RGDS抑制胃癌细胞BGC-823生长的实验研究

一
１ ２ 一 Ｏ
Ｃｈｉ ａ ａ ｎ，ａ ｕ ｒ ２ １ Ｖｏ ６， ． ｎＪ Ｌ ｂ Ｄｉｇ Ｊ ｎ ａ ｙ， ０ ２， ｌ１ Ｎｏ １
文 章 编 号 ：０ ７ ２ ７ ２ １ ） １ ００ ～０ １ ０ —４ ８ （ ０ ２ ０ — １ ２ ３
ＲＧＤＳ抑 制 胃癌 细胞 Ｂ 一 ＧＣ ８ 长 的实 验研 究 ２ ３生
细胞 体积 变小 ， 细胞核 深 染 ， 细胞 浆 发 红 。从 ＨＥ染 色 的结果 我们 能很 直 观 的看到 ＲＧ ＤＳ对 人 胃癌 细胞 系 Ｂ 一２ ＧＣ ８ ３的作 用 呈现 出 的浓度依 赖 性 。
一 一一
图 ３ ＲＧＤＳ作 用 后 的 人 胃癌 细 胞 充 分振 荡 ， 标 仪 （ ＸＬ Ｏ ） Ｏ， 酶 Ｅ ８ Ｏ 检测 各孔 的 光 密度 吸 收值 （ 。 Ａ）
１ ３ 凋 亡 细 胞 的 普 通 光 镜 观 察 细 胞 经 胰 蛋 白 酶 ．
消化 后 ， 种 于 盖 玻 片 上 ， 含 体 积 分 数 为 １ 新 接 用 Ｏ 生 牛 血 清 的 Ｉ Ｍ 培 养 ２ ＭＤ ４ ｈ后 ， 成 ５ ｇ ｍｌ 换 ０ｕ ／ Ｒ Ｓ的 Ｉ ＧＤ ＭＤＭ 培养 液 （ 经多 次实 验证 明 ５ ｇ ｍｌ ０ｕ ／ Ｒ Ｓ处 理 是细 胞形 态观 察 的最适 浓度 ） 继 续 培 养 ＧＤ ，
１ １ 细 胞培 养 人 胃癌 细胞 系Ｂ Ｃ ８ ３ 由吉林 大 ． Ｇ 一２ ，
学 第 二 医 院 中 心 实 验 室 提 供 。 在 含 ｌ 灭 活 新 生 ０ 牛血 清 的 Ｉ ＭＤＭ 完 全 培 养 液 中 ， ３ ℃ ， Ｃ 置 ７ ５ Ｏ
附肽处 理 ４ ８ｈ的细 胞 ， 体 积分数 ７ 的冷 乙醇 固 用 ｏ
变 化 。 当 浓 度 大 于 ５ ｇ ｍｌ相 同 浓 度 下 作 用 ７ ０￣ ／ ， ２ｈ
培养液， 每组 ５复孔 。３ ℃ ， Ｃ 培 养 箱继 续 培 ７ ５ Ｏ 养 ２ 、 ８ｈ ７ ｈ之 后 ， 孔 加 入 ２ Ｔ（ ／ ４ｈ４ 、２ 每 ０ｌ ＭＴ ５ｇ
的 吸光值 接近 于作 用 ４ ８ｈ的吸 光值 ， 映 出 细胞 的 反 数量 减 少 了 。
２１ Ｒ Ｄ ． Ｇ Ｓ对 人 胃 癌 细 胞 系 Ｂ Ｃ ８ ３ 生 长 增 殖 的 Ｇ －２
影响
如 表 ｌ所示 ， 对 照组相 比 ， 与 两组数 据 间存 在
培 养 ２ ４ ｈ后 ， 成 含 １ 新 生 牛 血 清 的完 全 培 养 换 ｏ
液 。分 ２ ： 组 细胞 黏附 肽 组 （ Ｒ 含 ＧＤ） 加 ２ ０“ 含 ： ０ １ 不 同浓 度 ＲＧ ＤＳ培养 液 （ ２ ５￣ ／ 、 ５￣ ／ 、０ １ ． ｇ ｍｌ２ ｇ ｍｌ５
图２ Ｒ Ｄ Ｇ Ｓ作 用 后 的 人 胃癌 细胞 系 Ｂ Ｃ ８ ３ Ｇ －２ 的超 微 结构
￣ ／ 、０ ｇ ｍ１ ； 白 对 照 组 ： ２ ０ ｌ Ｍ Ｄ ｇ ｍｌ１ ０￣ ／ ） 空 加 ０ Ｉ Ｍ
显著 差异 ， 有 Ｒ Ｓ的 实 验组 细 胞 的 生 长 明显 受 加 ＧＤ
到抑 制 ， 随着 Ｒ Ｓ浓 度 的增 加 ，９ ｍ 处 的吸 并 ＧＤ ４ ２ｎ
光值 呈下 降趋 势 ， 现 出 浓 度 的依 赖 性 。 当 Ｒ 呈 ＧＤＳ 浓度 达 到 ５ ｇ ｍｌ ， 用 ４ ０ｕ ／ 时 作 ８ｈ之 后 ， 光值 不 再 吸
定 ２ ４ｈ以 上 ， Ｐ Ｓ洗 ２遍 ， １ ／ 用 Ｂ 加 ０ｍｇ Ｌ ＲＮＡ 酶 ， ３ ℃ 温 育 ３ ｎ ，０ ｍｇ Ｌ 碘 化 丙 锭 （ Ｉ 染 色 ， ７ ０ｍｉ ２ ／ Ｐ） 通
培 养箱 中培 养 ，—３ｄ传 代 １次 。 ２
１ ２ Ｒ Ｓ抑 制 胃 癌 细 胞 系 Ｂ Ｃ ８ ３ 按 Ｍｏ — ． ＧＤ Ｇ －２ ｓ
０＞ ／ ， ２小 匀 的分布 ， 看 到 完 整 的线 粒 体 和 粗 面 内 质 网。 图 生长 。当浓 度大 于 ５ ｇ ｍｌ相 同浓 度下作 用 ７ 能 ８小 时 的吸光 值 ， 映 出 细胞 的 反 ２ Ｂ和 图 ２ 是 人 胃癌 细 胞 系 Ｂ 一２ Ｃ ＧＣ ８ ３在 ５ ｇ ｍｌ 时 的吸光值 接 近于 ４ ０￣ ／ 说 还 ＲＧＤ浓度 下作 用 ４ ８ｈ后 的超 微结 构 图 ， 图 中可看 数量减 少 了 ， 明细胞 的生 长 不但 完 全 被抑 制 了， 从 ＧＤ 到 典 型 的细 胞 凋 亡 早 期 的特 征 ： 胞 表 面 的微 绒 毛 引起 了细 胞的死 亡 。这说 明 Ｒ Ｓ可 以抑 制 人 胃癌 细 ＧＣ ８ ３的生长 增 殖 ， 且 有 一定 的浓 度 依 并 消失 ， 异染 色 质 趋 边 凝 聚 ， 聚集 在 核 膜 上 ， 成 新 细胞 系 Ｂ 一２ 都 形 月 形 帽状结 构 （ ２ ） 甚 至 核 膜 消 失 ， 胞 核 碎 裂 赖 关 系 。但 这是 一种 什么 形式 的关 系 还 有 待 于我 们 图 Ｂ ， 细
片 段 的 流 式 细 胞 分 析
３ 讨 论
’
我 们 主 要 研 究 了 ＲＧ ＤＳ对 人 胃 癌 细 胞 系 Ｂ 一 ＧＣ
Ａ
Ｂ
Ｃ
８ ３的生 长 、 殖及 细胞 形 态 的影 响 。如 表 １ 示 ， ２ 增 所 与只加 Ｉ Ｍ 基 础培 养基 的对 照 组相 比较 ， 组 数 ＭＤ 两
细 胞 内还 能观 察到许 多 细胞 核 碎裂 形 成 的深 蓝 色 小 的对照 组 ， Ｂ和 ３ ３ Ｃ分 别 为 Ｒ Ｓ浓 度 为 ２ ￣／ ＧＤ ５／ ｍｌ ｇ
点 。图 １ 是 不 加 Ｒ Ａ ＧＤＳ的 对 照 组 ， 多 数 细 胞 的 和 ５ ￣／ 时 的直 方 图 。图 中显示 ， 二倍 体 峰 前 大 ０／ ｍｌ ｇ 在 细胞 核 都呈 现 均匀 的蓝 色 ， 浆 为 浅粉 色 ， 胞 只有 极 少 数 的 细胞胞 核颜 色较 深 。
Ｌ） 于 培养箱 中孵 育 ４ ｈ 吸去 上 清 ， 孔 加 １ ０ ｌ ， ， 每 ５
表 １ Ｒ Ｓ 人 胃癌 细胞 系 Ｂ Ｃ ８ ３生 长 增 殖 的影 响 （ ， ＝５ ＧＤ 对 Ｇ 一２ 士 ｎ ）
＊通 讯作 者
中 国实 验 诊 断学
２１ ０ ２年 １ 月 第 １ ６卷
（ ２ ） 但 是 细胞 质 中 的线粒 体和 粗 面 内质 网还 比 进 一 步 的 研 究 。 图 Ｃ ，
较 完整 。
细 胞在 正常 生 理 条 件 下 的形 态 表 现 为 ， 胞 膜 细 表 面光 滑 ， 细胞表 面有 特有 的微 绒 毛 结构 ， 胞 核 内 细 的染 色 质 分 布 均 匀 ， ＨＥ染 色后 ， 胞 浆 呈 浅 粉 经 细
图 １ 和 图 １ 是 人 胃 癌 细 胞 系 Ｂ 一２ 在 Ｂ Ｃ ＧＣ ８ ３
出现 了一个 凋亡 峰 ， 随着 Ｒ Ｄ 并 Ｇ Ｓ浓 度 的增 加 ， 面 峰 积也 随着 增大 。２ ｔ／ ｌ ５ ｇ ｍｌ 度下 的凋 亡 ５ｐ ｍ 和 ０Ｍ ／ 浓 ｇ 峰所 占的百分 比分别 为 ２ ． 和 ３ ． 。 ４７ ８ ２／ ９ ５ ．
据 间存在 显 著差异 ， 有 Ｒ Ｓ的 实 验 组 细胞 的 生 加 ＧＤ 长 明显 的受到 了抑 制 ， 且 随着 Ｒ Ｓ浓度 的增 加 ， 并 ＧＤ ４ ２ｎ 处 的吸光值 呈下 降 的趋 势 ， 现 出浓 度 的依 ９ ｍ 呈
Ａ． ＲＧＤＳ， ｔ ｍ ｌＢ． ０ｐ ｇ／ ； ＲＧＤＳ， ０＞ｇ ｍｌＣ． ５ ／ ； ＲＧＤＳ， ０ ／ ／ １ ０ ＊ ｍｌ ｇ
Ｒ Ｓ浓度 分 别 为 ５ ￣ ／ 和 １ ０ｔ ／ 情况 下作 ＧＤ ０／ ｍｌ ｇ ０ ｇ ｍｌ ￣
用 了 ４ ８ｈ后 的 状 态 ， 以看 到 跟 对 照 组 比较 ， 胞 可 细
的数 量 大大 减 少 ， 且 浓度 越 高 ， 胞 减 少 得 越 多 。 并 细 经过 ＨＥ染 色 后 可 以看 到 出 现 了 大量 的凋 亡 细 胞 ，
图 １ ＲＧ Ｓ 用 的 人 胃 癌 细 胞 系 Ｂ Ｃ ８ ３的 Ｄ 作 Ｇ 一２ Ｈ Ｅ染 色 （ ０ × ） ２０
ＧＤ ０￣ ／ 时 在 ８ ２ ３ 细胞 超 微 结 构 的 变化 通 过 透射 电 镜 观 察 ， 赖性 。当 Ｒ Ｓ浓 度 达 到 ５ ｇ ｍｌ ， 作 用 ４ ． 吸光值 不再 变化 ， 说 明细 胞 已经停 止 了 这 图 ２ 是正 常 细胞 的超微 结 构 ， 色 质在 细胞 核 内均 小时之 后 ， Ａ 染
过 流式 细胞 仪 （ Ｌ Ｔ 日本 ）进行 检 测 。 Ｅ Ｉ Ｅ，
２ 结 果
ｍａ 【 ｎ纠方 法 ， 处 于 指 数 生 长 期 的人 胃 癌 细 胞 系 将 Ｂ Ｃ ８ ３ 用 含 １ ／ 生牛 血清 的 Ｉ Ｍ 制成 ３ Ｇ 一２ ， ０９ 新 ６ ＭＤ × １ ｅｌ／ ０ ｃｌ Ｌ细胞 悬 液 ， 孔 ２ ０ ｌ 种 于 ９ ｓ 每 ０ 接 ６孔 板 。
张 鹏， 丁 巍 ， 士兴 ， 乔 万广稳 ， 宝平 朱
（ 林 大学第二医院 ， 林 长春 １０４） 吉 吉 ３ ０ １
Ｒ ＧＤ（ 氨酸一 精 甘氨 酸一 冬氨 酸 ） 肽 序列 是 多 天 三 种 细胞 外基 质蛋 白和血 浆蛋 白结 构 中共 有 的基 本成
分 ， 存在 于 细胞 间 识 别 系 统 的 基 本 单 位 ， 是 因此 含 Ｒ ＧＤ 的多肽 或化 合 物有 望 成 为 治 疗 重 要 疾 病 的新
４ ， 出 盖 片 ， 酮 固 定 ， ８ｈ 取 丙 ＨＥ染 色 ， 镜 观 察 细 胞 光
形 态变 化 。
制 剂［ 。该 类肽 的黏 附性 也成 为药 物设 计 的一个 新 １ ］
靶 点 。合成 的 ＲＧ 在 人 体 内 不 稳 定 ， 们 应 用 新 Ｄ 我
的方 法 即 酶 一 化 学 法 合 成 Ｒ ＧＤＳ（ ｇＧｌ— ｐ Ａｒ— ｙＡｓ —
霾 霞 ■
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