PCR测定临床应用和结果临床意义

b. TB特异性核酸片段克隆
c. 插入序列
举例 65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123b
p;IS986,245bp; 16sDNA,584bp.
注意事项 • 标本处理 ：痰液化，抑制物去除
• 试剂质控及灵敏度
临床评价 •结核的PCR临床主要应用
a.结核与其他分枝杆菌区分
• 需扩增二次
• 低温启动UDG系统--RNA不稳定性
注意事项
防止RNase污染
杜绝溶血
临床评估
• 定性用于诊断(只有抗HCV无法
决定病毒存在状况） • 定量用于治疗监测
• HLA
方法:免疫学
分子生物学 ： PCR SSCP RFLP 基因芯片
I 类(A,B,C) 与疾病发生频率有关 II 类(DR,DQ,DP) 等 移植配型
阳性率与“金标准”
不能单向强调PCR的优势和检出率应 与传统方法比对,合理判断
临床实践是判断PCR结果最重要的依据
临床实践是检验实验室工作的标准 重视从临床实践找出问题和评价
b.结核耐药基因
c.对含菌量低的标本的分离
d.为临床可疑者捕捉信息
临床评价 • PCR方法与痰涂片及TB培养的比较
应做比对研究
• 沙眼衣原体(Ct)
实验设计特点
靶及引物选择
•外膜蛋白基因(MOMP-OMPI) • 7.5kb质粒 隐蔽性基因质粒拷贝 • 16srRNA基因
注意事项
标本取材是关键
DR为例
设计10条特异性引物:DR1-DR10
设计2条组特异性引物:3568,DRB1
选择其中某些组合成上,下游引物
据bp数推算等位基因
局限性:
DR6用排它法
有6种表型(DR3/DR3, DR8/DR6等)不能区分
临床评价中共同问题
假阳性与假阴性
•假阳:残余模板的污染 其它
•假阴:标本处理不当 其它
PCR测定临床应用及结果临床意义
北京大学人民医院 张正 100044
概述
临床PCR检测三条件
• SDA批准使用的试剂盒 •国家批准符合要求的实验室
•经行政部门同意并培训后持证上岗
关于结核杆菌等5项检测的
具体应用
• 结核分枝杆菌(TB)
实验设计特点
靶序列来源: a. 单抗检出的TB抗原旦白编码基因
临床评价
•细胞培养 McCoy. Hela-229金标准
• ELA法 • PCR法.专家希望此法为新金标
• HBV-DNA
.
实验设计特点
• S及C混合引物
• 定量用治疗监测
104 , 106
临床评价
一 般临床靠免疫标志 但无法明确时可测
拉米呋定及干扰素治疗监测
新问题研究
• HCV-RNA
实验室wk.baidu.com计特点