17微生物细胞数量的镜检计数法

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微生物数量检查方法及其验证报告(修改)

微生物数量检查方法及其验证报告(修改)引言本报告旨在介绍微生物数量检查方法及其验证过程。

微生物数量检查是确定产品或样品中微生物数目的重要步骤，对于保证产品质量和安全至关重要。

本报告将详细描述常用的微生物数量检查方法以及相应的验证过程。

微生物数量检查方法1. 蓝斯菌落计数法（LBC法）蓝斯菌落计数法是一种常用的微生物数量检查方法，特点是操作简单、成本低廉。

该方法主要通过将待测样品均匀涂布在琼脂平板上，培养并计算形成的菌落数量来确定微生物的数量。

2. 膜过滤法膜过滤法是另一种常用的微生物数量检查方法，适用于水样等液体样品。

该方法通过将待测样品通过微孔膜过滤器，将微生物捕获在膜上，然后将膜放置在固定培养基上进行培养，最后统计菌落数量来确定微生物的数量。

3. 流式细胞术流式细胞术是一种现代化的微生物数量检查方法，能够快速准确地测定微生物数量。

该方法通过将待测样品与荧光染色剂结合，利用流式细胞仪进行检测，并通过计算机软件进行数据分析，得出微生物数量的结果。

微生物数量检查方法验证为了保证微生物数量检查方法的准确性和可靠性，在使用前需要对其进行验证。

以下是一些常用的验证项目：1. 精密度：通过重复测试同一样品，验证方法的重复性和一致性。

2. 线性：通过测试不同浓度的微生物样品，验证方法的线性关系。

3. 灵敏度：通过测试不同浓度的微生物样品，确定方法的检测限和灵敏度。

4. 特异性：通过测试不同微生物种类的样品，验证方法对于特定微生物的识别和检测能力。

验证过程应严格按照相关规章制度进行，并记录所有实验结果和分析。

结论微生物数量检查方法是保证产品质量和安全的重要步骤。

本报告介绍了蓝斯菌落计数法、膜过滤法和流式细胞术作为常用的微生物数量检查方法，并介绍了相关的验证项目。

通过严格进行方法的验证，可以保证微生物数量检查结果的准确性和可靠性。

微生物大小的测定及显微镜直接计数法

微⽣物⼤⼩的测定及显微镜直接计数法微⽣物学实验报告姓名年级班级组别⼀组同组者科⽬微⽣物题⽬微⽣物⼤⼩和数量的测定仪器编号⼀、⽬的要求1．学习并掌握使⽤显微镜测微尺测定微⽣物⼤⼩的⽅法。

2．了解⾎球计数板的构造、明确其计数原理。

3．学习并掌握使⽤⾎球计数板测定微⽣物细胞或孢⼦数量的⽅法。

⼆、基本原理l．显微测微尺可⽤于测量微⽣物细胞或孢⼦的⼤⼩，包括镜台测微尺和⽬镜测微尺两个部件。

镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。

⽤于校正⽬镜测微尺没⼩哥的长度.⽬镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的⼩格.测量前应预先⽤镜台测微尺来校正并计算出在某⼀放⼤镜下,⽬镜测微尺每⼩格所代表的实际长度,再以后作为测量微⽣物细胞的长度.⽬镜测微尺每格长度（µm）=（两重合线间镜台测微尺格数x10）/两重合线间⽬镜测微尺格数2.球菌⽤直径表⽰⼤⼩；杆菌⽤宽和长来表⽰µm图⼀：测微尺的校正3．显微直接计数法：将⼩量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的⼀种简便、快速、直观的⽅法。

显微计数法适⽤于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢⼦等。

菌体较⼤的酵母菌或霉菌孢⼦可采⽤⾎球计数板，⼀般细菌则采⽤彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。

三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使⽤油镜观察。

⽽⾎球计数板较厚，不能使⽤油镜，计数板下部的细菌不易看清。

⾎球计数板是⼀块特制的厚型载玻⽚，载玻⽚上有4条槽⽽构成3个平台。

中间较宽的平台，被⼀短横槽分隔成两半，每个半边上⾯各有⼀个计数区。

计数区的刻度有两种：⼀种是计数区（⼤⽅格）分为16个中⽅格，⽽每个中⽅格⼜分成25个⼩⽅格；另⼀种是⼀个计数区分成25个中⽅格，⽽每个中⽅格⼜分成16个⼩⽅格。

计数区由400个⼩⽅格组成。

每个⼤⽅格边长为1mm，其⾯积为lmm2，盖上盖玻⽚后，盖载玻⽚间的⾼度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。

常见微生物计数法汇总!(一)

常见微生物计数法汇总!（一）引言概述：微生物计数是一种常见的实验方法，用于定量估计和检测环境中的微生物数量。

常见微生物计数法有许多种，本文将汇总介绍其中的几种常用计数方法。

一、直接计数法1. 显微镜计数法：使用显微镜观察培养皿中的微生物数量，通过数在视野中出现的微生物来估算总数。

2. 填充网格计数法：使用遗传学细胞计数板或计数室将细胞封装在微小方格中进行计数。

3. 浓度计算法：通过对微生物液体培养物的稀释以及菌落形成数量进行计算，从而估算原始液体中微生物的数量。

4. 流式细胞仪计数法：利用流式细胞仪对细胞进行连续识别和计数，快速且准确。

二、间接计数法1. pH法：通过确定微生物在特定pH值下的生长情况来计算微生物的数量。

2. 活菌数测定法：使用平板法、涂布法和滤膜法等方法，根据菌落形成数量来计算微生物的数量。

3. 光密度测定法：利用光密度计测量微生物培养物中细胞浓度对光的吸光度，从而计算微生物的数量。

4. ATP测定法：通过测量微生物中的ATP含量来估算微生物数量。

5. 核酸测定法：通过分子生物学技术，测定微生物DNA或RNA的含量，计算微生物数量。

三、表面计数法1. 培养基涂布法：将待测样品均匀涂布在培养基表面，按规格标准进行观察和计数。

2. 表面化学计数法：通过使用表面活性剂或化学溶液对微生物进行杀灭，并利用计数技术计算杀灭的微生物数量。

3. 扫描电子显微镜计数法：利用扫描电子显微镜观察样品表面的微生物数量，并进行计数。

4. 膜过滤计数法：将待测液体通过微孔膜过滤，然后在培养基上进行培养和计数。

四、生物传感器计数法1. pH微电极法：利用微电极检测微生物生长过程中产生的H+离子浓度变化。

2. 导电性测定法：利用微生物生理代谢活性所产生的电导率变化进行计数。

3. 生物发光法：利用荧光素酶或细菌荧光素所产生的可见光等特性进行计数。

五、图像处理计数法1. 数字图像处理法：利用图像处理软件进行图像分析，自动或半自动计数微生物数量。

微生物计数方法

微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。

正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。

下面将介绍几种常用的微生物计数方法。

血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。

该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。

此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。

流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。

该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。

此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。

自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。

该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。

此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。

平板计数法是一种常用的细菌计数方法。

该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。

此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。

不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。

为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。

微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。

通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。

选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。

培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。

制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。

微生物计数原理

微生物计数原理一、引言微生物计数是微生物学研究中的基础工作之一，它可以用于评估微生物的数量和生长状况。

微生物计数原理是指基于一定的方法和技术，通过对微生物样本的处理和观察，确定其中微生物数量的过程。

本文将介绍几种常用的微生物计数原理及其应用。

二、直接计数法直接计数法是最常见的微生物计数原理之一，它通过直接观察和计数微生物的个体来确定其数量。

常用的直接计数方法有显微镜计数法和电子计数法。

1. 显微镜计数法显微镜计数法是一种传统的微生物计数方法，它通过显微镜放大被计数微生物的图像，再用目镜进行计数。

该方法适用于大型微生物，如细菌和酵母菌等。

在显微镜下，通过顶点计数法或方格计数法，将显微镜视野中的微生物个数进行计数，并根据显微镜视野的大小和计数范围来计算总体数量。

2. 电子计数法电子计数法是一种利用电子显微镜进行微生物计数的方法。

它通过将微生物样品制备成薄片，然后在电子显微镜下观察和计数微生物的个体。

电子计数法具有高分辨率和高准确性的特点，适用于微小微生物的计数，如病毒和细菌孢子等。

三、间接计数法间接计数法是一种无需直接观察和计数微生物个体，而是通过测量微生物活性或生物产物来确定微生物数量的方法。

常用的间接计数方法有培养计数法和生物化学计数法。

1. 培养计数法培养计数法是一种通过培养微生物并计数生长的菌落数量来确定微生物数量的方法。

该方法需要将微生物样品接种到含有适宜营养物质的培养基上，经过一定的时间后，观察和计数培养基上形成的菌落数量。

根据菌落的形态和特征，可以初步确定微生物的种类，并通过计算菌落的数量来推断微生物的数量。

2. 生物化学计数法生物化学计数法是一种利用微生物在生长过程中产生的生物化学物质来确定微生物数量的方法。

常用的生物化学计数方法有ATP计数法和蛋白质计数法。

在这些方法中，通过测量微生物产生的ATP或蛋白质的浓度来推断微生物的数量。

四、流式细胞术流式细胞术是一种高通量的微生物计数方法，它通过将微生物样品悬浮液通过流式细胞仪，以高速流动的方式逐个计数微生物个体。

微生物大小与数量的测定实验报告

山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康一、目的要求1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。

2.增强微生物细胞大小的感性认识。

3. 明确血细胞计数板计数的原理。

4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、基本原理一）微生物大小的测定1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。

2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每格长0.01mm（即10µm）。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对长度。

3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。

4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。

如金黄色葡萄球菌直径约为0.8µm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3µm。

二）微生物数量的测定1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。

显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

测定微生物总数的方法

测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。

本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。

一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。

它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。

2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。

3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。

4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。

二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。

2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。

3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。

4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。

5. 根据计数结果，计算微生物总数。

三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。

2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。

3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。

4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。

5. 根据计数结果，计算微生物总数。

四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。

2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。

微生物计数方法有哪些

微生物计数方法有哪些微生物计数方法是用来确定样品中微生物数量的技术方法。

根据微生物所在的环境、特征和研究目的的不同，可以选择不同的计数方法。

常用的微生物计数方法包括直接计数法、培养计数法、膜滤法、荧光染色法等。

本文将详细介绍这些常用的微生物计数方法。

一、直接计数法直接计数法是指直接通过显微镜观察计数来确定微生物数量的方法。

常用的直接计数法有：1. 显微镜计数法：通过显微镜观察样品中微生物的数量，通常使用显微镜配合计数室或计数盘进行计数。

2. 相位差显微镜计数法：与常规显微镜计数法类似，但使用相位差显微镜可以获得更清晰的图像，更准确地计数微生物的数量。

3. 流式细胞仪计数法：使用流式细胞仪对微生物进行计数和粒子分析，可以同时获得微生物的数量和其他特征信息，如大小、形状等。

二、培养计数法培养计数法是通过将微生物样品培养在含有适宜营养物质的培养基上，利用微生物的生长繁殖特性来确定微生物数量的方法。

1. 可视化计数法：将培养基和微生物混合后在琼脂培养基上进行平皿计数或浸液计数，通过观察菌落形成单位来计数微生物数量。

2. 过滤膜计数法：将微生物样品过滤到具有适当孔径的膜滤器上，然后将膜滤器移植到含有适宜培养基的琼脂平皿上，通过菌落形成单位进行计数。

3. 表面播菌计数法：将微生物样品均匀涂布在琼脂平板的表面，通过菌落形成单位计数微生物的数量。

三、膜滤法膜滤法是利用膜滤器对微生物样品进行筛选和集落计数的方法。

膜滤法通常用于分析水、空气和食品等中微生物的数量。

1. 电子显微镜计数法：将微生物样品过滤到具有适当孔径的膜滤器上，并使用电子显微镜观察并计数微生物的数量。

2. DNA混合体计数法：将微生物样品过滤到DNA束水中，通过对DNA束的计数来确定微生物数量。

3. 梅勒算法：将微生物的集落过滤到膜滤器上，使用特定的染色剂、显微镜和图像分析软件进行计数。

四、荧光染色法荧光染色法是通过使用特定的荧光染料和荧光显微镜或流式细胞仪来计数微生物数量的方法。

微生物显微直接计数法

5、清洗
使用完毕后，将血细胞计数板及盖玻片按前面介绍的程序进行清
洗、干燥，放回盒中，以备下次使用。
五、实验报告P55表Ⅲ-6
各中格菌数 A B 菌数 /ml
二室平均数
1 第一室第二室
2
3
4
5
4、显微镜计数
将加有样品的血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到
计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内有5~10个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的一个中格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量；
计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等的计数，而后两种计菌器较薄，可用油镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
除了用上述这些计菌器外，还有用已知颗粒浓度的样品如血液与未知浓度的微生物细胞（孢子）样品混合后根据比例推算后者浓度的比例计数法。显微计数法的优点是直观、快速、操作简单，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动性强的活菌进行计数。目前已有一些方法可以克服这些缺点，如结合活菌染色、微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的，或用染色处理杀死细胞以计数运动性细菌等。
（注：计数板上的计数室的刻度非常精细，清洗时切勿使用刷子等硬物，也不可用酒精灯火焰烘烤计数板。）
3、加样品
将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，再用镊子轻压盖玻片，以免因菌液过多将盖玻片顶起而改变了计数室的容积。加样后静置5min，让细胞自然沉降；（注：取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生）

微生物实验显微镜直接计数法

菌体为宜。
3.计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
4.如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作
为两个菌体计算；
5.清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用
水柱清洗，直到洗净为止。 6.一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。
特别注意
血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。
将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），
4.显微镜计数静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低
倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。
5.清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自
行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。
五、注意事项
1.加样前先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般

显微镜直接计数法名词解释

显微镜直接计数法名词解释
显微镜直接计数法是一种常用的微生物计数方法，它通过显微镜直接观察和计数样品中的细胞或微生物数量。

这种方法的具体步骤是，首先将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（血球计数板），然后在显微镜下直接计数每个格子内的细胞或微生物数量，最后根据格子面积和体积推算出单位体积内的细胞或微生物数量。

显微镜直接计数法的优点包括操作简单、结果直观、可以测定所有形态的细胞或微生物、结果准确、误差小等。

然而，这种方法也存在一些缺点，例如不能区分细胞或粒子的死亡或活性、容易产生误差、需要经验丰富的操作者进行操作、需要时间和劳动力成本高等。

在应用显微镜直接计数法时，需要注意以下几点：首先，样品的稀释比例要适当，以避免细胞或微生物聚集在一起而影响计数结果；其次，要选择合适的血球计数板，根据需要选择不同的规格；最后，在计数过程中要遵守规定的计数规则，以确保结果的准确性和可靠性。

总之，显微镜直接计数法是一种简单、快速、直观的微生物计数方法，适用于各种实验室和科研机构的使用。

在使用该方法时，需要注意操作步骤和注意事项，以保证结果的准确性和可靠性。

微生物细胞数量的显微镜直接计数法

南京林业大学实验报告食品科学与工程专业1201091年级120109112姓名：马天柔日期：2014/04/20 实验六微生物细胞数量的显微镜直接计数法一．实验目的：掌握实用血球计数板进行微生物细胞数量的计数办法。

二．实验器材：显微镜，血球计数板，盖玻片，酵母菌悬液，滴管。

三．实验方法：1．将细胞悬液加适量的无菌水充分混匀并稀释至每小格约有5-10个菌体为宜。

2．制片：先将血球计数板和盖玻片用纱布或绸布擦干净后，把盖玻片盖在计数板的刻度上，用滴管取少量稀释的菌体从盖玻片的一端注入，使菌液沿两玻片空隙间渗入，注意不可有气泡产生，用吸水纸吸干沟槽中流出的多余菌液，切勿将盖玻片抬高。

3．镜检计数：静置几分钟后，将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后转换成高倍镜进行计数，按对角线方向数5中格即80小格，计数每一小方格细胞的平均数。

由于菌体细胞在血球计数室中处于不同的位置，要在不同焦距下才能看到，因为要求观察时要不断调节微调螺旋，防止遗漏，如菌体细胞位于小格的线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

4．结果计算：每小格的室容积=（1×1×0.1）/（16×25）=0.1ul/400计数：数5个中方格（80个小格）每小格的平均细胞数=A/（5×16）=A/80每ul细胞数=（A/80）×40005．清洗：血球计数板用完后，一定要用清水冲洗干净，晾干后保存，注意不可用粗糙物品擦中央平板，以免损坏小格刻度。

用血球计数板在显微镜下直接计数微生物细胞的数量是一种比较方便而快速的计数方法，但只能测得微生物细胞的总数，分辨不出活细胞还是死细胞。

四.实验结果：每小格的室容积=（1×1×0.1）/（16×25）=0.1ul/400计数：数5个中方格（80个小格共有406个）每小格的平均细胞数=A/（5×16）=A/80=406/80≈5.075每ul细胞数=（A/80）×4000=20300五.心得体会：1）取待测稀释菌悬液像血球计数板加样前，必须将菌悬液充分摇匀；2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片；3）由于菌体在计数室中处于不同空间位置，须在不同焦距下才能观察到，故观察时续不断调节微调，计数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。

微生物细胞大小测定及显微镜直接计数

微生物细胞大小测定及显微镜直接计数实验原理微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺（图示）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上，此处正好与物镜放大的中间物像重迭，用于测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

镜台测微尺（图示）是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长10µm 即0.01mm，是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。

测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和稀释平板计数法。

直接计数法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，则难于直接测定。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼德罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。

两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌难于区分。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载坡片上有4条槽所构成的3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图示），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格，大方格用三线隔开，而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格，大方格之间用双线分开，而每个大方格又分成16个小方格。

微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定

实验四微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定以及四大类微生物菌落形态的比较和识别微生物显微镜直接计数法一、实验目的1、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。

2、学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。

二、实验原理酵母菌显微直接计数—血球计数板三、实验材料显微镜、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸.四、实验步骤1、取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。

2、取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。

3、用10×(40x)镜观察并将计数室移至视野中央。

4、在10×(40x)镜下计数：计数5个中格的平均值，最后再换算到每mL 菌液中的含菌数。

注意事项：计上不计下，计左不计右。

出芽计一半。

五、实验结果将显微计数结果记录于下表中。

T 表示五个中方格中的总菌数。

各中格中菌数T二室平均值个/ml12345第一室第二室六、问题与讨论在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？有何改进方法？②酵母菌死活细胞的鉴定一、实验原理美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。

二、实验材料酵母菌悬液、0.1 ％吕氏碱性美蓝染色液显微镜、载玻片、盖玻片。

三、实验步骤美蓝镜片的观察1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用吸取计数时酵母菌样品液放在染液中，混合均匀。

2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

3）将制片放置约1min后镜检，低倍镜到高倍镜观察，根据颜色来区别死活细胞。

注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。

微生物数量测定

微生物数量测定在生物学和医学领域，微生物的数量测定是一个重要的实验技术。

通过对微生物数量的测定，我们可以了解生物体在不同环境中的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，以及监测和治疗疾病等。

微生物数量测定的基本原理是利用单位体积或单位面积上的微生物细胞数，通过统计和计算得到微生物的数量。

常用的方法包括显微镜计数法、比浊法、平板计数法等。

显微镜计数法是一种直接计数法，通过显微镜观察并计数样品中的微生物数量。

该方法需要将样品均匀涂布在载玻片上，干燥后进行染色和固定，然后使用显微镜观察并计数。

该方法的优点是简单易行，适用于微生物数量较少的样品，但不适用于大量样品。

比浊法是一种通过测量样品的浊度来测定微生物数量的方法。

该方法是通过将样品与标准曲线进行比较，得出微生物的数量。

该方法的优点是快速、简便、准确度高，适用于大量样品的测定。

但是，该方法需要使用标准曲线，对于某些微生物可能不太准确。

平板计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物数量的方法。

该方法是将样品稀释后涂布在培养基上，培养一定时间后统计菌落数量，然后计算出微生物的数量。

该方法的优点是准确度高，适用于各种微生物的测定，但需要一定的培养时间和人力。

微生物数量测定的应用领域非常广泛，包括环境科学、医学、食品科学、农业科学等。

例如，在环境科学中，微生物数量测定可以用来评估污染物的毒性对生态环境的影响；在医学中，微生物数量测定可以用来监测和治疗疾病；在食品科学中，微生物数量测定可以用来控制食品的质量和安全；在农业科学中，微生物数量测定可以用来了解土壤的健康状况和作物的生长情况等。

微生物数量测定是一种重要的实验技术，广泛应用于生物学和医学等领域。

通过对微生物数量的测定，我们可以更好地了解生物体的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，监测和治疗疾病等。

未来随着科技的不断进步和应用领域的不断拓展，微生物数量测定的方法和应用将更加多样化和精准化。

在生物学和医学领域，微生物的大小和数量的测定对于研究生命过程、疾病诊断和治疗等方面都具有重要的意义。

微生物生长的测定方法

微生物生长的测定方法:微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。

1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、抱子、酵母菌等单细胞微生物的数量。

计数法又分为直接计数和间接计数两类。

(1)直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

此法的缺点不能区分死菌与活菌。

计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高O.Imm的计数室，在I mm2的面积里又被刻划成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成。

将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。

每毫升原液所含细菌数二每小格平均细菌数x400x1000x稀释倍数.(2)间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。

将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2m1故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数:每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数x稀释倍数x5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。

尽管如此，由于该方法能测出样品中微量的菌数，仍是教学、科研和生产上常用的一种测定细菌数的有效方法。

土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽抱与抱子等的数量均可用此法测定。

但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。

除上述两种常用的计数方法外，还有膜过滤法、比浊法。

膜过滤法是当样品中菌数很低时，可以将一定体积的潮水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器。

生物计数法

生物计数法
生物计数法是一种用于测量微生物数量的方法，通常用于检测和分析微生物群落的数量和组成。

该方法基于微生物细胞的数量和质量，通过使用适当的培养基和培养条件，使微生物细胞生长和繁殖，然后计数生长的微生物细胞数量来确定微生物群落的数量。

生物计数法通常包括以下步骤:
1. 制备样本：从待测样品中提取微生物细胞，并将其转移到适
当的培养基中。

2. 培养：将样本培养在适当的培养基中，并将其置于适当的温
度和湿度条件下，以促进微生物细胞的生长和繁殖。

3. 计数：在培养完成后，将培养基进行染色或涂片，并通过显
微镜观察和计数来确定微生物细胞的数量。

4. 数据分析：根据计数结果，计算微生物群落的数量和组成，
并进行数据分析和解释。

生物计数法是一种准确、可靠和灵敏的方法，可以用于测量微生物群落的数量和组成，并且可以作为评估微生物群落健康状况的指标。

微生物显微技术及微生物计数法

微生物显微技术及微生物计数法•在实验室中常用的有:普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

通常在我们观察细菌、放线菌以及真菌等相对较大的微生物时,可以采用普通光学显微镜。

普通光学显微镜通常能将物体放1500~2000倍。

八、微生物计数法•显微直接计数法：利用血细胞计数板在显微镜下直接计数,能立即得到数值,但死活细胞都计数在内。

•平板计数法：是平板上长成菌落后再计数,反应较真实,但费时太长。

（一）微生物直接计数法•利用血细胞计数板进行直接计数。

•计数前需对样品做适当稀释,然后将经过适当稀释的菌悬液(或孢子悬液)放在血细胞计数板的计数室内,按照在显微镜下观察到的微生物数目代入计算公式运算后,即可得出单位体积微生物总数目。

•此法的优点是直观、快速。

•用于直接测数的菌悬液浓度一般不宜过低或过高(常大于106个/mL)。

活跃运动的细菌应现用甲醛杀死或适度加热以停止其运动。

•显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质,常不易分辨。

•菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板。

•两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。

•每个方格网共分九个大方格,中间的方格即为计数区。

•计数区分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格，即计数区都由400个小方格组成。

•每毫升菌悬液中含有细胞数=每个小格中细胞平均数(N)×系数(Κ)×菌液稀释倍数(d)。

系数K=400×104血细胞计数板的便用(1)稀释菌液：根据待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释,目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4~5个酵母细胞为宜,一般稀释100倍即可。

(2)准备计数板：取清洁干燥的血细胞计数板(使用前可通过显微镜检验计数板上有无污物,若有,则需清洗后才能进行计数),在中央的计数室上加盖专用的盖玻片。