生物制品及其质量控制要点

分 装*
包 装 检 定
10 000 级 100 000 级
图 -２
病毒疫苗工艺流程及环境区域划分示意图
21
细菌和病毒类疫苗质控要点
1．所有原辅材料符合《中国药典》或《中国生物制 品主要原辅料质量标准》； 2．采用强毒菌株（鼠疫、霍乱、炭疽等）、芽胞菌 和强毒病毒株，应有专用生产操作间，专用生产设备 及隔离实施，操作人员应有安全防护设施； 3．所用生产的菌株或病毒株，要建立原始种子批、 主代种子批、生产种子批三级种子批系统；病毒疫苗 生产用细胞也要建立上述三级细胞库系统； 4．菌苗及疫苗原液、中间品合并、分离、纯化等每 道加工工序后均要做无菌试验和鉴别试验；
原液收获#
半成品* 配置
分 装*
包 装 检 定
10 000 级 100 000 级
图- １
细菌疫苗工艺流程及环境区域划分示意图
20
原代细胞的 制备或传代 细胞复苏
毒种筛选#
种子批的# 建立及检定
毒种接种# 培养细胞 病毒的收 获过滤 #
扩大细胞培养
病毒原液 保存
病毒灭活
原液合并 减毒活疫苗 半成品* 配置
28
抗原包被微孔板 酶标记抗体 组装
菌种筛选#
其它组分
阳性对照*
100 000 级
隔离区
图-5
酶联免疫诊断试剂工艺流程及环境区域划分示意图
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酶联免疫诊断试剂质控要点
1．所用抗原或抗体的纯度、带型、效价及稳定 性等符合现行国家标准，来源要固定； 2．辣根过氧化物酶R2不应低于3.0； 3．微孔板CV（%）不大于10%； 4．选择最佳浓度进行抗原或抗体包被，选择最 佳浓度进行酶标记 5．酶标记后抗体加入有关保护剂，低温保存； 6．应有阳性血清处理、分装的隔离操作间。
4
细菌类疫苗
由细菌、螺旋体或其衍生物制备而成，包括： • 减毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫 疫苗等 • 灭活疫苗：霍乱菌体疫苗、钩端螺旋体疫苗 等 • 亚单位疫苗：脑膜炎球菌多糖疫苗、伤寒 Vi 多糖疫苗等 • 重组 DNA 疫苗：重组疟疾疫苗、重组幽门螺 杆菌疫苗等
5
病毒类疫苗
由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制备 而成，包括： 减毒活疫苗：乙型脑炎减毒疫苗、麻疹疫苗、 风疹疫苗、OPV等 灭活疫苗：乙型脑炎灭活疫苗、出血热疫苗、 狂犬疫苗等 亚单位疫苗：重组乙肝疫苗等 重组DNA疫苗：重组乙肝疫苗等
“活毒”与“死毒”的生产场所、生产设备及器 材，须严格分开。
35
3．“脱毒前”与“脱毒后”
“脱毒前”系指破伤风梭状菌、白喉杆菌繁 殖培养时，生产大量破伤风毒素及白喉毒素， 对人体有致病性，这一阶段为“脱毒前”。 “脱毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或适 宜脱毒剂，将毒素去掉毒性，不再具有致病 性，仍保留其抗原性和免疫原性，称之为 “脱毒后”。 “脱毒前”与“脱毒后”的生产场所、生产 设备及器材须严格分开。
15
三、生物制品的基本属性和特点
（二）
其质量控制和质量检定是采用生物学分析方法， 其效价或生物活性检定有其变异性； 生物制品原材料、中间品、成品、运输、贮存、 甚至使用保持在“冷链”系统中； 特别是预防制品使用对象不是病人，而是健康 人群； 生物制品的质量控制实行生产全过程监控;
生产现场检查时要充分考虑这些特点
6
联合疫苗
由两种或两种以上疫苗抗原原液配制而成 的具有多种免疫原性的疫苗。 例如： 吸附百白破联合疫苗 麻风腮三联疫苗
7
抗毒素及免疫血清
——由特定抗原免疫的动物血清而制备
主要产品： 白喉抗毒素 破伤风抗毒素 抗狂犬病血清等
8
血液制品
——由健康人的血浆或特异免疫人血浆分 离、提纯或由重组技术制成的血浆蛋 白组分或血细胞组分制品 。 主要产品：人血白蛋白 人免疫球蛋白 人凝血因子等
2．死毒与活毒
“活毒”是制备灭活疫苗的第一阶段或减毒活疫 苗生产时，将生产用细菌或病毒株进行大规模培 养制备，其生产过程和生产场所、生产设备、器 材含有大量活的细菌或活的病毒生物体，称之为 “活毒”。
“死毒”是制备灭活疫苗时，第一阶段生产出大 量活细菌或或病毒后，到第二阶段，对活生物体 加入一定量甲醛或适宜灭活剂，将全部细菌或病 毒杀死，称之为“死毒”。
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五、生物制品GMP检查要点
保护环境和操作者 防止交叉污染，严格分区，独立空调 局部负压 尽可能一个产品、一个车间 彻底消毒和清场 严格动物使用及动物管理 环境温度
33
生物制品GMP认证检查要点
1．强毒与弱毒 “强毒”系指生物制品生产及检定用细菌株及病毒 株，其致病力强，传染性强，感染的机率高，感染 后症状较重，可危及生命健康，甚至引起传染病爆 发流行的细菌菌株及病毒株。 “弱毒”系指生物制品生产及检定用细菌株及病毒 株，经过天然或人工改造方法，去除或封闭其毒力 因子，使其致病力减弱，一般不引起感染或发病的 细菌菌株及病毒株。 强毒株与弱毒株，不允许混放在一起，其生产及检 定操作场所须严格分开，并有专用设备。 34
体内诊断制品 ——由抗原制成的用于体内诊断 疾病的试剂，如卡介苗纯蛋白衍生物（BCGPPD）、锡克试剂毒素、标记的单克隆抗体等。
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其他制品
由有关生物材料或特定方法制成的， 上述5类产品以外的生物制品，如变态 反应原、微生态制剂、重组 DNA 产品、 基因治疗产品、单克隆抗体制剂、某 些细胞治疗制剂等。
3
二、生物制品分类
按生物制品的组成和性质可分为: 疫苗（Vaccines） 抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera) 血液制品（Blood Products） 细胞因子和重组DNA产品（Cytokines and Recombinant DNA Products） 诊断制品(Diagnostic Reagents) 其他制品
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生物制品按用途分类
预防类生物制品 疫苗、类毒素、被动免疫制剂 诊断类生物制品 免疫学诊断试剂、基因诊断试剂、 生化试剂 治疗类生物制品 血液制剂、细胞因子制剂、酶和激素、 特异性抗体、非特异性免疫治疗制剂、 基因及细胞治疗制品等
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预防类生物制品
减毒活疫苗与灭活疫苗的比较 减毒活疫苗 1. 2. 3. 注射一次即可有效 接种后似自然感染， 形成完整免疫 在一定范围内疫苗病 毒可排斥野毒 1. 灭活疫苗 可多种抗原混合制成多价疫 苗 抗原性稳定 经过灭活处理不会污染其它 病原 可提纯抗原，加入佐剂增加 免疫效果 一般需注射2~3次才明显有效 一般仅产生体液免疫 抗原要求量大，制造工艺较 繁琐
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优 点
2. 3.
4.
缺 点
1. 2.
抗原不稳定，灭活即 失效 易污染其它病原
1. 2. 3.
三、生物制品的基本属性和特点
（一）
其起始材料均为生物活性物质； 生物制品生产加工全过程是生物学过程，是无 菌操作过程； 有些生物制品的生产过程是有毒或有菌的过程; 生物制品多为蛋白质或多肽类物质，分子量较 大，并具有复杂的分子结构 , 较不稳定，易失 活，易被微生物污染，易被酶解破坏。
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菌种筛选#
PCR组份１ PCR组份２
组装
PCR组份３
阳性对照*
100 000 级
隔离区
图 -６
PCR诊断试剂工艺流程及环境区域划分示意图
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PCR诊断试剂质控要点
1．应有阳性血清处理、分装的隔离操作间； 2．PCR试剂的生产区与检定区严格分开； 3．PCR引物设计要合理，引物合成要有固定 场所及专用设备；纯度达到现行国家标准； 4．DNA聚合酶活性及稳定性达现行国家标准 并有固定来源； 5．PCR检测方法要可靠，操作人员经专门培 训。
源自文库
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菌种
原核表达
接种＊
真核表达
细胞复苏 扩大培养 大罐培养 粗纯 原液 除菌过滤＊ 细胞 种子
内包材 粗 洗 精 洗 灭菌除热原
扩大培养 发 酵 粗 纯 除菌过滤
配制及除菌过滤＊
10 000 级 100 000 级
分装＊ 外包装 包装 入库
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图 -４
重组产品工艺流程及环境区域划分示意图
重组DNA产品质量控制要点
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四、生物制品的管理
生物制品国家管理6项基本职能 1．完整的疫苗和生物制品审批程序和审批标准的法规 文件； 2．审批结论要以实验和临床试验数据为依据； 3．国家质控当局对疫苗和生物制品出厂销售实行国家 批签发制度； 4．要有对疫苗和生物制品进行质量评价的法定的实验 检定机构和实验实施； 5．对生物制品生产企业实施GMP定期检查； 6．对生物制品有效性和不良反应进行上市后检测。
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细菌和病毒类疫苗质控要点
5 ．细菌类及病毒类的灭活疫苗，加入灭活剂后，必 须要做活菌或活毒试验，确保彻底灭活； 6 ．原材料、半成品及成品，应按现行《中国生物制 品规程》相关标准进行检定； 7 ．对制品的安全、效价或免疫力试验等项目检定所 用实验动物应符合清洁级； 8．从起始材料直至使用，全过程，必须无菌操作， 制品2—8℃保存； 9．生物制品生产用水均为注射用水。
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重组DNA产品质量控制要点
6．半成品及成品应按现行《中国生物制品规程》相 关标准进行检定； 7．工程菌株应进行菌落形态、革兰氏染色、抗生素 的抗性、电镜检查、生化反应、表达量、质粒酶切图谱 等检查； 8．工程细胞应进行外源因子（细菌、真菌、支原体、 病毒）检查、致病性实验、细胞鉴别试验、表达量测定 等； 9．重组DNA产品生产，必须按其生产所用工程菌株 或工程细胞株、将原核细胞系与真核细胞系彻底分离分 别进行生产。
生物制品及其质量 管理
中国药品生物制品检定所
1
主要内容
一、生物制品定义 二、生物制品种类 三、生物制品的基本属性和特点 四、生物制品的管理 五、生物制品GMP现场检查要点
2
一、生物制品定义
生物制品(Biological Products)是应用 普通的或以基因工程、细胞工程、 蛋白质工程、发酵工程等生物技术 获得的微生物、细胞及各种动物和 人源的组织和液体等生物材料制备， 用于疾病预防、治疗和诊断的药品。
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血浆
血浆合并
低温乙醇法
病毒灭活
超滤浓缩
内包材
粗 洗
精 洗
除菌过滤*
灭菌除热原
分 装*
10 000 级 100 000 级
包 装
外包材
入 库
图 -３
血液制品工艺流程及环境区域划分示意图
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血液制品质量控制要点
1．生产用具，经过严格清洗、去热原处理、灭菌处理； 2．原料血浆要经过乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、ABO定型诊 断试剂检测合格，-20℃以下保存； 3．生产工艺采用低温乙醇法分部提取各组份；工艺中应有 去除/灭活病毒工艺步骤； 4．原液、半成品、成品符合现行《中国生物制品规程》相 应标准； 5．所用血源检测和成品检测的乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等 检测的试剂均为国家批批检定试剂。
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生物制品实行国家批签发
《药品管理法实施办法》中规定，国家对 所规定的生物制品实行国家批签发制度。 国家批签发——国家药品监督管理部门授 权国家药品检定机构，对所规定的生物制品， 在出厂前或进口时，按批进行审查和签发， 凡审查或检定不合格的不允许销售或者进口。
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生物制品国家批签发分为三种类型
1．生产用工程菌株或工程细胞株要建立原始种子批、主代 种子批、生产种子批系统，定期进行质粒稳定性检查； 2．发酵用培养基应不含抗生素，生产用细胞培养液应不含 血清和抗生素； 3．发酵培养过程中应根据工艺要求控制其培养温度、pH、 溶氧、辅料及培养时间； 4．根据其工艺要求，通过初步纯化和高度纯化达到规定质 量要求； 5．重组产品的原液，应做：蛋白质含量、比活性、纯度、 效价、SDS-PAGE法、高效液相色谱法、分子量、外源性DNA 残留含量、宿主蛋白残留含量、等电点、紫外光谱肽图（至 少每年1次），N末端氨基酸序列（至少每年测一次）；
一、仅对某种制品每批的批记录摘要进行审 查，符合要求发给批签发证；
二、审查批记录摘要 ＋ 对部分批次制品进 行抽检检定、审查和检定符合要求发给批签 发证；
三、审查批记录摘要 ＋ 批批检定，审查和 批批检定符合要求发给批签发证。
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菌种筛选#
种子批的# 建立及检定
菌种接种#
扩大培养
原液保存
原液合并
杀 菌
9
细胞因子和重组DNA产品
——由健康人血细胞增值、分离、提纯或 由重组技术制成的多肽类或蛋白类制 剂。 主要产品：干扰素(IFN) 白细胞介素(IL) 集落刺激因子(CSF) 红细胞生成素 (EPO)等
10
诊断制品
体外诊断制品 ——由特定抗原、抗体或有关生 物物质制成的用于体外诊断疾病的试剂或试 剂盒，如伤寒、副伤寒等细菌的诊断菌液， 沙门氏菌属诊断血清，HBsAg诊断试剂盒等。