降血糖药物筛选方法.

指标： 血糖升高，胰岛素水平升高，出现明显的胰岛 素抵抗。
优缺点： 模拟人类高糖高脂膳食诱发糖尿病模型； 但造模时间较长，成本高，不稳定。
2）自发性糖尿病大鼠（PO大鼠）
PO大鼠又称嗜ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ肥鼠 发病特征：
出生两周后，90%PO大鼠出现明显的胰岛素抵抗 症状。
发病阶段：
起始阶段，血清及胰岛素水平正常 胰岛素水平升高，血糖正常 高胰岛素水平，高血糖水平 胰岛细胞受损，导致低胰岛素和高血糖
优缺点：造模快速、模型稳定、组织毒性小；但 价格昂贵
2）自发性糖尿病大鼠（BB大鼠）
渥太华Biobreeding实验室培育出来的自发遗传I 型糖 尿病大鼠。
发病机制：自身免疫性破坏胰腺β细胞引发胰腺炎
发病特征：于出生后60日发病，体重减轻，糖尿，
低胰岛素，胰腺炎、胰岛细胞减少， 须胰岛素治疗才能生存。
2.2 II型糖尿病动物模型
II 型糖尿病动物模型的病理生理改变
胰岛素抵抗增加 基础肝糖输出率增加，空腹高血糖 胰岛细胞功能减退
胰岛素抵抗的出现，为维持血糖稳定，胰岛细胞 分泌胰岛素代偿性增加，最终导致细胞分泌功能 障碍，发展为糖尿病。
1）高糖高脂饮食诱发II型糖尿病动物模型
方法： 采用占热量61%高脂饮食（饱和脂肪酸的动物 脂肪，蛋白质19%，碳水化合物20%，脂肪 61%），饲养3-6周。
发病率
全球糖尿病患者人数已超过1.77亿，预计到2025年将 达到3.7亿，成为继心血管和肿瘤之后第三位“健康 杀手” （WHO）。
中国糖尿病发病率达5%，全国糖尿病患者人数已在 3000万以上，糖尿病患者的人数仅次于印度居世界第 二位。
世界糖尿病日
纪念胰岛素的发现者班廷的诞辰，世界卫生组织 （WHO）和国际糖尿病联盟（IDF）将班廷医生 的生日11月14日定为世界糖尿病日（WDD）。
葡萄糖酸
过氧化物酶 H2O2 + 4-氨基安替吡啉 + 酚
+ H2O2 醌亚胺 + H2O
醌亚胺在480-550 nm有最大吸收峰，醌亚胺与葡萄糖的量成 正比，比色法测定醌亚胺的量，即可得到葡萄糖浓度。
方法：
葡萄糖氧化酶 过氧化物酶 磷酸缓冲液 酚 4-氨基安替吡啉
孵育 15 min
505 nm测定 吸光度OD
结果：
葡萄糖浓度 =
A样品-A空白 A标准-A空白
X 标准浓度（mM）
局限：还原性物质如尿酸、维 C 、胆红素等，可
与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反
应过程中所产生的过氧化氢，使测定结果偏低
举例：
样品 OD 葡萄糖浓度（mM）
空白 0.05
0
标准品 0.95
5.0
样品A 0.5
?
样品B 0.35
亚洲。 每10秒中，就有人死于糖尿病相关性疾病；同时，
就有2例新病例被诊断． 在发达国家，糖尿病是成年人失明和视力障碍的
主要原因。 2型糖尿病占糖尿病患者的90％以上。 肥胖是2型糖尿病的主要危险因素。
并发症
糖尿病可导致失明、心脑血管疾病、肾功能衰竭、 神经病变、肢体坏疽以致截肢、昏迷等多种并发 症。
降血糖药物筛选方法
2010年11月5日
导论 动物水平筛选 细胞水平筛选 酶和受体水平筛选 总结和思考
糖尿病（DM, Diabetes Mellitus）
糖尿病为一种多病因的代谢疾病，特点 是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌及/或作用 缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。
指标： 餐后2 h 血糖高于11.1 mmol/ L 空腹血糖高于7.0 mmol/ L
3）肥胖高血糖小鼠（ob/ob小鼠）
发病特征：体型极胖，早期有高血糖和糖尿，血
清胰岛素水平高，有明显的胰岛素抗性。胰岛肥 大增生，胰岛素含量增加。
用途：胰岛素增敏剂的研究
4）糖尿病小鼠（db/db小鼠）
发病特征：体型极胖，脂肪沉淀，早期有高血
糖和糖尿，高胰岛素血症，晚期可见胰岛细胞坏 死。
2.3 降糖药物体内药效评价方法
利用糖尿病动物模型评价药效，主要以空腹血 糖、糖耐量及胰岛素敏感性为指标。
a）空腹血糖测定 取材：动物禁食过夜，次日眼眶采血，测 定血糖浓度。 方法：葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法以及 血糖仪。
葡萄糖氧化酶法（国内推荐方法）
原理：
葡萄糖氧化酶 葡萄糖 + O2
STZ量决定细胞损伤程度：
凋亡（低剂量） 高剂量（坏死）
链脲霉素结构
方法：一次性大剂量静脉或腹腔注射STZ 大鼠（60-80 mg/kg） 小鼠（100-200 mg/kg）
注意： STZ水溶液不稳定，生物半衰期5 min，造 模时新鲜配置、快速注射。
结果：注射72 小时后，血糖稳定升高，动物出现 三多症状（多食、多饮、多尿）。
?
血糖仪
方法：
手指采集1 ul血样，将试纸顶端轻靠血样，试纸 就可以自动吸收血样，插入血糖仪，只需5秒快 速显示测试结果
特点：
方便、快速、简单，主要用于糖 尿病患者日常监控血糖，但准确 度稍差。
控制糖尿病，刻不容缓！ （Let's take control of diabetes. Now！）
班廷，Banting， 加拿大生理学家 （1891-1941）
糖尿病的事实
全球每30秒就有一人因糖尿病而截肢。 每年死于糖尿病的人远远高于死于艾滋病的人。 2005年，全球约290万人死于糖尿病。 每年患糖尿病的人数增加700万，而且多数集中在
治疗药物
磺脲类： 双胍类：
格列本脲（优降糖）格列齐特（达美康） 格列吡嗪（美吡达）格列喹酮（糖适平 格列美脲（亚莫利）
苯乙双胍（降糖灵）二甲双胍（美迪康）
α糖苷酶抑制剂：
阿卡波糖（拜糖平）伏格列波糖（倍欣）
胰岛素增敏剂：罗格列酮（文迪雅）
胰岛素：
诺和灵、优泌林
二、动物水平筛选
2.1 I型糖尿病动物模型
造模方法：
采用化学试剂破坏胰岛细胞造模或因为遗传因素， 胰岛细胞受到自身免疫性破坏而产生的。
1）化学试剂诱导的高血糖动物模型 链脲霉素（四氧嘧啶）诱导的高血糖动物模型
链脲霉素诱导的高血压动物模型
原理：
含亚硝基的化合物 特异性破坏胰岛β细胞 诱导NO大量合成 激活自身免疫过程