ATCC菌种(冻干粉)孵育步骤
百日咳鲍特菌 ATCC9340
菌种说明
一菌种简介
菌种名称百日咳鲍特菌
编号ATCC 9340
规格冻干粉
菌种主要应用
二保存条件
斜面、穿刺菌和冻干粉可常温运输，但应在4-10度长期保存。
甘油菌可常温运输，但应在-80度长期保存。
微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退。
三培养条件
培养基ATCC Medium 35 Bordet Gengou Agar
（见附件）
培养温度37度
培养时间2-5天
培养条件
四活化步骤
冻干粉首次活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2支斜面上培养。
注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。
五注意事项1 微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
2 菌种操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；
3 斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为3-6个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是2-25年；甘油菌保存时间为2-5年。
ATCC Medium 35 Bordet Gengou Agar
Bordet Gengou Agar Base（BD 248200）30.0g Glycerol 10ml Proteose Peptone 10g DI Water 840ml Adjust for pH 6.7±0.2
Cool base medium to 45-50℃and add：
Sterile Defibrinated Rabbit Blood 150ml。
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。
2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。
3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。
B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。
2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。
2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。
3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。
4. 灼烧接种环，将接种环归位。
D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。
2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
ATCC15834发根农杆菌使用说明
（必要时，可适当延长培养时间）。
菌 株 传 代 ：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量
增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓
慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数
的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
ATCC15834 发根农杆菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR01170 ATCC15834 发根农杆菌
基 本 信 息 ：
名称：ATCC15834 发根农杆菌
规格：300ul 甘油菌
储 存 温 度 ： -‐80℃
简 介 ：
注 意 事 项 ：
1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放
置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能
正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-
菌种管理规范
菌种管理规范引言概述：菌种管理是生物技术领域中非常重要的一项工作，它涉及到菌种的保存、鉴定、培养和分发等方面。
规范的菌种管理能够保证菌种的纯度和可靠性，为科学研究和工程应用提供可靠的基础。
本文将从菌种的保存、鉴定、培养、分发和记录等五个大点，分别阐述菌种管理的相关内容。
正文内容：1. 菌种的保存1.1 保存条件：菌种保存需要提供适宜的环境条件，包括温度、湿度和光照等。
不同菌种对保存条件的要求不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
1.2 保存方式：常见的菌种保存方式包括冷冻保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
不同保存方式有其优缺点，需要根据菌种的特性和使用需求选择合适的保存方式。
2. 菌种的鉴定2.1 鉴定方法：菌种的鉴定是确定其物种和亚种的过程，常用的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
鉴定方法的选择应根据菌种的特性和鉴定目的进行。
2.2 鉴定标准：菌种的鉴定需要依据一定的标准和参考物种进行比对。
国际上常用的鉴定标准包括国际菌种保存中心（CBS）和美国类型菌种文化集（ATCC）等。
3. 菌种的培养3.1 培养基选择：菌种的培养需要提供适宜的培养基，包括基础培养基和特定培养基。
基础培养基可根据菌种的需求选择，特定培养基则针对特定菌种的培养需求进行设计。
3.2 培养条件控制：菌种的培养需要控制适宜的温度、pH值和培养时间等条件。
不同菌种对培养条件的要求有所不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
4. 菌种的分发4.1 分发要求：菌种的分发需要满足科学研究和工程应用的需求，同时要保证菌种的纯度和可靠性。
分发过程中需要采取一系列措施，如制备分生孢子、制备冻干粉和制备液体培养物等。
4.2 分发方式：常见的菌种分发方式包括直接分发和间接分发。
直接分发是将菌种直接提供给用户，间接分发是通过菌种库或合作单位进行分发。
分发方式的选择应根据实际情况进行。
5. 菌种的记录5.1 记录内容：菌种的记录需要包括菌种的基本信息、保存和鉴定的结果、培养条件和分发情况等。
冻干粉工艺流程
冻干粉工艺流程
《冻干粉工艺流程》
冻干粉是一种常见的生物制剂，其工艺流程包括多个步骤，需要经过严格的控制和操作。
下面是冻干粉的工艺流程简要介绍：
1. 原料准备：首先需要准备好所需的原料，包括生物制剂、添加剂以及其他辅助材料。
2. 混合和溶解：将原料混合并溶解于适当的溶剂中，使其形成均匀的溶液。
3. 过滤和消毒：将溶液进行过滤和消毒处理，以去除杂质和微生物，确保产品的纯度和安全性。
4. 冻结：将溶液注入冷冻容器中，通过控制温度和速度冷冻成冰。
5. 冻干：将冷冻的溶液置于真空干燥器中，通过升温和减压的方式使冰直接升华，达到冻干的效果。
6. 装罐和包装：将冻干后的粉末装罐并进行密封包装，确保产品的保存和运输质量。
7. 检验和贮存：对冻干粉进行质量检验，确保产品符合规定标准，并将其储存于适当的环境中，以保持其品质和稳定性。
冻干粉工艺流程复杂而精细，需要严格控制每一个环节，确保产品的质量和安全。
同时，随着科技的发展与进步，冻干粉工艺流程也将不断地进行优化和改进，以满足不断增长的市场需求和质量要求。
质控菌种管理规定
质控菌种管理规定微生物实验用菌种是进行新产品研发和生产质量控制的标准物质。
为了保证微生物实验的准确灵敏和人员及环境的卫生安全，特制定以下规定：1. 菌种采集。
实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种交流。
不管是哪种来源，均由公司统一采集。
采集中严格按照规范执行。
要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。
保证菌种合格和环境安全。
采集中要有菌种传代标识。
2.菌种的活化：购买的标准菌种必须要求是冻干粉，科研中菌种交流可以为斜面或液体。
菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别推荐，一般不用液体培养基。
具体使用培养基的情况如下表，详细菌种使用方法见附表：方法培养基方法1 胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)，非选择性羊血琼脂，PCA或营养琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。
方法2 非选择性羊血琼脂，35℃正常环境培养24-48小时。
方法3 巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养24-48小时。
方法4 CDC厌氧血琼脂35℃厌氧培养48-72小时；部分专性厌氧菌能需要5-7天，才能充分生长；对于梭菌，以下新鲜培养基也可选用：营养琼脂，TSA琼脂，PCA琼脂，需培养48-96小时。
方法5 沙堡氏葡萄糖Emmons琼脂25-28℃培养3-7天；也可用PDA琼脂。
方法6 巧克力琼脂平板，35℃微需氧环境培养48-72小时。
方法7 改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂，35℃5-10%CO2或正常环境培养7天。
方法8 缓冲活性碳酵母提取物琼脂，35℃正常环境培养3-5天。
方法9 巧克力琼脂平板，35℃5-10%CO2环境培养48小时。
方法10 先用脑心浸出液肉汤或TSB培养基35℃增菌培养18-24小时，再划线至TS A琼脂35℃正常环境培养24-48小时。
方法11 先接种于MRS肉汤35℃增菌培养24-48小时，再划线接种至含羊血的哥伦比亚CNA培养基35℃5%CO2环境培养24-48小时。
菌种使用说明书2012版
微生物检测冻干质控菌种使用说明书1复苏菌种前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。
2启开菌种前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。
在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开塑盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞，加入0.3mL 左右的配套液体培养基，用无菌滴管反复吹吸，将冻干菌种溶解成为悬液，然后用无菌滴管或接种环移至斜面、平板或液体培养基，并连同剩余菌悬液的西林瓶一起放置于36℃培养箱中进行培养。
（菌种与培养和保存方法对应表见附表1，培养基、培养方法和传代保存方法见附表2）。
3次日观察菌种的生长情况，如未生长，应继续培养24h ，或吸取培养之后的西林瓶剩余菌悬液再次接种培养基，培养24h 观察。
4菌株为一次性使用品，开启之后不能反复使用或保存，暂不开启的菌种应在4℃保藏。
5复苏后的菌种在传1-2代后使用，建议菌种使用5代后弃用。
注）：购买后请尽量及时使用冻干菌种，如发现菌种不活或污染等情况，请在购买之日起1个月内与我们联系。
冻干菌种复苏示意图：用无菌滴管吸取液体培养基加入冻干菌种中�混合均匀按箭头方向打开西林瓶盖将菌悬液吸出接种于肉汤、斜面、平板上于适宜的温度培养附表2培养基、培养条件和保存方法方法1：无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于营养琼脂（022020）斜面上35－37℃划线培养24－48h。
斜面（第一代）放于4℃冰箱保存，每个月转接一次，代数以此类推，建议使用菌种代数不超过5代，5代后菌种应销毁。
方法2：无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于营养琼脂（022020）斜面上划线35－37℃培养24－48h。
斜面（第一代）放于25℃下保存，每个月转接一次，代数以此类推，建议使用菌种代数不超过5代，5代后菌种应销毁。
方法3：无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于血平板（024070）后涂布，35－37℃培养24－48h。
微生物菌种保藏过程中常见的问题
微生物菌种保存过程中常见的问题一、菌种保藏的认识1.刚买回来的阳性菌株是第0代吗？菌株买回来时上面都会写明第几代，常规来说都是第0代。
像购买的ATCC或CICC的冻干粉都是标记为0代的。
2.菌种保藏时为什么要进行分离纯化？分离纯化后才能获得单一菌株，单一菌株进行菌种保藏才有意义，防止菌种交叉污染和变异，这也是菌种保存的基本原则。
3.怎样纯化菌株？纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转接一次，这就相当于纯化了。
二、菌种可以保存的种类1.所有的菌都能保存吗？如果不是的话，什么样的菌可以保存？什么样的菌不可以保存？菌种保存的原理是预防或减缓DNA复制时自发突变导致菌种退化，因此要创造代谢不活泼的状态，而菌种保存时使菌种进入休眠态（孢子、芽孢)，并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境，创造的环境越接近此状态，所保存的菌种的时间就越长，所以从原理上讲，所有菌种都可用这种方法保存，但需要注意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌）等特殊细菌保存时，需-80℃或更低温度保存，才可以做到更长期的保存。
2.菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗？可以。
对于霉菌等真菌需培养7天进行保存，而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存，保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝，相当于砂土保存法中砂土作为载体起到的作用。
三、菌种的保存时间和保存条件1.怎样延长菌株的保存时间呢？大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。
2.能用菌种保存管永久保存菌株吗？温度越低，保藏效果越好。
从目前的试验数据及实际保存效果来看，-20℃可保存1~5年，-80℃或液氮中可保存5~10年，不同菌种及不同的保存温度保存时间会有所不同（例如：大肠、沙门等常规细菌-20℃目前可以保存到6年）。
但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定，确定菌株无变异。
3.为什么说，如果有条件的话，菌种保存管最好置于-80℃冰箱或液氮中？因为，贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，可极大降低冰晶形成对细菌的伤害，同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境，从而延长细菌保存的时间。
菌种冻干操作规程
菌种冻干操作规程菌种冻干是一种将活菌种通过冷冻和真空干燥的方法，将其转化为冻干菌粉的过程。
菌种冻干技术广泛应用于微生物学、制药业、食品工业等领域。
下面是菌种冻干的操作规程，详细描述了操作过程和注意事项。
一、准备工作1. 确认菌种冻干设备状态正常，例如冷冻系统、真空泵等。
2. 准备菌种培养物、冻干粉剂、无菌容器等相关物品。
3. 清洗工作区、操作台和工具，并进行消毒处理。
二、菌种培养1. 取出菌种培养物，将其接种到含有培养基的培养皿中。
2. 在恒温摇床上进行培养，温度、时间和培养方式需要根据不同菌种而定。
3. 筛选出生长良好、纯度高的菌种，进行后续处理。
三、制备冻干粉剂1. 预先准备好冻干粉剂，根据菌种特性选择合适的添加剂和保护剂。
2. 按照比例将冻干粉剂溶解于适量的培养基中，充分混合并进行无菌过滤。
四、菌种冷冻1. 将培养物转移到冷冻管中，添加适量的冷冻保护剂。
2. 快速冷冻，推荐使用液氮浸泡法或酒精浴法。
3. 将冷冻菌种存放在低温冷冻机中，温度通常为-70℃至-196℃。
五、菌种真空干燥1. 将冷冻菌种转移到真空干燥设备中，调整设备到合适的温度和压力。
2. 打开真空泵，排除设备内的气体，并在适当温度下加热样品。
3. 维持一定的真空度和温度，直至样品完全干燥。
六、收集和包装冻干菌粉1. 将干燥的菌种收集到无菌容器中，注意避免污染。
2. 对冻干菌粉进行密封和标记，包括菌种名称、生产日期和效期等信息。
3. 存放在干燥、阴凉、无菌的环境中，防止湿气和光照。
七、清洁和保养1. 完成操作后，及时清洗和消毒工作区、设备和工具。
2. 定期检查和保养设备，确保其正常运行。
八、安全注意事项1. 在操作过程中，必须佩戴防护手套、防护眼镜等个人防护用具。
2. 注意避免菌种与人体直接接触，容易引起感染。
3. 操作时要轻拿轻放，避免对菌种造成机械伤害。
4. 注意电源和设备的安全使用，防止触电或设备故障引起事故。
以上是菌种冻干的操作规程，通过正确的操作步骤和注意事项，可以确保菌种冻干过程的安全和有效。
菌种冻干操作规程
菌种冻干操作规程
《菌种冻干操作规程》
一、冻干操作前准备
1. 准备工作台、传染性物质隔离柜等操作设备，保持洁净。
2. 取出所需的冻干管和培养基，确保其完整和干燥。
3. 消毒操作台面、设备和工具。
二、冻干操作步骤
1. 将需要冻干的菌种培养液倒入冻干管内，每支管液面高度不超过管壁的一半。
2. 在管盖上打蜡封，确保密封性。
3. 将密封的冻干管放入冻干机内，设置适当的温度和压力。
4. 开启冻干机，开始冻干操作。
三、冻干后处理
1. 冻干结束后，关闭冻干机，取出冻干管。
2. 在无菌条件下，将密封蜡封刮除。
3. 将冻干管存放在低温冰箱内保存。
4. 记录冻干操作的日期、菌种信息等相关信息。
四、冻干操作注意事项
1. 操作过程中要保持无菌操作，避免外源污染。
2. 注意操作台面和工具的消毒，确保操作环境清洁。
3. 冻干机的设置和操作要符合菌种所需的温度和时间条件。
4. 冻干管的密封要确保严密，避免冻干过程中的氧化。
5. 冻干操作结束后，要及时记录菌种信息，方便后续的使用和
管理。
以上就是关于《菌种冻干操作规程》的操作步骤和注意事项，希望对相关工作人员能有所帮助，确保菌种冻干操作的顺利进行。
冻干菌种复苏的方法
冻干菌种复苏的方法
冻干菌种复苏的方法如下：
1. 准备培养基：选择适合菌种生长的培养基，可以是含有营养成分的琼脂培养基或液体培养基。
2. 取出冻干菌种：从冷冻保存的菌种中取出所需菌株，尽量避免长时间接触室温空气，以防止污染。
3. 快速复苏：将菌种迅速加入预先准备好的培养基中，并快速均匀地摇匀，以确保菌株与培养基充分接触。
4. 孵育菌种：将培养基含菌的培养瓶或培养皿置于恰当的温度和湿度条件下培养，通常是在30°C-37°C的恒温培养箱中。
5. 观察菌种生长情况：大约24小时后，开始观察菌株的生长情况，包括菌株数量、生长速率、形态等。
6. 纯化和鉴定：如果需要纯化和鉴定菌种，可以进行传代培养并使用相应的鉴定方法进行检测。
总结起来，冻干菌种的复苏主要包括准备培养基、取出冻干菌种、快速复苏、孵育菌种、观察生长情况和纯化鉴定等步骤。
ATCC菌株操作说明中文版
TIB. 081
养基。在最初的 48 小时培养期内不要揭开接过种的平皿。
Candida sp. Capnocytophaga sp. Cellulosimicrobium sp. Chryseobacterium sp. Citrobacter sp. Cladosporium sp. Clostridium sp.
方法 8 缓冲活性炭酵母提取物琼脂-----35℃，正常环境，3-5
天。
方法 9 V 琼脂或巧克力琼脂-----35℃，5％－10％ CO2 环
境，48 小时。 方法 10 脑心浸出液肉汤，胰蛋白胨大豆肉汤，或 0.85％生
理盐水均可选用。 非选择性羊血琼脂或胰蛋白胨大豆琼脂-----35℃，正
中保存的。
Bacteroides sp.
拟杆菌属
方法 4
注： Bacteroides ureolyticus(解尿素拟杆菌)应培养 5 天，菌落很小。有时
需要多传 1 代以得到足够的供试菌落。
Bifidobacterium sp. Bordetella sp.
双岐杆菌属 博德特氏菌属
方法 4 方法 3
Aeromonas salmonicida(杀鲑气单胞菌 )应在 25℃培养。
Alcaligenes sp.
产碱杆菌
方法 1
Alicyclobacillus sp.
脂环酸芽孢杆菌 方法 12
Alloiococcus sp.
Method 2
Aneurinibacillus sp.
硫 胺 素 芽 孢 杆 菌 方法 1 属
方法 14 取 一 颗 冻 干 颗 粒 于 SP4 葡 萄 糖 肉 汤 中 ， 若 是
KWIKSTIK 则溶于自带的培养基中。作系列梯度稀 释（例如，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32）。在 35℃下， 正 常 环 境中 培 养。 一 旦肉 汤 从红 色 变成 黄 色（ 1-4 周），转接 0.2 mL 到 SP4 葡萄糖琼脂，划线分离。 不要使用棉质拭子或木质棒。35℃，CO2 环境中， 可以使用烛缸，培养 5-15 天。使用显微镜观察平板 菌落。 方法 15
冻干质控菌种的复苏、培养和保存
冻干质控菌种的复苏、培养和保存微生物检测冻干质控菌种使用说明书1 复苏菌种前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。
2 启开菌种前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。
在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开塑盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞，加入0.3mL左右的配套液体培养基，用无菌滴管反复吹吸，将冻干菌种溶解成为悬液，然后用无菌滴管或接种环移至斜面、平板或液体培养基，并连同剩余菌悬液的西林瓶一起放置于36℃培养箱中进行培养。
（菌种与培养和保存方法对应表见附表1，培养基、培养方法和传代保存方法见附表2）。
3 次日观察菌种的生长情况，如未生长，应继续培养24h，或吸取培养之后的菌悬液中再次接种培养基，培养24h观察。
4 菌株为一次性使用品，开启之后不能反复使用或保存，暂不开启的菌种应在4℃保藏。
5 复苏后的菌种在传1-2代后使用，建议菌种使用5代后弃用。
注）：购买后请尽量及时使用冻干菌种，如发现菌种不活或污染等情况，请在购买之日起1个月内与我们联系。
冻干菌种复苏示意图：附表1 菌种与培养和保存方法对应表菌种编号其它中心编号菌种名称方法菌种编号其它中心编号菌种名称方法FSCC1140 01 ATCC16404黑曲霉方法8FSCC219005CMCC(B)51572福氏志贺氏菌方法1FSCC1140 02 CMCC(F)98003黑曲霉方法8FSCC219006CMCC(B)51592宋氏志贺氏菌方法1FSCC1970 01 As 3.2788 桔青霉方法8FSCC145010ATCC29544阪崎肠杆菌方法1FSCC1970 02 MIG3.104 绳状青霉方法8FSCC167001广临检-57 肺炎克雷伯氏菌方法1FSCC1290 01 ATCC10231白色念珠菌方法8FSCC167002CMCC(B)46117肺炎克雷伯氏菌方法1FSCC1290 02 CMCC(F)98001白色念珠菌方法8FSCC145003CMCC(B)45301阴沟肠杆菌方法1FSCC2140 02 ATCC 9763 酿酒酵母方法8FSCC145001ATCC13048 产气肠杆菌方法1FSCC2230 04 ATCC 6538 金黄色葡萄球菌方法1FSCC204002CMCC(B)49027普通变形杆菌方法1FSCC2230 01 ATCC25923金黄色葡萄球菌方法1FSCC204001CMCC(B)49005奇异变形杆菌方法1FSCC2230CMCC(B)26003 金黄色葡萄球菌方法1FSCC CMCC(B)41002粘质沙雷伯氏菌方法1用无菌滴管吸取液体培养基加入冻干菌种中，混合均匀按箭头方向打开西林瓶盖将菌悬液吸出接种于肉汤、斜面、平板上于适宜的温度培养液体培养基05 217001FSCC2230 11 CMCC(B)26069表皮葡萄球菌方法1FSCC135002ATCC43864 弗氏柠檬酸杆菌方法1FSCC1810 02 CMCC(B)28001藤黄微球菌方法1FSCC234002CMCC(B)52204小肠结肠炎耶尔森氏菌方法1FSCC1460 02 ATCC29212粪链球菌方法3FSCC232030ATCC27562 创伤弧菌方法7FSCC2250 02 CMCC(B)32210乙型溶血性链球菌方法3FSCC232009ATCC17802副溶血性弧菌方法7FSCC2060 04 CMCC(B)10104铜绿假单胞菌方法2FSCC232004Vb0 非01霍乱弧菌方法6FSCC2060 01 ATCC 9027 铜绿假单胞菌方法2FSCC178002CMCC(B)54002单核细胞增生李斯特菌方法4FSCC2060 02 ATCC15442铜绿假单胞菌方法2FSCC178006ATCC19115单核细胞增生李斯特菌方法4FSCC2060 03 ATCC27853铜绿假单胞菌方法2FSCC115051ATCC 9372枯草芽孢杆菌黑色变种方法1FSCC1490 04 ATCC 8739 大肠埃希氏菌方法1FSCC115037ATCC 6633 枯草芽孢杆菌方法1FSCC1490 02 ATCC25922大肠埃希氏菌方法1FSCC115036CMCC(B)63501枯草芽孢杆菌方法1FSCC1490 06 CMCC(B)44103大肠埃希氏菌方法1FSCC115031CMCC(B)63202短小芽孢杆菌方法1FSCC1490 05 CMCC(B)44102大肠埃希氏菌方法1FSCC115002CMCC(B)63303蜡样芽孢杆菌方法1FSCC1490 01 8099 大肠埃希氏菌方法1FSCC115001CMCC(B)63301蜡样芽孢杆菌方法1FSCC1490 15 NCTC12900大肠埃希氏菌O157：H7方法1FSCC137005ATCC19404生孢梭菌方法5FSCC2150 09 CMCC(B)50071伤寒沙门氏菌方法1FSCC137006CMCC(B)64941生孢梭菌方法5FSCC2150 13 ATCC14028 鼠伤寒沙门氏菌方法1FSCC137003ATCC13124产气荚膜梭菌方法5FSCC2150 12 CMCC(B)50115鼠伤寒沙门氏菌方法1FSCC118001CICC6071 两歧双歧杆菌方法10FSCC2150 05 CMCC(B)50093甲型副伤寒沙门氏菌方法1FSCC118003CICC6069 婴儿双歧杆菌方法10FSCC2150 07 CMCC(B)50094乙型副伤寒沙门氏菌方法1FSCC173012CICC6032德氏乳杆菌保加利亚亚种方法11FSCC2190 03 CMCC(B)51105痢疾志贺氏菌方法1附表2 培养基、培养条件和保存方法方法1：无菌条件下，用无菌吸管往西林瓶冻干菌粉中加入脑心浸液培养基，充分悬浮后取适量的菌悬液于营养琼脂（022020）斜面上35－37℃划线培养24－48h。
菌种保藏真空冷冻干燥法操作步骤
菌种保藏真空冷冻干燥法操作步骤（总3页）本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21 year.March真空冷冻干燥法保藏菌种操作步骤操作过程1、安甑管准备选取规格约直径为8mm,高100mm的中性玻璃安甑管，先用2%盐酸浸泡8〜10h,再经自来水冲洗多次，用蒸憾水涮洗2〜3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字而朝向管壁，管口塞好脱脂棉塞，12VC下高圧灭菌20分钟，备用。
2保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，115°C下髙压蒸汽火菌25min,备用。
3冻干样品的准备(3)菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳泄期为好，抱子是新鲜的。
每支长好的斜而加2〜3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基)，制成菌悬液。
如用液体培养的菌种，则需经离心收集和用火菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。
悬液中菌数要求达到108^1010个/ml为宜。
悬液制备完成尽快分装和冻结。
分装安甑时可用火菌的长滴入安甑管底部，每管分装量约〜毫升，分装安甑管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。
分装时应注意在无菌条件下操作。
4预冻-80°C冰箱预冻1-2小时。
5冷冻干燥将冷冻后的样品安甑管宜于冷冻干燥机的F燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20 小时。
终止干燥时间应根据下列情况判断：①安甑管内冻干物呈酥块状或松散片状：②真空度接近空载时的最髙值；③选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结。
6真空封口将安甑管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。
7保藏安竈管保藏在-20C冰箱里。
8活化如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外璧消毒，用蹑/敲下已开裂的安瓯管的顶端，使管子破裂，在安韻管中加入〜lml液体培养基，慢慢旋转安韻管，是冻干菌种复水，然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。
atcc标准菌株说明书
atcc标准菌株说明书
1、ATCC菌种批号说明:菌名称简称的拼音首字母+转种日期-代数-编号。
2、菌株每转种一次即增加一代，实验用应控制在五代以内。
3、购买菌株后，立即进行转种，不宜长期冷藏保存。
4、转种方式:
普通菌斜面:用接种环挑取斜面上的菌落，转种至适宜的液体培养基中，按药典规定的时间培养后，将液体培养物分装至无菌冻存管中，每支 1.5~2.0ml，冰箱冷冻(-20°℃)保存。
每次实验取一支转种后使用。
如:生孢梭菌:将小管中液体培养物接入硫乙醇酸盐液体培养基中，ATCC菌种按药典规定的时间培养后，将液体培养物分装至无菌冻存管中，每支1.5~2.0ml，冰箱冷冻(-20℃)保存。
每次实验取一支转种后使用。
黑曲霉:用接种环蘸取小管中孢子悬液，并涂布至改良马丁琼脂斜面上，培养1周后，按药典方法将孢子洗下，孢子悬液冰箱冷藏(4℃)保存。
实验时可直接取该悬液稀释至合适的级别后使用。
5、转种的液体培养基体积推荐为100ml，可分装约40~50支无菌冻存管，平时使用时应定期进行菌株的鉴定，若菌落形态不典型或特征反应不明显，说明该ATCC菌种已不适宜继续使用，应销毁后购买新菌株。
冻干菌粉制备
冻干菌粉制备
冻干菌粉制备是将菌株培养后经过一系列处理步骤，最终得到的干燥菌粉。
以下是一般的冻干菌粉制备流程：
1. 培养菌株：选择合适的菌株并进行预培养，使其在适当的培养基和条件下生长。
2. 收获菌液：当菌株达到适宜的生长阶段时，收获培养物。
可以通过离心、滤液等方法将菌体与培养基分离。
3. 预处理：将菌体洗涤以去除残留培养基和杂质。
这可以通过多次离心和洗涤来完成。
4. 冻结：将洗涤后的菌体悬浮液均匀地分装到冻结容器中，并在低温环境下迅速冷冻。
5. 干燥：采用冻干技术，将冻结的菌体悬浮液在真空条件下进行干燥，以去除水分。
6. 研磨：将干燥的菌体研磨成粉末状，以便于保存和使用。
7. 包装和储存：将冻干菌粉装入密封的容器中，并存放在低温和干燥的环境中，以保持其长期稳定性。
以上是一般的冻干菌粉制备流程，具体步骤可能会因不同的菌株和实验条件而有所不同。
菌种传代、使用、保存操作规程
菌种传代、使用、保存操作规程1.目的本文件规定了微生物检验用菌、无菌检验用菌及抗生素检验用菌的接种、保存，传代方法及要求，适用于中心化验室进行检验用菌的接种和传代操作。
2. 适用范围适用于中心化验室菌种管理人员进行检验用菌的接种、保存和传代操作。
3.职责菌种管理人员应按本程序的规定操作。
4.参考文件及相关程序B08(02)005 微生物实验室标准管理程序B08(02)019 微生物检验用菌标准管理程序B08(02)020 检验用培养基标准管理程序5. 程序5.1.对照菌株名称·金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26 003〕·铜绿假单胞菌〔CMCC(B) 10 104〕·生孢梭菌〔CMCC(B) 64 941〕·枯草芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 501〕·大肠埃希菌〔CMCC(B) 44 102〕·白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕·黑曲霉〔CMCC(F) 98 003〕·短小芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 202〕·藤黄微球菌〔CMCC(B) 28 001〕·乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B) 50 094〕5.2.菌种来源中国药品生物制品检定所提供的冷冻干燥菌种（即安瓿）。
5.3. 微生物检验用菌菌悬液的制备5.3.1.菌种的复苏与传代5.3.1.1. 取备妥的冷冻菌种安瓿，灭菌的毛细滴管、双碟、镊子、注射器、灭菌水及复苏菌种所需的培养基等物品，移入超净工作台。
5.3.1.2. 用75%酒精棉球擦净冷冻菌种安瓿外壁，放在灭菌双碟内，待干。
5.3.1.3. 点燃酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼，用灭菌毛细管吸取灭菌水或胰酪大豆胨液体培养基少许在灼热处，使其骤冷,用干燥无菌纱布包裹安瓿，安瓿掰开。
5.3.1.4. 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取约0.5ml胰酪大豆胨琼液体培养基，注入安瓿内，轻轻震摇使冷冻菌块溶解、混匀，随即用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支胰酪大豆胨液体培养基，1支普通胰酪大豆胨胰酪大豆胨琼脂斜面培养基内。