康为世纪 CW0503高纯度质粒大提试剂盒
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号:HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个(注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存)保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜(Spin Columns PA )吸附。
通过去蛋白液(Buffer PD )和漂洗液(Buffer PW )的清洗可去除蛋白及其他杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA,可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。
2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇,即开即用。
康为世纪 CW0503高纯度质粒大提试剂盒
PurePlasmid Maxi Kit高纯度质粒大提试剂盒Version06302010‐2.1I 组分说明Catalog no. CW0503 CW0503ANumber of preps. 10 2Buffer P1 100 ml 25 mlBuffer P2 100 ml 25 mlBuffer P3 100 ml 25 mlBuffer EB 30 ml 10 mlRNase A(10 mg/ml) 1 ml 250 μlFliter 10 2Collection Tube(50ml) 10 2Protocol 1 1II 保存条件该试剂盒室温干燥条件下(15-25℃)可保存一年,更长的保存时间可置于2-8℃。
若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A可室温(15-25℃)保存,长时间保存置于2-8℃,加入RNase A后的Buffer P1置于2-8℃保存,可以稳定保存半年。
III 产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过独特的缓冲系统和异丙醇沉淀方法,可快速获得大量高纯度的质粒DNA。
由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,体外转录,转化细菌,内切酶消化等。
IV 注意事项1.Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。
2.使用前请先检查Buffer P2 和Buffer P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
3.注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3,使用后应立即盖紧盖子。
4.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
V 需要客户自备的试剂1.异丙醇2.5M NaCl溶液Ⅵ 操作步骤1.取100ml (根据培养菌体的浓度选择合适的量,低拷贝推荐用200ml)过夜培养的菌液,加入离心管中,10,000 rpm(~11,500×g )离心3 分钟收集细菌,尽量吸弃上清。
康为世纪 高纯度质粒中提试剂盒
PurePlasmid Midi Kit高纯度质粒中提试剂盒Version 04282010‐2.1I 组分说明Catalog no. CW0502CW0502ANumber of preps. 50 6Buffer P1 30 ml 5 mlBuffer P2 30 ml 5 mlBuffer N3 40 ml 5 mlBuffer PB 30 ml 5 mlBuffer PW(concentrate) 15 ml 2 mlBuffer EB 15 ml 1 mlRNase A(10mg/ml ) 600 μl 100μlSpin Column CL 50 6Collection Tube(2ml) 50 6Protocol 1 1II 保存条件该试剂盒室温干燥条件下(15-25℃)可保存一年,更长的保存时间可置于2-8℃。
若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNaseA可室温(15-25℃)保存,更长时间保存置于2-8℃,加入RNaseA后的Buffer P1置于2-8℃保存,可以稳定保存半年。
III 产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过新型离心吸附柱在高盐浓度下高效、专一结合溶液中的DNA,提取率达85%–90%。
本试剂盒提取的质粒纯度高,质量稳定,最大限度的去除杂质蛋白和细菌中其它有机化合物的污染,一次可处理5-15ml菌液。
所得质粒可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。
IV 注意事项1.Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
3.使用前请先检查Buffer P2 和Buffer N3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
大型大量质粒提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://PhasePrep EndoFree Maxi Kit大型/大量质粒提取试剂盒目录号:PL1401适用范围:适用于大量高纯或者转染级质粒制备和BAC/PAC大型质粒制备试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存20次(PL1401)RNaseA(10mg/ml)-20℃ 1.3ml溶液P1 4℃130ml溶液P2 室温100 ml溶液PⅢ室温110 ml杂质清除剂A 室温 3 ml杂质清除剂B 室温30 ml内毒素清除剂-20℃10 ml本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg /ml)置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。
2.内毒素清除剂在4℃可保存一个月,如果要长期保存,建议保存在-20℃!3.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA,采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂,只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质,获得高质量的质粒DNA。
纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。
纯化后期过程均在1.5ml 小离心管中操作,方法简单,不需特殊设备,无需过柱,不用酚氯仿抽提;基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒,不必担心质粒DNA的丢失。
本方法提取纯化质粒DNA,对质粒损伤小,即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒,只要碱裂解法能够提取,就可以有效纯化。
质粒大量提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://Plasmid Maxi Kit质粒大量快速提取试剂盒目录号:PL11试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存10次(PL1101)RNaseA(10mg/ml)-20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管(50ml)室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/ml)置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
快速、方便,从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80 %左右。
3.获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
QIAGEN质粒大提试剂盒
产品简介本试剂盒采用独特的硅胶模吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。
同时采用特殊的溶液P4和过滤器CS1,可有效的出去内毒素、蛋白质杂志;整个提取过程仅需1h,方便快捷。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化和细胞转染多种细胞等试验。
推荐每次菌液使用量:高拷贝质粒推荐使用量为100ml,得率一般在500-1500μg左右;低拷贝质粒推荐使用量为200ml,得率一般在200-600μg左右。
注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.溶液P1在使用前先加入RNase A (将试剂盒中提供的RNase A全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3.使用前先检查平衡液BL,溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
4.注意不要直接接触溶液P2和P4,使用后应立即盖紧盖子。
5.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出,避免滤膜因压力而松动。
6.提取的质粒量与细菌培养浓度,质粒拷贝数等因素有关。
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、P4的用量;洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热,可以适当延长吸附和洗脱时间,以提高提取效率。
7.实验前使用平衡液BL处理吸附柱,可以最大限度激活硅基质膜,提高得率。
8.用平衡液处理过的柱子最好立即使用,放置时间过长会影响使用效果。
质粒DNA 浓度及纯度检测得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。
纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8-2.0左右,可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的实验中。
操作步骤:1.柱平衡步骤:向吸附柱CP6中(吸附柱放入50ml收集管中)加入2.5ml的平衡液BL,8000rpm(~8228×g)离心2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
无内毒素质粒 DNA 大量提取试剂盒
5 12,000 rpm 室温离心 12min,收集上清。 6 将上清置于 DNA 纯化柱中,静置 5 min。
●
如果收集的上清液过多,超过 DNA 纯化柱容积(15 ml),可 将上清分次加入 DNA 纯化柱中。
7 12,000 rpm 离心 2min,弃滤液。
●
此时质粒 DNA 被吸附于 DNA 纯化柱中的硅胶膜上。
溶液 W 初次使用前用无水乙醇按 1: 1.5 稀释,即含 60% 乙醇。 ● 溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、溶液 PB 中含碱和变性剂,请不要直接 接触皮肤。 ● 上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。
质量控制 从大肠杆菌提取 pGEM 质粒 DNA。提取的质粒DNA 质 量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。 保存条件 RNase A:可室温保存 1 年以上。RNase A 为浑浊溶液。初 次使用本试剂盒时,请将 RNase A 全部加入到溶液Ⅰ中,均 匀混合后于 4℃保存。可保存 6 个月。 其他试剂:室温保存。 若溶液Ⅱ出现沉淀,请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使 用。沉淀的出现不会影响质粒 DNA 的纯化结果。 注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------● ● ● ●
● ● ●
若溶液Ⅱ出现沉淀,请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使用。沉淀的出现 不可剧烈混和,否则会使染色体 DNA 断裂。 此步骤不宜超过 5 min。
不会影响质粒 DNA 的纯化结果。
康为世纪 CW0555复杂植物基因组提取试剂盒
SurePlant DNA Kit复杂植物基因组提取试剂盒Version 04272010‐2.1I 组分说明Catalog no. CW0555 CW0555ANumber of preps 50 6Buffer GF1 40 ml 5 mlBuffer GF2 18 ml 3 mlBuffer GF3(concentrate)30 ml 5 mlBuffer GW(concentrate)17 ml 3.4 mlBuffer GE 24 ml 2 mlRNase A (100mg/ml) 220 μl 30 μlSpin Column DM 50 6Shredder Spin Column 50 6Collection Tube(2ml) 100 12Protocol 1 1II 保存条件自收到之日起,该试剂盒室温干燥条件下(15-25℃)可保存一年。
单独包装的RNase A可室温(15-25℃)保存,更长时间保存请置于2-8℃。
III 产品简介本试剂盒适用于从多种植物的组织中提取基因组DNA,特别适用于多酚、多糖含量高的植物组织。
该试剂盒采用可以特异性结合DNA的吸附柱和独特的缓冲液系统,单独配置的Shredder Spin Column可最大限度去除植物组织中的多糖、多酚等杂质。
提取的基因组DNA片段大,可吸附最大为40kb的DNA、纯度高,质量稳定可靠,可用于各种分子生物学常规试验,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、分子标记等实验。
IV 注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。
2.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下进行离心。
3.若Buffer GF1,Buffer GF2中有沉淀,可在65℃水浴中溶解,摇匀后使用。
4.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GF3和Buffer GW中加入无水乙醇。
技术支持:010‐58851919‐616 订购:010‐58851919‐618 Email:ask@5.所使用的植物样本不超过100mg湿重,20mg干重。
康为世纪 CW0506高纯96质粒提取试剂盒
Version 110910920102010PurePlasmid 96Kit 高纯96质粒提取质粒提取试剂盒试剂盒Cat Cat..N o.CW CW05060506保存:保存:Buffer Buffer P1P1(加入(加入RNaseA RNaseA)):2-8℃其他组分:室温组分说明Cat.No.CW0506CW0506A Number of preps4×961×96Buffer P1120ml 30ml Buffer P2120ml 30ml Buffer N3160ml 40ml Buffer PB250ml 60ml Buffer PW(concentrate)3×40ml 30ml Buffer EB 60ml 10ml RNaseA(10mg/ml) 1.2ml 300μl Filter 96Plate 4×961×96Bind 96Plate 4×961×96Collection Plate16×964×96Tape Pad 205Protocol11产品简介本试剂盒应用膜吸附技术纯化高质量的质粒DNA。
可以最大限度去除蛋白及其它杂质,从而保证提取的质粒纯度更高。
96孔板可从小体积细菌培养液中提取质粒、粘粒、BACs 等。
优化流程,可通过手动或自动化操作。
提取质粒可应用于测序、限制性酶切、PCR 和转化等其它下游实验。
注意事项1.Buffer P1使用前请先加入RNaseA(将试剂盒提供的RNaseA 全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW(concentrate)中加入无水乙醇。
3.使用前先检查Buffer P2和Buffer N3是否出现浑浊,如有浑浊现象,可置于37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
4.提取质粒得率与细菌的培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
质粒大提试剂盒说明书
北京索莱宝科技有限公司质粒大提试剂盒说明书货号:D1110规格:10次保存:常温保存,复检期一年。
试剂盒内容:RNaseA(10mg/ml)1ml溶液Ⅰ60ml溶液Ⅱ60ml溶液Ⅲ80ml漂洗液2×15ml洗脱液30ml吸附柱10个收集管(50ml)20个说明书1份产品说明:本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,一般从50-100ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA,提取率达85-90%。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:第1页共3页1.收集50-100ml过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3.向离心管中加入5ml溶液Ⅱ,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意:①翻转一定要温和,以免污染细菌基因组DNA。
②作用时间不要超过5分钟,以免质粒受到破坏。
4.向离心管中加入7ml溶液Ⅲ,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀(如菌液过多,可在此步放置5分钟,以尽可能的降解RNA)。
11000rpm离心10分钟,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,注意尽量不要吸出沉淀。
康为世纪 CW0543血液基因组96孔板提取试剂盒
BloodGen 96 Kit血液基因组96孔板提取试剂盒Version 04022010I 组分说明Catalog no. CW0543 CW0543ANumber of preps 4×96 1×96Buffer GR 15 ml 50 mlBuffer GL 15 ml 50 mlBuffer GW1(concentrate)19 ml 76 mlBuffer GW2(concentrate)13 ml 52 mlBuffer GE 15 ml 60 mlProtease 1 ml 4×1 mlCollection Plate 4×96 1×96Tape Pad for Collection 8×96 2×96Bind 96 Plate 4×96 1×96C-Block 4×96 1×96Airpore Tape 8×96 1×96Elution Plate 4×96 1×96Tape Pad for Elution 4×96 1×96Protocol 1 1II 保存条件自收到之日起,该试剂盒室温干燥条件下(15-25℃)可保存一年。
Protease 置于-20℃保存。
III 产品简介本试剂盒采用独特的缓冲系统和可以特异性结合DNA的96孔吸附板。
适用于全血、血浆、血清、骨髓、无细胞体液、淋巴细胞、培养细胞中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA及病毒DNA,也适用于冻干血及用柠檬酸盐、抗凝血剂或是EDTA处理过的血液。
本试剂盒广泛的用于临床样品的检测,可以同时处理96个样品,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。
所提DNA产量高、质量好,可直接用于PCR、Real-time PCR Genotyping和Southern Blot等实验。
质粒的提取
质粒DNA提取细菌质粒是一类双链、闭环的DNA,大小范围从1kb至200kb以上不等。
各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份,通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态,但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。
质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。
目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取,碱裂解法是最为常用的提取方法。
其优点是收获率高,适于多数的菌株,所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。
原理:用SDS和NaOH处理细菌后,会导致细菌细胞破裂,释放出质粒DNA 和染色体DNA,两种DNA在强碱环境都会变性。
由于质粒和主染色体的拓扑结构不同,变性时前者虽然两条链分离,却仍然缠绕在一起不分开;但后者完全变性甚至出现断裂,因此,当加入pH4.8的酸性乙酸钾降低溶液pH值,使溶液pH 值恢复较低的近中性水平时,质粒的两条小分子单链可迅速复性恢复双链结构,但是主染色体DNA则难以复性。
十二烷基磺酸钠(SDS)是一种阴离子表面活性剂,它既能使细菌细胞裂解,又能使一些蛋白质变性。
在离心时,大部分主染色体与细胞碎片,杂质等缠绕一起被沉淀,而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。
再由苯酚/氯仿 /异戊醇沉淀、乙醇洗涤,可得到纯化的质粒DNA。
碱裂解法提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析等。
试剂配制及作用机理1. 溶液ⅠpH 8.0: 50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl,10mM EDTA。
葡萄糖的作用是使悬浮后的大肠杆菌不会很快沉积到管子的底部,增加溶液的粘度,维持渗透压及防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA是Ca2+和Mg2 +等二价金属离子的螯合剂,在溶液I中加入EDTA,是要把大肠杆菌细胞中的二价金属离子都螯合掉。
从而起到抑制DNase对DNA的降解和抑制微生物生长的作用。
质粒DNA大提试剂盒-经典法
技术咨询电话:400-607-9999质粒DNA大提试剂盒-经典法Classic Max Plasmid DNAout货号: M090110产品及特点本试剂盒是用于质粒DNA大量制备与纯化的试剂盒。
菌体先经碱裂解法处理,再通过离心吸附柱,专一结合DNA,最后洗去杂质,高效快速提取质粒DNA,全套操作可以在30分钟之内完成。
使用本试剂盒可从50-100 mL过夜培养的菌液纯化得到高达300-500 ug的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
1.快速、步骤少,整个操作在半个小时之内完成。
2.纯度高,采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间。
3.产量高,每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 ug/mL。
4.用途广,适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5.价格低,比多数国内同类产品的价格更便宜。
规格及成分5次包装成份溶液A 30mL溶液B 30mL溶液C 40mLRNase A溶液1.5 mL(2 mg/mL)通用洗柱液100mL大提离心吸附柱5套通用洗脱液10mL使用手册1份运输及保存RNase A溶液需要4℃保存,其余成分可室温保存,如有沉淀可加热溶解后再使用。
技术咨询电话:400-607-9999使用方法1.先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中,摇匀后再取用,未用完的溶液A最好在4℃保存。
2.用250 mL离心管收集100-300 mL菌液,5,000 rpm离心10分钟,去除上清。
3.往细菌沉淀中加入6 mL溶液A(含RNase A),充分振荡悬浮。
注意:充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
4.加入6 mL 溶液B,温和翻转10 余次至透明。
若混合液不透明,应减少细菌的用量或室温放置5-10分钟直到裂解液变透明。
注意:避免剧烈振荡,否则细菌基因组DNA将断裂为小片段,与质粒难以分离,污染质粒DNA。
大提质粒注意事项
大提质粒注意事项
提取质粒时需要注意以下几点:
1. 注意操作规范,避免污染:提取质粒的过程需要严格控制,避免交叉污染和外界杂菌的侵入。
在操作过程中要保证在无菌环境下进行,并按照操作规范进行每一步操作。
2. 注意使用试剂的纯度:提取质粒所使用的试剂要求纯度较高,避免使用过期或劣质的试剂,以免影响提取效果。
3. 注意控制温度和时间:在提取质粒的过程中,需要控制好温度和时间,保证DNA的完整性和纯度。
同时,对于不同的质粒需要采用不同的方法和条件进行提取。
4. 注意观察和记录实验结果:在实验过程中需要随时观察实验结果,如有问题及时调整操作步骤或更换试剂。
同时,实验结束后需要记录实验结果,以便后续的分析和处理。
5. 注意安全:提取质粒过程中使用的试剂和器具具有一定的危险性,需要注意安全防护措施,避免对人体造成危害。
6. 做好质粒的保存工作:提取出的质粒需要妥善保存,避免污染和降解。
在保存过程中要选择适当的保存条件和方法,以保证质粒的质量和稳定性。
7. 实验人员要求:进行此实验前需具备一定的分子生物学实验基础,且应熟悉质粒提取的相关知识。
以上是提取质粒时需要注意的几点事项,仅供参考。
质粒 DNA 提取及纯化试剂盒 说明书
质粒DNA提取及纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展,它有效结合了细胞裂解,杂质去除,及质粒纯化等功能。
无需过柱,不用酚氯仿抽提,确保所提质粒DNA高产量、高质量。
并且可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid试剂使细胞裂解,释放DNA,及杂质去除有效结合起来。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行:Miniprep, Midiprep或Maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●方便:无需过柱,无需过滤,无需高效液相色谱法,无需超速离心机,无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿,无饱和正丁醇,无溴化乙锭,无氯化铯。
●快速:一分钟完成菌体沉淀,五分钟完成颗粒细菌碎片,10分钟完成沉淀质粒DNA,整个过程只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂,可应用于所有分子生物学的操作。
●高产量: 从1 ml (mini), 10 ml (midi), 100 ml (maxi) 的过夜培养基中获得大约5 μg,50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●质优价廉订购信息与储存条件室温保存。
有效期12个月。
使用限制:本产品属科研专用。
不用于人类或动物的诊断、治疗。
GBpure Plasmid MiniPrep Protocol从1-2 ml过夜细菌培养中提取5-10 μg质粒DNA操作方法1.取1- 2 ml过夜培养菌液,装入2 ml离心管中,室温最大速度(14,000 × g)离心1 min沉淀菌体,完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1 重悬液,充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec,使其完全分散开,至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2 裂解液,轻轻颠倒离心管3-5次,室温放置1 min,使细菌完全裂解,此时溶液应呈透明。
康为世纪 CW0542血液基因组大量提取试剂盒
BloodGen Maxi Kit血液基因组大量提取试剂盒Version 05012010I 组分说明Catalog no. CW0542Number of preps 10Buffer GR 126 mlBuffer GL 126 mlBuffer GW1(concentrate)27 mlBuffer GW2(concentrate)17mlBuffer GE 22 mlProtease 5 mlSpin Columns DX 10Collection Tube(50 ml)10Protocol 1II 保存条件自收到之日起,该试剂盒室温干燥条件下(15-25℃)可保存一年。
Protease 置于-20℃保存。
III 产品简介本试剂盒适用于从全血、血浆、血清、骨髓、无细胞体液、淋巴细胞、培养细胞、组织等样本中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA及病毒DNA。
可处理3-10 ml的人全血,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。
所提DNA产量高、质量好,可直接用于PCR、酶切和Southern Blot等实验。
IV 注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。
2.本试剂盒最多可以提取3-10 ml全血样品或2 x 108个白细胞。
3.若Buffer GL中有沉淀,可在56℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下进行离心。
5.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
V 操作步骤此步骤以提取3-5 ml全血为例,如需提取大体积的样品,提取液的量按比例增加,本试剂盒最多可以从10ml全血中提取基因组DNA。
1.在50ml离心管底部加入500μl Protease。
2.加入3-5ml血液样品,不足5ml加Buffer GR补足至5ml,轻轻混匀。
3.向样品中加入6 ml Buffer GL,上下颠倒离心管15次使样品充分混匀,然后剧烈震荡至少1分钟。
康为世纪 CW0546动物组织基因组提取试剂盒
Version 10112010 TissueGen DNA Kit动物组织基因组提取试剂盒Cat. No. CW0546保存:Proteinase K:-20℃其他组分:室温组分说明Cat. No. CW0546CW0546AKit Size 50 6Buffer GTL 15 ml 3 mlBuffer GL 15 ml 3 mlBuffer GW1(concentrate)19 ml 3.8 mlBuffer GW2(concentrate)13 ml 2.6 mlBuffer GE 15 ml 2 mlProteinase K 1.25 ml 150 μlSpin Column DM 50 6Collection Tube(2ml) 50 6产品简介本试剂盒用于新鲜或冰冻动物组织、细胞、血液或细菌的高纯度总DNA的分离纯化。
纯化过程无需苯酚或氯仿,无需乙醇沉淀,提取后可以立即使用。
优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效结合在吸附柱上,吸附柱可吸附分子量最大为50kb 的DNA片段,同时对100bp的DNA片段也能有效回收。
DNA特异性结合到硅胶膜上而其他污染物可流过膜,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步有效的洗涤步骤被完全去除。
低盐缓冲液或水洗脱下来的纯化DNA可以直接用于AFLP、RFLP、RAPD、Southern Blot、Real-Time PCR等下游操作。
注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2.如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组,建议在对数生长期早期收集样品。
3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4.若Buffer GL 和Buffer GTL中有沉淀,可在56℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
5.所有离心步骤均应使用台式离心机,在室温下进行离心。
6.如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GL前加入4 μl DNase-free的RNase A(100 mg/ml),RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:CW0601。
康为世纪 CW0553植物基因组提取试剂盒
Version 10112010 PlantGen DNA Kit植物基因组提取试剂盒Cat. No. CW0553保存:室温组分说明Cat.No. CW0553 CW0553A CW0553BKit Size 50 200 6Buffer GP1 40 ml 160 ml 5 mlBuffer GP2 40 ml 160 ml 5 mlBuffer GW1(concentrate)19 ml 76 ml 3.8 mlBuffer GW2(concentrate)13 ml 52 ml 2.6 mlBuffer GE 15 ml 60 ml 2 mlSpin Column DM 50 200 6Collection Tube(2ml) 50 200 6产品简介本试剂盒利用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序可以简单快速地从植物或真菌中分离得到高纯度DNA。
本品可以在1小时内完成总DNA的全部提取过程,包括基因组DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA。
纯化过程无需乙醇沉淀,提取后可以立即使用。
DNA特异性结合到硅胶膜上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步有效的洗涤步骤去除,最后用低盐缓冲液或水洗脱下来的纯化DNA可以直接用于PCR、AFLP、RFLP、RAPD、Southern Blot、Microsatellite Analysis和Real-Time PCR 等下游操作。
注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2.所有离心步骤均应使用台式离心机,在室温下进行离心。
3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4.使用前请先检查Buffer GP1和Buffer GP2是否出现浑浊,如有混浊现象,可在65℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
5.Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇,1 ml Buffer GP1加1 μl β-巯基乙醇。
不同试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较
不同试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较李卫玲;易初丽【摘要】目的比较几种不同质粒提取试剂盒提取质粒中内毒素水平.方法选用6种市售商业化试剂盒:QIAGEN质粒小提试剂盒Plasmid MiniKit(12123),QIAGNE无内毒素质粒大提试剂盒EndoFree Plasmid MaxiKit(12362),康为世纪高纯质粒中提试剂盒(CW0502),A厂家无内毒素质粒中提试剂盒,B厂家无内毒素质粒小提试剂盒,C厂家无内毒素质粒小提试剂盒(BSC01S2D).分别提取质粒DNA,应用鲎试剂显色基质法和凝胶法检测所提质粒中内毒素水平.结果 6种试剂盒提取质粒得率、A260/A280及A260/A230值均较好,但内毒素水平各不相同,其中各厂家标明无内毒素试剂盒提取质粒中内毒素水平相对较低,QIAGEN无内毒素质料大提试剂盒提取的质粒中内毒素小于0.125 EU/μg.结论6种质粒提取试剂盒使用时应根据实际情况进行选择.【期刊名称】《江汉大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2019(047)001【总页数】5页(P36-40)【关键词】质粒;内毒素;鲎试剂;质粒提取试剂盒【作者】李卫玲;易初丽【作者单位】江汉大学武汉生物医学研究院,湖北武汉 430056;江汉大学武汉生物医学研究院,湖北武汉 430056【正文语种】中文【中图分类】Q782质粒是细菌、放线菌和真菌细胞中一种染色体外双链闭环的DNA分子,以超螺旋状态存在,具有自主复制和转录能力。
质粒可将有用的外源基因通过基因工程的手段送入细菌中进行繁殖和表达,是分子生物学试验中常用的工具[1]。
内毒素为革兰阴性细菌细胞壁外膜的主要组成成分脂多糖,是诱发炎症反应过程中主要的致病成分[2]。
鲎试剂法作为一种检测疫苗制品细菌内毒素的方法已被列入《中华人民共和国药典》[3]。
由于研究目的不同,对质粒DNA质量的要求也不同,质粒DNA提取试剂盒的选择成为试验顺利进行的关键,但对质粒内毒素水平检测的研究较少。
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PurePlasmid Maxi Kit
高纯度质粒大提试剂盒
Version06302010‐2.1
I 组分说明
Catalog no. CW0503 CW0503A
Number of preps. 10 2
Buffer P1 100 ml 25 ml
Buffer P2 100 ml 25 ml
Buffer P3 100 ml 25 ml
Buffer EB 30 ml 10 ml
RNase A(10 mg/ml) 1 ml 250 μl
Fliter 10 2
Collection Tube(50ml) 10 2
Protocol 1 1
II 保存条件
该试剂盒室温干燥条件下(15-25℃)可保存一年,更长的保存时间可置于2-8℃。
若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A可室温(15-25℃)保存,长时间保存置于2-8℃,加入RNase A后的Buffer P1置于2-8℃保存,可以稳定保存半年。
III 产品简介
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过独特的缓冲系统和异丙醇沉淀方法,可快速获得大量高纯度的质粒DNA。
由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,体外转录,转化细菌,内切酶消化等。
IV 注意事项
1.Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。
2.使用前请先检查Buffer P2 和Buffer P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
3.注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3,使用后应立即盖紧盖子。
4.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
V 需要客户自备的试剂
1.异丙醇
2.5M NaCl溶液
Ⅵ 操作步骤
1.取100ml (根据培养菌体的浓度选择合适的量,低拷贝推荐用200ml)过夜培养的菌液,加入离心管中,10,000 rpm
(~11,500×g )离心3 分钟收集细菌,尽量吸弃上清。
注意:质粒拷贝数较低或>10kb时,可以通过二次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中,同时后续所加试剂Buffer P1、P2及P3的量需加倍。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入10 ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器充分混
匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低
3.向离心管中加入10 ml BufferP2,温和地上下颠倒混匀6-8 次,使菌体充分裂解,室温放置5 分钟。
注意:不要剧烈震荡,以免造成所提质粒中基因组DNA污染。
如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
4.向离心管中加入10 ml Buffer P3,立即温和地上下颠倒混匀6–8 次,此时出现白色絮状沉淀,然后室温放置10分钟
左右,10,000 rpm (~11,500×g )离心5-10 分钟。
注意:Buffer P3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5.将上清全部倒入Fliter 中,8,000 rpm (~6,200×g )离心3-5分钟,滤液收集在Collection Tube中。
6.向滤液中加入0.35 倍滤液体积的异丙醇和0.5倍异丙醇体积的5M NaCl,上下颠倒充分混匀。
注意:加入异丙醇过多容易导致RNA 污染
7.4℃,10,000 rpm (~11,500×g )离心30 分钟,小心弃上清,注意不要丢掉沉淀。
8.向管中加入6ml 70%乙醇充分洗涤沉淀,4℃ 10,000 rpm (~11,500×g )离心10分钟,小心弃上清,注意不要丢掉沉
淀。
9.重复步骤8。
10.室温干燥10-20 分钟,加入1-1.5ml Buffer EB, 充分溶解沉淀。
DNA 产物应-20℃保存。