恒河猴促滤泡激素生物测定法的建立和应用
不同时间针刺对雌性恒河猴生殖内分泌影响的实验研究
不同时间针刺对雌性恒河猴生殖内分泌影响的实验研究[摘要]方法:采用2×2析因设计,分别观察不同时间针刺对实验动物月经周期前半期外周血FSH,LH,E2,T分泌水平的影响。
结果:(1)早晨组、晚上组、早晚组各激素分泌均出现明显抑制,空白组及非穴组则呈现大致正常的分泌状态。
(2)各时间针刺组的各种激素分泌峰的上升速度及峰值增值变化与空白组相比,差异均有非常显著性意义(P0.05)。
(3)不同时间针刺组组间比较,对FSH,T分泌峰的上升速度及峰值增值变化的影响由强到弱依次为早晨组、早晚组、晚上组;对LH分泌峰的上升速度及峰值增值变化的影响由强到弱依次为早晨组、晚上组、早晚组;对E2分泌峰的上升速度及峰值增值变化的影响由强到弱依次为晚上组、早晚组、早晨组。
(4)针刺1天1次与1天2次比较,其作用差异无显著意义。
[主题词]时间因素;促卵泡成熟激素/血液;黄体生成素/血液;雌二醇/血液;睾酮/血液在人类中,各种生理生化功能、行为和反应以至细胞形态和结构等都具有节律变化。
本课题组的前期实验已证实[1,2]:根据生殖内分泌周期性变化的规律,在月经周期卵泡期实施恰当的治疗,对促卵泡成熟激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、和睾酮(T)的分泌高峰有显著的抑制效应,并认为[3]针灸时效性是影响针灸效果的重要因素之一。
为进一步观察时间因素对生殖内分泌抑制性效应的影响,以雌性恒河猴为研究对象,采用放射免疫分析法和体外生物测定法,系统观察并对比了不同时间针刺对雌性恒河猴月经周期前半期外周血中FSH,LH,E2,T分泌水平的影响。
报告如下。
1材料与方法1.1实验材料实验动物:健康育龄雌性恒河猴,由福建省计划生育非人灵长类实验中心提供,单笼饲养,猴舍通风良好,自然光照,每天喂混合营养颗粒饲料和时令瓜果,自由进水。
器材:华佗牌32号1寸、1.5寸毫针;G6805-Ⅲ电针治疗仪;80-2离心沉淀器。
试剂:盐酸氯胺酮注射液,上海第一制药厂生产,批号98041;雌二醇、睾酮、胶原酶Ⅱ、牛血清白蛋白(BSA)、HEPES购于SIGMA公司;McCoy′5A培养基购于GIBCO公司;3H-雌二醇、3H-睾酮购于AMERSHAM公司;hFSH,oLH标准品、睾酮、雌二醇放射免疫测定药盒由中国科学院动物研究所庄之临教授提供。
恒河猴睾丸支持细胞对间质细胞分泌睾酮的研究
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恒河猴和食蟹猴ABO血型竞争性等位基因PCR(KASP)检测方法的建立
恒河猴和食蟹猴ABO血型竞争性等位基因PCR(KASP)检测方法的建立杨玲焰;王立鹏;荣荣【摘要】目的人的ABO血型常规免疫学检测方法不适用于实验猴猕猴血型检测,而实验猴血型鉴定在器官移植等研究中必不可少.本研究目的是建立一个快速、可靠的恒河猴与食蟹猴ABO血型核酸鉴定方法.方法本室建立了一种新的ABO血型的分子学检测方法,利用竞争性等位基因PCR(KASP)技术,通过识别与血型密切相关功能基因的2个SNP位点上的碱基,对恒河猴与食蟹猴血型进行分型,并通过设计2个SNP位点外围的普通PCR引物,对KASP方法鉴定出的血型样本进行Sanger 测序鉴定.结果比对了15份用Taqman PCR方法已确定血型的食蟹猴全血核酸样本,新建立的KASP分型结果与原血型结果完全一致,为了保证KASP方法鉴定结果的准确性,实验人员用新建立的普通PCR方法通过Sanger测序验证了KASP方法与测序结果完全一致.为了对新建的KASP方法重复性进行验证,选取了已知血型的6份实验猴全血,每份血样做5个重复,结果显示该方法有极好的重复性.进一步用新建的KASP方法检测了51份临床样本,其中食蟹猴样本38份,恒河猴样本13份,同一样本的2个位点的血型结果完全一致,其中A型血9份(17.6％),B型血19份(37.3％),AB型血23份(45.1％),未检出O型血.同时从A型、B型、AB型的临床样本中,各型分别选了5个样本,进行普通PCR扩增及测序分析,证明2个SNP位点上的序列与KASP分型结果一致.结论新建的KASP血型鉴定方法准确性高,可用于实验恒河猴与食蟹猴的ABO血型的快速检测.该方法相较于传统的血清学或测序方法,简单快捷,经济可靠,结果易于判读,同时对样本的要求比传统的血清学方法低,新鲜或存放较久的全血、唾液或核酸等都可以用于检测.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2019(029)008【总页数】6页(P31-36)【关键词】食蟹猴;恒河猴;ABO血型;竞争性等位基因PCR【作者】杨玲焰;王立鹏;荣荣【作者单位】苏州西山生物技术有限公司,苏州 215123;苏州西山生物技术有限公司,苏州 215123;西交利物浦大学,苏州 215123【正文语种】中文【中图分类】R-33由于猕猴属(Macaques)动物与人类拥有共同祖先，他们的基因相似率大于93%，且在神经学、生理学、代谢类疾病及对微生物的敏感性方面表现的都非常相似，所以猕猴属动物尤其是食蟹猴(Macaca fascicularis, Cynomolgus monkeys)和恒河猴(Macaca mulatta, Rhesus monkeys)作为非人灵长类实验动物模型，被广泛用于生物医药研究中，近几年，生物医药研究领域的投入不断加大，干细胞和移植研究也得到飞速发展，而对用于这方面研究的供体和受体动物的血型要准确的掌握，ABO血型是最重要的血型系统，所以当实验猴被用于研究时就需要明确知道它的ABO血型，才能防止在移植中出现严重的排斥反应，导致实验的失败及资源的浪费。
一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法[发明专利]
![一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/27505daccf84b9d529ea7a35.png)
专利名称：一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法专利类型：发明专利
发明人：王莉,陈波,刘斌,王汉蓉,岳焕勋,李宏霞
申请号：CN201010263384.8
申请日：20100826
公开号：CN102370973A
公开日：
20120314
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法，它是由雌性恒河猴为试验对象，经皮下注射促黄体激素LH，60IU/只/次，每天2次，连续7天，制备成恒河猴卵巢及卵泡生成模型。
本发明还提供了促黄体激素LH在制备激活卵巢及其卵泡发育的药物中的用途。
本发明造模方法使用动物为猴，其生理学、血液学、血液生化等背景数据丰富易得，并且猴与人生物学背景相似，猴的结果能较好地预示药物在临床上反应；多方面、多角度评估，结果能较好、客观地反应药物对生殖系统的药效作用，此外，本模型使用的动物(猴)及仪器(B超仪、显微镜、细胞培养装置等)简单易得，具有通用性。
申请人：四川大学华西医院,成都华西海圻医药科技有限公司,国家成都中药安全性评价中心
地址：610041 四川省成都市外南国学巷37号
国籍：CN
代理机构：北京律诚同业知识产权代理有限公司
代理人：李高峡
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联合使用米索前列醇和米非司酮以获取恒河猴胎猴样品
联合使用米索前列醇和米非司酮以获取恒河猴胎猴样品赵理;罕园园;唐东红【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2009(029)009【摘要】目的建立获取恒河猴早、中、晚期不同胎龄胎猴样品的新方法.方法通过B超确定恒河猴孕猴怀孕天数后,皮下注射米非司酮,在其阴道后穹窿放置米索前列醇以促使孕猴终止妊娠,获取胎猴样品.通过bishop评分、孕猴终止妊娠率和胎猴脑组织总RNA提取质量评估该新方法效果.结果实验组孕猴的宫颈评分和胎猴3日娩出率均高于对照组(P<0.05),从胎猴脑组织中提取的总RNA质量良好.结论联合使用米索前列醇和米非司酮是一种有效而安全的获取恒河猴胎猴样品的新方法.【总页数】3页(P908-910)【作者】赵理;罕园园;唐东红【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室,北京,100005;中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所,昆明,650118;中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所,昆明,650118【正文语种】中文【中图分类】Q-34【相关文献】1.恒河猴血管内皮细胞原位获取的实验研究 [J], 潘明新2.米非司酮对恒河猴促性腺激素分泌水平的抑制作用 [J], 王训立3.恒河猴睾丸内激素调控的离体研究Ⅲ--雌激素对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响 [J], 王训立;李荣皓;庄临之;魏振年4.SHIV1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定[J], 丛喆;陈志伟;魏强;蒋虹;金光;陈霆;王卫;陶真;姚南;熊竞;吴芳新5.米非司酮对恒河猴母胎界面细胞凋亡和凋亡分子p53表达的影响 [J], 魏鹏;陶世信;张学森;胡召元;刘以训因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恒河猴促黄体激素生物测定法及应用研究
恒河猴促黄体激素生物测定法及应用研究
王训立
【期刊名称】《医学研究杂志》
【年(卷),期】2008(37)12
【摘要】目的建立恒河猴促黄体激素(LH)生物测定法.方法利用LH体外生物测定法,测定恒河猴血清中LH含量.结果测定方法的灵敏度为0.05ng/管,批内和批间误差分别为(3.18±1.52)%和(7.56±3.41)%,证明该方法准确性高;恒河猴血清中LH含量反应曲线和hLH标准曲线平行良好,说明该方法可以用来检测恒河猴血清中的具有生物活性的LH变化,反映了动物正常的生理状态;回收实验表明,在该测定方法中加入10ng、20ng、40ng hLH时的回收率分别为(99.12±4.56)%、
(99.31±6.49)%、(101.02±7.58)%,说明测定结果的可靠性.结论本实验所建立的LH体外生物测定法灵敏度高,稳定性强.
【总页数】4页(P41-44)
【作者】王训立
【作者单位】350108,福州,福建中医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.家蚕促前胸腺激素的生物测定法 [J], 普后;张建安
2.053 雄烯二酮、胰岛素和促黄体激素对人类卵巢颗粒黄体细胞产生雌、孕激素的
影响 [J], 李云;吴瑞芳
3.恒河猴促滤泡激素生物测定法的建立和应用 [J], 王训立
4.黄体生成素释放激素拮抗类似物（TX51）抑制成年恒河猴促性腺激素及甾体… [J], 胡自正;方溪
5.大菱鲆促黄体激素受体基因的克隆及其生物信息学分析 [J], 贾玉东;孟振;牛化欣;刘新富;高淳仁;雷霁霖
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恒河猴实验报告
恒河猴实验报告恒河猴实验报告引言：恒河猴（Macaca mulatta）是一种常见的灵长类动物，广泛分布于南亚地区。
由于其与人类基因的相似性较高，恒河猴成为了许多医学和生物学研究的重要模型动物。
本报告旨在介绍恒河猴实验的目的、方法和结果，并探讨其在科学研究中的应用。
实验目的：本实验的目的是研究恒河猴的认知能力和学习行为。
通过观察恒河猴在特定环境下的行为反应，我们可以了解其智力水平和学习能力的发展过程。
这对于进一步研究人类认知能力的起源和发展具有重要意义。
实验方法：实验中，我们选取了一组恒河猴，将其置于特定的实验环境中进行观察和测试。
首先，我们为猴子提供了一些基本的认知任务，如物体辨识和空间导航。
通过观察猴子的行为反应，我们可以评估其对物体和空间的认知能力。
此外，我们还进行了一些复杂的认知任务，如工具使用和问题解决。
通过观察猴子在实验中的行为表现，我们可以了解其学习和解决问题的能力。
同时，我们还使用了一些非侵入性的脑电图和脑成像技术，以进一步研究猴子的脑活动模式。
实验结果：我们的实验结果表明，恒河猴具有较高的认知能力和学习能力。
在物体辨识任务中，猴子能够准确地辨别不同的物体，并能够根据形状和颜色进行分类。
在空间导航任务中，猴子能够准确地找到特定位置，并能够记忆和识别不同的空间结构。
在复杂的认知任务中，猴子也表现出了出色的学习和解决问题的能力。
在工具使用任务中，猴子能够学会使用简单的工具来达到目标，如使用棍子够到远处的食物。
在问题解决任务中，猴子能够通过观察和试错的方式找到解决问题的方法。
通过脑电图和脑成像技术的应用，我们还发现了一些与认知能力相关的脑活动模式。
例如，在物体辨识任务中，我们观察到了与物体辨识相关的脑电波活动增强。
这些结果为我们进一步研究恒河猴认知能力的神经机制提供了重要线索。
讨论与应用：恒河猴实验的结果对于人类认知能力的研究具有重要意义。
通过与猴子的比较，我们可以更好地理解人类认知能力的起源和发展。
恒河猴血清孕酮含量测定方法
恒河猴血清孕酮含量测定方法王训立【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2008(18)7【摘要】目的建立恒河猴血清中孕酮含量测定方法.方法本文采用放射免疫测定技术.结果孕酮的回收率为94%,批内CV为5.1%~8.3%,批间CV为4.5%~7.7%,灵敏度为5~10pg.说明该方法具有较高的灵敏度、特异性、准确性.分别测定了幼年组、成年组和老年组的雌性恒河猴的血清中的孕酮含量分别为:(0.20±0.04)ng/mL、(6.26±0.17)ng/mL和(0.35±0.06)ng/mL;成年雌性恒河猴月经周期孕酮的变化范围为:滤泡期为(1.10±0.12)ng/mL,排卵期(2.36±0.18)ng/mL,黄体期(6.17±0.15)ng/mL,妊娠期随着妊娠月份的增加,孕酮浓度也增加,最高可达50ng/mL.结论经实验验证,该方法灵敏、可靠、适用,可作为恒河猴血清中孕酮含量测定的一种方法.【总页数】4页(P56-59)【作者】王训立【作者单位】福建中医学院实验动物中心,福州350108【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.恒河猴睾丸内激素调控的离体研究Ⅲ--雌激素对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响 [J], 王训立;李荣皓;庄临之;魏振年2.SHIV1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定[J], 丛喆;陈志伟;魏强;蒋虹;金光;陈霆;王卫;陶真;姚南;熊竞;吴芳新3.血清孕酮、转化生长因子-β、共刺激分子可溶性B7-H3在自发性流产病人中的表达及预测价值分析 [J], 李超平;马瑛;时琼;白瑞平4.海洛因及吗啡对恒河猴β-内啡肽、促肾上腺皮质激素、皮质醇、睾酮的影响海洛因及吗啡对恒河猴β-内啡肽、促肾上腺皮质激素、皮质醇、睾酮的影响 [J], 郭晓红;徐贵丽;张晓冬;张肇玖;张正仙;曾庆云;侯云成;杨森富;宋岚曦;赵泉;蒋家雄5.血清孕酮、雌二醇联合β-HCG检测预测先兆流产结局的意义分析 [J], 蔡雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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。
间 进 行 采 集 样 品 ， 只动 物均 采 血 ３ ｍＬ 血 液 于 每 ， ４ ℃静置 １ｈ后 ，０ ０ｒｍｉ 心 ２ｍｉ ， ３ ０ ／ ｎ离 ｎ 分离 血 清 ，
一
２ ℃冰 箱 。待所 有样 品收集 后 ， 中测 定 。 Ｏ 集
１４ 大 鼠睾 丸 支 持 细 胞 的制 备 ． 根 据 Ｆ Ｈ 可 以 Ｓ
养 箱 中培 养 ２ ， ４ｈ 收集 培 养液 待测 。 用 放射 免疫 采
测 定 法 测定 培 养 液 中的 雌二 醇含 量 ，进 而 计 算 出 血 清 中 Ｆ Ｈ 的含量 。 Ｓ
物 重点 实验 室提 供 ，实 验动 物 使 用 许可 号 ：Ｙ Ｋ ＳＸ
（ ）０ ５ ０ １ ， 中幼 年组 、 年 组 、 年组 的 恒 闽 ２０ —０ ５ 其 成 老
维普资讯
２８
福 建 中 医 学 院 学 报 ２０ ０ ８年 ８月 第 １ ８卷 第 ４ 期 Ｊ ｕ ｌ ｆ ｊａ ｉｅｓ ｏ ＴＣ／ｌ ｇ ｓ ０ ８，８（ ） ｏ ｍａ ｏ Ｆｕｉｎ Ｕｎｖ ｒｉ ｆ Ｗ ＇ ｖ Ａｕ ｕｔ２ ０ １ ４
刺 激 大 鼠睾 丸 Ｓ ｒ ｌ 细胞 分 泌 雌二 醇 的 作 用 ． ｅｔ ｉ ｏ 建 立 Ｆ Ｈ 体外 生 物测 定法 。将 去除 Ｌ ｙ ｉ 胞 后 的 Ｓ ｅｄｇ细 曲细 精 管经 ０５ ．％胶 原 酶 ３ ℃消化 ２ ｎ 待 曲 细 ５ ０ｍｉ ，
高等 动物 的 Ｆ Ｈ对 低 等 动 物有 效性 是 生 物学 Ｓ
恒河猴促滤泡激素生物测定法的建立和应用
王 训 立
（ 建 中医 学 院 实 验 动 物 中心 ， 建 福 州 ３ ０ ０ ） 福 福 ５ １８
摘 要 ： 目的 建 立恒 河猴 促 滤 泡 激 素 （ ｓ 生物 测 定 法 。 方 法 Ｆ Ｈ） 利 用 Ｆ Ｈ 体 外 生物 测 定 法 ， ｓ
现有 的促 滤 泡 激 素 （Ｓ 的测 定方 法 都 是 针 Ｆ Ｈ） 对 某种 动 物特异 性 的 Ｆ Ｈ和 其特 异 性抗 体建 立 的 ｓ Ｒ Ａ法 ， Ｉ 每种 方 法 只能测 定 一 种 动物 的 Ｆ Ｈ水 平 ， ｓ 特别 在 非 人 灵 长 类 动 物 尚无 商 品化 测 定 药 盒 ， 致 使 该 种类 动 物 的生 殖生 物 学研 究 受 到 了一 定 限制
养 箱 中连 续 培 养 ７ ；更 换 含 有雄 烯 二 酮 （ ０ ２ｈ １ ｍ ｌＬ） ＭＩ １ ｍ ｌＬ 的 培 养 液 ， ｏ／ 和 Ｘ（０ ｏ／ ） 并加 入含 有
一
１１ 实验动物 ．
①ｓ Ｄ大鼠 ： ２ Ｏ只 Ｓ Ｄ大鼠由中国
科 学 院上 海 实验 动物 中心 提供 ，实验 动 物 生 产许
精 管 下 沉 后 弃 去 上 清 液体 ，再 经 ００ ％胶 原 酶 、 ．５
３ ℃恒温 水 浴摇 床 中振荡 消 化 ３ ｎ 滤 液 经 ２ ０ ５ ０ｍｉ ， ０ 目尼龙 网筛 过 滤 、 置 、 心 。将 得 到 的支 持 细 胞 静 离 悬 浮 液 ， ２ Ｌ 养 板 中 ， 孑 加 入 支 持 细 胞 悬 在 ４孑 培 每 Ｌ 浮 液 同时 加 入 一 定 量新 鲜 的 培 养 液 ，７ ， Ｏ 培 ３℃ Ｃ
中一个 普 遍存 在 的现象 ，说 明 Ｆ Ｈ受体 具有 较 高 Ｓ 的同 源保 守 性 ［。 利 用 Ｆ Ｈ可 以刺 激 睾丸 Ｓ ｒ ｌ Ｓ ｅｔ ｉ ｏ 细 胞分 泌 雌二醇 ，建 立 一种 适 用 于 非人 灵 长类 动
物 恒河 猴 Ｆ Ｈ 的生 物测 定 法 。 Ｓ
１ 材 料 与 方 法
可证 号 ：Ｃ Ｓ ＸＫ（ ）０ ３ ０ ０ ， 验用 Ｓ 大 鼠需 沪 ２ ０ —０ ３ 实 Ｄ
要在 实 验室 中饲养 ３ ～５ｄ后 ， 行 实验 。② 恒 河 进 猴 ：Ｏ只 雌性 恒 河 猴 由福 建 省 非 人灵 长 类 实 验 动 ６
定 量 的标 准 样 品和 待 测定 的 样 品 ，７ 、 Ｏ 培 ３℃ Ｃ
测 定 了恒 河 猴 血 清 中 Ｆ Ｈ 含 量 。 Ｓ
结果
测 定 方 法 的 灵敏 度 为 ００ ｇ 管 ， 内和 批 间 误 差 分 别 为 ． ｎ／ 批 ２
（ ． － １ ５ ％和 （ ． ±２ １ ） 证 明 该 方 法 准 确性 高 ； 河 猴 血 清 中 Ｆ Ｈ 含 量 反 应 曲线 和 ｈ Ｓ 标 ２５ ４ ． ） ３－ ２ ４０ ２ ． ％， ７ 恒 ｓ ＦＨ 准 曲 线平 行 良好 。 明该 方 法 可 以 用 来检 测 恒 河猴 血 清 中 的 具 有 生物 活 性 的 Ｆ Ｈ 变 化 ． 映 了动 物 说 ｓ 反
正常 的 生 理 状 态 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 回 收 实验 表 明 ．在 该测 定 方 法 中加 入 ５ ｎ 、 ０ ｎ ２ ｇｈｚＨ 时 的 回 收 率 分 剐 为 ｇ １ ｇ、０ ｎ ｌ Ｓ
（０ ． ±５６ ） （９７ ±４５ ） （０ ．１ ５４ ） 说 明 测 定 结 果 的 可 靠 性 。 结 论 本 实 验 所 建 １ １ ８ ． ％、 ９ ． ２ ６ ８ ．１％、 １０６ ± ．２ ％，
河猴 各 ２ Ｏ只。 １２ 试 剂 ． 胶 原 酶 、 血 清 白蛋 白 （ Ｓ 、 二 牛 Ｂ Ａ） 雌 醇 、 烯 二 酮 、 酸 二 酯 酶 抑 制 剂 （ Ｘ） 于 Ｓｇ 雄 磷 ＭＩ 购 ｉ ．