微生物大小与数量的测定实验报告
微生物细胞大小和数量的测定
实验程序
测定微生物的大小 测定微生物数量
实验程序Ⅰ （测定微生物的大小）
测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺
实验程序Ⅱ
（测定微生物的大小）
目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后， 转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动 器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后， 仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微 尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长 10µm，所以可得： 目镜测微尺每格长度（ µm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜 测微尺格数 注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的 接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情 况下才可重复使用。
微生物细胞大小和数 量的测定
微生物细胞大小和数量的测定
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细 菌染色片、血球记数板、酵母菌悬液、 盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、 香柏油、二甲苯。
（测定微生物数量）
本实验用血球计数板计数酵母菌的数量
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一 小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
实验八 酵母菌细胞数量和大小的测定
实验八酵母菌细胞数量和大小的测定
一、实验目的
1. 学习和掌握显微镜的使用方法
2. 学习和掌握酵母菌细胞数量和大小的测定方法
3. 了解酵母菌作为微生物的特点和应用
二、实验原理
1. 显微镜使用方法
显微镜是一种用于观察细小物体的仪器。其主要部分包括光源、物镜、目镜、台架等组成部分。在观察物体时，需要先将待观察的物体放置在载玻片上，涂上适量的药液，然后将载玻片放置在台架上，在显微镜下逐渐调整光源、物镜和目镜，直到达到最佳观察效果。
酵母菌是一种典型的单细胞真菌，其细胞大小通常在5-10微米之间。在实验中，可以用显微镜对酵母菌进行观察和计数，也可以通过简单的模拟实验估算酵母菌细胞数量。
三、实验步骤
1. 准备工作
准备所需的实验器材和试剂：载玻片、盖玻片、万能药液、盐水、酵母菌培养液、移液管等。
2. 酵母菌细胞数量的估算
（1）取一支移液管，吸取适量的酵母菌培养液（约0.5毫升）。
（2）加入适量的盐水（约0.5毫升），充分混合。
（3）将混合液滴在一张载玻片上。
（4）在载玻片上随意涂抹，使混合液均匀分布在玻片表面。
（5）在显微镜下对涂片进行观察，估算酵母菌细胞数量。
（1）准备一份酵母菌培养液。
（4）将盖玻片放置在载玻片上。
四、注意事项
1. 实验操作过程中需要注意卫生和安全，遵守实验室安全规定。
2. 在观察酵母菌时，需要小心操作，避免将酵母菌培养液污染到实验室环境中。
3. 在显微镜操作时，需要小心调整光源和物镜，避免损坏镜头和影响观察效果。
五、实验结果分析
通过上述实验，可以获得酵母菌细胞数量和大小的估算结果。根据所得结果，可以了解到酵母菌在不同培养条件下的数量和大小变化情况，从而为后续的酵母菌研究提供参考依据。
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微⽣物⼤⼩的测定及显微镜直接计数法
微⽣物学实验报告
姓名年级班级组别⼀组同组者科⽬微⽣物题⽬微⽣物⼤⼩和数量的测定仪器编号
⼀、⽬的要求
1．学习并掌握使⽤显微镜测微尺测定微⽣物⼤⼩的⽅法。
2．了解⾎球计数板的构造、明确其计数原理。
3．学习并掌握使⽤⾎球计数板测定微⽣物细胞或孢⼦数量的⽅法。
⼆、基本原理
l．显微测微尺可⽤于测量微⽣物细胞或孢⼦的⼤⼩，包括镜台测微尺和⽬镜测微尺两个部件。镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。⽤于校正⽬镜测微尺没⼩哥的长度.⽬镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的⼩格.测量前应预先⽤镜台测微尺来校正并计算出在某⼀放⼤镜下,⽬镜测微尺每⼩格所代表的实际长度,再以后作为测量微⽣物细胞的长度.
⽬镜测微尺每格长度（µm）=（两重合线间镜台测微尺格数x10）/两重合线间⽬镜测微尺格数
2.球菌⽤直径表⽰⼤⼩；杆菌⽤宽和长来表⽰µm
图⼀：测微尺的校正
3．显微直接计数法：将⼩量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的⼀种简便、快速、直观的⽅法。
显微计数法适⽤于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢⼦等。菌体较⼤的酵母菌或霉菌孢⼦可采⽤⾎球计数板，⼀般细菌则采⽤彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使⽤油镜观察。⽽⾎球计数板较厚，不能使⽤油镜，计数板下部的细菌不易看清。
⾎球计数板是⼀块特制的厚型载玻⽚，载玻⽚上有4条槽⽽构成3个平台。中间较宽的平台，被⼀短横槽分隔成两半，每个半边上⾯各有⼀个计数区。计数区的刻度有两种：⼀种是计数区（⼤⽅格）分为16个中⽅格，⽽每个中⽅格⼜分成25个⼩⽅格；另⼀种是⼀个计数区分成25个中⽅格，⽽每个中⽅格⼜分成16个⼩⽅格。计数区由400个⼩⽅格组成。每个⼤⽅格边长为1mm，其⾯积为lmm2，盖上盖玻⽚后，盖载玻⽚间的⾼度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。使⽤⾎球计数板计数时，通常测定五个中⽅格的微⽣物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得到⼀个⼤⽅格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微⽣物的数量。设5个中⽅格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则：
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数
生32 程雨婧 2013012406
一、实验目的
1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理
1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。
2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)
图一:测微尺的校正
3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。计数区由400个小方格组成。每个大方格边长为1mm，其面
2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5
实验七微生物数量的测定
实验七微生物数量的测定
一、实验目的
1.掌握在液态和固态培养基上进行微生物计数的方法。
2.掌握稀释系数的计算方法。
3.了解红外辐射计数器的检测功能和操作方法。
二、实验原理
在液体培养基上进行微生物计数的方法属于定量分析中的一项基本技术，其主要原理
为先将微生物和加有营养物质的液体平均混合，然后分别取出适当体积，经过一定的稀释，将其等量分配到不同的培养皿内，然后在液体培养基上进行生长，最后根据各个培养皿内
微生物生长的数量来计算初始菌落的数目。其中，常用的标准液体培养基有肉汤、营养琼脂、拟南芥培养基等。
但该方法存在的问题在于，微生物生长的速度会因培养基的不同而有很大区别，如在
肉汤培养基上生长较慢，需要长达24小时才能形成充分的菌落，而在营养琼脂培养基上生长则较快，并且易于观察。此外，该方法要求使用无菌技术，并且在取样时需要注意尽量
避免空气中污染菌落的产生，否则将会导致不准确的计数结果。
2.微生物计数固体培养基法
在固体培养基上进行微生物计数的方法是将微生物标本均匀涂于固体培养基上，然后
生长出菌落进行计数。与液体培养基相比，该方法在菌落的形成方面更直观，且繁殖数目
相对更多，故计数更为准确。常用的固体培养基有营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、血液琼
脂等。
但该方法存在的问题在于，菌落大小、形状、颜色等因素均可能影响计数结果，在计
数时需要注意与目测直接形状相同的菌落合并计算，否则会造成漏计或重复计数的情况。
稀释是将一定量的菌液，通过逐步加入相等体积的稀释液而逐渐降低其菌落总体载量
的过程。通过分析稀释液与菌落的比例，就可以得到相对菌落的绝对数量。其中，稀释系
实验五 微生物的大小和数量的测定
﹟ ﹟
细胞数/ml=[每中方格平均细胞数×25（16）/10-4] 细胞数 每中方格平均细胞数× （ ） 每中方格平均细胞数 ×稀释倍数
二、实验原理---酵母菌大小测定 实验原理--测量工具及构造
镜台测微尺
目镜测微尺
目镜测微尺的校正
三、实验器材
显微镜 血球计数板、镜台测微尺、目镜测微尺 酵母菌悬液（测数用）、酵母菌装片（测定大小用） 长颈胶头吸管、盖玻片、擦镜纸等。
3、菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将酵母菌染色标本置于载 菌体大小的测定：取下镜台测微尺， 物台上，然后在高倍镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。 物台上，然后在高倍镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。
五、实验结果
将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌 数；D表示菌液稀释倍数。
各中方格中菌数
四、实验步骤---酵母菌悬液计数 实验步骤--5、压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本 压在方格线上的菌体， 格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大， 格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单 个酵母计数。 个酵母计数。 6、计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干， 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干， 最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。 最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
酵母菌细胞数/mL= 酵母菌细胞数 （X1+X2+X3+X4+X5） 25（或16） × 10 × 1000 ×稀释倍数 ） × （ ） 5
微生物的大小及数量的测定
2
微生物试验报告
图 3 血球计数扳的构造 a. 平面图(中间平台分为两半，各半边有一个方格网) b. 侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为 0.1 毫米的间隙)
图 4 血球计数板计数网的分区和分格
三、 实验材料
1. 仪器 显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水 纸、计数器、滴管、擦镜纸，酒精灯 2. 材料 酵母菌液，枯草芽孢杆菌斜面培养物 3．试剂 美兰染液，结晶紫，蒸馏水等
8 1
7 1
8 2
7.67 1.33
枯草芽孢杆菌大小平均值＝3.91（长轴）×0.68（短轴）μ m² 4、血细胞计数板对酵母菌悬液计数结果
实验次数 1 47 48 各中格中菌数 39 32 30 总菌数 196 稀释倍数 5 平均值 39.2 菌数(个/mL) 4.90×10
7
5
微生物试验报告
六、 实验分析
参考文献
詹火元生物学通报 1995 年底 30 卷第 2 期 沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006 沈萍，陈向东.微生物学实验.第 4 版.北京:高等教育出版社，2007
6
2、酵母菌的大小测定结果（10×100）
菌号 目镜测微尺的格数 （小格） 长轴 短轴 1 2 3 平均值
13 9
12 9
12 10
微生物大小与菌群数量的测定实验 史倩
微生物大小与菌群数量的测定实验
一、实验目的
1.学习并掌握微生物大小及菌落数量的测量方法
2.了解血细胞计数板和显微镜测微尺的使用
二、实验原理
酵母菌（yeast）是一群单细胞的真核微生物。这个词语为无分类学意义的普通名称，通常用于以裂殖或芽殖来进行无性繁殖的单细胞真菌，以与霉菌分开。大多数酵母菌为单细胞，在光学显微镜下，一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形。大小约为（1-5）μm╳（5-30）μm，最大可达100μm。各种酵母菌有其一定的大小和形态，但也随菌龄和环境条件而异。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3μm，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5μm，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
显微测微尺包括镜台测微尺和目镜测微尺两部分。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，等分成100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。
实验八酵母菌细胞数量和大小的测定
实验八 酵母菌细胞数量、大小
的测定
一、实验目的
1、学习利用血球计数板直接计数微生物细胞的方法 2、学习测定微生物细胞大小的方法
二、实验材料
1、菌种：酿酒酵母培养液 2、器材：血球计数板、目镜测微尺
三、实验原理及结果记录
1、显微直接计数法 （血球计数板）
血球计数扳的构造
0.1毫米
（二）酵母细胞大小的测定
1、利用血球计数板在中、高倍镜下（10×、40×）标定目镜 测微尺。 2、取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。 3、移去血球计数板，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到 目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体 的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位 数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于 该菌的长和宽。选取10个不同大小酵母细胞进行大小测定 并记录结果（观察到的是平均大小）。
1mm/20格
5X4
每个大方格均被分成400个小方格；根据规定每个大方格的 边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片 后，在盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的 容积为0.1 mm3（万分之一毫升）。
1、用血球计数板进行酵母菌液计数并记录结果。 一般在每个计数室中取5个中方格(左上、左下、右上、右下、 中间）进行计数，数两个计数室。可拍照后在电脑上数。
两重合线间目镜测微尺格数
酵母菌细胞数和发芽率的测定、微生物细胞大小的测定实验报告
酵母菌细胞数和发芽率的测定、微生物细胞大小的测定
实验报告
实验报告
一、实验目的
1.了解酵母菌的基本结构和特点，能够通过显微镜观察和测量微生物的大小。
2.了解酵母菌的生长规律和判断细胞数量的方法。
3.学习正确使用显微镜、计数盘等工具的方法和技能。
二、实验原理
1.酵母菌细胞数量的测定
酵母菌生长的过程中，细胞数量会不断增加。在进行数量的测定时，可以使用计数盘的方法，将酵母菌培养液进行稀释后，挑取一定数量的细胞在计数盘中进行计数，从而得出总细胞数。
计算公式：N=Nv/(Vs某d)
其中，N为总细胞数，Nv为计数盘中可数的细胞数，Vs为取自培养液的样品体积，d为稀释倍数。
2.酵母菌发芽率的测定
酵母菌发芽率是指在特定条件下发芽的酵母菌占总酵母菌数量的百分比。测定方法为：将稀释后的培养液分别在不同的温度和时间条件下进行培养，待观察到发芽的细胞数后再进行计算。
计算公式：G=Nf/Nt某100%
其中，G为发芽率，Nf为观察到发芽的细胞数，Nt为总细胞数。
三、实验步骤
1.酵母菌细胞数量的测定
（1）将酵母菌液稀释至合适浓度，取出10μl滴于计数盘的盆2中。
（2）低倍镜下计数，计算得到总细胞数。
2.酵母菌发芽率的测定
（1）将酵母菌液稀释至合适浓度，分别放置于不同的温度和时间条
件下培养。
（2）观察不同条件下的发芽情况，计算得到发芽率。
四、实验结果与分析
1.酵母菌细胞数量的测定
（1）计算盘的小方格数为16，每个小方格的面积为0.010mm²。
（2）经过计数后得到的样品的平均值为32个/小方格，计算得到总
细胞数为32某16/(0.01某10)=5120个/mL。
微生物细胞大小测定及显微镜直接计数
微生物细胞大小测定及显微镜直接计数
一、实验原理
微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺（图示）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上，此处正好与物镜放大的中间物像重迭，用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。镜台测微尺（图示）是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长10µm即0.01mm，是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。
测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和稀释平板计数法。
直接计数法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，则难于直接测定。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼德罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌难于区分。
微生物大小与数量的测定实验报告
微⽣物⼤⼩与数量的测定实验报告
微⽣物⼤⼩与数量的测
定实验报告
Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
⼭东⼤学实验报告2017年11⽉27⽇ ________________________________________
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科⽬：微⽣物学实验题⽬：微⽣物⼤⼩与数量的测定姓名：丁志康
⼀、⽬的要求
1.学习并掌握⽤测微尺测定微⽣物⼤⼩的⽅法。
2.增强微⽣物细胞⼤⼩的感性认识。
3. 明确⾎细胞计数板计数的原理。
4. 掌握使⽤⾎细胞计数板进⾏微⽣物计数的⽅法。
⼆、基本原理
⼀）微⽣物⼤⼩的测定
1.微⽣物细胞的⼤⼩是微⽣物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之⼀。微⽣
物⼤⼩的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量⼯具——测微尺，包括⽬镜测微尺和镜台测微尺。
2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻⽚，⼀般是将1mm等分为100格
每格长（即10µm）。镜台测微尺并不直接⽤来测量细胞的⼤⼩，⽽是⽤于矫正⽬镜测微尺每格的相对长度。
3.⽬镜测微尺是⼀块可放⼊接⽬镜内的圆形⼩玻⽚，其中央有精确的等分刻度，
有等分为50⼩格和100⼩格两种。测量时，需将其放在接⽬镜中的隔板上，⽤以测量经显微镜放⼤后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的⽬镜和物镜组合放⼤倍数不同，⽬镜测微尺每⼩格所代表的实际长度也不⼀样。因此，⽤⽬镜测微尺测量微⽣物⼤⼩时，必须先⽤镜台测微尺进⾏校正，以求出该显微镜在⼀定⼤放⼤倍数的⽬镜和物镜下，⽬镜测微尺每⼩格所代表的相对长度。然后根据微⽣物细胞相当于⽬镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际⼤⼩。
实验二：微生物细胞大小与数量的测定
实验二：微生物细胞大小与数量的测定
一、实验目的与要求：
（1）了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。
（2）学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、物镜测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。
（3）了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
二、实验原理
1.微生物大小测定原理
微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺（图20-1）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
镜台测微尺（图20-2）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，
图 20-1目镜测微尺
由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
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山东大学实验报告2017年11月27日
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科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康
一、目的要求
1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
2.增强微生物细胞大小的感性认识。
3. 明确血细胞计数板计数的原理。
4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、基本原理
一）微生物大小的测定
1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物
大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测
微尺和镜台测微尺。
2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每
格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于
矫正目镜测微尺每格的相对长度。
3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有
等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以
测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大
倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺
测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放
大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物
细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直
径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。
二）微生物数量的测定
1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接
计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻
片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前
国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley
计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。
后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间
的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除
了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，
此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
作简单。但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有
一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分
裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计数板为例进行显微
镜直接计数。
2.用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是
一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽
隔成两半，每一边的平台上
3.各列有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中
方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格
又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格
都是400个。每一个大方格边长为lmm，则每一个大方格的面积为lmm2，盖上盖
玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm，所以计数室的容积为0.lmm3(万
分之一毫升)。（本次试验所用血球计数板为25个中方格）
4.计数时，通常数随机五个不相邻中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，
再乘上25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成lml菌液中的总菌数。
5.设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，所以对于25个中方格的计数
板，1mL菌液中的总菌数n=A/5×25×10^4×B=50000A·B（个）。
血球计数板
三、器材
1.菌种：大肠杆菌7d鞋面培养物，酿酒酵母24h液体合成培养基培养物。
2.仪器或其他用具：目镜测微尺，镜台测微尺，载玻片，盖玻片，显微镜，移液枪，
血球计数板等。
四、操作步骤
一）微生物大小的测定
1.装目镜测微尺
取出右目镜，把目镜上的透镜片旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。
2.校正目镜测微尺
（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
（2）校正先用低倍镜观察，将镜面测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰的看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微
尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重
合，然后分别数出两重合线之间镜台微尺和目镜微尺所占的格数。
（3）计算由于已知镜台测微尺每格长10μm，根据下列公式即可分别计算处在不同放大倍数下，目镜测微尺每格所代表的长度。
目镜测微尺每格长度（μm）=
用上述方法分别对低倍镜、高背景和油镜进行校正，分别测出在低倍镜、高倍
镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所占的格数，并用上述公式计算出不同倍
镜下目镜测微尺每格所代表的长度。
（观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台微尺的刻度；换高倍镜和油镜校
正时，务必十分细心，防止接物镜压坏镜台微尺和损坏镜头。）
3.菌体大小的测定
目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上细菌染色制片。先用低倍镜和高倍镜找到菌体后，换油镜测定大肠杆菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜微尺和移动载玻片，测出大肠杆菌宽和长所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺（用油镜时）每格所代表的长度，即为该菌的实际大小。测定酵母菌时，先将酵母菌培养物制成水浸片，然后用高倍镜测出宽和长各占目镜微尺的格数，最后，将测得的格数乘上目镜微尺（用高倍镜时）每格所代表的长度，即为酵母菌的实际大小。通常测定对数生长期菌体来代表该菌的大小；可选择有代表性的3~5个细胞进行测定；细菌的大小需用油镜测定，以减少误差。
4.测定完毕
取出目镜测微尺后将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦拭干净，放回盒内保存。
二）微生物数量的测定
1. 菌悬液制备
以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。
2．镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。
3．加样品
将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用换上新枪头的移液枪移取少量摇匀的酿酒酵母菌悬液，之后由盖玻片边缘缓缓注入一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。（取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。）
4．显微镜计数
加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显微镜还要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易看清楚计数室方格线，或只见竖线或只见横线。
5．清洗血细胞计数板
使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。之后镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求细菌每小格内约有5～10个菌体为宜，酵母菌每小格内约有2～6个菌体为宜。每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，可按照各人习惯记或者不记芽体，但要在结果中注明芽体数目是否算入。