安捷伦1260HPLC液相流路
Agilent1260液相色谱系统操作规程
Agilent 1260液相色谱系统标准操作及维护保养规程1目的规范 Agilent 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。
2适用范围适用于 Agilent 1260 系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
3职责实验室分析人员负责Agilent 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4系统组成4.1 Agilent 1260系列四元泵(G1311C)和脱气机；4.2 可变波长紫外检测器（ VWD G1314F）；4.3 Chemstation A.01.04色谱工作站4.4 国产柱温箱（ AT-550）色谱柱；4.5 电脑、打印机等辅助设备。
5定义无6操作程序6.1 开机前的准备6.1.1 检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。
6.1.2 检查上次《实验室仪器设备使用记录表》和仪器状态，确认仪器处于正常状态；6.1.3 流动相的制备：6.1.3.1 按《高效液相色谱法流动相配制标准操作规程》配制需要的流动相。
6.1.3.2 用前超声脱气（一般 10～ 20min）。
6.1.4 更换流动相：6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖；6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。
6.1.5 供试溶液的配制：Agilent 1260液相色谱系统标准操作及维护保养规程6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。
6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制 2 份。
6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。
6.1.6 选择色谱柱：6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱；6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。
6.1.7 更换色谱柱6.1.7.1拆卸原色谱柱：先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线；松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线；用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内。
安捷伦HPLC1260简介讲述
•
HPLC各模块的工作原理及维护
检测器—DAD
检测器—DAD
• DAD (Diode Array Detector)二极 管阵列检测器，是以光电二极管
• 阵列作为检测元件的UV-VIS检测器. DAD的光源—氘灯有一定的半衰期， 一般为1000小时左右，所以在没有样 品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘 灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关, 这样也会影响寿命。同时，打开灯需 要预热10min 左右，灯使用时间越长， 预热的时间也要越长。 流动池污染后，会造成灵敏度下降、 噪声加大，应避免脏的样品进入流动 池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持 流动池性能有一定好处。
HPLC各模块的工作原理及维护
关于原理
HPLC各模块的工作原理及维护
关于色谱柱保护
过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。
柱子在不使用时，两端密封保存
在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围
不要高压冲洗柱子
不要高温下过长时间使用硅胶键合相
HPLC各模块的工作原理及维护
Agilent 1260 HPLC 工作原 理及简单操作
10-12-2012
Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作
• 培训目的：
1.了解HPLC各模块的原理； 2. 掌握HPLC各模块日常维护的要点； 3. 掌握开机，关机。
Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 • 内容： 一、 HPLC各模块的原理及维护；
自动进样器
•样品要干净、经过过滤。 洗针：把样品残留降低到最 小限度，可降低进样的记忆 效应，洗针瓶最好不要加瓶 垫。 多次吸液 用于进样量大于100ul
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。
（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀（顺时针）。
（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。
（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。
（4）积分。
从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦 仪器参数1260
安捷伦1260高效液相色谱仪技术参数1 梯度泵*1.1 串联双柱塞往复泵，齿轮传动，20ul-100ul自动连续可变冲程设计；1.2 四元梯度泵可设置的流速范围：0.001–10 mL/min，0.001 mL/min步进；1.3 流速精密度：±0.07%RSD；1.4 整个系统耐压：不小于400bar；1.5 混合精度：< 0.2 % RSD 或< 0.04 min SD，流速1 mL/min；1.6 含柱塞清洗附件。
2 集成在线真空脱气机2.1 在线真空膜过滤技术，内置真空泵，压力传感器，实时监控真空腔压力变化；2.2 4个通道，最大流速每个通道：10 mL/min。
3 自动进样器3.1 进样精度：< 0.25% RSD；3.2 交叉污染：≦0.05%；*3.3 进样瓶容量：不小于100位（2ml样品瓶），可配置扩展样品盘，实现无人值守自动扔瓶功能；3.4 进样范围：0.1 - 100μL，增量为0.1μL；3.5 计量工具：高压流路中采用计量泵；*3.6 具有样品柱前衍生、振荡稀释、复杂程序进样等功能。
*3.7操作压力：不小于600bar4 柱温箱4.1 半导体控温模式，控温范围：室温下10℃ - 80℃，带降温功能；4.2 控温精度：±0.15℃；4.3 控温准确度：±0.5℃；*4.4 柱容量：3根30cm色谱柱4.5色谱柱识别模块，用于GLP记录色谱柱类型，可监测柱子使用情况。
5 高灵敏度可变波长紫外检测器5.1 类型：双光束光路设计5.2光源：氘灯；*5.3最大采样速率：80 Hz；5.4 噪声：在230 nm 处，<±0.25×10-5 AU；5.5 漂移：在230 nm 处，< 1×10-4 AU/小时；5.6 波长范围：190 – 600 nm；5.7 波长准确度：± 1 nm, 氘线灯自动校准。
安捷伦1260操作规程
安捷伦1260操作规程安捷伦（Agilent）1260操作规程一、仪器概述安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。
该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。
二、仪器准备1. 确保仪器的电源已连接并接通。
2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。
3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充，以及是否有足够的溶剂。
三、方法设置1. 打开色谱软件，并选择合适的方法模板。
2. 根据分析需求，在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。
3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。
四、进样操作1. 打开进样器的盖子，将待测样品加入样品瓶中。
2. 点击软件中的进样按钮，设置样品名称和进样量。
3. 将样品瓶放入进样器，并关闭盖子。
4. 点击软件中的进样按钮，开始进样。
5. 进样完成后，从进样器中取出样品瓶，并将它放入垃圾桶中。
五、色谱柱操作1. 打开色谱柱的阀门，并将柱端与色谱柱连接。
2. 检查色谱柱是否没有泄漏，如果有泄漏，则需重新连接。
3. 检查色谱柱的温度，确保它处于合适的温度范围内。
六、液相泵操作1. 打开液相泵的电源，并连接到电脑上。
2. 设置合适的流速和梯度梯度。
3. 点击软件中的启动按钮，开始进行分析。
七、数据分析1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。
2. 根据需要选择适当的数据处理方法，如峰面积计算、定量分析等。
3. 导出分析结果并保存。
八、仪器维护1. 分析结束后，关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。
2. 清洗色谱柱和进样器，保持其清洁。
3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。
九、安全操作1. 在操作仪器时，注意安全，避免接触到有害化学品。
2. 在操作过程中，严禁随意触摸仪器或移动连接线。
3. 在操作过程中，如遇到异常情况，请及时停止分析并向管理员报告。
通过以上操作规程，可以有效地使用安捷伦1260高效液相色谱仪进行样品分析。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260液相操作规程一开机1 打开计算机，登录windows操作系统。
2 打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，出现进样器，泵，检测器，柱温箱四个图标。
若没有出现，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”选项。
二排气1 把各流动相放入溶剂瓶中2 旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流速设到5ml/min，溶剂瓶A设到100％，开泵，排出管线的气体3分钟，柱压＜10bar。
3 依次切换到B,C,D溶剂瓶排气，待排气结束，关泵。
4 将泵的流速设到1.0ml/min，将多元泵设置成做样时的溶剂配比，关闭排气阀（顺时针）。
5 开泵，待柱压稳定后，基线平衡后方可进样。
三设置方法和调用方法1 设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，设定进样量。
在进样模式中输入进样量。
“标准进针”——只能输入进样体积。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置。
2 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“控制”，打开检测器的灯，点击“确认”。
3 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与泵，进样器一致”。
4 紫外检测器参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长。
5 以上模块设置好后，从“方法”菜单中，选中“方法另存为”，输入方法名，点击“确认”。
6 从“方法”菜单中，选择“调用方法”，单击确认。
四设置序列和调用序列1 从“序列”菜单中，选中“序列参数”，选择数据文件路径和输入子目录名称，这样数据会自动保存在指定的文件夹中，方便查找。
2 从“序列”菜单中，选中“序列表”，在样品盘中依次放置好样品，命名样品的名称和批号，选择“方法”，点击“确认”。
3 从“序列”菜单中，选中“调用序列表”，把序列表改好后，点击保存当前序列模板。
点击“文件”，另存为序列模板。
4 点击“进样器”图标上的“序列”或者点击序列表中的“运行”，仪器进样。
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。
2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。
3.有关责任：化验室精密仪器室4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容：5.1开机前准备5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
5.2.采样前准备5.2.1打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。
5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。
5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。
5.2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。
5.2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A 到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
)5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
安捷伦LC1260液相色谱操作规程及使用注意事项
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程㈠开机1．把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2．打开计算机，打开主机各模块电源（从上至下），再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。
3．旋开排气阀（逆时针），右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。
4．依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。
㈡数据采集1. 编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。
2. 编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC（柱箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定：在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置：默认即可。
7. 关闭排气阀（顺时针），冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时（定量环体积为20uL），用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。
安捷伦1260高效液相色谱培训课件
D、选择使用适宜的流动相（尤其是PH值），以避免固 定相被破坏。有时候可以在进样器前面连接一预柱， 分析柱是键合硅胶，预柱为硅胶，可是流动相在进入 分析柱之前预先被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基 质被溶解。
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年 代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技 术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极 为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经 典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏 度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度 高、操作自动化的特点。
•9 •安捷伦1260高效液相色谱培训
E、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接进入柱内， 需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一 个保护柱，保护柱一般是填有固定相的短柱，保护柱可以 经常更换。 F、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质 G、保存色谱柱时应将色谱柱中充满乙腈或甲醇，柱接
•4 •安捷伦1260高效液相色谱培训
2、输液泵的使用和维护注意事项 A、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其他任何杂质 微粒都能磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先 除去流动相中的任何固体微粒； B、流动相不应含有任何腐性物质含有缓冲液的流动相不应 保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如 果含有缓冲溶液的流动相在柱内，由于蒸发或泄漏，甚至 由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体。这些晶粒将 损坏密封环和柱塞等。因此，仪器在关机前必须将泵清洗 干净，再换成适合色谱柱保存的和有利于泵维护的溶剂。 C、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空 泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。 D、输液泵的最高压力不要超过规定的最高压力值，否则会 使高压密封环变形。 E、流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的 稳定。
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：避免使用高粘度的溶剂作为流动相；所选用的流动相一定要与样品相溶；各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
准备工作用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）仪器操作将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。
注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。
先打开计算机登陆windows操作系统，再将仪器的泵、色谱柱、检测器打开，待计算机界面显示连接好后，双击桌面“联机”图标，进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。
（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀（顺时针）。
（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。
（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。
（4）积分。
从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦HPLC1260操作流程
色谱峰实例
mAU 80 70 60 50 40 30 20 10
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 ,4 R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J 2 0 1 5 -0 3 -2 4 1 1 -3 1 -1 6 \V P A -2 0 1 5 0 3 2 4 0 0 1 .D )
安捷伦HPLC1260操作流程
仪器的组成 操作前准备 开机及关机 工作站使用 数据分析 注意事项
安捷伦HPLC1260操作流程
主体 安捷伦1260HPLC 流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、 二极管阵列检测器
附件 电脑、显示器、打印机等
安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦1260HPLC 流动相瓶 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器
流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改 变，时间久了柱子填料会坍陷或松动，最终柱 压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变 流速。
安捷伦HPLC1260操作流程
仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h， 流量1.0mL/min，再用100甲醇冲洗0.5h；
安捷伦HPLC1260操作流程
开机时，打开排气阀，设置流动相为100%水， 泵流量5.0mL/min，若此时显示压力＞10bar， 则应更换排气阀里的过滤白头。
安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦HPLC1260操作流程
流动 相瓶
排气阀
关电 源 开
四元泵 自动进样器
灯指 示
色谱柱
安捷伦HPLC1260操作流程
二极管阵列 检测器
柱温箱
流动相选择 流动相过滤 流动相超声与脱气 流动相冷却
Agilent 1260 HPLC 简明操作步骤
Agilent 1260 HPLC 操作规程开机：打开电脑，打开液相色谱各个模块的电源，双击桌面“LC1260(联机)”,进入联机界面排气：手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈），调节流速，开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止；设置流速为0，旋紧冲洗阀；按照方法的要求设置温度，波长；打开柱温箱和检测器。
参数设置：新建或调用方法，设置泵参数，流速，流动相比例，停止时间等；设置自动进样器参数，设置其他参数保存方法文件设置数据保存方案上样：待基线平稳后选择单针进样或序列进样关机：样品分析完成后，冲洗色谱柱和系统，让色谱柱中充满有机相，两端封闭保存。
退出化学工作站及其它窗口，关闭计算机；关闭Agilent 1260各模块电源开关数据处理：调出样品谱图，进行分析仪器使用注意事项1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行.勿使用多日存放的蒸馏水.2. 在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,下面阀A/D接水相/盐溶液,C/B 接有机溶剂.使用盐时脱气机易堵,可将管路入口与出口反接,用60摄氏度的温水反冲,用针筒缓慢吸200mL左右.3. 流动相瓶中的滤头脏.压力波动,可将滤头拔下,检查是否与滤头有关.滤头污染,可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或过夜,看污染程度,最后用水冲洗干净,重新装好.4. seal-wash 用10%的异丙醇.使用缓冲盐时要加seal-wash选项,周期清洗.5. LAN与CAN不能串联,LAN接仪器,PC.CAN为模块间通讯.6. 柱温箱选择3uL,减少死体积,延迟体积.7. 液相上各种灯颜色.电源打开后,四个模块左侧灯亮绿色.状态指示灯位于各自模块的右上方：呈黄色：该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检.呈绿色：该仪器正在运行,采集数据(Run).无颜色：该仪器已准备好等待运行(Pre-run).呈红色：该仪器检测到有故障发生,仪器在错误状态,红色多发生于漏液时.8. 过滤白头位于排气阀内,当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了.判断的方法是：打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了.如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的.9. 毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红；0.25mm内径-------蓝PEEK 管线：内径-----0.18mm.10. 灯能量测试,先将灯预热,用水平衡系统.启动Agilent Lab advisor 进行测试.启动软件connect（界面右上部分）Service&Diagnostics（左侧导航栏）选择G4212B Intensity Test Run 查看结果.11. 柱子存放：柱子填充乙腈或甲醇,两端堵头封存,每一个月重新使用乙腈或甲醇,填充封存。
安捷伦1260液相色谱仪技术参数
一、产品介绍Agilent 1260液相色谱仪Agilent 1260液相色谱仪将最新色谱柱技术与先进备件完美结合，确保实现稳定的分离和稳健的检测性能。
轻松的色谱柱操作，出色的样品流程，从样品提交到数据分析都能确保快速的周转时间和最高的仪器利用率。
无缝的方法转移和逐步升级的方式有助于对现有架构进行零风险整合，在预算范围之内实现无干扰的方法转移，并获得最高的性能。
二、仪器配置原装色谱工作站软件，四元泵/ G1311C ，自动进样器/G1329B，柱温箱/G1316A，在线脱气机，紫外检测器/G1314F，示差检测器/G1362A三、技术参数：1 梯度泵1.1 串联双柱塞往复泵，齿轮传动，20ul-100ul自动连续可变冲程设计；1.2 四元梯度泵可设置的流速范围：0.001–10 mL/min，0.001 mL/min步进；1.3 流速精密度：±0.07%RSD；1.4 整个系统耐压：不小于400bar；1.5 混合精度：< 0.2 % RSD 或< 0.04 min SD，流速1 mL/min；1.6 含柱塞清洗附件。
2 集成在线真空脱气机2.1 在线真空膜过滤技术，内置真空泵，压力传感器，实时监控真空腔压力变化；2.2 4个通道，最大流速每个通道：10 mL/min。
3 自动进样器3.1 进样精度：< 0.25% RSD；3.2 交叉污染：≦0.05%；3.3 进样瓶容量：不小于100位（2ml样品瓶），可配置扩展样品盘，实现无人值守自动扔瓶功能；3.4 进样范围：0.1 - 100μL，增量为0.1μL；3.5 计量工具：高压流路中采用计量泵；3.6 具有样品柱前衍生、振荡稀释、复杂程序进样等功能。
3.7操作压力：不小于600bar4 柱温箱4.1 半导体控温模式，控温范围：室温下10℃ - 80℃，带降温功能；4.2 控温精度：±0.15℃；4.3 控温准确度：±0.5℃；4.4 柱容量：3根30cm色谱柱4.5色谱柱识别模块，用于GLP记录色谱柱类型，可监测柱子使用情况。
标准安捷伦1260液相色谱仪操作规程
安捷伦1260液相色谱仪操作规程一、 仪器开机1、更换流动相（水需要超纯水，有机试剂需要色谱纯），其中水需要每次使用时更换，有机试剂长时间不用也需要更换2、开机：打开电脑、打开液相所有模块电源、点击电脑桌面上的工作站联机图标3、打开工作站上的所有电源，待其就绪（所有灯变绿）4、拧开排空阀，四元泵里设置流速5 ml/min，A 100%；3分钟后，设置B 100%；3分钟后设置流速至合适流速，关闭排空阀二、 运行样品1、新建方法或调用已有方法2、设置方法参数四元泵：设置流速、流动相比例、采集时间，若需梯度则设置梯度，确定自动进样器（ALS）：设置进样量，确定柱温箱（TCC）：设置柱子温度，确定紫外检测器(VWD)：设置紫外波长，确定设置好后保存方法3、在线信号中点击“改变”，可添加泵的压力，以及VWD的信号4、等待系统平衡，所有灯变绿，泵的压力稳、VWD的信号稳定（约20分钟）5、进样：（1）单针进样：运行控制—样品信息，设置进样位置，保存路径等后运行方法（2）序列进样：序列—序列参数，编辑保存路径；序列—序列表，编辑序列表，然后运行序列6、待仪器自动停止分析（四元泵中已设置采集时间）或手动点击“停止”图标（四元泵中未设置采集时间）三、 关机1、冲柱流动相中含缓冲盐：先用10%甲醇、90%水冲30分钟，再用90%甲醇、10%水冲30分钟（四元泵里设置比例）后关机流动相中不含缓冲盐：用90%甲醇、10%水冲30分钟（四元泵里设置比例）后关机2、关机关闭各模块，关闭仪器电源，关闭工作站，关闭电脑四、 数据处理1、调用需要处理的信号2、自动积分，或者手动积分，删除不要的峰3、打印面积百分比结果，记录每个峰的峰面积、保留时间，在excel中用已知浓度（标准样品）的峰面积作工作曲线，得到工作曲线方程4、未知样品的峰面积来算得其浓度。
安捷伦高效液相操作规程
安捷伦1260高效液相操作规程一开机1)打开计算机，登陆windows操作系统。
2)打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。
3)把各流动相放入溶剂瓶中。
4)旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到3ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头）5)依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
6)将泵的流量设到0.8ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）7)再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1.0ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。
8)把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。
二数据采集方法编辑1)编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2)编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
3)四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1ml/min，在“溶剂”处选中B 输入18%（A=100-B-C-D），在右面注释栏中标明和溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：400bar,在”时间表“添加编辑梯度。
4)进样器参数设定：在进样模式中输入进样量xxul。
“标准进针”——只能输入进样体积此方式无洗针功能。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置为XX，此方式针从样品瓶抽完样品后在洗瓶中洗针。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。
3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。
4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。
6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。
7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。
二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。
若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。
在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。
点击“确定”进入下一参数设定。
(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。
(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。