大鼠脂肪基质细胞成脂分化及慢病毒感染的实验研究

合集下载

中国医学科学院学报2010年第32卷文题索引

然等，３（）５２１：５
锌仅糖蛋白真核表达载体的构建和体外表达鉴定（著）：论．张韶君等，３（）２３２３：８
芪红胶囊对柯萨奇病毒体外感染ＨＬ细胞的影响（ｅａ论著）．宋
晓东等，３（）２３２３：９氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜生成的影响（论著）．崔
三种烤瓷合金材料对磁共振成像的影响（著）论．王威等，３２
（：７３）２６
人脐血间充质干细胞培养鉴定和慢病毒载体介导胶质源性神经
营养因子在脐血间充质干细胞中的表达（论著）．黄爱华等，
３（）９２１：３
Ｋｒ基因突变通过调节Ｅｃｄｅｎ￣ｃｔｉｐ２白复合体 —ｓａ —ａｈｆ／一ａｎｎｌ０蛋ｉｅ／形成和ＲｏｈＡ蛋白活性对结肠癌细胞株Ｃｃ－ａｏ２转移的影响（论著）李景南等，３１：４．２（）６基因表达连续分析标签数据库的实时定量多聚酶链反应验证（论著）尹磊淼等，３１：５．２（）１负透镜诱导豚鼠离焦性近视眼后部巩膜Ｉ型胶原、基质金属蛋白酶＿及金属蛋白酶组织抑制因子＿２２的表达（论著）．王淑
冬清等，３（）３０２３：１
胶原模拟多肽三螺旋结构的热变性过程（短篇论著）．刘龚等，
３（）３３２３：４
整合素６在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达作用（１论著）．耿松梅等，３（）０２１：６二十二碳六烯酸与氟尿嘧啶联合应用对人胃癌细胞株ＭＧ８３Ｃ０的影响（论著）．吴全等，３（）５２１：６人脐带间充质干细胞对脐血Ｃ３细胞在ＮＤＳＩ鼠体内Ｄ４Ｏ／ＣＤ小造血重建的影响（论著）郝牧等，２（）１．３１：７成年人体重指数、去脂体重指数、脂肪体重指数与深吸气量的关系（论著）．冯逵等，３（）５２１：８黑龙江省牡丹江和海林地区１Ｏ～１８岁汉族和朝鲜族人群体循

辛伐他汀抑制乙醇诱导骨髓基质细胞成脂分化的实验研究初步报告

Ｍｅｉａｏｌｇｅ，ｄｌＣｌｅＺｈｅｇｈｕＵｎｖｒｉｃｎｚｏｉｅｓｔｙ
【ｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｂｅｖｅｅｅｔｏｈｂｔｎｏｍａｔｉｎｄｆｒｎｉｉｆｏｅｍａｒｗＡｓｃ】ｒｊｃｉｏｏｓｒｅｔｆｃｓｆｎｉｉｏｆｉｖｓｔｏｉｅｅｔｔｎｏｎｒｖｈｆｉｉｓａｎｆａｏｂｏ
删ＪｍｉＷＵＸｅａＬｕｂｉ，ＨＯＧｏｉｎ Ⅳ ｈｎｉ， Ⅳ ￣ｈｎ．ｅａｔｅｔｆｉｎ，ｕｉｎ，ＩＹｅａＺＡｕｑａｇ，ｎｇｊＧＣｕｘＧｓｅｇ．１Ｄｐｒｎｏｍ
ＯｔｏａｄｃＳｒｅ，ｅＦｒｆｌｔｏｉｌＺｅｇｈｕＵｉｒｔ，ｈｎｚｏ５０２Ｈｎｎ２ＢｓｒｐｅｉｕｒｔｉｔｆｉｅＨｓｔ，ｈｎｚｏｎｅｉＺｅｇｈｕ４０５，ｅａ；．ａｉｈｇｙｈｓＡａｄｉｐａｖｓｙｃ
ｅｅｔｏｉａｔｔｎｏｒａｉｇａｃｈｌｓｅｎｃｏｉ．ｅｈｏＢＭＳｒｓｌｔｄｆｏＳ —ｒｔｂｎｆｃｆｓｍｖｓａｉｎｔｅｔｌｏｏｉｏｔｏｅｒｓｓＭｔｄｓｎｃＣｓｗｅｅｉｏａｅｒｍＤａｏｅｍａｒｗ，ｏｔｉｄａｄｃｌｕｅｒｏｂａｎｅｎｕｔｒｄ．ＢＭＳＣｓｗｅｅｒｎｏｙｓｐｒｔｄｂｙ３ｇｏｐｒａｄｍｌｅａａｅｒｕｓ：ｇｏｐＡ：ｔｅｃｌｓｗｅｅｔｅｔｄｒｕｈｅｌｒｒａｅｗｉｈ０．９ＬＬａｃｈｌｒｕｔ０ｍｏ／ｏｏ：ｇｏｐＢ：ｔｅｃｌｓｗｅｅｔｅｔｄｗｉｈ０．９ｍｏ／ｃｈｌａｄ１×１ｌｈｅｌｒｒａｅｔ０ＬＬａｏｏｎｌ０～ｍｏ／ｉａ — ＬＬｓｍｖｓｔｔｇｏｐＣ：ｔｅｃｌｓｗｅｅｔｅｔｄｗｉｏｔａｃｈｌｏｉａｔｔｎａｏｔｏ．Ｔｈｅｌｎｃｌｕｅｗｅｅｏ — ａｉｒｕｎ：ｈｅｌｒｒａｅｔｕｏｏｒｓｍｖｓａｉｓｃｎｒ１ｈｌｅｃｌｓｉｕｔｒｒｂｓｒｅｎａｉｖｒｅｈｓｏｔａｔｍｉｒｓｏｅｅｄｏｎｅｔｄｐａｅｃｎｒｓｃｏｃｐ．Ｔｈｏｔｎｓｏｉｌｃｒｄｎｌａｉｅｐｏｐｔｓｃｉｉｖｅｃｎｅｔｆｔｇｙｅｉｅａｄａｋｌｎｈｓｈａａｅａｔｔｒｖｙｉｅｌｒｅｅｍｉｄｂｏｈｍｉａｓａｎｃｌｓｗｅｅｄｔｒｎｅｙｂｉｃｅｃａｓｙ：ｔｅｃｎｅｔｆｏｔｏａｃｎｉｈｄｉｒｅｅｉｅｙｒ— ｌｈｏｔｎｓｏｓｅｃｌｉｎｔｅｍｅａｗｅｅｄｔｒｎｄｂａｍｄｏｍｍｕｏｓａ．ＲｅｕｌＴｌａｉｅｐｏｐａａｅａｔｖｔａｕｓａｄｔｅｃｎｅｔｆｔｅｏｔｏａｃｎｉｈｉｉｎａｓｙｓｔｓｈｅａｋｌｎｈｓｈｔｓｃｉｉｙｖｌｅｎｈｏｔｎｓｏｈｓｅｃｉｎｔｅｌ

脂肪干细胞成脂诱导及鉴定程序

脂肪干细胞成脂诱导及鉴定程序一、试剂准备（一）成脂分化诱导液（Adipogenic Medium, AM）配方【1】：试剂名称浓度商品信息1.极限必须培养基(Dulbecco’S Modified Eagle Medium ，DMEM) 1.0 L(SH30021.01B, Hyclone)2.胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）10%(ES-009-B, Millipore)3.青霉素/链霉素（Penicillin/Streptomycin）1%（TMS-AB2C, CHEMICON）4.地塞米松(Dexamethasone,DM) 1µmo／L 分子量：392.46(D4902-25MG, Sigma)5.胰岛素(Insulin, IS) 10 µmol／L 分子量：5808(91077C—1g, Sigma)6.3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Isobutylmethylxanthine,IBMX) 0.5 mmol／L 分子量：222.24( I5879-100MG, Sigma)7.吲哚美辛(Indomethacin,ID) 200 µmol／L 分子量：357.79(I7378—5G, Sigma)（二）成脂分化诱导液浓储液配制试剂名称质量浓缩倍数配制方法1.Stock A胎牛血清1ml/管1X( liquid）分装1ml/管X100 保存：-20℃2.Stock B青霉素/链霉素0.1ml/管100X( liquid）分装0.1ml/管X100 保存：-20℃3.Stock C地塞米松0.0117738 g 1000X 溶于30ml 无水乙醇(0.1%) 分装0.1ml/管X300保存：-20℃4.Stock D胰岛素0.05808 g100X 溶于10ml Hcl(0.1 mol/L，PH2.0) 分装0.1ml/管X100保存：4℃5.Stock E3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.05556 g 200X 溶于2.5ml DMSO(0. 5%) 分装0.05ml/EP管X50 保存：-20℃6.Stock F吲哚美辛0.07155 g 500X 溶于2ml 无水乙醇(0.2%) 分装0.02ml/管X100保存：-20℃（三）成脂分化诱导液工作液配制（10ml）1.取DMEM(L)8.72ml加入15ml离心管（BD）;2.加1管Stock A（1ml）；3.加1管Stock B（0.1ml）；4.取1管Stock C（0.1ml）溶解，加入0.01ml；5.加1管Stock E（0.05ml）；6.加1管Stock F（0.02ml）；7.加1管Stock D（0.1ml）；8.测渗透压，调pH7.2-7.4;9.0.22µm微孔过滤，4℃贮存，一周内使用。

MicroRNA

17<-(&)1(2=<>%1(#2%H15KE+1354@55??5/41?(*/31=F!G!&* !(*=G!&*"19+*E*8 (54)M1+*-(&/5++A*)M*+*4.)98 )E1E41-*-1?+*E141K*/@5E)41/.45-0?%(9./-<*/5L535?58L*4@+1LG?)48*54!#I$")98@*,@G?)48*54!%I$"41/19-437/4 /19431+,317E)98919G)+/1@1+*/?)44.+*A538*-5)-5- !F!I#$"(185+0%5()41K.+*9G51-*9 !%a'"-4)*9*9,)981*+358 -4)*9*9,L5357-58411M-53A54@5+*A53@*-41+1,.023*()3.@5E)41/.45-!2%;-"L535*-1+)458?31( L*+8G4.E5(*/5)984@59 *9/7M)458L*4@!""7<E)+(*4*/)/*8!2!"?13!)@41(*(*/)@*,@G?)459A*319(5940I)44.85,5953)4*191?@5E)41/.45-L)R78,58M.1*+358-4)*9*9,&)-E)34)4543)9-)(*9)-5 !!"H")98)+)9*95)(*9143)9-?53)-5 !!#H"+5A5+-0Y7)94*4)4*A5

脂肪源性基质细胞特性及其向神经细胞分化的研究进展

ＣＤｌ６、ＣＤｌ８，ＣＤ３１，ＣＤ４５，ＣＤ５０，ＣＤ５６，ＣＤ６２，ＣＤｌ０４，
ｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣ）。由于ＡＤＳＣ具有来源丰
富、体外扩增容易及低免疫原性等优点。同时，可避免胚胎干、神经干细胞等应用产生的伦理及严重移植物排斥反应的问题，因此，更有利于神经移植研究。本文就ＡＤＳＣ的生物学特性、电生理特性、免疫原性及向神经细胞分化进展进行综述。
万方数据
・１３７２・
植后１４ｄ发现２％ＡＤＳＣ迁徙到同侧皮质损伤区域，以梗死周边区为主，动物缺失的躯体感觉、运动功能有所恢复，而经脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）转染ＡＤＳＣ后神经恢复更明显。由于表达成熟神经元及星形胶质细胞标志的ＡＤＳＣ仅占１０％。且移植细胞的电生理情况亦不明确，故症状改善可能并非细胞转化及细胞融合的直接结果。此外，仅仅依靠少量存活尚且功能不明确的ＡＤＳＣ替代脑损伤的脑组织亦远远不够。
干细胞移植治疗中枢神经系统损伤和变性疾病已成为研究热点，广泛应用于基础研究及临床治疗。其中研究较多的是骨髓基质细胞（ｂｏｎｅｍａｒ—ｌｏｗ
ｓｔｌｏｍａｌ
ｃｅｉｌｓ，ＢＭＳＣ），但骨髓基
质细胞的获取给病人带来一定的痛苦，且数量有限，不利于大规模的实验研究及临床应用。近年来发现脂肪组织中存在一些类似于骨髓基质细胞的细胞，此类细胞具有干细胞特征，可自我复制，高度增殖，并具备多向分化潜能。在特定培养条件下，可向不同胚层分化，称之为脂肪组织源性干细胞（ａｉｄｐｏ－
ＡＤＳＣ及其诱导分化的神经样细胞在脑缺血疾病的临床应
用前景随着对ＡＤＳＣ体外神经分化的研究进展，人们设想将ＡＤ－Ｓｃ植入中枢神经系统进行脑缺血疾病的治疗，然而这些植入细胞能否存活并发挥功能，许多学者对其作用机制进行了大量研究。７．１细胞移植后能在宿主体内存活、迁移，并向神经元样细胞分化Ｓａｆｆｏｒｄ等¨＂将ＡＤＳＣ及其诱导分化的神经细胞分别定向注入鼠脑海马ＣＡｌ区，发现诱导后植入的ＡＤＳＣ沿胼胝体和纹状体嘴尾轴迁徙，最远可达２ｍｍ，并至少可存活１２周。存活的ＡＤＳＣ类似神经细胞形态，表达早期神经元标记神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）、ＮｅｕＮ，而未经体外神经诱导的ＡＤＳＣ则无上述现象发生，提示体外神经诱导为ＡＤＳＣ移植后能否在神经微环境中生存所必需。然而，移植后ＡＤＳＣ能否表达神经元及神经胶质细胞的全部标记，其最终表型在移植前就已决定还是因局部神经微环境而改变，它们能否替代缺失神经元发挥神经功能，包括神经电位诱发、神经突触建立、递质合成传递等功能目前尚无相关文献报道。Ｋａｎｇ等口１将成人ＡＤＳＣ以腺病毒标记，经侧脑室立体定向移植入鼠ＭＡＣＯ模型，移

非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及病理变化的动态观察

楼琦石巧娟，，郭红刚，李巍卢领群周文伟萨晓婴，，，
（．浙江省医学科学院实验动物中心，州３０１；．浙江大学医学院药理学教研室杭州１杭１０３２３０３）１０１
２１０２年３月
中国比较医学杂志
ＣＨＩＮＥＳＪＥＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＶＥＭＥＤＩＩＩＣＮＥ
Ｍａｃｒｈ，２１０２Ｖｏ．２Ｎｏ３１２．
第２２卷
第３期
非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及病理变化的动态观察
ｇｏｐｏｏｍａａｓｗｅｅｓｔｕｐｆｒｃｎｒｌｔｅｓｒｍｒｕｆｎｒｌｒｔｒｅｏｏｔｏ，ｈｅｕＧＬＵ、ＣＨＯＴＧ、ＨＤＬ、ＬＤＬＧＰＴ、ＧＯＴａｎｕｌｎｗｅｅｔｓｅｎｄｉｓｉｒｅｔｄ，ｔｅｈ
价等方面的应用提供参考依据。方法
Ｓ大鼠５ＤＯ只，正常对照组外，余动物饲喂高脂饲料，别检测４８除其分，，
１，６周大鼠血清ＧＵ、ＨＯ、Ｇ、ＬＬＬＧＴＧＴ及胰岛素水平，脏组织切片进行病理学及细胞凋亡观察，２１ＬＣＴＨＤ、Ｄ、Ｐ、Ｏ肝进一步分析大鼠肝功能、质代谢、岛素抵抗及肝细胞凋亡对肝组织病理改变的影响。结果模型组大鼠４周脂胰后就出现肝功能损伤，质代谢紊乱、岛素抵抗，细胞凋亡８Ｗ后明显增加，细胞脂变及炎症为肝组织病理脂胰肝肝

【国家自然科学基金】_pparγ基因_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129
脂肪组织脂肪性状脂联素脂类代谢相关基因脂代谢能量限制肥胖模型肥胖抵抗肥胖肝脏肝细胞肉鸡肉仔鸡聚脂基因罗格列酮细胞间黏附分子-1 糖皮质激素糖代谢类风湿性关节炎研究进展盐皮质激素受体甲状腺肿瘤生长激素腺瘤生脂基因生育三烯酚球型脂联素猪炎症激动剂滤泡状甲状腺癌滤泡性淫羊藿海洋生物学法尼酯x受体核受体标准品无功能垂体腺瘤成骨分化慢病毒载体微粒体甘油三酯转运蛋白小鼠实时荧光定量pcr 天冬胺酰胺多囊肾,常染色体显性基因表达基因敲除垂体腺瘤吡格列酮受体,胰岛素前体脂肪细胞分化前体脂肪细胞冻存决明子内脂素
107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122
mrna表达 mcf-7 mbp imf含量 hepg2 hbx h-fabp fas cptⅰa cpt-1 caat/增强子结合蛋白α c/ebpb基因 atra atp结合盒转运体a1 amp激活的蛋白激酶 2型糖尿病
科研热词推荐指数 pparγ 6 脂肪细胞 3 肝脏 3 过氧化物酶体增殖物激活受体 2 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 2 表达条件 2 血脂 2 腺病毒载体 2 脂肪组织 2 精原干细胞 2 生脂基因 2 猪 2 小鼠 2 小檗碱 2 分化 2 优化 2 rna干扰 2 pparα 2 hepg2细胞 2 dha 2 麦芽糖结合蛋白 1 鸡 1 骨形态发生蛋白质类 1 非诺贝特 1 间质干细胞 1 过氧化酶体增殖物活化受体α 1 过氧化物酶增殖激活受体-δ 1 过氧化物酶增殖体激活受体α 1 过氧化物酶增殖体激活受体-γ (ppar1 γ ) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 2基因 1 过氧化物酶体增殖物激活受体-α 1 过氧化物酶体增殖因子活化受体δ 1 过氧化物酶体增殖体激活受体? 1 过氧化物体增殖剂活化受பைடு நூலகம்γ 1 转录调控 1 诱导分化 1 诱导 1 表达 1 蛋白表达 1 葡萄糖摄取 1 脑 1 脂质代谢 1 脂解基因 1 脂肪酸 1 脂肪甘油三酯水解酶 1 脂肪形成 1 脂肪前体细胞 1 脂多糖(lps) 1 脂代谢障碍 1 脂代谢 1 胰岛素敏感性 1 胰岛素抗药性 1

脂肪细胞的分化与调控

山西农业大学学报第27卷(第5期)　000003J.Shanxi Agr ic.Univ.No.5Vol.272007收稿日期2828作者简介贺建青(2),女(汉),山西原平市人,助理畜牧师,主要从事动物遗传育种和繁殖方面的研究。

脂肪细胞的分化与调控贺建青(山西省原平市畜禽繁育工作站,山西原平034100)摘　要:对20多年来脂肪细胞分化的研究动态:脂肪细胞的分化过程,脂肪细胞分化的调节及其机理进行了综述,以期对脂肪细胞分化及其调控进行全面总结。

关键词:脂肪细胞;分化;调控中图分类号:S852116+3 文献标识码:A 文章编号:167128151(2007)0520006203Adipocyte Diff erent ia t ion a nd It s Regula t ion HE Jian 2qing(Yuanping Pow lt ry B ree ding St ation of S ha nxi P rovine ,Yua nping Shanxi 034100,Chi na)Abstra ct :This a rticle is aimed to review the advance r esea rc h of adipoc yte diff erentiation on the course ,the regulation a nd the mecha nism.K ey w o r ds :Adipoc yte ;Differ entiatio n ;Regulation 脂肪组织和脂肪细胞是近二十年特别是近十年来人们广泛探索的领域之一。

目前已经证明脂肪细胞分化与糖及脂肪代谢、与机体能量平衡、与肥胖症、与I I 型糖尿病、与脂肪肝和高脂血症及乳腺癌等有非常密切的关系.对脂肪细胞分化机制及其调控的研究,不但对于探讨上述重大生命和疾病过程具有重要理论意义,而且对于上述疾病的预防与治疗也具有实际意义。

脂肪细胞的基础知识

脂肪细胞的基础知识脂肪细胞的生长全过程及其形态变化脂肪母细胞，是指能向脂肪细胞分化的ADSCs在激素、生物活性因子、寒冷等因素刺激下均能逐渐分化成为单能干细胞。

它可保持着干细胞增殖活跃的特性，脂肪母细胞再进一步分化为前脂肪细胞，即通常人们所说的脂肪细胞前体。

前脂肪细胞再经历细胞融合、接触抑制和克隆扩增等步骤启动向成熟脂肪细胞分化，并在胰岛素、地塞米松等诱导剂作用下完成向成熟脂肪细胞的分化。

全过程可以表示为：多能干细胞——脂肪母细胞——前脂肪细胞——不成熟脂肪细胞——成熟脂肪细胞。

生长期前脂肪细胞的形态与成纤维细胞相似，经诱导分化，其细胞骨架和细胞外基质发生变化，开始进入不成熟细胞向成熟细胞转变。

细胞形态由成纤维细胞样逐渐趋于类圆或圆形，胞体逐渐增大，胞质中开始出现小脂滴，脂质开始累积，以后小脂滴增多并融合为较大的脂滴，可经油红“O”染色等方法于显微镜下显色，从而获得成熟脂肪细胞的形态特征。

此时的细胞无分裂增殖能力，为脂肪细胞分化的终末阶段。

张高娜,梁正翠.动物脂肪细胞的研究进展[J].饲料工业,2009,30(2):42-44.脂肪细胞由起源于中胚层的间充质干细胞逐步分化形成,按间充质干细胞→脂肪母细胞→前脂肪细胞→不成熟脂肪细胞→成熟脂肪细胞的过程发展。

前脂肪细胞在多种转录因子调控下,激活脂肪组织相关基因,并在这些基因的顺序性调控下,经一系列复杂的步骤分化为成熟脂肪细胞。

张艳.脂肪细胞分化过程中的分子事件[J].儿科药学杂志,2008,14(1):56-57.间充质干细胞概念：不同文献中，分别命名为抽脂处理细胞（processed lipoaspirate cells, PLA），脂肪基质微管碎片细胞（stromal vascularfraction cells, SVF），脂肪组织源基质细胞（adipose-tissue derived stromal cells, ATSCs），脂肪源中胚层干细胞（adipose-derived mesodermal stem cells, ADMSCs）等。

人、兔、大鼠脂肪基质细胞的生物学性状对比

・
论著
・
人、、鼠脂肪基质细胞的生物学性状对比兔大
倪永伟，永胜，周刘云松，曾百进，永伟许
（北京大学口腔医学院・口腔医院修复科，北京
［摘
１０８）００１
要］目的：探讨在同一质量控制条件下，、、鼠来源脂肪基质细胞（ｄｏｅｔｓｅｄｒｅｔｍｌｃｌ，人兔大ａｉｓｉｕ－ｅｖｄｓｏａｅｓｐｓｉｒｌ
ＡＳＲＣＯｂｅｔｅＴｉｓｄｉｎｅｔａｅｔｅｄｆｒｎｅｏｒｌｅａｏａｅｎｎｓｏＢＴＡＴｊｃｉ：ｈｓｔｙａｔｉｖｓｇｔｈｉｅｅｃｆｏｆｒｔｎｐｔｒｓａｄｏｔ — ｖｕｍｓｏｉｆｐｉｉｔｅ
量分析３细胞体外钙沉积能力。成脂向诱导培养基包含１ｐｎｌＬ地塞米松、０￣ｌＬ胰岛素、０，ｏＬ吲种ｕｏ／１ｘ／ｍｏ２０ｐｌｍ／
哚美辛和０５ｍｏＬ异丁基黄嘌呤，．ｍｌ／在成脂向诱导后的第７１、４天行油红Ｏ染色检测细胞的成脂分化状况。结果：３种来源的脂肪均可分离培养出“ 成纤维细胞样” 细胞，均能成脂向分化和成骨向分化，但兔ＡＳｓＤＣ在成骨向分化时碱性磷酸酶染色呈弱阳性，无明显钙结节形成，与其他两种细胞比较，ＡＳｓ兔ＤＣ的成骨向分化能力较差。结论：与人来
ＡＳｓ的体外生物学性状的异同。方法：ＤＣ）分离培养人吸脂来源ＡＳｓ兔及大鼠腹股沟皮下脂肪垫来源ＡＳｓ体ＤＣ、ＤＣ，外观察３种细胞原代和传代细胞的形态及生长情况，ＦＭＴ法检测细胞增殖情况。以相同密度将第２代细胞接种于２４孔板，并诱导其成骨及成脂向分化。成骨诱导培养基包含１０ｎｏＬ地塞米松、０ｐｌＬ抗坏血酸二磷酸酯０ｍｌ／５，／ｍｏ和１ｍｌＬ３甘油磷酸钠，０ｍｏ－／在成骨向诱导后的第３７１、１天行碱性磷酸酶染色，１、８天行茜素红染色，、、４２第４２定

小鼠骨髓和脂肪间充质干细胞定向分化能力的比较研究

实验研究小鼠骨髓和脂肪间充质干细胞定向分化能力的比较研究钟家帅，冯玉梅△摘要：目的探讨小鼠骨髓源性间充质干细胞（BM-MSCs）和脂肪源性间充质干细胞（AD-MSCs）的定向分化能力。

方法从C57BL/6J小鼠股骨骨髓和腹股沟白色脂肪组织中分别分离和培养BM-MSCs和AD-MSCs，分别使用成骨、成软骨和成脂诱导分化培养基诱导两种细胞定向分化。

采用茜素红、阿利新蓝和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化程度；实时荧光定量PCR（qPCR）鉴定MSCs并检测定向分化相关基因Runx2、Sp7（成骨），Sox9、Col2a1（成软骨），Pparg和Cebpa（成脂）表达水平，确定细胞的定向分化能力。

基于GEO数据库中GSE43804和GSE122778数据集的小鼠和人类BM-MSCs和AD-MSCs基因表达谱数据，分析差异表达基因及其富集的信号通路。

结果分离培养得到的BM-MSCs和AD-MSCs细胞形态不同，AD-MSCs梭形形态更明显；两种细胞均表达CD29、CD44和CD90，不表达CD34和CD45。

定向诱导后AD-MSCs的成骨和成脂分化程度高于BM-MSCs，而成软骨分化程度低于BM-MSCs （P＜0.05）；定向诱导后AD-MSCs中Runx2、Pparg和Cebpa mRNA表达水平高于BM-MSCs，Sox9mRNA表达水平低于BM-MSCs（P＜0.05）。

小鼠和人的AD-MSCs高表达的基因富集于PPAR和WNT信号通路，BM-MSCs高表达的基因富集于软骨和骨发育信号通路。

结论小鼠AD-MSCs成骨和成脂分化能力强于BM-MSCs，而成软骨分化能力弱于BM-MSCs，PPAR、WNT、软骨和骨发育信号通路的活化状态在决定BM-MSCs和AD-MSCs不同定向分化潜能中起重要调节作用。

关键词：间质干细胞；骨髓；脂肪类；PPARγ；Wnt信号通路；成骨分化；成软骨分化；成脂分化中图分类号：R329.24文献标志码：A DOI：10.11958/20230437Comparative study on the directed differentiation ability of mouse bone marrow andadipose-derived mesenchymal stem cellsZHONG Jiashuai,FENG Yumei△Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical Research Center for Cancer;Tianjin's ClinicalResearch Center for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Department of Biochemistry and Molecular Biology,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,Tianjin300060,China△Corresponding Author E-mail:**************.cnAbstract:Objective To investigate the targeted differentiation ability of mouse bone marrow derived mesenchymal stem cells(BM-MSCs)and adipose-derived mesenchymal stem cells(AD-MSCs).Methods BM-MSCs and AD-MSCs were isolated and cultured from bone marrow of femur and white adipose tissue of groin of C57BL/6J mice respectively,and the two types of cells were induced by osteogenic,chondrogenic and adipogenic differentiation medium respectively.Alizarin red,alcian blue and oil red O staining were used to detect the differentiated degree of osteogenic,chondrogenic and lipogenic differentiation.Real-time fluorescence quantitative PCR(qPCR)was used to identify MSCs and detected expression levels of directed differentiation-related genes Runx2,Sp7(osteoblast),Sox9,Col2a1(chondroblast),Pparg and Cebpa(lipogenesis)to determine the directed differentiation ability of cells.Based on gene expression profiles of mouse and human BM-MSCs and AD-MSCs in GEO database GSE43804and GSE122778,the differentially expressed genes and their enrichment signal pathways were analyzed.Results The cell morphology of BM-MSCs and AD-MSCs obtained by isolation and culture was different,and spindle-shaped morphology was more obvious in AD-MSCs.Both cells expressed CD29,CD44and CD90,but did not express CD34and CD45.AD-MSCs showed higher osteogenic and lipogenic differentiation than those of BM-MSCs after directed induction,while chondrogenic differentiation was lower in AD-MSCs than that of BM-MSCs(P＜0.05).After directional induction,expression levels of Runx2,Pparg and Cebpa mRNA were higher in AD-MSCs than those in BM-MSCs,and Sox9mRNA expression levels were lower than those in BM-MSCs(P＜0.05).Highly expressed genes of AD-MSCs in mice and human were enriched in PPAR and WNT signaling pathways.Highly expressed genes of BM-MSCs were基金项目：天津市医学重点学科（专科）建设项目（TJYXZDXK-009A）作者单位：天津医科大学肿瘤医院，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津医科大学肿瘤医院肿瘤研究所生物化学与分子生物学研究室（邮编300060）作者简介：钟家帅（1999），男，硕士在读，主要从事肿瘤分子生物学方面研究。

脂肪组织黏膜相关恒定T细胞通过分泌白介素4调节小鼠脂肪棕色化

超重乃至肥胖已经成为危害人类健康的重要因素，与心血管疾病、2型糖尿病、高血压和高血脂等多种慢性疾病密切相关，给个人和社会带来巨大的健康和经济负担［1,2］。

脂肪组织与肥胖的发病密切相关，它主要包括负责能量贮存的白色脂肪组织和负责在寒冷环境产热的棕色脂肪组织两种［3,4］。

在寒冷的刺激下，白色脂肪组织内会出现线粒体上高表达UCP-1蛋白的脂肪细胞，被称为棕色脂肪细胞，这一现象也被称为白色脂肪棕色化［5］。

白色脂肪棕色化能明显提高机体的能量消耗水平，因此是近年来肥胖研究中的重要方向和干预靶点。

Cold stimulation promotes interleukin-4secretion by mucosal-associated invariant T cells in the adipose tissue to promote adipose browning in miceYE Xiao 1,2,SONG Yingxiang 2,ZHAO Yu 2,ZHU Dalong 11Department of Endocrinology,Drum Tower Hospital Clinical College of Nanjing Medical University,Nanjing 210008,China;2Department of Endocrinology,Zhejiang Provincial People's Hospital (Affiliated People's Hospital of Hangzhou Medical College),Hangzhou 310014,China摘要：目的探究黏膜相关恒定T （MAIT ）细胞与脂肪棕色化之间的关系以及调节脂肪棕色化的分子机制。

方法构建MAIT 细胞功能缺陷小鼠模型，对比野生型小鼠及MAIT 细胞缺陷小鼠，通过Western blot 和RT-PCR 检测冷刺激前后小鼠脂肪棕色化标志物的水平差异，并通过流式细胞术检测了小鼠脂肪组织内MAIT 细胞在冷刺激前后数量、活化水平以及细胞因子分泌能力的差异。

脂肪组织源性基质细胞研究进展

—
领域的基础研究进展迅速，文就ＡＳｓ生物学特本ＤＣ的性、向分化潜能及临床应用前景进行综述。多１的发现与分离培养
由于在干细胞的研究中已发现越来越多的器官或
ｍｅｙｘｎｈｎ，ＩＭＸ）地塞米松、岛素和吲哚美辛ｔｌｔｉｅＢｈａ、胰
组织可分离出成体干细胞，神经干细胞、液干细如血
胞、骨髓间充质干细胞、肉干细胞、骨干细胞、肤肌成皮
诱导分化２，分细胞分化为脂肪细胞，长时间的周部经培养，ＤＣＡＳｓ仍维持此种分化潜能【。噻唑烷二酮ｌＪ（ｉｏｄ１ｉｅ）ｔａｌｉｄｎｓ与糖皮质激素（ｌｃｏｉｉ）以协ｈｚｉＩｏｅｇｏｒｃｄ可ｕｃｔｏｓ同刺激ＡＳｓＤＣ向脂肪细胞分化，细胞脂滴形成，显使明增加脂肪细胞特异的甘油磷酸脱氢酶（ＰＨ）ＧＤ和瘦素（ｐｎ的表达。外源性的添加碱性成纤维细胞生长因１ｔ）ｅｉ子（ｍＦ或转染ｂＧ则明显促进ＡＳｓ殖，成脂ｂ）ＦＦＤＣ增在肪细胞分化条件的诱导下转染ｂＧＦＦ的细胞停止增殖，并开始向脂肪细胞分化，ＤＣ可能是人脂肪组织再ＡＳｓ生较合适的细胞来源【。４Ｊ

脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染宿主细胞中作用研究进展

中国畜牧兽医 2024,51(4):1686-1695C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 脂质代谢和糖代谢在P R R S V 感染宿主细胞中作用研究进展罗琴1,2,刘宝玲1,乔常宏1,2,陈翔宇1,2,刘丁语1,王晓虎1,王刚1,刘昊2,蔡汝健1(1.广东省农业科学院动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站,广州510640;2.佛山科学技术学院生命科学与工程学院,佛山528225)摘要:猪繁殖与呼吸综合征病毒(P o r c i n e r e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s ,P R R S V )感染可引起母猪繁殖障碍㊁仔猪呼吸道疾病及公猪精液质量下降,给世界养猪业造成了巨大的经济损失㊂P R R S V 不能自主复制,其生命周期的各个阶段均依赖于宿主的代谢系统㊂宿主细胞也可调节其代谢过程,以防止P R R S V 复制和维持其正常生理功能㊂脂质代谢和糖代谢在P R R S V 感染中均扮演了重要角色,P R R S V 作为一种囊膜病毒对脂质代谢系统的依赖性较其他代谢系统更强㊂脂质参与了P R R S V 生命周期的各个阶段,包括吸附㊁进入㊁复制㊁组装和释放,此外还与细胞炎症㊁免疫和凋亡有关㊂糖代谢也可干扰P R R S V 的生命活动,从而促进或抑制P R R S V 复制㊂文章综述了脂质代谢中脂肪酸㊁胆固醇㊁磷脂㊁脂滴和脂筏以及糖代谢中糖酵解和三羧酸循环在P R R S V 感染宿主细胞中的作用,以期为阐明P R R S V 的致病机制以及疫苗和抗P R R S V 药物的研发提供基本理论依据㊂关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒(P R R S V );宿主细胞;脂质代谢;糖代谢中图分类号:S 852.65+9.6文献标识码:AD o i :10.16431/j .c n k i .1671-7236.2024.04.036 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-10-16基金项目:广东省省级科技计划项目(2023B 020*******);广州市农村科技特派员项目(20212100015);2021年英德市科技计划项目;云浮市云安区生猪产业园科技支撑和技术示范(动卫合经2022k 06-005);生猪智能化动物疫病防疫与诊疗系统(动卫合经2022k 11-006)联系方式:罗琴,E -m a i l :l u o q i n 121104@163.c o m ㊂通信作者刘昊,E -m a i l :l i u h a o _l h @h o t m a i l .c o m ;蔡汝健,E -m a i l :466866569@q q.c o m R e s e a r c hP r o g r e s s o n t h eR o l e o fL i p i dM e t a b o l i s ma n d G l u c o s eM e t a b o l i s mi nP R R S V -i n f e c t e dH o s t C e l l sL U O Q i n 1,2,L I U B a o l i n g 1,Q I A OC h a n g h o n g 1,2,C H E N X i a n g y u 1,2,L I U D i n g yu 1,WA N G X i a o h u 1,WA N G G a n g 1,L I U H a o 2,C A IR u ji a n 1(1.S c i e n t i f i c O b s e r v a t i o na n dE x p e r i m e n t a lS t a t i o no f V e t e r i n a r y D r u g s a n dD i a g n o s t i c T e c h n i q u e s o f G u a n g d o n g P r o v i n c e o f M i n i s t r y o f A g r i c u l t u r e a n dR u r a lA f f a i r s ,K e yL a b o r a t o r y o f L i v e s t o c ka n dP o u l t r y D i s e a s eP r e v e n t i o no f G u a n g d o n g Pr o v i n c e ,I n s t i t u t e o f A n i m a lH e a l t h ,G u a n g d o n g A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a lS c i e n c e s ,G u a n gz h o u 510640,C h i n a ;2.S c h o o l o f L i f eS c i e n c e a n dE n g i n e e r i n g ,F o s h a nU n i v e r s i t y ,F o s h a n 528225,C h i n a )A b s t r a c t :P o r c i n e r e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s yn d r o m ev i r u s (P R R S V )i n f e c t i o ni sk n o w nt o c a u s e r e p r o d u c t i v ed i s o r d e r s i ns o w s ,r e s p i r a t o r y d i s e a s e i n p i g l e t s ,a n dr e d u c es e m e n q u a l i t y in b o a r s ,r e s u l t i n g i ns i g n i f i c a n te c o n o m i cl o s s e st ot h e g l o b a l p i g i n d u s t r y.P R R S Vi su n a b l et o r e p l i c a t e o n i t s o w na n dr e l i e so nt h eh o s tm e t a b o l i c s y s t e mf o r a l l s t a g e so f i t s l i f ec yc l e .H o s t c e l l s ,i n t u r n ,r e g u l a t e t h e i rm e t a b o l i c p r o c e s s e s t oh i nde rP R R S Vr e pl i c a t i o na n d m a i n t a i nt h e i r4期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展n o r m a l p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s.B o t h l i p i dm e t a b o l i s ma n d g l u c o s em e t a b o l i s m p l a y c r u c i a l r o l e s i n P R R S Vi n f e c t i o n.A sa n e n v e l o p e d v i r u s,P R R S V i s p a r t i c u l a r l y r e l i a n to nl i p i d m e t a b o l i s m s y s t e m s.L i p i d sa r ei n v o l v e di nv a r i o u ss t a g e so ft h eP R R S Vl i f ec y c l e,i n c l u d i n g a d s o r p t i o n, e n t r y,r e p l i c a t i o n,a s s e m b l y a n d r e l e a s e,i t i s a l s oa s s o c i a t e dw i t hc e l l u l a r i n f l a m m a t i o n,i m m u n i t y a n d a p o p t o s i s.G l u c o s e m e t a b o l i s m c a n a l s o i n t e r f e r e w i t h P R R S V l i f e a c t i v i t i e s,t h e r e b y p r o m o t i n g o r i n h i b i t i n g P R R S Vr e p l i c a t i o n.T h er o l e so f f a t t y a c i d s,c h o l e s t e r o l,p h o s p h o l i p i d s, l i p i dd r o p l e t sa n dl i p i dr a f t si nl i p i d m e t a b o l i s m a r er e v i e w e d,a l o n g w i t ht h ei n v o l v e m e n to f g l y c o l y s i s a n d t h e t r i c a r b o x y l i c a c i d c y c l e i n g l u c o s em e t a b o l i s mi nP R R S V-i n f e c t e dh o s t c e l l s,s o t o p r o v i d e a t h e o r e t i c a l b a s i s f o r e l u c i d a t i n g t h e p a t h o g e n i cm e c h a n i s mo fP R R S Va n dc o n t r i b u t e t o t h e d e v e l o p m e n t o f v a c c i n e s a n d a n t i-P R R S Vd r u g s.K e y w o r d s:P o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s(P R R S V);h o s tc e l l s;l i p i d m e t a b o l i s m;g l u c o s em e t a b o l i s m猪繁殖与呼吸综合征(p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e,P R R S)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(P o r c i n er e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s,P R R S V)引起猪的一种高度传染性疾病㊂P R R S V主要导致妊娠母猪流产㊁产死胎㊁木乃伊胎,仔猪严重呼吸道疾病及公猪精液质量下降[1-2]㊂P R R S于1987年在美国首次报道,随后在北美和欧洲流行并逐渐蔓延至亚洲[3]㊂中国于1996年首次发现P R R S,此后全国各地均有该病报道[4]㊂2006年,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H i g h l y p a t h o g e n i c p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s,H P-P R R S V)在中国暴发,导致感染猪的病变更严重,死亡率更高[5]㊂P R R S对世界养猪业造成了巨大的经济损失,然而目前一直没有针对P R R S V的有效药物,商业疫苗提供的保护也有限,不断重组与变异的P R R S V使得P R R S防控形势更加严峻㊂因此,对P R R S V感染机制及防治方法的研究仍是世界范围内一项极为紧迫的任务㊂病毒作为细胞寄生物,不能自主复制,依赖宿主代谢提供能量和各类代谢产物完成复制等生命活动㊂脂质广泛分布于生物体中,不仅是细胞的重要组成成分,而且还参与了许多重要生理活动㊂作为细胞内寄生的病毒,脂质及其代谢在病毒生命周期中扮演着十分重要的角色㊂脂质几乎参与了甲型流感病毒(I n f l u e n z aAv i r u s,I A V)生命周期的所有阶段,包括I A V与宿主细胞的初始相互作用㊁膜融合㊁核的输入和输出以及协调病毒颗粒的组装和出芽[6]㊂病毒感染宿主细胞之后,脂质代谢也会发生相应的改变,如巨细胞病毒(C y t o m e g a l o v i r u s, C MV)感染细胞后脂质代谢中脂肪酸代谢的生物合成增加;反之,抑制脂肪酸的生物合成也可抑制C MV感染[7-8]㊂脂质代谢的改变在病毒感染中也发挥了重要作用,如在登革热病毒(D e n g u ev i r u s, D E N V)㊁寨卡病毒(Z i k av i r u s,Z I K V)㊁黄热病病毒(Y e l l o w f e v e rv i r u s,Y F V)和西尼罗病毒(W e s t N i l e v i r u s,WN V)感染期间,宿主胆固醇水平的调节促进了病毒的进入㊁复制复合物的形成㊁组装㊁释放及对Ⅰ型干扰素(i n t e r f e r o n-Ⅰ,I F N-Ⅰ)反应的控制[9]㊂同样,P R R S V作为一种囊膜病毒,其生命周期各阶段均与脂质代谢相关(图1),脂质代谢在P R R S V感染中也起着调控作用㊂病毒除了引起宿主细胞脂质代谢变化外,还可特异性干扰糖代谢途径㊂病毒可操纵宿主细胞内的糖代谢水平,从而为细胞生化反应提供能量,如Z I K V感染可增加三羧酸循环中的葡萄糖使用量,重编程宿主细胞中的葡萄糖代谢[10]㊂新型冠状病毒(S e v e r ea c u t er e s p i r a t o r y s y n d r o m ec o r o n a v i r u s 2,S A R S-C o V-2)在宿主细胞中的复制依赖于葡萄糖代谢的改变[11]㊂糖代谢在肠道病毒(E n t e r o v i r u s 71,E V71)复制中起着正向作用,抑制葡萄糖代谢E V71的复制也会受到抑制[12]㊂目前有关糖代谢在P R R S V感染中的研究还相对较少,大多针对P R R S V复制具有重要作用㊂作者就脂质代谢中脂肪酸㊁胆固醇㊁磷脂㊁脂滴和脂筏以及糖代谢中糖酵解和三羧酸循环在P R R S V感染宿主细胞中的作用进行综述,以阐明P R R S V的致病机制,对疫苗和药物研发具有重要意义㊂7861中国畜牧兽医51卷F A ,脂肪酸(黄色);C h o l ,胆固醇(绿色);P L ,磷脂(浅紫);L D ,脂滴(棕色)F A ,F a t t y a c i d (y e l l o w );C h o l ,C h o l e s t e r o l (g r e e n );P L ,P h o s p h o l i p i d (l a v e n d e r );L D ,L i p i dd r o p l e t s (b r o w n )图1 脂质代谢在P R R S V 感染中的作用F i g .1 T h e r o l e o f l i pi dm e t a b o l i s mi nP R R S Vi n f e c t i o n 1 脂质代谢在P R R S V 感染中的作用1.1 脂肪酸在P R R S V 感染中的作用脂肪酸在多种病毒感染中都起到了重要作用㊂研究表明,干扰脂肪酸生物合成途径的药物对多种囊膜病毒具有抗病毒作用,包括人类巨细胞病毒(H u m a n c y t o m e g a l o v i r u s ,H C MV )[13]㊁乙型肝炎病毒(H e pa t i t i s B v i r u s ,H B V )[14]㊁丙型肝炎病毒(H e p a t i t i sCv i r u s ,H C V )[15]㊁人类免疫缺陷病毒(H u m a n i m m u n o d e f i c i e n c y vi r u s ,H I V )[16]和裂谷热病毒(R i f tV a l l e y f e v e r v i r u s ,R V F V )[17]等,证实了脂肪酸在囊膜病毒复制中的重要性㊂脂肪酸参与了P R R S V 的复制㊁组装和释放,并且与炎症和免疫反应有关㊂研究表明,G P 5和M 蛋白的棕榈酰化是病毒组装和出芽所必需的,脂肪酸能影响G P 5和M 蛋白的棕榈酰化,从而影响P R R S V 的组装与释放,表明脂肪酸对于P R R S V 的增殖至关重要[18]㊂5'-磷酸腺苷酸活化的蛋白激酶(5'-a d e n o s i n e m o n o p h o s ph a t e -a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e ,AM P K )是一个调控能量代谢的关键分子,能够抑制脂肪酸合成限速酶乙酰辅酶A 羧化酶(a c e t y l -C o Ac a r b o x y l a s e1,A C C 1)的活性,从而抑制细胞内脂肪酸的合成代谢[19]㊂L o n g 等[20]研究证实,在P R R S V 感染过程中病毒通过AM P K 使A C C 1活性降低,从而抑制脂肪酸合成,且脂肪酸合成抑制剂C 75能够显著抑制P R R S V 增殖㊂熊玉剑[21]研究表明,P R R S V 及P R R S V N S P 4均能通过过氧化物氧化还原蛋白5(pe r o x i r e d o x i n 5,P R D X 5)调控AM P K -A C C 1信号通路,进而抑制脂肪酸合成,P R D X 5抑制P R R S V 增殖,并主要抑制P R R S V 的释放㊂此外,有研究发现中链脂肪酸(m e d i u m -c h a i n f a t t y ac id s ,M C F A s )能够抑制P R R S V 感染㊂Y a n g 等[22]检测了4种M C F A s 的细胞毒性及其对P R R S V 的抑制率,结果显示,在4种M C F A s 中,辛酸单甘酯(c a p r yl i c m o n o g l yc e r ide ,C MG )对细胞的毒性最小,而对P R R S V 的抑制率最高㊂经C MG 治疗后仔猪促炎细胞因子(白细胞介素6(i n t e r l e u k i n ,I L -6)㊁I L -8㊁I L -1β㊁I F N -γ㊁肿瘤坏死因子-α(t u m o r n e c r o s i s f a c t o r -α,T N F -α))水平显著下调,抗炎细胞因子(I L -10)水平显著上调㊂蓝俊虹[23]研究发现,α-单月88614期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展桂酸甘油酯(α-g l y c e r o lm o n o l a u r a t e,α-GM L)具有显著抑制P R R S V的作用,作用机制主要是降低P R R S V的活力,减少P R R S V G P5与M蛋白及细胞受体C D163的表达,同时抑制N F-κB通路,并减少T N F-α的分泌㊂前列腺素E2(p r o s t a g l a n d i nE2,P G E2)来源于花生四烯酸,通过激活限速酶环氧化酶1/2型(c y c l o o x y g e n a s e t y p e1/2,C O X-1/2)在发热中起重要作用㊂H P-P R R S V可通过E R K1/2-p-C/E B P-β信号通路诱导C O X-1的表达,导致P G E2的增加[24]㊂H P-P R R S V N S P2还能够通过激活M E K1-E R K1/2-C/E B P-β信号通路诱导C O X-2上调,从而增加小胶质细胞中P G E2的产生[25]㊂1.2胆固醇在P R R S V感染中的作用胆固醇是真核细胞生物膜中的一种丰富的脂质,对需要生物膜来建立感染的病毒增殖中起着重要作用㊂S u n等[26]研究表明,用甲基-β-环糊精(m e t h y l-β-c y c l o d e x t r i n,MβC D)(一种用于去除细胞膜胆固醇的药物)预处理非洲绿猴肾上皮细胞(M a r c-145)可显著抑制P R R S V感染,并呈剂量依赖性,而补充外源性胆固醇后可部分恢复P R R S V 的感染性,表明P R R S V感染能力的下降是细胞膜胆固醇的去除而导致的;进一步研究发现,细胞膜胆固醇的减少显著抑制了病毒的进入,尤其是病毒的吸附和释放㊂H u a n g等[27]研究也证实了细胞膜胆固醇对P R R S V的进入至关重要,表明细胞膜中的胆固醇是P R R S V感染的关键成分㊂胆固醇-25-羟化酶(c h o l e s t e r o l-25-h y d r o x y l a s e, C H25H)是一种重要的干扰素刺激基因(i n t e r f e r o n-s t i m u l a t e d g e n e,I S G)编码的多面体膜蛋白,可以催化胆固醇氧化生成25-羟基胆固醇(25-h y d r o x y c h o l e s t e r o l,25H C)[28]㊂C H25H和25H C 在调节胆固醇代谢㊁炎症㊁免疫和抗病毒感染中发挥了重要作用[29]㊂研究发现,P R R S V N S P1β和N S P11在H E K293F T中通过溶酶体途径介导C H25H的降解,但在M a r c-145细胞中N S P1β和N S P11可以颉颃C H25H的抗P R R S V活性[28];C H25H通过阻止病毒进入而显著抑制P R R S V感染,表现出降低催化活性的C H25H具有针对P R R S V的抗病毒作用[30]㊂在另一项研究中, P R R S V E蛋白通过泛素-蛋白酶体途径降解猪C H25H(p o r c i n e C H25H,p C H25H),敲低p C H25H能降低E蛋白诱导的炎症细胞因子表达,而过表达p C H25H则具有相反的效果,表明p C H25H的表达与E蛋白诱导的炎症反应相关[31]㊂25H C在体外具有抗P R R S V感染的作用,能削弱P R R S V的吸附和进入,但不影响病毒基因组的合成和病毒体的释放[32]㊂S o n g等[30]证明了25H C可以在相对较低的剂量下显著抑制P R R S V感染猪肺泡巨噬细胞(p o r c i n e a l v e o l a rm a c r o p h a g e s,P AM s)和M a r c-145细胞,且25H C可以抑制P R R S V的复制并促进P AM s中I L-1β和I L-8的产生[33]㊂3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶还原酶(3-h y d r o x y-3-m e t h y l g l u t a r y l-c o e n z y m eAr e d u c t a s e,HMG C R)是参与胆固醇合成的限速酶,HMG C R磷酸化水平下调是其激活形式㊂HMG C R的活性受AM P K和蛋白磷酸酶2(p r o t e i n p h o s p h a t a s e2,P P2A)2种激酶的调控,活化的P P2A激活HMG C R,而活化的AM P K抑制HMG C R的活性[19]㊂许多病毒可以通过HMG C R调节胆固醇合成,如H B V[34]㊁H C V[35]㊁H C MV[36]㊁D E N V[37]及卡波西肉瘤相关疱疹病毒(K a p o s i s s a r c o m a-a s s o c i a t e d h e r p e s v i r u s, K S H V)[38]等㊂最近研究表明,P R R S V感染通过降低P P2A磷酸化水平以激活HMG C R,导致细胞胆固醇增加,而N S P4在这一过程中发挥了重要作用㊂此外,P R R S V N S P4还可通过调节细胞胆固醇代谢抑制I F N-Ⅰ的产生[39]㊂研究表明,膜蛋白-前蛋白转化酶枯草溶菌素9(p r o p r o t e i n c o n v e r t a s e s u b t i l i s i nk e x i n9,P C S K9)在胆固醇运输过程中具有重要作用,P C S K9可与胆固醇代谢相关的受体L D L R互作,并能抑制P R R S V复制[40-41]㊂综上,胆固醇对于P R R S V的吸附㊁进入㊁复制和释放等阶段至关重要㊂此外,胆固醇还参与了炎症反应以及对I F N-Ⅰ的调控㊂1.3磷脂在P R R S V感染中的作用磷脂主要包括甘油磷脂(g l y c e r o l p h o s p h o l i p i d,G P)和鞘磷脂(s p h i n g o m y e l i n,S M)㊂G P可分为磷脂酰甘油(p h o s p h a t i d y l g l y c e r o l,P G)㊁磷脂酰丝氨酸(p h o s p h a t i d y l s e r i n e,P S)㊁磷脂酰肌醇(p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l,P I)㊁磷脂酰胆碱(p h o s p h a t i d y l c h o l i n e,P C)㊁磷脂酰乙醇胺(p h o s p h a t i d y l e t h a n o l a m i n e,P E)和心磷脂(c a r d i o l i p i n,C L)㊂研究表明,多种病毒感染都可引起磷脂的代谢变化,如I A V感染引起P S㊁P I和S M 的代谢变化,在I A V感染中发挥了重要作用[6]㊂猪伪狂犬病病毒(P s e u d o r a b i e sv i r u s,P R V)感染猪肺泡巨噬细胞系(i P AM)可引起P E㊁P S㊁P C㊁P G㊁P I 及神经酰胺(c e r a m i d e,C e r)的代谢变化[42]㊂D E N V9861中国畜牧兽医51卷可以通过重塑循环重新配置磷脂,以改变内膜并促进复制复合物的形成[43]㊂磷脂与P R R S V感染引起的凋亡㊁炎症及病毒复制相关㊂研究表明,P S暴露在细胞表面是P R R S V感染细胞中显示的凋亡证据,可以作为一种重要的吞噬信号[44-45]㊂W a n g等[46]研究发现,抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l-3-k i n a s e,P I3K)减少了病毒基因转录,使病毒蛋白合成显著减少,表明P I3K可影响病毒复制㊂最新研究发现,鞘磷脂磷酸二酯酶酸性样蛋白3B (s p h i n g o m y e l i n p h o s p h o d i e s t e r a s e a c i d-l i k e3B, S M P D L3B)抑制了P R R S V的吸附㊁进入㊁复制和释放,且其缺失显著抑制了P R R S V的增殖,表明S M P D L3B在P R R S V复制中起积极作用[47]㊂N-乙酰鞘氨醇脱乙酰基酶(N-a c y l s p h i n g o s i n e a m i d o h y d r o l a s e1,A S A H1)的自然底物C e r是S M途径信号系统的中心分子,A S A H1可以通过水解C e r激活N F-κB信号通路,A S A H1的上调表达在P R R S V感染引起的细胞凋亡和炎症反应中扮演着重要角色[48]㊂1.4脂滴在P R R S V感染中的作用脂滴是一种高度动态的细胞器,主要负责中性脂质的储存㊂脂滴来源于内质网,具有独特的结构,由中性脂质的疏水性核心组成㊂研究表明,病毒感染宿主细胞后可以诱导脂滴积累,宿主脂滴也可以调节病毒的生命周期,如轮状病毒(R o t a v i r u s,R V)利用脂滴进行复制,阻断脂滴积累可以显著减少R V增殖产生的子代病毒数量[49];D E N V感染增加了细胞内脂滴的数量,C75减少了D E N V感染和未感染细胞中脂滴的量,也抑制了D E N V的复制[50];H C V的核心蛋白与二酰基甘油酰基转移酶(d i a c y l g l y c e r o l a c y l t r a n s f e r a s e1,D G A T1)相互作用,使核周区脂滴增加并聚集,而抑制D G A T1活性可减少感染性病毒粒子的产生[51]㊂此外,脂滴还可作为一个平台,招募病毒蛋白,加速病毒组装,增加病毒复制[52]㊂P R R S V感染可以诱导脂滴积累,脂滴参与了P R R S V的复制和组装,且与细胞炎症相关㊂研究表明,P R R S V感染下调N-M y c下游调控基因1(N-M y cd o w n s t r e a m-r e g u l a t e d g e n e1,N D R G1)的表达,激活脂噬以促进子代病毒的复制和组装[53]㊂Y u等[54]研究表明,P R R S V感染会增加M a r c-145和P AM s细胞中的脂滴数量,而表没食子儿茶素没食子酸酯(e p i g a l l o c a t e c h i n g a l l a t e,E G C G)可以抑制P R R S V诱导的脂滴形成和脂质含量的增加㊂韩莹倩[55]选择了参与脂质合成和分解并调控脂滴趋向性的主要基因R a b18进行研究,利用R a b18基因敲低和显著负突变体证实R a b18参与P R R S V复制;进一步检测敲低R a b18基因对P R R S V生命周期的影响发现,R a b18基因参与P R R S V子代病毒的组装㊂最新研究表明,P R R S V感染可诱导脂滴积累,减少脂滴积累可显著降低P R R S V复制和抑制N F-κB 信号通路,同时下调I L-1β和I L-8的转录[56]㊂1.5脂筏在P R R S V感染中的作用脂筏是富含胆固醇和鞘脂的质膜微域(图2),参与了各种重要的细胞过程,包括胞吞作用㊁胞吐作用和细胞信号传导,基本上在病毒生命周期的每个阶段都依赖脂筏进行感染[57-59]㊂脂筏在许多病毒的生命周期中起着重要的作用,如宿主脂筏在I A V的组装和出芽中起着关键作用,且I A V可以利用脂筏依赖的内吞作用进行宿主内化[60]㊂一些病毒如S A R S-C o V-2[61]㊁黄病毒[62]及埃博拉病毒(E b o l a v i r u s,E B O V)[63]等都利用脂筏进入宿主细胞,表明病毒在进入阶段与细胞膜上的脂筏有密切关系㊂图2脂筏结构示意图F i g.2S c h e m a t i c o f l i p i d r a f t s t r u c t u r e09614期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展一些证据表明,P R R S V进入细胞依赖脂筏㊂Y a n g等[64]证明了P R R S VG P3和G P4蛋白在病毒进入过程中与脂筏相关,细胞脂筏的破坏抑制了P R R S V的进入,且细胞膜上的脂筏在P R R S V的复制和释放中起着重要的作用㊂D u等[65]证明P R R S V G P4蛋白是一种糖基磷脂酰肌醇(g l y c o s y l-p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l,G P I)修饰的膜相关蛋白,G P4与C D163在细胞膜脂筏上的共定位暗示了该复合物对于P R R S V进入和感染的重要作用㊂孙颖[66]用针对性抑制脂筏介导的胞吞途径的药物处理细胞以研究脂筏在P R R S V侵入M a r c-145细胞过程中的作用,结果表明,当脂筏介导的胞吞途径被抑制时,病毒增殖能力下降;进一步用针对性抑制网格蛋白介导的胞吞途径的药物处理细胞后P R R S V的感染受到明显的抑制,表明P R R S V侵入M a r c-145细胞的胞吞途径是依赖脂筏和网格蛋白的㊂然而,H u a n g等[27]研究证明,胆固醇缺乏并不改变M a r c-145细胞中P R R S V受体C D163的表达水平,对网格蛋白介导的胞吞作用没有影响,但干扰了脂筏依赖的胞吞作用㊂2糖代谢在P R R S V感染中的作用2.1糖酵解增强对P R R S V的作用一些病毒感染可以影响宿主细胞内的糖代谢水平,如H C MV感染促进糖酵解水平显著增加,导致葡萄糖消耗增加,从而抑制病毒复制[7]㊂D E N V和I A V感染能够诱导糖酵解途径,从而促进病毒复制[67-68]㊂H C V重编程宿主细胞代谢,以利于有氧糖酵解水平的提高[69]㊂腺病毒(A d e n o v i r u s)的基因产物E4O R F1诱导宿主细胞葡萄糖代谢上调,通过激活MY C来促进上皮细胞中糖酵解的增强[70]㊂P R R S V可以通过糖酵解途径来促进病毒复制㊂L i u等[71]发现P R R S V G P5在细胞质中与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(g l y c e r a l d e h y d e-3-p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e,G A P D H)相互作用,抑制G A P D H 进入细胞核,并通过其糖酵解活性促进P R R S V复制㊂Z h a n g等[72]研究发现,P R R S V感染促进糖酵解产生乳酸,乳酸靶向MA V S抑制R L R信号,从而促进病毒复制㊂毛健等[73]研究表明,P R R S V感染M a r c-145细胞可明显提高糖酵解的关键激酶乳酸脱氢酶A(l a c t a t e d e h y d r o g e n a s eA,L D H A)表达,并呈现病毒感染剂量依赖性㊂抑制L D H A和糖酵解可以显著抑制P R R S V N蛋白表达并降低病毒滴度,表明L D HA可显著影响P R R S V复制,糖酵解在P R R S V感染中发挥重要作用㊂2.2三羧酸循环代谢产物对P R R S V的作用三羧酸循环是有氧生物获得生命活动所需能量的主要途径㊂三羧酸循环的整个过程需要多种酶的协同作用,并产生多种中间代谢产物,以此来维持细胞稳定的生存环境㊂衣康酸是免疫反应基因1 (i m m u n o r e s p o n s i v e g e n e1,I R G1)通过催化顺乌头酸产生的三羧酸循环的代谢产物,在代谢和免疫中起重要作用㊂P a n g等[74]研究发现,衣康酸4-辛酯(4-o c t y l i t a c o n a t e,4-O I)可通过干扰病毒的吸附㊁复制和释放,剂量依赖性地抑制P R R S V增殖;还可通过增强核因子红细胞2相关因子2(n u c l e a r f a c t o r e r y t h r o i d2-r e l a t e df a c t o r2,N r f2)信号传导抑制P R R S V诱导的炎症反应,表明4-O I是一种很有前景的抗P R R S V候选药物㊂3小结与展望脂质代谢中脂肪酸㊁胆固醇㊁磷脂㊁脂滴和脂筏在P R R S V感染中发挥了重要作用㊂其中,脂肪酸对于P R R S V的增殖至关重要,参与了P R R S V的复制㊁组装及释放等阶段,且与炎症和免疫有关;胆固醇参与了P R R S V感染的多个阶段,包括P R R S V 的吸附㊁进入㊁复制和释放,同时也参与了炎症反应及对I F N-Ⅰ的调控;磷脂在P R R S V复制中起促进作用并与P R R S V感染引起的细胞凋亡有关;脂滴参与了P R R S V的复制和组装,同时与细胞炎症相关;细胞膜上的脂筏是P R R S V进入宿主细胞所必需的,并参与了P R R S V的复制和释放㊂同样,糖代谢中的糖酵解途径在P R R S V感染中具有重要作用,P R R S V通过增强糖酵解以促进病毒复制㊂此外,三羧酸代谢产物4-O I能够抑制P R R S V的复制和P R R S V诱导的炎症反应㊂总而言之,脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染中都扮演了十分重要的角色㊂目前,P R R S V的商业疫苗仍难以提供令人满意的效果,且无有效的药物进行治疗㊂因此,对P R R S V感染机制的研究仍然是一项极为紧迫的任务㊂脂质代谢是病毒与宿主细胞的抗衡过程中重要的一部分,脂质代谢参与了P R R S V感染的多个阶段,探索脂质代谢和P R R S V之间的相互作用,有利于增加对病毒复制机理的认知,可为未来抗P R R S V药物的研发提供一些新思路,如对于一些依赖胆固醇进行复制且缺乏治疗方法的病毒而言,胆固醇可作为治疗靶点[75]㊂P R R S V通过增强糖酵1961中国畜牧兽医51卷解以促进病毒复制,三羧酸循环代谢产物又可抑制病毒复制,了解糖代谢与P R R S V感染之间的关系,有助于阐明P R R S V的复制机制㊂随着代谢组学的发展和完善,脂质代谢和糖代谢影响P R R S V感染机制的研究将会变得更为简单和快速,这也为今后抗P R R S V药物研发提供了更大的可能性㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] L IP,S H E N Y,WA N G T,e ta l.E p i d e m i o l o g i c a ls u r v e y o fP R R Sa n d g e n e t i cv a r i a t i o na n a l y s i so f t h eO R F5g e n ei n S h a n d o n g p r o v i n c e,2020-2021[J].F r o n t i e r s i nV e t e r i n a r y S c i e n c e,2022,9:987667.[2] HA N J,Z H O U L,G E X,e ta l.P a t h o g e n e s i sa n dc o n t r o l o f t h e C h i n e s e h i g h l y p a t h o g e n i c P o r c i n er e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s[J].V e t e r i n a r y M i c r o b i o l o g y,2017,209:30-47. [3] Z HA N G M,D U T,L O N G F,e ta l.P l a t y c o d i n Ds u p p r e s s e s t y p e2P o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s i n p r i m a r y a n d e s t a b l i s h e dc e l l l i n e s[J].V i r u s e s,2018,10(11):657.[4] G U OZ,C H E N XX,L IR,e t a l.T h e p r e v a l e n t s t a t u sa n d g e n e t i c d i v e r s i t y o f P o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u si n C h i n a:A m o l e c u l a re p i d e m i o l o g i c a l p e r s p e c t i v e[J].V i r o l o g y J o u r n a l,2018,15:2.[5] Y A NJ,P E N GB,C H E N H,e t a l.O n-s i t ed i f f e r e n t i a ld i a g n o s t i c de t e c t i o n of H P-P R R S V a n d C-P R R S Vu s i n g E u N P s-m A b f l u o r e s c e n t p r o b e-b a s e di m m u n o a s s a y[J].A n a l y t i c a l a n d B i o a n a l y t i c a lC h e m i s t r y,2021,413:5799-5810.[6] Z H O U Y,P UJ,WU Y.T h e r o l eo f l i p i dm e t a b o l i s mi nI n f l u e n z a A v i r u si n f e c t i o n[J].P a t h o g e n s,2021,10(3):303.[7] MU N G E R J,B A J A D S U,C O L L E R H A,e ta l.D y n a m i c so f t h ec e l l u l a r m e t a b o l o m ed u r i n g H u m a nc y t o m e g a l o v i r u s i n f e c t i o n[J].P L o S P a t h o g e n s,2006,2(12):e132.[8] Y U Y,C L I P P I N G E RAJ,A L W I N EJC.V i r a l e f f e c t so n m e t a b o l i s m:C h a n g e si n g l u c o s e a n d g l u t a m i n eu t i l i z a t i o n d u r i n g H u m a n c y t o m e g a l o v i r u si n f e c t i o n[J].T r e n d s i n M i c r o b i o l o g y,2011,19(7):360-367.[9] O S U N A-R AMO SJF,R E Y E S-R U I ZJM,D E LA R.T h e r o l e o f h o s t c h o l e s t e r o l d u r i n g F l a v i v i r u si n f e c t i o n[J].F r o n t i e r si n C e l l u l a r a n d I n f e c t i o nM i c r o b i o l o g y,2018,8:388.[10] T HA K E R S K,C HA P A T,G A R C I A G J,e ta l.D i f f e r e n t i a lm e t a b o l i cr e p r o g r a m m i n g b y Z i k av i r u sp r o m o t e s c e l l d e a t h i n h u m a n v e r s u s m o s q u i t oc e l l s[J].C e l lM e t a b o l i s m,2019,29(5):1206-1216.[11]I C A R D P,L I N C E T H,WU Z,e t a l.T h ek e y r o l eo fW a r b u r g e f f e c t i n S A R S-C o V-2r e p l i c a t i o n a n da s s o c i a t e d i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e[J].B i o c h i m i e,2021,180:169-177.[12]杨秀文,陆剑云,卢紫欣,等.糖代谢在肠道病毒E V71复制中的作用研究[J].中国病原生物学杂志,2022,17(2):143-148.Y A N G X W,L U J Y,L U Z X,e ta l.T h er o l eo fg l u c o s em e t a b o l i s mi nt h er e p l i c a t i o no fE n t e r o v i r u sE V71[J].J o u r n a l o f P a t h o g e n B i o l o g y,2022,17(2):143-148.(i nC h i n e s e)[13] P U R D YJG,S H E N K T,R A B I N OW I T ZJD.F a t t ya c i d e l o n g a s e7c a t a l y z e s l i p i d o m e r e m o d e l i n ge s s e n t i a lf o r H u m a nc y t o m eg a l o v i r u sr e p l i c a t i o n[J].C e l l R e p o r t s,2015,10(8):1375-1385.[14] O K AMU R A H,N I O Y,A K A H O R I Y,e ta l.F a t t ya c i db i o s y n t h e s i si si n v o l v e d i n t h e p r o d uc t i o n o fH e p a t i t i s B v i r u s p a r t i c l e s[J].B i o c h e m i c a l a n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o m m u n i c a t i o n s,2016,475(1):87-92.[15] Y AMA N E D,HA Y A S H I Y,MA T S UMO T O M,e t a l.F A D S2-d e p e n d e n tf a t t y a c i d d e s a t u r a t i o nd i c t a te s c e l l u l a r s e n s i t i v i t y t of e r r o p t o s i s a n dp e r m i s s i v e n e s sf o r H e p a t i t i sC v i r u sr e p l i c a t i o n[J].C e l l C h e m i c a lB i o l o g y,2022,29(5):799-810.[16] K U L K A R N I M M,R A T C L I F F A N,B HA T M,e t a l.C e l l u l a rf a t t y a c i ds y n t h a s e i sr e q u i r e df o r l a t es t a g e so fH I V-1r e p l i c a t i o n[J].R e t r o v i r o l o g y,2017,14(1):45.[17] MO S E R T S,S C H I E F F E R D,C H E R R Y S.AM P-a c t i v a t e d k i n a s e r e s t r i c t s R i f t V a l l e y f e v e r v i r u si n f e c t i o nb y i n h i b i t i n g f a t t y a c i ds y n t h e s i s[J].P L o SP a t h o g e n s,2012,8(4):e1002661.[18] Z HA N G M,HA N X,O S T E R R I E D E R K,e t a l.P a l m i t o y l a t i o n o ft h e e n v e l o p e m e m b r a n e p r o t e i n sG P5a n d M o fP o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r ys y n d r o m e v i r u s i s e s s e n t i a l f o r v i r u s g r o w t h[J].P L o SP a t h o g e n s,2021,17(4):e1009554.[19]龙思文.脂质代谢在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染中的作用研究[D].武汉:华中农业大学,2019.L O N GS W.T h er o l eo f l i p i d m e t a b o l i s mi nP o r c i n er e p r o d u c t i o n a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u si n f e c t i o n[D].W u h a n:H u a z h o n g A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,2019.(i nC h i n e s e)[20] L O N GS,Z H O U Y,B A ID,e t a l.F a t t y a c i d s r e g u l a t e29614期罗琴等:脂质代谢和糖代谢在P R R S V感染宿主细胞中作用研究进展P o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u si n f e c t i o n v i a t h eAM P K-A C C1s i g n a l i n g p a t h w a y[J].V i r u s e s,2019,11(12):1145.[21]熊玉剑.猪P R D X5在P R R S V调控AM P K信号通路中的作用及机制研究[D].武汉:华中农业大学,2022.X I O N G YJ.S t u d y o f e f f e c t sa n d m e c h a n i s m so f p i gP R D X5i n t h e r e g u l a t i o n o fAM P Ks i g n a l i n gp a t h w a yd u r i n g P o r c i ne r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u si n f e c t i o n[D].W u h a n:H u a z h o n g A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,2022.(i nC h i n e s e)[22] Y A N G L,W E N J,Z HA N G Y,e ta l.T h ea n t i v i r a la c t i v i t y o f c a p r y l i c m o n o g l y c e r i d e a g a i n s t P o r c i n er e p r o d u c t i v e a n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s i nv i t r oa n d i n v i v o[J].M o l e c u l e s,2022,27(21):7263.[23]蓝俊虹.α-单月桂酸甘油酯对猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制机制的探究[D].杭州:浙江农林大学,2021.L A N J H.I n h i b i t o r y m e c h a n i s m o fα-g l y c e r o lm o n o l a u r a t eo nP o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r ys y n d r o m ev i r u s[D].H a n g z h o u:Z h e j i a n g A g r i c u l t u r a la n dF o r e s t r y U n i v e r s i t y,2021.(i nC h i n e s e)[24] B IY,G U O X K,Z HA O H,e ta l.H i g h l yp a t h o g e n i cP o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u si n d u c e s p r o s t a g l a n d i n E2p r o d u c t i o n t h r o u g hc y c l o o x y g e n a s e1,w h i c h i sde p e n d e n t o n t h eE R K1/2-p-C/E B P-b e t a p a t h w a y[J].J o u r n a l o f V i r o l o g y,2014,88(5):2810-2820.[25] D U L,WA N G H,L I U F,e t a l.N S P2i s i m p o r t a n t f o rh i g h l y p a t h o g e n i c P o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s t o t r i g g e r h i g h f e v e r-r e l a t e dC O X-2-P G E2p a t h w a y i n p i g s[J].F r o n t i e r si nI m m u n o l o g y,2021,12:657071.[26] S U N Y,X I A OS,WA N G D,e t a l.C e l l u l a rm e m b r a n ec h o l e s t e r o l i sr e q u i r e df o rP o r c i n er e p r od u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s e n t r y a n d r e l e a s e i nM a r c-145c e l l s[J].S c i e n c e C h i n a-L i f e S c i e n c e s,2011,54(11):1011-1018.[27] HU A N GL,Z HA N GYP,Y U YL,e t a l.R o l e o f l i p i dr a f t s i n P o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r ys y n d r o m e v i r u s i n f e c t i o n i n M a r c-145c e l l s[J].B i o c h e m i c a l a n d B i o p h y s i c a l R e s e a r c hC o m m u n i c a t i o n s,2011,414(3):545-550.[28] D O N G H,Z H O UL,G EX,e t a l.P o r c i n e r e p r o d u c t i v ea n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u sN S P1b e t a a n dN S P11a n t a g o n i z e t h e a n t i v i r a l a c t i v i t y o f c h o l e s t e r o l-25-h y d r o x y l a s e v i a l y s o s o m a l d e g r a d a t i o n[J].V e t e r i n a r yM i c r o b i o l o g y,2018,223:134-143.[29] Z HA OJ,C H E NJ,L IM,e t a l.M u l t i f a c e t e d f u n c t i o n so f C H25H a n d25H C t o m o d u l a t e t h e l i p i dm e t a b o l i s m,i m m u n er e s p o n s e s,a n db r o a d l y a n t i v i r a la c t i v i t i e s[J].V i r u s e s,2020,12(7):727.[30] S O N G Z,Z HA N G Q,L I U X,e t a l.C h o l e s t e r o l25-h y d r o x y l a s e i sa ni n t e r f e r o n-i n d u c i b l ef a c t o rt h a tp r o t e c t s a g a i n s tP o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r ys y n d r o m e v i r u s i n f e c t i o n[J].V e t e r i n a r yM i c r o b i o l o g y,2017,210:153-161.[31] K E W,F A N G L,T A O R,e t a l.P o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u s E p r o t e i n d e g r a d e sp o r c i n e c h o l e s t e r o l25-h y d r o x y l a s e v i a t h eu b i q u i t i n-p r o t e a s o m e p a t h w a y[J].J o u r n a l o f V i r o l o g y,2019,93(20):e719-e767.[32] D O N G H,Z H O U L,G E X,e ta l.A n t i v i r a l e f f e c to f25-h y d r o x y c h o l e s t e r o l a g a i n s t P o r c i n e r e p r o d u c t i v ea n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s i n v i t r o[J].A n t i v i r a lT h e r a p y,2018,23(5):395-404.[33] S O N G Z,B A I J,N A UWY N C K H,e t a l.25-h y d r o x y c h o l e s t e r o l p r o v i d e s a n t i v i r a l p r o t e c t i o na g a i n s th i g h l y p a t h o g e n i c P o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s p i r a t o r y s y n d r o m ev i r u si ns w i n e[J].V e t e r i n a r yM i c r o b i o l o g y,2019,231:63-70.[34] L IY J,Z HU P,L I A N G Y,e ta l.H e p a t i t i sBv i r u si n d u c e se x p r e s s i o no fc h o l e s t e r o l m e t a b o l i s m-r e l a t e dg e n e s v i a T L R2i n H e p G2c e l l s[J].W o r l d J o u r n a lo f G a s t r o e n t e r o l o g y,2013,19(14):2262-2269.[35] H S U C S,L I U W L,L IQ,e ta l.H e p a t i t i sC v i r u sg e n o t y p e s1-3i n f e c t i o n sr e g u l a t el i p o g e n i cs i g n a l i n ga n d s u p p r e s s c h o l e s t e r o lb i o s y n t h e s i s i nh e p a t o c y t e s[J].J o u r n a lo f t h e F o r m o s a n M e d i c a lA s s o c i a t i o n,2020,119(9):1382-1395.[36] G U O N,Z HA N G N,Y A N L,e ta l.D o w n-r e g u l a t i o no f s i n g l e-s t r a n d e dD N A-b i n d i n gp r o t e i n1e x p r e s s i o ni n d u c e d b y H C MV i n f e c t i o n p r o m o t e s l i p i da c c u m u l a t i o n i n c e l l s[J].B r a z i l i a n J o u r n a l o fM e d i c a la n d B i o l o g i c a l R e s e a r c h,2017,50(11):e6389.[37] S O T O-A C O S T A R,B A U T I S T A-C A R B A J A L P,C E R V A N T E S-S A L A Z A R M,e t a l.DE N V u p-r e g u l a t e st h e HMG-C o A r e d u c t a s ea c t i v i t y t h r o u g ht h e i m p a i r m e n t o f AM P K p h o s p h o r y l a t i o n:Ap o t e n t i a l a n t i v i r a l t a r g e t[J].P L o SP a t h o g e n s,2017,13(4):e1006257.[38] S E R Q U I N A A,K AM B A C H D M,S A R K E RO,e t a l.V i r a l m i c r o R N A sr e p r e s st h ec h o l e s t e r o l p a t h w a y,a n d25-h y d r o x y c h o l e s t e r o l i n h ib i t s i n f ec t i o n[J].m B i o,2017,8(4):e517-e576.[39] K E W,Z H O U Y,L A IY,e ta l.P o r c i n er e p r o d u c t i v e3961。

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向脂肪细胞分化的实验研究

爬片显示约有６骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。结论Ｏ
导分化为脂肪细胞。
大鼠骨髓间充质干细胞能进行体外分离培养并能诱
【关键词】骨髓细胞；问充质干细胞；脂肪细胞；细胞分化【中图分类号１Ｒ２．３９２【文献标识码】Ａ
ＥｐｒｍｅｔｏｆｅｅｔａｉｎｏｔＢｎａｒｗｅｅｃｙａｔｍｌｓｉｔｉｏｙｅｘｅｉｎｆＤｉｆｒｎｉｔｏｆＲａｏｅＭｒｏＭｓｎｈｍｌｅＣｅｌｎｏＡｄｐｃｔＳ
ｃｎａｎｎｅａｅｈｓｎｎｓｌｒＴｈｎｄｆｒｎｉｄｃｌｒｅｉｃｔｄｂｕａＶｔｉｏｔｉｉｇｄｓｍｔａｏｅａｄｉｕｉｅｉｅｅｔｎｒｆａｅｅｓｗｅｅｉｎｆａｅｙＳｄＩｓａｒｌｄｔｉｎ＿Ｒｅｕｔｓｌｓ
ｍａｒｗ．ｕｔｒｄａｄｐｓａｅ．ｒｏｃｌｅｎａｓｇｄＭＣｒｎｕｅｏｄｆｅｅｔｔｎｏａｉｏｙｅｎｉｄｃｉｎｍｅｉｍｕｓｗｅｅｉｄｃｔｉｒｎｉｅｉｄｐｃｔｓｉｎｕｔｄｕｄｆａｔｏ
ｔｅ１ｔａｆｅｅｎｎｕｅ，ｐｒｘｍａｅｙ６ｒｔｈ２ｈｄｙａｔｒｂｉｇｉｄｃａｐｏｉｔｌ０ｄａＭＣｓｗｅｅｉｄｃｔｄｐｇｎｃｃｌ￣Ｃｉｕｉｎｒｎｕｅｏａｉｏｅｉｅｌｄｓｏ￣ｓｏＣｓｃｎｃｌｒｎｉｅｅｔｔｔｄｐｃｔｓｉｉ．ａｕｔｅａｄｄｆｒｎｉｅｉｏａｉｏｙｅｖｔｕｆａｎｎｒｏ

试验四间充质干细胞的培养及鉴定一

2、BMSCs的诱导分化 1)成脂诱导：将骨髓间充质干细胞以4×103/cm2的接种密度培养在35 mm培养皿里，待细胞融合后将含10% NCS的低糖DMEM生长培养液换为成脂肪分化诱导液（高糖DMEM+10%血清+10 μg/ml胰岛素+1 μM地塞米松+100 μM吲哚美辛+0.5 mM 3isobutyl-1-methylxanthine）培养，每隔3 d换诱导液一次，持续诱导培养6 d。然后用维持液（高糖 DMEM+10%胰岛素）继续培养细胞3 d。各组细胞用PBS冲洗3次，4%多聚甲醛固定10 min，油红O 工作液浸染10 min，60%异丙醇洗去多余染液， PBS冲洗3次，苏木精复染3-5 min，PBS漂洗10 min。镜下观察并摄影。
3）将预先经过灭菌处理并包被多聚赖氨酸的盖玻片置于35 mm2培养皿中，将第5代BMSCs用0.25%胰酶消化，按 1×105/ml 密度接种， 37℃、 5% CO2 条件下培养。 4）待细胞70%汇合时细胞去除培养基，进行免疫荧光染色鉴定其表面抗原CD29、CD34、CD45、CD71、 CD90、CD106的表达。用PBS清洗，加入4%多聚甲醛固定，4℃过夜。PBS洗3次后，分别滴加用 PBS+NaN3(0.02%)+BSA(3%)+ TritonX-100(0.2%) 稀释的单克隆抗体孵育，室温90 min。PBS洗3次。细胞核用Hoechst 33258染色，室温放置5 min并冲洗。用50%甘油缓冲液封片，荧光显微镜观察拍照。
实验四间充质干细胞的培养及鉴定
一、实验目的

1、掌握大鼠骨髓间充质干细胞原代培养的方法。 2、熟练掌握间充质干细胞的传代、冻存和复苏的操作过程。 3、掌握间充质干细胞表面抗原的鉴定方法。 4、通过诱导间充质干细胞成脂、成骨分化，鉴定间充质干细胞的多向分化潜能，并掌握其诱导分化的方法。

肌管-边周含有肌原纤维的长条形多核细胞,由成肌细胞融合而成,最后分化成成熟的肌纤维

肌管-边周含有肌原纤维的长条形多核细胞，由成肌细胞融合而成，最后分化成成熟的肌纤维肌管-边周含有肌原纤维的长条形多核细胞，由成肌细胞融合而成，最后分化成成熟的肌纤维。

学术术语来源---联合诱导兔脂肪源性基质细胞的成肌潜能文章亮点：根据Pubmed检索结果，目前涉及细胞因子和5-氮杂胞苷联合诱导脂肪源性细胞成肌潜能分化的研究国内外报道较少，实验在种子细胞成肌诱导方面具备先进性，研究结果表明，联合诱导法是脂肪源性基质细胞分化成肌细胞的理想方法，是成肌细胞体外培养的有效途径，为培养肌源性干细胞提供了良好的尝试，具有潜在的临床应用价值。

关键词：干细胞；脂肪干细胞；脂肪源性基质细胞；转化生长因子β1；成肌分化因子；5-氮杂胞苷；Ⅲ型胶原；诱导成肌；成肌细胞；细胞培养；结蛋白；省级基金；干细胞图片文章摘要背景：成肌种子细胞是构建工程化成肌复合物的基础，如何优化其扩增是过渡到临床应用的核心。

目的：分析将MyoD、转化生长因子β1及5-氮杂胞苷不同模式下联合诱导兔脂肪源性基质细胞体外成肌潜能的变化。

方法：取兔腹部脂肪，采用胶原酶消化法分离获取脂肪源性基质细胞，分别以不同方式进行成肌细胞诱导：5-氮杂胞苷诱导组；MyoD+转化生长因子β1诱导；5-氮杂胞苷+ MyoD+转化生长因子β1联合诱导组；并设空白对照。

于诱导第1，4，8，12，16，20，24，28天观察细胞形态学特点，行MTT比色法、流式细胞仪和免疫组织化学检测鉴定细胞，检测Ⅲ型胶原含量。

结果与结论：联合诱导组与其他组相比，细胞生长迅速，16 d增殖达高峰，20 d肌管数量增多，体积增大，排列规则，呈结蛋白强阳性表达，细胞周期显示联合诱导组脂肪源性基质细胞的DNA复制期细胞比例增加，间隙期细胞减少，Ⅲ型胶原含量明显增高，差异有显著性意义。

结果提示，多因子联合5-氮杂胞苷模式能有效促进脂肪源性基质细胞向成肌细胞定向分化，细胞增殖显著，是成肌细胞体外诱导的理想方法。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

Ｌｉｉ，ＭａＳｕｎｕＬｈａｇ，ＧｕＨａｌｎ，Ｒｅｈｏｉ。ｕｎＹａａ，ＹａｇＪｎｎｕ
（ＤｅａｔｅｔｆＮｕｒｉｎｏｄＨｙｉｅＳｈｏｏｕｌａｔ，ｈｎｄｃｌｎｅｓｙ，ｈｎａｇｐｒｍｎｔｉｏａｄＦｏｒｉＳｅｙｎｏｔｎｎｃｈａａＵｖｔ
第１９卷第４期２１００年Ｏ８月
中国组织化学与细胞化学杂志
ＣＨＩＮＥＳＪＥＯＵＲＮＡＬＳＯＦＨＩＴＯＣＨＥＭＩＴＲＹＳＡＮＤＣＹＴＯＣＨＥＭＩＴＲＹＳ
Ｖｏ．１．ＮＯ．１９４
Ａｕｇｕｓ．２０ｔ０１
（要］摘
目的诱导大鼠脂肪基质细胞成脂分化，观察慢病毒感染效果。方法大鼠脂肪基质细胞培养至第３后，代
间接免疫荧光法鉴定细胞表面抗原Ｃ４，并采用ＭＴ法绘制生长曲线；第３基质细胞成脂诱导分化为脂肪细胞，油红Ｄ４Ｔ代０染色法鉴定，并行慢病毒感染。结果第３代脂肪基质细胞表面抗原Ｃ４Ｄ４表达呈阳性；细胞生长曲线呈 “ ” 形。细胞ｓ
ｏｓｒｅｄｆｅｅｔａｅｄｐｃｔｓｉｆｃｅｙｌｎｉｉｕ．ＭｅｈｄｌｓｒａｅａｔｇｎＣＤ４ｓｉｅｔｉｄｂｅｖｉｆｒｎｉｔｄａｉｏｙｅｎｅｔｄｂｅｔｖｒｓｔｏｓＣｅｌｕｆｃｎｉｅ４ｗａｄｎｉｅｆ
ＥＸＰＥＲＩＥＮＴＡＬＳＭＴＵＤＹｏＮＡＤＩＰｏＧＥＮＩＤＩＣＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩＮｏｏＦＡＤＩＰｏＳＤＥＲＩＥ— ＶＥＤＳＴＲｏＭＡＬＣＥＬＬＳＡＮＤＬＥＮＴＩＲＵＳＩＦＥＣＴＩＶＩＮｏＮＮＩＲＡＴＳ
１００；ｖｓｎｏｔｏｅｉ，ＳｅｇｉｇＨｏｐｔｌｈｎｄｃｌＵｎｖｒｉ１０１ＤｉｉｏｆＯｒｈｐｄｃｈｎＪｎｓｉ，ＣｉＭｅｉｉｅｓｔｉｓａａａｙ，Ｓｅｙｎ１０４ｈｎ）ｈｎａｇ１００，Ｃｉａ
［ｓｒｃ］Ａｂｔａｔ
ＯｂｅｔｅＴｏｉｄｃｄｐｇｎｃｄｆｅｅｔａｉｎｏａｄｐｓ — ｅｉｅｔｏｌｅｌａｄｔｊｃｉｎｕｅａｉｏｅｉｉｆｒｎｉｔｆｔａｉｏｅｄｒｖｄｓｒｍａｌｓｎｏｖｏｒｃ
经成脂诱导分化剂诱导１ｄ后，胞内有大量脂滴形成，脂滴大小不等。油红０染色显示脂滴被染成红色；携带ＧＦ０Ｐ报告
基因的慢病毒可感染成熟脂肪细胞，感染率约为８，且细胞被感染后状态良好。结论慢病毒可高效感染由大鼠脂肪基ｏ质细胞成脂诱导分化成的脂肪细胞，为研究脂肪细胞的基因功能、相关疾病的基因治疗提供了一个有效工具。
ｉａｄｉｓ — ｅｉｅｔｏｍａｅｌｆｇｎｒｔｏｎ３ｂｙｉｄｉｅｔｉｍｕｏｆｕｅｃｎｃｉｔｄ，ａｎＴＴｓｎｒｔａｐｏｅｄｒｖｄｓｒ１ｃｌｓｏｅｅａｉｎｒｃｍｎｌ０ｒｓｅｅｍｅｈｏｄＭａ— ｓｙｓｗｅｈｅｃｌｇｒａｈｏｄｔｅｌｏｗｔｕｖ．Ｔｈｅｅｉｕｃｄａｉｏｇｎｃｄｉｆｒｎｔａｉｎ．ＯｉｒｄＯｔｉｎｇｗｅｅｉｈｃｒｅｎｗｎｄｅｄｐｅｉｆｅｅｉｔｏｌｅｓａｎｉｒ－ｄｎｉｉｄＡｄｐｙｅｉｆｒｎｉｔｄｆｏｄｐｏｅｄｒｖｄｓｒｍａｅｌｅｅｉｎｔｆｅｉｒｄＯｔｉｎｅｔｆｅｉｏｃｔｓｄｆｅｅｔａｅ，ｒｍａｉｓ — ｉｉｅｔｏｌｃｉｓｗｒｄｅｉｉｄｂｙｏ１ｅｓａｎｉｇ，
（关键词］脂肪基质细胞；成脂分化；慢病毒；感染
［图分类号］中Ｑ８３１１．１［献标识码］文ＡＤ０Ｉ０３７／ｇｚｘ２１．４０２：１．８０ｚｚｈ．０００．０
大鼠脂肪基质细胞成脂分化及慢病毒感染的实验研究
刘莉 ¨ 马爽顾海伦任亚浩杨军
（中国医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室沈阳１００；中国医科大学附属盛京医院骨外科沈阳１００）１０１１０４