伊红染色液溶液的配制方法
伊红染色液(水溶)
仅供科研版本号：170602
伊红染色液(水溶)
【产品组成】
【保存条件】
室温,避光,12个月
【产品概述】
伊红(Eosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末。分子式为
C20H6O5Br4Na2，分子量为691.86。伊红最适宜不苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。水溶性伊红Y含有一个醌型苯环的发色团和两个形成钠盐的酸性助色团(R-COONa、R-ONa)。这种形成盐类的酸性染料在水中溶解时解离为带负电荷的色酸部分(R-COO-、R-O-)，即染料的有色部分和带正电荷的钠离子部分(Na+)。染色时伊红Y带负电荷的色酸部分不组织内带正电荷的物质以离子键的形式结合而显色。
伊红染色液(Eosin Y Stain)采用特有防腐剂，操作简单，丌使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在伊红染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。本染色液可以重复使用，直至认为效果丌佳时再换用新的染色液，染色后细胞浆呈粉红色或红色。
【使用方法】
1、样品处理
a)对于石蜡切片:
二甲苯中脱蜡5~10min。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5~10min。无水乙醇5min。90%乙醇2min。70%乙醇2min。蒸馏水2min。
b)对于冰冻切片:
蒸馏水2min。
c)对于培养细胞:
用4%多聚甲醛固定10min以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
2、伊红染色
对于上述处理好的样品，伊红染色液染色0.5~2min(根据染色结果和要求调整时间)。如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
HE染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨
医学信息2011年4月第24卷第4期Medical Information.Apr.2011.Vol.24.No.4临床医学
收稿日期：2011-02-23
HE 染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨
李红芬，郑肇巽，马品耀，平国强
（江苏省人民医院病理科，江苏
南京
210029）
摘要：目的探讨HE 染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的临床基础性意义，推广优良、简捷、经济的试剂配制方法，研究染色过程中的若干问题，完美HE 染色，明确病理诊断，利于临床治疗。方法采用本科室自己配制试剂所染HE 切片30张和30张（对照组）某试剂公司配制试剂所染HE 切片进行显微镜下对比，分析两者的优缺点及染色过程中的若干问题。结果本科室自家配制试剂所染HE 切片明显优于对照组，尤其体现在细胞核着色上，注重染色过程中的若干问题的切片比未注重染色过程中的若干问题的切片质量高。结论HE 染色原理和试剂配制及染色过程中的若干问题的探讨，从基础理论出发，不断实践，为更完美、清晰地呈现显微镜下正常或异常的组织细胞结构，明确病理诊断，从而更好更快地指导临床治疗而努力。关键词：HE 染色；病理
在病理组织切片染色中，苏木素-伊红（HE ）染色是其最基本、最常用的一种染色方法，目前各种试剂公司HE 染液层出不穷，购买方便，但价格昂贵、染色效果并不太理想。本科室二十多年来应用自己所配HE 染色液，效果较好，近年偶然用了某试剂公司HE 染液，结果效果次于前者，后也有其它试剂公司HE 染液要求试用，结果效果也不太好，尤其在细胞核的显色上更明显，现将结果报道如下：1资料与方法1.1一般资料
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升
B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升
B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升
将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)
A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升
B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升
将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)
碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)
番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)
孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)
黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
含铁血黄素染色液(伊红法)
含铁血黄素染色液(伊红法)
简介：
含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其
含铁，且为金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls 普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞或间质内。普鲁士蓝染色用于显示局部组织内的各种出血性病变，常见于吞噬细胞内，可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广，可以进行复染，该染色液的复染液采用伊红。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片染色：
1、 组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、 切片厚度4μm ，常规脱蜡至水。
3、 蒸馏水水洗1min 。
4、 切片入Perls stain 浸染。
5、 蒸馏水充分冲洗。
6、 入伊红染色液淡染细胞核。
7、 自来水冲洗。
8、 常规脱水透明，中性树胶封固 (二)冰冻切片染色：
1、 无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min 。
2、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。 (三)细胞染色：
1、4%多聚甲醛固定10～20min 。
编号 名称
DJ0002 2×50ml
DJ0002 2×100ml
Storage
试剂(A): Perls stain A1: Perls stain A 25ml 50ml RT A2: Perls stain B
伊红染色液(醇溶) 操作步骤及注意事项
伊红染色液(醇溶)操作步骤及注意事项
规格：100ml/500ml
货号：G1108
保存：常温避光保存，有效期为1年。
产品说明：
伊红(Eosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末。伊红(醇溶)分子式为C20H8Br4O5，分子量为649.9。伊红最适宜不苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。
伊红染色液(醇溶)采用特有防腐剂，操作简单，丌使用汞、甲醇等有毒试剂。常用于组织切片或培养细胞的染色，染色后细胞浆呈粉红色或红色。
自备材料：
系列乙醇、4%多聚甲醛
操作说明：
1、样品处理
a)对于石蜡切片：
1)二甲苯（I）中脱蜡5-10min。
2)换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5-10min。
3)无水乙醇5min。
4)90%乙醇2min。
5)70%乙醇2min。
6)蒸馏水2min。
b)对于冰冻切片：
经固定的切片置蒸馏水2min。
c)对于培养细胞：
①4%多聚甲醛固定10min以上，
②蒸馏水洗涤2min，
③换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
2、伊红染色
对于上述处理好的样品，伊红染色液染色0.5-2min(根据染色结果和要求调整时间)。
如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
注：如果用于免疫组化等染色后的复染，参考上述步骤在其它染色完成后进行伊红染色。
3、脱水、透明、封片或进行其它染色
a)脱水、透明、封片：
1)95%乙醇脱水2min。
2)更换新鲜的95%乙醇再脱水2min。
3)二甲苯透明5min。
苏木素-伊红染色液（混合型）
苏木素-伊红染色液（混合型）
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E）
【型号】
混合型
【包装规格】
货号：DH0003
单瓶包装规格分别为：50ml、100ml、250ml、500ml、5000ml。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色，本染色液系将苏木素和伊红混合成一种溶液，染色后可不分化即可达到常规HE染色效果。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
苏木素-伊红染色液(H-E）混合型苏木色精伊红
【储存条件及有效期】
5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有
效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】
l、石蜡切片于二甲苯I、II中各脱蜡若干分钟；
2、经无水乙醇和95%乙醇各约若干分钟，经80%乙醇若干分钟，自来水冲洗若干分钟；
伊红染色步骤
伊红染色步骤
一、材料准备
1. 玻璃片或塑料板；
2. 载玻片和盖玻片；
3. 洗液（自来水）；
4. 蒸馏水；
5. 生理盐水；
6. 9%盐酸溶液；
7. 8%氢氧化钠溶液；
8. 碘液；
9. 双氧水；
10. 无菌吸管；
11. 无菌滴管。
二、具体操作步骤：
第一步，取材。根据需要选择合适的组织块进行切片或者涂片。注意要保证组织的完整性，避免损坏细胞膜等结构。同时还要注意消毒工作，确保取材环境无菌。这一步是为了保护细胞的活性以及保证染色效果。
第二步，漂洗。将处理好的组织放在干净的玻璃片上，用洁净的自来水轻轻冲洗几遍以去除表面残留的血液或其他物质。此过程可有效提高染色的准确性。
第三步，加碱性品红染液。在室温下将染液均匀涂抹于组织表面，时间一般为几分钟到十几分钟不等。
第四步，水洗。将染好的组织放入清水中清洗几遍，以去除多余的染料和杂质。这一步骤是为了保证染色效果更加均匀、清晰。
第五步，加酸复红化。为了防止碱性品红的颜色发生变化或退色，需要在酸
性环境中将其还原为原生细胞质的颜色。因此，需要用9%盐酸溶液进行冲洗并中和处理。这一过程可以帮助提高染色的准确性，并且避免颜色变化或褪色的问题。
第六步，再次漂洗。将经过酸复红化的组织放在干净的玻璃片上，再用蒸馏水轻轻冲洗几次，以确保没有残留的酸或其他物质影响染色效果。
第七步，封固。使用无菌吸管吸取生理盐水滴在组织表面，然后用盖玻片覆盖即可完成封固工作。注意要确保封固严密且不漏气，以免影响观察结果。
第八步，镜检观察。
三、注意事项
1. 染色过程中要保持环境的清洁，避免污染。
苏木精-伊红染色使用说明
苏木精-伊红染色使用说明
【试剂配制】
苏木精染液苏木精配方很多，现介绍常用的是Harris苏木精染液。
苏木精1g
95％乙醇溶液10ml
钾矾或铵矾20g
蒸馏水200ml
氧化汞0.5g
冰醋酸8.0ml
先将苏木精溶于乙醇溶液。钾矾加温溶解烧瓶后，将倒入，继续加热1min。加热停止后，缓慢加入氧化汞0．5g，再继续加热煮沸1min。迅速将烧瓶移人冰水内。染液冷却呈深色时，加冰醋酸过滤后即可使用。棕色磨口瓶保存。室温保存2个月，4℃保存4个月左右。
1.0％伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中，每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。
【实验步骤】
(1)石蜡片经脱蜡、水化，单层细胞片经漂洗固定。
(2)苏木素染液染5～10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。
(3)自来水换数次，标本转为深蓝色。
(4)分色：浸入1％稀盐酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min，脱去多余的蓝浮色，标本转为淡紫红色镜下呈紫红色，胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。
(5)蓝化：自来水浸洗10min或数小时，甚至更长，标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。注意：为缩短自来水浸洗时间，使苏木素更加显色，可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鲜艳的浅蓝色，经此处理的标本，要经自来水充分浸洗，否则会影响伊红染色。
(6)蒸馏水漂洗。
(7)伊红染液5～10min，进行对比染色。
(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70％、80％、90％梯度乙醇溶液脱水各一次，再分别经95％、100％乙醇溶液脱水各两次，每次1min。
常用染色液的配方
一、常用染色液的配制
⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。
配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油
（2）先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100ml
煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。
⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine）核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）
染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升
B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B 液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升
B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升
将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)
A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升
B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升
将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)
碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)
番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)
孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)
黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
伊红溶液配制方法__解释说明
伊红溶液配制方法解释说明
1. 引言
1.1 概述
伊红溶液是一种常用的有机染料，在科学研究和实验操作中具有广泛的应用。其配制方法的准确性和可重复性对于获得准确的结果至关重要。本文将详细介绍伊红溶液的配制方法，包括材料准备、配制步骤以及需要注意的事项。
1.2 文章结构
本文共分为5个章节：引言、伊红溶液配制方法、结果与讨论、应用与意义以及结论。通过依次阐述这些内容，读者将能够全面了解伊红溶液配制方法及其在科学研究中的应用和意义。
1.3 目的
本文旨在提供一个清晰明了的指导，使读者能够正确并有效地配制伊红溶液。通过深入剖析实验结果和讨论影响因素，我们还希望揭示伊红溶液在某领域中的应用及对其他实验操作的启示和借鉴意义，并展望该领域未来对伊红溶液配制方法研究所能做出的贡献。最终，通过总结要点，我们希望读者能够获得对伊红溶液配制方法的全面认识，并能够应用于实际科研工作中。
以上是文章“1. 引言”部分的详细内容。
2. 伊红溶液配制方法
2.1 材料准备
为了配制伊红溶液，我们需要以下材料：
- 伊红固体粉末（一般为碳铁蓝或三环蓝）
- 无水酒精或蒸馏水
- 碱性溶液（如氨水或氢氧化钠溶液）
- 醋酸乙酯或二甲苯
2.2 配制步骤
下面是伊红溶液的配制步骤：
1. 量取适量的伊红固体粉末。根据所需的浓度，可以使用天平准确称取所需的质量。
2. 将伊红固体粉末加入一个干燥的容器中。
3. 慢慢加入一定量的无水酒精或蒸馏水。用玻璃棒轻轻搅拌混合，直到伊红完全溶解。
4. 在另一个容器中，配置一定浓度的碱性溶液。
5. 将步骤3中得到的伊红溶液倒入配置好的碱性溶液中。注意要缓慢倾倒，同时用玻璃棒轻轻搅拌混合。
精子活体染色液(伊红法)
北京雷根生物技术有限公司
精子活体染色液(伊红法)
简介：
Leagene 精子活体染色液(伊红法)可以常规检测所有精子标本的存活率，通过染料拒染法来鉴别细胞膜完整的精子，从而得出活精子的百分率。该染色液由伊红、去离子水等组成，利用了染料拒染原理，即相关基于损伤的细胞膜，如在非活的(死)细胞上的膜，允许非透过膜性染料可进入膜内染色；而活细胞的细胞膜能够抗拒染料进入，所以产生拒染现象，不着色。
组成：
操作步骤（仅供参考）：
1、 取洁净载玻片，滴加新鲜精液和精子活体染色液(伊红法)各1滴，混匀。
2、 加盖盖玻片放置，立即在高倍镜(可用400×)下观察。
3、 计数200个精子，计算未着色(活精子)占200个精子的百分率。
染色结果： 活精子
不着色(白色) 死精子
红色
注意事项：
1、 精液标本一旦液化应立即检测精子存活率，最好在30min 内，在任何情况下都不能超过1h ，以免因脱水或温度变化导致精子失活而使染色检测结果不准。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 DA0182 Storage 精子活体染色液(伊红法) 10ml RT 避光 使用说明书 1份
伊红染液说明书
伊红染液
货号：AG1100
规格：100ml/500ml
保存：常温避光保存，复检期为1年。
产品说明：
伊红(Eosin)又称曙红，是一种酸性生物染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
索莱宝生产的伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色，染色后细胞浆呈粉红色或红色。本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
本产品为工作液，可直接使用。
操作说明：
1、样品处理
a)对于石蜡切片：
①二甲苯（I ）中脱蜡5-10min 。
②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5-10min 。
③无水乙醇5min 。
④95%乙醇2min 。
⑤80％乙醇2min
⑥70%乙醇2min 。
⑦蒸馏水2min 。
b)对于冰冻切片：
经固定的切片置蒸馏水2min 。
c)对于培养细胞：
①4%多聚甲醛固定10min 以上，
②蒸馏水洗涤2min ，
③换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min 。
2、伊红染色
①伊红染色液染色染色2min (可以根据染色结果和实验要求调整时间)。
②用蒸馏水洗去多余染料。
③自来水浸泡5min 。
此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。
如需脱水、透明后封片按后续步骤进行：
①95％乙醇（I ）1min 。
②95％乙醇（Ⅱ）1min 。
③100％乙醇（I ）1min 。
④100％乙醇（Ⅱ）1min 。
⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min
。
Shanghai Acmec Biochemical Co.,Ltd.
病理室常用试剂配制方法
盐酸酒精的配制
盐酸酒精的配制方法是，用滴定管配合吸耳 球转移盐酸1ml至99ml 70%乙醇中混匀即可。 1%盐酸酒精有效期3个月。
福尔马林的配制
固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与 生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、 细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞 内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变 成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和 凝固起来 。 因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时， 应使用足量的固定液。
苏木精染色液的配制
人工氧化：是指在配制苏木精染液时加入一 定量的氧化剂如氧化汞、碘酸钠等可立即 使苏木精氧化成苏木红。但要注意加入氧 化剂的量不能太多，不要使苏木精分子全 部氧化变成苏木红，否则，苏木精染液的 染色力减弱甚至失效。
苏木精染色液的配制
苏木精氧化剂中首选碘酸钠。其优点是在 室温下易溶于水，不需煮沸就能放氧。氧 化后，产生的碘化钠是无害的，染液的稳 定性好。而氧化汞需要在苏木精染液煮沸 时加入才能放氧，当开始放氧时又要立即 把染液置入冷水中终止放氧。随后苏木精 染液每天都会在液面形成一层金属膜，需 要把染液过滤后才能用以染色，而汞盐也 是一种毒性物质。
苏木精染色液的配制
苏木精的氧化与下列因素有关： 苏木精染液PH值。染液偏碱性氧化快，中性时稍 慢，酸性时很慢，所以加酸时的苏木精染液可延 缓氧化。
氧化剂的量。加入人工氧化剂后苏木精可立即被 氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有关。如靠近 阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。
伊红Eosin Y,water soluble使用说明
伊红Eosin Y，water soluble 使用说明
货号：E8090
中文名：伊红Y，水溶性别名：酸性红87；水溶伊红；四溴荧光素钠；四溴荧光黄；朝红；黄光曙红；曙红Y 水溶性；曙红钠盐
CAS 号：17372-87-1
分子式：C 20H 6Br 4Na 2O 5
分子量：691.86
性状：橘红色粉末
保存：RT，有效期3年
用途：
水溶性伊红，是细胞质和细胞外基质中的成分着色的良好染料。
伊红Y 是一种化学合成的酸性染料，在水中可解离成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基（带正电荷的阳离子）结合从而使胞浆着色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红着色情况与组织或细胞的种类有关，可随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
操作说明：（仅供参考）
一、溶解方法
1、伊红水溶液
用蒸馏水溶解，常用1%的浓度，待伊红充分溶解后加入适量的冰醋酸（一般情况100ml 伊红水溶液中加入100ul 即可）。可根据实验要求溶解不同浓度的伊红。
2、盐酸化伊红溶液
将1g 伊红溶于100ml 水中，加入2ml 浓盐酸充分搅拌，静置过夜后过滤。过滤的沉淀用蒸馏水洗两遍后再次过滤。将滤纸同沉淀物仪器置于温箱内干燥后，加100ml95%酒精。使
用时再用95%酒精1:1稀释，并加入1%冰醋酸至半透明状。
二、染色步骤
1、样品处理
a)对于石蜡切片（常规脱蜡水化）：
伊红配制
伊红，是我们常用的染料，英文名为Eosin，又叫四溴荧光素，是一种混合物。伊红是生物学上常用的染料，一般观察细胞用的HE染色，其中的E就是伊红的简称。
伊红的分子式，但是实际试用的是混合物，而非纯净物，根据溶解度不同，分为水溶性和醇溶性的两种，水溶性的并不是不溶于醇，而是溶解度较小的缘故。
加入浓盐酸之后，原来的水溶液，竟然分成两层了。
因为常用，所以科里面有许多以前购买的伊红试剂，反正我们上班之后一直用的就是那些试剂，技术员说，从来没有购买过。不过最近技术员说配置的伊红不怎么着色，她用的方法大概是2.5-5g伊红，溶于500毫升蒸馏水中配称伊红染液；后来我看了一下，还有其他的方法，就用另外一种方法：伊红0.5克，蒸馏水75毫升，95%的酒精25毫升，以前用这种方法配的着色还行，不过这次用这种方法配，着色效果也不是很好。
大家找不到原因，最后担心是不是试剂时间太长，过了失效期了？不过试剂瓶上并没有有效期一说。就想到到病理技术网上问问，后来丁老师给了一个方法：2.5克溶于500毫升水当中，然后加入10毫升浓盐酸，静置过夜然后过滤，之后把放置烤箱内烤干，用这些干燥物，加95%的酒精1000毫升配称原液，用时可以用1：1到1：2的比例稀释。
其实这个方法以前看到过，只不过没有看明白。最主要的疑惑就是不知道用水溶解之后过滤剩余的该如何处理？难道要把这些滤液倒掉吗？所以一直有着用的一个疑问。这个疑问是因为我们用的是水溶性的伊红，在水中的溶解度比较高，简单的方法直接就可以使用，这些滤液倒掉岂不可惜。
但是实际操作的时候，发现原来自己的担心是多余的。
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伊红染色液配制方法
溶液的配制方法如下：
华越洋伊红染色液：100ml
伊红染料配方较多在常规配方中，有的染色效果好，但操作较繁琐，且消耗较多试剂。有的操作简单，但染色时间长，染液有效期短，常需加入冰醋酸，但加入剂量不易掌握，量少达不到促染作用，加入过多染液易沉淀，且引起色调不正，特别是容易褪色，染色结果不能长期保存。为此，对伊红Y染色液配制进行了改进。改进后的方法具有操作简便、经济、染色性质稳定、着色力强且持久颜色鲜艳等优点；
制备方法：伊红Y1G，蒸馏水90ML，苦味酸饱和水溶液10ML。将蒸馏水加入伊红，待其全部溶解后，加入苦味酸饱和水溶液。
染色结果观察：染色时间0.5-1分钟。伊红所着的颜色鲜艳，层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。
伊红Y（四嗅荧光素二钠盐，分子式：C20-H6O5Br4NO2）是一种酸性红色胞浆性染料，室温下，在水中的溶解度度远大于在酒精中的溶解度。它在溶液反应中，由于钠离子的存在而呈碱性状态。苦味酸[分子式：（NO2）3C6HOH]是一种较强的酸性染料，它的颜色是由硝基发色团所致，染色性能是由羟基助色团产生的。苦味酸具有三种作用：1本身是一种胞浆染料，具有染色作用。2又是一种酸，加入伊红Y染色液中，使染色造成比胞浆等电点略为酸性的环境，抑制了部分氨基酸中羟基官能团，从而使氨基酸中氨基官能团和酸性染料结合，增加了染液与组织间的亲和力，起到促染作用。3苦味酸又是一种氧化剂，在染色体中经过氧化物作用后，使染色剂与组织成份结合的更牢固。组织着色鲜艳，染色后不易褪色，因而切片可长期保存。
华越洋伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。
本伊红染色液染色后细胞浆呈粉红色或红色。
本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本伊红染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。
本染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。