基于双向凝胶电泳-质谱技术的小型猪心肌缺血气虚血瘀证血浆特征蛋白质研究

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《双向电泳技术》课件

高通量
该技术可以同时分离大量蛋白质，提高了实验的通量。
高稳定性
该技术具有较高的稳定性，实验结果重复性好。
缺点
实验周期长
双向电泳技术的实验周期较长，需要耗费较多的时间和人力
。
对样品要求高
该技术需要大量的起始样品，并且对样品的纯度要求较高。
对实验条件要求严格
双向电泳技术的实验条件较为苛刻，需要精确控制实验参数。
在药物研发中的应用
总结词
双向电泳技术为药物研发提供了高通量和高效率的蛋白质分离手段，有助于发现潜在的药物靶点和筛选候选药物。
详细描述
在药物研发过程中，双向电泳技术可用于分析药物对蛋白质表达谱的影响，从而发现药物作用的靶点。此外，通过比较不同物种或组织的蛋白质表达谱，可以发现潜在的药物靶点，为新药研发提供思路和候选药物。
应用领域的拓展
疾病诊断与治疗
利用双向电泳技术分析疾病相关蛋白质，为疾病诊断和治疗提供依据。
药物研发
通过双向电泳技术筛选药物作用靶点，加速新药研发进程。
生物工程与农业
在生物工程和农业领域中应用双向电泳技术，优化生物过程和育种。
未来发展方向与挑战
标准化与规范化
建立双向电泳技术的标准化操作流程和质量控制体系，提高实验结果的可靠性和可比性。
CHAPTER 02
双向电泳技术的实验流程
样本制备
01
02
03
样本选择与处理
选择适当的组织或细胞样本，进行适当的处理以提取蛋白质。
蛋白提取
使用适当的缓冲液和试剂，从样本中提取蛋白质。
蛋白定量
使用蛋白质定量方法，确定蛋白质的浓度。
蛋白质提取
溶解蛋白质

双向电泳技术原理及其应用

¹双向电泳技术原理及其应用刘上峰傅俊江综述李麓芸审校(中南大学湘雅医学院人类生殖工程研究室,湖南长沙410078)摘要:双向电泳技术是蛋白质组研究的核心技术之一,本文对其基本原理、分辨率、可重复性、相关数据库、减法分析等作了介绍,并对其今后的发展方向作了展望。

关键词:双向电泳; 蛋白质组; 数据库;减法分析中图分类号:R318133 文献标识码:A 文章编号:100121773(2002)022*******随着后基因组时代的到来,蛋白质组学应运而生。

双向电泳(tw o 2dimensional electrophoresis,22D E)作为蛋白质组研究的三大关键核心技术之一(另二种是质谱技术和计算机图像数据处理与蛋白质组数据库即蛋白质组信息学),仍然是目前分析组份复杂蛋白质分辨率最高的工具,因此日益受到人们的广泛关注。

1 双向电泳的基本原理首先根据蛋白质等电点不同在pH 梯度胶中等电聚焦(isoelec tric f ocusing,IEF)将其分离,然后按照它们的分子量大小在垂直方向或水平方向进行十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS 2PAG E)第二次分离。

根据第一向等电聚焦条件的不同,可将22DE 分为三种系统:第一种系统是在聚丙烯酰胺凝胶中进行,两性电解质在外加电场作用下形成梯度,该系统称为IS O 2D A L T 。

其主要缺点是pH 梯度不稳定,重复性差,上样量低,不利于不同实验室间进行图谱比较;如果第一向电泳使用丙烯酰胺和Immobilines 共聚,形成具有pH 梯度的凝胶,这种系统称为IPG 2D AL T 系统,该系统pH 梯度稳定,不依赖于外加电场,基本上克服了ISO 2D AL T 的主要缺点,无论是重复性和上样量均优于I SO 2D AL T;第三种是非平衡pH 梯度电泳(nonequilibrium pH gradient electrophoresis,NEPhG E),主要用于分离碱性蛋白质,电泳展开时间相对比较短。

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107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160
2009年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
科研热词推荐指数基因芯片 18 蛋白质组学 15 基因表达谱 11 遗传多样性 9 基因表达 9 rna干扰 9 差异表达基因 8 寡核苷酸序列分析 7 大鼠 7 基因 7 蛋白质组 6 肺肿瘤 6 肿瘤转移 5 肾阳虚 5 细胞凋亡 5 小鼠 5 小麦 5 胞增殖 4 种质资源 4 磁共振成像 4 rapd 4 dna芯片 4 预后 3 遗传多态性 3 葡萄胎 3 胰腺肿瘤 3 聚类分析 3 绿色荧光蛋白 3 筛选 3 磷高效 3 猪 3 水稻 3 核心种质 3 干细胞 3 基因型 3 卵巢肿瘤 3 冠心病 3 光谱法,质量,基质辅助激光解吸电离 3 rt-pcr 3 issr 3 hepg2细胞 3 鼠脑 2 骨髓间充质干细胞 2 骨坏死 2 阅读障碍 2 金匮肾气丸 2
科研热词基因芯片基因表达蛋白质组学差异表达基因蛋白质组抑制性消减杂交大鼠基因小麦基因表达谱细胞增殖双向电泳胃癌动物模型 rna干扰骨髓间充质干细胞衰老细胞周期细胞分化生物信息学淋巴细胞小鼠基因巢肿瘤儿童低氧训练骨质疏松转染质谱表达蛋白组学荧光定量pcr 胃肿瘤肾阳虚肝细胞结核分枝杆菌细胞凋亡线粒体白血病癌生长烧伤激光捕获显微切割湖羊排卵数

双向电泳

双向电泳的应用及研究进展摘要:双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。

本文重点介绍了双向电泳的基本原理及其应用。

同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。

关键词: 双向电泳，应用，前景1.1双向电泳技术概述双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE）是蛋白分离的黄金标准，由此可以分析生物样品的显著差别，产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的环境和药物的毒性。

双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过质量的不同分离。

双向电泳协同质谱技术是正在出现的蛋白组学领域的中心技术。

双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段，是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术，其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。

双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。

可见双向电泳在蛋白质组学研究中的重要性。

就像Fey和Larsen在他们的综述中提到：“尽管人们都想有新技术取代它，可是如果希望对细胞活动有全面的认识，其他技术无法在分辨率和灵敏度上与双向电泳相媲美”。

1.2双向电泳基本原理1975年,意大利生化学家O’Farrell发明了双向电泳技术[1],双向电泳是指利用蛋白质的带电性和分子量大小的差异,通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质群的技术。

双向电泳技术依据两个不同的物理化学原理分离蛋白质。

第一向电泳依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质进行分离。

在此基础上进行第二向的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,它依据蛋白质分子量的不同将之分离。

双向电泳所得结果的斑点序列都对应着样品中的单一蛋白。

因此，上千种蛋白质均能被分离开来，并且各种蛋白质的等电点，分子量和含量的信息都能得到。

影响猪血浆蛋白热诱导凝胶质构特性及持水性因素的研究

影响猪血浆蛋白热诱导凝胶质构特性及持水性因素的研究孔保华1，张立娟1，刁新平2(1.东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨 150030；2.东北农业大学动物科学技术学院，黑龙江哈尔滨 150030)摘要：本实验研究在一定的加热条件下猪血浆蛋白质量浓度、加热温度、加热时间、离子种类、离子强度和pH 值对猪血浆蛋白热诱导凝胶的质构、持水性等性质的影响。

利用质构仪测定猪血浆蛋白热诱导凝胶的硬度和黏附性，利用离心的方法测定凝胶的持水性。

结果表明，在80℃下加热45min ，猪血浆蛋白质量浓度超过6g/100mL 可以形成凝胶，并且随蛋白质量浓度的增大，凝胶强度和持水性也增大；凝胶强度随pH 值(3～9)增加而增大，pH5时凝胶的持水性最小，pH3时最大；NaCl 浓度0.2mol/L ，CaCl 2浓度0.6mol/L 时，凝胶硬度最大。

实验得出，猪血浆蛋白热诱导凝胶的质构特性及持水性受许多因素影响，在实际生产中应该控制加热条件，以获得高质量的凝胶。

关键词：猪血浆蛋白；热诱导凝胶；质构；持水性Factors Affecting Textural Properties and Water-holding Capacity of Heat-induced Gels ofPorcine Blood Plasma ProteinKONG Bao-hua 1，ZHANG Li-juan 1，DIAO Xin-ping 2(1. College of Food Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China ；2. College of Animal Science and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)Abstract ：Effects of protein concentration, heating temperature, heating time, ionic species, ionic strength and pH on textural property and water-holding capacity of heat-induced gels of porcine blood plasma protein were investigated in this study. Gel hardness and adhesiveness were studied using TA-XT analyzer and water-holding capacity (WHC) was measured by centrifugation. Results showed that porcine blood plasma protein was easy to form protein gels under the condition of over 6g/100mL protein concentration via heating for 45 min at 80 ℃. Increasing concentration of porcine blood plasma protein resulted in a significant increase of gel strength and WHC (P < 0.05). Meanwhile, gel strength exhibited a significant improvement with increasing pH within the range of 3 to 9 (P < 0.05). The lowest and the highest WHC of heat-induced gels of porcine blood plasma protein were observed at pH 5.0 and 3.0, respectively. In addition, the highest hardness of porcine blood plasma protein gel was observed in the presence of 0.2 mol/L NaCl and 0.6 mol/L CaCl 2, respectively. These findings suggest that many factors affect the textural properties and WHC of heat-induced gels of porcine blood plasma protein. Therefore, heating conditions should be controlled to improve gel quality during practical processing.Key words ：porcine plasma protein ；heat-induced gel ；texture ；water-holding capacity (WHC)中图分类号：TQ93 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)07-0075-06收稿日期：2009-07-09基金项目：黑龙江省杰出青年基金项目(JC200702)；东北农业大学创新团队发展计划资助项目作者简介：孔保华(1963—)，女，教授，博士，研究方向为食品科学。

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化张明顺; 李雪华; 兰晓霞; 栾大伟; 赵化冰; 王世鑫【期刊名称】《《医学信息》》【年(卷),期】2010(023)007【摘要】目的建立稳定的人血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术体系,提高人血清蛋白2-DE图谱的分辨率和重复性。

方法采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳技术,对血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条选择、等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳程序及参数等进行了比较和优化。

结果两样品经过3次重复,还原烷基化蛋白质斑点数（678±32）个,非还原烷基化蛋白质斑点数（358±26）个,还原烷基化分离较好,电泳图谱更清晰。

结论还原烷基化处理能提高血清蛋白质2-DE的分辨率,该方法也可对其它蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴作用。

【总页数】3页(P2310-2312)【作者】张明顺; 李雪华; 兰晓霞; 栾大伟; 赵化冰; 王世鑫【作者单位】天津武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室天津300162【正文语种】中文【相关文献】1.血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化 [J], 董红;王世鑫;罗来龙;栾大伟2.寻常型银屑病血清蛋白质组学研究中双向凝胶电泳-质谱技术的初步建立 [J], 刘占奎;谭升顺;于春水;樊靖华;白转丽;李俊杰3.优化并建立双向凝胶电泳初步研究糖尿病视网膜病变血清蛋白质组 [J], 李俊;贾丽丽;陆琳娜;王悦4.家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立 [J], 要瑞莉;张明顺;李宏杰;董淑云;王世鑫;冯桂玲5.血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化 [J], 张明顺;李雪华;兰晓霞;栾大伟;赵化冰;王世鑫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

双向电泳-质谱技术筛选心绞痛血瘀证相关蛋白的研究

瘀证是心绞痛中常见的中医证候表现。目前，心绞痛
的发病机制仍然不完全清楚，尚无早期诊断的特异
性标志物。近年来。随着蛋白质组学技术的飞速发
展．为研究心绞痛的发病机制和探索早期诊断的生
绞痛未再次出现或症状减轻，发作频率减少，持
者血瘀证程度变化前后的血浆进行比较蛋白质组学研究，找心绞痛血瘀证的相关蛋白，寻为进一步・
双向电泳一质谱技术筛选心绞痛血瘀证相关蛋白的研究术
赵慧辉王伟李宏
【要】目的对心绞痛血瘀证患者血瘀证程度变化前后的血浆进行双向电泳图谱检测，寻找心绞痛血瘀证相关蛋白，摘探
索心绞痛血瘀证的蛋白质组学特点。方法采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析／电离一行时间质谱对８例心绞痛血瘀证患飞者血瘀证程度变化前后的血浆进行比较蛋白质组学研究，找心绞痛血瘀证相关蛋白。结果初步发现了Ｃｕｔｉ、ｐＡＩ寻ｌｓｒＡｏ — 在ｅｎ血瘀证程度变轻后表达增加，Ｆｂｉｏｅｈｉ、ｉｍｉＤＢｎｉｇＰｏｅ、ｐｇｏｉｈｉ、ｌｕｎｉｆｒ在血瘀证程而ｉｒｇｎｐｃａＶｔｎ — ｉｎｒｔｉＨａｔｌｂｎｐｃａＡｂｍｉｓｏｍｎｎａｄｎｏｎｏ度变轻后表达降低。结论初步发现Ｃｕｔｒ、ｐＡ— 、ｉｒｏｅｈｉ、ｉｍｎＤ— ｉｄｎｒｔｎＨａｔｌｂｎｐｃａ、ｌｓｉＡｏＩＦｂｉｇｎｐｃａＶｔｉＢｎｉｇＰｏｅ、ｐｇｏｉｈｉｅｎｎｎａｉｏｎＡｂｍｎｉｆｍ可能与心绞痛血瘀证相关，结果有待运用其他生物学的方法进行具体的验证并探索其机制。ｌｕｉｏｒｓｏ但

猪肝脏蛋白质组双向电泳体系的建立及优化

猪肝脏蛋白质组双向电泳体系的建立及优化王新洁;韩剑众;曲道峰【期刊名称】《肉类研究》【年(卷),期】2011(000)011【摘要】建立猪肝脏蛋白质组的双向电泳体系，并从样品处理、电泳参数、染色方法等方面对该体系进行优化。

样品处理采用超速离心法，Cleanup试剂盒处理，17cm pH5-8的双向电泳预制干胶条，蛋白上样量120μL，得出匹配率为76％，蛋白点有1412±8个。

参照全盲法，对各种不同的猪肝脏样品进行准确性和重复性实验，样品匹配率均在70％以上，且图谱中点的相对迁移率都在实验室的控制标准之内，可以筛选出既具有统计学意义又具有量分析意义的蛋白点，也可用于区分不同的猪肝脏样品。

该体系能满足不同猪肝脏样品的双向电泳分析。

【总页数】5页(P1-5)【作者】王新洁;韩剑众;曲道峰【作者单位】浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江省食品安全重点实验室,浙江杭州310035;浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江省食品安全重点实验室,浙江杭州310035;浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江省食品安全重点实验室,浙江杭州310035【正文语种】中文【中图分类】TS251.65【相关文献】1.吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术的建立与优化 [J], 朱佳杰;沈夏霜;付强;周宇;谭芸;甘西2.适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳优化体系的建立 [J], 王强;王娟;李宁;唐亚萍;杨涛;王柏柯;杨生保;帕提古丽;余庆辉3.蚯蚓蛋白质组双向电泳技术体系的建立及条件优化 [J], 吴石金;赵士良;沈飞超;徐铭4.大黄鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术的建立及优化 [J], 李明云;冀德伟;吴海庆;陈炯;史雨红5.华根霉蛋白质组双向电泳体系的建立及优化 [J], 郑礼月;王栋;徐岩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蛋白质组学及其在兽医学中的应用

动物医学进展,2008,29(2):76278Progress in Veterinary Medicine蛋白质组学及其在兽医学中的应用张爱玲1,王兴龙23(1.吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;2.军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130062) 摘　要:蛋白质组学以蛋白质组为研究对象,从整体上对生命载体进行研究,已成为后基因组时代的研究热点。

目前,蛋白质组学技术主要包括双向凝胶电泳、生物质谱及生物信息学。

双向凝胶电泳根据蛋白质的等电点和分子质量分离蛋白质,而质谱技术已成为鉴定蛋白质的极为灵敏而迅速的工具。

由此得到的肽质量图谱结合准确全面的数据库技术,就使得新的蛋白质或多肽得以鉴定。

近年来,蛋白质组研究技术已应用到多种生命科学领域中,在兽医学研究领域中尤其是兽药开发方面也将会有很广阔的应用前景。

关键词:蛋白质组学;兽医学;双向凝胶电泳;质谱中图分类号:S852.21文献标识码:A文章编号:100725038(2008)022******* 后基因组时代研究重心已开始从揭示生命的所有遗传信息,转移到在整体水平上对生物功能的研究,于是产生了功能基因组学。

这一新学科从基因组整体水平上对基因的活动规律进行阐述,如在mRNA水平上通过DNA芯片技术检测生物基因的表达模式,其前提是细胞中mRNA的水平反映了蛋白质表达的水平。

但事实上并不完全如此,从DNA2mRNA2蛋白质,存在3个层次的调控,即转录水平调控、翻译水平调控及翻译后修饰水平调控。

从mRNA角度考虑,实际上仅包括了转录水平调控,不能全面代表蛋白质的表达水平。

蛋白质特有的活动规律如蛋白质的修饰加工、转运定位、结构变化、蛋白质与蛋白质及其他生物大分子之间的相互作用等均无法从基因组水平上的研究来获知。

因此,对生物功能的主要体现者和执行者———蛋白质的表达模式和功能模式的研究就成为生命科学发展的必然。

蛋白质组学研究现已成为生命科学研究领域最活跃的学科之一[123]。

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中的差异表达蛋白质

收稿日期：２０１３．１０．１６
通讯作者：郑玉才（ｔ９６５．），男，教授，博士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｃａｉｚｈｅｎｇ６５＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎ．ｒ基金项目：国家自然科学基金资ｌｔ］Ｊｉ￣（Ｎｏ．３１２４００５３）；中央高校基本科研业务费资助课题（Ｎｏ．１２ＮＺＹＴＨ０６）；西南民族大学研究生创新型科研项目资助（Ｎｏ．ＣＸ２０１３ＳＺ５２）．
未见报道．
１材料与方法
１．１样品采集麦洼牦牛ｏｓｇｒｕｎｎｉｅｓ）和犏牛睾丸组织均采自成都市青自江一屠宰场．选取健康的成年公牦牛（ｎ＝４）和公犏
牛（ｎ＝２），屠宰后立刻取其睾丸，纵切面剖开后用干冰带回实验室，－８０￣（２保存至分析．
中图分类号：￥８２３。￥８５２．２３文献标识￣ｉＢ－：Ａ文章编号：ｌ００３．４２７１（２０１４）０１－００Ｉｌ－Ｏ５
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
牦牛主要分布于我国青藏高原地区，对恶劣环境有极强的适应能力，是青藏高原地区牧民的主要生活和生产资料．将普通牛同牦牛杂交，其后代犏牛具有生长速度快、产肉产奶量高等特点．然而，由于物种间存在生殖隔离，使得犏牛具有雄性不育的特点，这极大阻碍了犏牛优良性状的横向遗传和保留．为解决这一难题，国内外牦牛研究者经过大量科学研究，不断探索解决犏牛雄性不育的方法，并已取得一定成果．已有的研究主要涉及对犏牛的精子发生水平、生殖器官解剖和生殖内分泌、生化遗传学等方面研究¨ ．但迄今为止，有关犏牛雄性不育的机制仍不清楚．胡欧明等对精子的发生进行了研究，发现犏牛精子发生存在各个时期的生殖细胞，但从精母细胞细胞开始以后逐级受阻；Ｈｕａｎｇ等通过对牦牛及犏牛的乳酸脱氢酶Ｃ基因选择性剪切变异体的定量分析发现，选择性剪切在调控该基因在睾丸组织中的表达可能有一定影响，可能与犏牛雄性不育有关．对ＳＹＣＰ３、Ｄｍｃｌ等基因的分析发现，犏牛与其他牛相比，在转录、表达、修饰等环节存在一些差异，可能与犏牛雄性不育有关Ｉ４Ｊ．然而，有关犏牛雄性不育的因果关系仍不清楚，尤其缺乏蛋自质水平的证据．目前，蛋白质组学已经应用于植物雄性不育及医学、：衣学等领域．本研究采用蛋白质组学方法，分析牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异，探索犏牛雄性不育的可能机制．将蛋白质组学应用于犏牛雄性不育的研究尚

双向凝胶电泳与质谱技术分析Dukes B期大肠癌肿瘤与癌旁组织的差异蛋白质组学

双向凝胶电泳与质谱技术分析Dukes B期大肠癌肿瘤与癌旁组织的差异蛋白质组学赵海丰;赵蕴伟;刘振玉;何成彦【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2010(030)024【摘要】目的研究Dukes B期大肠癌肿瘤与癌旁组织差异蛋白质组学.方法①应用双向凝胶电泳(2-DE)和质谱技术对大肠癌肿瘤与癌旁组织分离分析.②在鉴定出具有差异蛋白质中,选出2个蛋白质烯醇化酶(Enolase)、血红蛋白(Hemoglobin)行蛋白印记实验,验证2-DE结果.结果通过2-DE和质谱技术对大肠癌肿瘤与癌旁组织进行分离分析,21个蛋白质点在组织中的表达量差异显著.通过免疫蛋白印记实验进一步证明2-DE结果的准确性.结论 Dukes B期大肠癌肿瘤与癌旁组织蛋白质具有差异性,其中14个蛋白质点在肿瘤组织上调,7个下调.【总页数】3页(P3651-3653)【作者】赵海丰;赵蕴伟;刘振玉;何成彦【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154003;佳木斯市中心医院;佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154003;吉林大学中日联谊医院【正文语种】中文【中图分类】R735.3+4【相关文献】1.初步探讨肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6在大肠癌及其癌旁组织中的表达及意义 [J], 田颖;牛琼2.凝胶电泳-毛细管液相色谱-质谱联用技术分析大肠癌肿瘤与癌旁组织的差异蛋白质组 [J], 刘卓;李洪军;李晓鸥;杨照微;赵丽纯;黄丽红;郭宏华;王海;赵晴3.荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白 [J], 陈壮飞;肖耀军;黄泽海;陈彤;赵善超;姜耀东;吴芃;郑少斌4.利用双向凝胶电泳和质谱技术进行前列腺癌差异蛋白质组学研究 [J], 王轩久;周利群5.微小RNA-126在大肠癌组织正常癌旁组织及大肠癌细胞中的表达及其意义研究[J], 边涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

奶牛血浆蛋白质组学研究中双向凝胶电泳条件的优化

奶牛血浆蛋白质组学研究中双向凝胶电泳条件的优化牛丽莉;魏彩虹;李宏滨;杜立新【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2009(0)20【摘要】【研究目的】血浆蛋白组成复杂、信息含量丰富。

血浆蛋白质结构和数量的改变,对疾病诊断和治疗具有重要的意义;【方法】双向电泳技术是蛋白质组研究中比较常用的一种蛋白质分离技术。

根据血浆蛋白动态范围大,高丰度蛋白对分析存在干扰的特点,设计了两种实验方案,并比较了这两种方案的优缺点,为血浆作为奶牛疾病诊断标记的应用提供参考;【结果】使用热SDS法处理样品可分离出230个可以重复的蛋白点。

Aurum Affi-Gel Blue Mini columns除白蛋白柱处理样品分离了156个可重复的蛋白点;【结论】热SDS法处理血浆样品联合pH4～7的IPG胶条的方案,步骤简单,分离效果好。

【总页数】5页(P30-34)【关键词】奶牛血浆;蛋白质组;双向凝胶电泳【作者】牛丽莉;魏彩虹;李宏滨;杜立新【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.33【相关文献】1.双向凝胶电泳在临床血浆蛋白质组学研究中的技术难点和解决方法 [J], 罗小云;吴庆华2.优化双向凝胶电泳和图象分析技术应用于骨肉瘤蛋白质组研究 [J], 顾锐;杨小玉;段德生3.优化并建立双向凝胶电泳初步研究糖尿病视网膜病变血清蛋白质组 [J], 李俊;贾丽丽;陆琳娜;王悦4.胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化 [J], 李炜;李建芳;蔡劬;瞿颖;孔雷;秦建民;刘炳亚5.双向凝胶电泳技术在胰腺癌蛋白质组学研究中的应用及条件优化 [J], 宗美娟;孟猛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2013.12.12 实验蛋白质组学实验技术相关理论介绍(一)双向电泳(2DE)实验技术

第二向SDS-PAGE 垂直电泳
第二向SDS-PAGE 垂直电泳步骤
配制凝胶及准备第二向电泳系统在SDS 平衡缓冲液中平衡固相pH干胶条将平衡好的固相pH 干胶条放置在SDS 凝胶上进行电泳染色、显影

平衡固相pH干胶条

平衡缓冲液（75 mM Tris-HCl, pH 8.8）：使固相pH 干胶条的pH 值维持在电泳适合的范围内；由缓冲液、尿素、甘油、还原剂、SDS 和染料组成。

稳定的同位素虽然其化学性质相同，但质量数却存在差异。 ITRAQ就是利用这一原理，用稳定同位素分别标记不同的样品，将标记和未标记的样品以等量混合，酶解后再用质谱技术检测它们的相对丰度。作为一种新的蛋白质绝对和相对定量技术，具有很好的精确性和重复性。
二维凝胶差异电泳技术DIGE

DIGE技术中将样品和对照品的蛋白质用激发波长不同而化学性质类似的两种荧光染料标记，混合
二维凝胶差异电泳技术digedige技术中将样品和对照品的蛋白质用激发波长不同而化学性质类似的两种荧光染料标记混合二维电泳分离然后采用不同波长扫描通过观察一个蛋白质点两种荧光密度的差异变化得特定蛋白质点的差异表达信息
双向电泳（2DE）实验技术
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病毒免疫室赵婷 2013.12.12
IEF注意事项：
Ettan IPGphor Ⅲ系统是高压设备，如果安全装置失效，可能引起致命电休克。因此，操作开始前必须锁上安全盖，否则就不会加电。每个IPG 胶条的电流限度建议值为50μA，如超过可能会烧毁胶条并损坏仪器。常规胶条槽和Manifold 胶条槽采用陶瓷制成，应小心操作。
基质辅助激光解析质谱成像技术 MALDI MSI

双向凝胶电泳

第一向：
3. 仪器简介
BIO-RAD公司PROTEAN IEF Cell 等电聚焦仪：
采用珀耳帖温度控制聚焦平台；最大电压为10, 000伏；有不同的电压上升方式；可分步进行时间或电压·小时控制；重泡胀可采取整体的或独立的步骤；程序可时时控制；可同时聚焦24根7cm，12根17cm胶条；有三个预设程序的方法；有十个用户自定方法；采集运行数据可经RS232端口输出或任何热敏打印纸。
同年，2D PAGE在原理上又有了新的发展，以第一向为蛋白质等电聚焦的双向凝胶电泳技术建立起来，即IEF-PAGE (Dale G, Latner AL. Isoelectric focusing of serum proteins in acrylamide gels followed by electrophoresis. Clin Chim Acta, 1969, 24: 61-68；Macko V, Stegemann H. Mapping of potato proteins by combined elctrofocusing and electrophoresis identification of varieties. Hoppe-seyler’s Z Physiol. Chem, 1969, 350: 917-919)。
非变性/还原/SDS-2D-PAGE：非变性条件下IEF聚焦，之后用 8M尿素 + 5%β-ME + 2%SDS进行平衡，再进行第二向SDSPAGE电泳。此时分离的蛋白质点可进行点的切取、蛋白酶消化、MALDI-TOF-MS分析鉴定，提供关于断裂二硫键连接的多肽的信息。
变性2D-PAGE：样品先用2%SDS + 5%β-ME + 95℃变性5min, IEF在8M尿素 + 1%NP-40条件下进行，之后胶条用2%SDS + 5%β-ME平衡，然后进行SDS-PAGE。该技术适于DNA序列和多肽结构的分析，或分析被碳氢键连接和其它翻译后修饰所引起的多肽结构微异质性，但此方式显示的大于100KD的蛋白质点少于第三种方式。

基于二维凝胶电泳分析健康泌乳奶牛血浆蛋白质组的个体差异

基于二维凝胶电泳分析健康泌乳奶牛血浆蛋白质组的个体差异杨永新;程广龙;赵辉玲;江喜春;陈胜【摘要】为了分析奶牛血浆蛋白质存在的个体差异,以合理选择牛血浆蛋白质组研究中试验奶牛的样本数.试验采集了临床健康的泌乳早期的初产中国荷斯坦奶牛的血液,分离血浆蛋白后用二维凝胶电泳技术分离,考马斯亮蓝G-250染色后,对分离形态好的56个蛋白点的表达丰度进行分析.结果发现,蛋白点的变异系数在8.7%～59.6%之间,且有5个蛋白点的丰度变异系数较大(35%～59.6%),用液相色谱串联离子阱质谱分析后,3个蛋白点获得有效鉴定,为转甲状腺素蛋白、载脂蛋白A1和α1酸性糖蛋白.方差分析结果表明,当样本数≥4时可有效降低组内样本间的个体差异.因此,奶牛血浆蛋白的表达存在个体差异,本试验为奶牛血浆蛋白质组研究中合理选择样本数量提供了依据.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)011【总页数】5页(P90-94)【关键词】奶牛;血浆;蛋白质组;个体差异【作者】杨永新;程广龙;赵辉玲;江喜春;陈胜【作者单位】安徽农业科学院畜牧兽医研究所,合肥,230031;安徽农业科学院畜牧兽医研究所,合肥,230031;安徽农业科学院畜牧兽医研究所,合肥,230031;安徽农业科学院畜牧兽医研究所,合肥,230031;安徽农业科学院畜牧兽医研究所,合肥,230031【正文语种】中文【中图分类】Q51血液是生物医学研究中最为相关和容易获得的样品（Cair oli等，2006），这是由于当机体各组织或器官发生生理或病理变化时，可直接或间接地造成血液组成发生变化。

血液的主要成分为血浆和血细胞，而血浆的主要成分为蛋白质，它们具有多种重要的生理功能，涉及机体免疫、凝血抗凝血、物质运输及维持渗透压、p H和营养源的作用（陈杰，2007），所以通过血浆蛋白质研究为寻找疾病相关标记分子、认识疾病发生过程及预防治疗疾病具有非常重要的意义。

当归水煎液对血虚小鼠补血作用的差异蛋白组学研究

当归水煎液对血虚小鼠补血作用的差异蛋白组学研究当归水煎液作为一种常用的中药，被广泛应用于治疗血虚等相关疾病。

然而，对于当归水煎液在补血作用中的具体机制，迄今为止还不完全清楚。

为了探究当归水煎液在补血作用中的差异蛋白组学研究，本文使用小鼠作为研究模型进行实验。

首先，我们选取了40只健康小鼠，随机分成四组：正常对照组、血虚模型组、当归水煎液A组和当归水煎液B组。

其中正常对照组和血虚模型组只接受等量的生理盐水，而当归水煎液A组和当归水煎液B组分别接受等量的当归水煎液A和当归水煎液B。

每组10只小鼠，连续给予处理21天。

在处理结束后，我们收集小鼠的血液，使用蛋白提取试剂盒提取血浆中的蛋白质。

通过二维凝胶电泳技术对血浆蛋白组进行分离和检测。

利用荧光染色和成像系统对二维凝胶电泳结果进行分析，并以正常对照组作为基准，比较其他组的差异表达蛋白质。

结果显示，与正常对照组相比，血虚模型组的差异蛋白质表达明显增加。

而当归水煎液A组和当归水煎液B组的差异蛋白质表达也与血虚模型组有所不同。

进一步分析差异蛋白质的功能主要集中在调节免疫反应、代谢调控和细胞增殖等方面。

在进一步研究中，我们发现当归水煎液A组和当归水煎液B组的差异蛋白质表达也存在一定的差异。

具体而言，差异蛋白质中涉及到调节免疫反应的蛋白质在当归水煎液A组中表达较高，而涉及代谢调控和细胞增殖的蛋白质在当归水煎液B组中表达较高。

这表明当归水煎液A和当归水煎液B在补血作用中可能具有不同的机制。

综上所述，本研究通过差异蛋白组学的方法，对当归水煎液对血虚小鼠补血作用的机制进行了初步的探索。

实验结果表明差异蛋白质主要涉及调节免疫反应、代谢调控和细胞增殖等方面。

此外，当归水煎液A和当归水煎液B在补血作用中可能存在差异。

然而，进一步的研究还需要对差异蛋白质进行鉴定和功能验证，以更好地解析当归水煎液对血虚小鼠补血作用的机制。

希望本研究对进一步深入研究当归水煎液的补血作用提供一定的参考和指导综合分析结果显示，血虚模型组、当归水煎液A组和当归水煎液B组的差异蛋白质表达与正常对照组存在明显差异。

双向电泳和质谱技术

双向电泳和质谱技术双向电泳和质谱技术是生物分析领域中常用的两种先进技术手段，它们在蛋白质分析、基因测序和疾病诊断等方面发挥着重要作用。

本文将重点介绍双向电泳和质谱技术的原理、应用及未来发展趋势。

1. 双向电泳技术双向电泳是一种利用电场在两个方向同时进行电泳分离的方法。

在垂直电泳的基础上，通过在水平方向引入一个交叉的电场，使得分子在两个方向上同时受到电场的作用，从而实现更加细致的分离和分析。

双向电泳技术可以有效地应对复杂样品的分析需求，提高分离效率和分辨率，广泛用于蛋白质组学和基因组学领域。

2. 质谱技术质谱技术是一种通过测定分子的质荷比来识别、定量和分析化合物的方法。

质谱技术主要包括质谱仪器、样品制备和数据分析三个方面。

通过质谱技术可以快速准确地鉴定生物样品中的蛋白质、代谢产物和小分子化合物，为生物医学研究和临床诊断提供重要帮助。

3. 双向电泳和质谱技术的应用双向电泳和质谱技术在生物学研究和医学诊断中有着广泛的应用。

在蛋白质组学研究中，双向电泳可以帮助科学家分析蛋白质的组成和结构，揭示蛋白质的功能与调控机制；而质谱技术则可以通过蛋白质质谱鉴定和定量，解析复杂生物系统中的蛋白质交互作用和信号传导通路。

在疾病诊断中，质谱技术可以通过检测患者生物标志物的质谱图谱，诊断疾病类型和病情进展，为个体化治疗提供指导。

4. 双向电泳和质谱技术的未来发展随着科学技术的不断进步，双向电泳和质谱技术也在不断优化和完善。

双向电泳技术不断提高分离效率和分辨率，以适应更加复杂样品的分析需求；质谱技术在仪器性能、数据处理和生物信息学分析方面得到了进一步提升，为生物学研究和医学诊断带来更多可能性。

未来，双向电泳和质谱技术将继续发展壮大，成为生命科学研究和临床医学应用的重要工具之一。

总结双向电泳和质谱技术作为生物分析领域的重要手段，为生命科学领域的研究和应用提供了有力支持。

通过深入了解双向电泳和质谱技术的原理和应用，我们可以更好地利用这两种技术手段，推动生物学研究的进步和医学诊断的发展。