絮凝剂实训报告

酵母菌类絮凝剂产生菌的最佳培养条件
姓名：苏婷婷
院（系）：制药与环境工程系
专业：食品生物技术1331
学号：1303071109
实训地点：实B 313
指导老师：李夏何静
2015年10月
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摘要：本文以酿酒酵母作为微生物絮凝剂产生菌，干制的甜叶菊苷为实验原料，研究甜叶菊苷提取液絮凝剂处理方法。

采用单因素实验，寻找甜叶菊苷提取液絮凝工艺中溶液PH值、絮凝温度、酵母菌量和絮凝时间4个因素进行评价，寻找甜叶菊苷提取液的最佳絮凝条件。

关键词：甜叶菊苷、絮凝剂、提取液
制备甜叶菊浸提液
用研钵讲干制的甜叶菊磨成细粉，称取10g至于200ml沸水中加热40分钟，用纱布过滤，滤液保存，将滤渣置入130ml沸水中加热20分钟，用纱布过滤，过滤后的滤液保存。

滤渣置于130ml沸水中煮20分钟，过滤。

三次过滤的溶液为样液。

（样液贯穿整个实验有必要还是需要灭菌处理121.3摄氏度下高压蒸汽灭菌20分钟）
牛肉膏蛋白胨培养基制备
1.25g牛肉膏、
2.5g蛋白胨、1.25gNaCI、250ml水将PH调至7.0~7.5 在121.3摄氏度下高压蒸汽灭菌20分钟
酵母菌溶液的制备
称取2g酵母粉、5g葡萄糖、100ml无菌水
酵母菌培养
将酵母菌溶液在酒精灯火焰旁置入牛肉膏蛋白胨培养基中，放在37摄氏度培养箱中培养48小时
1.测得甜叶菊的吸光度
吸光度 1.336 1.339 1.342
甜叶菊吸光度为1.339
2.将甜叶菊苷的滤液取3ml分别放置于编号A、B的试管中：
A试管中加入2ml酵母菌的代谢产物
B试管中加入2ml酵母菌本身
分别离心处理测出吸光度
吸光度
A 0.395
B 0.381
3.与化学絮凝剂的对比
三氯化铁FeCl3·6H2O （测得化学絮凝剂的吸光度为0.354）
1、对金属（尤其对铁器）腐蚀性大，对混凝土亦腐蚀，对塑料管也会因发热而引起变形
2、不受温度影响，矾花结得大，沉淀速度快，效果较好
3、易溶解，易混合，渣滓少
4、适用最佳pH值为6.0~8.4
单因素实验A/B/C/D
A、PH对甜叶菊苷絮凝的影响
取甜叶菊甙浸提液10mL，加入絮凝剂测得有絮凝效果的酵母菌部分，在水浴50℃下絮凝30min，絮凝溶液的pH分别为3、4、5、6、7、8、9絮凝结束后取清液进行蒽酮比色，检
测絮凝后溶液中甜叶菊甙的含量，考察pH对甜叶菊甙浸提液絮凝效果的影响。

PH 3 4 5 6 7 8 9
吸光度 1.309 0.574 0.377 0.461 0.707 0.815 1.499
澄清度
B．温度对甜叶菊苷絮凝的影响
取甜叶菊甙浸提液10mL，加入絮凝剂测得有絮凝效果的酵母菌部分，在水浴50℃下絮凝30min，水浴温度分别为45 50 55 60 65 70℃条件下絮凝30min。

絮凝结束后取清液进行吸光度测定，检测絮凝后溶液中的甜叶菊甙的含量，考察絮凝温度对甜叶菊甙浸提液絮凝效果的影响。

温度（℃）45 50 55 60 65 70
吸光度 1.939 1.737 1.807 1.850 1.892 1.877
澄清度
C．酵母菌量对甜叶菊苷的絮凝的影响
取甜叶菊甙浸提液10mL，分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0絮凝剂测得有絮凝效果的酵母菌部分，在水浴50℃下絮凝30min，在絮凝溶液。

絮凝结束后取清液进行吸光度测定，检测该溶液中的甜叶菊甙含量，考察絮凝剂用量对甜叶菊甙浸提液絮凝效果的影响。

酵母菌的量 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
吸光度 1.349 1.085 0.977 0.960 0.800 0.909 0.867
澄清度
D．絮凝时间对甜叶菊苷絮凝的影响
取甜叶菊甙浸提液10mL，加入絮凝剂测得有絮凝效果的酵母菌部分，在水浴60℃下絮凝，絮凝沉淀反应时间分别为30、60、90、120、150min，做絮凝实验。

絮凝结束后取清液进行吸光度测定，检测絮凝后溶液中的甜叶菊甙含量，考察絮凝时间对甜叶菊甙浸提液絮凝效果的影响。

20 40 60 80 100 120 140 160 絮凝时
间
（min）
吸光度 1.437 1.586 1.008 1.032 0.688 0.712 0.894 0.809 澄清度
正交试验（四因素三水平）
A因素：PH A1=4A2=5 A3=6
B因素：温度B1= 48 B2=50 B3=52
C因素：酵母菌量C1=2.8C2= 3.0C3=3.2
D因素：时间D1=90 D2 =100 D3=110
甜叶菊的吸光度为1.307 （第二次配置的溶液）
酵母菌溶液吸光度0.187 （第二次配置的溶液）
PH 温度酵母菌量时间吸光度A1B1C1D1 4 48 2.8 90 0.976 A1B2C2D2 4 50 3.0 100 0.986 A1B3C3D3 4 52 3.2 110 0.910 A2B1C2D3 5 48 3.0 110 0.841 A2B2C3D1 5 50 3.2 90 0.791 A2B3C1D2 5 52 2.8 100 1.078 A3B1C3D2 6 48 3.2 100 0.771 A3B2C1D3 6 50 2.8 110 0.782 A3B3C2D1 6 52 3.0 90 0.731 K1
K2
K3
k1
k2
k3
极差R
主次顺序
优水平
优组合
与化学絮凝剂的对比
三氯化铁FeCl3·6H2O
5、对金属（尤其对铁器）腐蚀性大，对混凝土亦腐蚀，对塑料管也会因发热而引起变形
6、不受温度影响，矾花结得大，沉淀速度快，效果较好
7、易溶解，易混合，渣滓少
8、适用最佳pH值为6.0~8.4
微生物絮凝
1、比表面积大，转化能力强、繁殖速率快，易变异、分布广生产周期短，效率高。

2、抑郁固液分离，形成沉淀物少
3、易被微生物降解，无毒无害，安全性高。

4、由于微生物絮凝剂分子质量都在108以上，具有可生化性。

可消除二次污染。

5、絮凝广泛，脱色、除浊效果独特。

6、有的微生物絮凝还不受PH的影响，热稳定强，用量小等特点
7、此外产生絮凝作用的微生物大多数来自土壤中，资源丰富，获得方法简单，成本低廉。