菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶分离方法(精)
• 工艺流程如图 所示。超滤法生产工艺和操作比较 复杂，且设备一次性投资大。超滤浓缩后的浓缩 液若再用高岭土吸附法或者单宁沉淀法提取，可 大大节约其他辅助原料的用量，总生产成本减少， 且产品质量好，纯度高，酶活力高，酶活总回收 率高，经济效益明显比传统工艺好。超滤浓缩后 的浓缩液用有机溶剂沉淀法提取精酶，由于需要 低温使生产成本上升，但产品质量、纯度、酶活 都优于前者，是菠萝蛋白酶升级换代的新工艺。
菠萝蛋白酶制备方法及比较
工业生产上对菠萝蛋白酶的制备主要是从菠萝的 下脚料中提取，制备工艺有高岭土吸附法、单宁 沉淀法、盐析法和超滤法等。
• 比较:高岭土吸附法获得的菠萝蛋白酶虽然纯度较高， 酶活力在410×10 U／g以上，但工艺流程长，原料消 耗多，酶活总回收率低，会对环境有污染； • 单宁沉淀法比高岭土法简单，原料消耗少，酶活回收 率较低，产品酶活力在315×10 －410×10 U／g，会 对环境造成污染； • 盐析法获得的菠萝蛋白酶活性较低，纯度与药用要求 相差甚远
• 超滤法能有效分离提取菠萝蛋白酶。从超滤法提 取菠萝蛋白酶的工艺流程上看，其操作步骤简单， 并且该法具有无相变、低温、能耗少、活力损失 小、操作简单等特点，应用于菠萝蛋白酶的浓缩 和分离，不仅能保护其活性，降低生产成本，使 用的有机溶剂可回收再生产，基本上没有废物排 放，而且超滤透过液还可用作饮料添加剂，可以 达到清洁生产的要求；另外，超滤法分离得到的 菠萝蛋白酶质量好，纯度高，能达到医药级水平。
菠萝蛋白酶的提取：称取1 kg制备好的鲜果 皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r ／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。上 清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁， 分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、 0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。虹吸除去上清 废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r ／min。离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复 合物。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人 烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将 1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以
菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶的应用
三、菠萝蛋白酶的应用前景
菠萝蛋白酶的应用已有很长的历史,其安全性已受 到时间的考验,对当前危害人类健康的疾病,如心血管疾 病、癌症等,菠萝蛋白酶已表现出其应用潜力。值得一 提的是,菠萝蛋白酶制品大多数是各种成分的混合物,而 且,其组成会因不同的品种、产地及提取方法而产生一 定的差异,因此,有必要进一步确定真正起作用的具体成 份,选择适当的提取工艺,得到专一性更强的药物。此 外,菠萝蛋白酶作为生物活性物质,易受有关因素的影响 而失活,如何在生产、储存、运输中保存所需酶的活 性,如何提高菠萝蛋白酶的生物利用度,这些都是需要进 一步研究的课题。
菠萝蛋白酶的应用
一些含菠萝蛋白酶的药物
菠萝蛋白酶的应用
二、菠萝蛋白酶在食品领域的应用
在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂, 能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等, 可用于肉质嫩化、 水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。菠萝蛋白酶对 含酪氨酸较多的蛋白质有很强的水解能力, 用于牛肉 加工中的嫩化过程, 抑制血小板聚集,加速纤维蛋白原的分解 菠萝蛋白酶能抑制血小板聚集引起的心脏病发 作和中风,缓解心绞痛症状,缓和动脉收缩,加速纤维 蛋白原的分解。因此,它作为蛋白水解酶对心血管疾 病的防治也是有益的。Metzig等(1999)研究结果表 明,菠萝蛋白酶在体外可以减少人体血小板聚集,减 少血小板在牛内皮细胞的吸附和大鼠体内血栓的形 成。这些结果解释了临床上使用菠萝蛋白酶治疗血 栓及相关疾病的效果。
菠萝蛋白酶常见的工业提取方法
3.超滤法浓缩有机溶剂提取 工艺流程：
菠萝蛋白酶常见的工业提取方法
超滤法浓缩有机溶剂提取生产工艺和操作比上述 两种方法复杂,超滤膜的使用、清洗、保护操作技术 含量高,对工人素质要求高;设备一次性投资大, 生产 成本上升。但超滤透过液可作饮料添加剂,有机溶剂 可回收再生产,基本上没有废物排放,可以达到清洁生 产的要求;加上酶质量好、纯度高、回收率高、产品 酶活力高,达到医药级,综合经济效益分析与高岭土吸 附法相当,但酶质量远优于后者。
菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶
三、菠萝酶和木瓜酶的市场现状
木瓜蛋白酶的生产和销售相对来说有较长的历史和较多 的经验，而菠萝蛋白酶的生产则起步较晚，两者都有很 大的发展空间。
国内酶应用水平低，销售的大部分是粗制酶，精制 酶大部分销往国外，国外市场潜力较大。
该类企业存在的问题 ➢ 规模较小，资金有限 ➢ 生产企业精品意识差，核心竞争力低 ➢ 国际市场劲敌多，如印度、泰国，其蛋白酶产量大
，品质好，品牌较响，市场份额大。
四、国内产业分布与发展情况
• 木瓜和菠萝在我国主要分布于广东、海南、广西、云南与 福建等热带省区，而木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的厂家主要 集中在广东和广西。
• 但超滤法浓缩有机溶剂提取生产工艺和操作比上述两种方 法复杂
• 因此，建议：若超滤浓缩液不用有机溶剂提取工艺, 而采 用高岭土法或单宁法提取, 可大大节约其他辅助原料, 总生 产成本减少, 且产品酶活力提高, 酶活总回收率也有所提高 ; 对环境造成污染程度减小，经济效益明显比传统工艺好 。
菠萝蛋白酶的提取新工艺
广西 集中于南宁地区，生产经验较为丰富，销售渠道较为成熟 资源优势使其成为全国产量最大的地区，约占60%市场份额
广东
蛋白酶工厂起步较晚，发展却比较迅速，主要集中在徐闻和 广州。 徐闻菠萝产量大，但经济不发达，主要生产粗酶 广州酶工厂设立于郊区，交通便利，经济发达，销售渠道广
五、工厂发展方向
一、增加技术投资和设备投资，提高酶的纯化技术和固定 化、微胶囊化技术，以高质量的酶产品占领市场先机。
• [2]王平诸 孙君社 李魁. 菠萝蛋白酶三种生产工艺的比较 [J].河南化工， 2002(7)：1-3
菠萝蛋白酶
四、前景
菠萝蛋白酶的应用已有很长的历史，随着 提取纯化技术的进步，它将有更广泛的应用。 我国菠萝资源丰富，年产菠萝100万吨以上， 每年都有大量的菠萝皮、茎被浪费掉。同时， 我同对菠萝蛋白酶的需求量逐年增多，特别是 高活性的菠萝蛋白酶。因而，对菠萝蛋白酶分 离纯化技术进行深入研究，提取高质量的菠萝 蛋白酶具有重要的实用价值。
三、菠萝蛋白酶在食品加工中的 应用
肉类：菠萝蛋白酶将肉类蛋白质的大 分子蛋白质水解为易吸收的小分子氨 基酸和蛋白质，令肌肉肌丝和筋腰丝 断裂，使肉类变得嫩滑，使人体食用 后易于消化吸收,可广泛地应用于肉制 品的精加工。
酸豆乳:利用菠萝蛋白酶的蛋白水解活 性，将豆乳中的蛋白质部分水解成为 功能性多肽，再添加发酵剂制成酸豆 乳。顾仁勇等采用正交实验法，以蛋 白质水解度为评价指标，确定最佳酶 解条件为：菠萝汁用量15％；pH=7.0； 温度45℃；时间70min。
2.菠萝蛋白酶的理化性质
菠萝蛋白酶的分子量为30000～33000，酶液 的最大吸收波长为280nm，0.051%浓度的酶液 在280nm的光吸收值达0.984%。分子中有4个 N-乙酰化的氨基己糖，含糖 2.1%，分子中含 有285个氨基酸残基，含氮量为15.88%。 一般认为，菠萝蛋白酶无毒、无副作用，少 数人会对菠萝蛋白酶起过敏反应及轻微的肠胃 反应。
溶解：将粗酶放入溶解罐中，加入10倍水。用 NaOH溶液调pH值至7.0～7.5，搅拌使其溶解， 过滤除杂，收集滤液。 沉淀、干燥：在搅拌下用1:3的盐酸凋节上述 滤液的pH值至4.0，静置1小时使酶析出，用离 心机分离出沉淀物，冷冻真空干燥或减压干燥 即得菠萝蛋白酶精品。
2、单宁沉淀法
菠萝蛋白酶氨基酸结构
菠萝蛋白酶氨基酸结构菠萝蛋白酶是一种存在于菠萝中的酶类物质，它在菠萝成熟过程中起到了重要的作用。
本文将详细介绍菠萝蛋白酶的氨基酸结构以及其在生物学中的功能。
1. 菠萝蛋白酶简介菠萝蛋白酶是一种被称为“溶解肉”的天然酶，主要存在于未成熟的菠萝果实中。
它属于一类特殊的酵素，被广泛应用于食品加工和医药领域。
菠萝蛋白酶能够降解蛋白质，使其分子链断裂，从而改变其结构和性质。
2. 菠萝蛋白酶的氨基酸组成菠萝蛋白酶的氨基酸序列决定了其三维结构和功能。
根据已知的研究结果，菠萝蛋白酶主要由以下几种氨基酸组成：•天冬氨酸（Aspartic acid，简称Asp，D）：在菠萝蛋白酶的氨基酸序列中，天冬氨酸是较为重要的成分之一。
它参与了菠萝蛋白酶的催化反应过程，发挥了关键作用。
•谷氨酰胺（Glutamine，简称Gln，Q）：谷氨酰胺在菠萝蛋白酶中占据了重要位置。
它参与了菠萝蛋白酶的结构稳定性和功能活性调节。
•丙氨酸（Alanine，简称Ala，A）、甘氨酸（Glycine，简称Gly，G）、丝氨酸（Serine，简称Ser，S）等：这些氨基酸在菠萝蛋白酶中也起到了重要的作用。
它们参与了菠萝蛋白酶的结构组装和稳定性维持。
3. 菠萝蛋白酶的结构菠萝蛋白酶具有复杂的三维结构，在生物学中被归类为一种“异肽水解酶”。
根据已有研究结果，在菠萝蛋白酶的结构中，存在着两个相同的催化中心，分别位于酶分子的两端。
菠萝蛋白酶的结构主要由α-螺旋和β-折叠构成。
这些结构单元通过氢键、离子键和疏水作用力等相互作用力维持在一起。
菠萝蛋白酶的结构稳定性和功能活性受到氨基酸序列的调控。
4. 菠萝蛋白酶的功能菠萝蛋白酶在生物学中具有重要的功能。
它主要通过降解蛋白质来改变其结构和性质。
菠萝蛋白酶可以将复杂的蛋白质分子链断裂成简单的肽段或氨基酸，从而增加了食品消化和吸收的效率。
此外，菠萝蛋白酶还具有抗炎、抗肿瘤、降血压等生物活性。
它可以促进血液循环，改善人体免疫系统功能，并对某些疾病具有一定程度上的治疗作用。
菠萝蛋白酶的含量测定
药量。据推断, 对于抗癌药物, 也有类似的作用。此外，菠萝蛋白酶能促
进营养物质的吸收。 三、菠萝蛋白酶在美容化妆品业中的应用 菠萝蛋白酶具有嫩肤、美白去斑的优异功效。 基本作用原理：菠萝蛋白酶可作用于人体皮肤上的老化角质层，促使其 退化、分解、去除，促进皮肤新陈代谢，减少因日晒引起的皮肤色深现 象。使皮肤保养呈现良好白嫩状态。
含量的测定 0.1M的牛血清蛋白
浓度mg/ml
标准蛋白（ml） 磷酸缓冲液（ml） 考马斯亮蓝（ml） 测A595
0 0.002 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02
待测液
1
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1 4
0.9 4
0.8 4
0.6 4
0.4 4
0.2 4
0 4
0 4
实验结果记录
菠萝蛋白酶的来源与应用 菠萝蛋白酶主要来自于菠萝的茎叶皮儿。 菠萝蛋白酶的应用： 一、菠萝蛋白酶在食品加工业的应用 1、焙烤食品：将菠萝蛋白酶加入生面团中，可使面筋降解，生面团 被软化后易于加工。并能提高饼干与面包的口感与品质。
2、干酪：用于干酪素的凝结。
3、肉类的嫩化：菠萝蛋白酶将肉类蛋白质的大分子蛋白质水解为易 吸收的小分子氨基酸和蛋白质。可广泛地应用于肉制品的精加工。 4、菠萝蛋白酶在其它食品加工业中的应用，有人已经用菠萝蛋白酶 来增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品及 含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。其它还有生产脱水豆类、婴儿食品 和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给
0.6
0.4
0.2
0
0
考马斯亮蓝（ml） 4
菠萝蛋白酶结构
菠萝蛋白酶结构
【实用版】
目录
1.菠萝蛋白酶的概述
2.菠萝蛋白酶的结构
3.菠萝蛋白酶的应用领域
4.菠萝蛋白酶的使用方法
5.菠萝蛋白酶的安全性和注意事项
正文
菠萝蛋白酶是一种从菠萝植物中提取的蛋白质水解酶，其分子量为33000，等电点为 9.55。
这种酶广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中，并最早在 1957 年作为一种治疗性成分被发现。
菠萝蛋白酶不仅具有蛋白水解酶系，还含有磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其它糖苷酶及非蛋白物质。
菠萝蛋白酶的结构是由分子质量 33000 酪素、血红蛋白、baee 的最佳 ph 值为 68，而明胶则为 50。
重金属可以抑制酶的活性。
在水中稍溶，在乙醇，丙酮，氯仿和乙醚中不溶。
其在碱基或芳香族氨基酸的羧基侧优先水解肽链，选择性水解纤维蛋白，可分解肌纤维，但对纤维蛋白原不敏感。
菠萝蛋白酶的应用领域包括啤酒澄清、药效助消化、消炎消肿等。
在食品、医药及生物等行业都有广泛的应用。
使用方法为将菠萝蛋白酶添加到需要澄清的啤酒中，酶解蛋白质，使啤酒澄清。
对于助消化方面，菠萝蛋白酶可在胃里分解蛋白质，帮助人体对蛋白质食物的消化和吸收。
对于消炎消肿方面，菠萝蛋白酶可以抑制炎症反应，缓解肿胀。
使用菠萝蛋白酶时需要注意其安全性。
虽然菠萝蛋白酶是一种天然的、
无毒、无副作用的酶，但是在使用时仍需注意其用量，过量使用可能会引起不适。
菠萝蛋白酶
酶和微生物制剂
01 化合物简介
03 安全信息 05 药典标准
目录
02 生产方法 04 应用 06 化合物相关药品说明
菠萝蛋白酶又称菠萝酶。由菠萝汁、皮等提取的巯基蛋白酶。浅黄色无定形粉末，微有特异臭。分子量。对 酪蛋白、血红蛋白、BAEE的最适pH值是6～8，对明胶是pH值5.0。酶活性受重金属抑制。略溶于水，不溶于乙醇、 丙酮、氯仿和乙醚。它优先水解碱性氨基酸(例如精氨酸)或芳香族氨基酸(例如苯丙氨酸、酪氨酸)的羧基侧上的 肽链，选择性水解纤维蛋白，可分解肌纤维，而对纤维蛋白原作用微弱。可用于啤酒澄清、药用助消化和抗炎消 肿。
精密量取供试品溶液1.0ml，置具塞试管(15mm×130mm)中，于(37±0.5)℃水浴预热5分钟，精密加入 (37±0.5)℃预热的底物溶液(取硅胶干燥器中干燥至恒重的酪蛋白0.6g，精密称定，置烧杯中，加0.05mol/L磷 酸氢二钠溶液80ml，水浴中加热溶解，放冷，用1mol/L盐酸调节pH值至7.0，转移到100ml量瓶中，加水至刻度， 临用新配)5.0ml，立即振摇，置(37±0.5)℃水浴中准确反应10分钟后，加三氯醋酸溶液(取三氯醋酸1.8g，无 水醋酸钠2.99g，冰醋酸液1.9ml，加水使溶解并稀释至100ml)5.0ml，振摇，于(37±0.5)℃水浴中准确放置40 分钟，用干燥滤纸滤过，取续滤液，在2小时内，照分光光度法(中国药典2015年版二部附录Ⅳ A)，以水为空白， 在275nm的波长处测定吸收度A，再精密量取供试品溶液1.0ml，加上述三氯醋酸溶液5.0ml，振摇，精密加入底物 溶液5.0ml，同法操作，测定吸收度A。
化合物简介
基本信息 物化性质
毒性 化学性质
中文名称:菠萝蛋白酶 中文别名：菠萝蛋白酶;菠萝酶;菠罗蛋白酶;菠萝蛋白酶 20万单位;BROME LAINE菠萝蛋白酶 英文名称: Bromelain 英文别名： STEM BROMELAIN;3.4.22.32;BROMELAIN;BROMELAIN PINEAPPLE;BROMELIN;EC 3.4.22.1;EC 3.4.22.32;EC 3.4.22.4 CAS号: 9001-00-7 分子量:约 EINECS号:253-387-5
菠萝中提取蛋白酶
分离纯化第二组
背景知识 菠萝蛋白酶是从菠萝皮和菠萝肉中提取到的一 种蛋白酶，菠萝蛋白酶的生产可解决菠萝产业 中大量废料被丢弃造成的环境污染和资源浪费 问题，还可使菠萝产品高值化利用。由于菠萝 蛋白酶对环境条件的敏感性，在其生产过程中 活 性 易 失 ， 使 得 生 产 效 率 降 低 。
实验所需材料与仪器
实验用菠萝采自超市,以7～9分成熟为标准 菠萝肉各部分分别经打碎、 榨汁、 纱布粗滤、 离 心(4 000 r/ min ,10 min) 后得澄清液,存放于冰箱中 备用 5%柠檬酸钠 维生素c 单宁 0.1%EDTA溶 液 1.5%氯化钠溶液 1%酪蛋白溶液 1mol/L氢氧化钠溶液 0.05mol/L磷酸缓冲液 （溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0） 激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含 15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA-2Na,现配现用） 榨汁机、离心机、分光光度计 、水浴锅
注意事项
菠萝蛋白酶易受热失活，应低温短时生产， 一般在0℃左右进行。 某些化学药品和金属离子易引起菠萝蛋白酶 失活，生产过程忌碱、忌强酸作用，勿与铁、 铜等重金属接触。 菠萝蛋白酶是一种胶体，生产过程中易产生 气泡造成损失，所以生产过程应注意操作。
THE END 谢谢欣赏！
7 1.0 0 0 4 0.582
8 0 1.0 0 4 0.140 （稀释5 倍）
磷酸缓冲液 1.0 考马斯亮蓝 吸光度A 0 4
以吸光度为纵坐标， 以吸光度为纵坐标，标准蛋白质量为横坐标作图
菠萝蛋白酶活力的测定
1 试管 号 2 3 4 5 1、取酶制品溶解于0.05mol/L磷酸 缓冲液（PH7.0)至10ml,离心得 上清液； 2、取5支试管，分别标号1、2、3、 4、5，各加1ml溶液酶和0.9m激 活剂； 3、另取5支试管，分别对应标号A、 B、C、D、E，各加1ml缓冲液和 0.9ml激活剂； 4、将10支试管置于37℃水浴； 5、然后按左表操作
菠萝中的菠萝蛋白酶
菠萝中的菠萝蛋白酶菠萝中的菠萝蛋白酶1、抑制血小板聚集；2、溶解纤维蛋白；3、消炎；4、抗肿瘤；5、调节细胞因子和免疫；6、对皮肤清创的特性；7、促进其它药物的吸收；8、溶解粘液；9、助消化；1、0促进伤口愈合；11、改善心血管循环系统。
菠萝蛋白酶口服易于吸收，有可靠的证据表明大剂量给药可以提高治疗效果。
虽然所有的相关机理还没有完全搞清楚，但菠萝蛋白酶已被证明是一种安全有效的药物。
在大鼠试验中，服用一定剂量的菠萝蛋白酶会降低血清纤维蛋白原水平，高浓度的菠萝蛋白酶维可明显延长凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血酶时间(APTT)。
一定剂量下的菠萝蛋白酶通过刺激ADP、肾上腺素、前列腺素前体，可加强抑制血小板聚集的作用。
在体内和体外，菠萝蛋白酶都是一种有效的纤维蛋白溶解剂在消炎试验中，菠萝蛋白酶和强的松有相似的消炎作用。
具有免疫刺激作用曾有专利认为菠萝蛋白酶的某一组分可用于治疗免疫系统受抑制的病症或作为疫苗佐剂。
菠萝蛋白酶具有免疫刺激作用，血液中丙种球蛋白缺乏症病人的吞噬细胞表现出对这种刺激特别敏感。
体内外的研究表明，通过对辅助细胞的刺激作用和对T细胞的直接抑制反应，菠萝蛋白酶可以增强和抑制T细胞的免疫反应。
抑制毒素分泌实验证明菠萝蛋白酶能降低毒素结合活性并能抑制热不稳定毒素、霍乱毒素及热稳定毒素的分泌效应。
用于烧伤脱痂菠萝蛋白酶能选择性地除去死皮，使新皮移植得以尽早进行。
动物实验证明，菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良影响。
局部使用抗生素不影响菠萝蛋白酶的效果。
用其制备的菠萝蛋白酶脱痂制剂治疗深2度和3度烧伤，可在3-4小时完成脱痂。
全过程无需麻醉，脱痂十分彻底，对于功能部位的烧伤治疗具有更重要的意义。
消炎作用菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿（包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤），能在体外激活鼠巨噬细胞和自然杀伤（NK）细胞。
因此，对于免疫缺失的个体，菠萝蛋白酶具有激活炎症反应的潜力。
菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶的性质：
综上所述，菠萝蛋白酶有一个较高的最适 的反应温度，较广的酶反应pH，一般金属 盐NaCl、kCl对酶的反应影响不大,MgCl、 CaCl在高浓度下对酶有一定程度的抑制作 用，在低浓度下影响不明显。
菠萝蛋白酶的提取方法：
1、高岭土吸附法
抑制血小板聚集 加速纤维蛋白原的分解：
对心血管疾病的防治：菠萝蛋白酶能抑制 血小板聚集引起的心脏病发作和中风，缓 解心绞痛症状，缓和动脉收缩，加速纤维 蛋白原的分解。
抑制毒素分泌作用：
试验结果证明，菠萝蛋白酶能降低毒素结 合活性并能抑制热不稳定毒素(LI)、霍乱毒 素(CT)及热稳定毒素(ST)的分泌效应。
预防和治疗动物腹泻：
仔猪大肠杆菌性腹泻是养猪场最常见的疾病 之一，而肠毒源性大肠杆是引起仔猪腹泻 的主要病菌之一。 菠萝蛋白酶防治仔猪腹泻可能通过以下几 个方面实现：(1) 抗炎作用；(2) 抑制细菌 毒素分泌作用；(3) 增加抗生素吸收作用； (4) 细胞因子和免疫Βιβλιοθήκη 节作用；(5)促进伤口 愈合作用。
菠萝蛋白酶的提取 及医药运用
主要内容
菠萝蛋白酶的简介 菠萝蛋白酶的性质
菠萝蛋白酶的提取方法
菠萝蛋白酶在医药中的应用 应用前景
简介
菠萝蛋酶:(Bromelain， 简称菠萝酶，亦称为凤 梨酶或凤梨酵素)是从 菠萝果茎、叶、皮提取 出来，经精制、提纯、 浓缩、酶固定化、冷冻 干燥而得到的一种纯天 然植物蛋白酶。
简介
于在1975年，发现菠萝蛋白酶可作为一种 治疗性成分。它的纯品是一种糖蛋白，其 糖分子结构有以下两种：
菠萝蛋白酶的性质是 什么呢？
1.温度的影响 菠萝蛋白酶有一个较高的最适反应温度, 介 于55～60℃, 温度再升高, 酶的热失活增强, 2.反应速度下降 pH的影响 菠萝蛋白酶的最适pH 在6.5～7.5, 在7. 1 附近 达到最大值。在酸性环境下酶反应速度直线下 3金属离子的影响 滑, 在碱性环境下则有一个较广的应用区间。 金属离子(如NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2 ) 对酶 当pH由5.6升到7.1时, 酶反应速度提高了14.6%， 反应均有影响。随着浓度的增加, NaCl、KCl对 酶较稳定的pH 在3.5～4.5, 在3.9附近效果最佳 酶反应影响不大,而MgCl2 和CaCl2 对酶有一定 (章佩芬等, 2003)。菠萝蛋白酶的最适pH为7.1。 程度的抑制作用。但是, 当盐浓度不超过0.001 N
菠萝里面有白点是怎么回事
菠萝里面有白点是怎么回事很多人在吃菠萝的时候吃着吃着会突然的发现菠萝上面有白色的点点，如果菠萝里面有白色点点的话很多人就会担心这个菠萝是坏掉了，所以说不敢吃，看到这个菠萝里面的白点就想将里面的白点及时的去掉，因为担心白点点对身体的伤害，菠萝上面的白点点其实是有原因的，那么下面让我们来看看菠萝里面有白点到底是怎么回事?菠萝中间有白点。
这个是菠萝蛋白酶。
菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。
其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000，等电点为9.55。
品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工，采用超滤方法进行过滤浓缩，低温冷冻干燥而得的。
产品已被广泛应用于食品、医药等行业。
可以食用。
菠萝蛋白酶是用于食品添加剂。
菠萝的作用菠萝全身药用价值丰富，菠萝皮中就富含一种菠萝酶，长期食用菠萝皮，可有效降低心脑血管疾病、糖尿病、高血压以及癌症等疾病的发病率。
菠萝味甘性温，具有解暑止渴、消食止泻的功效，可清热生津、利于小便，有着与西瓜一样的解渴功效，为夏季不可多得的时令水果之一。
菠萝富含丰富的维生素B，能有效促进肌肤亮丽滋润，有一定的美容功效，还可以减肥呢!除了上述功效，其还可以提高人体免疫力，抵抗病毒入侵。
菠萝具有消炎的作用，能促进血液循环及伤口愈合。
菠萝还能够减轻咳嗽的症状，对于因为感冒导致的喉咙疾病，有着明显的治疗效果。
菠萝里面如果有白点的话，那么首先不要担心，要考虑是这些正常的因素所引起的，菠萝里面有白点到底是为什么，上面我们已经给大家介绍得很详细了，如果发现菠萝里面有白点的话可以不将这个白点消除，白点也是可以吃的，很多菠萝过度成熟了都是会有白点的发生。
菠萝蛋白酶（菠萝酶）
菠萝蛋白酶（菠萝酶）菠萝蛋白酶编辑词条B 添加义项 ?菠萝蛋白酶是从菠萝水果皮、茎、芯等部分经生物技术制得的一种纯天然植物蛋白酶，其分子量为33000，等电点为9.55，属于疏基蛋白酶，其活动中心为疏基（-SH），能进行蛋白质水解等各种生化反应，菠萝蛋白酶是一种天然的、无毒无害，卫生安全的蛋白酶，它可广泛应用食品、医药及生物等行业。
目录1基本介绍2组成结构3理化性质4制备方法5价值应用6注意事项折叠编辑本段基本介绍菠萝蛋白酶(Bromelain），简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤111梨酵素。
是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。
其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000，等电点为9.55。
品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工，采用超滤方法进行过滤浓缩，低温冷冻干燥而得的。
产品已被广泛应用于食品、医药等行业。
折叠编辑本段组成结构菠萝蛋白酶是由多种不同分子量和分子结构的酶所组成的酶系，其中至少包含了5种蛋白水解酶。
除此之外，有的还含磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其它糖苷酶及非蛋白物质。
菠萝蛋白酶是一种糖蛋白，分子结构中含有一个寡糖分子，由木糖（xylose，xy1）、岩藻糖（fucose，Fuc）、甘露糖（mannose，Man）和N—乙酰葡糖胺（N—aceltylglu2cosamine，GlcNAc）组成，共价连接在肽链上，Ishihara和Yasuda等人分别推测出了糖分子的结构。
折叠编辑本段理化性质菠萝蛋白酶的分子量为30000－33000，等电点为9155，酶液的最大吸收波长为280nm。
因其由多种酶分子构成，故在催化底物上具有多样性。
它能分解蛋白质、肽、脂和酰胺，其水解蛋白的活性较木瓜蛋白酶高10倍以上。
菠萝蛋白酶催化的必需基团不是糖分子，而是所含肽链中的巯基；另外，菠萝蛋白酶分子结构中的羧基和羟基亦与酶活性无关。
菠萝蛋白酶的催化活性易受到pH、温度、金属离子、EDT A 及还原剂等的影响。
菠萝蛋白酶
我国菠萝资源丰富，年产菠萝100万吨以上， 仅有30%左右用于加工，大多是直接以水果出售， 每年都有大量的菠萝皮、茎被浪费掉，如能进行 综合利用，不仅可减少环境污染，而且还能生产 出高价值的产品，这将带来良好的社会效益和经 济效益。同时，我酶的市场价约为 800元/千克， 我国年需菠萝蛋白酶千吨以上，而国内生产量不 足 10%， 因此，菠萝蛋白酶的市场前景广阔，有 强劲的开发潜力。
工艺要求
1.原料的预处理 2. 果汁过滤 3.去除重金属离子 4.浓缩 5.层析 6.脱盐 7.干燥
生产工艺
物料计算
物料 菠萝渣 苯甲酸钠 EDTA-2Na 硫酸铵 每天 156.25t 0.03906t 0.03906t 0.459t 每年 31250t 7.8125t 7.8125t 91.8t
湛江经济技术开发区（简称湛江开发区）是 湛江经济技术开发区（ 简称湛江开发区） 1984年11月29日经国务院批准成立的全国 年 月 日经国务院批准成立的全国 首批14个沿海经济技术开发区之一 个沿海经济技术开发区之一， 首批 个沿海经济技术开发区之一，是实行 类似特区的优惠政策和新型管理体制的经济 技术功能区，是湛江市未来发展的中心区域。 技术功能区，是湛江市未来发展的中心区域。 湛江市具有独特的地缘区位优势： 湛江市具有独特的地缘区位优势：一是中国 沿海通往非洲、中东、欧洲、东南亚、 沿海通往非洲、中东、欧洲、东南亚、大洋 洲航程最短的口岸； 洲航程最短的口岸；二是中国大西南经济腹 地进出口的重要咽喉； 地进出口的重要咽喉；三是中国进军东盟各 国市场最佳的“桥头堡” 国市场最佳的“桥头堡”，也是东盟各国进 入中国大陆市场最佳的“登陆点” 入中国大陆市场最佳的“登陆点”。独特的 区位优势使湛江经济技术开发区在泛珠三角 经济合作圈、环北部湾经济圈、中国—东盟 经济合作圈、环北部湾经济圈、中国 东盟 自由贸易区、 自由贸易区、亚太经济圈中处于重要的战略 地位， 地位，成为中国大陆最适宜外来投资者投资 经营的地区之一。 经营的地区之一。
菠萝蛋白酶的制备及活性测定
菠萝蛋白酶的制备及活性测定背景菠萝蛋白酶(Bromelain)，别名菠萝酶，是存在于菠萝(Anana COmOSl2S)植株中的蛋白质水解酶，为浅黄色无定形粉末，微有异臭。
菠萝的果、茎、柄和叶片中都含有菠萝蛋白酶。
一般从菠萝果中提取的称为果菠萝蛋白酶，从菠萝皮、茎中提取的为茎菠萝蛋白酶。
八成熟的菠萝果汁含有约0．4％的菠萝蛋白酶，成熟的菠萝果汁含有O．3％左右的菠萝蛋白酶，茎汁含8．7％的菠萝蛋白酶(Murachi，et a1．，1964)。
1981年，Marcano首先发现菠萝汁中含有蛋白水解酶，随后Willstatter，Bergmann和Martin相继指出，菠萝蛋白酶存在于果、皮和茎部中，存在于茎部的称为茎酶(Stembromelain E．C．3．4．22．4)，存在于果汁中的酶称为果酶(Fruit bromelainE．C．3．4．22．5)。
Murachi和Neurath、E1．G harbawi和Whitaker采取层析法分离提取了菠萝蛋白酶并研究了它的活性成分。
结构特性研究表明，果菠萝蛋白酶是酸性酶，等电点为pH4．6，茎菠，约为33，000，等电点为pH9．5，其活性中心的氨基酸顺序和催化机理与木瓜蛋白酶相似，并确定茎菠萝蛋白酶为糖蛋白。
Ota S et aL研究指出，茎菠萝酶分子量为36000，末端氨基酸残基是丙氨酸，果酶分子量为30000，末端氨基酸残基也为丙氨酸，碳水化合物分析与Muraclli 的分析结果相似。
1988年，T．L．迈诺特等由十二烷基硫酸钠．聚丙烯胺凝胶电泳(SDS．PAGE)测定果菠萝蛋白酶分子量22200．25080，等电点3．8~4．8。
菠萝蛋白酶是各种酶的混合物，已知菠萝蛋白酶粗品中包含至少五种蛋白水解酶，也包含非蛋白水解酶，包括酸性磷酸酶和过氧化物酶，并含有淀粉酶和纤维素酶活性，还存在其他成分。
菠萝蛋白酶成分的复杂性，限制了其在生产中的应用，特别是医药领域对功能成分的要求上，因此对菠萝蛋白酶的成分和各成分的具体功能的分析研究具有重要意义。
食品酶学实验-菠萝蛋白酶重点讲义资料
食品酶学综合性实验实验1 菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定【目的和要求】1. 了解酶分离纯化的一般程序；2. 掌握硫酸铵沉淀法、透析法分离提取菠萝蛋白酶的基本原理和方法；3. 熟悉蛋白质含量测定、菠萝蛋白酶活力测定等实验原理和方法。
【实验原理】1.建立有效的酶纯化程序应考虑的原则（1）利用酶在分离纯化上最有利的特性；（2）尽早使用一种选择性好的方法；（3）选择交换能力高的层析技术作为第一步层析；（4）不要连续使用相同的纯化方法；（5）将各层析步骤连接起来，使前一步得到的样品适用于下一步层析；（6）在造成酶被稀释的步骤后来要用浓缩酶的方法；（7）要使每步过程的分辨能力呈递增趋势；（8）每步纯化过程后，通过量体积，酶活力和蛋白质浓度测定，监测纯化的进程。
2.菠萝蛋白酶简介菠萝蛋白酶（Bromelain，EC 3.4.22.3）简称菠萝酶，是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶。
在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。
在医药上它可以治疗水肿及多种炎症。
1891年Mercaro于菠萝的汁中首先发现。
菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。
菠萝蛋白酶的相对分子质量大约为33 000DW，等电点9.55，最适pH在7.1左右，在偏酸环境下酶活下降较快，碱性环境能延缓失活。
菠萝蛋白酶的温度的最稳定范围是55℃~65℃。
金属盐离子中NaCl、KCl对酶活的影响不是很大，维生素C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，，EDTA能通过螯合对酶活有影响的金属离子而保护菠萝蛋白酶，有机溶剂中甲醇、乙醇、乙二醇对酶活损失较大。
3.菠萝蛋白酶的粗分离（1）盐析分离盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一。
在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增加而升高，这种现象称为盐溶。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Folin-酚试剂 folin-酚试剂一般用于folin酚法，做蛋白质含量测定的一种显色
剂。 folin-酚试剂
一般原理：folin试剂中的磷钼酸-磷钨酸盐被蛋白质中的色氨酸 和酪氨酸 残基还原，发生显色反应：产生蓝色（钨兰+钼兰）。蓝色的浓重度与 蛋白质含量成正比。
配置：
试剂甲：
（A） 10克 Na2CO3，2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠 （KNaC4H4O6·4H2O）。溶解于500毫升蒸馏水中。
物理性质：
白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水，水溶液
无色至淡黄 色， 有时有乳白光，不溶于乙醇、氯
仿和乙醚。属糖蛋白。
主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。
尚有水解酰胺基键
和酯类的作用。
分子量：约33000，
等电点pH值：9.35
最适pH值：6～8
最适温度：55℃。
化学性质： 中文名称:菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶活力测得的实验过程：
分别取酶制品0. 15 g 克加入pH7. 0 , 0. 05mol/ L 磷酸缓冲溶液定容至100 mL ,过滤,此滤液为溶液酶制 剂。 取1 mL 溶液酶加入0. 9 mL 激活剂(pH7. 0 , 0. 05 mol/ L 磷酸缓冲溶液, 内含15mmol/ L 硫代硫酸钠 及6 mmol/ L EDTA22Na) ,于37 ℃水浴中保温恒定后, 加入同样预热的1 %酪蛋白溶液,混匀,在37 ℃下准确反 应10 min ,加入8mL 1N 氢氧化钠溶液,迅速摇匀,于室 温放置半小时。 取上清液于275 nm 波长下测定OD 值。 计算溶液酶的活力。
二、菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用
1、抑制肿瘤细胞的生长 经相关临床研究观察表明，菠萝蛋白酶能抑制肿瘤细胞的生长。 2、对心血管疾病的防治 菠萝蛋白酶作为蛋白水解酶对心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小 板聚集引起的心脏病发作和中风, 缓解心绞痛症状,缓和动脉收缩, 加速纤维蛋 白原的分解。 3、用于烧伤脱痂 菠萝蛋白酶能选择性地除 皮, 使新皮移植得以尽早进行。动物实验证明, 菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良影响。局部使用抗生素不影响菠萝蛋白酶 的效果。 4、消炎作用 菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿(包括血栓静脉炎、骨骼 肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤)，菠萝蛋白酶具有激活炎症 反应的潜力。菠萝蛋白酶还可治疗腹泻。 5、增进药物吸收 将菠萝蛋白酶与各种抗生素(如四环素, 阿莫西林等)联用, 能提高其疗效。 相关研究表明, 它能促进抗生素在感染部位的传输, 从而减少抗生素的用药量。 据推断, 对于抗癌药物, 也有类似的作用。此外，菠萝蛋白酶能促进营养物质 的吸收。
作用条件：
最佳温度： 53±1℃ 失活温度： ≥65℃ 最佳PH值： 5.0～8.0 失活PH值： 小于3.0和大与9.5 推荐用量: 0.05～0.1%对蛋白质计 温度范围： 50～60℃ 作用PH值: 6.0～9.0
生产方法 菠萝压榨得汁液, 按压出汁液的体
积量加10 %氯化钠,在室温下自然沉降120 h ,弃 去沉淀物,得澄清液。 将澄清液移入烧杯中,在搅 拌条件下,按澄清液体积加入0. 05 %EDTA22Na 、 0. 02 %维生素C ,立刻加入0. 1 %的单宁和自制 的吸附剂,在4 ℃下静置1 h ,离心弃去上清液,收 集沉淀物,加入2～3 倍pH 值为4. 5 的抗坏血酸 溶液,静止30 min。 离心14 min ,弃去沉淀物,收 集滤液,用冷冻真空干燥即得菠萝酶。
菠萝蛋白酶
第一组：徐波 李万智 刘金安 徐标 叶永逸
从菠萝中提取菠萝蛋白酶
定义：
一种来源于菠萝的多肽水解酶，属巯基蛋白酶。是从菠萝果 茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷 冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉 末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。品质最佳的菠 萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓 缩,低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药 等行业。
蛋白质含量的测定过程：
取12 支试管,分别加入0 ,0. 20 ,0. 40 ,0. 60 ,0. 80 ,1. 00 mL 标准牛血清溶液 (500μ g/ L ,用水补足1. 00mL ,以上每种浓度 各做一份重复,即平行做两份,按顺序向各管加 入5 mLFolin-酚试剂甲,混匀。 室温下放置10 min 后,再依次向各管加入0. 5 mL Folin-酚试 剂乙,立即摇匀,在30 ℃保温(或室温下放置) 30 min。 然后,在721 型分光光度计上进行比 色测定。 以光密度(O.D. )为纵坐标,以牛血清 溶液浓度为横坐标,绘制出牛血清的标准曲线。 未知的菠萝蛋白酶的蛋白质含量在曲线中得到。
中文同义词: 菠萝蛋白酶;菠萝酶;菠罗蛋白酶 相关类别: 酶和微生物制剂;酶制剂;食品添加剂 储存条件：20°C 状态：粉末 颜色：黄棕色 水溶解性：可溶 毒性 类别：有毒物质 毒性分级：高毒 急性毒性：腹腔-大鼠 LD50: 85 毫克/公斤; 腹 腔-小鼠 LD50: 37 毫克/公斤 可燃性危险特性 热分解排出刺激烟雾 储运特性 库房通风低温干燥 灭火剂：水,泡沫,沙土,二氧化碳,干粉
三、菠萝蛋白酶在美容化妆品业中的应用
菠萝蛋白酶具有嫩肤、美白去斑的优异功效。 基本作用原理：菠萝蛋白酶可作用于人体皮肤上的老化角质层， 促使其退化、分解、去除，促进皮肤新陈代谢，减少因日晒引起的皮 肤色深现象。使皮肤保养呈现良好白嫩状态。
四、菠萝蛋白酶制剂在饲料中的应用
将菠萝蛋白酶加入饲料配方或直接混合在饲料中，可以大大 提高蛋白质的利用率和转化率，并能开发更广的蛋白源，从而降 低饲料成本。
注意：选用无水碳酸钠。A，B三种溶液在测定的当天将按100：1： 1的体积比混合。
混合放置30mn.后使用，混合液只能用一天。三种溶液分开可长期 保存。
应用：
一、菠萝蛋白酶在食品加工业的应用
1、焙烤食品：将菠萝蛋白酶加入生面团中，可使面筋降解，生 面团被软化后易于加工。并能提高饼干与面包的口感与品质。
2、干酪：用于干酪素的凝结。 3、肉类的嫩化：菠萝蛋白酶将肉类蛋白质的大分子蛋白质水解 为易吸收的小分子氨基酸和蛋白质。可广泛地应用于肉制品的精加工。 4、菠萝蛋白酶在其它食品加工业中的应用，有人已经用菠萝蛋 白酶来增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品 及含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。其它还有生产脱水豆类、婴儿食 品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品； 给日常食品添味等。
（B） 0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每 次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。
（2）试剂乙：
在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克 钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸， 100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结 束时，加入150克 硫 酸 锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴， 开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色（如仍呈 绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。稀释至1升，过滤，滤液置于棕 色试剂瓶中保存。使用时用标准NaOH滴定，酚酞作指示剂，然后适当 稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1N左右。