银杏种实发育中中种皮PCD的研究.

陈鹏等根据种核的形状及特点，将其分为长 子、佛指、马铃、梅核和圆子5种类型,并发现银 杏种核形状在不同品种类型间表现出显著或极显 著差异；种核的宽/厚比与种仁的氢氰酸含量紧密 相关。种核形状与其内在有关成分含量变化的关 系一直为国内外银杏生产和市场所关注。有关研 究表明中种皮的形成亦是一种PCD过程,但有关其 过程的发生、及伴随发生的生理生化变化尚未见 有报道。
固定
脱水
置换
修块
包埋
浸透
切片
染色,拍照
4.1.3种壳骨质化后，取中种皮及内种皮进行电镜观察
去外果皮
5%NaOH冲洗
乙醇固定
电镜扫描
喷金
取样,粘贴
4.2相关酶及激素测定
4.2.1脂肪氧合酶（LOX） 样品研磨
离心
30ml反应体系,30 ℃ 下,于234nm处测LOX 活性,加酶液后15s开 始,记录1min内的 A234的变化.
上清液测LOX
4.2.2ACC合成酶
样品研磨
测定乙烯含量
转化成乙烯
离心
加SAM 保温 加HgCl2
终止反应
缓冲液透析
生成ACC
4.2.3ABA的测定
4.2.3.1样品中激素的提取 取样
研磨 提取 离心 过柱
样品提取液
4.2.3.2样品测定
包被 洗板
样品 OD值
比色
竞争
洗板
加底物显色 洗板
加二抗
4.3Ca2+测定
银杏种实发育中 中种皮PCD的研究
研究生：于 维 华
导
师：陈鹏 教授
银杏（ Ginkgo biloba ）又名 白果，因其种子形态似杏而中种 皮和胚乳为银白色，遂称银杏。
银杏是现存种子植物中最古老的孓遗植物，在学术 界被称为“活化石”,具有重要的研究价值。
银杏的种核富含蛋白质、脂肪、糖、维生素C、 核黄素等营养成分，具有延年益寿、抗皱美容的功能， 一直以来被誉为高级滋补品；银杏外种皮中含有白果 酸、白果醇、白果酚等有机物，可提供药用；银杏叶 中含有的黄酮类化合物，可软化血管，增加冠状动脉 血流量，对心绞痛脑血管疾病具有显著疗效；银杏木 材结构细密、纹理通直，有光泽、易加工、不翘裂、 不易变形，适用于工艺、雕刻及其他特殊用材，是国 际上优良材种
多多指教!
谢谢!
5.试验进展
1.银杏种实发育过程的生长特点 2.银杏种实发育过程中Ca2+ 的含量
3.种仁中可溶性糖及蛋白质的含量
4.种仁中ABA的含量
5.不同发育时期中种皮结构特点
6. 研究计划
1.进行不同品种的指标测定
2.切片观察中种皮发生PCD的结构特点
3.LOX酶的测定
4.ACC合成酶的测定
5.银杏种实发育过程中各生理生化指标间的关系
植物体各部位运输水分和无机盐的管状分子 和行机械支持功能的各种厚壁组织细胞，成熟时 都是死细胞，它们的发育成熟过程本身就是 PCD （Programmed Cell death，细胞程序性死亡）， 有关管状分子分化过程中 PCD的研究已相当多.李 大辉等在研究银杏胚珠贮粉室的早期发育过程以 及珠心细胞死亡的细胞学机制时，证实了珠心细 胞的死亡是PCD过程.
杀青
样品 105℃ 70℃
烘干
称取0.2000g HCl浸泡24h
原子吸收法测量 离心 振荡2h
4.4可溶性糖的测定
乙醇提取
wk.baidu.com
杀青
样品 105℃
烘干
70℃ 称取0.1000g
离心 合并,定容
提取液+蒽酮
测定光密度
4.5蛋白质的测定
缓冲液 研磨 离心
样品
定容
提取液
考马斯亮蓝G-250 静置2min
595nm比色,得吸光度值
2.研究意义
银杏栽培品种繁多，种核间大小差异较大， 且不耐贮藏。加入 WTO 后 , 随着银杏种核商品的市 场不断扩大,银杏种核的优质高产高效生产已成为 保持和发展我国银杏核用生产特色与优势的迫切 要求。银杏种核形状及其种仁成分的分析研究中 发现，种核的形状与种仁成分含量有关。了解中 种皮发育过程中PCD发生的机理，通过推迟其发生 时间，使种仁充分生长，可以提高其经济价值， 同时对研究银杏种核贮藏保鲜性能亦具重要意义.
。
目录
1.选题依据
2.研究意义
3.试验材料
4.试验方法
5.试验进展
6.研究计划
1.选题依据
种梗
外种皮 中种皮 内种皮 胚乳 胚
种拖 外种皮 中种皮 内种皮 胚乳 子叶 胚 珠孔
种实纵切面
种实横切面
银杏的种子由外种皮、中种皮、内种皮、胚乳、 子叶、胚、胚根和珠孔等组成。
银杏中种皮骨质，乳白色，所以又有“白果” 之称。中种皮由珠心壁发育而成，在种子生长过 程中珠心壁细胞随胚乳生长变薄，并最终死亡形 成骨质的种壳。中种皮既是种实的输导组织，也 是种仁的保护组织。在种子发育过程中，6 月初 到7月上旬为种仁的速长期，而中种皮6月中旬开 始骨质化，它的形成对种仁体积的增大有一定影 响，从而影响其商品价值。电镜观察发现，中种 皮壳壁的管胞具有明显的穿孔，有良好的通透性， 一方面使种子收获后很快失水、硬化，另一方面 霉菌可穿透进入种子内部蔓延着生，造成种子的 不耐贮藏，失去其营养和经济价值。
3.试验材料
供试材料为银杏主栽品种佛指。
自盛花后开始，4月28日—6月1日每隔15—20天取样 一次；6月1日—7月15日隔10天取样一次；7月15日 至采收，隔20天取样一次.
4.研究方法
4.1形态学观察
4.1.1取样后测种子横、纵径，天平称重；将种子 切开，计算机扫描，观察其发育进程
4.1.2制作超薄切片，观察细胞形态、结构变化