免疫球蛋白A(IgA)测定标准操作程序SOP文件
免疫球蛋白(IgA)定量测定试剂盒标准操作程序
*免疫球蛋白(IgA)测定标准操作程序1.摘要本试剂盒适用于体外临床检验,用于测定人血清中免疫球蛋白IgA的含量。
IgA的主要功能是与抗原结合,并进一步触发抗原的分解。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中IgA的浓度。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定IgA浓度的工作人员要严格按照本 SOP程序进行, 实验室负责人监督管理;本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的免疫球蛋白(IgA)试剂盒采用的是免疫透射比浊法。
5.原理样本中的IgA与试剂中相应的抗体相遇,立即形成抗原抗体免疫复合物,在特定的缓冲环境中形成浊度,其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成正比,与相同条件下操作的校准品比较,即可求出样本中IgA的含量。
6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源:上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分:磷酸缓冲液(PH7.2)、Tween20、PEG、NaN s、羊抗人IgA抗体。
7.3试剂稳定性:试剂避光保存于 2-8E,若无污染,可稳定至失效期,本试剂有效期为 12个月。
试剂不可冰冻。
R1、R2打开后冷藏于分析仪中可稳定 28天。
7.4试剂准备:试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序:使用上海科华生物工程股份有限公司试剂盒内提供的校准品对自动分析仪进行校准。
由a、b、c、d、e五只组成,浓度见瓶签。
校准品可溯源至国际参考物质ERM4708.2质控品:使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控,加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装,在2-8C冰箱可稳定到失效期,使用前用5ml去离子水复溶,待质控物充分溶解(大约 30分钟)后使用。
8.3质控数据管理:按程序对检验后的质控结果进行转换,对质控数据进行分析处理,如出现失控值,应及时分析失控原因,并填写好相关失控记录。
抗球蛋白试验标准操作规程(sop)
抗球蛋白试验标准操作规程一、目的规范抗球蛋白的技术操作,保证鉴定结果准确有效。
二、适用范围输血科日常抗球蛋白试验。
三、原理本试验是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。
即用已知抗原的红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体,或用已知抗血清测定受检红细胞上相应抗原。
此法可用于鉴定血型和检查血清中不完全抗体、输血前交叉配血试验及其他特殊研究。
四、设备与试剂试剂:(1)抗人球蛋白血清(2)受检血清(或已知抗体的血清)(3)5 %已知抗原的红细胞悬液(或5 %受检红细胞悬液)(4)不完全抗D 血清(5)AB 型血清(6)5 %阳性红细胞悬液设备:普通离心机,血型血清学专用离心机,显微镜。
五、步骤和方法1.方法(1)取试管3 支,标明受检管、阳性对照及阴性对照。
(2)按下表将各反应物加入相应试管内。
(3)混匀,置37 ℃水浴1 小时,用生理盐水洗涤3 次。
末次洗涤后,将上清液除尽,并用滤纸将附着于管口的盐水吸去,每管各留红细胞悬液1 滴。
(4)每管各加适当浓度抗人球蛋白血清1 滴,混匀,以1000r/min 离心1min ,观察结果。
(5)结果判定。
阳性对照管凝集,阴性对照管不凝集,受检管出现凝集者为阳性,表示受检血清中有不完全抗体(或受检红细胞上有相应抗原),如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。
(6)效价滴定。
如受检血清中检出有不完全抗体,可将受检血清以盐水作倍量稀释后,按上法进行测定。
六、注意事项(1)血清与相应红细胞在37 ℃水浴中致敏的时间经研究发现,如致敏1 小时,75 %的抗体吸附于红细胞上,如致敏时间延长达2 小时,抗体吸附达95 %;如以低离子强度盐水溶液(LISS)代替生理盐水配制5 %红细胞悬液,则致敏时间可减少,大多数抗体经致敏15 ~30min 即可,但抗Fy 和抗Jk 抗体需较长的孵育时间。
(2)红细胞洗涤应迅速,不应当中断停止,洗涤用盐水要足量,并用力冲入管底,使压积于管底的细胞分离。
免疫球蛋白IgA测定
免疫球蛋白IgA测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。
2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白A抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物,出现凝集,进行透射比浊检测。
通过加入PEG可促使反应迅速达到终点,可增加灵敏度,降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。
3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1 试剂:上海罗氏诊断产品有限公司IgA试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014)4.1.1 试剂组成R1:TRIS 缓冲液:20 mmol/l,pH 8.0;氯化钠:200 mmol/L;PEG:3.6%;防腐剂和稳定剂。
R2:抗人免疫球蛋白A抗体(羊):取决于滴度;TRIS缓冲液:20 mmol/l;氯化钠:150 mmol/L;防腐剂。
4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存:2-8°C下保存期限:见试剂标签上的有效期。
机上稳定期:90天。
4.1.4变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染则试剂不能使用。
4.2 校准品:使用罗氏多项生化校准品提供的IgA校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
生化项目SOP
沭阳县仁慈医院检验科生化室作业指导书文件编号:SYXRCYYLAB-SH –SOP第A版编制:路珊珊钱丽萍审核:李萍批准:侯波生效日期:2012年10月01日沭阳县仁慈医院检验科修订页血清总胆红素(T-BIL)测定一、目的保证总胆红素测定的结果准确、可靠。
二、修改程序本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:质量主管、授权人(科主任)。
三、适用范围钒酸盐氧化法测定总胆红素。
四、试剂来源本标准操作程序适用于上海执诚生物科技股份有限公司生产的总胆红素测定试剂盒。
五、溯源全国临床检验操作规程(第二版)。
六、原理此方法基于样品中的总胆红素在pH3.0 环境中,在有机复合物氧化剂的作用下,可以被氧化成胆绿素,而胆红素特有的黄色也随即消失,在450nm 处测定吸光度的变化,即可计算出样品中总胆红素的浓度。
七、试剂R1:硫磺酸缓冲液(pH2.9) 0.1mol/L表面活性剂R2:磷酸缓冲液(pH7.0) 10mmol/L有机钒酸盐 4mmol/L 不同批号试剂盒中各组份不能互换。
本试剂对光敏感,2~8℃密闭避光保存可以稳定18个月(勿冷冻);首次开启试剂后,避光保存于2~8℃防污染环境中,可继续稳定至效期。
校准液: Randox 公司提供的系列校准品。
八、标本采血清总胆红素(T-BIL)测定血清、血浆。
样本2~8℃保存可以存放约3天,-20℃保存可以存放3个月,但只能冻融一次。
九、操作步骤1、标本编号,分离血清,依顺序置样品架上。
2、按标本编号在全自动化生化仪器上输入标本的基本信息和测定要求,进行测定。
3、仪器校准:将校准液置试管架上,输入校准液浓度,然后进行测定(测定参数与下同),其吸光度贮存在电脑中,浓度值测定符合要求即可应用。
一般每3~6个月校准一次,若更换不同批号的试剂、质控超标或仪器维修处理后应进行校准。
4、测定参数:血清量 7μl试剂Ⅰ 200μl试剂Ⅱ 50μl主波长 444nm次波长 548nm反应类型终点法;负反应测定时间 10分钟温度 37℃报告单位μmol/L5、结果计算:ΔA 样品样本中总胆红素的含量 = ------- ×标准液浓度ΔA 标准单位换算:mg/dl×17.1=μmol/L十、正常参考值5.1-20μmol/L血清总胆红素(T-BIL)测定十一、室内质控质控方法:每天测定样品前做一组质控,在标本中间插一组质控,最后再做一组质控品,共三组。
紫外分光光度法测定免疫球蛋白A
203科技资讯 S CI EN CE & T EC HNO LO GY I NF OR MA TI ON 学 术 论 坛测定血清中免疫球蛋白A 的含量对诊断和指导治疗肝脏疾病、结缔组织疾病和肾病有实际的临床意义[1]。
目前,检测IgA的方法主要有酶免疫分析法、免疫荧光法、免疫比浊法、共振散射法[2]等。
本文将吸收光谱与高选择性的免疫反应相结合,建立了一种定量检测人血清中免疫球蛋白A 的新方法。
本法具有操作简便、快速,所用仪器简单等特点,用于样品分析,结果满意。
1 实验方法在10m L 比色管中分别加入0.4m L p H 值为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液,0.30mL经过适当比例稀释的羊抗人IgA溶液,0.60mL的PEG4000,一定量的IgA溶液,用二次纯水定容至3m L ,摇匀,静置30分钟。
用紫外可见分光光度计扫描得到体系的吸收光谱,测定283nm波长处的吸光强度A;不加IgA作空白,测其吸光强度I b ;计算ΔA =A -A b 。
2 结果与讨论根据免疫反应原理,IgA抗原与IgA抗体发生特异性结合形成抗原-抗体复合物微粒。
P E G 为一种无电荷的线性分子的多糖,能够解除抗原抗体周围的电子云和水化层,促进两者靠近并结合成大复合物,加快反应速度。
IgA在一定浓度范围内随其浓度的增加,在283nm 处的吸收强度呈线性增强,据此可建立IgA的免疫吸收光谱分析法。
2.1吸收光谱IgA和羊抗人IgA血清在283nm处都有1个吸收峰,随着IgA浓度增大该吸收峰强度呈线性大大增强。
本实验未采用试剂厂家推荐波长340nm,因为在340nm处吸光度值变化幅度小,为了增加灵敏度,本实验采用283nm为测定波长。
2.2p H 值、缓冲溶液用量的选择分别测定了pH值为5.8~8.0范围内体系在Na 2HPO 4-柠檬酸缓冲溶液中ΔA 283nm 的波动变化。
结果表明,当pH 值为6.2时,ΔA 283nm 达到最大值,增加灵敏度的效果达到最好,所以本文选择了p H 值为6.2的Na 2H P O 4-柠檬酸缓冲溶液;又考察了缓冲溶液的用量从0~0.8m L 对ΔA 283n m 的影响。
免疫球蛋白检测作业指导书
免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)检测作业指导书1 检验目的规范免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)检测试验,确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法免疫透射比浊法。
3 检测原理样品中的免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)抗原分别与试剂中的IgG、IgA、IgM抗体发生免疫反应,生成免疫复合物,形成一定浊度,其浊度与免疫球蛋白的含量成正比。
与通过同样处理的校准液比较,即可计算出样品中免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)的含量。
4 样本血清处理方法见生化标本采集程序。
稳定性:2~8℃稳定4天。
5 仪器和试剂5.1 仪器:美国贝克曼-库尔特DXC800全自动生化仪。
5.2 试剂:由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂(详见试剂说明书),超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物:Rodan混合校准品,符合WHO标准,贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物:Rodan正常值及病理值质控品,符合WHO 标准,贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准:每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准:试剂盒在仪器上放置稳定期后;试剂批号更换后;由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作,操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围IgG: 7~16.5g/L,IgA: 0.59~3.5g/L,IgM: 0.48~2.12g/L。
9 警告/危急值未规定。
10 性能指标10.1 线形上限:IgG ≤32g/L,IgA ≤7 g/L,IgM≤24g/L。
10.2 精密度:批内CV ≤4%,批间CV≤8%。
10.3 准确度:不准确度≤8%。
10.4试剂贮存:试剂密闭避光贮存2~8℃可稳定12个月。
11 干扰因素及变异的潜在来源标本出现溶血对测定结果有一定影响。
12 临床意义12.1 免疫球蛋白增高:12.1.1 各种感染,特别是慢性细菌感染如骨髓炎、慢性肺脓肿等,血Ig可升高。
人免疫球蛋白 A(IgA)酶联免疫分析试剂盒 说明书 本试剂盒仅供
人免疫球蛋白A(IgA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围:7.8ng/ml-500ng/ml最低检测限:1.95ng/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人IgA,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IgA含量。
说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IgA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IgA抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的IgA呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
免疫球蛋白A(IGA)测定试剂盒(免疫比浊法)产品技术要求ldm
免疫球蛋白A(IGA)测定试剂盒(免疫比浊法)适用范围:本产品用于体外定量测定人血清中免疫球蛋白A的含量。
1.1规格试剂1(R1):2×60mL,试剂2(R2): 2×12mL;试剂1(R1):4×95mL,试剂2(R2): 3×10mL;试剂1(R1):1×60mL,试剂2(R2): 1×12mL;试剂1(R1):1×20mL,试剂2(R2): 1×6mL。
1.2产品组成1.2.1试剂组成试剂1(R1)(以下简称R1):无色液体,试剂2(R2)(以下简称R2):浅黄色液体。
R1:PEG4 缓冲液:包含高分子强化剂的磷酸盐缓冲液,含有0.095%的叠氮化钠。
R2:IgA抗血清,含0.095%的叠氮化钠。
2.1 外观液体双试剂:R1为无色澄清液体,R2为浅黄色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应<0.15 ABS。
2.4 分析灵敏度浓度为70mg/dL时,吸光度变化范围在(0.08- 0.50)之间。
2.5 线性范围在[40-560]mg/dL线性范围内,线性相关系数r2≥0.995。
在(100-560]mg/dL,范围内的相对偏差≤10%;测定结果[40-100]mg/dL时绝对偏差≤10mg/dL。
2.6 精密度试剂盒测试项目精密度 CV< 5 %。
2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对偏差应< 6 %。
2.8 准确度相对偏差:用参考物质作为样本进行检测,其测量结果的相对偏差应不超过±10%。
2.9稳定性原包装试剂,在(2-8)℃下有效期为18个月,取失效期的试剂盒检测其线性和准确度,试验结果满足2.5、2.8的要求。
免疫球蛋白G(IgG)测定标准操作程序SOP文件
定标频率:A试剂批号更换
B由质控结果决定
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-44
免疫球蛋白G(IgG)测定
版序:ABCD
页码:第2页,共3页
4.3质控物
来源:Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
4.2校准物
来源:ROCHE配套校准物,符合WHO标准,CRM470,具体如下:
S1:0.9%的NaCl
S2-6:Preciset Serum protein
批特异的定标液的靶值乘以下列的转换因子,用来计算定标曲线。
S2:0.10
S3:0.25
S4:0.50
S5:1.00
S6:2.00
贮存条件:校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
3标本
血清及肝素-Li、Na-肝素或EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性:20-25℃3个月
4-8℃3个月
-20℃6个月
4试剂
4.1试剂
来源:ROCHE配套试剂(详见试剂说明书)。
贮存条件及稳定性:未打开试剂盒:2-8℃储存至效期末
R1:打开后机上稳定90天
R2:打开后机上稳定90天
准备:直接使用。
IgG是再次免疫应答的主要抗体,具有吞噬调理作用、中和毒素作用、中和病毒作用及激活补体经典途径。IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白,并且对胎儿及新生儿有保护作用。婴儿在6个月左右建立免疫系统,在18个月左右达到成人水平。
多克隆IgG水平的升高见于系统性红斑狼疮、慢性肝炎及传染性疾病中。单克隆IgG水平的升高见于骨髓瘤。
免疫球蛋白A(IgA)测定标准操作程序SOP文件
S2:0.10
S3:0.25
S4:0.50
S5:1.00
S6:2.00
贮存条件:校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备:直接使用。
定标频率:A试剂批号更换
B由质控结果决定
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-42
免疫球蛋白A(IgA)测定
5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6操作
见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。参数设置见附表。
7参考范围
IFCC/CRM470
Roche
mg/dl
g/l
mg/dl
g/l
70-400
0.7-4.0
男性:100-490
女性:
85-450
1.0-4.9
0.85-4.5
版序:ABCD
页码:第2页,共3页
4.3质控物
来源:Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
其它适合的质控品
贮存条件:置2-8℃冰箱至有效期。
准备:直接使用。
质控间隔时间及限制:应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内,如果超出范围,实验室应根据情况采取措施。
在慢性肝炎/慢性感染及自身免疫性疾病时,会出现多克隆的IgA水平升高,而骨髓瘤时会出现单克隆IgA水平升高。
IgA的合成降低可以见于获得性或先天性免疫缺陷疾病,如先天性无丙种球蛋白血症。
另外烧伤等蛋白的缺失也可以造成水平降低。
应用特异性抗体定量检测血清中的球蛋白已经成为非常具有价值的诊断指标。
免疫学检验室内质量控制标准操作规程
免疫学检验室内质量控制标准操作规程【目的】保证ELISA 检测结果准确可靠, 充分发挥其方法学的优点。
【该SOP 变动程序】本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。
【方法】【分析前质控】1. 人员培训实验是人操作的,因此检验人员需经过培训,熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:[1] 检验项目的基本原理(ELISA 原理);[2] 临床意义;[3] 熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;[4] 熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);[5] 熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识。
[6] 某些特殊项目的检测如抗HIV 等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。
2. 室内质控血清的制备:[1] 收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清,到一定量(够本室使用3-6 个月的量);[2] 传染性病毒阳性需经56℃、10 小时灭活后使用;[3] 过滤,除纤维沉淀物;[4] 稀释,用正常人血清或10%小牛血清PBS 溶液稀释;[5] 测定值,与定值参考品进行对比、求值,一般定在Cut Off 值附近的阳性值;[6] 分装小瓶(每日用量),加盖、贴签,-20℃冻存备用【试剂盒选择】卫生部规定乙肝试剂,丙肝试剂,艾滋病试剂,梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格,并贴有防伪标签的产品。
【试剂盒评价】试剂评价需要有权威的血清考核盘(Panel)进行检测,价格昂贵,操作繁琐,一般实验室不易开展,可以通过以下信息,了解试剂质量。
1.根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告,了解其质量水平,按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂;2.通过询问试剂包被物的组成,如原料来源(基因工程或合成多肽),片段的组合(按比例混合或化学合成),片段的长短等判断试剂的优劣;3.参考室间质评报告中对试剂的评价结果,了解不同试剂的质控成绩。
猪免疫球蛋白A
拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
7、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37℃避光显色15min。
10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。
最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【猪免疫球蛋白A(IgA)Elisa试剂盒样本要求】1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。
【猪免疫球蛋白A(IgA)Elisa试剂盒注意事项】1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为2.5-80μg/mL,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(2.5-80μg/mL范围内),乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
医院检验中心IgE测定标准操作程序
医院检验中心IgE测定标准操作程序(SOP)
1.该SOP变动程序
本SOP因试剂说明、仪器操作程序的修改或其他原因所致的改动,可由化学发光免疫测定技术主管修改,并报经科主任批准签字。
2.操作方法
(1)样品收集和处理
样品类型:血清,至少200μl。
保存方法:血清室温下放置不超过8小时,2-8℃冷藏不超过48小时,超过应在-20℃以下冷冻。
样品只
能冷冻1次,且复融后应彻底混匀。
(2)试剂 (试剂、定标液、质控品均由BECKMAN公司提供) IgE检测试剂
(3)定标
当使用新批号的试剂时需先定标。
IgE用B定标液定标。
事先将标准曲线条码和定标液浓度条码扫描入仪器。
(4)质控
定标后必须做质控,判断样品测值是否准确也可做质控,事先将质控物浓度输入仪器。
(5)上机检测
参见ACCESS仪器标准操作程序。
3.参考值
IgE <1岁 0.0178-0.6784nmol/L
1-4岁 0.0051-4.4837nmol/L
5-10岁 0.0064-5.0116nmol/L
11-15岁 0.0242-2.1730nmol/L
>15岁 0.0000-4.8204 nmol/L
4.相关技术指标
项目 IgE
测定范围 0.0191-38.2569
灵敏度 0.0191
5.本SOP不尽之处请详阅相关项目试剂说明书。
免疫球蛋白检测标准
免疫球蛋白检测标准
免疫球蛋白检测通常包括对不同免疫球蛋白亚类(IgA、IgG、IgM 等)的测定。
这些检测可用于评估免疫系统的功能、检测感染或自身免疫疾病,以及监测治疗的效果。
检测的标准可能因实验室、地区和具体的免疫球蛋白亚类而有所不同。
以下是一些可能用于解释免疫球蛋白检测结果的一般标准:
1.正常范围:免疫球蛋白的正常范围可能因年龄、性别和实验室
的不同而异。
通常,实验室会提供一个正常参考范围,以帮助
解释患者的检测结果。
2.免疫球蛋白亚类比例:正常血清中各种免疫球蛋白亚类的比例
可能是相对稳定的,某些情况下异常的亚类比例可能提示潜在
的免疫问题。
3.特定疾病标志物:在某些情况下,特定的免疫球蛋白检测可以
用作某些疾病的标志物。
例如,抗核抗体(ANA)是自身免疫
疾病的标志物之一。
4.疫苗免疫:对于已接种疫苗的人群,免疫球蛋白的产生可能与
疫苗类型和接种时间有关。
特定的抗体水平可能被认为是免疫
有效性的指标。
请注意,这只是一般性的指导,具体的标准应该根据具体实验室的方法和仪器、患者的个体情况以及检测的免疫球蛋白亚类而有所不同。
因此,对于免疫球蛋白检测结果的解释应该由专业医疗人员进行,他们会结合患者的整体状况和临床信息进行综合评估。
免疫球蛋白IgA测定
免疫球蛋白IgA测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。
2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白A抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物,出现凝集,进行透射比浊检测。
通过加入PEG可促使反应迅速达到终点,可增加灵敏度,降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。
3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1 试剂:上海罗氏诊断产品有限公司IgA试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014)4.1.1 试剂组成R1:TRIS 缓冲液:20 mmol/l,pH 8.0;氯化钠:200 mmol/L;PEG:3.6%;防腐剂和稳定剂。
R2:抗人免疫球蛋白A抗体(羊):取决于滴度;TRIS缓冲液:20 mmol/l;氯化钠:150 mmol/L;防腐剂。
4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存:2-8°C下保存期限:见试剂标签上的有效期。
机上稳定期:90天。
4.1.4变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染则试剂不能使用。
4.2 校准品:使用罗氏多项生化校准品提供的IgA校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
ISO15189S免疫球蛋白A(IgA)测定(免疫比浊法)
4.标运输:室温运输
5.标本拒收标准:细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
6.试剂
6.1试剂名称:免疫球蛋白A检测试剂盒
6.2 试剂生产厂家:芬兰Orion诊断试剂公司
6.3 包装规格:60Test/kit
8.5如下准备各比色管:
定标液
空白
定标液
测定
样品
空白
样品
测定
样品
定标液
空白缓冲液
抗血清应用液
—
50ul
500ul
—
—
50ul
—
500ul
50ul
—
500ul
—
50ul
—
—
500ul
8.6轻轻摇动混匀,室温18-25℃放置30±5分钟。
8.7仪器测试步骤:参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
9.结果计算:仪器直接计算并打印结果。
1.原理
分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中,经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。散射光结果和血清中的IgA浓度成正比。
2.标本采集:
2.1标本采集前病人准备:受检者空腹
2.2标本种类:血清或血浆
2.3标本要求:取被检者静脉血2ml,室温放置不超过4小时,分离血清备用。
6.4 试剂盒组成:
缓冲液30ml
空白缓冲液 30ml
抗血清试剂 0.5ml
定标液0.5ml
磁卡 1张
7.仪器设备:
7.1仪器名称:Orion TurboxRplus特定蛋白分析仪
免疫球蛋白检验方法
免疫球蛋白检验方法
一、适用范围
适用于检测人血清、血浆中免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM、IgE)水平。
二、原理
免疫球蛋白的检测利用免疫沉淀反应,配制特异性抗血清与病人标本混合,当IgG、IgA、IgM、IgE抗体形成沉淀时,以比色检测,检测抗体浓度的变化,从而检测血清中免疫球蛋白含量。
三、试剂盒选择
抗体用于免疫球蛋白检测的试剂盒应选择经认证的、适用于检测人免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM、IgE)水平的试剂盒(如ELISA试剂)。
四、仪器使用
根据使用的试剂盒类型,选择适当的仪器,如ELISA仪、比色检测仪等,以便进行免疫球蛋白检测。
五、样本收集
根据使用的试剂盒,收集血清或血浆样本,每次检测取0.5ml样本,如果多次检测,可放置在4℃保存,4℃以下冷冻保存不超过一个月。
六、试剂配制
1.将用于 ELISA 检测的准备好的抗体、病人标本等试剂放置室温,将其涂层板中;
2.按照试剂盒的使用说明,准备其他试剂,并用抗体标本反应
液调整到稀释抗体的浓度;
3.将抗体标本反应液和病人标本混合涂洒到涂层板的检测格中,放置室温反应15分钟;
4.用洗涤液洗涤检测格,然后用抗体反应液复活格中的抗体,放置室温反应10分钟;
5.用洗涤液洗涤检测格,然后用检测液检测抗体,放置室温反应1小时;
6.用洗涤液洗涤检测格,然后用终止液终止反应,放置室温反应30分钟;
7.将涂层板置于比色检测仪中,检测抗体浓度的变化,从而检测血清中免疫球蛋白的含量。
七、报告
根据比色检测仪结果,判定血清中IgA、IgG、IgM、IgE含量,并根据参考值报告免疫球蛋白水平。
鹅(Goose)免疫球蛋白A(IgA)-NEWA
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断鹅(Goose)免疫球蛋白A(IgA)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被免疫球蛋白A(IgA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白A (IgA)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1. 酶标仪(450nm)2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、20、40、80、160、320μg/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
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10.5 IgA的浓度低于5000mg/dl时不会有HOOK效应。
10.6 IgA,IgG,IgM之间没有交叉反应。
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-42
免疫球蛋白A(IgA)测定
版序:ABCD
页码:第3页,共3页
在慢性肝炎/慢性感染及自身免疫性疾病时,会出现多克隆的IgA水平升高,而骨髓瘤时会出现单克隆IgA水平升高。
IgA的合成降低可以见于获得性或先天性免疫缺陷疾病,如先天性无丙种球蛋白血症。
另外烧伤等蛋白的缺失也可以造成水平降低。
应用特异性抗体定量检测血清中的球蛋白已经成为非常具有价值的诊断指标。
准备:直接使用。
4.2校准物
来源:ROCHE配套校准物,符合WHO标准,CRM470,具体如下:
S1:0.9%的NaCl
S2-6:Preciset Serum 。
S2:0.10
S3:0.25
S4:0.50
S5:1.00
S6:2.00
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-42
免疫球蛋白A(IgA)测定
版序:ABCD
页码:第1页,共3页
1测定方法
免疫比浊法。
2测定原理
标本中的免疫球蛋白A(IgA)与试剂中的抗IgA抗体相结合,发生特异性的抗原-抗体反应,形成不溶性免疫复合物,检测浊度,免疫球蛋白A(IgA)的浓度与浊度成正比。
7参考范围
IFCC/CRM470
Roche
mg/dl
g/l
mg/dl
g/l
70-400
0.7-4.0
男性:100-490
女性:
85-450
1.0-4.9
0.85-4.5
8线性范围
本法线性范围为50-800mg/dl,不准确度允许范围 ±3SD,不精密度CV=1.2%,灵敏度为4mg/dl。
9注意事项
3标本
血清及肝素-Li或Na/K-肝素, EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性:20-25℃7天
4-8℃3个月
-20℃6个月
4试剂
4.1试剂
来源:ROCHE配套试剂(详见试剂说明书)。
贮存条件及稳定性:未打开试剂盒:2-8℃储存至效期末
R1:打开后机上稳定90天
R2:打开后机上稳定90天
11临床意义:
IgA约占血浆中免疫球蛋白的13%,它的作用是保护皮肤及粘膜免受微生物的感染,并且能够结合毒素以及与溶酶体一起起到抗病毒及细菌感染的功能。分泌型的IgA免疫球蛋白,主要由唾液腺/泪腺及肠腺中分泌。分泌型的IgA对于防止局部感染有重要作用。在血清中,IgA以单体/二聚体及三聚体等形式存在,而分泌型的IgA主要以二聚体形式存在,并结合有另外的一条具有分泌功能的链。
其它适合的质控品
贮存条件:置2-8℃冰箱至有效期。
准备:直接使用。
质控间隔时间及限制:应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内,如果超出范围,实验室应根据情况采取措施。
5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6操作
见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。参数设置见附表。
贮存条件:校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备:直接使用。
定标频率:A试剂批号更换
B由质控结果决定
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-42
免疫球蛋白A(IgA)测定
版序:ABCD
页码:第2页,共3页
4.3质控物
来源:Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
9.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.2换算公式:mg/dl×0.01=g/l
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力:
10.1标准:回收率在90%-110%之间。
10.2黄疸:黄胆指数达到63时不会有明显干扰。(直接和间接胆红素浓度约为63mg/dl)
10.3溶血:溶血指数达到1000时不会有明显干扰。(血红素浓度约1000mg/dl)