高考生物总复习第一单元有机体中的细胞第一章细胞概述第3节测定微生物的数量课件中图必修1

2.检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数 (1)细菌总数通常是指1 g或1 mL检测样品中 所含细_菌__菌_落______的总数,单位用cfu/g(mL) 表示。
(2)大肠菌群数通常是指每100 g或100 mL检 测样品中所含大肠菌群的实验数值，以 (MPN)表示。大肠菌群是37指在____℃条件下， 24 h内能发酵乳_糖_____，产酸产气的一需类___ 氧或兼_性_厌_____氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌的 总称。大肠菌群数的检测，多常管用发酵 __________法，使用乳糖胆盐伊蛋红白－胨美培蓝养 基、___________琼脂培养基(EMB培养基) 和乳糖发酵管。
2.间接计数法(活菌计数法) (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养 基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液 中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数， 就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)操作 ①设置重复组,增强实验的说服力与准确性。 将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三 个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制 备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂 布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养 计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同 一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上, 经涂布、培养，计算出菌落平均数。
第3节 测定微生物的数量
学习导航 1.概述微生物计数的基本方法。 2.运用稀释平板法测定样品中微生物的数量。 [重、难点]
新知初探思维启动
一、直接计数法 1.常用方法：显微镜直接计数法。 2.具体步骤：将待测样品制成悬液→取一定 量的悬液放在显微镜下进行计数→观察并计 算出单位体积内的微生物总数。

(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是 这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液 加入计数板进行计数，并记录数据；②把酵 母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样 计数，记录数据，统计分析绘成曲线。 请纠正该同学实验操作中的3处错误： ① _______________________________ _______ _______________________________
要点突破讲练互动
要点一 直接计数法和间接计数法的比较 1.显微镜直接计数法 (1)原理：利用特定细菌计数板或血细胞计 数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微 生物的数量。
(2)方法：用计数板计数。计数板是特制的 载玻片，其上有特定的面积为1 mm2，高为 0.1 mm的计数室，一个计数室又被分成25 个(或16个)中格，每个中格再被划分成16个 (或25个)小格，每个计数室都由400个小格 组成。
(2)取样及倒平板：每个号码设置__3个重复。 (3)培养。 (4)观察记录 ①计数时对于细菌、放线菌、酵母菌以每个 培养皿内有__3_0_～_3_0_0___个菌落为宜。霉菌 以每个培养皿内有1_0_～_1_0_0_____个菌落为宜。
②同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不要 太悬殊。 ③计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品 菌数 ＝细某菌稀 培养 释倍 时数所的 用的 菌落 稀平释均 液体 数积×稀释 倍数。
②为了保证结果准确，要选择一个合适的稀 释倍数，且同一稀释倍数的各个重复组菌落 数要相近，若设置的重复组中结果相差太远, 意味着操作有误，需重新实验。 (3)优点：能观察菌落特征。
例1 在探究培养液中酵母菌种群数量变 化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进 行直接计数。计数板是一个特制的可在显微 镜下观察的载玻片，样品就滴在计数室内。 计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液 体总体积为0.1 mm3。某同学操作时将1 mL 酵母菌样品加99 mL无菌水稀释，用无菌吸 管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻 片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。
2.具体步骤：需要将待测样品配制成均匀的 _系__列_稀__释_液_____ 并 使 其 均 匀 分 布 于 平 板 中 的培养基内，经过培养后，统计培养基中出 现的_菌_落__数____,即可推算出检测样品中的活 菌数。 3.优点：在样品中含菌数__较_少____的情形下 也可以完成计数。
判一判 (1)在用直接计数法测量培养瓶中酵母菌时， 应在培养液静置一段时间后，从瓶底部吸取 液体样本。(×) (2)用稀释平板计数法，通过观察菌落，得 出的数值往往比实验值要大。(×) (3)在计数时，用于培养的器皿要进行灭菌。 (√)
3.土壤中分解尿素细菌的计数 有些细菌含有__尿_素__分_解____酶，能将尿素琼 脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变 成氢氧化铵，导致培养基变成__碱__性，使 酚红指示剂呈现__红__色。
想一想 土壤有“微生物的天然培养基”之称，为什 么？ 【提示】 由于土壤具备了各种微生物生长 所需的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压 和温度等条件，是微生物生活的良好环境。 对微生物来说，是微生物的“大本营”；对 人类来说，是最丰富的“菌种资源库”。
三、间接计数法实例
1.土壤中好气性细菌的计数 (1)制备土壤稀释液 取土壤表层__5_c_m_～_1_0_c_m____处的土样。准 确称取1 g土样，放入盛有__9_9mL无菌水的 锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释 液。然后进行系列稀释，得到103、104、 105、106的系列稀释菌液。
所需设备_简__单__，可迅速得到结果 3.优点
能观察到微生物的__形__态__特__征__ 4.缺点：难以计数_微__小___的细菌。 5.适用范围：一般适用于纯培养悬浮液中各种 _单__细_胞__菌_体_____的计数。 二、间接计数法 1.常用方法：_稀_释__平__板_计__数_法______。
(3) 操 作 ： 将 稀 释 的 样 品 滴 在 计 数 板 上 ， 盖 上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格 中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平 均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含 的细菌数。 (4)计算公式 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数 ×400×10000×稀释倍数 (5)缺点：不能区分死菌与活菌。