动物性食品中奇异变形杆菌PCR检测方法的研究

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分子生物学方法在食品微生物检测中的应用

分子生物学方法在食品微生物检测中的应用分子生物学方法是一种利用生物分子来进行检测、分析和研究的技术手段，已经广泛应用于食品微生物检测中。

这些方法的应用可以提高检测效率和准确性，并且对食品安全有着重要的意义。

在下面的内容中，我将详细介绍一些分子生物学方法在食品微生物检测中的应用。

1.基于PCR的方法：聚合酶链反应（PCR）是一种广泛应用的分子生物学方法，通过扩增特定DNA序列来检测食品中的微生物污染。

PCR可用于检测致病菌、变质菌和食品腐败微生物，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。

此外，PCR还可以用于检测传统方法难以分离和检测的微生物，如非典型变形菌、嗜冷菌等。

2.实时荧光PCR：与常规PCR相比，实时荧光PCR可以实时监测PCR扩增的过程，具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点。

该方法可以实时检测食品中微生物的数量，并能够快速准确地定量微生物的存在。

此外，实时荧光PCR还可以与其他分子生物学方法结合使用，如多重PCR和荧光探针技术，以提高检测效果。

4.基于基因芯片的方法：基因芯片是一种能够同时检测多个样本中多个基因组区域的技术，可以用于高通量的微生物检测。

通过基因芯片，可以同时检测和鉴定食品中多个微生物的存在，并能够快速、准确地确定微生物的种类和数量。

此外，基因芯片还可以用于快速筛选和鉴定食品中的污染物和有害物质。

5.其他分子生物学方法：除了上述方法外，分子生物学还广泛应用于食品微生物检测中的其他技术。

例如，流式细胞术可以用来快速检测食品中的细菌和真菌等微生物，并且能够对样品中细菌的数量、形态和大小等进行精确测量。

此外，分子生物学还可以与其他化学和免疫学方法结合使用，如PCR-ELISA、PCR-RFLP和PCR-DGGE等，以提高微生物检测的准确性和灵敏度。

总之，分子生物学方法在食品微生物检测中的应用极其广泛。

通过这些方法，我们可以高效、准确地检测和鉴定食品中的微生物污染，为食品安全的监测和控制提供有力的技术手段。

多重PCR方法快速检测3种消化道病原菌

ＬＩＵＸｉａｏ — ｄａｎ，ＭＥＮＧＸｉａｎｇ — ｌｉ，ＸＵＮｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＷｅｎ — ｌｏｎｇ ’ ，ＷＡＮＧＪｕｎ — ｗｅｉ
（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，Ｃｈｉｎａ）
ａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｗｉｈｔａｄｅｔｅｃｉｔｏｎｌｉｍｉｔｏｆ１０ｃｆｕ／ｍＬ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｈｅｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｏｆｔｉｓｓｕｅｓａｍｐｌｅｓｒｏｆｍａｒｔｉｉｆｃｉａｌｌｙｉｎｆｅｃｔｅｄｍｉｃｅｏｒａｒｔｉｉｆｃｉａｌｌｙｃｏｎｔａｍｉｎ￣ｅｄｔｉｓｓｕｅｓａｍｐｌｅｓｐｒｏｖｅｄｈａｔｔｈｅｔｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲｗａｓｓｐｅｃｉｉｆｃａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅ．ＯｕｒｄａａｔｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓａｐｐｌｉｃａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＰ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ，ＳａｌｍｏｎｅＨａａｎｄＣ．ｐｅｒｉｆｑｎｇｅｎｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｏＰｔｅｕｓｍｉｒａｂｉｌｉｓ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ；ｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲａｒｔｉｉｆｃｉａｌｔｅｓｔｓ

水产品中8株特殊生化型奇异变形杆菌的分离鉴定

水产品中8株特殊生化型奇异变形杆菌的分离鉴定陈伟峰;洪舒音;赵秀玲;胡群【摘要】[目的]探讨水产品中8株特殊生化型奇异变形杆菌的分离与鉴定.[方法]从8个批次的鱼粉和冻黄鳍金枪鱼样品中分离到8个菌株,通过表型观察、生化鉴定和16s rDNA及rpoB系统进化分析对其进行了鉴定,并对细菌鉴定的方法选择、减少变形杆菌检测鉴定偏差进行了探讨.[结果]从水产样品中分离的8个菌株经鉴定确认为奇异变形杆菌,且它们的生化特征与典型菌株均存在差异.其中,64285等6个菌株鉴定为KCN阴性的奇异变形杆菌,64284菌株鉴定为KCN阴性、木糖阴性的奇异变形杆菌,20932菌株鉴定为鸟氨酸脱羧酶阴性、KCN阴性的奇异变形杆菌,它与典型的奇异变形杆菌相差较大,是一种非常罕见的生化型.[结论]该研究为变形杆菌的准确鉴定以及预防因其引起的疾病提供科学依据.%[Objective] The study aimed to discuss the isolation and identification of 8 Proteus mirabilis strains with the special biochemical type from the aquatic products.[ Method] 8 strains were isolated from the samples of 8 batches of the fish meal and the frozen yellowfin tuna and they were identified through the phenotype observation, biochemical appraisal and 16s rDNA and rpoB system evolution analysis. The selection of the bacteria identification methods and the reduction of the identification error for the testing of P. Mirabilis were discussed. [ Result ] 8 strains were isolated from the aquatic products were identified as P. Mirabilis, and their biochemical characteristics had difference with that of the typical strains. Among which, 6 strains such as 64285 strain were identified as KCN negative P. Mirabilis, 64284 strains was identified as KCN negative and xylose negative P.Mirabilis and 20932 strain was identidied as the omithine decarboxylase negative and KCN negative P. Mirabilis which had a large difference with the typical P. mirabUis and was a very rare biochemical type. [ Conclusion] The study provided the scientific basis for the accurate identification of P. Mirabilis and the prevention of the disease caused by P. Mirabilis.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】4页(P118-121)【关键词】奇异变形杆菌;鉴定;鸟氨酸脱羧酶;KCN试验【作者】陈伟峰;洪舒音;赵秀玲;胡群【作者单位】奉化出入境检验检疫局,浙江宁波315500;奉化出入境检验检疫局,浙江宁波315500;奉化出入境检验检疫局,浙江宁波315500;大榭出入境检验检疫局,浙江宁波315812【正文语种】中文【中图分类】S986.1变形杆菌属(Proteus)是引起食物中毒和临床感染的主要微生物类群之一。

一株引起鸡白痢鸡伤寒平板凝集实验阳性的奇异变形杆菌的分离鉴定

摘要：从宁夏某养殖场鸡白痢鸡伤寒多价平板凝集抗原阳性鸡只的肠道中分离到一株革兰氏阴性杆菌，经16S rRNA 测序鉴定为奇异变形杆菌；通过对该菌株进行人工感染健康鸡只，成功复制出与自然感染相同的病例。

关键词：鸡白痢；鸡伤寒；变形杆菌的分离中图分类号：S858文献标识码：ADOI 编号：10.14025/ki.jlny.2017.01.016周云锋1，2，褚欧成1，2，边海霞1，2，郭磊1，王学强1，王洁1，2，王翔1，2（1.宁夏晓鸣农牧股份有限公司，宁夏银川750011；2.宁夏家禽工程技术研究中心，宁夏银川750021）鸡沙门氏菌病OIE 规定的标准诊断方法：病原鉴定。

采取检测样本，通过选择性培养基分离、培养细菌，还有沙门氏菌复苏试验，都可以从病原学上鉴定、验证鸡沙门氏菌病；血清学试验。

利用沙门氏菌抗原，通过快速全血凝集试验、快速血清凝集试验、试管凝集试验、微量凝集试验等检测样本中的抗体，达到诊断的目的。

但我国国标对鸡白痢伤寒检测采用平板凝集实验，实验方法随着细菌的变异准确性越来越低，经实践证明有多种细菌感染均会引起平板凝集阳性，其中包括奇异变形杆菌。

奇异变形杆菌（proteusmirabilis ，PM ）属于肠杆菌科变形杆菌属，是革兰氏阴性运动细菌，有鞭毛，是人和动物的寄生菌和病原菌；广泛分布于人和动物的体表、黏膜及消化道，其产生的毒素可引起中毒，是一种常见的条件性致病菌[1]，当机体抵抗力降低时容易引起发病。

鸡奇异变形杆菌病是近年来新发生的一种鸡群的细菌性传染病，各种日龄的鸡均可感染，但以7周龄以下的雏鸡最易感，病死率可高达50%以上；育成鸡及成年产蛋鸡均易感但发病率与病死率一般很低。

该病作为一种不常暴发的新的细菌性传染病，可造成较高的死亡，而愈后的雏鸡生长速度变慢，导致雏鸡的大批死亡，造成很大的经济损失，因此应引起养鸡业的高度重视[2]。

近年来，有少量文献报道[3]奇异变形杆菌与沙门氏菌属具有共同抗原，能够与沙门氏菌属的多价血清和因子血清发生交叉凝集，引起菌种鉴定上的困难。

PCR技术在食品科学领域中的应用

食品生物技术导论——PCR技术在食品科学领域中的应用学院：食品学院班级：食工09级一班学生：蒋璐璐学号：2009113167指导老师：刘福林PCR技术在食品科学领域中的应用摘要：本文综述了PCR 的技术原理，PCR除了是一个诊断工具外，更重要的是它有广泛的运用。

PCR本身可直接用来鉴定特定基因的存在与否，也可以用来侦测基因是否有异常。

PCR技术的发展历程及其在食品微生物检测、转基因食品、食品成分检测等方面的应用并对PCR技术今后的发展作出展望。

关键词：PCR技术原理食品应用引言：PCR(Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶链式反应，又称多聚酶链反应、基因的体外扩增法、无细胞克隆技术等。

这是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段的方法。

利用此方法,能使极其微量的目的基因或某一特定的DNA片段在几小时后迅速扩增数百万倍,且无需通过繁琐费时的基因克隆程序,便可获得足够数量的精确的DNA拷贝。

1983年，PCR技术由美国Cetus公司人类遗传研究室的科学家K.B. Mullis发明，因其特异性强,灵敏度高、快速和准确等优点，在食品、农业、医药、分子生物学等领域得以广泛的应用。

本文主要对PCR技术在食品科学领域中的应用进行综述。

1 、PCR技术的基本原理PCR技术由三个步骤反复的热循环构成:高温变性、低温退火和适温延伸。

高温变性，在高温(95℃)条件下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；低温退火，在低温(37～55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链；适温延伸，即在特异耐热酶-TaqDNA聚合酶的最适温度(72℃)时,引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成新的DNA链[1]。

新合成的DNA双链又可作为扩增模板，反复进行解链、退火、延伸三个步骤的热循环，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍, PCR产物得以2n 的指数形式迅速扩增,经过25～30个循环后,理论上可使基因扩增109 倍以上,实际上可达106～107 倍。

食物中毒标本中奇异变形杆菌致病因子检测研究

２１内毒素检测情况：４．６株奇异变形杆菌产生内毒素者３株，出率为７．％。其中食品中分离２５检６０９９株，有１株产内毒素，从病人分离的】株全部产内８７毒素。２２毒力试验检测情况：在４．６株菌中，有２３株菌使小白鼠在８ｈ内死亡；１株菌使小白鼠在１ｈ内１３死亡；６株菌使小白鼠在２４ｈ内死亡；４株菌出现症状但未死亡。从病人腹泻粪便分离到的１７株菌均使小白鼠在１２ｈ内死亡。从而说明此菌株毒力较强。２３Ｔ测定情况：６株奇异变形杆菌中有２．Ｓ４２株菌肠重与鼠体其余部分重量之比均大于００３．，其余２８４株菌ｓ测定结果均小于００３ｒ．８，且２２株ｓｒ阳性有
医学化验所生产）０５ｍｌ入灭菌试管中，混匀置．加３７℃ 恒温水浴１ｈ后观察结果。凡与阳性对照结果相同，形成凝胶状为阳性；凡与无热原水阴性对照相
作者单位：７ｏｏ山东，枣庄市薛城区卫生防疫站２７０
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PCR快速检测食品致病原方案

性致病菌的概况；2、设计一个实验方案，基于PCR技术检测牛奶中沙门氏菌，需要列出详细实验方案。

要求：思路清晰，用词较为专业，不少于1800字。

答:1.概括：PCR技术又称聚合酶链式反应,是通过模拟体内DNA复制的方式在体外选择性地将DNA 某个特殊区域进行片段扩增出来的技术。

基因扩增的实验又称PCR实验，是专门用来检测艾滋病，乙型肝炎病毒以及检测食品中食源性致病菌等感染性疾病的一种检验手段。

它可以通过将病毒体体内所含有的基因进行，扩增的方法测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。

由于该检测的方法可以测出普通检测发现的病毒。

并具有灵敏度高，特异性高，快捷，对样品要求低等优点。

因此被临床医生广为认可，已广泛的应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的病毒诊断。

但是办事中实验需要有能保证绝对安全，配置合理的实验室和非常规范的操作为前提，近年来，对临床扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检验结果的可靠性，准确性和安全性起到了至关重要的作用。

2.方案：PCR在食品领域中可以对沙门氏菌进行控制性的微生物检验，其方案如下。

沙门氏菌是一种常见的重要的人蓄共患病原菌。

不仅能引起各种动物的沙门氏菌病，而且与人类多种致病有关，在世界各地的食物中毒病例中，沙门氏菌引起的中毒病例占首位或者第二位。

实验通过ss培养基的培养以及革兰氏染色检验。

测得鉴定和纯化菌株，并选用操作简单快速，费用低廉的热裂解法来获得细菌基因组的DNA。

同时对热裂解的时间进行了比较实验，以及对PCR检测的敏感性和所用引物的特异性进行了试验。

结果表明，所培养的菌却为沙门氏菌。

菌体煮沸时间为两分钟，这可得到比较好的PCR效果，通过PCR的检测出129pg的沙门氏菌DNA，所设计的引物对沙门氏菌有比较好的特异性。

1.沙门氏菌的危害检验:沙门氏菌是一种常见的重要的人蓄共患病原菌，不仅能引起各种动物的沙门氏菌，并而且与人类多种疾病有关，在世界各地的食物中毒案例中位居首位，因此，沙门氏菌日益引起了人人们的重视，成为了各国检验机构对多种进口出食品的必检项目之一。

一起奇异变形杆菌食物中毒的实验室诊断及分析

如下。
样，进行病原学检测，最后经实验室诊断查明是一起进行生化反应试验。１２４ＩＥ３全自动微生物分析系统．．ＶＴＫ２操作按ＶＴＫ２ＩＥ３操作说明书进行。按无菌操作方法采集现症患者疑菌落染色镜检和进行ＶＴＫ２ＩＥ３分析系统鉴定，仪器的
时。
食物中毒实验室诊断奇异变形杆菌
中图分类号：Ｒ５７５．９
２０年１０７０月２１日，化州市某餐馆进食者出现类
似急性胃肠炎症状，腹痛，腹泻（样便）发慌，水，
１２２血清学试验．．
从三糖铁斜面上挑取可疑菌
ＥＢ平板３ ℃ ２Ｍ７４小时培养。查看培养基上菌落的生长
三糖铁斜面上层变黑或变红，下层变黄或变黑，大
部分都产气。挑取可疑菌落进行生化鉴定，生化反应特
征见பைடு நூலகம்表１。
情况，并挑取可疑菌落接种于三糖铁斜面３ ℃ ２７４小
２４ＩＥ３全自动微生物分析系统．ＶＴＫ２
国际医药卫生导报
一
２００８年
第１４卷
第２期（月Ｔ）１半ｇ
起奇异变形杆菌食物中毒的实验室诊断及分析
余冬令
广东化州５５０２１０
曾超锋
化州市疾病预防控制中心
摘
要目的调查引起本次食物中毒事件的原因，为现场处理和临床诊断治疗提供依据。方法参照
异变形杆菌，６份厨具拭子中检出４份奇异变形杆菌，阳性率为６％。食品，厨具和病人所检出的致病菌７

鹅奇异变形杆菌的分离鉴定、药敏试验

2019年第05期表1分离菌的药敏试验结果奇异变形杆菌为革兰氏阴性杆菌，是一种常见的条件致病菌。

奇异变形杆菌是具有细胞迁徙生长现象的兼性厌氧菌，对生长环境要求不高，普遍存在于泥土、水和机体消化道中，有周鞭毛，运动活泼。

奇异变形杆菌广泛存在于人和动物的肠道中，该菌是引起临床泌尿系统感染的重要病原菌。

奇异变形杆菌可引起家禽感染，可穿透种蛋壳，造成鸡胚死亡、卵黄感染以及雏鸡、鸽死亡等，引起山羊和猪腹泻。

在狐狸、水貂、等主要引起消化道、呼吸道、泌尿生殖道的感染及体表溃烂等症状。

本文对一起送检的疑似感染奇异变形杆菌的雏鹅进行实验室诊断。

发病情况如下：2018年6月安徽省滁州市某养鹅户饲养了2000只12日龄雏鹅，患病雏鹅精神萎靡、食欲减退甚至不食、站立不稳、或者趴在地上，排黄白色和浅绿色稀粪，重症者肛门周围羽毛上均沾染有粪便。

对病死鹅的解剖发现，病死鹅脱水，尤其是腿部，爪子脱水尤为严重，喉头出血，肺脏淤血、出血，皮下淤血，肠道广泛性出血，尤其是十二指肠出血严重，整个肠道空虚，里面没有内容物。

整个胰腺出血，呈现红色，肝脏肿大，质地脆，淤血，颜色发紫，脾脏肿大，有出血斑点，肠内容物呈粘液状，部分脑膜充血，肾脏肿大，出血，淤血。

本文对该起送检的疑似奇异变形杆菌感染的病死鹅进行了病原分离。

1材料与方法1.1.1被检材料安徽省滁州市凤阳县某养鹅户送检的12日龄病死鹅6只。

1.1.2药敏纸片环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢他啶、头孢西丁、链霉素、新霉素、庆大霉素、复方新诺明、阿米卡星、多粘菌素B 等13种抗菌药物纸片购于杭州滨和微生物试剂有限公司，生产批号是20180415。

1.2.1分离菌的纯化及染色镜检用无菌接种环蘸取病死鹅的肝脏组织分别在麦康凯琼脂、SS 琼脂及营养琼脂培养基上划线接种，然后置37℃培养18~24h。

对培养出来的菌落，挑取疑似单个菌落在营养琼脂上纯化。

同时，对分离菌进行革兰氏染色，油镜下观察。

一起竹鼠感染奇异变形杆菌的诊断

一起竹鼠感染奇异变形杆菌的诊断赵德丰&秦桢富2蒋先彪2李广平$何奇松4莫梅鲜$秦建有$闭璟珊4熊毅4马琳4（1兴安县动物疫病预防控制中心广西桂林5413002阳朔县动物疫病预防控制中心广西阳朔5419993广西恭城县动物疫病预防控制中心广西恭城5425994广西壮族自治区动物疫病预防控制中心广西南宁530001）［摘要％某竹鼠养殖场零星竹鼠出现不采食、拉稀等症状，并日渐消瘦至死亡。

经实验室诊断为感染奇异变形杆菌，对患病竹鼠连续3d注射1mg/kg头U瘗月亏，病情有所控制。

关键词：腹泻；剖检；分离鉴定；药敏试验竹鼠又名竹狸，属竹鼠科、竹鼠属，是一种体型较大的啮齿类动物-目前已在南方各地大规模人工养殖「门。

竹鼠肉质鲜美可口，营养丰富，属于高蛋白、低脂肪的肉类，有促进人体白血球和毛发生长的功效,能增强肝功能和防止血管硬化,抗衰老，是天然的美容和强身食品-饲养过程中，竹鼠很少患病,偶发病也多是因饲养操作不当而引起的腹泻和牙齿脱落「2,-多种细菌和病毒均可引起竹鼠腹泻，需要根据具体情况指导用药，以起到良好的治疗效果-桂林市恭城县某竹鼠养殖场，竹鼠存栏1200多只，有4栋竹鼠养殖舍。

该场长时间都有零星小竹鼠拉稀现象发生。

患鼠一般在断奶分栏$〜4d 后出现拉稀症状，拉稀2d后脱水-养殖场前期使用咲喃卩坐酮、土霉素治疗无效果-笔者结合临床症状和实验室检测分析，诊断病例为感染奇异变形杆菌,治疗后病情有所控制-1材料与方法1.1病例情况2只50日龄小鼠和1只120日龄小鼠，2019年11月中旬开始出现零星拉稀现象，粪便呈浅黄白色，出现症状后2d小鼠开始脱水-1.2主要试剂血平板和LB液体培养基分别购自郑州安图生物工程股份有限公司和青岛海博生物技术有限公司，头抱嗟月亏、四环素、复方新诺明、头抱嗟吩、氨节西林、卡那霉素、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、氧氟沙星等10种药敏试纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司；一步法提取试剂盒、DL2000DNA Marker,PCR反应试剂等均购自宝生物工程（大连）有限公司-"为通信作者基金项目：广西重点研发计划项目（桂科AB18221076&阳朔县技术研究与开发计划（201905）1.$实验室检查1.$.1剖检:对$只供试小鼠进行解剖，观察其病理变化-1.$.2细菌分离培养：采集$只小鼠心、脾、肝、淋巴结等内脏器官，涂抹血平板，于培养箱中$7°C培养,24h后观察结果。

多重PCR方法检测食品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌

多重PCR方法检测食品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌江迎鸿;谭贵良;陈亚波;李向丽【摘要】通过扩增霍乱弧菌(VC)、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生李斯特氏菌(LM)的特异性核酸片段,建立了VC、VP和LM的多重PCR检测方法,相应的扩增片段分别为588、450、234 bp.该方法特异性强、灵敏度高、简便、快速,可实现对上述致病菌的同时检测,在接种食品中检测灵敏度达到103 CFU/mL.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2011(038)010【总页数】4页(P135-137,150)【关键词】多重PCR;霍乱弧菌;副溶血性弧菌;单核细胞增生李斯特氏菌;食品【作者】江迎鸿;谭贵良;陈亚波;李向丽【作者单位】中山市质量计量监督检测所,广东中山528403;中山市质量计量监督检测所,广东中山528403;中山市质量计量监督检测所,广东中山528403;中山火炬职业技术学院生物医药系,广东中山528436【正文语种】中文【中图分类】TS201.6长期以来，各食品质检部门和食品企业内部大都采用培养的方式对致病菌进行检测。

这些传统方法不仅费时、费力，而且结果假阳性较高，不能适应现代微生物快速检测发展的需要。

因此，近年来一些研究者开始采用新兴的分子生物学方法（如定量PCR和多重PCR法）对食品中致病菌进行检测。

其中多重PCR法是一种较为理想的方法，可在同一个PCR反应体系中加入两对或两对以上的引物，同时扩增出多个核酸片段，实现对多个致病菌的快速检测。

目前已有对水产品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌[1-2]以及对饮用水[3]和无公害畜禽肉中[1]多种致病菌进行多重PCR检测的报道，但未见对食品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌3种致病菌进行多重PCR检测的研究。

本研究采用以上3种致病菌的特异性引物，在单重PCR的基础上建立了多重PCR检测方法，实现了多种致病菌的同步快速检测。

奇异变形杆菌鉴定流程

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首先要进行准确的样本采集，这是后续鉴定工作的基础。

奇异变形杆菌生化鉴定

奇异变形杆菌生化鉴定
奇异变形杆菌（Bacillus cereus）是一种常见的细菌，广泛存
在于土壤、灰尘、食品和水中。

对于奇异变形杆菌的生化鉴定，可以通过以下步骤进行：
1. 培养基选择：选择适合奇异变形杆菌生长的培养基，如普通营养琼脂平板培养基。

2. 培养：将待检菌株接种到培养基上，通常在37℃下孵育12-24小时。

3. 形态特征观察：观察菌落形态特征，奇异变形杆菌的菌落通常呈不透明、灰白色，边缘不规则，中央凹陷。

4. 芽孢形成观察：奇异变形杆菌属于芽孢形成细菌，可通过鉴定菌落上是否有明显的中央坚果状小球来确定。

5. 革兰染色：进行革兰染色，奇异变形杆菌为革兰阳性细菌，细胞呈直杆状。

6. 生化鉴定：可以使用一系列常规生化试验来鉴定奇异变形杆菌，如淀粉水解试验、甲烷红酚酸碱指示剂试验、溴百里酚蓝酸盐试验等。

7. 其他鉴定方法：除了生化鉴定外，还可以使用分子方法如聚合酶链反应（PCR）、16S rRNA基因测序等进行进一步的确
诊和鉴定。

需要注意的是，奇异变形杆菌与其他的芽孢形成细菌（如大肠杆菌、肠球菌等）在某些生化试验上可能存在相似性，因此综合多种鉴定方法可以提高鉴定的准确性。

同时，细菌培养和鉴定需要在合适的实验室环境下进行，并遵循相关的生物安全操作规范。

一株猪源奇异变形杆菌的分离鉴定

512021年第1期一株猪源奇异变形杆菌的分离鉴定张秋林1,2，陈荟旭1,2，潘姣姣1，孙世浩2，张伟信1,2，李莲瑞1,2*（1.塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室，新疆阿拉尔 843300）摘要：试验通过对阿克苏某生猪养殖场腹泻仔猪肛拭子进行病原分离，并成功分离到一株细菌。

细菌纯化后通过革兰氏染色观察其形态结构，并提取其DNA测序。

分离菌株得到的基因序列标记为W1，通过DNA star生物软件将菌株W1与国内外菌株进行基因序列对比，并做同源性和进化树分析。

结果表明：W1与国内外15株奇异变形杆菌的同源性为96.4%~99.4%，其中与W1同源性最低的是KT216564，与W1同源性最高的是AB272366。

遗传进化树分析表明，分离株W1与南京株JF775415处于同一分支，属于奇异变形杆菌，该菌株的成功分离为阿克苏地区对奇异变形杆菌的研究提供参考。

关键词：阿克苏；奇异变形杆菌；分离鉴定中图分类号：S 855.1 文献标识码：A 文章编号：1672-9692（2021）01-0051-04Isolation and identification of a strain of Proteus mirabilis from swineZhang Qiulin 1,2, Chen Huixu 1,2, Pan Jiaojiao 1, Sun Shihao 2, Zhang Weixin 1,2, Li Lianrui 1,2*(1. College of Animal Science,Tarim University, Xinjiang Alar 843300; 2. Engineering Laboratory of Tarim Animal Diseases Diagnosis and Control, Xinjiang Production&Contruction Corps Alar, Xinjiang Alar 843300)Abstract: In the experiment, the pathogen was isolated from anal swabs of diarrhea piglets from a pig farm in Aksu, and a strain of bacteria was successfully isolated. The isolated bacteria were purified and observed their basic morphological structure by gram staining, and their DNA was extracted for sequencing. The gene sequence obtained by the isolated strain is marked as W1, and the gene sequence of the strain W1 was compared with the domestic and foreign strains through the DNA star biological software, and the homology and evolutionary tree analysis are performed. The test results showed that the homology between W1 and 15 strains of Proteus mirabilis at home and abroad is 96.4%~99.4%, of which KT216564 had the lowest homology with W1 and AB272366 had the highest homology with W1. The analysis of the genetic tree, the isolate W1 was in the same branch as the Nanjing strain JF775415 and belongs to Proteus mirabilis . The successful isolation of this strain provides a reference for the study of Proteus mirabilis in Aksu area.Key words: Aksu; Proteus mirabilis ; Isolation and identification收稿日期：2020-09-02作者简介：张秋林，硕士在读，研究方向为动物群发性疾病防控。

奇异变形杆菌研究进展

奇异变形杆菌研究进展李欣南;夏欣;李永才;韩镌竹;马帅;李香珍;苏葳艺【摘要】奇异变形杆菌（proteus mirabilis,PM）作为人畜共患传染病病原,其危害性仅次于沙门氏菌等强致病菌,是一种常见的条件致病菌。

近年来,PM引起的食品中毒事件屡见报道,其在畜禽养殖业上造成的损失也逐年增加。

因此笔者将近年对PM的研究情况进行整理,使研究人员对PM有进一步的了解,以便于更好地防控该菌株引起的生物危害。

同时,了解PM的耐药特征,对于指导临床合理应用抗生素、减少耐药菌株的生产和传播具有重要意义。

【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2011(000)012【总页数】3页(P73-75)【关键词】奇异变形杆菌;鉴定方法;耐药机制【作者】李欣南;夏欣;李永才;韩镌竹;马帅;李香珍;苏葳艺【作者单位】辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳110016【正文语种】中文【中图分类】S852.618奇异变形杆菌（proteus mirabilis，PM）属于肠杆菌科变形杆菌属，是革兰氏阴性运动细菌，有鞭毛，是人和动物的寄生菌和病原菌；广泛分布于人和动物的体表、黏膜及消化道，其产生的毒素可引起中毒，是一种常见的条件性致病菌。

当机体免疫力下降时，PM可感染人和动物，引起尿道炎、肾盂肾炎、中耳炎、菌血症、小儿急慢性腹泻及脊髓炎等多种疾病，严重时可致死[1]。

近年来，PM在畜禽生产中引起的疫情频频发生，给畜禽养殖场带来巨大的经济损失。

感染该细菌的肉鸡可能出现热应激反应，发病率和死亡率均较高[2]。

羊奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

羊奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验谢秀兰;黎帅;马小明;康晓冬;高海慧;李颖康【摘要】为查明宁夏地区某羊场羔羊腹泻的发病原因并选择敏感药物用于治疗,从患病羔羊粪便中分离出4株细菌,进行形态特征、培养特性、16 S rRNA测序、VITEK微生物鉴定系统鉴定、致病性试验及药敏试验.结果显示,分离菌为奇异变形杆菌.动物试验表明,4株奇异变形杆菌对小鼠具有很强的致病性.药敏试验表明,4株奇异变形杆菌对氨基糖甙类抗生素(阿米卡星、卡那霉素、链霉素)、氟苯尼考及头孢菌素类抗生素敏感,而对大环内酯类(红霉素和克林霉素)、复方新诺明、恩诺沙星全部耐药.对青霉素类(哌拉西林、氨苄西林、阿莫西林)、喹诺酮类(环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星)、四环素、万古霉素、庆大霉素呈现不同程度的耐药.结果表明,该4株奇异变形杆菌具有较强的致病力和多重耐药性,可能是此次羔羊腹泻的致病菌,治疗首选氨基糖甙类、氟苯尼考及头孢菌素类抗生素.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)007【总页数】5页(P115-119)【关键词】羔羊腹泻;奇异变形杆菌;分离鉴定;药敏试验【作者】谢秀兰;黎帅;马小明;康晓冬;高海慧;李颖康【作者单位】宁夏农林科学院动物科学研究所,宁夏银川 750002;宁夏大学新华学院,宁夏银川 750021;宁夏农林科学院动物科学研究所,宁夏银川 750002;宁夏农林科学院动物科学研究所,宁夏银川 750002;宁夏农林科学院动物科学研究所,宁夏银川 750002;宁夏农林科学院动物科学研究所,宁夏银川 750002【正文语种】中文【中图分类】R378.99;S858.26奇异变形杆菌(Proteus mirabilis，PM)是营腐生的人畜共患病原菌，也是一种引起多种动物患病的条件致病菌，广泛存在于自然环境及人和动物的肠道中，在人类可引起食物中毒、腹泻、菌血症、尿道炎及呼吸道感染等[1-5]。

PCR方法检测猕猴奇异变形杆菌

PCR方法检测猕猴奇异变形杆菌禹文海;赵远;黄芬;杨凤梅;鲁帅尧;李艳艳;陈丽雄;王俊斌;和占龙【摘要】目的利用PCR检测猕猴奇异变形杆菌,为该病菌的鉴定、临床诊断、治疗及流行病学调查等提供参考.方法从猕猴粪便中分离奇异变形杆菌并进行鉴定,纯培养后提取基因组DNA,经PCR扩增、凝胶电泳检测、基因序列测序后,序列提交BLAST比对分析.用该菌株检验PCR方法的特异性和敏感度,利用PCR方法和传统分离培养法同时对80只猕猴进行检测.结果在分离得到的猕猴奇异变形杆菌中扩增出225 bp的基因序列(GenBank登录号为JQ040548,其与GenBank中奇异变形杆菌AM942759的同源性为98.2%),而其它5株非奇异变形杆菌的PCR扩增结果为阴性,表现出极好的特异性.纯化培养的奇异变形杆菌利用PCR方法检测灵敏性,其敏感度达80 cfu/mL.在80只猕猴中,共检测出了2份阳性样品,阳性率为2.5%,检测结果与传统培养方法一致.结论该PCR方法能迅速、准确地检测猕猴奇异变形杆菌,在临床具有良好的实用性.%In order to provide data for Proteus mirabilis identification , clinical diagnosis , treatment and epidemiological investigation in Macaca mulatto, the Proteus mirabilis from Macaca mulatto was detected by PCR method in this study . Proteus mirabilis was isolated and identified from feces of Macaca mulatta, and the DNA was extracted from cultured strains and then amplified by PCR . The products were analyzed by gel electrophoresis and then sequencing . The sequence of Proteus mirabilis was identified by BLAST . The specificity and sensitivity of PCR were assessed . Eighty samples of Macaca mulatta were screened for Proteus mirabilis by PCR method and traditional method of isolation and identification simultaneously . Results showed that the sequence (225bp) of Proteus mirabilis was amplified from Macaca mulatta and submitted to GenBank (No . JQ040548); homology analysis showed that the strain shared 98 .2% similarity with the Proteus mirabilis (AM942759). The specificity was identified by negative amplification of other 5 non-Proteus mirabilis strains. The sensitivity of PCR was 80 cfu/mL . The PCR method was comparable with traditional method of isolation and identification as the positive rate of Proteus mirabilis in Macacamulatta detected by that was 2 .5% (2/80) . The PCR method was useful for its rapid and accurate detection of Proteus mirabilis in Macacamulatta, which would be applicable in clinic.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2013(029)003【总页数】4页(P278-281)【关键词】猕猴;奇异变形杆菌;PCR检测【作者】禹文海;赵远;黄芬;杨凤梅;鲁帅尧;李艳艳;陈丽雄;王俊斌;和占龙【作者单位】昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;中国医学科学院北京协和医学院,医学生物学研究所,昆明,650118;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224;昆明理工大学,生命科学与技术学院,昆明,650224【正文语种】中文【中图分类】R378.22011年4月，我所猴场离乳婴猴一周内先后有21只出现腹泻，其中造成4只死亡，根据菌落菌体形态特征及传统生化反应鉴定为奇异变形杆菌。

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变形杆菌检测具有良好的特异性，对人工布菌样品的检测敏感度达１２０ｃ／０ｇ． ×１２ｆ１０。通过对扩增目的片段的核酸序列测定，ｕ目的片段大小为２８ｂ。该方法用于奇异变形杆菌检测具有特异性强、感、４ｐ敏快速的特点，用于动物性食品中奇异变形杆菌适
２Ｃｎｒｏｒｅｔｎｏｔｅｎａｄｓａｓ１Ｆｊｎｐｖｃ．ｕｈｕ３００）．ｅｔｒｅｎａｄｃｎｔｉｌｉｓ１ｕｉｒｉｅＦｚｏ５０３ｅｆｐｖｍｌｈａｍｅｅｉａｏｎ
ＡｓａｔＴｓｂｓＰｌｅｓｈｉＲａｔｎ（Ｃ）ｍｔｏｒｅｃｏｒｅｓｉｂｉＳａｔｐｖｅａｅｒｃｅｏｒａｉｂｔｃｏｅａｌｈｏｍｒｅＣａｅｃｏＰＲｅｄｆｔｔｎＰｏｕｍｒｉ，Ｏｓｏｒｉｒｆｅｅｔｆｎ— ｒｔｉｙａｎｉｈｏｄｅｉｔａｌｏｄｅｎｍｈｏｓｓｄ
ｔｙｉｓｅｔｎ０ｈａｉｏｅｃｎｅｖｄｓｃｉｎｏｅｔｌｒｅｒｓｔｎｅｇｎｅｕｎｅｏｒｔｕｒｂｌ．ｅｓｏｐｃｃｐｍｒｗｓａｐｃｉ．ｎｔｅｂｓｓｆｔｏｓｒｅｅｔｆｈｅｕｉｅｉａｃｅｅｓｑｅｃｆＰｏｓｍｉｉｓａｓｔｆｅｉｒｅｓａｒｎｏｈｏｔｌｔｓｅａｉｓｆｉｉｄｓｎｄ，ＲｍｅｈｅｅｐｄｔｉｅｔｙＰｏｕｒｂｌ．ｈＲｍｅｈｄｅｔｂｉｅｎｔｉａｔｌｌｉｈｙｓｃｃａｄｉｅＲｄｔｃｅｉｅａＰｔｏｄｖｌｅｎｉｒｔｓｍｉｉｓｒｅＰｔｏｓｌｈｄｉｈｓｒｃｅａｅｈｇｌｐｉ．ｎａｅｔｇＣｄｏｏｄｆｅａｉＣａｓｉｅｆｔｅ
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第３物性食品中奇异变形杆菌ＰＲ检测方法的研究Ｃ
罗兆飞张为宇杨得胜（．西大学动物科技学院，１广南宁５０２；２福建省动物疫病预防控制中心，３０２．福州３００）５０３
摘要研究制定动物源性食品中奇异变形杆菌的ＰＲ检测方法，日常食品卫生监测提供快速检验的依据。根据奇异变形Ｃ为
杆菌抗亚碲酸盐基因的保守序列设计Ｑ４ＦＲ，定ＰＲ备件，用标准菌株检验方法的特异性和敏感度。引物Ｑ４２８／确Ｃ利２８对奇异
检测的快速筛选检验。
关键词
奇异变形杆菌ＰＲ检测Ｃ
文章编号：０３３１２０｝１０１３１０ —４３（０８０ —００ —０
文献标识码：Ａ
ＤｅｅｔｎｆＰｒｔｕｒｂｉｓｉａｉｌｔｃｏｏｏｅｓｍｉａｌｎｎｍａ —ｄｅｉｅｏｄｂｌｍｅａｅＣｈｉａｔｏｉｉｒｖｄｆｏｙＰｏｙｒｓａｎＲｅｃｉｎ
ＫｅｒＰｒｔｕｒｂｌｄｔｃｉｎＰＲｙｗｏｄｓｏｅｍｉａｉｉｓｓｅｅｔＣｏ
奇异变形杆菌（ｒｅｓｍｒｂｉ）属于肠杆菌科Ｐｏｕｉｉ，ｔａｌｓ变形杆菌属… ，广泛分布于人和动物的体表，是一种常见的条件性致病菌。奇异变形杆菌在人或动物体内或体表的适宜环境生长并大量繁殖时，引起人能的呼吸道感染、道感染以及食物中毒。近年来有尿关变形杆菌引起食物中毒的事件逐渐增多，其奇尤异变形杆菌ｊ。变形杆菌与副溶血性弧菌、门沙菌一并构成引起食源性疾病的三大代表微生物＿，４ｊ应引起社会各界的重视。奇异变形杆菌主要污染动