PCR测定临床应用和结果临床意义
PCR试验报告分析病变异趋势
PCR试验报告分析病变异趋势PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因分型、基因表达和病毒检测等领域。
通过PCR试验报告的分析，可以揭示病变的异趋势，为病理诊断和药物治疗提供可靠的依据。
一、PCR试验报告简介PCR试验报告是基于PCR技术进行特定基因序列扩增的结果，通过检测扩增产物的数量变化，可以间接了解样本中病原体的存在与否以及相关基因的表达情况。
PCR试验报告一般包括实验目的、方法、结果和结论等内容。
二、PCR试验报告分析步骤1. 实验目的PCR试验的目的是明确样本中特定基因序列的扩增情况，根据实验目的选择适当的引物和技术参数，确保实验的可靠性和准确性。
2. 实验方法PCR试验方法包括DNA提取、引物设计、试剂配制和扩增条件设置等步骤。
在实验中，需要保证操作规范，避免污染和误操作对结果的影响。
3. 结果分析根据PCR试验的结果，分析扩增产物的带型和浓度。
通过凝胶电泳等方法，可以直观地观察到扩增产物的数量和大小，从而推测样本中相关基因的表达情况以及病变的异趋势。
4. 异趋势分析根据PCR试验报告中的结果，针对病变的特定序列进行异趋势分析。
例如，若扩增产物的带型变浓、变宽或消失，可能说明该基因序列在样本中出现异常变异，与疾病相关。
根据不同疾病的病变特点，可以进一步分析异常变异背后的机制和影响。
5. 结论根据PCR试验报告的分析结果，给出相关结论。
结论应准确客观，不能过于主观或武断，应结合临床和实验观察数据进行综合判断。
三、PCR试验报告分析的意义1. 疾病诊断PCR试验报告能够快速、高效地检测病原体的存在与否，为疾病的早期诊断提供依据。
通过研究病变的异趋势，可以进一步深入分析和了解疾病的发生机制和进展规律。
2. 药物治疗指导PCR试验报告分析可以确定特定基因序列的表达情况，从而指导药物治疗的选择和剂量的调整。
尤其是对于个体化治疗和精准医疗而言，PCR试验报告的分析具有重要的指导意义。
PCR技术在医学诊断中的应用
PCR技术在医学诊断中的应用PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，已经广泛应用于医学诊断中。
它能够通过扩增、检测和分析DNA序列，从而提供对疾病的早期诊断、个体化治疗和预后判断等方面的支持。
本文将重点介绍PCR技术在医学诊断中的应用。
首先，PCR技术在传染病的早期诊断中发挥着重要作用。
在传染病的早期诊断过程中，PCR技术能够通过扩增病原体的DNA片段并进行检测，从而快速确定感染病原体是否存在。
例如，PCR可以用于检测结核分枝杆菌、流感病毒和艾滋病病毒等病原体的存在。
与传统的培养方法相比，PCR技术可以提供更快速和准确的结果，有助于早期干预和控制传染病的传播。
其次，PCR技术在遗传病的诊断中具有重要意义。
遗传病是由基因突变引起的疾病，PCR技术可以用于检测基因突变的存在和类型。
通过PCR技术，研究人员可以扩增特定基因的DNA序列，并对扩增产物进行测序和分析。
这对于确诊遗传病、筛查携带者和进行家庭遗传咨询非常有价值。
例如，PCR技术已被成功应用于囊性纤维化、遗传性乳糜泻和肌营养不良等遗传病的诊断。
此外，PCR技术在肿瘤诊断和治疗中也扮演着重要的角色。
肿瘤是由DNA序列的突变引起的疾病，PCR技术可以通过扩增和检测肿瘤相关的DNA序列来进行早期检测、分型和预后判断。
例如，PCR技术可以用于检测肿瘤相关的突变基因，如BRAF、EGFR和KRAS基因的突变。
这些基因的突变状态可以用于肿瘤的分型和预后判断，并且可以指导个体化的治疗方案的选择。
此外，PCR技术还可以用于监测肿瘤治疗的疗效和预测复发风险。
除了上述应用，PCR技术还在个体化药物治疗、遗传标记物研究和体外受精技术中发挥着重要作用。
例如，PCR技术可以用于检测药物代谢相关的基因多态性，从而指导个体化药物治疗的选择和调整。
此外，PCR技术可以用于研究遗传标记物在疾病发展和治疗过程中的作用，有助于深入理解疾病的机制和发展新的治疗方法。
此外，PCR技术在体外受精技术中可以用于检测胚胎的遗传病风险，从而保障胚胎的质量和健康。
PCR在临床检验中的应用
PCR在临床检验中的应用医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊断技术。
60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。
特别是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术热，成为现代医学发展的又一里程碑。
用于临床检验的PCR技术与经典的PCR反应在操作上稍有区别，有其自己的特色。
一般在样品处理上，多采用非离子去污剂一次加热处理，这种方法对DNA纯化有限，但适应临床微量、快速的特点。
另外PCR反应体系中各组成成份往往都预分装到反应管中，既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会，具有极高的使用价值。
本公司率先研制并推出单管单人份的PCR诊断试剂，具有开创性意义。
这些改进都不影响PCR效果，同样表现出高特异性、高敏感性、简便快捷等PCR最优秀的特征，在常见传染病、性病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等广泛领域中有相当高的实际应用价值。
常见的传染性疾病有细菌、病毒、衣原体、支原体等，可引起消化、呼吸、循环、泌尿生殖等不同系统相应的病变。
消化系统感染性疾病在我国具有代表性意义的有肝炎、胃炎及肠道感染性疾病。
引起肝炎的病原体主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它还有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。
这几种肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均为RNA病毒。
我国是乙肝高发区，乙肝病人为世界乙肝病人总数的50％。
乙肝病毒经血液传播，病毒主要在肝细胞中增殖，也可以长期存留在骨髓细胞或外周血白细胞中。
通常用PCR法检测血清中的乙肝病毒。
有报道用PCR法可以在泪液、乳汁、精液及血白细胞中检出乙肝病毒，这些发现提示其它传染途经存在的可能。
PCR法检测乙肝的优势表现在：①早期诊断，因为PCR扩增极其敏感，理论上可检出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潜伏期即可被PCR法检出。
pcr的临床意义及应用
pcr的临床意义及应用
PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，其在医学
领域中有着广泛应用。
本文将从PCR的临床意义和应用两个方面展开
探讨。
首先，PCR在临床上有着极为重要的意义。
通过PCR技术，医生
们可以快速、准确地检测出一系列疾病。
例如，在感染性疾病的诊断中，PCR可以检测出病原体（如病毒、细菌等）的存在，有利于早期
发现和治疗。
此外，PCR还可以用于遗传病的基因检测，帮助人们了
解自己的基因情况，预防患病。
因此，PCR在临床诊断中具有不可替
代的地位。
其次，PCR技术在临床应用上也非常广泛。
在疾病预防和控制方面，PCR可以用于流行病学调查、疫情监测等工作。
同时，在肿瘤的诊断
和治疗中，PCR也扮演着重要的角色。
通过检测肿瘤细胞的特定基因
突变，可以帮助医生选择最佳的治疗方案，提高治疗效果。
此外，
PCR还可以用于药物敏感性检测、免疫学研究等多个领域，为医学研
究和临床实践提供强大支持。
综上所述，PCR的临床意义和应用远不止以上所述，随着科学技术
的不断进步，PCR技术在医学领域的应用前景将会更加广阔。
PCR的
发展使得疾病的诊断和治疗变得更加精准和高效，极大地提高了人们
的生活质量，为医学事业的发展贡献力量。
PCR技术的不断完善和创新，将为医学领域带来更多惊喜和突破，值得期待。
PCR项目及临床意义
PCR检验室常规项目简介1. 乙型HBV-DNA定量HBV-DNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法间接检测的局限性,通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义：1判断疾病的严重程度和传染性.HBV-DNA是直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标.2PCR定量结果与血清免疫学结果的综合评价.采用FQ-PCR定量检测乙肝病毒DNA,结合“二对半”检测结果,对于机体乙肝病毒感染状态尤其变异株发生和病人预后的评估更为科学.3观察抗病毒药物疗效,指导药物用量.直接检测血清中的HBV-DNA是监控HBV传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法.根据2000拉米夫定临床应用指导意见,中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的之一就是要降低血清HBV-DNA.同时血清HBV-DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间是否需要联合用药以及用药的效果等提供参考.4献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断.HBsAg在血清中的检出通常在乙肝病毒感染后的2－4月出现,平均为56天左右.而HBV-DNA的检出可以将该所谓″窗口期″提前6－15天,对于早期诊断和提高输血安全有着重要的意义.5预测病情、判断预后.通常HBV-DNA持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎.抗－HBe阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝损严重.6对阻断母婴传播的监测.联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母婴传播,但仍有5-10%婴儿对疫苗呈低反应,荧光定量PCR可对此进行监测.7器官移植中的作用.肝脏器官移植是目前肝硬化晚期治疗的唯一方法,定量检测HBV-DNA为肝移植术后的跟踪观测具有较好的临床价值.乙肝病毒定量相关检测还有：乙肝标志物定性,乙肝标志物定量,乙型HBV-DNA定量,肝脏功能检测.2. 乙型HBV-DNA定性HBV-DNA是乙肝病毒基因,其有无、多少是乙肝病毒存在及有无复制能力的直接标志.早期诊断乙肝病毒感染的直接证据,提高乙肝病毒检测的阳性率,用于乙肝病毒治病机理的研究,作为乙肝病毒分子流行病学研究.乙肝病毒相关检测还有：乙肝标志物定性,乙肝标志物定量,乙型HBV-DNA定量,肝脏功能检测.3. 丙肝病毒RNA定量HCV RNA定量检测有助于预测、监测抗病毒治疗的效果,HCV 病毒核酸的定量检测在一定程度上能反应肝脏炎症活动程度,分析抗病毒治疗后HCV RNA血清水平有助于总结抗病毒制剂的疗效,为调整剂量、确定疗程提供依据.丙肝病毒相关检测还有：丙肝抗体检测,肝脏功能检测.4. 结核杆菌DNA定性根据临床表现,常规痰涂片或分离培养对某些结核病人可能造成误诊或漏诊.荧光PCR理论上可检出一个结核杆菌,特异性好,且时间短至1-2小时即可出报告.可以对结核病人早期诊断,可以鉴别诊断肺结核和肺癌.作为抗痨治疗的疗效评价；结核病的分子流行病学研究.结核杆菌的相关检测还有：结核抗体检测,ADA,结核杆菌芯片检测,抗酸染色,OT试验,PPD试验,放免分析,结核培养.5. HPV基因分型宫颈癌是人类所有癌症中唯一病因明确的癌症,即人乳头瘤病毒的感染是宫颈癌发生的必要条件和主要病因,%的宫颈癌患者都能发现高危型HPV感染,从HPV感染到宫颈癌的发生需要经过多年甚至数十年的时间,这为宫颈癌筛查指明了方向.因此早期定期进行HPV感染的筛查,对预警癌变倾向,及时发现、预防和早期诊断及临床治疗具有非常重要的意义.相关检查项目：组织原位杂交,基因芯片技术,液基细胞学试验6. 乳头瘤病毒DNA定性HPV16,18病毒DNA通常整合到人基因中,可能是宫颈癌的启动癌基因,对于妇产科的防癌普查有指导意义,而常可诱发良性湿疣或宫颈糜烂.因此,HPV的检查非常重要.相关检查项目：组织原位杂交,基因芯片技术,液基细胞学试验.7. 梅毒螺旋体DNA定性FQ-PCR检测人体不同来源标本中TP-DNA的结果,实际上是反映了梅毒螺旋体在这些部位的载量及其消长规律.梅毒血清学检查比如RPR、TPPA,是诊断各期梅毒最常用的实验室检查手段,但其阳性结果不代表体内有活的TP存在.相关检查项目：RPR、TPPA、TPHA8. 淋球菌DNA定性传统的涂片、培养等方法,灵敏度不高,女性病人检出率仅50%淋球菌感染,男性可发生尿道炎.女性可引起尿道炎及子宫颈炎.不经治疗或治疗不彻底,可致慢性感染.胎儿经产道时,可感染淋病性急性结膜炎.因此,在淋病的早期诊断,对该病有重大意义.淋球菌相关检查项目：淋球菌培养,涂片革兰氏染色,基因探针技术.9. 沙眼衣原体DNA定性非淋球菌感染的尿道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、急性输卵管炎及盆腔炎,有超过50%是由沙眼衣原体感染所致,同时可引起不孕不育.因此,在妇产科和男性生殖泌尿科,同时检测UU 和CT很有必要.可致沙眼、成人和新生儿包涵体结膜炎.沙眼衣原体相关检查项目：细胞培养,免疫荧光法,沙眼衣原体抗体检测.10. 解脲支原体DNA定性解脲支原体在非淋球菌性尿道炎中,有50%是由本病引起的.如果孕妇生殖道带有解脲支原体,可通过胎盘感染胎儿引起早产、死胎,分娩时可引起新生儿呼吸道感染.另外还可导致不孕不育.因此,妇产科普查解脲支原体有很重要的意义.相关检查项目：解脲支原体培养,解脲支原体抗体,生长抑制试验,代谢抑制试验.11. EB病毒DNA定性EB病毒属于疱疹病毒,可引起增殖性感染和非增殖性感染.特别是非增殖性感染,可导致细胞癌变.被认为与传染性单核细胞增多症.淋巴癌、胃咽癌、何杰金氏癌、慢性疲劳综合症有关.相关检查项目：EB病毒特异性抗体或异嗜性抗体凝集试验.12. 单纯疱疹病毒DNA定性HSV-1型：主要侵犯口、唇的皮肤黏膜,可引起脑炎,偶尔可见于外生殖系统.HSV-2型：一般与外生殖系感染和新生儿感染有关.可引起脏器的病变包括脑炎偶见于口腔病变.相关检查项目：单纯疱疹病毒抗体检测.13. 肺炎支原体DNA定性肺炎支原体是原发性非典型肺炎和急性呼吸道感染的病原体,尤其是儿童和青少年中常见.常在军营和中小学生中流行.每隔3-5年流行一次.许多患者症状较轻,只有头疼、发热、咳嗽等呼吸道症状,也有个别引起死亡的报道.有时合并中耳炎、心血管、神经症状和皮疹.肺炎支原体感染是在治疗上与其它微生物感染是治疗不尽相同,为避免滥用抗生素,应早期、快速、准确的检测肺炎支原体.相关检查项目：肺炎支原体抗体检测；补体结合试验；肺炎支原体培养.14. 幽门螺旋杆菌DNA定性幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织MALT 淋巴瘤和胃癌的主要致病因素.1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构WHO/IARC 将幽门螺杆菌定为Ⅰ类致癌原.现在PCR可通过鼻胃管收集5ml胃液作PCR 检测.采用胶囊包裹的尼龙线取胃液标本的方法,使这一诊断性试验的侵入性更小.相关检查项目：C13/C14呼吸法；血清学检验.15. 肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型RNA定性这两个病原体是引起手足口病的主要病原体.而手足口病多发生于5岁以下儿童,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症.个别重症患儿如果病情发展快,导致死亡.。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术，可以用于检测病毒感染。
人巨细胞病毒（HCMV）是一种广泛存在于人群中的病毒，它可以引起免疫功能低下人群的严重感染。
本文将通过对实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义进行分析，以期探讨该技术在临床诊断和治疗中的应用前景。
一、HCMV感染与临床疾病HCMV感染是一种全球性分布的病毒性感染，通常对健康人群并不产生严重影响，但对于免疫功能低下的人群，特别是器官移植受者、艾滋病患者和先天免疫缺陷患者等，HCMV感染可能导致严重并发症，如肺炎、肝炎、胃肠道炎症等。
HCMV还是新生儿感染的主要致病因子之一，导致新生儿先天性HCMV感染，可能引发先天性畸形和神经系统损伤。
二、实时荧光定量PCR检测HCMV感染1. 技术原理实时荧光定量PCR是一种核酸扩增技术，它结合了PCR扩增和荧光探针技术，能够实现对靶基因数量的准确计数。
在进行PCR扩增的荧光探针与靶基因结合，产生特定的荧光信号，通过荧光信号的强度可以定量检测靶基因的数量。
实时荧光定量PCR具有高灵敏度、高准确性和高特异性的特点，能够快速准确地检测HCMV感染。
2. 临床应用实时荧光定量PCR检测HCMV感染已被广泛应用于临床诊断和监测。
在器官移植术后感染HCMV的患者中，通过定期对血液或组织样本进行实时荧光定量PCR检测，可以及时发现HCMV感染的情况，以便早期干预治疗。
对于新生儿先天性HCMV感染的诊断，实时荧光定量PCR也具有高度的准确性和可靠性，有助于早期发现感染，进行及时治疗。
1. 提高诊断准确性传统的HCMV感染诊断方法包括病毒培养、免疫组化检测和血清学检测等，这些方法存在着时间长、操作复杂、准确性低等缺点。
而实时荧光定量PCR检测HCMV感染具有高灵敏度、高特异性和高准确性的特点，能够在短时间内对HCMV感染进行快速、准确的诊断，有助于提高诊断准确性。
实时荧光定量PCR检测临床上的运用与意义
实时荧光定量PCR检测临床上的运用与意义叶明奇（厦门安普利生物工程有限公司，福建厦门 343，技术工程部）【摘要】目的分析临床使用实时荧光定量PCR法在临床检测的各个项目情况，并探讨实时荧光定量PCR法的临床意义。
主要介绍核酸DNA或RNA的提取、实时荧光定量 PCR技术以及实时荧光定量PCR方法临床运用的意义：乙型肝炎病毒核酸实时荧光定量ＰＣＲ检测在临床诊断中的应用、实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床应用、实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的临床应用、实时荧光定量PCR检测HPV病毒的临床运用、泌尿生殖道感染沙眼衣原体的临床应用、传染性疾病检测临床应用、测胰腺癌中HIF1α、VEGF 和bFGF 的表达及其临床意义、绵羊肺腺瘤病毒检测、胃癌淋巴结微转移敏感且特异的方法，实时荧光定量PCR法在临床检测的运用在临床分期、判断预后以及治疗方案选择具有重要意义。
【关键词】实时荧光定量PCR；乙型肝炎；丙型肝炎；传染性疾病；HPV；MTB；[Abstract]Objective using real-time fluorescence quantitative PCR method in clinical detection of each project, and to explore the clinical significance of real-time fluorescent quantitative PCR method.Mainly introduces the nucleic acid extraction of DNA or RNA, real-time fluorescent quantitative PCR and real-time fluorescence quantitative PCR method for clinical application significance: hepatitis B virus DNA by real-time fluorescent quantitative PCR assay application in clinical diagnosis, real-time fluorescent PCR detection of hepatitis C virus nucleic acid and its clinical application, the real-time fluorescence quantitative PCR assay in the detection of Mycobacterium tuberculosis DNA in plasma clinical application, real-time fluorescence quantitative PCR detection of HPV virus, the clinical application of urogenital Chlamydia trachomatis infection in the clinical application of infectious diseases, clinical application, measured in pancreatic cancer HIF1 α, VEGF and bFGF expression and its clinical significance, sheep pulmonary adenomatosis virus detection of lymph node micrometastasis, sensitive and specific method, real-time fluorescence quantitative PCR method applied in clinical detection in clinical staging, prognosis and treatment options have important significance.[keyword]real-time fluorescence quantitative PCR; hepatitis B; hepatitis C virus; infectious diseases; HPV; MTB;PCR法最初由Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。
PCR检测技术及临床应用
RNA的抽提 匀浆化作用 分离阶段 操 作 步 骤 RNA的沉淀
RNA的洗脱 RNA的再溶解
测RNA的纯度
制备cDNA
PCR扩增
cDNA电泳
防止RNA酶污染的措施
1、 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的 高温下干烤6hr或更长时间。 2、 塑料器皿可用0.1% DEPC(二乙基焦磷酰 胺)水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃 器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。 3、 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗 涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% 双氧水室温10min，然后用0.1% DEPC水冲 洗，晾干。
RT-PCR的应用
分析基因的转录产物 获取目的基因 合成cDNA探针 构建RNA高效转录系统
四、荧光定量PCR
实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术于1996年由美 国Applied Biosystems公司推出，由于该技 术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而 且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有 效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点， 目前已得到广泛应用。
荧光探针和荧光染料
TaqMan荧光探针：PCR扩增时，Taq酶 的5‘-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告 荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监 测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧 光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
PCR的基本原理
PCR反应中，当引物-模板与DNA聚合 酶达到一定比值时，DNA聚合酶催化的反应 趋于饱和，出现“平台效应”，即PCR反应 产物不再增加。
这主要取决于起始模板的拷贝数、所 用的DNA聚合酶的性能及底物dNTP的浓度 等。
标准的PCR反应体系
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析1. 引言1.1 背景介绍人巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus，HCMV）是一种广泛存在于人类群体中的病原体，属于疱疹病毒科。
HCMV感染在全球范围内具有高发病率，尤其是在免疫功能受损的个体中，如艾滋病毒感染者、器官移植患者和新生儿等。
HCMV感染对人类健康造成了一定的威胁，容易引起各种严重疾病，包括肺炎、胃肠道炎、感染性单核细胞增多症等。
实时荧光定量PCR技术是一种高灵敏、高特异、快速、准确的核酸检测技术，已被广泛用于病原体的检测和定量。
在HCMV感染的检测中，实时荧光定量PCR技术具有极大的优势，能够快速准确地检测出病毒的存在和数量，为临床诊断和治疗提供了重要依据。
本文将对实时荧光定量PCR技术进行介绍，探讨HCMV感染及其危害，分析实时荧光定量PCR在HCMV感染检测中的应用，进一步探讨其临床意义，并对检测结果进行解读，以期为临床诊疗提供科学依据和参考。
1.2 研究目的研究目的是探讨实时荧光定量PCR技术在检测人巨细胞病毒感染中的应用及临床意义，为临床诊断和治疗提供可靠依据。
具体目的包括：1.了解实时荧光定量PCR技术的原理和方法，探讨其在人巨细胞病毒感染检测中的优势和局限性。
2.分析人巨细胞病毒感染的病原学特点及危害，探讨实时荧光定量PCR在早期诊断和治疗中的应用潜力。
3.总结实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义，探讨其在指导临床决策、评估疗效和预后预测方面的作用。
4.通过对检测结果的解读，分析实时荧光定量PCR在人巨细胞病毒感染监测中的可靠性，并提出进一步研究的展望和建议。
通过本研究，旨在为临床医生提供更准确、快速和可靠的人巨细胞病毒感染检测方法，为患者的诊断和治疗提供更好的支持。
2. 正文2.1 实时荧光定量PCR技术介绍实时荧光定量PCR是一种高度灵敏和特异性的分子生物学技术，可用于快速、准确地检测目标DNA或RNA序列的数量。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析一、HCMV感染的临床表现HCMV感染可引起多种疾病，其临床表现也因感染对象的不同而有所差异。
在免疫功能正常的成年人中，HCMV感染多数为无症状性感染，或者出现轻微的上呼吸道症状，如咽痛、发热、乏力等。
而在免疫功能受损的个体中（如艾滋病毒感染者、器官移植受者、白血病患者等），HCMV感染往往表现为严重的疾病，如肺炎、肝炎、肾炎、视网膜炎等。
在早产儿、新生儿及婴幼儿中，HCMV感染可引起一系列疾病，如先天性脑损伤、听力损害、智力障碍等。
对于需要接受免疫抑制治疗的患者、器官移植受者以及新生儿等特殊人群，及时准确地检测HCMV感染显得尤为重要。
二、实时荧光定量PCR检测HCMV感染的临床意义1. 早期诊断和治疗指导实时荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、快速准确的特点，可以在早期发现HCMV感染，帮助医生尽早进行诊断和治疗。
特别是对于接受器官移植、免疫抑制治疗的患者，因其免疫功能较低，一旦出现HCMV感染，往往病情进展较快。
实时荧光定量PCR技术可以在感染初期迅速发现病毒载量的增加，有助于医生及时调整治疗方案，提高治疗的效果。
2. 监测疗效和预后评估对于HCMV感染的患者，实时荧光定量PCR技术可以帮助监测治疗效果，及时评估感染的严重程度和预后情况。
通过定期检测病毒载量的变化，医生可以科学地调整治疗方案，判断治疗的效果和预后情况，有助于及时采取有效措施，提高患者的临床治疗效果。
3. 防控传播和预防感染及时准确地检测HCMV感染，有助于医院和社区进行传染病防控工作。
特别是在儿科医院和新生儿保健机构，实时荧光定量PCR技术可以帮助医生及时发现HCMV感染的患者，采取有效的隔离和预防措施，防止感染在人群中的传播。
尽管实时荧光定量PCR技术具有快速、准确、灵敏的特点，但其在检测HCMV感染时也存在一些局限性。
实时荧光定量PCR技术需要高度训练的技术人员进行操作，对实验室条件有一定的要求，可能会增加检测成本。
结核杆菌基因检测(PCR)
结核杆菌基因检测（PCR）
结核杆菌基因检测（PCR）介绍：
结核分枝杆菌在体外培养周期长，阳性检出率不高，因此对临床的早期诊断和确定药物治疗都带来一定的困难，应用聚合酶链反应(PC R)技术检测结核分枝杆菌，能大大提供结核分枝杆菌的检出率和检出特异性，有利于临床即使治疗。
标本采自患者的痰、支气管分泌物、脑脊液、心包积液、胸腔积液、胸腹水等。
结核杆菌基因检测（PCR）正常值：
阴性。
结核杆菌基因检测（PCR）临床意义：
异常结果：
阳性：见于各种结核病。
需要检测的人群：
发热，盗汗，咳嗽，咳痰，胸痛，咯血的人群
结核杆菌基因检测（PCR）注意事项：
检查时：配合医生进行检测
检查后：
若检测结果阳性，应该立即就医，由医生判断是否得进行隔离或者其他医疗措施。
不适宜人群:没有
结核杆菌基因检测（PCR）检查过程：
应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分枝杆菌。
基因突变分析技术及其临床意义
基因突变分析技术及其临床意义基因突变是指DNA序列中发生的错误或变异，可以分为两种类型：基因突变和染色体突变。
随着科技的进步，各种基因突变分析技术不断涌现，并在临床中发挥着重要的作用。
本文将介绍几种常见的基因突变分析技术，并探讨其在临床中的意义。
首先，聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是一种常用的基因突变分析技术。
PCR可以扩增特定的DNA区域，使其在实验室中产生大量复制的DNA片段。
PCR可以用于特定基因突变的检测和定量PCR可以用于检测某个基因的拷贝数变化。
这些突变检测结果可以帮助科研人员和医生了解基因突变与遗传疾病的关系，并为治疗和预防提供依据。
其次，新一代测序（next generation sequencing, NGS）技术是近年来发展迅猛的基因突变分析技术。
与传统测序技术相比，NGS技术具有高通量、高灵敏度和高准确性的特点。
NGS技术的应用使突变的检测更加高效和可靠，同时也降低了检测成本。
NGS可以用于对整个基因组的突变进行分析，探索基因突变与疾病之间的关系。
此外，NGS技术还可以对肿瘤样本进行测序，帮助医生确定个体的肿瘤突变谱，从而为个性化治疗提供参考。
另外，比较基因组学是一种比较不同个体基因组序列的方法，可以揭示不同物种或个体之间的基因差异。
比较基因组学的突变分析可以帮助科研人员研究种属间的进化关系，也可以帮助医生识别有风险的基因突变。
例如，通过比较基因组学分析，科学家们发现一些特定的基因突变与乳腺癌、卵巢癌等遗传性疾病有关。
这些研究对于早期发现患者的遗传病风险，进行家族病史风险评估以及成人遗传咨询等方面具有重要的临床意义。
此外，单细胞测序是一种新兴的基因突变分析技术，可以对单个细胞的基因组进行测序研究。
传统的测序技术受限于细胞样品的数量和杂质，无法获得单细胞的具体信息。
而单细胞测序技术可以提供细胞间的异质性资料，从而帮助研究人员探索细胞类型的多样性和发展动态，对早期疾病的发现和诊断起到重要的作用。
PCR检测的临床应用
[临床应用]检验科基因诊断室近日引进了德国罗氏的全自动荧光定量分析仪（Lighter Cycler）,并在近期内申请国家标准的PCR室。
由于PCR技术具有高灵敏度、高特异性、快速简便及直接检测致病病原体或异常基因等特点，成为基因诊断在临床应用最为广泛的技术之一。
在90年代，PCR技术在我国临床诊断曾得到广泛应用，但由于PCR产品生产产家的良莠不齐，PCR技术本身的特点对于实验条件提出特殊的要求，造成各种假阴性或假阳性结果，反而给临床诊断带来困难和错误。
目前荧光PCR的兴起以及标准试验室的认证为PCR的应用显示出更为光明的前景。
一、早期诊断:免疫学诊断主要是抗原抗体反应，应用于临床通常在体内产生抗体以后，许多病原体的抗体产生存在较长的“窗口期”，不利于对疾病的早期诊断；而PCR方法直接检测病原体的DNA/RNA，能大大缩短“窗口期”。
以HCV为例，免疫学检测的“窗口期”平均长达70天，而荧光PCR可将“窗口期”缩短59天，显然有利于疾病的早期诊断。
二、药物疗效观察：对原体的药物治疗中，免疫学指标的变化通常比较滞后出现，且受个体差异影响较大，从而对临床判断难以及时提供直接证据；而荧光定量PCR检测可直接反映病原体滴度是否受药物治疗发生变化，从而为药物疗效观察提供直接依据，以供治疗方案参考；同时药物治疗中可能引起的基因变异等情况更依赖核酸检测提供直接证据。
三、病情判断和预后评价：评估受侵器官或组织的炎症发生程度以及是否发生病变；长时间机体病毒高水平的患者尤其是慢性病患者往往预后不好。
因此对病原体的定量PCR检测对病情和预后评估均有参考意义。
四、加快疾病的诊断：许多病原体到目前为止仍旧依靠传统的细菌培养作为诊断手段，操作繁琐费时。
以结核杆菌为例，传统培养法需要1-2个月，而荧光PCR可将检测时间缩短至半天，能更及时地为临床提供诊断依据。
五、疾病的发病监控：许多病原体可以感染人体后整合入细胞内成为整合型，而一旦机体免疫力下降等又重新进入活动期并引致发病，临床上希望通过检测病原体基因的数量变化并结合临床表现找出其活动以及是否引起发病的规律，荧光定量PCR可以为此提供直接证据。
简述pcr技术及临床应用
简述pcr技术及临床应用
PCR 技术主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
在变性步骤中，双链 DNA 被加热至高温，分离成两条单链；在退火步骤中，引物与单链 DNA 结合，形成局部双链；在延伸步骤中，DNA 聚合酶以单链 DNA 为模板，沿着 5'到 3'方向合成新的 DNA 链。
PCR 技术具有高度的特异性、敏感性和快速性，因此在临床上有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：
1. 疾病诊断：PCR 技术可用于检测病原体的 DNA 或 RNA，如病毒、细菌、真菌等，从而帮助诊断感染性疾病。
2. 遗传疾病检测：PCR 技术可用于检测基因突变、缺失、重复等，有助于遗传疾病的诊断和筛查。
3. 肿瘤诊断和治疗：PCR 技术可用于检测肿瘤相关基因的突变、表达水平等，为肿瘤的诊断和治疗提供依据。
4. 法医鉴定：PCR 技术可用于个体识别、亲子鉴定等法医领域。
总之，PCR 技术作为一种重要的分子生物学技术，在临床诊断、疾病监测、基因治疗等方面发挥着重要作用。
随着技术的不断发展和完善，PCR 技术的应用前景将更加广阔。
PCR方法在基因分析中的重要意义和应用
PCR方法在基因分析中的重要意义和应用PCR（聚合酶链式反应）是一种基于DNA复制机制的体外DNA扩增技术，被广泛应用于基因分析领域。
PCR方法的发展为基因分析提供了高效、快速和精确的手段，对于了解基因功能、诊断疾病、研究进化以及推动个体化医学等方面具有重要意义。
PCR方法的重要意义体现在以下几个方面：1. 高度灵敏性：PCR方法能够在体外扩增极小数量的DNA，甚至是单个DNA分子。
这种高度灵敏的特性使得PCR方法在基因分析中能够检测到微量的目标DNA，例如病原体的核酸、疾病相关基因突变等。
对于一些低频突变的检测和研究，PCR方法是不可或缺的工具。
2. 特异性：PCR方法通过引物的设计可以选择性地扩增目标DNA序列。
通过合理选择引物的序列和温度条件，可以避免非特异性扩增，从而确保扩增产物的准确性和特异性。
这种特异性使得PCR方法在基因分析中能够区分目标基因和非目标基因，避免干扰信号的干扰。
3. 高度可靠性：PCR方法的结果是可重复的，这意味着研究者能够在不同实验室、不同时间点对同一样本进行PCR分析，结果应该是一致的。
这种高度可靠性使得PCR方法成为许多基因分析领域的金标准，例如基因突变检测、基因表达分析等。
PCR方法在基因分析中的应用远远不止于此，下面将介绍几个PCR方法的典型应用：1. 基因突变检测：PCR方法可以通过扩增目标基因的特定区域，然后使用各种方法进行突变检测，例如限制性片段长度多态性（RFLP）、单碱基扩增聚合酶链反应（PCR-RFLP）、聚合酶链式反应-限制片段长度多态性（PCR-SSCP）等。
这些方法能够快速、准确地检测基因突变，为临床诊断和基因遗传病的筛查提供重要依据。
2. 基因表达分析：PCR方法可以用于定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）来研究基因的表达水平。
通过逆转录转录为cDNA，然后使用引物特异性地扩增目标基因，可以快速测量目标基因在样本中的表达量，并分析其在不同条件下的变化。
PCR测定的临床应用及测定结果的临床意义烟台毓璜顶医院寇新明
的α珠蛋白基因簇的三种大片段缺失所致，另外有2种 点突变。在缺失断点两侧设计三个引物，可直接检出缺 失并区分杂合子与纯合子。对于二种点突变基因，采用 PCR技术结合检测点突变的技术就可检测。
第三章 PCR在遗传病基因检测中的应用
第一章 PCR在病原体基因检测中的应用 结核分枝杆菌
2 基因检测的应用
(1) MPB64蛋白基因：以检测是否存在240bp的特异 性片段。
(2) 重复序列IS986基因：结核菌的模板较少，可采 用巢式PCR。缺点是需经两次扩增，容易产生假阳 性。
(3) 重复序列IS6110基因：原位聚合酶链。血标本 中，可见红细胞和淋巴细胞周围粘附着大量的结 核杆菌DNA阳性颗粒。
HLA理想配型的供者尤其是DR位点的相配，可提高 5年以上存活率10%-30%，明显减少1年内急性排斥反响 的发生。
第一章 PCR在病原体基因检测中的应用 第二章 PCR在移植配型中的应用 第三章 PCR在遗传病基因检测中的应用 第四章 PCR在肿瘤研究中的应用 第五章临床应用评价应注意的共同问题 第六章定量PCR测定技术及其临床应用 第七章 PCR技术在其它方面的应用
结核分枝杆菌 HBV DNA HCV RNA 沙眼衣原体
HCV RNA
第一章 PCR在病原体基因检测中的应用
用ELISA技术检测HCV抗体临床上急性期HCV感染的检出 率只有60%。
PCR技术可在极低病毒含量的标本中检测到HCV基因的特 异性片段，且能动态反映病毒的复制状态。
HCV RNA
感度高但试剂贵。
第一章 PCR在病原体基因检测中的应用 沙眼衣原体
2 要注意问题 取材一定要取到细胞，分泌物或尿沉渣检出阳性率均较低。 3 临床应用评价 (1)培养观察活细胞内的包涵体，是诊断“金标准〞。 (2) “金标准〞 多用于科研。 (3)常规检测方法不理想。 (4)分子生物学方法抑制以上缺点。 (5)有假阳性和假阴性。
定量和半定量PCR技术及其临床意义
定量和半定量PCR技术及其临床意义张 捷(北京医科大学第三医院检验科,北京 100083)1 半定量和定量PCR及定量核酸的方法1.1 内对照法将已知的目的DNA及内对照DNA混合,加入两对引物同时进行PCR扩增,最后将PCR产物转膜,用特异性探针杂交,目的DNA扩增后的量通过系列稀释后与内对照的相对量进行比较即可确定[1]。
1.2 PCR杂交法(PCR2Hyb法)合成的引物5′端连有生物素,所带有生物素的PCR产物一端可与标有辣根过氧化物酶的亲合素结合。
另一端与酶标板上包被的特异性探针杂交。
然后加入底物显色,呈色的程度与PCR产物浓度呈正比。
1.3 分枝DNA法(b2DNA法[2])两种特异性探针与待测的RNA杂交,其中一种探针的另一端与酶标板上的探针杂交。
另一种探针的另一端与分枝DNA杂交,分枝DNA的另一端再与放入的酶标记的探针杂交。
最后放入化学发光底物,底物在酶的作用下,产生光的强度与待测DNA或RNA浓度成正比。
此方法有放大和定量的作用。
1.4 PCR2杂交定量的荧光检测PCR产物通过两个标有荧光团的探针进行杂交后,首先给第一个荧光团激发光,使它的发射光去激发第二个荧光团,荧光检测仪检测第二个荧光团发出的发射光来计算PCR 产物。
此方法的特异性很高。
1.5 连续荧光检测PCR产物在进行PCR扩增的同时,荧光染料SY BP R GreenⅠ结合到双链DNA产物上,在一定温度下,连续监测荧光发射的最高峰,则可计算出PCR产物的量。
1.6 5′核酸酶分析(荧光定量PCR)探针的5′端标有荧光团,3′端标有淬灭团。
荧光团与淬灭团在一定距离内,淬灭团控制荧光团的发光。
此探针杂交在待测的DNA上,然后放引物进行PCR扩增,当引物延伸到探针的5′端,切断探针5′端的荧光团,淬灭团失去控制荧光团的作用,则荧光团发出荧光。
连续检测荧光的强度与待测的DNA浓度呈正比。
2 PCR技术检测病原微生物的临床意义 如果原有检测技术的灵敏度和特异性基本上已达到临床需要,则不必一律采用PCR技术。
荧光定量PCR法在产前筛查B族链球菌感染中的临床应用价值和意义
论著·临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS 中国社区医师2018年第34卷第27期B 族链球菌是一类位于人体阴道和下消化道内的致病菌，该病原菌可能会感染胎儿，导致胎儿窘迫、败血症等疾病[1]，严重影响孕妇和胎儿的健康。
孕妇阴道内B 族链球菌的感染率约10%～30%，因此开展产前筛查具有重要的临床意义。
临床通常将基因测序作为B族链球菌诊断的金标准，但该方法目前无法普及，对设备和检测技术的要求较高[2]，因此本文分析荧光定量PCR 法和细菌培养在产前筛查B 族链球菌感染检测中的作用，现报告如下。
资料与方法选取接受产前筛查的孕妇1500例，纳入标准：①采集标本1周内没有应用抗生素类药物者；②孕周均34～37周。
方法：采集研究对象的阴道分泌物标本，每例孕妇均采集3份，并在48h 内应用不同检测方法诊断B 族链球菌感染。
细菌培养法：该方法具体是将标本在特定的培养基上涂匀接种，并将培养基置于37℃、5%CO 2无菌条件下培养24h，按照培养后菌落的形态、染色、CAMP 等方法给予菌种鉴别。
荧光定量PCR 法：该方法具体是将1mL 缓冲液加入标本并震荡，离心取下层沉淀并加入缓冲液再次离心，将下层沉淀重悬后添加核酸提取剂，破碎细胞后置于100℃条件下10min，离心提取上清液备用，然后依仪器说明书实施PCR 扩增反应操作。
试剂盒来自于北京博尔诚有限公司，荧光PCR 型号为ABI7500。
感染阳性评价标准为荧光信号曲线呈S 形，且CT 指标＜36。
基因测序：标本送第三方检验中心检测。
观察指标：以基因测序作为金标准，比较细菌培养和荧光PCR 法在筛查B 族链球菌感染的准确度、敏感度和特异性。
统计学分析：数据均使用统计学软件SPSS 22.0分析，计数资料以%的形式描述，组间比较采用χ2检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。
结果荧光PCR 法和细菌培养检出B 族链球菌感染的阳性率差异有统计学意义(P ＜0.05)，前者阳性率25.0%(390例)，后者阳性率13.3%(200例)；荧光PCR法检出B 族链球菌感染的准确度、敏感度和特异性均明显高于细菌培养(P ＜0.05)，见表1。
早期诊断肺结核进行PCR检验的准确性与临床意义
早期诊断肺结核进行 PCR检验的准确性与临床意义【摘要】目的：观察分析早期诊断肺结核（pulmonary tuberculosis,PT）进行PCR检验的准确性与临床意义。
方法：将2018年5月至2020年10月我院接收的88例疑似肺结核病人进行研究，所有患者均给予传统的痰涂片检测与PCR 检测，根据检测方式的不同对检测结果进行分组，将其分为实验组和参照组，每组均为88例。
参照组检验方式选择传统的常规痰涂片检测，实验组则是采用PCR 检验进行检测，比较两组检验方式的灵敏度与特异度以及准确率。
结果：实验组检测方式的灵敏度与特异性显著优于参照组，差异较大（P＜0.05）；且实验组检测方式的准确率也优于参照组,差异较大（P＜0.05）。
结论：PCR检验方式用于早期诊断肺结核的诊断中可以显著提升对于诊断的准确性，能够更为及时的发现患者的情况，为早期治疗争取了宝贵的时间，值得临床推广。
【关键词】早期诊断；肺结核；PCR；准确性肺结核是一种在临床上极为常见的传染性慢性疾病，同时该病也是当下我国重点传染病预防与控制的一种疾病。
该病在临床上一般症状为咳嗽、气喘、乏力、发热等，患病早期一般不会对患者的自然活动造成严重损害，所以患者不易察觉，但是该病是一种传染性极大的慢性传染疾病（Chronic infectious diseases，CID），并且该病在逐步进展的时候会对肺部造成即为严重的影响，若是不能及时进行治疗，则会造成肺部的不可逆的纤维化，最终造成死亡。
基于此PT越早的得到确诊，治疗效果也就越好，对人体的危害也就越低[1]。
同时因为更早的发现，意味着更早的阻断传染源，这对于我国的CID的防治是有着极为重要的意义。
一般来说肺结核在近些年的发病率一直是一种较低的势态，这是得益于我国优秀的CID预防控制政策[2]。
但是正是因为这种优秀的势态导致现在对于肺结核检验技术并不为医学界所关注，不少地方仍然采用传统的痰涂片进行检测，为提升对于PT检验的效果，我院现就使用PCR诊断PT与传统痰涂片的诊断作出对比研究，发现PCR在诊断PT上具有极为显著的优势，现报告如下。
pcr技术的意义
pcr技术的意义PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一项重要的分子生物学技术，通过模拟DNA复制过程，能够高效、快速地扩增特定的DNA片段。
自从PCR技术的发明以来，它广泛应用于医学、生物学、法医学、环境科学等领域，具有重要的意义和价值。
一、PCR技术在医学领域的意义PCR技术在医学领域被广泛应用，它能够检测和诊断出很多传染病、遗传病和肿瘤等疾病。
例如，在感染性疾病的检测中，PCR技术可以快速准确地检测出病原体的存在，为及时采取措施提供了依据。
在遗传病诊断中，PCR技术能够检测出基因突变，帮助医生准确诊断病症，并为患者提供个体化治疗方案。
二、PCR技术在生物学研究中的意义PCR技术在生物学研究中起到了举足轻重的作用。
它可以从极少数量的DNA样本中扩增出大量目标DNA片段，使得研究人员可以更深入地了解生物体的基因组结构、功能和遗传变异。
PCR技术在基因工程、基因测序、基因突变分析等方面的应用都取得了重要的突破，推动了这些领域的发展。
三、PCR技术在法医学中的意义PCR技术在法医学中的应用具有重要的意义。
利用PCR技术，可以从微量DNA样本中迅速扩增出足够多的DNA片段，用于刑事犯罪的DNA鉴定和匹配。
这对于破案和司法公正起到了至关重要的作用。
同时，PCR技术还可以用于亲子鉴定、酒驾检测等领域，为社会公共安全提供了技术支持。
四、PCR技术在环境科学中的意义PCR技术在环境科学中的应用也日益重要。
通过PCR技术，可以检测和监测环境中微生物的多样性和种群结构，研究其对环境的适应性和生态功能。
此外，PCR技术还可以应用于环境污染物的检测和监测，提供了更快速、准确的方法，为环境保护和治理提供了科学依据。
总结起来，PCR技术的意义非常重大。
它在医学、生物学、法医学和环境科学等领域的广泛应用，为人们提供了更加准确、快速的检测方法，推动了这些领域的进步。
随着技术的不断发展和完善，相信PCR技术在更多领域将发挥更大的作用，为科学研究和人类福祉做出更多贡献。
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临床评价
•细胞培养 McCoy. Hela-229金标准
• ELA法 • PCR法.专家希望此法为新金标
• HBV-DNA
.
实验设计特点
• S及C混合引物
• 定量用治疗监测
104 , 106
临床评价
一 般临床靠免疫标志 但无法明确时可测
拉米呋定及干扰素治疗监测
新问题研究
• HCV-RNA
实验室设计特点
阳性率与“金标准”
不能单向强调PCR的优势和检出率应 与传统方法比对,合理判断
临床实践是判断PCR结果最重要的依据
临床实践是检验实验室工作的标准 重视从临床实践找出问题和评价
b. TB特异性核酸片段克隆
c. 插入序列
举例 65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123b
p;IS986,245bp; 16sDNA,584bp.
注意事项 • 标本处理 ：痰液化，抑制物去除
• 试剂质控及灵敏度
临床评价 •结核的PCR临床主要应用
a.结核与其他分枝杆菌区分
PCR测定临床应用及结果临床意义
北京大学人民医院 张正 100044
概述
临床PCR检测三条件
• SDA批准使用的试剂盒 •国家批准符合要求的实验室
•经行政部门同意并培训后持证上岗
关于结核杆菌等5项检测的
具体应用
• 结核分枝杆菌(TB)
实验设计特点
靶序列来源: a. 单抗检出的TB抗原旦白编码基因
b.结核耐药基因
c.对含菌量低的标本的分离
d.为临床可疑者捕捉信息
临床评价 • PCR方法与痰涂片及TB培养的比较
应做比对研究
• 沙眼衣原体(Ct)
实验设计特点
靶及引物选择
•外膜蛋白基因(MOMP-OMPI) • 7.5kb质粒 隐蔽性基因项
标本取材是关键
• 需扩增二次
• 低温启动UDG系统--RNA不稳定性
注意事项
防止RNase污染
杜绝溶血
临床评估
• 定性用于诊断(只有抗HCV无法
决定病毒存在状况） • 定量用于治疗监测
• HLA
方法:免疫学
分子生物学 ： PCR SSCP RFLP 基因芯片
I 类(A,B,C) 与疾病发生频率有关 II 类(DR,DQ,DP) 等 移植配型
DR为例
设计10条特异性引物:DR1-DR10
设计2条组特异性引物:3568,DRB1
选择其中某些组合成上,下游引物
据bp数推算等位基因
局限性:
DR6用排它法
有6种表型(DR3/DR3, DR8/DR6等)不能区分
临床评价中共同问题
假阳性与假阴性
•假阳:残余模板的污染 其它
•假阴:标本处理不当 其它