腰痛康胶囊的质量标准研究

2.5色谱条件与溶液制备
2.5.1色谱条件 色谱柱 Inertsil ODS3反相色谱柱5 m，250 mm4.6 mm 流动相 乙腈0.1%磷酸溶液28∶72 流速 1 mlmin 柱温 35℃ 检测波长 270 nm 进样量 20 l。理论板数以淫羊藿苷色谱峰计应1000。在此条件下，分别得到对照品和样品的分离色谱图图5。
[Key words]Quality standards Yaotongkang Capsules Thin layer chromatography High performance liquid chromatography
腰痛康胶囊为南昌市洪都中医院自制制剂，处方于该院骨伤科名老中医根据祖国传统中医理论，结合多年临床经验总结而成的，处方由淫羊藿、桑寄生、续断、狗脊、鹿角霜、牛膝、独活、生姜等15味中药组成，具有补肝益肾、理气通络、活血止痛的功效，用于肝肾亏虚、寒湿遇阻所致的急慢性腰痛、腰腿疼痛等症。为全面地控制药品质量，本文首次对腰痛康胶囊的质量标准进行了研究。淫羊藿为处方中君药，味辛甘性温，走肝肾二经，为补命门、强筋骨、益精气、温肾壮阳之要药[1]。淫羊藿苷作为淫羊藿的重要活性成分[2]，其含量测定多采用高效液相色谱法high performance liquid chromatography，HPLC[35]。本研究选择淫羊藿苷为研究目标进行腰痛康胶囊的含量测定试验。
2.6方法学考察
2.6.1专属性试验 用固定阈值为990的方法来检测样品中淫羊藿苷的色谱峰纯度，得出峰的纯度因子为1000，在阈值之上，说明样品中的淫羊藿苷色谱峰为单一物质峰图6。
2.6.2线性关系考察 精密吸取淫羊藿苷对照品溶液4、12、20、28、40 l，分别注入高效液相色谱仪，以进样量0.21、0.63、1.05、1.47、2.10 g为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。测得线性回归方程为 Y=4106X+192 488，r=0.998 4，线性范围为0.21～2.1 g容物5 g，研细，加水30 ml使溶解，再用乙醚振摇提取3次，每次25 ml，合并上层乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml溶解作为供试品溶液。再取蛇床子素对照品，用甲醇溶解制成1 mgml的溶液，作为对照品溶液。为增加鉴别的专属性，取去除独活的模拟处方制成阴性样品，再按上述供试品溶液的制备方法依法制成缺独活的阴性样品溶液。按照薄层色谱法《中国药典》2016年版一部附录Ⅵ B试验，分别吸取供试品溶液、阴性样品溶液各15～20 l以及对照品溶液5 l，点于同一硅胶G薄层板上，正己烷醋酸乙酯9∶3作为展开剂，展开后取出晾干，置于紫外光灯365 nm下检视。结果显示，供试品色谱与对照品色谱在相应的位置上显相同颜色的斑点图3。
1仪器与试剂
Shimadzu LC20AT系列高效液相色谱仪日本岛津公司 Sartorius BS224S电子天平赛多利斯科学仪器有限公司 MettlerToledo XS105 DualRange电子天平梅特勒托伦多称重设备系统有限公司 UV2550紫外可见光分光光度计日本岛津公司 KQ300DB型超声波清洗器昆山超声仪器有限公司 DKS12电热恒温水浴锅沈荡中新电器厂 2022S电热恒温干燥箱上海跃进医疗器械厂。
2.6.5重复性试验 取同一批腰痛康胶囊样品6份，每份约2.0 g，精密称定，按2.5.3项下的方法制备供试品溶液并按2.5.1项下的色谱条件测定含量。结果淫羊藿苷的平均含量为0.3700 mgg，RSD为0.89%n=6，表明该方法重复性良好。
2.6.6加样回收率试验 分别称取同一批次的腰痛康胶囊样品淫羊藿苷含量为0.37 mgg5份，每份约1.0 g，精密称定，分别置于已加标并经氮气吹干的5个锥形瓶中105 gml的淫羊藿苷对照品溶液各5 ml，精密加入70%乙醇20 ml，再按2.5.3项下的方法制备 分别精密吸取20 l，注入液相色谱仪，测定淫羊藿苷色谱峰面积，计算回收率，结果淫羊藿苷的平均回收率为99.2%，RSD为0.25%n=5，表明该方法的准确性良好表2。 2.7样品测定
2.6.3精密度试验 取2.5.3项下的对照品溶液，按2.5.1项下的色谱条件连续进样6次，测定淫羊藿苷的峰面积。结果淫羊藿苷峰面积的RSD为0.68%n=6，表明该方法的仪器精密度良好。
2.6.4稳定性试验 取2.5.3项下的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h后进样，测定供试品溶液中淫羊藿苷色谱峰峰面积，计算RSD为0.25%n=7，表明供试品溶液在制备后的24 h内基本稳定。
腰痛康胶囊7批，均由南昌市洪都中医院制剂中心提供，阴性样品按处方自制。淫羊藿苷对照品批 、川续断皂苷Ⅵ对照品批 、蛇床子素对照品、原儿茶酸对照品，均购自中国食品药品检验检定研究院。D101型大孔树脂上海蓝季，中国、聚酰胺粉上海谱振生物科技有限公司、硅胶G青岛海洋化工有限公司、硅胶H青岛海洋化工有限公司。乙腈色谱纯，Merck公司，水为超纯水Purifier DZG303A超纯水系统，博科公司，其余试剂均为分析纯。
取7批腰痛康胶囊样品，分别按2.5.3项下方法制备供试品溶液，并按2.5.1项色谱条件进行测定，每批样品各测3次，以外标法计算各指标成分含量，表3。
3讨论
本文考察了不同浓度的乙醇或甲醇溶液与不同的超声提取时间对淫羊藿苷的提取效果的影响，结果表明70%的乙醇超声30 min的效果较为合适，提取充分且效果稳定 此外本实验还考察了先用乙醚进行提取，继而弃去乙醚液，然后再采用乙酸乙酯提取，结果发现回收率明显偏低，且操作复杂。在色谱条件摸索过程中，大量研究采用乙腈水30∶70作为流动相，但试验所得的对照品色谱峰有拖尾现象，故考虑加酸以改善其峰形[911]。因此，选择常用的0.1%磷酸水溶液替代纯水溶液[1213]，结果发现对照品峰形有所改善。文献报道，淫羊藿苷检测波长为270 nm[1417]。本试验采用UV2550紫外分光光度计，在200～400 nm波长范围内对淫羊藿苷对照品溶液进行光谱扫描，测得在270 nm处有最大吸收，与文献报道相同。
2.4狗脊的薄层鉴别
取本品内容物5 g，加水30 ml使溶解，加盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取3次，每次25 ml，合并上层乙醚液，蒸干，残渣用1 ml甲醇溶解作为供试品溶液。再取原儿茶酸对照品，加甲醇溶解制成1 mgml的溶液作为对照品溶液。为增加鉴别的专属性，取去除狗脊的模拟处方制成阴性样品，再按上述供试品溶液的制备方法依法制成缺狗脊的阴性样品溶液。按照薄层色谱法《中国药典》2016年版一部附录Ⅵ B试验，分别吸取供试品溶液、阴性样品溶液各15～20 l以及对照品溶液5 l，点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为三氯甲烷甲醇甲酸6.0∶1.0∶0.2，展开后取出晾干，再喷5%三氯化铁乙醇溶液，于105℃加热至斑点清晰显色。结果显示，供试品色谱与对照品色谱在相应的位置显相同颜色的斑点图4。
2.5.2对照品溶液的制备 精密称取适量淫羊藿苷对照品，置于100 ml容量瓶中，加甲醇溶解制成浓度为52.5 gml的溶液，即得。
2.5.3供试品溶液的制备 取装量差异下的本品内容物，研细，精密称定2.0 g，置具塞锥形瓶中，精密移取70%乙醇25 ml，称定重量，静置过夜，超声处理功率250 W，频率35 kHz30 min，冷却至室温，称定重量，再用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得[68]。
[关键词]质量标准 腰痛康胶囊 薄层色谱法 高效液相色谱法
[中图分类 ] R927.2 [文献标识码] A [编 ] 16744721201610b000705
[Abstract]Objective To establish the quality standards of Yaotongkang Capsulesthods Radix dipsaci，angelica wolfberry，rhizoma etc. medicinal materials in the prescription were identified by using thin layer chromatography TLC content of epimedium glycoside in Yaotongkang Capsules was detected by reverse phase high performance liquid chromatography HPLC method.Results TLC spots were clear and well separated HPLC for sample size of epimedium glycoside in the range of 0.212.1 g was good r=0.998 4，average recovering rate was 99.2% n=5，RSD was 0.25% n=5.Conclusion The method has the advantages of simple operation，strong specificity，high accuracy，good precision and repeatability，and can be used as the quality control standard of the preparation.
取本品内容物4.5 g，研细，置具塞锥形瓶中，移入甲醇25 ml，超声处理300 W，25 kHz30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25 ml，合并正丁醇提取液，正丁醇提取液继续用氨试液洗涤2次，每次15 ml，弃去氨试液，再用水洗涤3次，每次30 ml，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，上样于D101型大孔树脂柱内径1.5 cm，长12 cm，依次用水、30%乙醇各50 ml进行洗脱，弃去洗脱液，再用70%乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液后蒸干，用甲醇1 ml溶解残渣作为供试品溶液。再取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇溶解制成1 mgml的溶液，作为对照品溶液。为增加鉴别的专属性，取去除续断的模拟处方制成阴性样品，再按上述供试品溶液的制备方法依法制成缺续断的阴性样品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2016年版一部附录Ⅵ B试验，分别吸取供试品溶液、阴性样品溶液各15～20 l以及对照品溶液5 l，点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为三氯甲烷甲醇水13∶7∶2在10℃以下放置过夜的下层溶液，展开后取出晾干，并喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点清晰显色。结果显示，供试品色谱与对照品色谱在相应的位置上显相同颜色的斑点图2。