 ) 存活数 (只 ) 死亡率
A
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C
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17. 5 21. 0 14. 0 12. 5 22. 0 16. 0 15. 0
关键词 :虎杖 ; 白藜芦醇 ; 含量测定 ; 薄层扫描法 中图分类号 : R284. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 100121528 (2005) 0520605202
虎杖 为 蓼 科 植 物 虎 杖 ( Polygonum cuspida tum Sieb. et Zucc)的根茎和根 ,具有祛风 、利湿 、破瘀 、通经等作用 ,为临 床常用中药 。虎杖中含有游离蒽醌衍生物及二苯乙烯类化 合物白藜芦醇 、白藜芦醇苷 、蒽苷类成分等 。其中白藜芦醇
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(组间剂量比为 1∶0. 6) LD50及其 95 的可信限为 7. 200 ±1. 841 g·kg- 1 表 3 鬼灯檠乙酸乙酯提取物急性毒性试验结果
组别剂量 ( g·kg - 1小) 鼠数 (只 ) 死亡数 (只 ) 存活数 (只 ) 死亡率
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16. 0 20. 0 15. 0 11. 5 15. 0 15. 0 15. 0
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∶0. 02)饱和 15 m in后展开取出 ,晾干 ,扫描 ,以外标两点法 定量 ,结果见表 1。
2. 4 回收率实验 :分别精密称取已测定含量的虎杖药材约 0. 1 g,分别精密加入对照品溶液 ,按样品处理方法处理并测
定 ,结果见表 2。
表 1 虎杖药材中白藜芦醇含量测定结果 ( n = 5)
[ 3 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生 出版社 , 1993. 1122118.
[ 4 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生 出版社 , 1993. 1182119.
薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
赵瑞芝 (广州中医药大学第二临床医学院中药制剂学实验室 ,广东 广州 510120)
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(组间剂量比为 1∶0. 6)
LD50及其 95 的可信限为 ( 9. 215 ±2. 574) g·kg- 1。 4. 2 本实验证明鬼灯檠具有显著的抑菌作用 ,从表 1中可 知鬼灯檠对肺炎链球菌的抑菌效果最佳 ,对金黄色葡萄球 菌 、支气管炎博德特氏菌也有一定的抑菌活性 。 4. 3 从抑菌试验结果可知对主要病原菌的抑菌强度由大到 小为 :醋酸乙酯的提取物 >丙酮提取物 >甲醇提取物 > 95 乙醇提取物 > 1 HCl提取物 >水提取物 ,所以选用丙酮和 乙酸乙酯提取液 (提取的收率分别为 9. 3 和 3. 5 )进行毒 理学评价 。 4. 4 高剂量组小鼠给药后 10 m in内即出现竖尾 、痉挛 、打 嗝 ,持续约 10 m in,以后活动减少 ,安静 ,翻正反射逐渐消失 , 死亡 ,多数小鼠于给药后 24 h内死亡 。经解剖发现部分死 亡小鼠胃肠胀气 ,多数为肝脏和肺部发生变化 ,提示该药可 能在肺部的分布浓度较大 ,这与岩白菜素治疗哮喘 、慢性支 气管炎的作用一致 。 致谢 :中国农科院兰州畜牧兽药研究所胡振英 ,罗永江 ,尚若 峰同志帮助完成了抑菌试验 。
硅胶 G (青岛海洋化工厂 ) ,白藜芦醇对照品购自 Sigmag 公司 。其它试剂为分析纯 。
虎杖购自广州药材公司 ,经本实验室鉴定为蓼科植物 Polygonum cuspida tum 的根及根茎 ,粉碎成细粉备用 。 2 方法 2. 1 分析条件确定 2. 1. 1 色谱条件 :以硅胶 G薄层板进行薄层色谱分析 ,经过 系统比较最后选定石油醚 2乙酸丁酯 2甲醇 2冰醋酸 ( 4 ∶1 ∶0. 7 ∶0. 02)为展开剂 ,白藜芦醇可和其它成分基线分离 。薄层扫 描结果见图 1, 2。
样品称 样量 ( g)
0. 1174
含量 (mg·g - 1 )
平均值 RSD ( )
(mg·g - 1 )
1. 76, 1. 73, 1. 75, 1. 74, 1. 71
0. 1058 1. 89, 1. 87, 1. 85, 1. 83, 1. 88 1. 813
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0. 1038 1. 89, 1. 87, 1. 76, 1. 79, 1. 87
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2005年 5月 第 27卷 第 5期
中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
M ay 2005 Vol. 27 No. 5
法 [3, 4 ] ,采用乙睛 2水系统作为流动相 ,测试成本较高 ,本研究 建立了白藜芦醇的薄层扫描测定方法 ,方法简单易行 ,精确 度和重现性良好 ,可用于虎杖的质量控制 。 1 仪器与试药 : CS9301薄层扫描仪 日本岛津公司 。
3 结果与讨论 3. 1 白藜芦醇对光 、热均较敏感 ,因此其提取过程应尽可能 缩短提取时间 。白藜芦醇在乙醇中溶解度较好 ,因此 ,本文 选择乙醇为提取溶媒 ,与文献方法 (3) 相比 ,可降低成本并保 护环境 ;采用超声震荡法提取 ,则可大幅度缩短提取时间 。 3. 2 白藜芦醇与大黄素极性相近 ,根据文献报道的展开系 统 (4)尚不能使其基线分离 ,本实验经过多次试验 、摸索 ,最后 确定的四元系统可有效分离两者 。
具有调节脂质代谢 、抑制血小板聚集 ,保护心血管 ,抗炎 ,抗 肿瘤等多项生物活性和药理作用 [1, 2 ] ,是虎杖治疗心脑血管 疾病的物质基础之一 ,其研究正越来越受到重视 。
文献报道白藜芦醇含量测定方法主要为高效液相色谱
收稿日期 : 2004203216 基金项目 :广东省教育厅及广州中医药大学总体规划资助课题 ,课题编号分别为 Z02016和 GH0237。 作者简介 :赵瑞芝 (1968～) ,副研究员 ,硕士 ,研究方向 :中药新剂型及其相关技术 ,电话 : 021281887233237403。
参考文献 :
[ 1 ] 周建军. 虎杖中二苯乙烯类化合物药理作用研究进展 [ J ] ,西 北药学杂志 , 2002, 15 (2) : 86.
[ 2 ] 吕秋军 ,吴祖泽 ,等. 白藜芦醇的雌激素活性及其分子机制研 究进展 [ J ] ,中国药学杂志 , 38 (9) : 651.
[ 3 ] 周建军 ,张宏杰 ,杨培君 ,等. 汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及其 苷元含量的测定 [ J ] ,中草药 , 2002, 33 (5) : 414.
图 1 对照品薄层扫描图 2. 1. 2 对照品溶液的配置 :精密称取白藜芦醇对照品约 8 mg,以乙醇定容于 50 mL 量瓶中 ,作为对照品溶液 (1) 。
2. 1. 6 精密度实验 : 精密吸取对照品溶液 1. 0 μL , 5 份 ,分
别点于同一硅胶 G薄层板上 ,展开 ,取出 ,晾干 ,扫描 ,结果
2005年 5月 第 27卷 第 5期
中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
M ay 2005 Vol. 27 No. 5
表 1
不同极性溶剂提取物的抑菌活性
抑菌圈直径 (mm ) 菌种
副溶血嗜血杆菌 支气管炎博
德物氏菌 金黄色葡萄球菌
肺炎链球菌 丹毒杆菌 沙门氏菌 绿脓杆菌 大肠杆菌 肺炎克雷件氏菌
平均峰面积值为 478. 78, RSD 为 0. 98 。 2. 2 供试品溶液的制备 :精密称取药材细粉约 0. 1 g,加乙
醇 20 mL ,超声震荡 15 m in提取多次至提取液无色 (约需 3
次 ) ,过滤 ,滤液浓缩至干 ,加乙醇定容于 10 mL量瓶中 。 2. 3 样品含量测定 :定量吸取对照品溶液 1 μL , 3 μL ,供试 品溶液 2μL ,以石油醚 2乙酸丁酯 2甲醇 2冰醋酸 ( 4 ∶1 ∶0. 7
表 2
含量测定回收率实验 ( n = 5)
样品含量 (m g) 0. 2128
对照品加 入量 (mg)
0. 3120
测得量 (m g) 0. 5218
回收率 () 98. 6
平均值 RSD () ()
0. 1916
0. 3120 0. 5118 104. 3
0. 1846
0. 1560 0. 3474 103. 4
参考文献 :
[ 1 ] 江苏新医学院. 中药大辞典 [M ]. 下册. 上海 :上海科学技术 出版社 , 1977. 254022541.
[ 2 ] 徐以珍 ,白翠贤 ,周琪 ,等. 黄药子乙醇浸膏管内抑制灭活病毒 的研究 [ J ]. 药学通报 , 1988, 23 (9) : 5352537.
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图 2 虎杖药材薄层扫描图
2. 1. 3 扫描波长的确定 :取硅胶 G薄层板 , 105 °C活化 1 h, 点样对照品溶液 2μL ,以上述展开剂饱和 15 m in后展开 ,取 出 ,晾干 ,在紫外光下定位 ,在 200～370 nm范围内分别进行 样品及空白硅胶板光谱扫描 ,以样品扫描结果减去空白吸 收 ,发现白藜芦醇在 293 nm 有最大吸收 ,所以选择 293 nm 为扫描波长 。 2. 1. 4 标准曲线的制备 :分别精密吸取 ( 1)液 0. 5, 1, 2, 3, 4 μL点于同一硅胶 G薄层板上 ,以上述展开剂饱和 15 m in后 展开 ,展距 8 cm ,取出 ,晾干 ,扫描 ,以峰面积对浓度回归 ,得 白藜芦醇的标准曲线为 : A = 2292. 2C + 87. 768, r = 0. 999。 2. 1. 5 稳定性 :精密吸取对照品 1. 0 μL ,点样 ,展开 ,取出 , 晾干 ,每隔 10 m in扫描 1次 ,结果白藜芦醇斑点在 2 h内稳 定 , RSD 为 2. 52 。
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A:丙酮对照 B:乙酸乙酯 C:丙酮 D: 95 乙醇 E:甲醇 F: 水 G: 1 盐酸
表 2 鬼灯檠丙酮提取物急性毒性试验结果
组别剂量 ( g·kg - 1小) 鼠数 (只 ) 死亡数 (只 ) 存活数 (只 ) 死亡率
A
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关键词 :虎杖 ; 白藜芦醇 ; 含量测定 ; 薄层扫描法 中图分类号 : R284. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 100121528 (2005) 0520605202
虎杖 为 蓼 科 植 物 虎 杖 ( Polygonum cuspida tum Sieb. et Zucc)的根茎和根 ,具有祛风 、利湿 、破瘀 、通经等作用 ,为临 床常用中药 。虎杖中含有游离蒽醌衍生物及二苯乙烯类化 合物白藜芦醇 、白藜芦醇苷 、蒽苷类成分等 。其中白藜芦醇
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(组间剂量比为 1∶0. 6) LD50及其 95 的可信限为 7. 200 ±1. 841 g·kg- 1 表 3 鬼灯檠乙酸乙酯提取物急性毒性试验结果
组别剂量 ( g·kg - 1小) 鼠数 (只 ) 死亡数 (只 ) 存活数 (只 ) 死亡率
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∶0. 02)饱和 15 m in后展开取出 ,晾干 ,扫描 ,以外标两点法 定量 ,结果见表 1。
2. 4 回收率实验 :分别精密称取已测定含量的虎杖药材约 0. 1 g,分别精密加入对照品溶液 ,按样品处理方法处理并测
定 ,结果见表 2。
表 1 虎杖药材中白藜芦醇含量测定结果 ( n = 5)
[ 3 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生 出版社 , 1993. 1122118.
[ 4 ] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生 出版社 , 1993. 1182119.
薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
赵瑞芝 (广州中医药大学第二临床医学院中药制剂学实验室 ,广东 广州 510120)
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(组间剂量比为 1∶0. 6)
LD50及其 95 的可信限为 ( 9. 215 ±2. 574) g·kg- 1。 4. 2 本实验证明鬼灯檠具有显著的抑菌作用 ,从表 1中可 知鬼灯檠对肺炎链球菌的抑菌效果最佳 ,对金黄色葡萄球 菌 、支气管炎博德特氏菌也有一定的抑菌活性 。 4. 3 从抑菌试验结果可知对主要病原菌的抑菌强度由大到 小为 :醋酸乙酯的提取物 >丙酮提取物 >甲醇提取物 > 95 乙醇提取物 > 1 HCl提取物 >水提取物 ,所以选用丙酮和 乙酸乙酯提取液 (提取的收率分别为 9. 3 和 3. 5 )进行毒 理学评价 。 4. 4 高剂量组小鼠给药后 10 m in内即出现竖尾 、痉挛 、打 嗝 ,持续约 10 m in,以后活动减少 ,安静 ,翻正反射逐渐消失 , 死亡 ,多数小鼠于给药后 24 h内死亡 。经解剖发现部分死 亡小鼠胃肠胀气 ,多数为肝脏和肺部发生变化 ,提示该药可 能在肺部的分布浓度较大 ,这与岩白菜素治疗哮喘 、慢性支 气管炎的作用一致 。 致谢 :中国农科院兰州畜牧兽药研究所胡振英 ,罗永江 ,尚若 峰同志帮助完成了抑菌试验 。
硅胶 G (青岛海洋化工厂 ) ,白藜芦醇对照品购自 Sigmag 公司 。其它试剂为分析纯 。
虎杖购自广州药材公司 ,经本实验室鉴定为蓼科植物 Polygonum cuspida tum 的根及根茎 ,粉碎成细粉备用 。 2 方法 2. 1 分析条件确定 2. 1. 1 色谱条件 :以硅胶 G薄层板进行薄层色谱分析 ,经过 系统比较最后选定石油醚 2乙酸丁酯 2甲醇 2冰醋酸 ( 4 ∶1 ∶0. 7 ∶0. 02)为展开剂 ,白藜芦醇可和其它成分基线分离 。薄层扫 描结果见图 1, 2。
样品称 样量 ( g)
0. 1174
含量 (mg·g - 1 )
平均值 RSD ( )
(mg·g - 1 )
1. 76, 1. 73, 1. 75, 1. 74, 1. 71
0. 1058 1. 89, 1. 87, 1. 85, 1. 83, 1. 88 1. 813
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中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
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法 [3, 4 ] ,采用乙睛 2水系统作为流动相 ,测试成本较高 ,本研究 建立了白藜芦醇的薄层扫描测定方法 ,方法简单易行 ,精确 度和重现性良好 ,可用于虎杖的质量控制 。 1 仪器与试药 : CS9301薄层扫描仪 日本岛津公司 。
3 结果与讨论 3. 1 白藜芦醇对光 、热均较敏感 ,因此其提取过程应尽可能 缩短提取时间 。白藜芦醇在乙醇中溶解度较好 ,因此 ,本文 选择乙醇为提取溶媒 ,与文献方法 (3) 相比 ,可降低成本并保 护环境 ;采用超声震荡法提取 ,则可大幅度缩短提取时间 。 3. 2 白藜芦醇与大黄素极性相近 ,根据文献报道的展开系 统 (4)尚不能使其基线分离 ,本实验经过多次试验 、摸索 ,最后 确定的四元系统可有效分离两者 。
具有调节脂质代谢 、抑制血小板聚集 ,保护心血管 ,抗炎 ,抗 肿瘤等多项生物活性和药理作用 [1, 2 ] ,是虎杖治疗心脑血管 疾病的物质基础之一 ,其研究正越来越受到重视 。
文献报道白藜芦醇含量测定方法主要为高效液相色谱
收稿日期 : 2004203216 基金项目 :广东省教育厅及广州中医药大学总体规划资助课题 ,课题编号分别为 Z02016和 GH0237。 作者简介 :赵瑞芝 (1968～) ,副研究员 ,硕士 ,研究方向 :中药新剂型及其相关技术 ,电话 : 021281887233237403。
参考文献 :
[ 1 ] 周建军. 虎杖中二苯乙烯类化合物药理作用研究进展 [ J ] ,西 北药学杂志 , 2002, 15 (2) : 86.
[ 2 ] 吕秋军 ,吴祖泽 ,等. 白藜芦醇的雌激素活性及其分子机制研 究进展 [ J ] ,中国药学杂志 , 38 (9) : 651.
[ 3 ] 周建军 ,张宏杰 ,杨培君 ,等. 汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及其 苷元含量的测定 [ J ] ,中草药 , 2002, 33 (5) : 414.
图 1 对照品薄层扫描图 2. 1. 2 对照品溶液的配置 :精密称取白藜芦醇对照品约 8 mg,以乙醇定容于 50 mL 量瓶中 ,作为对照品溶液 (1) 。
2. 1. 6 精密度实验 : 精密吸取对照品溶液 1. 0 μL , 5 份 ,分
别点于同一硅胶 G薄层板上 ,展开 ,取出 ,晾干 ,扫描 ,结果
2005年 5月 第 27卷 第 5期
中成药 Chinese Traditional Patent M edicine
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表 1
不同极性溶剂提取物的抑菌活性
抑菌圈直径 (mm ) 菌种
副溶血嗜血杆菌 支气管炎博
德物氏菌 金黄色葡萄球菌
肺炎链球菌 丹毒杆菌 沙门氏菌 绿脓杆菌 大肠杆菌 肺炎克雷件氏菌
平均峰面积值为 478. 78, RSD 为 0. 98 。 2. 2 供试品溶液的制备 :精密称取药材细粉约 0. 1 g,加乙
醇 20 mL ,超声震荡 15 m in提取多次至提取液无色 (约需 3
次 ) ,过滤 ,滤液浓缩至干 ,加乙醇定容于 10 mL量瓶中 。 2. 3 样品含量测定 :定量吸取对照品溶液 1 μL , 3 μL ,供试 品溶液 2μL ,以石油醚 2乙酸丁酯 2甲醇 2冰醋酸 ( 4 ∶1 ∶0. 7
表 2
含量测定回收率实验 ( n = 5)
样品含量 (m g) 0. 2128
对照品加 入量 (mg)
0. 3120
测得量 (m g) 0. 5218
回收率 () 98. 6
平均值 RSD () ()
0. 1916
0. 3120 0. 5118 104. 3
0. 1846
0. 1560 0. 3474 103. 4
参考文献 :
[ 1 ] 江苏新医学院. 中药大辞典 [M ]. 下册. 上海 :上海科学技术 出版社 , 1977. 254022541.
[ 2 ] 徐以珍 ,白翠贤 ,周琪 ,等. 黄药子乙醇浸膏管内抑制灭活病毒 的研究 [ J ]. 药学通报 , 1988, 23 (9) : 5352537.