铁皮石斛组织培养技术研究进展

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铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.

铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。

赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。

曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。

罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。

1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。

2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。

6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。

KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。

ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。

1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。

1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。

曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。

铁皮石斛组培快繁技术的研究分析

铁皮石斛组培快繁技术的研究分析摘要：铁皮石斛的种子极为细小、无胚乳，自然条件下需要与某些真菌共生才能萌发，因此自然繁殖率很低，不易获得实生苗；而传统的分株、杆插等方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和破坏生境，其资源已濒临灭绝，被国家列为重点保护的药用植物之一。

文章基于此，对铁皮石斛组培快繁技术进行综述性分析。

关键词：铁皮石斛；组培快繁；技术研究植物组织培养技术是20世纪初，以植物生理学为基础发展起来的一门新兴技术。

植物组织培养是指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使之生长、繁殖或长出完整植株的技术和方法。

目前，植物组织培养技术己经在科学研究以及实际生产上得到非常广泛的应用。

该技术不仅具有缩短育种年限、加快繁殖过程，改良品质，节省空间，减少劳力，并可全年进行生产，不受季节、气候等自然条件限制等特点，而且组培苗的体积不大，方便运输和资源交流。

在促进农林业现代化方面展现出了巨大的经济、社会和生态效益，被认为是一项很有潜力的高新技术。

铁皮石斛种子细如粉尘，一个果实内所含种子达100万粒之多，由于缺乏胚乳，种子需与真菌共生才能正常萌发，自然条件下萌发率非常低。

因此，虽然分布广，但生活环境狭窄，产量还不能满足目前药用需求，利用组织培养技术繁殖试管苗是解决铁皮石斛种苗的有效途径。

铁皮石斛的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。

根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，我国研究人员在铁皮石斛组培快繁技术方面的研究取得了一定的进展。

在20世纪70年代谭文澄等就进行铁皮石斛组织培养研究并获得完整植株；何静波等尝试通过种胚培养繁殖铁皮石斛；左春芳等于1985年开始研究铁皮石斛的组织培养，并取得进展。

1外植体的选择在植物组织培养中，外植体的选择是十分关键的因素，不同的取材部位和时期，培养的结果也不一样。

目前，诱导铁皮石斛原球茎采用的外植体主要有种子种子、无菌苗幼苗茎段、根尖、不定芽、幼叶，及人工种子等。

铁皮石斛组培快繁技术的研究

因此，探寻快速有效的繁殖方法势在必行。该文
ＰＨ５．８，培养温度为２５ ℃，光照强度２０００ｌｘ，光照时间１６ｈ・ｄ，每个处理接种５个带节的茎段，培养６０ｄ后统计试管苗鲜重、干重和株高。
１．２．３ＢＡ和ＮＡＡ组合对铁皮石斛丛生芽增殖的影响以ＭＳ为基本培养基，加入ＢＡ和
以铁皮石斛茎段为材料，研究不同的培养基种类、
植物生长调节剂及浓度对其发根、生长和增殖的影响，并对试管苗驯化后适宜的栽培基质进行了筛选，旨在提高铁皮石斛的繁殖系数和移栽成活率，为工厂化育苗提供科学依据。
用成活率可迭９Ｏ．６。
关键词：铁皮石斛；丛生芽；组织培养
中图分类号：￥６８２．３１文献标识码：Ａ文章编号：１００２－－２７６７（２Ｏ１４）０５ — ００３０ — ０５
铁皮石斛（ＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍＫｍｉｕｒａｅｔＭｉｇｏ）为兰科气生草本植物，又名黑节草、铁皮枫
福建等地，其植株中含有石斛碱、石斛次碱等生物
茎段作为外植体。把经过预处理的材料在无菌条件下．放入７５酒精中，约３０Ｓ后用无菌水冲洗２～３遍，再用０．１的升汞浸泡，消毒时间分别为

铁皮石斛组培苗研究进展

作者简介：马赞留（１９７７一），男，江苏如皋人，硕士，农艺师，主要研究方向为花卉繁育与栽培。
段出芽最合适的分裂素及浓度是４ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ。
表２不同浓度生长激素处理对茎段形成愈伤组织的影响
３小结
四药门花的组织培养茎段作外植体，通过对培养条件的初步摸索，确定了外植体的最佳灭菌时间以及诱导愈伤组织和芽分化的最佳激素及浓度，四药门花的茎段最佳灭菌时间
参考文献
１张宏达．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７９
表３不同浓度生长分裂素处理对茎段分化芽的影响
２顾垒，张奠湘．濒危植物四药门花的自花授粉明．植物分类学报，２００８（５）
３刘华．四药门花扦插繁殖技术 Ⅱ 】．现代园艺，２０１３（２３）
被国家列为重点保护的药用植物之一。
２铁皮石斛组织培养技术
铁皮石斛种子细如粉末，又缺乏胚乳，需在适宜的环境
与真菌共生才能萌发嘲，自然繁殖率极低，生长周期长。只有
通过组织培养技术实现铁皮石斛快速繁殖以满足市场需求。组织培养一般采用野生铁皮石斛植株种子、茎尖和茎段
问题和展望了发展前景。
关键词：铁皮征
铁皮石斛（ＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍＷａｌ１．ｅｘｔａ＇ｎｄ１）是兰科石斛属多年生附生草本植物，俗称铁皮兰、黑节草，是我国名贵的传统中药材之一，位于“ 九大仙草” 之首，同时也是一种重要的花卉植物ｆ１］。其生物学特征为：茎直立，圆柱形，通常长２０～３５ｃｍ，直径２４ｃｍ；幼嫩茎长５～７ｃｍ，肥壮饱满，可粗达８ｍｍ；长茎着花时略弯垂。叶３～５枚，生于茎上部节上，二

铁皮石斛的研究进展

詹忠根 [7 ]对根尖诱导丛生芽作了研究 ,选择健壮、根长为 3 cm的无菌苗 ,取其长约 0. 3 - 0. 5 cm 的根尖分生组织平放在改良的 B5培养基中 ,在 25 ±1℃,光照强度 800 lx ,持续光照。结果诱导根尖形成了愈伤组织、类原球茎或直接转化成芽且获得再生植株 ,通过细胞学观察认为铁皮石斛的类原球茎是单细胞起源的体细胞胚。 2 大田栽培研究
养基有利于种胚的萌发 ,萌发率接近 80% ; 培养基中加入 2%活性炭 ,原球茎增殖倍数高 ; 添加 NAA 使试管苗生根多且长。
为解决原球茎转接成活率低的问题 ,侯丕勇等 [5 ]对悬浮培养的原球茎在固体培养基上生长和分化进行了研究。他们选用不同的培养基 ,以植株鲜重和成苗数为指标 ,考察原球茎的生长和发育。结果发现 ,降低培养基微量元素含量有利于原球茎的生长 ,但不利于分化 ,灭活真菌容易引起原球茎形态变异。刘骅等 [6 ]对降低试管苗繁殖成本进行了研究 , 用常水替代蒸馏水、食用白糖替代药用蔗糖 ,成效明显。
铁皮石斛的种子细如粉末 ,一个蒴果内所含种子达百万粒之多 ,由于缺乏胚乳 (营养物质 ) ,种子必须飘落到非常适宜的环境与真菌共生 ( symbiotical)才能萌发 ,自然条件下萌发率极低。组织培养是实现快速繁殖、人工栽培的最佳技术手段。组织培养一般采用野生铁皮石斛植株 ,以其胚、茎尖或根尖为外植体 ,接种到培养基上进行细胞培养。从细胞到微苗、幼苗、壮苗 ,周期约 1年。 1985年左春芳等开始研究铁皮石斛的组织培养 ,并取得进展。唐桂香等 [4 ]以成熟的铁皮石斛种胚 ,用 1 /2M S为培养基 ,接种到含有 6 - 苄基腺嘌呤 (BA )和萘乙酸 (NAA )以及含有马铃薯、香蕉提取物的培养基上 ,诱导种胚萌发、增殖、分化及生根。研究结果认为含有 20%马铃薯提取物的培

铁皮石斛组培快繁技术研究进展

（：４４．４）１— ５
［４］郑丹．烤烟香气物质的成分及其影响因素研究进展［］．江Ｊ西农业学报，２００９，２３：２１（）３—２．６
［］任永浩，陈建军，马常力．５不同根际ｐＨ下烤烟香气化学成分
的研究［］．华南农业大学学报，１９Ｊ９４，１（）２５１：１７—１２３．［］中国烟草总公司郑州烟草研究院，中国农业科学院资源与农业６区划研究所．中国烟草种植区划图册［Ｍ］．陕西：西安地图
２基本培养基及培养条件
铁皮石斛组织培养主要采用ＭＳ、改良ＭＳ和Ｂ｜．１Ｈ为基本培养基；适宜光照周期为１／ｌ］Ｉ２ｈｄ；１７
温度以（５±１ ℃最适合原球茎的生长繁殖，较低２）
种源的重要基础。关于铁皮石斛的组培快繁技术已
参考文献：
［］白智勇．１９１９３～１９９８年世界各国烟叶产量统计［］．上海烟Ｊ
叶，１９（）５— ７９９２：５５．
出版社，２０．０９
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［２１］黄光荣．同轮作方式对烤烟病虫害及产量品质的影响［］．不Ｊ
河南农业科学，２０（）０— ２０９５：４４．
（责任编辑：柯文辉）
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２０第１０年期１
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铁皮石斛组培快繁技术研究进展

铁皮石斛原球茎组织培养研究进展

一••琴••零••零••琴••琴■■琴丨••琴丨■■琴••琴丨■■琴••琴••零••琴••琴丨■■琴••琴丨■■琴••琴••零••琴••琴••琴••琴••零••零■•零■•零■•零■•琴■•琴■•琴f文章编号：1002-0659 (2018) 02-0036-05I|铁皮石斛原球茎组织培养研究进展i专题综述t张鑫!(天津创世生态景观建设股份有限公司，天津南开300000)摘要：铁皮石斛是我国传统的名贵中药材，具有很高的药用价值，其所含的主要成分为石斛多糖和生物碱。

由于长期的采挖，自然资源日益枯竭，现阶段铁皮石斛的种苗主要通过组织培养方法获得，但在培养过程中存在诸多问题如出苗的成本过高，幼苗移栽成活率低，工厂化生产效率低等。

鉴于以上问题，对于铁皮石斛原球茎的研究日益广泛，原球茎中含有同石斛苗相同的药用成分，通过大规模培养来提取，同样可以满足药材市场对石斛的需求。

本文通过对相关文献的查阅，阐述了有关铁皮石斛原球茎的组织培养方面的研究概况。

关键词：铁皮石斛；原球组织培养；多糖中图分类号：S682.1+9 文献标识码：A铁皮石斛（■O e/zdraW M m q^dna/e Kimura et Migo)是兰科（Orchidaceae)石斜属（Dendrobium)多年生附生草本植物，因其老基外呈黑色，又名为黑节草，是名贵中药，居“中华九大仙草”之首，所含的主要成分为石斛多糖及生物碱，另外，还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等。

现代药理研究证明石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫力的功能。

但由于铁皮石斛生长环境特殊，以及长期采挖，自然资源日趋枯竭，已被国家列为重点保护的野生药材。

从20世纪中期开始就有关于铁皮石斛的研究，主要涉及组织培养方法、有效成分含量和药理作用方面的研究。

随着研究的深人，发现铁皮石斛在组织快繁过程中存在一些问题，例如通过组培生产出苗的成本过高，幼苗移栽成活率低，工厂化生产效率低。

A 铁皮石斛组培繁殖及其内生真菌的研究

１．１石斛属植物观赏价值
石斛属植物约有四分之一可供观赏，称为石斛兰（Ｄ．ｏｒｃｈｉｄｓ），以花艳丽而著称，石斛株型美观，茎干奇特，花多而密，花型优美，能给人以超凡脱俗的艺术感受，多用于盆栽观赏，可用于居室内装饰，摆放在阳台，窗台，或用吊盆悬挂客室，书房，凌空泼洒，别具一格。吊载或树载多见于公园，植物园，温室和各类休闲游览区，其模拟石斛兰原生种的野生状态，形成独特的热带附生植物景观，具有极佳的观赏效果。石斛兰具有秉承刚强，祥和可亲的气质，因此被誉为“成
功之花”。
今年来，石斛作为观赏植物发展迅速，同时它也是良好的杂交亲本，在国际花卉市场上占有重要的位置，已形成独立产业。当今世界上许多国家都广泛栽培，尤以东南亚最盛，其中以泰国产量最大。石斛兰在荷兰的总销售额已达３２０万美元，其中大部分直接销售给法国，德国，美国和意大利的批发商。东南亚国家出口石斛的主要品种为“蓬皮杜夫人”和“索尼娅”，前者每支价格为０．４１～０．６５美元，后者每支价格为０。３８～０．５７美元。在亚洲，日本是石斛兰最大的进口国，１９９３年市场销售２３０万盆，销售额为２８００万美元（王意成，２００７）。１．２石斛属植物的药用价值我国石斛植物中近４０种可作药用，主要有环草石斛（Ｄ．ｃｏｄｄｉｇｅｓｉｓ）、马鞭石斛（Ｄ．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｍ）、铁皮石斛（Ｄ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、黄草石斛（Ｄ．ｃｈｒｙｓａｎｔｕｍ）和金钗石斛（Ｄ．ｎｏｂｉｌｅ）等。现代医学研究表明：石斛含有多种人体所需的微量元素、必需氨基酸、维生素、多糖、生物碱等，具有滋阴清热、生津益胃、止咳润肺之功效，其主要成分
２．１．２．１培养基的选择
选择合适的培养基是组织培养最关键的一步，不同的培养途径、不同的培养阶段和目的，所对应的培养基也不同。曾宋君等发现Ｎ６培养基对石斛胚的萌发和生长最好（１９９６），而以茎尖作为培养材料，Ｎ６培养基诱导愈伤组织能力明显不如ＭＳ。ＤｅｖｉＪ等利用Ｄ．ｍｏｓｃｈａｔｕｍ的茎尖在５种培养基上诱导形成拟原球茎，结果以Ｎｉｔｃｈ培养基的效果最好（高培元等，２００２）。高培元等在金钗石斛芽的诱导过程中发现ＭＳ培养基对侧芽诱导率最高，Ｂ５次之，ＫＣ最低（２００２）。２．１．２．２激素与添加物植物激素对植物细胞分裂、诱导器官形成和次生产物的合成都有重要作用。廖福琴等在石斛兰芽增殖培养过程中发现，ＮＡＡ浓度保持不变，当６．ＢＡ浓度为４．０ｍｇ・Ｌ以时，芽增殖倍数为最高，增殖７～ｌ２倍；当６－ＢＡ浓度增至５．０ｍｇ・Ｌ以时，芽增殖倍数下降，可见较高浓度的６－ＢＡ对芽的分化有抑制作用（廖福琴等，２００３）。赵天榜等在１／２Ｎ６培养基中加入０～Ｏ．５ｍｇ・Ｌｑ的ＮＡＡ，对石斛种胚苗

铁皮石斛栽培、组培技术研究进展

关键词：皮石斛；培；培；用价值铁栽组药中图分类号Ｑ４．１．３９９７８４文献标识码Ａ文章编号１０７３（０２ｌ４ｏ０７— ７１２１）９— Ｏ— ４
ＰｒｇｅｓｏｈｔｆｃａｏｒｓｎｔｅＡｒｉｉｌＣｕｌｉａｏａｎｓｕｌｔｖｔｏｆＤｅｒｂｕｃｎｄｕｉｔｖｔｎｄＴｉｓｅＣｕｉａｎｏｎｄｏｉｍａｄｉｍｉｉ
摘
要：综述了铁皮石斛的植物学特性、栽培技术、组培技术、药用价值。总结了近年来多个科研单位及个人在铁皮
石斛育种技术上所取得的研究成果，包括种子萌发、原球茎分化、苗以及生根培养，壮以期为今后的育种工作提供借
鉴。并对未来我国铁皮石斛的研究发展进行了展望。
铁皮石斛（ｅｄｏｉｍａｄｄｍ）兰科石斛属多年Ｄｎｒｂｕｃｎｉｕ是生附生草本植物，被誉为“ 中华九大仙草（铁皮石斛、山天雪莲、千年人参、百二十年首乌、甲之茯苓、花苁蓉、山灵深
霜多雾、降雨量５０～１０ｍ的常绿阔叶林中。铁皮年０００ｍ石斛自然结实率很低，何平荣等认为其平均自然结实率为０３％，中以开花当天萼片还没有完全展开时．１其的人工授粉结实率最高。铁皮石斛自花授粉成功率极低，
大进展。
仅３％左右，０而异花授粉成功率达１０。铁皮石斛野０％

石斛组织培养研究进展

石斛组织培养研究进展张明夏鸿西朱利泉张玉进［摘要］目的：综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。

方法：系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。

结果与结论：介绍了石斛组培的多种方法，对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述，并提出了存在的问题及对策。

［关键词］石斛；组织培养［中图分类号］S567.035.3 ［文献标识码］A［文章编号］1001-5302(2000)06-0323-04石斛属Dendrobium为兰科第2大属，多年生草本植物，全球计有1 500种。

多生于树皮或岩石上，开花多，结果少，每果可含100万粒种子。

种子细如粉尘［1］，每粒重约0.3～0.4 μg。

种胚不超过球形阶段，即存在后熟现象。

由于缺乏胚乳组织，需与真菌共生(symbiotical)才能萌发，自然条件下发芽率一般不及5%。

石斛为合轴生长(sympodial)，分株是其繁殖的主要方式，对生长条件的要求较为苛刻。

石斛属植物中有不少是名贵中药，在《本草纲目》中石斛被列为上品。

我国76种石斛属植物中有近40种作药用［2］，著名的有D.nobile(金钗石斛)、D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。

具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用，其应用范围正迅速扩大。

石斛属植物约有四分之一可供观赏［3］，称为石斛兰D.orchids，以花艳丽而著称，近年作为观赏植物发展迅速，已形成独立产业。

集药用和观赏于一体的价值，加之过度的采伐利用和繁殖率低，造成了石斛供需之间的紧张状况，我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。

自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来，石斛组织培养逐步走向深入化。

近年来，石斛组织培养的最佳条件，包括光照、温度、pH以及如何选用外植体，选用激素等取得长足进展，并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等，还获得了转基因石斛植株。

铁皮石斛组培

铁皮石斛的组织培养技术摘要：铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo．)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。

铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。

铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。

铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。

为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。

关键词：铁皮石斛组织培养目前铁皮石斛的组织培养技术非常成熟，有大量关于其组织培养及快繁体系成功建立的报道，大都以茎段、根尖、茎尖、原球茎和种胚等为外植体。

除了固体培养外，近几年来还出现了一些关于铁皮石斛液体悬浮培养的报道。

一、茎段培养1．培养条件(1)诱导培养基①MS+6一BA0．5mg／I。

+NAA0．05mg／L+AC(活性炭)29／L；②MS+6-BAl．0mg／L+NAA0．1mg／L+AC29／L。

(2)增殖培养基花宝3号39／L+6一BA2．5mg／L+NAA0．25mg／I。

+AC29／L。

(3)生根培养基1／2MS+IBA0．5mg／L+AC29／L。

培养基中添加蔗糖209／L，pH5．2～5．4，培养温度(25-!-2)℃，连续光照培养时间为12h／天，光照强度1500～2000lx。

2．取材与消毒从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。

在超净工作台上将茎段放置在75％的酒精中消毒30s后，再用0．1％的HgClz水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。

3．诱导培养用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。

15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。

继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。

铁皮石斛的快速组培实验分析----农研铁石斛种植

农研铁皮石斛种植铁皮石斛的快速组培实验分析铁皮石斛(Dendrobium Nobil)是兰科石斛属多年生附生兰,但目前由于专业性培育斛的整体水品不是很高,关键的生产环节技术薄弱,造成石斛繁殖系数偏低,工业化生产效率不高,许多名贵品种短缺,品质较低,且市场售价较高。

因此建立和完善石斛组培快繁技术是解决这一问题的重要途径。

本试验以石斛花后假鳞茎带节茎段为外植体诱导丛生芽,研究以丛生芽途径建立植株再生体系。

主要围绕外植体灭菌、腋芽诱导、丛生芽增殖、壮苗生根、炼苗移栽等几方面进行,集中研究不同灭菌方法、不同基本培养基类型、不同激素配比和浓度、不同添加物、不同碳源等多个方面问题。

试验中的培养基方案均采用正交设计,数据采用SPSS软件分析。

通过试验,获得如下主要结果:1、以石斛开花后假鳞茎带节茎段为外植体,最佳的灭菌方法是Ⅱ处理组,即假鳞茎带节茎段→自来水冲洗→洗衣粉上清液浸泡10min并用软刷刷去表面污垢→自来水冲洗30min→置于超静工作台上70%酒精浸泡20s→无菌水冲洗4次→0.1%HgCl_2浸泡15min→无菌水冲洗8次→取出吸干水分并除去包叶→接种,成活率达80%。

2、影响石斛假鳞茎带节茎段诱导腋芽的主要因素是基本培养基、细胞分裂素BA和天然添加物,其次是NAA。

丛生芽诱导最适宜的培养基配方为1/2 MS+BA1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+椰汁150.0mL/L+食糖30.0 g/L+琼脂7.0 g/L,pH5.4,诱导达94.47%。

3、影响石斛丛生芽增殖的主要因素是:(1)基本培养基,以1/2MS最佳;(2)细胞分裂素BA,以1.0mg/L最佳;KT以0.5 mg/L最佳;(3)生长素NAA,以1.0mg/L最佳。

其次,试验中发现添加物、培养基pH值、接入茎段长度、丛植密度对丛芽增殖有显著影响。

丛生芽增殖的最适宜的培养基配方是1/2MS+BA1.0mg/L+NAA1.5mg/L+KT0.5mg/L+食糖30.0g/L+琼脂 6.0g/L+椰汁150.0mL/L,pH5.4。

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养

铁皮石斛组织培养研究进展1、1种子萌发1.2基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6 , MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW、KundsonC , 1 / 2N6 White等培养基上均可萌发。

赵天榜等比较风、MS等14种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH、Kn、MS次之，I /2MS、1 / 2 Vw 最差。

曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH、改良N6、MS、KS、VW、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT培养基。

罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS培养基上所萌发的原球茎较大。

1.3激素在培养基中添加一定浓度的NAA可促进种子的萌发，浓度以0.2 —0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。

2,4-D对胚的萌发起抑制作用。

6 一BA对胚萌发后的生长起抑制作用。

KT、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L时，对胚萌发和成苗起抑制作用。

ABA有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用, 但张铭等发现ABA能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。

1.4天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。

1.5炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 %蔗糖。

曾宋君等在改良N6 + NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2原球茎增殖2.1基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。

铁皮石斛茎段组织培养技术研究

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安徽农学通报，ＡｎｈｕｉＪｕｌｙ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２０１３，１９（１３）
铁皮石斛茎段组织培养技术研究
戚华沙潘梅黄赛王景飞吕德任姜殿强
（海南省农业科学院园林花卉研究所，海南海口５７１１００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂｕｄｃｌｕｍｐｓｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｒａｐｉｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｙｓｔｅｍｏｆｐｒｏｐａｇａ —
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｏｆ６ｃｉｎａｌｅ；Ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｒｏｏｔｉｎｇ
铁皮石斛（ＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｏｆｉｅｉｎａｌｅＫｉｍｕｒａｅｔＭｉｇｏ）为兰科多年生附生草本植物，长于海拔达１６００ｍ的山地半阴湿的岩石上，并常与苔藓植物伴生，喜温的低温停止生长。铁皮石斛具有
１．２方法
１．２．１灭菌及接种方法选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛
健康植株，用刀片切取长为３ —５ｃｍ的顶芽，剥去节上叶片，
放置于洗洁精溶液中摇荡２ａｉｒｎ，再用自来水冲洗；沥干水

铁皮石斛组织培养研究进展

民营科技2018年第3期生态农林铁皮石斛组织培养研究进展曾铭（福建农林大学林学院，福建福州350000）铁皮石斛是属于兰科石斛属的一种多年生草本植物，它又被人们称作黑节草、铁皮兰。

早在1000多年前的《道藏》中更是被誉为“中华九大仙草”之首，主要分布于福建、浙江、湖南等地[1]。

铁皮石斛有着丰富的药用价值和超高的经济价值，它可以滋阴补益，抗疲劳抗氧化[2，3]，延缓人体衰老；可以降血糖、降血压、抗肿瘤[4]，增强特异性或非特异性免疫[5]。

因此，有着广泛药理作用的铁皮石斛一直被认为是珍贵的中药材，但是由于铁皮石斛的种子较小并且无种胚，需要和特定的真菌与其共生才能促进萌发[6]，故在天然状态下其繁殖率一直较低，并且生长缓慢，加上人为过度开采，野生铁皮石斛更是少之又少。

组织培养技术是实现植物的快速繁殖，人工栽培的最快技术手段，从20世纪70年代开始，我国已经展开了对铁皮石斛快繁技术的研究。

本文对近几年来的铁皮石斛组织培养的研究，包括外植体的选择，培养基和激素配置以及组培常见问题等情况做出综述。

1外植体的选择铁皮石斛的外植体来源十分广泛，种子、叶片、茎段、根、腋芽等都可以作为组织培养材料。

较为常见的铁皮石斛快繁技术是使用灭菌的成熟种子与幼嫩茎段作为外植体[7]，其中使用种子所需要经历的过程有种子→愈伤组织→原球茎→再生植株，而以茎为外植体只需要经过茎段→愈伤组织→丛芽→再生植株，故使用茎段作为外植体诱导成苗的速度要比种子萌发成苗的速度快[8]，以茎段建立的繁育体系其平均增殖系数小，苗木生长不一；而以种子为外植体建立的繁育体系苗木生长整齐，增殖系数大[9]。

从生产角度上看，以茎段建立的繁育体系成苗期段，处于短期代数的苗可以用于生根；而以种子萌发繁育，则可以在一段时间之内获得大量的成苗。

从无菌体系的建立的角度上看，饶宝蓉等[10]研究表明，茎段外植体明显输于种子外植体，其中种子外植体的污染率仅为8%~13%，而茎段外植体的污染率为48%~62%，是前者的大约5~6倍。

铁皮石斛的组培快繁技术研究进展

铁皮石斛的组培快繁技术研究进展作者：陈勇刘和平唐海尧林剑波张俊丽李彤丰关广胜来源：《现代园艺·下半月园林版》 2017年第9期陈勇刘和平* 唐海尧林剑波张俊丽李彤丰关广胜（阳江职业技术学院，广东阳江529566）摘要：铁皮石斛是我国名贵濒危药材，药效显著，但是传统种植方法繁殖率低，利用组织培养繁殖技术，扩大铁皮石斛产量，成为提高其经济价值的重要方式。

本文参考多年来国内外铁皮石斛组织培养相关文献，对铁皮石斛的快速繁殖关键技术进行了总结。

关键词：铁皮石斛；组织培养；快速繁殖铁皮石斛( )是兰科石斛属多年生附生草本植物，主要分布于西南和江南各省，属于国家二级保护名贵濒危药材[1]。

现代药理研究表明，铁皮石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的功效[2]。

但铁皮石斛的种子极小、无胚乳，在自然条件下，需与某些真菌共生才能萌发，故很难生产足够的实生苗用于栽培。

而传统的分株、扦插等方式繁殖率极低，为了保护这一濒危的名贵中药，国内的学者开展了铁皮石斛的组培快繁、种子萌发及菌根方面的繁殖研究，取得了一定的进展。

现将近年来铁皮石斛的快速繁殖关键技术进行总结。

1 铁皮石斛快速繁殖关键技术1.1 外植体选取铁皮石斛自然繁殖率低下，因此，利用组织培养技术来快速繁殖是解决铁皮石斛种苗的有效途径。

目前，铁皮石斛外植体主要有种子、无菌苗幼苗茎段等。

饶宝蓉[3]等研究表明，从无菌系建立效率来看，种子外植体优于茎段外植体，种子诱导感染率为8%~13%，而茎段诱导感染率为48%~62%。

从生长整齐度来看，也是种子外植体优于茎段外植体。

2.2 初代培养基选择在铁皮石斛的组织培养技术中，选择合适的培养基是尤为关键的环节，不同的物种、同一物种不同品种、同一植物不同位置的外植体材料，在不同培养阶段、不同培养目的，所对应的最适培养基也不同。

2.2.1 基本培养基。

初代培养基时常用诱导或分化培养基，培养基中的生长素和细胞分裂素的配比和浓度最为重要，诱导不定芽时，需要较高的细胞分裂素。

铁皮石斛愈伤组织诱导研究进展

铁皮石斛愈伤组织培养研究进展方春夏（浙江理工大学生命科学学院，浙江杭州310018）摘要：近年来，市场对铁皮石斛的需求日趋增加，铁皮石斛的组织培养技术也日趋成熟，本文结合了近年来对铁皮石斛的组织培养研究，从不同外植体，培养基及其培养条件、激素及添加物等方面综述了铁皮石斛愈伤组织诱导的研究概况，并展望了其发展前景。

关键字：铁皮石斛愈伤组织培养综述Advance on the callus cultivation ofDendrobium candidum Wall.ex LindlFang Chunxia（Zhejiang Sci-Tech University, Zhejiang Hangzhou 310018）Abstruct: Recent years, the market demand of Dendrobium candidum Wall.ex Lindl is keeping improving, and the technology of culitivate it has become more and more mature. In this paper, I summarize the different explants, hormone, medium, and the culture conditions to the callus cultivate of Dendrobium candidum, further more, prospects the development of it.Key words: Dendrobium candidum Wall.ex Lindl; callus ;cultivate铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall . ex Lindl）为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。

《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。

铁皮石斛的组织培养与快速繁殖研究

Final buds 765
Increase rate/ % 354. 74B**
Physical status* +++
B5
168
975
498. 90A
+++
MS
163
638
296. 02C
++
KC

136
388
181. 80D
+
* + ( 细弱) , + + ( 生长一般) , + + + ( 饱满, 健壮) , 下表同. * The physical status of buds were indicated as, + , tiny and thin; + + , or dinary; + + + , plump and vigorous. The same as below. ** 同一列不同字母者表示相互间比较差异达到极显著水平, 下表同. ** The different capital letter in the same column indicated very significant difference. The same as below.
pH 至 518. 在超净工作台上, 将铁皮石斛试管苗切成 1~ 2 cm 的茎段, 在以上培养基上接种进行芽诱导. 每组各接种 25 瓶, 随机抽取其中 20 瓶进行生长性状观测. 培养时间均为 1 个月, 培养温度( 25 ? 1) e , 光照强度1 500~ 2000 1x, 每天光照 12 h, 下同.
2 结果与分析
211 不同基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的影响 4 种基本培养基对铁皮石斛芽诱导效果, 相互之间的比较差异极显著( 表 1) , 其中以 B5 的增殖效果最