Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作 PPT课件

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安捷伦1260高效液相操作规程

安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。

如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。

流动相选择注意事项：①避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②所选用的流动相一定要与样品相溶；③各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.准备工作①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。

注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。

Agilent1260基本操作方法PPT课件

2021/将3/9当前窗口中的谱图拷贝到剪贴板中
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在图谱上添加文字标注
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在图谱上添加线形标注
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在图谱上添加EMF格式的图形标注
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2.514 2.901 3.246
4.027 4.513
根据预实验确定采集时间
10
20min 40min 60min 80min
MeOH 20 40 40 80
H2O 80 60 60 20
40′
80′ 60′
0′
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②仪器/采集-设置进样器
标准：0.1～100μL
前一针样品运行过程中，把下一针的样品瓶抓取到针座
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DAD高级功能
利用等吸收图优化色谱条件
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反选后最亮处表示吸收最集中，即最大吸收。
参比波长：选择样品无吸收，且靠近样品吸收处。
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DAD高级功能色谱峰纯度检索
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纯色谱峰的纯度因子将高于阈值不纯峰的纯度因子将低于阈值
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1.814
2.514 2.901 3.246

AgilentInfinity高效液相仪基本操作(共27张PPT)

（六）、检测器
（六）、检测器
（六）、检测器
氘灯的使用注意事项：
1、开灯后需预热，新灯大概需要十几分钟的预热时间，如果灯的使用时间已经很长则预热时间也需适当延长。
2、不用频繁开关氘灯，否则影响寿命。
3、氘灯为消耗品，寿命为2000小时左右。 4、氘是一种衰变的元素，不建议提前购买氘灯作为储备消耗
（一）2、、溶剂冲柜洗阀中PTFE（聚四氟乙烯）过滤芯的作用：过滤流动相中密封
（4）微量多孔板自动进样器
常①用作的用分：析过垫泵滤有流落单动元相下泵中、的的二颗杂元粒泵物质和、四微以元生泵物及。等杂密质封。垫磨损下来的碎屑。
不锈钢滤头可用异丙醇超声。（六）、检测器（六）、检测器４、荧光检测器（FLD） 3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙醇或温水或牙膏洗，软布擦。３、示差折光检测器（RID）２、二极管阵列检测器（DAD）
二元泵前视图
二元泵工作原理示意图
泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系所使用的密封垫不同。
实验室中应至少备有一对泵头密封垫。 2、泵头密封垫可用10%异丙醇水溶液定期清洗，防止无机盐溶液析出
的盐过多，造成过早过快磨损。
3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙醇或温
品。
参考资料
官网：安捷伦科技大学-关于Agilent-售后服务在中国-产品技术
支持。
l
水或牙膏洗，软布擦。
冲洗阀中的过滤芯
其3、中氘，灯1B为型、消：耗打60品0b开，ar寿冲命为洗200阀0小时，左右以。水为溶剂，流速5ml/min,系统压力大于10bar应
四元泵前视图
（２4、）二微极量管多该阵孔列更板检自测换动器进冲（样D洗器AD）阀中的过滤芯。

高效液相色谱仪使用的综合(仪器分析课件)

G1312B(二元泵)
可在泵的条件设置中,
输入所用流动相的种类,并通过独立的安捷伦LC诊断软
件对单个溶剂进行泵校正
溶剂---溶剂B、C和D的百分比可以设置为 0到100%之间的任何值。“溶剂A”通常输送剩余的量:100%-(%B+%C+%D) 时间表---此处设置同二元泵
G1313A(标准型自动进样器),G1329B(自动控温自动进样器) 设置进样器右键点击进样器模块视图的空白处,选择“方法”后进入进样器的参数设置界面
下面步骤如果已经配置过,则不需要操作通过点击菜单左上方的仪器,得到如下的界面
进可以分别创建位置和
输入相关信息,注意仪器类型一栏要选择 AGILENT LC SYSTEM,,输入完后点击确定。出现如下界面
选定刚刚创建的仪器名称,点击“配置仪器”选择“配置模块”,注意不要选择“使用经典驱动程序”。如果仪器中包括DAD、FLD,则需要选择“3D光谱评估”。点击确定
G1312X(二元泵), 冲洗A、B两个通道;对于G1310X(单元泵),冲洗一个通
道即可
开启模块:鼠标右键点击每个模块的空白都会弹出提示框,选择“控
制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模。也可在仪器视图
中选
“打开”
监视基线:点击“视图>在线信号”打开“在线图谱
点击“改变”按钮,选择“可选信号”中需监视的信号,“添加”到“选定信号中”。调整“窗口”中“X周范围”,如需要画“0”点基线,请选择“画零线”。调整Y轴 “Y轴范围”与“偏移量”或者选择“Y轴自动调整”来选择合适的监视图形
控制右键点击泵模块视图空白处,选择“控制”进入泵的控制界面
泵一控制泵的“启动”,“关闭”或者“待机”状态泵密封垫清洗组件(选配)一控制泵密封清洗蠕动泵的开关以及定期开关的程序

Agilent1260高效液相仪器的基本认识与使用注意事项ppt课件

2
必须更换
蠕动泵：用于seal wash,通常漏泄两个部位，上面漏液一般需更换软管，下面漏液多为连接松动
压力波动：当系统压力波动变大时，常见原因有两种。
1.流动相内有气泡，如未超声，滤头内存有气泡。。
2.图中两个单向阀脏污或损坏
如不是以上两种原因，则需其他的排查
样品盘：在样品盘取出后我们可以看到图中标记位置的三个白色的点，此处不可用手触摸，此为识别标识，若有损坏或脏污可能影响样品的识别。
1.Purge压力：应小于10bar，超过10bar则必须找管理员进行更换滤芯 2.二通压力（连接在线过滤器+检测池）：一般15bar左右 3.当发现系统压力异常时：我们首先应使用从下到上逐个部分断开排除法，察找压力异常部分，再根据情况进行解决
光线入口光线通道毛细管出器：我们将在线过滤器装在检测池前，能够尽可能的保护我们的流通池，以免堵塞。（此款在线过滤器100%甲醇通过是的压力大概3-4bar, 如超过5bar，说明滤芯脏污，低于2bar则应考虑是否滤芯破损）滤芯：过滤器内的滤芯脏污后可以用甲醇或异丙醇进行超声清洗，仔细观察我们会发现滤芯的其中一面有一个凹槽，我们统一将凹槽的方向朝着进液的方向安装不锈钢连接管线：与上面提到的管线类似，不可频繁弯折，以免折断
不锈钢接头和管线：在液相仪器上经常有使用图中标记的这种不锈钢管线和接头。尤其是柱温箱中的此处管线发生断裂最多。原因无非是此处我们经常拆装柱子，弯折次数最多，且有部分使用人员下手太重。
流通池：此款1260检测器的流通池缺点较为脆弱，易堵，有点为较为灵敏；在标记区域内，可以看到，流通池的耐压是60bar，流通池内体积1微升。当流通池堵塞时我们可以进行适当反冲，反冲压力为40bar

安捷伦HPLC1260操作流程ppt课件

逐步增大流速检查压力稳定后打开检测器
稳定后清洗针与管路
跑基线
保存数据
冲洗管路及关机
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关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇）冲0.5小时，然后保存方法和仪器设置。
退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。做好仪器使用登记。
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进入工作站主界面方法和各模块参数设置跑基线样品命名与进样检测
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进入工作站
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主界面
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方
法
在各模块中空白处点击右键，选择 “方法”编
辑参数。
和各模块参数
设
置
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1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同
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滤膜
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流动相超声与脱气为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线
噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声30min左右。
对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。
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流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水
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标准品
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m in
1 环己烷羧酸
2 丙戊酸钠
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患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
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m in

Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作课件

学习交流PPT
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（四）、进样器
（1）标准自动进样器G1319B
（2）高性能自动进样器G1367E
学习交流PPT
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自动进样器进样过程（1）
进样前，六通阀切换到旁路位置，来自泵的溶剂进入端口1、6直接
流到色谱柱。
学习交流PPT
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自动进样器进样过程（2）
进样开始后，取样针抬起，把样品瓶抓至针座上，取样针扎入样品瓶，
学习交流PPT
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（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、二元泵和四元泵。其中， B型：600bar C型：400bar
学习交流PPT
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四元泵前视图
学习交流PPT
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四元泵的工作原理示意图
学习交流PPT
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二元泵前视图
学习交流PPT
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二元泵工作原理示意图
学习交流PPT
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泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系所使用的密封垫不同。
Agilent1260高效液相色谱仪硬件简介
学习交流PPT
1
目录
一、组成部分二、工作原理三、安装与维护
学习交流PPT
2
一、组成部分
（一）、溶剂柜（二）、脱气机（三）、泵（四）、进样器（五）、柱温箱（六）、检测器
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
学习交流PPT
3
仪器的安装
连接线： ①电源线 ②LAN线 ③CAN线 ④遥控线
３、示差折光检测器（RID）
４、荧光检测器（FLD）
５、蒸发光散射检测器（ELSD）
其中，选择性检测器：VWD、 DAD和 RID；
通用型检测器： FLD学、习交E流LPSPTD。

Agilent 1260 Infinity 高效液相仪基本操作

4、氘是一种衰变的元素，不建议提前购买氘灯作为储备消
耗品。
参考资料
官网：安捷伦科技大学-关于Agilent-售后服务在中国-产品技术支持。
/article/2/1524.html
（一）、溶剂柜
问题：液相储液瓶中滤头的作用？注意事项？
①作用：过滤流动相中的颗粒物、微生物等杂质。 ②注意事项： a、玻璃滤头不能超声；不锈钢滤头可用异丙醇超声。 b、滤头应定期（每三个月）更换或清洗。
（二）、脱气机
１、分类：有内置和外置两种类型。２、工作原理：见下图。
（三）、泵
常用的分析泵有单元泵、二元泵和四元泵。其中， B型：600bar
C型：400bar
四元泵前视图
四元泵的工作原理示意图
二元泵前视图
二元泵工作原理示意图
泵头维护注意事项
1、泵头密封垫需要成对更换，反相体系和正相体系
用的密封垫不同。实验室中应至少备有一对泵头密封垫。 2、泵头密封垫可用10%异丙醇水溶液定期清洗，防止无机盐溶液析出的盐过多，造成过早过快磨损。 3 、活塞杆采用人造单晶蓝宝石材料，不能超声清洗,用乙醇或温水或牙膏洗，软布擦。
所使
冲洗中的过滤芯
1、打开冲洗阀，以水为溶剂，流速5ml/min,系统压力大于
10bar应该更换冲洗阀中的过滤芯。
2、冲洗阀中PTFE（聚四氟乙烯）过滤芯的作用：过滤流动相中密封垫落下的杂质以及密封垫磨损下来的碎屑。
（四）、进样器
1、分类：有手动和自动进样器两种。其中，自动进样器又包括：（1）标准自动进样器
（2）高性能自动进样器
（3）双通道自动进样器（4）微量多孔板自动进样器（5）制备型自动进样器 2、工作原理：

安捷伦1260高效液相色谱培训课件

C、一般情况下色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去柱内杂质，否则反冲会迅速降低柱效。
D、选择使用适宜的流动相（尤其是PH值），以避免固定相被破坏。有时候可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶，预柱为硅胶，可是流动相在进入分析柱之前预先被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。
•9 •安捷伦1260高效液相色谱培训
E、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接进入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱，保护柱一般是填有固定相的短柱，保护柱可以经常更换。 F、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质 G、保存色谱柱时应将色谱柱中充满乙腈或甲醇，柱接
•4 •安捷伦1260高效液相色谱培训
2、输液泵的使用和维护注意事项 A、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其他任何杂质微粒都能磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒； B、流动相不应含有任何腐性物质含有缓冲液的流动相不应保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果含有缓冲溶液的流动相在柱内，由于蒸发或泄漏，甚至由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体。这些晶粒将损坏密封环和柱塞等。因此，仪器在关机前必须将泵清洗干净，再换成适合色谱柱保存的和有利于泵维护的溶剂。 C、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。 D、输液泵的最高压力不要超过规定的最高压力值，否则会使高压密封环变形。 E、流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定。

高效液相色谱仪的基本操作和使用42页PPT

谢谢！

45、法律的制定是为了保证每一个人自由发挥自己的才能，而不是为了束缚他的才能。—— 罗伯斯庇尔
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学，如日中之光；志而好学，如炳烛之光。 ——刘向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好的教师是幸福，不如说好的教师是不幸。 ——海贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦。——杰纳勒尔·乔治·S·巴顿
高效液相色谱仪的基本操作和使用
41、实际上，我们想要的不是针对犯罪的法律，而是针对疯狂的法律。 ——马克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就像影子跟随着身体一样。— —贝卡利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进步。— —杰弗逊 44、人类受制于法律，法律受制于情理。— —托·富勒

安捷伦1260液相操作规程

安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。

3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。

将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。

4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。

5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。

6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。

7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。

二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。

若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。

在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。

点击“确定”进入下一参数设定。

(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。

(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。

在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。

Agilent1260HPLC工作原理及简单操作课件

HPLC各模块的工作原理及维护
泵的注意事项
1 ，溶剂的过滤、脱气； 2 ，避免使用腐蚀性溶剂；
3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速—较低的系统压力。
4，更换过滤白头； 5，考虑溶剂的相容性；
• 四元泵：
四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、 D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水； B、C通道：有机溶剂； D通道：缓冲溶液。
• 内容：
一、 HPLC各模块的原理及维护；二、开机/关机操作；
三、讨论；四、评估。
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一、 HPLC各模块工作原理及维护
HPLC：高效液相色谱仪(High Performances
Liquid Chromatography)。由储液器、泵、进样器、色谱柱、检
测器、记录仪等几个部分组成。工作时储液器中的流动相被高压泵打
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HPLC各模块的工作原理及维护
检测器— DAD
19
HPLC各模块的工作原理及维护
检测器— FLD
• FLD(Fluorescence Detector) 荧光检测器：是利用某些溶质在受到紫外光激发后，能发射可见光
(荧光)的性质来检测的。 •FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。 •其流通池和DAD的一样，也要定期用异丙醇冲洗，以保证性能。
入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。