HPLC- MS 分析薏苡仁油中的甘油三酯成分

油酸] 为 575. 5 , [ M +1 亚油酸] 为 577. 5 等碎片 信号 。 其中保留时间为 17. 0 min 的化合物的质谱图 中 , 存在质量数为 857. 9 , 601. 6 , 575. 6 和 577. 6等4 个强峰 , 结果相符 , 可确定为棕榈酸亚油酸油酸甘油 酯 。 因此由上述质谱碎片信号可对甘油三酯进行鉴 定 。 测定结果见表 1 。 共有 12 种 甘油三酯得到了 鉴定 。 其中含量大于 3 %的有三亚 油酸甘油酯 、二 亚油酸油酸甘油酯 、 棕榈酸二亚油酸甘油酯 、 亚油酸 二油酸甘油酯 、 棕榈酸亚油酸油酸甘油酯 、 三油酸甘 油酯和棕榈酸二油酸甘油酯等 7 种 , 总量占甘油三 酯的 90 %以上 。 组成 甘油三酯的脂肪酸主要为棕 榈酸 、 亚油酸 、 油酸和硬脂酸 , 其中硬脂酸含量较少 。 脂肪酸种类与文献[ 1] 用 GCMS 测定得到的结果一 致 。 采用 HPLCMS 法有效地解决了薏苡仁油中甘 油三酯的鉴定分析 , 为薏苡仁油的指纹图谱提供了 定性依据 , 可用于有关制剂质量标准的制定 。 [ 参考文献]
向智敏＊ , 祝 明 , 陈碧莲 , 陈 勇
( 浙江省药品检验所 , 浙江 杭州 310004)
[ 摘要] 目的 : 对薏苡仁油中的甘油三酯成分进行定性分析研 究 。 方法 : 采用高效液相色谱-大 气压化学电 离质谱法( HPLC -APCI -MS)。 实验条件 : 正离子检测 模式 , 喷雾电 压 3 000 V , 毛细管温 度 250 ℃, APCI 源 温度 400 ℃, corona 电流 4 μ A 。 鞘气( 高纯液氮) 压力 35 KPa 。 质谱扫描范围为 300 ～ 900 amu , 扫描时间 1 s , Q1 宽度为 0. 7 。 液相 色谱 的固定相为 Zorbax Extend C18柱( 4. 6 mm ×250 mm , 5 μ m)。 流动 相为二氯 甲烷-乙腈( 35∶ 65) , 流速 1 mL·min -1 。 柱温 25 ℃。 结果 : 共鉴 定出 12 种甘油三酯 。 结论 : 此测定结果可作为薏苡仁注射液指纹图谱中组分的定性依据 。 [ 关键词] 薏苡仁油 ; 甘油三酯 ; 液相色谱 -质谱法 [ 中图分类号] R 284 . 1 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1001 -5302( 2005) 18-1436 -03
[ 收稿日期] 2004 -04 -05 [ 通讯作 者] 向智 敏 , Tel : ( 0571) 86459425 , E -mail : xiangzm @ sina. com
＊
酯的鉴定和分析可以采用 HPLC-APCIMS 和 GC[ 5] MS 。 由于甘油三酯 的挥发性 低 、沸 点高 , 用 GCMS 分析时柱温较高 , 易造成固定相流失而缩短柱子 使用寿命 ; 而 HPLC 适合低挥发性成分的分析 , 当与 质谱 法联 用后 得 到的 结 果又 能 直接 用 于 以后 的 HPLC 指纹图谱使用 。 因此为解决薏苡仁油指纹图 谱中各成分的鉴 定 , 作者 用 HPLCAPCI-MS 对其中 的甘油三酯进行了分析研究 。 1 实验部分 1. 1 仪器 Surveyor 高效液相色谱仪和 TSQ Quantum Discovery 质谱仪( 美国 Thermo Finnigan 公司) 。 1. 2 质谱实验条件 大气压化学电离源( APCI) ,正 离子方式 。 喷雾电压 3 000 V , 毛细管温度 250 ℃, APCI 蒸发温度 400 ℃, corona 电流 4 μ A 。 鞘气( 高纯 液氮) 压力 35 kPa 。 质 谱质 量扫 描范 围 300 ～ 900 amu , 扫描时间 1 s , Q1 峰宽 0. 7。 1. 3 液相色谱实验条件 Zorbax Extend C18 色谱柱 ( 美国 Agilent 公司 , 4. 6 mm ×250 mm , 5 μ m) ; 流动相 -1 二氯甲烷-乙腈 ( 35∶ 65) , 流速 1 mL·min , 柱温 25 ℃。 1. 4 试剂和样品 二氯甲烷和乙腈为液相色谱纯 , 美国 Merck 公司 ; 薏苡仁油 , 由超临界二氧化碳提取 制备( 浙江康莱特药业有限公司提供) 。 1. 5 样品溶液制备 称取 5 mg 薏苡仁油 , 溶于 250 mL 流动相 。 0. 45 μ m 膜过滤 。 进样体积为 20 μ L。 1. 6 测定结果 见图 1 , 表 1 。 2 结果与讨论
+ +
为
为 599. 5 和 [ M +1 -亚油
酸] 为 601. 5 , 与其相符 , 所以可确定此为二亚油酸 油酸甘油酯 。 对于棕榈酸亚油酸油酸甘油酯 , 因棕 榈酸 、亚油酸或油酸均可能失去 , 所以可能有[ M + 1] +为 857. 8 , [ M +1 -棕榈酸]
+ +
为 601. 5 , [ M +1 +
[ 1] 杨 玲 , 苏维埃 , 钱建东 , 等 . 薏苡仁油脂的化学成分 分析 .食 品化学 , 2001 , 22( 5) : 60 . [ 2] 李大鹏 , 黄洁敏 , 苏维埃 , 等 . 薏苡仁油脂的化学成分 分析 .中 药新药与临床药理 , 1999 , 10( 2) : 99 . [ 3] Javier Parcerisa , Isidre Casals , J Boatella , et al.Analysis of olive and hazelnut oi l mixtures by HPLC -APCI MS of triacylglycerols and GC of non-saponifiable compounds.J Chromatogr A , 2000, 881 : 149. [4 ] W E Neff , W C Byrdwell.Triacylglycerols analysis by HPLC-APCI MS : crepis alpi na and vernonia galamensis seed oi ls . J Liq Chromatogr , 1995 , 18( 20 ) : 4165. [ 5] 邹建凯 .椰子油甘油三酯的高温气相色谱-质谱分析 .分析 化 学 , 2002 , 30( 4) : 428.
图 1 薏苡仁油的 HPLC -APCI -MS 总离子流图谱 表 1 薏苡仁油中甘油三酯的测定结果
No. 化合物 分子式 / min 质量 百分比 1 10. 0 三亚油酸甘油酯 C 57 H98O6 878. 7 6. 4 2 12. 5 二亚油酸油酸甘油酯 C 57 H100O 6 3 13. 4 棕榈酸二亚油酸甘油酯 C 55 H98O6 4 15. 9 亚油酸二油酸甘油酯 C 57 H102O 6 5 17. 0 棕榈酸亚油酸油酸甘油酯 C 55 H100O 6 6 18. 2 二棕榈酸亚油酸甘油酯 C 53 H98O6 7 20. 3 三油酸甘油酯 C 57 H104O 6 8 21. 1 油酸亚油酸硬脂酸甘油酯 C 57 H104O 6 9 21. 8 棕榈酸二油酸甘油酯 C 55 H102O 6 10 22. 6 棕榈酸亚油酸硬脂酸甘油酯 C 55 H102O 6 11 23. 5 二棕榈酸油酸甘油酯 C 53 H100O 6 12 27. 3 二油酸硬脂酸甘油酯 C 57 H106O 6 880. 8 17. 1 854. 7 6. 9 882. 8 17. 4 856. 8 13. 5 830. 7 884. 8 858. 8 832. 8 886. 8 3. 0 1. 8 0. 6 2. 0 1. 7 884. 8 19. 0 858. 8 10. 6 tR 分子 峰面积
+ +
Identification of triacylglycerols in coix oil by high performance liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionization-mass spectrometry
图 1 为薏苡仁油的 HPLCAPCI-MS 总离子流图 谱 。 在实验条件下 , 甘油三酯的质谱图中同时存在 信号强度较大的分子离子峰[ M + 1] +和分子失去 1 个脂肪酸的碎片离子峰[ M +1 脂肪酸]
+
。 例如三
亚油酸甘油酯只能失去 1 种脂肪酸( 亚油酸) , 其[ M + + + 1] 为 879. 8 , [ M +1 -亚油酸] 为 599. 5 。 实际 得到 的 相 应 质 谱 中分 别 存 在 质 量 数 为 879. 9 和 599. 6 等 2 强峰 。 当甘油三酯含 2 种或 3 种脂肪酸 时 , 可失去 2 种或 3 种脂肪酸 , 因此可同时存在 2 种 或 3 种[ M + 1脂肪酸] +的碎片离子峰 。 保留时间 为 12. 5 分的色谱峰的质谱图显示分别存在 3 种碎 片离子 , 882. 0[ ( M +1) ] , 599. 6[ ( M+ 1 -油酸) ] + 和 601. 6[ ( M +1 -亚油酸) ] 。 虽然同时含油酸和 亚油酸的有二亚油酸油酸甘油酯和亚油酸二油酸甘
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第 30 卷第 18 期 2005 年 9 月
China Journal of Chinese Materiol. 30, Issue 18 September , 2005
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油酯 , 但只 有二 亚油酸 油酸甘 油酯 的 [ M +1] 881. 8 , [ M +1 -油酸]
薏苡仁是禾本科薏苡仁属植物薏苡 Coix lacry majobi L. var.mayuen ( Roman. )Stapf 的种仁 , 民间 药用已有几千年的历史 。 由薏苡仁提取的薏苡仁油 经药效学实验证实具有抑杀癌细胞和调整机体免疫 功能的作用 , 其静脉制剂康莱特注射液已用于临床 , 对肝癌等均有较好疗效 。 康莱特注射液的活性成分 薏苡仁油的主要成分为甘油三酯 。 为了制订薏苡仁 油及其制剂的指纹图谱 , 必须研究其甘油三酯的组 成。 目前对薏苡仁油脂化学成分研究较少 , 文献[ 1 , 2] 采用 TLC 研究其中的甘油三酯和用 GCMS 研究 甘油三酯的脂肪酸成分 。 由于用 GC-MS 测 定脂肪 酸时采用甲酯化法 , 不能直接得到的甘油三酯的信 息 , 故结果不适用于甘油三酯的定性 ; 而 TLC 定性 时需要对照品 , 虽然可得到少量含单种脂肪酸的甘 油三酯对照品( 例如文献[ 1 , 2] 中使用的棕榈酸甘油 三酯和硬脂酸甘油三酯) , 但是天然油脂的甘油三酯 多数是由数种不同脂肪酸组成的复杂产物 , 仅含单 种脂肪酸的比较少 。 由于难以得到这些复杂的甘油 三酯对照品 , 因此用 TLC 只能对薏苡仁油脂中的少 数甘油三酯定性 , 而不能确定其他多数甘油三酯 , 由 于多数成分不能确定 , 所以仍难以解决指纹图谱中 各组分的鉴定 。 当缺乏对照品时 , 色谱-质谱联用法 是鉴定未知化合物的有效工具 。 食用油脂中甘油三