脐血间充质干细胞的体外扩增及向类肝细胞分化的实验研究
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人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展论文
人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展【中图分类号】r329 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）13-0068-02研究发现，具多向分化潜能的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，mscs），脐带间充质干细胞具有无限增殖和多项分化潜能，可以向肝细胞分化，能在体外自我增殖，并可以定向分化为内、中、外3 个胚层来源的多种细胞，如骨、软骨、脂肪、神经及类肝细胞等，有望用于肝脏疾病的治疗。
脐带来源广泛，无伦理道德方面的争议。
如果能够利用易于获得的mscs在体内外定向分化为肝前体细胞，则可做为肝细胞移植的一个主要来源。
不过脐血中的间充质干细胞含量很少，如何分离纯化？如何使其较长时间保持干细胞特性？如何诱导其向肝细胞分化？据研究表明，人脐血间充质干细胞能够贴壁生长，而体外培养的贴壁细胞是一个异质细胞群，可能含有多种细胞成分。
一般呈现类纤维细胞形态，并可分裂增生，且同时具有间皮细胞标志的贴壁细胞，如cd44+ 细胞，可以初步判断为是mscs。
之前，报道hucmscs可采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离获得，并可冷冻保存；复苏后在肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4 的联合诱导下，能定向分化为表达ck8&18，并合成白蛋白和糖原的类肝细胞，类肝细胞可能具有诱导人脐血间充质干细胞向肝系细胞定向分化的作用。
脐血中存在mscs， ucbmsc 形态与mscs相似，倍增时间为48 h ，传代后形态基本无变化； ucbms c 不表达cd34及cd45，强表达cd44及cd166 ，与mscs的表面抗原特性一致，是脐血中区别于造血干细胞的一群处于未分化状态的非定向干祖细胞。
本研究先通过对hucmscs 的体外培养，对hucmscs进行纯化、扩增和鉴定；初步掌握hucmscs分离、培养及冻存的技术和方法，探索有效诱导hucmscs 分化为肝前体细胞的途径；然后，将诱导和未诱导的hucmscs在体外与人肝星状细胞（hsc）共培养，为下一步研究其在体内通过不同途径移植到肝纤维化鼠体内，以观察其对肝功能的修复情况及对肝纤维化进程的影响奠定基础。
脐血间充质干细胞在神经系统疾病中的研究进展及应用前景
多 向分 化潜 能 ， 后 的研 究 相继 报 道 了从 骨 髓 中可 随
因疗 法 的一种理 想 的靶 细胞 ， 生物 学 和组 织 工 程 在 中具 有 巨大 的科 学价 值 ， 为 ＭＳ ｓ 典来 源 的骨 作 Ｃ 经 髓 间充 质 细胞 已被 广 泛 应 用 于研 究 领 域 。新 近 研
２１ 脐血采集 ．
选 择 健 康 足 月产 或 早 产 妇 ， 胎 待
儿娩 出后 ， 在距 胎儿 ５ １ 的脐 带处进 行双结 扎 ， —７Ｃ Ｉ Ｔ
剪断脐 带 ， 消毒母 侧 脐 带断 端 ， 刺脐 静脉 ， 含 抗 穿 用 凝保 护液 的一次 性负压 采血 袋抽 取 ５ 左 右 的脐 ０ｍｌ 带血 ， ４℃冰箱保 存 ， 标本 在 ４ｈ内进行处 理 。 ２． 脐血 ＭＳ ｓ ２ Ｃ 的分 离 主 要有 密度 梯 度 离心 法 、
１ 脐 血 间充质 干细胞 的发 现
作 为人成 体 干 细胞 的一 种 ， 有 自我更 新 、 度 增 具 高 殖 和多 向分化 潜能 的特性 ， 且 其应 用 避 免 了胚 胎 并
干细胞所 带来 的伦 理 问题 ， １ 成 为细 胞疗 法 和基 ３渐
１７ ９６年 ， ｒ ｄｎｔｉ 先 研 究 发 现 骨 髓 中存 Ｆｉ ｅｓｅ ｅ ｎ首 在一种 纺锤 形 的成 纤维 细胞 集 落 ， 有 自我更 新 和 具
胞［ 。而且 脐 血 取 材 容 易 ， 源 丰 富 ， 疫 源 性 较 来 免 弱 ， 耐受 更 大程 度上 的 ＨＬ 能 Ａ配 型不符 ， 就 为脐 这
２ 脐 血 间充质 细胞 的分 离培养
血 Ｍｓ 作为 “ 种子 ” 细胞治 疗多 种系统 疾病 提供 了
新 的思 路 ， 其 由原来 普 遍应 用 于 血 液 系统 疾 病 扩 使 展到多种 疾病 的研 究 和 治疗 中 ， 一步 扩 展 了脐血 进
因疗 法 的一种理 想 的靶 细胞 ， 生物 学 和组 织 工 程 在 中具 有 巨大 的科 学价 值 ， 为 ＭＳ ｓ 典来 源 的骨 作 Ｃ 经 髓 间充 质 细胞 已被 广 泛 应 用 于研 究 领 域 。新 近 研
２１ 脐血采集 ．
选 择 健 康 足 月产 或 早 产 妇 ， 胎 待
儿娩 出后 ， 在距 胎儿 ５ １ 的脐 带处进 行双结 扎 ， —７Ｃ Ｉ Ｔ
剪断脐 带 ， 消毒母 侧 脐 带断 端 ， 刺脐 静脉 ， 含 抗 穿 用 凝保 护液 的一次 性负压 采血 袋抽 取 ５ 左 右 的脐 ０ｍｌ 带血 ， ４℃冰箱保 存 ， 标本 在 ４ｈ内进行处 理 。 ２． 脐血 ＭＳ ｓ ２ Ｃ 的分 离 主 要有 密度 梯 度 离心 法 、
１ 脐 血 间充质 干细胞 的发 现
作 为人成 体 干 细胞 的一 种 ， 有 自我更 新 、 度 增 具 高 殖 和多 向分化 潜能 的特性 ， 且 其应 用 避 免 了胚 胎 并
干细胞所 带来 的伦 理 问题 ， １ 成 为细 胞疗 法 和基 ３渐
１７ ９６年 ， ｒ ｄｎｔｉ 先 研 究 发 现 骨 髓 中存 Ｆｉ ｅｓｅ ｅ ｎ首 在一种 纺锤 形 的成 纤维 细胞 集 落 ， 有 自我更 新 和 具
胞［ 。而且 脐 血 取 材 容 易 ， 源 丰 富 ， 疫 源 性 较 来 免 弱 ， 耐受 更 大程 度上 的 ＨＬ 能 Ａ配 型不符 ， 就 为脐 这
２ 脐 血 间充质 细胞 的分 离培养
血 Ｍｓ 作为 “ 种子 ” 细胞治 疗多 种系统 疾病 提供 了
新 的思 路 ， 其 由原来 普 遍应 用 于 血 液 系统 疾 病 扩 使 展到多种 疾病 的研 究 和 治疗 中 ， 一步 扩 展 了脐血 进
人脐血CD34^+造血干细胞的分离和体外扩增培养问题
３ 讨 论
脐带血 ， 指的是胎儿娩 出、 脐带结扎并离断后 ， 残 留在 脐 带 内以及胎盘 近胎 儿 侧血管 内的血液 ， 其 中含有 大量 干 细 １ 材 料 与 方 法 胞， 包括造 血干细胞和间充质干细胞等。干细胞具有较强 的 １ ． １ 材料 自我复制能力 。胚胎 干细胞在 一定 的环境 条件下 可 以分 化 １ ． １ ． １ Ｕ Ｃ Ｂ来源 ： 人脐带血 由相 关医院妇 产科 提供 。 为多能干细胞 。造血 干细胞是 多能干细胞的一种 ， 是骨髓 中 １ ． １ ． ２ 仪器 和药品 ： 使用的主要仪器包括细胞 培养箱 ， 超净 的干细胞 ， 它具有 自我更 新 的能 力 ， 也能 够分化成 为各种 血 工作 台； 细胞培养 板 ， 流式 细 胞仪 ； 显 微镜 ， 照相 机 ； 电子 天 细胞前体 细胞并 最终分化 为各种血 细胞 ， 如 红细胞 、 白细 胞 和血小板 。脐带 血可以重 建骨髓造血和人体免疫 ， 多 用来治 平， 离 心机 ； 低 温冰箱等 。 使用 的药品主要包括 细胞 因子 Ｓ Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 疗骨髓 衰竭 以及严重的血液疾病 ， 在一些遗传病 和严重 的免 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ； 青霉素 、 链霉素 ； Ｎ ａ Ｃ １ 、Ｋ Ｃ Ｉ ； 甲醇 、 乙醇 ； Ｎ ａ ２ Ｈ Ｐ Ｉ Ｍ、 疫缺陷疾病 中也 被广泛应用 ， 并且获得了一定的成功。有研 Ｋ Ｈ ２ Ｐ ０ ４； Ｆ ｉ ｃ ｏ ｌ ｌ 淋巴细胞分离 液 ； 胎牛血清 ； Ｄ ＭＥ Ｍ 培养液。 究表明脐带血中含有大量的干细胞 ， 无论是对外 界刺激的反 １ ． ２ 方法： 采用胎 盘娩 出后采血法采集脐带血 ， 要求 孕妇无 应还是增值能力都 比骨髓 干细胞 强。在 体外生 长培养 中也 产科 ， 内科合并症 以及其他血液疾病。采血过程 由助产士帮 显示出 由于骨髓 干细胞 的特点 ， 比骨髓干 细胞生 长的更好 ， 助 完成 。在 无菌条件下抽取脐带血 ， 注入无 菌采血袋后置 于 即更适合做体外扩增 培养… 。脐带血不仅含 有丰 富的干细 ４℃保存 。２ ４ ｈ内分离 制备 ＭＮ Ｃ悬液 后用 Ｉ ｓ ｏ ｌ ｅ ｘ ５ ０免疫磁 胞 ， 其分泌生长 因子的能力 也很强 。此外 ， 其端 粒酶 活性也 珠分 离系统收集 Ｃ Ｄ ３ ４ 造血 干细胞 ， 用 流式 细胞 仪 检测 收 远远高于骨髓和外周血干细胞 ， 这些特点导致 了脐带干细胞 集的 Ｃ Ｄ ３ ４ 纯度 后行体外扩增 培养 。通过 血液涂 片进行形 扩增会有更强的分裂存活能力 。 态学观察。根据细胞计数调整细胞悬 液量 ， 加入胎牛血清 和 造血生长 因子分 为刺 激增殖 的刺激因子 和维持 细胞存 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ溶液 。在 ２ ４孔培养板上做 ５组不同细胞因子组合 的 活 的存活因子 。根据各种生长 因子的不同功 能 ， 合理搭配 可 Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 培养孔 ， 以不加细胞 因子 的培 养孔作 为生长对 照 ， 每组重 复 以起 到 协 同作 用 。 本 研 究 结 果 表 明 Ｓ 三次 ， 共培养 ６周 。每周计数单个核细胞数和集落形成单 位 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ ５种细胞 因子联合 应用诱 导 Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干 细胞 体 且Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干细胞 体外 培养第 １ ３ （ Ｃ Ｆ Ｕ ） 。细胞因子分组为 ： （ １ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６ ； （ ２ ） Ｓ Ｃ Ｆ 外扩增培养效果 最好 ， 脐 带 血 造 血 干 细 胞 的 研 究 有 不 少 成 ＋Ｉ Ｌ一３＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ３ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ４ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ ｄ时 达 到 高 峰 。 目前 ， ３＋Ｉ Ｌ一 ６＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ５ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ＋ 果， 但至今成功移植的例子却很有限。一方 面是 因为 干细胞 Ｅ Ｐ Ｏ。其 中浓度分 别为 ： Ｓ Ｃ Ｆ １ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ一３ １ ０ ｉ ｒ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ 的数量较少 ； 另一方面则是 由于脐带干细胞 移植入成人 骨髓 ６ ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ８ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 ＥＰ Ｏ ２ Ｕ。 的成功率较 低 Ｊ 。所 以 ， 如何提高脐带血造血干细胞 的移植 １ ． ３ 数 据分析 ： 用Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０软件对 数据进行 统计学分析 ， 成功率 ， 如何在体外扩增和培养脐带血造血干细胞就成为 了 也是其进一步 发挥 于临床医学应用所要面对的 对数据进行 卡方 检 验。剂 量 资料采 用 平均 数标 准 差表示 。 研究的热点 ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５表 明差异具有统计 学意义。 重费挑战。 参 考 文 献
脐带血 ， 指的是胎儿娩 出、 脐带结扎并离断后 ， 残 留在 脐 带 内以及胎盘 近胎 儿 侧血管 内的血液 ， 其 中含有 大量 干 细 １ 材 料 与 方 法 胞， 包括造 血干细胞和间充质干细胞等。干细胞具有较强 的 １ ． １ 材料 自我复制能力 。胚胎 干细胞在 一定 的环境 条件下 可 以分 化 １ ． １ ． １ Ｕ Ｃ Ｂ来源 ： 人脐带血 由相 关医院妇 产科 提供 。 为多能干细胞 。造血 干细胞是 多能干细胞的一种 ， 是骨髓 中 １ ． １ ． ２ 仪器 和药品 ： 使用的主要仪器包括细胞 培养箱 ， 超净 的干细胞 ， 它具有 自我更 新 的能 力 ， 也能 够分化成 为各种 血 工作 台； 细胞培养 板 ， 流式 细 胞仪 ； 显 微镜 ， 照相 机 ； 电子 天 细胞前体 细胞并 最终分化 为各种血 细胞 ， 如 红细胞 、 白细 胞 和血小板 。脐带 血可以重 建骨髓造血和人体免疫 ， 多 用来治 平， 离 心机 ； 低 温冰箱等 。 使用 的药品主要包括 细胞 因子 Ｓ Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 疗骨髓 衰竭 以及严重的血液疾病 ， 在一些遗传病 和严重 的免 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ； 青霉素 、 链霉素 ； Ｎ ａ Ｃ １ 、Ｋ Ｃ Ｉ ； 甲醇 、 乙醇 ； Ｎ ａ ２ Ｈ Ｐ Ｉ Ｍ、 疫缺陷疾病 中也 被广泛应用 ， 并且获得了一定的成功。有研 Ｋ Ｈ ２ Ｐ ０ ４； Ｆ ｉ ｃ ｏ ｌ ｌ 淋巴细胞分离 液 ； 胎牛血清 ； Ｄ ＭＥ Ｍ 培养液。 究表明脐带血中含有大量的干细胞 ， 无论是对外 界刺激的反 １ ． ２ 方法： 采用胎 盘娩 出后采血法采集脐带血 ， 要求 孕妇无 应还是增值能力都 比骨髓 干细胞 强。在 体外生 长培养 中也 产科 ， 内科合并症 以及其他血液疾病。采血过程 由助产士帮 显示出 由于骨髓 干细胞 的特点 ， 比骨髓干 细胞生 长的更好 ， 助 完成 。在 无菌条件下抽取脐带血 ， 注入无 菌采血袋后置 于 即更适合做体外扩增 培养… 。脐带血不仅含 有丰 富的干细 ４℃保存 。２ ４ ｈ内分离 制备 ＭＮ Ｃ悬液 后用 Ｉ ｓ ｏ ｌ ｅ ｘ ５ ０免疫磁 胞 ， 其分泌生长 因子的能力 也很强 。此外 ， 其端 粒酶 活性也 珠分 离系统收集 Ｃ Ｄ ３ ４ 造血 干细胞 ， 用 流式 细胞 仪 检测 收 远远高于骨髓和外周血干细胞 ， 这些特点导致 了脐带干细胞 集的 Ｃ Ｄ ３ ４ 纯度 后行体外扩增 培养 。通过 血液涂 片进行形 扩增会有更强的分裂存活能力 。 态学观察。根据细胞计数调整细胞悬 液量 ， 加入胎牛血清 和 造血生长 因子分 为刺 激增殖 的刺激因子 和维持 细胞存 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ溶液 。在 ２ ４孔培养板上做 ５组不同细胞因子组合 的 活 的存活因子 。根据各种生长 因子的不同功 能 ， 合理搭配 可 Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 培养孔 ， 以不加细胞 因子 的培 养孔作 为生长对 照 ， 每组重 复 以起 到 协 同作 用 。 本 研 究 结 果 表 明 Ｓ 三次 ， 共培养 ６周 。每周计数单个核细胞数和集落形成单 位 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ ５种细胞 因子联合 应用诱 导 Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干 细胞 体 且Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干细胞 体外 培养第 １ ３ （ Ｃ Ｆ Ｕ ） 。细胞因子分组为 ： （ １ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６ ； （ ２ ） Ｓ Ｃ Ｆ 外扩增培养效果 最好 ， 脐 带 血 造 血 干 细 胞 的 研 究 有 不 少 成 ＋Ｉ Ｌ一３＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ３ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ４ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ ｄ时 达 到 高 峰 。 目前 ， ３＋Ｉ Ｌ一 ６＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ５ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ＋ 果， 但至今成功移植的例子却很有限。一方 面是 因为 干细胞 Ｅ Ｐ Ｏ。其 中浓度分 别为 ： Ｓ Ｃ Ｆ １ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ一３ １ ０ ｉ ｒ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ 的数量较少 ； 另一方面则是 由于脐带干细胞 移植入成人 骨髓 ６ ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ８ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 ＥＰ Ｏ ２ Ｕ。 的成功率较 低 Ｊ 。所 以 ， 如何提高脐带血造血干细胞 的移植 １ ． ３ 数 据分析 ： 用Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０软件对 数据进行 统计学分析 ， 成功率 ， 如何在体外扩增和培养脐带血造血干细胞就成为 了 也是其进一步 发挥 于临床医学应用所要面对的 对数据进行 卡方 检 验。剂 量 资料采 用 平均 数标 准 差表示 。 研究的热点 ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５表 明差异具有统计 学意义。 重费挑战。 参 考 文 献
人脐血间充质干细胞的体外培养
１１ 材 料 ．
无菌 条 件下 取 本 院 正 常 足 月剖 腹 产 胎
的 Ｍ ｓ ｃｋＴ ｅｅ ｕ Ｍ进行培养 ， ｎ 观察细胞贴壁延伸及原 代培养时间。⑤观察首次换液时间对细胞生长的影 响 ： 行 以上 研究 时 ， 进 分别 于接 种 后第 ２—７ｄ首 次 换液， 将换下的液体转人新瓶继续培养至少 ６ｄ 观 ， 察是否仍有贴壁细胞 ， 以确定首次换液时间。⑥观 察 不 同培 养基 对 细 胞 生 长 的影 响 ： ８份脐 血 ， 取 以
１ ｎ分 离 ， 获 得 的单 个核 细胞 均分 ， １×１ ５ｍｉ 将 以 ０／
ｍｌ１×１ 。 ｌ １×１ ｍｌ１×１ ｍｌ 种 于 Ｆ Ｓ包 、 ０ｍ 、 ０／ 、 ０／ 接 Ｂ
性， 为其在组织工程方面的应用进行初步探索。
１ 材பைடு நூலகம் 与方 法
被 的培 养 瓶 中 。首 次 换 液 时 间 ３ｄ 用 含 １％ Ｆ Ｓ ， ０ Ｂ
液面清晰， 稀释脐血与淋 巴细胞分离液的柱高 比为
３— ： 。用 Ｆｃ ｌ 以适 当 的 速 度 及 时 问 离 心 ， ５】 ｉ 法 ｄ 取 中间界面 白膜层 ， Ｐ Ｓ后 吹 打 ， １５０ｒｍｉ 加 Ｂ 以 ０ ／ ｎ离
心 ５ｍ ｎ弃上清 ， ｉ， 共洗涤 ２次， 后加入培养基 ； 以一 定密 度接 种于 培养 瓶 中 ， ３ 置 ７℃ 、 积 分数 为 ５％ 体 的 Ｃ Ｏ 饱和湿度的孵箱中培养， 细胞到 ８％融合时 ０ 用 ０２ ％胰 酶和 ００ ％ 乙二胺 四乙酸 （ ： ） ．５ ．４ １１ 消化 ， １ ： 传代培养。 ２ １２ 方法 ①不 同离心速度及时间分离脐血单个 ．
以往 研究 ¨ 表 明 ， 血 中存 在 间 充 质 干 细 胞 脐
维甲酸联合神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究
摘 要 目的 ： 讨 脐 血 间 充 质 干 细 胞 （ Ｃ ） 探 ＭＳ ｓ 向神 经 样 细 胞 定 向 诱 导 分 化 的 条 件 及 方 法 ，
以明确 其神 经分化 潜 能。方法 ： 将人 脐血 间充质 干 细胞体 外培养扩 增 、 保存 后 ， 第 ５代 的 ＭＳ ｓ 取 Ｃ
分 别 用维 甲酸 （ Ａ） 维 甲酸联 合神 经 生长 因子 （ Ｆ） Ｒ 、 ＮＧ 诱导 方 法向神 经样 细胞诱 导 ， 导分化 期 诱
间观 察 细 胞 形 态 变化 ， 比较 表 达神 经元 特 异 性 烯 醇 化酶 （ ｓ 并 ＮＥ ）ｍＲ ＮＡ、 质 纤 维 酸性 蛋 白 胶
（ ＡＰ） ＧＦ ｍＲＮＡ 的差 异 。结果 ： 两种 不 同诱 导方 法均能诱 导 细胞发 生典 型变化 ， 对照 组未发 现神
经样 细胞 生长 。 免疫 组化 法显示 三种诱 导方 法诱 导后 均表 达 Ｎ ｓｉ 、 Ｅ、 ＡＰ， ＧＦ ｅｔ ＮＳ ＧＦ ｎ Ｎ ＋Ｒ 组 Ａ 多于 Ｒ 组 。 ｅｌｔ — Ｃ 显 示诱 导组及 对照 组均有 ＮＳ ＮＡ、 ＡＰ ｍＲ Ａ Ｒ ａ— ｍｅＲＴ Ｐ Ｒ ｉ Ｅ ｍＲ ＧＦ ＮＡ 表 达 ， 但
【 中图分 类号】 Ｒ７ １ ０ 【 ４ ． ５ 文献标 识码】 Ａ
【 文章编号 １ １ ０ — ３ ７ ２ １ ）４ ０ ０ —４ ０ ０７ ７ （ ０ ０ ０ — ４ ４０
Ｔｈｅ ｅ ｐ ｒ ｍ ｅ ｎ ｒ ｔｎ ｉ ｃ ｄ ａ ｖ ｒ ｇ ｏ ｈ ｆ ｃ ｏ ｎｄ ｃ ｘ ｅ ｉ ｎｔｏ ｅ ｉ ｏ ｃ ａ ｉ ｎｄ ｎｅ ｅ ｒ ｗｔ ａ ｔ ｒ ｉ ｕ ｅ
Ｄｅ ｒ ｍｅ ｔｏｆＮｅ ｒ ｌ ｇｙ ，Ｔｈｅ Ａｆｉｉｔ ｄ Ｈｏｓ ｔ ｌｏｆＮｏｒ ｈ ｐａ ｔ ｎ ｕ ｏ ｏ ｆｌａ ｅ ｐｉａ ｔ Ｃｈｉ ａ ｅ ｉａ ｎａ Ｃｏ ｌＭ ｄ ｃ ｌＣｏｌｅ ｌｇｅ（ ｎ ｈａ ６ ００ ） Ｔａ ｇｓ ｎ ０ ３ ０
鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2018)13-02027-062027www.CRTER .org·研究原著·陈俊，男，1991年生，湖北省随州市人，汉族，徐州医科大学在读硕士，主要从事脐血间充质干细胞相关研究。
通讯作者：杨自金，主任医师，硕士生导师，徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科，江苏省连云港市 222002中图分类号:R394.2 文献标识码:A稿件接受：2017-12-18Chen Jun, Master candidate, Department of Pediatrics, Lianyungang Hospital Affiliated to Xuzhou Medical University (First People’s Hospital of Lianyungang), Lianyungang 222000, Jiangsu Province, ChinaCorresponding author: Yang Zi-jin, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Pediatrics, Lianyungang Hospital Affiliated to Xuzhou Medical University (First People’s Hospital of Lianyungang), Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化陈 俊，杨自金(徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科，江苏省连云港市 222002) DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.0492 ORCID: 0000-0002-3762-1586(陈俊)文章快速阅读：文题释义：鼠神经生长因子：是从小鼠颌下腺分离纯化出的一种细胞因子，对神经元有营养支持作用，能够促进受损神经的修复，对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。
低氧促进人脐带血间充质干细胞向神经细胞分化
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｕ ｍ ｂ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｄ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ －
Ｗａ ｎ ｇ Ｈａ ｉ ｙ ａ ｎ， Ｗａ ｎ ｇ Ｇａ ｎ ｇ， Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｘｉ ａ ｏ ｙ ａ ｎ， Ｌ ｉ Ｊ ｕ ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｈｅ Ｊ ｕ ｘ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ）
导成神经细胞的过程 中， 低氧诱导的间充质干细胞向神 经细胞的分化 能力增强。神经细胞表面标 记Ｎ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ 、 Ｎ Ｆ — Ｍ表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组 比具有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。 结论
关 键词
低氧条件可 以提 高脐 带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。 低 氧 脐 带血 间充质 干 细胞 神 经 细胞 分化
ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ —ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ—ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ Ｔ ｈ ｅ
王海燕， 王 刚， 张晓岩 ， 李菊英 ， 贺菊香
（ 青 海 大学 医学 院病 理教 研 室 ）
Ｗａ ｎ ｇ Ｈａ ｉ ｙ ａ ｎ， Ｗａ ｎ ｇ Ｇａ ｎ ｇ， Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｘｉ ａ ｏ ｙ ａ ｎ， Ｌ ｉ Ｊ ｕ ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｈｅ Ｊ ｕ ｘ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ）
导成神经细胞的过程 中， 低氧诱导的间充质干细胞向神 经细胞的分化 能力增强。神经细胞表面标 记Ｎ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ 、 Ｎ Ｆ — Ｍ表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组 比具有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。 结论
关 键词
低氧条件可 以提 高脐 带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。 低 氧 脐 带血 间充质 干 细胞 神 经 细胞 分化
ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ —ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ—ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ Ｔ ｈ ｅ
王海燕， 王 刚， 张晓岩 ， 李菊英 ， 贺菊香
（ 青 海 大学 医学 院病 理教 研 室 ）
人脐血间充质干细胞定向成骨分化的研究进展
干 细 胞 是 一 类 具 有 自我 复 制 能 力 和 多 向 分 化 潜 能 的 细
胞 ， 为胚 胎干 细胞 和 成体 干 细胞 。间 充质 干 细胞 （ Ｃ ） 分 ＭＳ ｓ 属 于 成 体 干 细 胞 的 一 种 ， 早 在 骨 髓 中 被 发 现 … 。 但 由 于 骨 最
髓 源性 ＭＳ ｓ 在 高 度 病 毒 污 染 的 可 能 ， 随 着 年 龄 的 不 断 Ｃ存 且
［ 图分 类 号 ］ Ｒ ２ ． 中 ３９ ２
［ 献标识 码］ Ａ 文
［ 章 编 号 ］ １０ ８ ４ （０ ２ １ 文 ０ ８— ８９ ２ １ ）３—１７ ０ ４ ５— ３
高 密 度 接 种 的 相 关 报 道 。于 海 微 等 以 ５×１ 。 密 度 接 ０Ｌ 种 时 细 胞 一 直 无 法 传 代 ， ５×１ Ｌ 的 密 度 接 种 时 细 胞 贴 以 ０ 壁 时间 、 出现 伸 展 时 间及 原 代 培 养 时 间均 短 于 其 他 接 种 密 度 ， 有显著 性差异 （ ００ ） Ｐ＜ ．５ 。孙 海 梅 等 在 研 究 相 关 问 题 时 ，
法 ， 现有 无 血 清 均 能 培 养 出 ＭＳ ｓ 只 不 过 无 血 清 培 养 ， 胞 发 Ｃ， 细
的 方 法 分 离 脐 血 ， 果 可 得 到 明 显 的 白 膜 层 细胞 ， 左 右 达 结 ２周 到 ８ ％ ～９ ％ 汇 合 。也 有 利 用 沉 淀 法 分 离 脐 血 的 报 道 ， 取 ０ ０ 并 得 了 良好 的分 离 效 果 。 迟 作 华 等 采 用 羟 乙基 淀 粉 沉 淀 法
人 脐 血 间充质 干 细 胞 定 向成 骨 分 化 的研 究进 展
鲁 俊 山 王建伟 。 马 勇。 ， ，
人脐血间充质干细胞体外向神经元样细胞分化的实验研究
ｍｅ ｉ ｍ． Ａｆｅ ｒ ａ ｅ ｔ ０ ｆ ｌＬ ｒ ｔ ｏｃ ａ ｉ ｎ １ ／ ／ ａ ｉ ｉ ｒ ｂ ａ ｔ ｇ ｏ ｈ ｆ ｃｏ ， ｄｕ ｔｒ ｔｅ ｔ ｄ ｗｉｈ ３ ｌ ／ ｅｉ ｉ ｃｄ ａ ｄ Ｌ Ｌ ｂ ｓｃ ｆ ｏ ｌｓ ｒ ｗｔ ａ ｔ ｒ ｍｏ ｎ ０ ｇ ｂ
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［ ｓｒ ｃ Ａｂ ｔａ ｔ］Ｏｂ ｅ ｔｖ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｈ ｅ ｓｂ ｌ ｙ ｏ ｕ ｎ ｕ ｉｃ ｌｃ ｒ ｌｏ ｓ ｎ ｈ ｍａ ｊ ｃｉｅ Ｔｏ ｉｖ ｓｉａ ｅ ｔ ｅ ｆａ ｉ ｉ ｔ ｆｈ ｍａ ｍｂｌ ａ ｏ ｄ ｂｏ ｄ ｍｅ ｅ ｃ ｙ ｌ ｉ ｉ
离心 方 法 分 离人 脐 带血 单 个核 细 胞 ， Ｍｅｅ Ｃ ｈ培 养液 体 外 扩 增 生 长 传 代 培 养 ， 用 ｓｎ ｕ 于倒 置 显 微 镜 下观 察 其 生 长 特 性 。取 第 ３代 的 脐 血 间 充质 干 细 胞 ， １ ｇＩ 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子 和 ３ ｍｏ／ 反 式 维 甲酸 诱 导培 养 的 细 胞 向 神 经 细 胞 分 用 ０ ／ ０ｂ ｌＩ 全 ｃ
脐带血造血前体细胞在间质干细胞微环境中的增殖和分化特性研究
ｃ ａ ｅ ｓ（ Ｃ ）ｆ ｍ ｃｒ ｌ ｄｗ ｒ ｅｐｎ ｅ Ｃ ｍｃｏｎｉ ｎ ｅｔｉ ｔｅｐｅｅｃ ｆ ｔ ｅ ａｔｒ Ｓ Ｆ ， ｌ ｒ ｌ ＭＮ ｓ ｒ ｏｄｂｏ ｅｅ ｘ ａｄ ｄｉ ＭＳ ｉ ｅｖｒ ｍ ｎ ｒｓｎｅｏ ｅ ｃｌｆ ｏ（ Ｃ ） ｅ ｃｌ ｏ ｏ ｎ ｒ ｏ ｎｈ ｓｍ ｌ ｃ Ｆ ＭＳ—ｌ ｅｔ ｏｉｅｋｎｓ ｉ ｎ （ ｌ ） ｈｏ ｂｐ ｉ ｉ （ Ｐ ｉ ｒｓ ｉａｅ３ｌ ａｄ ＦｔＬ ，ｔｒｍ ｏｏｅ ｎ Ｔ Ｏ）ａｄＩ ｋ ｙ ｎ ｇ ３ ｔ ｎ Ｌ一６ ．ＭＮ ｏｎ ｄ ｃｌｎ Ｃ ｃｕｔａ ｏｏｙ—ｆｒ ｉｇｃｌ ｎ ｏｍ ｎ ｅｌ （ Ｆ ）ｃｌ ｒ ｗ ｒ ｐｒ ｒ ｅ ｔ ｅｋ１ ２ ３ａｄ４ Ｅ Ｕ Ｔ ：（ ）Ｔ ｅｎ ｍ ｅ ｆ Ｃ ｃ ａｅ ｎ ａｈｄ１８ Ｃ Ｃ ｕｔ ｅ ｅｅ ｅｆ ｄａ ｗ ｅ ， ， ｎ ．Ｒ Ｓ Ｌ Ｓ １ ｈ ｕ ｂｒ ｓｉ ｒ ｓｄａｄｒ ｃｅ ０ ｕ ｏ ｍ ｏ ＭＮ ｎ ｅ ｅ
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志
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二
・
９９ ・ ５
［ 文章 编号 ］ １０ ４ １ （０７ ０ ０ ９ ０ ０ ０－ ７ ８ ２ ０ ） ５— ９ ５— ４
ＣＥＮ ｎ ．Ｌ Ｎ Ｍａ Ｈｏ ｇ Ｉ ｏ—ｆ ｎ ａｇ （ ｅａｔ ｅｔｆＣ ｅ ｏｈｒｐ ，Ｔ ｅ ｆ ｌ ｔ ｕ ｏ ｏ ｈ ｌ ｕ ｎｘ ｄ ａ ｎｖｒｔ，Ｎ ｎ ｉ ３ ０ １ ｈｎ ； Ｄｐ ｒ ｎ ｈｍ ｔ ａｙ ｈ ｆ ｉ ｅ Ｔｍ ｒ ｓ ａ，Ｇ ａｇ ｉ ｍ ｏ ｅ Ａ ａｄ ｉ Ｈ ｐ Ｍｅｉ ｌＵ ｉ ｓｙ ａｎｎ ５ ０ ２ ，Ｃ ｉａ ｃ ｅｉ ｇ Ｄｐ ｒ ｅｔｆＨ ｍ ｔｌ ｙ ｈ ｉｔ ｆ ｌ ｔ ｏ ｉ ｌ ｚ ｊ ｇＵ ｉ ｒｔ， ａｇｈ ｕ３０ ０ ， ｈｎ ） ｅａｔ ｎ ｅ ａｏ ｇ ，Ｔ Ｆｒ ｆ ｉ ｅ Ｈ ｓ ｔ ， ｈ ￣ｎ ｎｖ ｓｙ Ｈ ｎｚｏ １０ ３ Ｃ ｉ ｍ ｏ ｏ ｅ ｓＡ ａ ｄ ｐａ ｅ ｉ ｅ ｉ ａ ［ Ｂ Ｔ ＡＣ ＡＩ ： ｏｉ ｅｔａｅｔｅｐｏｉ ｒ ｉ ｎ ｉｅｅｔ ｔ ｎｐｔ ｒｓ ｆ ｅ ａ ｐ ｉｉ ｐｅｕｓｒ ｆ ｍ Ａ Ｓ Ｒ Ｔ］ Ｍ Ｔ ｖｓｇｔ ｈ ｒ ｆ ａｏ ａ ｄｄｆ ｒｎ ａ ｏ ａｅ ｍ ｔ ｏｅ ｃ ｒｃｒｏ ｏ ｎ ｉ ｌｅ ｔ ｎ ｉｉ ｔ ｏｈ ｎ ｏ ｔ ｓｒ
脐血间充质干细胞的培养与分化②：本刊中文部
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— —
ＷＷＷ． ＲＴ Ｒ． ｒ Ｃ Ｅ ｏｇ
原 代 培 养 大 鼠视 网膜 与 视 皮 质 神 经 元 的 方法 学 特 点 ☆
张 荻’ ，吴小影 ２ ，刘双 珍 （河南省 眼科研 究所 ，河 南省郑 州市 ４ ０ ０ ； 中南大学湘雅 医院眼科 ，湖 南省长 沙市 ４ ０ ０ ） ’ Ｉ ５０３ １０８
适合 应 用 于临床 。Ｌ 人 肝 细胞 系 源于正 常成 Ｏ２
人肝 细胞 ，是一 种 高分 化 的人 肝 细胞 系，各 项
生物 功 能较 好 。
实验 在 查阅大量 文献的基 础上对培 养基 的选
择 、离心速度 及时 间、接种 密度 、生 长 因子 的选
９ 香 丹 注射 液 诱 导 人 脐 血 间充 质 干细 胞 向神
便 ，且人 脐 血 细胞 相 关的 免疫 发 育 尚未 成 熟 ， 类似 于胚 胎 细胞 ，不 易发 生免 疫 排 斥反应 ， 更
化 能 力更 强 ；淋 巴 细胞 的免 疫 功 能不 够成 熟 ， 移 植物 抗 宿主 病发 生率较 低 ；微 生 物 和肿 瘤 细 胞 污 染的 可 能性 小 。但 目前 存在 的 问题 是 脐血
摘要
背景： 经元 的原代 培养是进 行神经 系统结 神
构和 功 能 研 究 的 一 种 重 要 手 段 。 果 能 建 立 如
张荻 ，吴小影，刘双珍 原代培养大 鼠视 网膜 与视皮质 神经 元 的方 法学特 点【】中国组织 Ｊｌ 工 程 研 究 与 临 床 康 复 ， ２ １ ，４ １ ） ０ ０１ （４ ：
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ＷＷＷ． ＲＴ Ｒ． ｒ Ｃ Ｅ ｏｇ
原 代 培 养 大 鼠视 网膜 与 视 皮 质 神 经 元 的 方法 学 特 点 ☆
张 荻’ ，吴小影 ２ ，刘双 珍 （河南省 眼科研 究所 ，河 南省郑 州市 ４ ０ ０ ； 中南大学湘雅 医院眼科 ，湖 南省长 沙市 ４ ０ ０ ） ’ Ｉ ５０３ １０８
适合 应 用 于临床 。Ｌ 人 肝 细胞 系 源于正 常成 Ｏ２
人肝 细胞 ，是一 种 高分 化 的人 肝 细胞 系，各 项
生物 功 能较 好 。
实验 在 查阅大量 文献的基 础上对培 养基 的选
择 、离心速度 及时 间、接种 密度 、生 长 因子 的选
９ 香 丹 注射 液 诱 导 人 脐 血 间充 质 干细 胞 向神
便 ，且人 脐 血 细胞 相 关的 免疫 发 育 尚未 成 熟 ， 类似 于胚 胎 细胞 ，不 易发 生免 疫 排 斥反应 ， 更
化 能 力更 强 ；淋 巴 细胞 的免 疫 功 能不 够成 熟 ， 移 植物 抗 宿主 病发 生率较 低 ；微 生 物 和肿 瘤 细 胞 污 染的 可 能性 小 。但 目前 存在 的 问题 是 脐血
摘要
背景： 经元 的原代 培养是进 行神经 系统结 神
构和 功 能 研 究 的 一 种 重 要 手 段 。 果 能 建 立 如
张荻 ，吴小影，刘双珍 原代培养大 鼠视 网膜 与视皮质 神经 元 的方 法学特 点【】中国组织 Ｊｌ 工 程 研 究 与 临 床 康 复 ， ２ １ ，４ １ ） ０ ０１ （４ ：
人脐带血间充质干细胞的分离培养研究与展望
获取 的单个 核细胞 ， 经椎 虫 蓝染 色 进 行 活 细胞 计 数 ， 每毫 升脐 血收集 的单 个核 细 胞 （．２ ２ １ ） ０ ， Ｏ ４ ～ ． ２ ×１
但 由于骨髓 源性 ＭＳ 存在 高度 病 毒污 染 或 其他 污 Ｃｓ 染 的可 能 ， 随 着 年 龄 的 不 断 增 长 其 细 胞 数 量 和 扩 且 增、 分化 能力 出现 明显 下降趋 势 ， 因此 ， 找一种 能替 寻
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四川解 剖学杂 志 ２０ ０ ７年
第 １ 卷
第 ２期
・
・ ２ ・ ９
综述 ・
人脐 带血 间充质 干细胞 的分 离培 养研 究 与展 望
苏维祥 杨 静 爱 麦秋 萍 ， ， 综述 ， 解继 胜 瑞雅。 黄 审校
（． 江 民族 医 学院 ２ ０ 临床 医学 系本 科 生 ；． １右 ０ ４级 ２ 右江 民族 医学 院 组 胚教 研 室 ；
平均为（．６ ．５ ×１ 肝素钠采血体积 ３ ￣５ １４ 士０２ ） ０ ， ５ ５ ｍｌ经 密度梯度 离 心法 分离 新 鲜脐 带 血 ， 取 的单 个 ， 获 核细胞 ， 经椎虫 蓝染 色 进行 活细 胞计 数 ， 毫升 脐 血 每 收集 的单 个核 细胞 （． １ ．５ ×１ 平 均 为 （． １ ２３ ～４０ ） ０ ， ３ １ ±０ ３ ） ０ ， 者 相 比差 异 具 有 显 著 性 意 义 （ 一 ． １ ×１ 两 ｔ ０ ０ １ Ｐ ．５ ， ． １ ， （０ ０ ）即肝 素钠 抗凝 获 取 的单 个 核 细胞 数 明显 高于枸橼 酸钠所 获取 的细胞 数 。 １ ２ 不 同抗凝 剂 对 获取 的单 个 核 细胞 细胞 生 长 状 ．
代骨髓 ＭＳ ｓ 并可弥补其缺 陷的间充质 干细胞 来 Ｃ， 源 ， 越 来 越 受 到 各 国 学 者 的 关 注 。 人 脐 带 血 已 （ ＨＵＣ ） Ｂ 是胎 儿 出 生 时脐 带 内及胎 盘 近胎 儿 一侧 血 管 内的血 液 ， 有 丰富 的干 细胞 和 祖 细胞 ， 含 主要 包含 造 血干细胞 和 ＭＳ ｓ Ｃ 。ＨＵＣ Ｂ优 势［ 在 于 ： １脐 血 】 ］ （） 从分娩后的胎盘 、 脐带残端收集 ， 其过程 比从骨髓或 胚 胎 获取干 细胞 简 单 。对 于新 生 儿 及 产妇 均 无任 何 痛 苦 和不 良作用 ， 于 接受 。（ ） 血受 胎 盘 屏 障 的 易 ２脐 保护 ， 其成 分被病 毒 、 细菌污 染 的几 率低 。（） 血免 ３脐 疫系统 的原始性 ， 降低 了移植 后受体 的排斥 反应。 （） 血 包 含 丰 富 的 ＭＳ ｓ 仅 可 用 于 造 血 系 统 疾 ４脐 Ｃ 不 病， 也可 用 于非造 血 系统 疾 病 的 治疗 。（） 血 中含 ５脐 有 ＭＳ ｓ 为原 始 ， Ｃ更 具有 更 强 的分 化 能力 。（ ） 涉 ６不 及社会、 伦理及法律方面的诸多争论。（） ７ 收集 的脐 血不仅可做异基因移植的供体 ， 而且还可将之低温保 存数十年， 用于 自体移植治疗相关疾病 。（ ） ８ 随着世 界 各 国脐 血库 的建 立 完善 及 脐 血 体外 扩增 技 术 的成 熟， 为脐 血 的临床应 用奠定 了坚实 的基 础 。故 脐血 干 细胞 的作用越来越突出， 可作为一种新的替代细胞来 源用 于各 系统疾 病 的细胞移 植及基 因治疗 。 １ 人脐 带血 的 采集 选 择健 康足 月产 或 早 产妇 ， 儿 娩 出后 （ 胎 胎盘 仍 在宫 腔 内）在距 胎儿 ５ ｃ 的脐 带 处进 行 双结 扎 ， ， ￣７ｍ 剪断脐 带 ， 消毒母 侧 脐 带 断端 ， 刺 脐静 脉 抽 取脐 带 穿 血， 经抗凝剂抗凝 ，℃冰箱保存 ， ４ 并于 １ ２ｈ内进行分 离。 １ １ 不 同抗 凝 剂对获取 的单 个核 细胞 数 的影响 ． 国 内学 者孙海 梅 等［分 别 用 复方 枸 橼 酸 和肝 素 ２ ］ 钠 两种 抗凝 剂各采 集人 脐血 ６份 ， 复方枸橼 酸采 血体 积 ３ ￣ ８ ， 密 度梯 度离 心法 分 离新 鲜 脐 带 血 ， ０ ２ｍｌ经
多组学整合解析脐带间充质干细胞扩增后异质性介绍演示培训课件
扩增后的脐带间充质干细胞中，不同 亚群的迁移速率可能存在差异，影响 整体细胞迁移能力。
异质性导致侵袭性差异
异质性使得细胞在迁移过程中可能产 生不同的侵袭性，导致部分细胞具有 更强的侵袭能力，可能对周围组织产 生不良影响。
06
结论与展望
研究结论总结
脐带间充质干细胞扩增后存在异质性
通过多组学整合分析，我们发现脐带间充质干细胞在扩增过程中会出现明显的异质性，表 现为基因表达、蛋白质组学和代谢组学等多个层面的差异。
特性
具有自我更新、多向分化潜能和免疫调节等特性，可分化为多种组织细胞类型 ，如骨、软骨、脂肪和神经等。
脐带间充贴壁法、酶消化法或 流式细胞术等方法从脐带中分离 出间充质干细胞。
培养条件
在含有适当生长因子和细胞因子 的培养基中，进行原代培养和传 代培养，以获得足够数量的细胞 用于后续实验。
扩增是UC-MSCs应用于临床治疗的关键步骤，但扩增过程中细胞的异质性变化可能 影响其治疗效果和安全性。
因此，解析UC-MSCs扩增后的异质性变化，对于优化其扩增方法和提高临床应用效 果具有重要意义。
国内外研究现状及发展趋势
目前，国内外学者已采用基因组学、转录组学、蛋白 质组学和代谢组学等多组学方法对UC-MSCs的生物学
脐带间充质干细胞的应用前景
组织工程和再生医学
细胞治疗
用于构建组织工程化组织或器官，治疗各 种组织缺损和功能障碍。
通过移植脐带间充质干细胞或其分化产物 ，治疗多种疾病，如血液系统疾病、神经 系统疾病和自身免疫性疾病等。
药物筛选和基因治疗
生物医学研究
作为药物筛选的模型或基因治疗的靶细胞 ，用于研究新药或基因治疗策略。
代谢产物的变化与基因表达的改变存在关联，一些代谢产物可能作为信号分子参与基因表达的调控，从 而影响细胞的生物学特性。
异质性导致侵袭性差异
异质性使得细胞在迁移过程中可能产 生不同的侵袭性，导致部分细胞具有 更强的侵袭能力，可能对周围组织产 生不良影响。
06
结论与展望
研究结论总结
脐带间充质干细胞扩增后存在异质性
通过多组学整合分析，我们发现脐带间充质干细胞在扩增过程中会出现明显的异质性，表 现为基因表达、蛋白质组学和代谢组学等多个层面的差异。
特性
具有自我更新、多向分化潜能和免疫调节等特性，可分化为多种组织细胞类型 ，如骨、软骨、脂肪和神经等。
脐带间充贴壁法、酶消化法或 流式细胞术等方法从脐带中分离 出间充质干细胞。
培养条件
在含有适当生长因子和细胞因子 的培养基中，进行原代培养和传 代培养，以获得足够数量的细胞 用于后续实验。
扩增是UC-MSCs应用于临床治疗的关键步骤，但扩增过程中细胞的异质性变化可能 影响其治疗效果和安全性。
因此，解析UC-MSCs扩增后的异质性变化，对于优化其扩增方法和提高临床应用效 果具有重要意义。
国内外研究现状及发展趋势
目前，国内外学者已采用基因组学、转录组学、蛋白 质组学和代谢组学等多组学方法对UC-MSCs的生物学
脐带间充质干细胞的应用前景
组织工程和再生医学
细胞治疗
用于构建组织工程化组织或器官，治疗各 种组织缺损和功能障碍。
通过移植脐带间充质干细胞或其分化产物 ，治疗多种疾病，如血液系统疾病、神经 系统疾病和自身免疫性疾病等。
药物筛选和基因治疗
生物医学研究
作为药物筛选的模型或基因治疗的靶细胞 ，用于研究新药或基因治疗策略。
代谢产物的变化与基因表达的改变存在关联，一些代谢产物可能作为信号分子参与基因表达的调控，从 而影响细胞的生物学特性。
脐带间充质干细胞的研究进展
更短 ，具有更强 的扩增 能力 ，７代后 可扩增 ３００倍 ；Ｌｕｎｄ 等 ” 的研究 认 为 一 条 人 脐 带 共 可 扩 增 到 １０ 个 细胞 ；ＵＣ．
中华 临 床 医师 杂 志 （电子 版 ）２０１２年 ３月 第 ６卷 第 ６期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｒｃｈ １５，２０１２，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．６
脐带包含丰富 的干细胞 ，每条脐 带的 ＭＳＣｓ的数 目４×１０ ， 密度为 （１Ｏ～１５）×１０ ／ｃｍ Ｊ，而每份脐血 中的数 目是 （１—５）× １０ ，骨髓 中的 数 目是 每 １０ 单 个 核 细 胞 中含 有 １—１０个
Ｍ ＳＣｓ［５２－５４］ 。
三 、ＵＣ—ＭＳＣｓ的生物学特性 由于脐带基质细胞的结构特征和主要功 能与成纤维细胞 相 似 ，早期认 为这 些细胞 是 “特殊 的成 纤维细胞 ”。 以后 进一步 的 研究 示 ，这些 细胞 既不是成纤维 细胞 也不是平 滑肌细胞 ，而是 肌纤维母细胞 ，在超 微结 构上具 有平滑 肌细胞 和成纤 维细胞 的 特 点 ，表达收缩蛋 白如肌动蛋 白 、非 肌球蛋 白、索蛋 白和 ｄ－平 滑 肌肌动蛋 白 （肌纤 维母 细 胞 的标 志 ）［２ｏ，３５，３９］，而肌 球 蛋 白不 表 达 。另外这 些细胞还表达 波形蛋 白 ，这种 中间丝 蛋 白 表达于间充质来源 的细胞 如成纤 维细胞 ，而不表达 于平滑 肌细 胞 。共表达波形蛋 白和索蛋 白提示这些 细胞 本质上是肌纤 维母 细 胞 。
时间从 ３０ ｍｉｎ＿４ 至 １６ ｈ＿舶 不等 ，取决于消化液 的剂量和组织块 的体 积。然后用孔径 ７０—１００ ｍ的滤 网过滤 以去除组织碎 片。 也可以不用酶 消化 ，而采用组织块培养法 。
中华 临 床 医师 杂 志 （电子 版 ）２０１２年 ３月 第 ６卷 第 ６期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｍａｒｃｈ １５，２０１２，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．６
脐带包含丰富 的干细胞 ，每条脐 带的 ＭＳＣｓ的数 目４×１０ ， 密度为 （１Ｏ～１５）×１０ ／ｃｍ Ｊ，而每份脐血 中的数 目是 （１—５）× １０ ，骨髓 中的 数 目是 每 １０ 单 个 核 细 胞 中含 有 １—１０个
Ｍ ＳＣｓ［５２－５４］ 。
三 、ＵＣ—ＭＳＣｓ的生物学特性 由于脐带基质细胞的结构特征和主要功 能与成纤维细胞 相 似 ，早期认 为这 些细胞 是 “特殊 的成 纤维细胞 ”。 以后 进一步 的 研究 示 ，这些 细胞 既不是成纤维 细胞 也不是平 滑肌细胞 ，而是 肌纤维母细胞 ，在超 微结 构上具 有平滑 肌细胞 和成纤 维细胞 的 特 点 ，表达收缩蛋 白如肌动蛋 白 、非 肌球蛋 白、索蛋 白和 ｄ－平 滑 肌肌动蛋 白 （肌纤 维母 细 胞 的标 志 ）［２ｏ，３５，３９］，而肌 球 蛋 白不 表 达 。另外这 些细胞还表达 波形蛋 白 ，这种 中间丝 蛋 白 表达于间充质来源 的细胞 如成纤 维细胞 ，而不表达 于平滑 肌细 胞 。共表达波形蛋 白和索蛋 白提示这些 细胞 本质上是肌纤 维母 细 胞 。
时间从 ３０ ｍｉｎ＿４ 至 １６ ｈ＿舶 不等 ，取决于消化液 的剂量和组织块 的体 积。然后用孔径 ７０—１００ ｍ的滤 网过滤 以去除组织碎 片。 也可以不用酶 消化 ，而采用组织块培养法 。
人脐血间充质干细胞体分离、培养及向脂肪细胞分化的实验研究
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摘 要 目的 ： 讨 脐血 间充质 干 细胞 （ Ｂ ＭＳ ｓ 探 ＵＣ — Ｃ ）的分 离培 养及 向脂 肪 细胞 的 分化 潜
能 。 法 ： 足 月儿脐 血 中获得 间充质 干 细胞 ， 外培 养传 代 ， 方 从 体 流式 细胞检 测 细胞 表 面及抗 原 细胞
周 期 ； １ Ｍ 地 塞 米 松 、 ０ ｇ ｍｌ１ 甲 基 一 一 丁 基 一 嘌 呤 （ＢＭＸ） ５ ｇ ｍｌ 坏 血 酸 的 予 Ｏ １ ０￣ ／ 一 ３异 黄 Ｉ 、 ０￣ ／ 抗
Ｄｅ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｒｃ Ｇｕａ ｇｘ ｐ ｒ ｍ ｎｔｏｆＰｅ ｉ ｔ ｉ ｓ， ｎ ｉＺｈｕ ｎｇ Ａｕｔ ｏｍｏ ｏ ｅ’ ｓ ｔ ｌ（ ｎｎ ｎｇ ５ ０ ） ａ ｏｎ ｕｓ Ｐｅ ｐｌ ｓ Ｈｏ ｐｉａ Ｎａ ｉ ３０ ２１
Ｄｅ ｇ Ｙｉ ｅ Ｔａ ａ ｌｎｇ ｎ ｎｙ ｏＹ ｎｉ Ａ ＢＳＴＲＡ ＣＴ Ｏｂｅ ｔｖ ｊｃｉｅ： Ｔ０ ｅ ｔｂ ｉｈ ｍｅ ｈ ｄ ｏ ｓ ｐ ｒ ｔ ｍｅｅ ｃ ｙ ｌ ｔｍ ｅｌ ｆＯＴ ｈｕ ｎ ｓａ ｌ ａ ｓ ｔ ｏ ｔ ｅ ａａ ｅ ｓ ｎ ｈ ｍａ ｓｅ ｃ ｌ ｒ １ ｍａ ｓ Ｉ
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摘 要 目的 ： 讨 脐血 间充质 干 细胞 （ Ｂ ＭＳ ｓ 探 ＵＣ — Ｃ ）的分 离培 养及 向脂 肪 细胞 的 分化 潜
能 。 法 ： 足 月儿脐 血 中获得 间充质 干 细胞 ， 外培 养传 代 ， 方 从 体 流式 细胞检 测 细胞 表 面及抗 原 细胞
周 期 ； １ Ｍ 地 塞 米 松 、 ０ ｇ ｍｌ１ 甲 基 一 一 丁 基 一 嘌 呤 （ＢＭＸ） ５ ｇ ｍｌ 坏 血 酸 的 予 Ｏ １ ０￣ ／ 一 ３异 黄 Ｉ 、 ０￣ ／ 抗
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脐血间充质干细胞体外培养的细胞学特性研究
【 要 】 目的 摘 研究 脐 血 间 充 质 干 细 胞 （ Ｃ 在 体 外 扩 增 的 细 胞 学 特 点 。 方 法 用 梯 度 离 心 和 贴 壁 培 养 法 ＭＳ ）
获取 脐 血 间充 质 干 细 胞 ， 体 外 进 行 传 代 和 培 养 ， 第 １ 、 ５代 和 第 １ 细 胞 ， 噻 唑 蓝 还 原 法 （ 在 取 代 第 Ｏ代 用 ＭＴＴ） 验 检 实 测 的 表 达 ， 流 酶联 免 疫 吸 附试 验 检 测 细 胞 因子 的 分 泌 情 况 ， 在 各 代 之 间 进 行 并 比较。结果 第 １ Ｏ代 ＭＳ 的分 泌 功 能 和 增 殖 活 性 有 所 下 降 。结 论 ＭＳ Ｃ Ｃ在 体 外 培 养 多 代 后 细 胞 特 性 会 发 生 变 化 ， ＭＳ 对 Ｃ进 行 研 究 应 该 在 细 胞 培 养 的 前 几 代 进 行 。
维普资讯
检验 医学与临床 ２ ０ ０ ７年 ７月第 ４卷第 ７期 Ｌ ｂＭｅ ｌ ，ｕ ａ ｄＣｉ ｊ ｌ ｎ
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６３ ３
脐 血 间 充质 干细 胞 体 外 培 养 的 细胞 学 特 性 研 究
李 丽 王 铉 ，
（ ． 东省 淄博 科技 职 业 学院微 生物 学教研 室 ２ ５ ０ ；． １山 ５ ０ ０ ２ 解放 军 ３ ７医院肿 瘤 中心 ） ０
ＤＭＥ 悬 浮 混 匀 ， 种 到 ５ 细 胞 培 养 瓶 ， 入 含 灭 活 的 Ｍ 接 ０ｍｌ 加
１ 胎 牛 血 清 的 低 糖 Ｄ Ｏ ＭＥ ， 整 细 胞 浓 度 为 ５ ０ ／ ， Ｍ 调 ×１ ｍｌ在 ３ ７℃ ， Ｃ 饱 和 湿 度 条 件 下 培 养 。 ２ ～ ４ ５ Ｏ２ ４ ８ｈ后 更 换 新 鲜 培 养 液 ， 除 未 贴 壁 细 胞 。 以 后 每 隔 ３ ４ｄ半 量 换 液 １次 。 去 ～ 待 细胞 生 长 至 ９ 融 合 时 ， ０ ２ 胰 蛋 白 酶 （ １ｍｍｏ／ Ｏ 用 ．５ 含 ｌＬ
获取 脐 血 间充 质 干 细 胞 ， 体 外 进 行 传 代 和 培 养 ， 第 １ 、 ５代 和 第 １ 细 胞 ， 噻 唑 蓝 还 原 法 （ 在 取 代 第 Ｏ代 用 ＭＴＴ） 验 检 实 测 的 表 达 ， 流 酶联 免 疫 吸 附试 验 检 测 细 胞 因子 的 分 泌 情 况 ， 在 各 代 之 间 进 行 并 比较。结果 第 １ Ｏ代 ＭＳ 的分 泌 功 能 和 增 殖 活 性 有 所 下 降 。结 论 ＭＳ Ｃ Ｃ在 体 外 培 养 多 代 后 细 胞 特 性 会 发 生 变 化 ， ＭＳ 对 Ｃ进 行 研 究 应 该 在 细 胞 培 养 的 前 几 代 进 行 。
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检验 医学与临床 ２ ０ ０ ７年 ７月第 ４卷第 ７期 Ｌ ｂＭｅ ｌ ，ｕ ａ ｄＣｉ ｊ ｌ ｎ
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脐 血 间 充质 干细 胞 体 外 培 养 的 细胞 学 特 性 研 究
李 丽 王 铉 ，
（ ． 东省 淄博 科技 职 业 学院微 生物 学教研 室 ２ ５ ０ ；． １山 ５ ０ ０ ２ 解放 军 ３ ７医院肿 瘤 中心 ） ０
ＤＭＥ 悬 浮 混 匀 ， 种 到 ５ 细 胞 培 养 瓶 ， 入 含 灭 活 的 Ｍ 接 ０ｍｌ 加
１ 胎 牛 血 清 的 低 糖 Ｄ Ｏ ＭＥ ， 整 细 胞 浓 度 为 ５ ０ ／ ， Ｍ 调 ×１ ｍｌ在 ３ ７℃ ， Ｃ 饱 和 湿 度 条 件 下 培 养 。 ２ ～ ４ ５ Ｏ２ ４ ８ｈ后 更 换 新 鲜 培 养 液 ， 除 未 贴 壁 细 胞 。 以 后 每 隔 ３ ４ｄ半 量 换 液 １次 。 去 ～ 待 细胞 生 长 至 ９ 融 合 时 ， ０ ２ 胰 蛋 白 酶 （ １ｍｍｏ／ Ｏ 用 ．５ 含 ｌＬ
脐血来源间充质干细胞的分化潜能
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细
＊
＿
陈明星★ 男 ， １ ９ ８ ３年 生 ， 江西省宜丰县人， ２ ０ １ ３年
，
宁波大学医学院毕 业， 硕
￣ － － － １ －
胞 成 分 ， 而 是 否 真 正 产 生 心 肌 细 胞 、 脂 肪 细 胞 却 存 在 相 当 大 的 争 议 ， 分 化 的 机 制 不 明 确 。
Ａ ｂｓｔ ｒ ａｃ ｔ
ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：Ｕｍｂｉ ｌ ｉ ｃ ａＩ ｃ ｏｒ ｄ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ－ ｄ ｅｒ ｉ ｖ ｅｄ ｍ ｅｓ ｅｎ ｃｈ ｙ ｍａ Ｉ ｓ ｔ ｅｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａｒ ｅ ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｏｔ ｅｎ ｔ ｉ ａｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ
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Ｃ Ｃ 。分阶段诱导 ６ 后 ， Ｄ Ｄ 周 细胞形态呈 多角形 ， 并检测到肝细胞表面标志物 白蛋白 、 Ｆ Ａ Ｐ和 Ｃ 一９ Ｋ １ 。结论 新
生 儿脐血中可分离 出 ＭＳ ｓ并可在体外进行培养扩增 ， Ｃ， 分阶段诱 导可分化 为类 肝细胞 。
关 键 词 ： 血 ； 充 质 干 细 胞 ； 肝 细 胞 ； 化 脐 问 类 分
Ａ ｓ ａｔ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｎｅｔａ ｈ ｅｓ ｉｔ ｏ ｕ ａ ｍ ｉｃｌｃｒ ｌ ｄ ｍ ｓｎｈ ｍ ｌｅ ｅｓ （ Ｃ — ｂｔ ｃ ： ｊｃ ｖ ｏｉｖｓｇｔ ｔｅｆａｉ ｌｙ ｆｈ ｍ ｎ ｕ ｂｌ ａ ｏｄ ｂ ｏ ｅｅ ｃｙ ａ ｔ ｃｌ Ｕ Ｂ ｒ ｉ ｉ ｅ ｂ ｉ ｉ ｏ ｓｍ ｌ
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ｍｅｓ ｃｈ ｅｎ ｙｍａｌ ｔ ｅｍ ｌ ｎ ｏ ｆ ｃ ｉ ａｌｈｅ ｔ ｙ ｅ—ｉｅ ｃ ｌ ｎ ｖｉ ｏ ｓ ｃｅｌ ｌｔ ｕｎ ｔ ｓ ｏｎ ｐａ ｏｃ ｐｔ ｌ ｅｌ ｉ ｔ ｋ ｓ ｒ
Ｈ Ｎ Ｃ ｉ ｉｇ ，Ｉ ｉ ｏｇ，Ａ ｅ，Ｅ ｉ — ａ ， Ｕ ｉ－ｉ ， １ Ａ ｕ－ ｎ ＬＵ Ｊ— ｎ Ｇ Ｏ ＬｉＰ Ｉ ｎ ｓ ｈ Ｓ Ｎ Ｘ ｎｘｎ Ⅳ ｐ ｙ Ｑ ｇｈ
化 。 倒 置 相 差 显 微 镜 观 察细 胞 形 态变 化 ， 诱 导后 ４周 和 ６周 的 细胞 分 别 采 用 Ｒ －Ｃ 取 ＴＰ Ｒ法 检 测 Ａ Ｂ Ａ Ｐ和 Ｃ 一９ Ｌ 、Ｆ Ｋ １ 基因 ｍ Ｎ Ｒ Ａ水 平 ， 析 类 肝 细 胞 诱 导 表 达 情 况 。结 果 分 按 １ ｍ 接 种 ， 含 １ ％ Ｆ Ｓ的 Ｄ Ｅ ／ １ ０／ ｌ 用 ５ Ｂ Ｍ Ｍ Ｆ ２培养 基 培养 可 成 功 获 取 Ｕ Ｃ ＭＳ ｓ Ｂ — Ｃ 。细 胞 呈 长 梭 形 ， 胞 表 面 抗 原 测 定 显 示 强 烈 表 达 Ｃ 、 Ｄ 而 不 表 达 造 血 细 胞 的 标 志 物 细 Ｄ Ｃ ，
一ｕ ） ，
（ ｒｖ ｅ ｌ ｏ ｉ ｌ ｆ ｌ ｔ ｈ ｎ ｏｇ Ｕ ｉ ｒ ｔ， ｉａ ５ ０ ， ． ． ｈｎ ） １Ｐ ｏｉ ｉ ｓ ｔ ｆ ｉ ｅ ｔ Ｓ ａ ｄ ｎ ｎ ｅ ｉ Ｊｎ ｎ２ ０ ２ Ｐ Ｒ Ｃ ｉａ ｎ ａ Ｈ ｐａＡ ａｄ ｏ ｉ ｖ ｓｙ １
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Ｍ ＳＣｓ１ ｎ ｕｃ ｄ ｉ ｔ ｕ ｔｏ ｌ ｈ ｐ ｔ ｅ ｐｔ—ｉ ｅｌ ｎ ｉｒ ．Ｍ ｅ ｈｏ ＦＬ —ｅｍ ＵＣＢ— ＳＣｓ ｓ ｍｐ ｅ ｗｅ ｅ ｂ ａｎ ｄ ｎ ｉ ｄ ｅ ｎｏ ｆ ｎｃｉｎａ ｅ ａ ｏ ｙ ｅ ｌｋｅ ｃ ｌｓ ｉ ｖｔｏ ｔ ｄｓ ｍ ｔｒ Ｍ ａ ｌｓ ｒ ｏ ｔ ｉｅ ｉ ｓｅ ｉｅ ｃ ｎ ｔｏ ｎｄ ｉｏａｔｄ ｂｙ ｄ ｎ ｉｙ ｇ ａ ｅ ｔｃ ｎ ｒｆ ａｉｎ ａ ｄ ｄｒ ｃｌ ｄｈ ｒ ｎ ｅ ｇ ｏ ｈ，ｈ ｒ ｕｔ ｒ ｄ ｉ ｉｒ ． ｔｒｌ ｏ ｄｉ ｎ ａ ｓ ｌ ｅ ｅ ｓｔ ｒｄｉｎ ｅ ｔ ｕｇ ｔ ｎ ｉｅ ｔｙ ａ ｅ ｅ ｃ ｗｔ ｔｅｎ ｗｅｅ ｃ ｌｕ ｅ ｎ ｖ ｔｏ ｉ ｉ ｏ ｒ Ａｆｅ ｈｅｆ ｕ ｔ ａ ｓ ｇｅｏ ｔｒｔ ０ ｒｈ ｐ ｓ ａ ｆＵＣＢ— Ｓ Ｍ Ｃｓ， ｕ ￣ ｃ ｎ ｉｅ ｓｗｅｅ ｄ ｔｃ ｅ ｔ ｏ ｃ ｔ ｍｅｒ ｓ Ｙａ ｅ ａ ｔｇ ｎ ｒ ｅ ｅ ｔ ｄ ｗｉｈ ｆ ｗ ｙ ｏ ｔｙ，ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｎｄ ｃ ｄ ｉ ｔ ｕ ｃ ｌ ｎ ｈ ｎ ｗｅ ｅ ｉ ｕ ｅ ｎ ｏｆ ｎ —
山东 医药 ２ １ ０ ０年第 ５ ０卷 第 ７期
脐 血 间充 质 干 细胞 的体 外 扩 增及 向类 肝 细 胞 分 化 的实 验 研究
韩 翠萍 刘 吉勇 ｈ 。 ， 高 蕾 裴 庆 山 孙 欣欣 文婷 玉 ， ， ，
（ １山 东大学 附属 省 立 医院 ， 南 ２ ０ ２ ； 济 ５ ０ １２深圳 市 宝安 区人 民医院 ）
摘要 ： 目的
探讨人脐带血 问充质干细胞 （ Ｂ ． Ｃ ） Ｕ ＣＭＳ ｓ 向类肝 细胞定 向分化 的可能性 。方法
无 菌条件 下Leabharlann 集 新生儿脐带血 ７ ５份 ， 采用密度梯度离心法与直接贴壁法相结合分离 Ｕ ＣＭＳ ｓ体外培养传代 ， Ｂ— Ｃ， 获得第 ４代集落 生长细胞作流式细胞仪 表面抗原 测定 ， 并应用 ａＦ Ｆ ｂＦ Ｆ Ｈ Ｆ Ｏ Ｍ 等多 种成分 ， 阶段 向肝 细胞定 向诱 导分 —Ｇ 、—Ｇ 、 Ｇ 、 Ｓ 分
中图分类号 ：８３１ Ｑ １ ． 文 献 标 志 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ —６ Ｘ（０ ０ ０ － ０ －３ １ ２２６ ２ １ ）７０ ３ ０ ０ ０
Ｅ ｐ ｒ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｔ ｄ ｎ ｔ ｅ ａ ｍｅ ｔ Ｉ ｕ ｙ ｏ ｈ ｍｐ ｉｃ ｔ ｎ ａ ｄ ｄｆ ｒ ｎ ｉ ｔ ｎ ｏ ｕ ｓ ｌｉ ａ ｉ ｎ ｉｅ ｅ ｔ ｉ ｆｈ ｍａ ｍｂ ｌ ａ ｃ ｒ ｌｏ ｆ ｏ ａｏ ｎｕ ｉ Ｉ ｏ ｄ ｂｏ ｄ ｉ ｃ