-安捷伦液相色谱培训教材

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混合中出现流动相不稳定的现象,特别是流动 相配比较低的如小于1%,其多元混合效果难以 达到我们的要求,造成保留时间漂移,甚至得 不到我们预期的色谱峰。明白四元泵的低压混 合的道理,实际操作中我们发现问题时,有助 于我们对原因的分析。
必要时泵可以拆御,更换密封垫及滤芯。 对容易出故障部位及处理方法,比如宝石
地执行用户的进样程序要求,如多种样品自动 混合,自动进样等高级功能的自由设置,但是, 由于进样针的扩散,所以进样量越小,受到扩 散的影响也越大,所以自动混合的准确度还是 难以达到容量瓶的混合方式。这在做标准由线 时得注意的问题,如为定量则不推荐小样量的 混合方式。
程序进样方式设置如下图:
第一步:设置进样 器
Agilent1200 高效液相色谱仪工作站 学习总结
生测室 颜栋林
开首语
本人在2008年1月8日至1月11日参加广州 安捷伦科技有限公司的1200高效液相色谱仪 化学工作站的学习培训,几天学习培训,使 我对1200液相色谱仪的硬件及软件有了更全 面的了解和更多的认识,现在做个总结向大 家介绍如下。
四元泵,其实就是比单元泵多了四元比例阀。 由单元泵可以升级到四元泵,除了要加上四元 比例阀外,还要更换主板。需要注意的是,当 使用盐溶液和有机溶剂时,建议将盐溶液接到 四元比例阀下面的通道上,有机溶剂接到上面 的通道上。如果经常使用盐溶液,建议定期用 水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐 沉淀。
二元泵的工作原理
进样器,安捷伦1200系列进样器有: 标准自动进样器G1329A、 高性能进样器G1367A、 高性能进样器SL型G1367B、 手动进样器G1328B。
自动进样器的特殊功能,洗针功能可以把 样品残留降低到最小限度;多次吸液用于进样 量大于100μl的情况;程序进样可以非常灵活
活塞杆是不能超声的部件,泵头密封垫要成对 更换,实验室中至少应备有一付4号泵头密封 垫,部件号为:5663-6589(用于反相色谱); 0905-1420(用于正相色谱)。同时实验室应备 有5-10个PTFE过滤芯,以备日常所需。判断方 法为,打开冲洗阀,以水为溶剂,流速 5ml/min,系统压力大于10bar就应更换过滤白 头了。
可以利用诊断方式来检测氘灯的能量,当然, 发现氘灯能量降低时不要马上得出氘灯应该更 换的结论,这也许是流通池脏或有气泡造成的 能量降低,所以必须用诊断方式检测流通池。 诊断结果大于0.6说明流通池很干净,小于0.2则 说明流通池该清洗了。更换氘灯后要在诊断日 志中填写更换氘灯,这样氘灯的使用时数便从 零开始。
硬件篇
安捷伦高效液相色谱仪1200由几部分 组成,脱气机,泵、进样器、柱温箱和检测器。 安捷伦1200HPLC系统采用积木式堆积结构,方 便用户按照自己的需要配置不同的的系统,整 个系统的流路自上而下设计、连接,减小了系 统的死体积和延迟体积。
Agilent 1200HPLC系统堆叠方式
脱气机 安捷伦1200系列在线脱气机有,微量真空
第二步:使用进样器程 序(U)
第三步:更多信息(功能项)
对于手动进样器,必须了解六通阀的工作原理, 应特别注意的是进样量少于定量环的50%或大 于定量环的3-5倍量是比较准确的,不过,大家 用自动进样器已经习惯了,如果再用回手动进 样器会不会有些郁闷?会不会有一种坐惯了宝 马又要回到踩单车的感觉?
四元泵的工作原理
二元泵,有两个泵头,特点是高压混合,无需 脱气;对于有强紫外吸收的流动相,使用静态 混合器可以降低基线噪声;可以选择溶剂切换 阀自动进行溶剂切换;对于高盐流动相,可选 择泵头密封垫清洗装置。所以脱气机不是标准 配置,但增加真空脱气机,流量范围可以从 0.5~5ml/min扩展至0.05~5ml/min;加入静态 混合器,使流动相混合更加均匀;如果配置
柱温箱,使用安捷伦柱温箱可以保证柱的稳 定性,从而保证了保留时间的重现性。恒定的 柱温特别是日温差大的时候更为必要。
检测器,安捷伦1200系列检测器有,可 变波长检测器G1314B、二极管阵列检测器 G1315B、二极管阵列检测器SL型G1315C、示 差折光检测器G1362A、荧光检测器G1321A。 本所用的是VWD的G1314B型,DAD型及FLD的就 不多说了。对VWD型检测器应了解它的工作原 理,氘灯的使用维护及更换。需要注意的是, 使用中不要频繁的开关氘灯,否则影响氘灯 的寿命。
溶剂切换阀,则两个泵头可分别控制两种溶剂, 类似四元比例阀,但并不完全一样,只能同时 混合两种溶剂,不可实现四种溶剂的同时使用。
二元泵为高压泵,为后混合式,精度更高, 而且由于为高压混合,产生的气泡也更少,所 以价格也比四元泵贵得多。四元泵为低压泵, 流速稳定性相对较差,低压混合容易产生气泡, 在实验中常会遇到这样的问题,多元
真空脱气机脱气原理
泵 安捷伦1200系列泵有: 单元泵:G1310A、 四元泵:G1311A、 二元泵:G1312A、 二元泵SL型:G1212B。
单独一个泵腔无法满足溶剂传输系统的要 求:连续性、稳定性都不符合标准,现在新购 仪器中已很少考虑。
单元泵,按溶剂的传输系统有两种,一种是并 联柱塞泵,另一种是串连柱塞泵。并联柱塞泵 由于两个泵的相位不同,可以补偿流量脉冲, 但由于单向阀的数量增多,所以容易造成泄漏, 增加了维护使用的难度。串连柱塞泵左泵腔的 活塞运动速度为右泵腔活塞的2倍,因此,相同 时间内,左泵提供的流量为右泵的两倍,左泵 提供的溶剂一半直接供给系统,另一半被右泵 吸入,稍后供给液相系统,减少了单向阀的用 量,可以使用压缩因子补偿。
脱气机G1379B、标准真空脱气机G1322A。原理 基本相同,就是使用半透膜管路,允许气体分 子通过,液体分百度文库无法通过。A型用的是微渗 管,B型用的是滤膜。流路A型是左进右出,而 B型为下进上出,本科室使用的为A型G1322A。 使用真空脱气机可以降低噪声,保证保留时间 的重现性,与He脱气相比,更方便,更节省费 用。
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