基于双向凝胶电泳-质谱技术的小型猪心肌缺血气虚血瘀证血浆特征蛋白质研究

辨 识 的 客 观 性 与 准 确 性 。本 文 拟 采 用 双 向 电 泳 等 蛋 白质 组 学 研 究手段 ， 探 讨 冠 心病 （ 心肌 缺血 ） 气虚 血瘀证 特征性 的血 浆蛋 白 质谱 ， 并 分 析 其 与证 候 表 征 的 相 关 性 ， 为 后 续 的 证 候 生 物 学 标 志 物 的 临床 研 究 奠 定 基 础 。
Ｃ ＨＩ ＮＥ Ｓ Ｅ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｉ ＮＴＥ ＧＲ ＡＴＩ ＶＥ ＭＥ ＤＩ Ｃ Ｉ ＮＥ ＯＮ ＣＡＲＤ Ｉ Ｏ一 ／ Ｃ Ｅ ＲＥＢ ＲＯＶＡＳ ＣＵＬ ＡＲ ＤＩ Ｓ Ｅ ＡＳ Ｅ Ｎｏ ｖ ｅ ｍｂｅ ｒ ２ ０ １ ３ Ｖｏ １ ． １ １ Ｎｏ ．１ １
物， 也 可 能 作 为 宏 观 表 征 的有 效 替代 指征 。
关键词 ： 心 肌 缺 血 气虚 血 瘀 证 ；血 浆 蛋 白质 组 ； 生物学标志物 ； 中华 小 型 猪
中图分 类号 ： 船２ ２ ． １ ８ ５ ． ５ 文献标识 码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｒ ￣ １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ ． ２ ０ １ ３ ． １ １ ． ０ ４ ２ 文章编 号 ： １ ６ ７ ２ — １ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ １ — １ ３ ４ ９ — ０ ３
仁， 工 作 于 北 京 中医 药 大 学 东 直 门 医 院 中 医 内科 学 教 育部 和 北 京 市 重 点
实验室（ 邮编 ： １ ０ ０ ７ ０ ０ ） ； 翟建英 ， 工作 于 中药 复 方新 药 开发 国 家 工 程 研 究
中心 。
因子 表 达 的影 响 ［ ． 『 ］ ． Ｉ 临床 心血 管 病 杂 志 ， ２ ０ １ １ ， ２ ７ （ ４ ） ： ３ １ ３—３ １ ５ ． ［ １ ２ ］ 戴睿 ， 曾秋 棠 ， 吴辉文． 法 舒 地 尔 对 急 性 心 肌 梗 死 大 鼠心 肌 的 保 护 作用［ Ｊ ］ ． 临 床心 血 管病 杂 志 ， ２ ０ ０ ８ ， ２ ４ （ ７ ） ： ５ ３ ７ —５ ３ ９ ． ［ １ ３ ］ 吴爱 明， 赵 明镜 ， 张冬梅 ， 等． 心 梗 后 心 力 衰 竭 模 型 大 鼠 中 医 证 候
染 色、 扫描后 ， 采用 Ｉ ｍａ ｇ ｅ ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ ２ Ｄ Ｐｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｕ ｍ ６ ． ０软 件 进 行 凝 胶 蛋 白 点检 测 及 匹配 ， 以 实验 组 与 对 照 组 的 Ｖ Ｏ ｌ 比值 ＞ ２或 ＜ ０ ． ５作
为 可 能 的 差 异蛋 白点 。采 用 基 质 辅 助 激 光 解 吸 附 的 时 间 飞 行 质 谱 对 差 异 蛋 白 点 进 行 鉴 定 。 结 果 与 对 照 组 相 比 ， 心 肌 缺 血 气 虚 血
中西 医结 合 心 脑 血 管 病 杂 志 ２ ０ １ ３年 １ １ 月第 １ Ｉ卷 第 ｉ １ 期
维 化 的干 预 作 用 Ｅ Ｊ ］ ． 中医杂志 ， ２ ０ ０ ６ ， ４ ７ （ ７ ） ： ５ ３ ８ —５ ４ ０ ． ［ ６ ］ 林强 ， 石江宏． 超 声 心 动 图 的 一 种 动 态 信 息 —— 全 方 向 Ｍ 型 心 动 图［ Ｊ ］ ． 仪 器仪 表 学报 ， ２ ０ ０ ５ ， ２ ６ （ ４ ） ： ４ ３ ７ —４ ４ ０ ． ［ ７ ］ 王加临 ， 郑建春 ， 张绍 昌 ， 等． 运 用 多 普 勒 超 声 心 动 图分 析 心 肌 梗 塞
Ｅ １ ４ ］ Ｚ ｈ ｏ ｕ Ｄ， Ｌ ｉ Ｚ ， Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｌ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｔ ａ ｎ ｓ ｈ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ Ｉ Ｉ Ａ
ｏ ｎ Ｔ ＧＦ Ⅱ一ｂ ｅ ｔ ａ ｌ—ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｃ ｆ ｉ ｂ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｊ Ｈｕ ａ ｚ ｈ ｏ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ
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特 点 及 心 脏 的超 声 评 价 ［ Ｊ ］ ． 中 国中西医结合 杂志 ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ７ （ ３ ） ：
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２ ０ ０ ８， １ ４ （ ３ ）： ８ ６—８ ８ ．
学标 志 物 、 证 候 主 要 表 征 的相 关 蛋 白质 。 方 法
ｇ 、 ｂ值 ， 心 脏 超 声 检 测 左 室射 血 分数 。 动 物 血 浆 采 用 ２ ４ ｃ ｍ、 Ｐ Ｈ３ 一ｌ ｌ ＮＬ的 胶 条 和 １ ３ 聚 丙 烯 酰 胺 凝胶 电泳 进 行 分 离 ， 考 马 斯 亮 蓝
１ 材 料 与 方 法
降 支 近 端 放 置 Ａｍｅ ｒ ｏ ｉ ｄ 缩 窄 环 制 备 心 肌 缺 血 模 型 。在 模 型 动
物符 合 心 肌 缺 血气 虚 血 瘀 证 诊 断 的 窗 口 （ 术后 ８ 周） ， 采集 舌象 、 心 功 能 等 指 标 并 采 集 血 浆 样 本 用 于 后 续 实 验 。 以 同期 的假 手 术 动 物 作 为 对 照 。 每 组 ６只 。
磊， 王
伟
采 用双 向凝 胶 电 泳一 质谱技术 ， 探 讨 小 型 猪 心 肌 缺 血 气虚 血 瘀 证 的 特 征 性 血 浆 蛋 白质 表 达 谱 ， 筛选 证 候 特 征 性 生 物 心 肌 缺 血 气虚 血 瘀 证 小 型 猪 和假 手 术 对 照 组 各 ６只 。数 码 相 机 拍 照 并 分 析 舌 象 ｒ 、
Ａｍ Ｊ Ｐｈ ｙ ｓ ｉ ｏ ｌ Ｈｅ ａ ｒ ｔ Ｃｉ ｒ ｅ Ｐｈ ｙ ｓ ｉ ｏ ｌ ， ２ ０ ０１ ， ２ ８ ０（ ６ ）： Ｈ２ ７ ２ ６—２ ７ ３ １ ．
［ １ ６ ］ 倪受东 ， 徐先祥 ， 高建． 绞 股 蓝 皂 甙 心 血 管 系 统 药理 作 用 的 研 究 进 展［ Ｊ ］ ． 中 国 中 医药 科 技 ， ２ ０ ０ ２ ， ９ （ ２ ） ： １ ２ ７—１ ２ ８ ． ［ １ ７ ］ 蔡久英 ， 任旭荣 ， 范仲凯 ， 等． 黄 芪 和 冬 虫 夏 草 对 心 脏 病 左 心 室 舒 张功能及血脂的影响［ Ｊ ］ ． 中 国中 西 医 结 合 急 救 杂 志 ， ２ ０ ０ ２ ， ９ （ ３ ） ：
瘀 证 小 型猪 血 浆 中检 测 到 １ ８种 下调 蛋 白 ， ６种 上 调 蛋 白 。质 谱 鉴 定 获 得 阳性 结果 的 下调 蛋 白为 动 力 蛋 白 重 链 ６和 视 黄 醇 结 合 蛋 白 ４ ， 均 与 能量 代 谢 有 关 。 左 室射 血 分 数 与 差 异 蛋 白 Ｓ ｐ ｏ ｔ ２ ２线 性 相 关 ， 值 分别与 Ｓ ｐ ｏ ｔ ２ ０ 、 Ｓ ｐ ｏ ｔ ６ 、 Ｓ ｐ ｏ ｔ ２ ０呈 线 性 相 关 。结 论 能 量 代 谢 异 常 可能 是 心 肌 缺 血 气 虚 血瘀 证 的 特 征 性 病 生理 进 程 之 一 。 蛋 白质 组 学研 究 提 示 的 差 异 血 浆 蛋 白有 可 能 成 为 证 候 诊 断 的 标 志
１ ． ２ 舌 ｒ 、 ｇ 、 ｂ分 析 数 码 相 机 拍 照 记 录动 物舌 象 ， 以ｃ ａ ｓ ｍａ ｔ ｃ ｈ
比色 卡 （ Ｂ Ｅ ＡＲ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ Ｃ ｏ ｒ ｐ ｏ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， 日本 ） 作为参 照 ， 采用 ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ — ｓ ｈ ｏ ｐ软 件 分 析 舌 ＲＧ Ｂ值 ， 并计算 ｒ 、 ｇ 、 ｂ 。 １ ． ３ 左 室 射 血 分 数 检 测 心 动 超 声 （ 惠普 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ ＯＮＯ Ｓ ５ ５ ０ ０ ， 美 国） Ｓ ｉ ｍｐ ｓ ｏ ｎ法 检 测 左 室 射 血 分 数 （ Ｌ ＶＥ Ｆ ） 。
１ ７ ４—１ ７ ５ ．
ｒ ９ ］ Ｓ ｈ ｉ ｍｏ ｋ ａ ｗａ Ｈ， Ｈｉ ｒ ａ ｍｏ ｒ ｉ Ｋ， Ｉ ｉ ｎ ｕ ｍａ Ｈ， ｅ ｔ ａ １ ． Ａｎ ｔ ｉ — ａ ｎ ｇ ｉ ｎ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ
ｆ ａ ｓ ｕ ｄ ｉ ｌ ， ａ Ｒｈ ｏ—ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ｉ ｎｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ， ｉ ｎ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｅ ｆ ｆ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｇ ｉ —
［ １ ０ ］ 孟文格 ， 陈小 贺 ， 陈欣华 ， 等． 盐 酸 法 舒 地 尔 治 疗 急 性 心 肌 梗 死 心 力 衰 竭 的研 究 ［ Ｊ ］ ． 中 国综 合 临 床 ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ３ （ １ ３ ） ： ８—９ ． ［ １ １ ］ 马建英 ， 谭丽娟 ， 潘娜娜． 法 舒 地 尔 对 急 性 心 肌 梗 死 大 鼠 炎 性 细 胞
证 候 是 疾 病 特 定 阶段 的病 生理 特 征 的 综 合 反 映 。除 了宏 观
小 型 猪养 殖 基 地 ， 体重 ２ ５ ±４ ｋ ｇ ， 月龄 ６ ～１ ０个 月 ） 左 冠 脉 前
四诊 信 息 ， 证 候 在微 观 生 物 学 指 标 层 面 必 然 也 存 在 着 特 征 性 的 变 化 。证 候 特 征 性 生 物 学 标 志 物 的 发 现 ， 有 利 于 提 升 临 床 证 候
１ ． １ 对象
采用课题组前期建立 的方法 ， 制 备 小 型猪 心 肌 缺 血
气 虚 血 瘀 证 病 证 结合 动 物 模 型 ＿ １ ］ 。中华小 型猪 （ 中 国农 业 大 学
１ ） 为 北 京 市 自然 科 学 基 金 项 目（ Ｎｏ ． ７ １ １ ２ ０ ７ ７ ）
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