02抗体
重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白
重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白(Recombinant Human Tumor Necrosis Factor Receptor 2 Antibody Fusion Protein)是一种由受体抗体融合而成的蛋白质,其定义为以特定的抗体作为载体,将TNF-R2(Tumor Necrosis Factor Receptor 2)受体抗体融合在一起形成的蛋白质。
TNF-R2(Tumor Necrosis Factor Receptor 2)是细胞表面上的一种膜蛋白,它可以通过结合外源性的肿瘤坏死因子(TNF)来调控多种炎症反应,并有助于细胞转录、凋亡和免疫反应相关的信号传导通路。
重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白的制备过程主要包括TNF-R2受体抗体及其载体蛋白的表达、纯化和融合等步骤。
首先,需要使用DNA质粒引物来克隆TNF-R2受体抗体的cDNA片段,然后将其表达在大肠杆菌中,并将所生产的TNF-R2受体抗体与载体蛋白(如IgG)进行融合。
其次,TNF-R2受体抗体和载体蛋白经过细胞悬液处理、浓缩和纯化后,即可得到目标蛋白,即重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白。
重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白具有多种应用,如在免疫学检测和研究中,可以用于对TNF-R2受体的抗原性进行定量。
此外,它还可以用于肿瘤治疗,如癌症疗法的新药开发,通过对TNF-R2受体进行抑制,从而达到抗肿瘤的效果。
此外,重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白还可以用于炎症反应的研究,包括细胞受体的激活、细胞凋亡和免疫反应的调控。
从上述可以看出,重组人2型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白具有重要的应用前景,它可以用于肿瘤治疗、炎症反应的研究和免疫学检测等方面,可以帮助人们更好地了解TNF-R2受体的特性,从而提高肿瘤治疗效果,促进炎症反应的治疗等。
肌炎抗体谱解读
肌炎抗体谱解读肌炎抗体谱(myositis profile)是一种用于筛查和诊断肌炎类疾病的血液检查。
该检查包括多种抗体检测,包括抗核抗体(ANA)、抗Jo-1抗体、抗SRP抗体、抗Mi-2抗体等,其结果对确定肌炎的类型以及患者可能存在的其他自身免疫性疾病具有重要意义。
抗核抗体(ANA)是肌病检测中最常见的抗体之一,可以检测到许多自身免疫性疾病。
该抗体与胞核内多种抗原结合,包括dsDNA、SSA/Ro、Sm、RNP等,其阳性率在肌病患者中约为60-80%。
而单克隆抗体抗Jo-1是多种肌病中最明显的标志物之一,其阳性率在PM/DM患者中约为25%,在肺炎型肌炎(ILD)患者中阳性率可以高达95%。
抗SRP抗体与抗Jo-1抗体相似,也是PM/DM患者中一种比较常见的抗体,但SRP阳性病例通常会出现较为严重的肌肉和肺部病症,并且治疗反应比较差。
抗Mi-2抗体则非常特异性和PM患者相关,阳性率约为20-30%。
抗PL-7、PL-12、OJ、EJ等抗体也与肌炎有关,但它们的识别率较低。
除了上述抗体外,还有一些抗体的检测也与肌炎有关。
如抗PM/Scl、抗DFS70等。
抗PM/Scl抗体通常与重叠性结缔组织病相关,在多发性肌炎或皮肌炎患者中阳性率较低。
而抗DFS70抗体则不与任何自身免疫性疾病直接相关,但在一些肌炎患者中也会出现,可能为某些药物或感染后的反应。
肌炎抗体谱的检测可以帮助医生初步确定患者是否存在肌炎,并加深对肌炎类型和情况的认识。
同时,对于已有明确肌炎诊断的患者,该检查还可以用于监测疾病活动性、评估疗效和预后。
但需要注意的是,虽然抗体谱检测对于肌炎的诊断和治疗具有重要意义,但其结果并不能证实或排除肌炎的诊断,需要综合临床表现、生化指标、影像学检查和组织学检查等多方面资料进行综合判断和诊断。
综上所述,肌炎抗体谱检查对于筛查、诊断和治疗肌炎类疾病有重要作用,但其结果需要与其他资料综合评估,不能作为单一诊断标准。
免疫学概论第4章抗体PPT课件
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体(Antibody):指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下,经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答,用于治疗免疫相关疾病,如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体,使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原,研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程,有下产生的一种蛋白质,具有高度的特异性,能够与相 应的抗原结合,发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G,是血清中含量最 高的抗体类型,也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用, 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M,是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型,主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用,但效 价较低。
疾病的抗体药物,提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景,未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物,进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统,通过补体的级联反应 ,发挥溶解和杀伤作用。
肺心病患者M2受体抗体检测及意义
自身抗体的产生可能与肺心病的发生发展有密切 关系。进一步分析肺心病病人M2受体自身抗体 阳性组与阴性组的临床资料,结果显示:M2受体自 身抗体阳性组病人的动脉Pa02较低,动脉血Pa. c02较高。而右室流出道内径、右室内径及左室内 径均增大,与阴性组比较差异有统计学意义(P< O.05)。表明M2受体自身抗体的产生与肺心病心 脏形态学改变密切相关。慢性肺心病病人的急性 发作多并发呼吸衰竭、心力衰竭,使得机体长期或 反复处于高碳酸血症和缺氧状态,可能诱发了心脏 M2受体自身抗体的产生。而自身抗体反过来又通 过影响受体功能而加剧心脏病理变化和功能失调。 因此在肺心病出现右心衰竭的发病过程中可能也 有心脏受体抗体的免疫学机制参与。 参考文献
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两组M2受体自身抗体阳性率及抗体滴度测
肺心病组病人血清M2受体的自身抗体的阳
定结果 性率及抗体滴度均高于对照组[13%,40(1.602± 表1。
襄I两组M2受体自身抗体阳性事及抗体蔫度的比较
0.369)],两组比寝黼统计学意义(P<0.岱)。见
G为平均几何滴度.i培±5岍为其对数及标准差
装)以2姗ol/L的浓度溶于pH
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医学免疫学—抗体
人类白细胞抗原(HLA)的分型方法、遗传特点以及与疾病易感性 的关系。
T细胞活化、分化和效应机制
T细胞活化的过程
阐述T细胞在抗原刺激下活化的 过程,包括抗原识别、信号传导
和基因表达调控等环节。
T细胞分化的过程
介绍T细胞在活化后如何分化为 效应T细胞和记忆T细胞,以及不 同亚群T细胞的生物学特性和功
细胞因子及其受体介导的 信号传导途径
阐述细胞因子与受体结合后,通过信号传导 途径对靶细胞的生物学效应进行调控的过程 。
MHC分子结构和功能以及HLA分型意义
MHC分子的种类和结构
主要组织相容性复合体(MHC)分子的分类、基因结构、表达及 产物特点。
MHC分子的功能
阐述MHC分子在抗原提呈、T细胞活化以及免疫应答调控中的重要 作用。
通过体细胞突变和选择压力的作 用,抗体可以逐渐提高其与抗原
的亲和力,实现亲和力成熟。
04 抗体与疾病关系
抗体在感染性疾病中作用
中和病原体
抗体能够结合病原体表面的抗原, 阻止病原体对宿主细胞的黏附和 侵入,从而中和病原体的毒性。
促进吞噬作用
抗体与病原体结合后,可通过Fc段 与吞噬细胞表面的Fc受体结合,促 进吞噬细胞对病原体的吞噬和清除。
制肿瘤细胞的生长和扩散。
介导肿瘤细胞凋亡
03
一些抗体能够诱导肿瘤细胞凋亡,通过激活死亡受体或抑制生
存信号等途径实现。
05 抗体检测技术与应用
常见抗体检测技术原理及优缺点比较
01
酶联免疫吸附试验(ELISA)
利用酶标记的抗原或抗体与待测抗体或抗原结合,通过底物显色反应进
行定量检测。优点:灵敏度高,特异性强;缺点:操作繁琐,易受干扰。
免疫学实验一抗,二抗的选择与搭配原则和方法
单克隆二抗
来自单一克隆细胞株,识别单 一表位,具有高特异性和一致 性。
二抗选择依据
种属来源
选择与一抗相同或相近种属来源的二 抗,以减少背景噪音。
抗体类型
根据实验需求选择IgG、IgM等类型 的二抗。
特异性与交叉反应
选择高特异性、低交叉反应的二抗, 以确保实验结果的准确性。
荧光标记
根据实验需求选择不同荧光标记的二 抗,如FITC、PE、APC等。
抗体鸡尾酒法
将多种抗体按一定比例混合后,与样品孵育 ,可同时检测多个抗原并降低背景噪音。
03
二抗选择与搭配原则二抗类型及特点 Nhomakorabea01
02
03
04
IgG类二抗
针对特定种属的IgG,如小鼠、 大鼠、兔等,具有高特异性和 亲和力。
IgM类二抗
主要用于检测IgM抗体,常用 于病毒感染等研究。
多克隆二抗
由多种克隆细胞株混合而成, 可识别多个表位,增加检测灵 敏度。
免疫学实验一抗二抗的选择与 搭配原则和方法
目
CONTENCT
录
• 引言 • 一抗选择与搭配原则 • 二抗选择与搭配原则 • 实验方法与技术 • 结果分析与解读 • 实验案例分享与讨论
01
引言
实验目的与意义
探究抗原与抗体之间的特异性结合关系,为免疫学研究和医学诊 断提供理论支持和实践指导。
通过一抗二抗的选择与搭配,实现对抗原的高灵敏度、高特异性 检测,提高实验的准确性和可靠性。
免疫学实验概述
免疫学实验是研究抗原与抗体 相互作用及其相关生物学效应 的重要手段,涉及免疫学、生 物化学、分子生物学等多个学 科领域。
免疫学实验包括抗原抗体反应 、免疫细胞功能检测、免疫分 子检测等多个方面,其中抗原 抗体反应是免疫学实验的核心 内容之一。
免疫学 02 抗体
5. IgE
0.03mg/100ml血清,半衰期为2.5d。主要 与肥大细胞及嗜碱性粒细胞的表面IgEFc受体 (FcR)结合(称亲细胞抗体),使这些细胞发挥 杀伤作用(如寄生虫感染时,体内IgE水平升 高)。当它们再与特异抗原结合后,可激活这 些细胞释放组织胺,与第Ⅰ型变态反应(速发 型 变 态 反 应 ) 有 关 , 在 某 种 情 况 下 , IgG 和 IgM是引起第Ⅱ和第Ⅲ型变态反应的基础。含 量最少的免疫球蛋白。
R.Porter用木瓜蛋白酶(papain)水解IgG后得到三个片 段,其中二个分子量较小,各可与一个抗原决定簇结合, 表明为一价,但不能形成沉淀或凝集,称 Fab(fragment antigen-binding);另外一个片段分 子 量 较 大 , 冷 藏 后 可 形 成 结 晶 , 称 为 Fc(fragment crystallized),该片段具有与补体结合和通过胎盘等生 物学活性。
L链的1/2和H链的3/4区,氨基酸种类、排 列顺序和构型相对稳定,称为恒定区(C区)。 C区包括CL区(轻链稳定区)和CH区(重链稳 定区)。不同类Ig的重链CH长度不一,同一 种属动物中,同一类别Ig分子C区氨基酸的 组成和排列顺序比较恒定。
③ 铰链区
在IgG、IgA、IgD的CH1和CH2之间还有 一个铰链区,含有丰富的脯氨酸,因此易 伸展弯曲,而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白 酶等水解。在V区和C区之间有一新铰链区。 这二个铰链区能使免疫球蛋白分子二臂自 由伸曲,进行变构,有助于其生物学功能 的发挥。 IgM和IgE分子没有铰链区,但CH2/CH2 结构域有铰链区的功能。
Байду номын сангаас蛋白酶
七、抗体的生物学功能
详细介绍抗体的生产制备
添加 标题
抗体的人工进化技术的流程:抗体的人工进化技术包括抗体基因的突变、重组、表达、筛选和选择等步骤。 通过这些步骤可以获得具有更高亲和力、更低免疫原性、更稳定等特性的抗体。
添加 标题
抗体的人工进化技术的应用:抗体的人工进化技术广泛应用于药物研发、生物治疗、诊断试剂等领域。通过 该技术可以获得针对特定疾病靶点的抗体用于治疗和诊断疾病。
随着肿瘤免疫疗 法、自身免疫性 疾病等领域的快 速发展抗体药物 的需求量将进一 步增加。
抗体药物的研发 和生产技术不断 创新为抗体药物 的产业化发展提 供了有力支持。
抗体药物的国际 市场竞争激烈国 内企业也在逐步 崛起未来发展前 景广阔。
抗体药物的生产工艺和质量控制
抗体药物的细胞 培养技术:介绍 细胞培养的基本 原理、培养基的 选择与优化、细 胞培养的过程控 制等方面的知识。抗体药物的来自发和注册审批流程添加 标题
抗体药物的研发:从靶点发现到临床试验阶段需要经过大量的实验和验证以确保药物的安全性和有效性。
添加 标题
注册审批流程:新药在进入市场前需要经过国家药品监管部门的注册审批。这一过程需要提供大量的数据和 资料包括药效、安全性、生产质量等方面的信息。
添加 标题
抗体药物的产业化:随着技术的不断发展抗体药物的生产已经实现了产业化。产业化可以大大提高生产效率 和降低成本使更多的患者能够受益于抗体药物的治疗。
02 抗体的生产过程
抗体的来源和制备方法
抗体的来源:动物免疫血清、单克隆抗体 制备方法:杂交瘤技术、基因工程、噬菌体展示技术等
免疫原的制备和免疫动物的接种
免疫原的制备:将抗原物质与佐剂混合形成免疫原以增强免疫反应。 免疫动物的接种:将免疫原注射到动物体内刺激动物产生特异性抗体。 接种途径:可采用皮下、皮内、肌肉注射等多种途径进行免疫接种。 接种剂量:根据动物种类、免疫原性质等因素确定适当的接种剂量。
医学免疫学课件——抗体
2023医学免疫学课件——抗体•抗体概述•抗体的分子结构与功能•抗体的基因组与表达•抗体的免疫应答与调节目•抗体在疾病诊断和治疗中的应用•研究进展与展望录01抗体概述定义抗体(Antibody)是B淋巴细胞接受抗原刺激后增值分化形成的浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
特点高特异性、高亲和性、可塑性。
抗体的定义和特点分类按作用方式分,抗体分为膜结合型和分泌型;按功能分,抗体分为中和抗体、调理抗体、ADCC抗体、凝集抗体、促有丝分裂抗体等。
功能识别并结合特异性抗原,参与免疫效应,介导体液免疫应答。
抗体的分类和功能B淋巴细胞接受抗原刺激后增值分化为浆细胞,浆细胞产生抗体。
产生抗体与相应抗原发生特异性结合,通过中和毒素、阻止病原体入侵、激活补体等方式发挥免疫效应。
作用机制抗体的产生和作用机制02抗体的分子结构与功能两个重链和两个轻链组成每个抗体分子由两个重链(heavy chain)和两个轻链(light chain)组成,通过二硫键连接。
抗原结合部位抗体的抗原结合部位位于重链的V区(variable region)和轻链的V区,这些区域在识别和结合特异性抗原中起关键作用。
抗体的基本结构五类免疫球蛋白根据重链的类型,抗体分为五类免疫球蛋白,包括IgM、IgD、IgA、IgE和IgG。
不同类别抗体的特点每种免疫球蛋白都有其独特的特点和功能,例如IgM在早期感染中起重要作用,IgA在黏膜免疫中发挥关键作用。
抗体的超家族结构功能区划分每个抗体分子都有不同的功能区,包括抗原结合区、Fc(结晶片段)区和铰链区(hingeregion)。
抗体的功能区及其作用机制Fc区的功能Fc区在Fc受体结合和效应功能中起作用,例如调理吞噬、ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)和炎症反应等。
铰链区的功能铰链区在抗体分子的折叠和稳定性中起关键作用,并可以调节抗原结合区的构象和功能。
03抗体的基因组与表达抗体是由B淋巴细胞表面表达的免疫球蛋白,其基因组由多个基因片段组成,包括编码重链和轻链的V、D、J基因片段以及编码恒定区和可变区的C基因片段。
抗体的制备与使用指南
抗体的制备与使用指南一、抗体的制备。
1. 免疫原的选择。
- 对于制备抗体,首先要确定合适的免疫原。
如果是针对蛋白质抗原,要保证其纯度尽可能高。
例如,从细胞裂解物中纯化目标蛋白,可以采用亲和层析等方法。
对于小分子半抗原(如药物分子等),通常需要将其与大分子载体蛋白(如牛血清白蛋白)偶联,以增强其免疫原性。
- 免疫原的剂量也很关键。
一般来说,初次免疫时,对于小鼠等小动物,蛋白质抗原的剂量可在10 - 100μg之间,具体剂量需要根据抗原的性质和动物的种类进行优化。
2. 动物的选择与免疫。
- 动物选择。
- 常用的动物有小鼠、大鼠、兔子等。
小鼠因为繁殖快、成本低,是实验室制备单克隆抗体时常用的动物。
兔子则常用于制备多克隆抗体,其血清中抗体产量相对较高。
- 免疫程序。
- 对于小鼠,初次免疫可采用皮下注射或腹腔注射的方式。
以皮下注射为例,可在小鼠背部多点注射免疫原。
初次免疫后,间隔2 - 4周进行加强免疫,加强免疫的剂量可以适当减少,一般为初次免疫剂量的1/2 - 1/3。
经过2 - 3次加强免疫后,可检测动物血清中的抗体效价。
3. 单克隆抗体的制备。
- 细胞融合。
- 在小鼠免疫后,取其脾脏细胞(其中含有产生抗体的B淋巴细胞),与骨髓瘤细胞(如SP2/0细胞系)在聚乙二醇(PEG)的作用下进行融合。
融合后的细胞具有两种细胞的特性,既能产生特异性抗体,又能在体外无限增殖。
- 筛选阳性克隆。
- 利用次黄嘌呤 - 鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的骨髓瘤细胞和HAT (次黄嘌呤 - 氨基蝶呤 - 胸腺嘧啶核苷)选择培养基进行筛选。
在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因为缺乏HGPRT酶而死亡,未融合的脾细胞在体外不能长期存活,只有融合成功的杂交瘤细胞能够生长。
然后通过ELISA等方法筛选出产生特异性抗体的阳性克隆。
- 克隆化培养。
- 对筛选出的阳性克隆进行克隆化培养,常用的方法有限稀释法和软琼脂平板法。
限稀释法是将细胞悬液进行连续稀释,使每个孔中理论上只含有一个细胞,然后培养这些细胞,形成单克隆的细胞集落,从而得到稳定分泌特异性抗体的单克隆细胞系。
免疫制品概述课件
免疫制品的生产
生产工艺
细胞培养:选择合适的细胞系进行培养 病毒培养:选择合适的病毒株进行培养
病毒灭活:通过物理或化学方法灭活病毒 纯化:通过离心、过滤等方法去除杂质 检测:对免疫制品进行质量检测,确保安全有效 包装:将免疫制品进行包装,准备上市销售
质量控制
01
原材料选择:严格筛选,确保技术进步推 动产品升级
3
政策支持行 业发展
4
市场竞争加 剧,企业需 不断创新
谢谢
免疫诊断试剂:用于检测疾病的试 04 剂,如ELISA试剂、PCR试剂等
免疫制品的作用
预防疾病:通过 接种疫苗,提高 机体免疫力,预
防疾病发生
治疗疾病:通过 注射抗体,直接 对抗病原体,治
疗疾病
增强免疫力:通 过免疫制品,提 高机体免疫力,
增强抗病能力
保护易感人群: 通过免疫制品, 保护易感人群, 降低疾病发生率
03 免疫制品的主要作用是预防和治疗疾病,提 高机体的免疫力。
04 免疫制品的生产和使用需要遵循严格的质量控 制和监管要求,以确保产品的安全性和有效性。
免疫制品的分类
疫苗:预防疾病的疫苗,如流感疫 01 苗、乙肝疫苗等
抗体:治疗疾病的抗体,如抗病毒 02 抗体、抗肿瘤抗体等
免疫调节剂:调节免疫系统的药物, 03 如免疫球蛋白、干扰素等
成品检测:对成品进行严格检 测,确保产品质量
02
生产过程控制:严格遵循生产 流程,确保产品质量
04
质量管理体系:建立完善的质量 管理体系,确保产品质量
法规要求
生产许可:需要获得国 家药品监督管理局的批
准
生产环境:必须符合国 家药品生产环境要求
质量标准:必须符合国 家药品质量标准
SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定
SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定陈秀婷汪毅祯商慧娴王思令郑子峥(厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室,厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,厦门大学公共卫生学院,厦门 361102)中图分类号R392 文献标志码 A 文章编号1000-484X(2024)04-0693-05[摘要]目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。
方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Pro‑tein A层析柱表达纯化XMA09蛋白;冷冻电镜技术确定XMA09识别的受体结构域(RBD)上的关键氨基酸位点;间接ELISA与表面等离子共振(SPR)技术检测XMA09对SARS-CoV-2及其突变株Spike蛋白的亲和力;采用基于水疱性口炎病毒(VSV)的假病毒系统检测XMA09对SARS-CoV-2野生型及突变株的中和能力。
结果:本研究发现XMA09识别的表位较为保守,对多种突变株Spike蛋白均具有强结合能力,能广谱中和关切突变株(VOCs),包括广泛流行的Omicron亚突变株BA.4/5。
结论:XMA09是SARS-CoV-2广谱中和抗体,具有作为SARS-CoV-2治疗性抗体的潜力,并可为SARS-CoV-2的广谱疫苗设计与抗体药物开发提供参考意义。
[关键词]SARS-CoV-2;受体结合结构域(RBD);广谱中和抗体Identification of broadly neutralizing antibody against SARS-CoV-2CHEN Xiuting, WANG Yizhen, SHANG Huixian, WANG Siling, ZHENG Zizheng. State Key Laboratory of Molecu⁃lar Vaccinology and Molecular Diagnostics, National Institute of Diagnostics and Vaccine Development of Infectious Diseases, School of Public Health, Xiamen University, Xiamen 361102, China[Abstract]Objective:To identify XMA09, a broadly neutralizing antibody against severe acute respiratory syndrome coronavi‑rus 2 (SARS-CoV-2), and to explore the potential mechanism of XMA09 to broadly neutralize variants of SARS-CoV-2, so as to pro‑vide a reference for vaccine design and broadly neutralizing antibody screening against SARS-CoV-2. Methods:XMA09 protein was expressed and purified by ExpiCHO expression system and Protein A chromatography column. The key amino acid sites on receptor binding domain (RBD) recognized by XMA09 were identified by Cryo-EM, and the affinity of XMA09 to Spike protein of SARS-CoV-2 and its variants was detected by indirect ELISA and Surface Plasmon Resonance (SPR). The pseudovirus neutralization assay based on vesicular stomatitis virus (VSV) was used to detect the neutralization ability of XMA09 to wild-type and variants of SARS-CoV-2. Results:In this study, it was found that the epitopes recognized by XMA09 were conservative, who has an excellent binding ability to Spike protein of many kinds of variants,and could neutralize the variants of concern (VOCs),including the widespread BA.4/5. Conclusion:XMA09 is a broadly neutralizing antibody, which has the potential to be used as a therapeutic antibody against SARS-CoV-2, and can provide reference for broad-spectrum vaccine design and antibody drug development against SARS-CoV-2.[Key words]SARS-CoV-2;Receptor binding domain (RBD);Broadly neutralizing antibody严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)是一种有包膜的单股正链RNA病毒,其表面有4种结构蛋白,分别是小包膜(envelope,E)蛋白、表面刺突(spike,S)蛋白、核(nucleocapsid,N)蛋白和囊膜(membrance,M)蛋白。
MD02 抗体的分装保存和稀释
抗体的分装保存和稀释1、抗体的分装保存做科研实验时用到的免疫组化一抗,多为浓缩液的形式。
对于包装规格较大和预计使用周期较长的一抗浓缩液,建议根据用量进行分装保存,分装后的抗体需根据抗体使用说明书指明的条件,保存在-20℃~-40℃低温冰箱中或2~8℃保存(并非所有的供应商都推荐一抗浓缩液在冷冻条件下长期保存)。
这样可以减少抗体反复开盖平衡至室温和反复冻融引起的效价下降。
抗体分装时的储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成,如聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。
即用型抗体工作液可在2~8℃冰箱中保存,无需在低温冰箱中保存。
2、浓缩液抗体的稀释抗原抗体的结合与两者之间的分子比例有密切关系。
如果使用的抗体浓度太高,抗体分子在特异性结合目标抗原后剩余过多,将会造成抗体与组织其他成分的非特异性结合的增加,使背景染色明显增强,甚至出现区域假阳性现象;无论特异性多好的抗体,只要浓度高到一定程度,都会出现非特异性着色或者染色背景。
因此,选择适当的抗体稀释度,不仅能节省抗体,而且还是获得满意染色结果必要条件。
在实际工作中,有很多抗体都从试剂公司购买,厂家所附的说明书上对抗体的稀释度通常已经标明,给了一个适当的参考范围。
第一抗体的使用浓度是免疫组织化学染色的关键之一,在第一次使用某种新的一抗时,有必要对抗体的最佳稀释度进行测定(如在推荐稀释度的上下区域梯度稀释后进行检测)。
浓缩液抗体的稀释是一个相当比较简单的操作,不少研究者会用实验室自己配置的PBS 来进行稀释。
这里需要提出关注的是——稀释后抗体的稳定性。
一般来说,浓缩液稀释成工作液后当天马上用完,不容易出现稳定性的问题。
而有时候由于某些一抗的效价比较高,一次稀释出来的工作液的量比较大,在当天用不完的时候有些研究者会选择就这样保存在冰箱中,等下次再用。
这样的操作可能会对实验带来一定的变数,虽然PBS可以用来稀释抗体浓缩液,但并非稳定保存抗体的有效试剂。
在单纯的PBS中,抗体效价会下降的比较快,那么效价下降前后的实验条件是不一样的,将导致批次实验结果的比较相对困难;例如原本弱阳性的染色结果,在一抗效价下降后,可能会得出阴性的染色结果。
β2糖蛋白抗体分型
β2糖蛋白抗体分型摘要:一、β2 糖蛋白抗体分型的概述二、β2 糖蛋白抗体分型的重要性三、β2 糖蛋白抗体分型的方法四、β2 糖蛋白抗体分型的应用五、β2 糖蛋白抗体分型的未来发展趋势正文:一、β2 糖蛋白抗体分型的概述β2 糖蛋白抗体分型是一种针对β2 糖蛋白抗体的检测方法,它是基于对β2 糖蛋白抗体不同亚型的识别,从而对疾病进行诊断、预测疾病进展和评估治疗效果的重要手段。
二、β2 糖蛋白抗体分型的重要性β2 糖蛋白抗体分型在医学领域具有重要的意义。
首先,通过β2 糖蛋白抗体分型,医生可以准确地诊断患者是否感染了β2 糖蛋白抗体相关的疾病,从而及时进行治疗。
其次,分型可以帮助医生预测疾病的进展,为患者提供更精确的治疗方案。
最后,分型还可以评估治疗效果,帮助医生调整治疗方案,提高治疗效果。
三、β2 糖蛋白抗体分型的方法目前,β2 糖蛋白抗体分型的方法主要有以下几种:1.凝集反应:通过观察抗体与抗原结合后是否发生凝集反应,从而判断抗体的类型。
2.免疫印迹法:通过检测抗体在凝胶电泳中的迁移情况,判断抗体的类型。
3.酶联免疫吸附试验:通过检测抗体与特定抗原的结合程度,判断抗体的类型。
4.化学发光免疫分析法:通过检测抗体与特定抗原的结合程度,判断抗体的类型。
四、β2 糖蛋白抗体分型的应用β2 糖蛋白抗体分型在临床医学、疾病预防和科研领域都有广泛的应用。
在临床医学中,分型主要用于诊断、预测疾病进展和评估治疗效果。
在疾病预防中,分型可以帮助医生了解患者的感染情况,从而制定相应的预防措施。
在科研领域,分型有助于研究β2 糖蛋白抗体与疾病的关系,为疾病的防治提供理论依据。
五、β2 糖蛋白抗体分型的未来发展趋势随着科学技术的进步,β2 糖蛋白抗体分型在未来将会有以下发展趋势:1.分型方法将更加简便、快速、准确。
2.分型将更加个性化,满足不同患者的诊断和治疗需求。
3.分型将在疾病预防、治疗和预后评估中发挥更大的作用。
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VL CL
VH CH1
VH区和VL区:结合抗原 CH1: 遗传标志 CH2:补体结合点所在, IgG借此穿过胎盘 CH3:亲细胞性,与细胞上FcR结合
CH2
CH3
8
2、辅助成分
•连接链(J链)
参与Ig多聚体合成,如IgA二聚体和IgM五聚体
•分泌片 (SP)
参与分泌型IgA(SIgA)合成
12
五、各类Ig的结构特点与功能
1、IgG
IgG1, IgG2 and IgG4
IgG3
13
含量最多,占血清总Ig的70~80% 具强大的抗感染作用
——(抗感染免疫的“主力部队”)
感染后产生迟,维持久(迟来迟去) 唯一能通过胎盘的Ig
14
J Chain
2、IgM
CH4
15
分子量最大,为五聚体 高效的抗病原微生物抗体:比IgG强500-1000倍 感染后出现最早,维持短(早来早去) 可用于传染病的早期诊断
N端 VH
恒定区(C区)
氨基酸排序不易变化 分布:H链近C端3/4~4/5 和L链近C端1/2
C端
5
1)超变区 (HVR) 互补决定簇区(CDR) 2) 骨架区
CDR1
CDR2
VH
VL C2
CH2
铰链区
CDR3
CH3
6
7
功能区
每110个aa由链内二硫键 形成相对独立的具有特 定功能的球形区域
22
rol
23
3、 基因工程抗体
利用基因重组技术,人为改变Ig基因,并使其 表达出活性抗体 嵌合抗体 鼠IgV区基因+人IgC区基因 →拼接成重组Ig 基因 → 表达活性抗体,可避免产生抗鼠抗体 抗体库技术 通过基因工程直接克隆特异性抗体
24
3
二、Ig的分子结构
1、基本结构(单体) 重链(H链):450~550aa
五类: g、a、d、m、e (链) 其Ig:IgG, IgA, IgD, IgM, IgE
N端
轻链(L链):214aa
两型 : k链 l链
C端
二硫键连接
4
结构区
可变区(V区)
氨基酸排序易变
分布:H链近N端1/4~1/5 和L链近N端1/2
18
4、IgE
正常人血清中含量最少
—(寄生虫感染、变态反应时 升高)
亲细胞性抗体 与肥大/嗜碱性粒细胞结合 —参与I型超敏反应
CH4
19
5、IgD
主要表达于B细胞表面
作为B细胞成熟标志
在血清中功能不明
tail piece
20
六、抗体的制备方法
1、 多克隆抗体(PcAb):即动物免疫血清
某Ag(含5个表位) → 免疫动物 →刺激B1~5五种B细胞增殖 →产生Ab1~5五种抗体(多克隆抗体) →Ab1~5共存于免疫动物血清内无法分开
21
2、 单克隆抗体(McAb)
针对一个抗原决定簇,活化特定一种B细胞, 利用杂交瘤技术获得单一克隆抗体
杂交瘤细胞:小鼠的脾细胞(含B细胞) +同 系小鼠骨髓瘤细胞融合 优点:高纯度,高产量,产业化
11
四、Ig的生物学功能
1、与抗原特异性结合: Fab段与决定簇 2、激活补体: IgM、 IgG3 、IgG1与
IgG2通过经典途径,发挥活性
3、 FcR介导的效应功能:
①调理吞噬作用:抗体搭桥 ②ADCC作用:抗体—靶细胞—杀伤细胞 ③ IgE FcR介导的效应功能 ④ 通过胎盘:去除Fc段不能通过
Secretory Piece
J Chain
9
3、Ig的酶解片段
木瓜蛋白酶
胃蛋白酶
pFc’
Fc Fab
F(ab’)2
10
三、Ig的抗原性
例如:人Ig→兔子→产生 兔抗人Ig的抗体 特异性结合
1、同种型 2、同种异型
3、独特型
同一个体内不同B细胞克隆合成的Ig,其超变 区独有的氨基酸序列所构成的抗原决定簇 等同超变区、决定簇互补区
第二章
免疫球蛋白
Immunoglobulin,Ig
内容简介
Ig与抗体的概念 Ig的分子结构 免疫球蛋白的抗原性 Ig的生物学功能 各类免疫球蛋白的特点 抗体的制备方法
2
一、Ig与抗体的概念
抗体 =抗原刺激机体产生,并与抗原发生特异 结合的球蛋白。即Antibody,Ab
免疫球蛋白= 具有抗体活性或化学结构与抗体 相似的球蛋白。即Immunoglobulin,Ig
(抗感染免疫的“先锋部队”) 个体发育中最早(胎龄20周)合成的Ig
新生儿脐血IgM升高提示宫内感染
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3、IgA 和 SIgA
血清型 IgA
分泌型 SIgA
Secretory Piece J Chain
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血清型(单体)和分泌型(双聚体)SIgA SIgA分布在各种外分泌液中 (初乳,唾液,呼吸道、消化道 和泌尿生殖道分泌液) 粘膜组织局部发挥抗感染免疫 ——(抗感染免疫的“地方部队”)