细胞计数与细胞增
细胞增殖及细胞活力检测方法
细胞增殖及细胞活力检测方法1.细胞计数法细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一、该方法通过显微镜观察细胞密度和数量来判断细胞的增殖情况。
首先，将培养皿中的细胞样本取出，使用显微镜观察细胞的形态和数量，然后用显微镜同时观察已知数量的细胞，计算出单位面积或体积中的细胞数量，最后通过比较细胞数量的变化来评估细胞的增殖情况。
2.三(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑盐(MTT)法MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
MTT是一种黄色噻唑盐，可以通过还原作用转化为紫色的甲氧基-4-硝基苯胺（formazan），这个转化过程是仅在活细胞中发生的。
首先，将MTT溶液加入细胞培养皿中，细胞内的活细胞色素（还原酶）可以将MTT转化为紫色的formazan。
然后，用溶剂将formazan溶解，测量溶液的吸光度，就可以通过测量吸光度的变化来评估细胞的活力。
3.荧光素酶体积法（ATP法）ATP法是一种用于检测细胞的能量代谢水平的方法。
ATP是细胞内的能量分子，在细胞进行代谢活动时会不断产生。
将细胞样品加入含有高能底物的反应溶液中，ATP酶将底物中的ATP转化为体积比较大的荧光素酶（luciferin）。
接下来，荧光素酶与荧光素生成一个反应产生的发光，发光强度与ATP浓度成正比。
通过测量发光强度来评估细胞的活力。
4.分子探针染色法分子探针是一种与特定分子结合的荧光标记物质，可以通过显微镜观察细胞中特定分子的分布和浓度。
常用的分子探针有细胞核染色剂（如DAPI），线粒体染色剂（如JC-1），胞质钙染色剂（如Fluo-3）等。
将细胞与特定分子探针共同孵育，根据分子探针的荧光强度和分布情况，可以评估细胞内特定分子的含量和活动水平，从而间接评估细胞的增殖和活力。
5.流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞的物理和化学性质，通过细胞悬浮液在液体流动中的传递和分析的技术。
通过染色、抗体标记、荧光探针等方法，可以区分和分析细胞的不同类型和状态。
细胞生物学细胞计数法和MTT法
实验题目：细胞增殖和活力的检测方法一、摘要：细胞增殖是生物体生长和繁殖的基础，当细胞增殖发生异常时往往会导致疾病的发生，比如肿瘤的发生就是细胞增殖失控的结果。
掌握细胞增殖和活力的检测是从事细胞生物学研究的一个重要方面。
针对细胞增殖和活力的检测方法有很多，这些方法除了能用于细胞本身增殖特性的研究、还能应用于药物毒副性检测，生长因子对细胞增殖和活力的影响等。
二、实验原理：〔1〕细胞计数法：最简单直接的方法：传统细胞计数的方法是用血球计数板，原理：将一定量的细胞悬液载入固定体积的玻片夹层中，在显微镜下数出细胞数量，然后换算出原始的细胞悬液浓度。
使用自动化细胞计数器，它通过拍下计数界面照片，利用软件程序设定去识别细胞，实现自动化计数。
好处:这种方法能兼容台盼蓝染色，染上蓝色的细胞视为死细胞，直接观察就能大致判断细胞的活力状态，计数后能定量分析细胞存活率。
缺点:①它的灵敏度低②线性范围太窄，细胞浓度低于 10 万个/ml 则计数不准确。
〔2〕 MTT 法MTT 称为噻唑蓝，是一种黄颜色染料。
定义：MTT 比色法是一种通过检测细胞代谢活性间接反映细胞增殖的方法。
原理：活细胞线粒体里的酶能够将外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，活细胞数量越多，形成的有色沉淀越多，通过测定颜色的深浅也就是吸光值来反映细胞代谢活性的强弱，而细胞代谢活性与细胞数量呈正比，从而反映细胞数量的多少。
缺点： MTT被还原形成的有色沉淀需要溶解后才能比色，检测用时较长，检测结果会受到沉淀溶解效果的影响。
三、实验材料和用品：细胞计数法：待测细胞悬液、细胞计数板、盖玻片、普通光学显微镜、微量移液器及枪头、酒精棉球、吸水纸、台盼蓝染液MTT法：贴壁细胞（A549 肺癌细胞株）酶标仪、酶标板振荡器、超净工作台，倒置显微镜，CO2培养箱、96 孔培养板，EP 管及管架，微量移液器及枪头、5mg/ml MTT 溶液，DMSO 溶液，1640 完全培养液四、实验操作（细胞计数法）：实验过程分为四个环节：（首先）清洁细胞计数板及盖玻片—（然后）镜检计数室—（接着）细胞加样—（最后）细胞计数具体操作细节如下：1、清洁细胞计数板及盖玻片：用 75%酒精棉球仔细擦拭细胞计数板的计数室区域，接着擦拭盖玻片，放置吸水纸上自然晾干；2、镜检计数室：1）细胞计数板和盖玻片干燥后，将盖玻片覆盖到细胞计数板的计数室部位；2）在显微镜下观察擦拭效果，确定计数室区域已擦拭干净、能清晰看到计数室的大方格及中方格3）直接平行移出计数板，平放在实验台上；3、待测细胞加样：1）将待测细胞悬液混匀后，吸取 10ul 细胞悬液加入 EP 管，然后再吸取10ul台盼蓝染液加入 EP，混匀，染色静置 2 分钟。
细胞名词解释
细胞名词解释1.愈伤组织：原意是指植物体的局部受创伤刺激后，在其伤⼝表⾯新⽣的⼀团薄壁细胞。
在组织培养中是指在⼈⼯培养基上由已经分化的外植体的细胞重新分裂⽣长⽽形成的⼀团⽆特定形状、⽆序⽣长的薄壁细胞。
在⼀定条件下离体状态的植物组织中已经分化并停⽌⽣长的细胞重新分裂⽣长所形成的⽆组织结构的细胞团。
2.外植体：指植物组织培养中作为培养材料的离体组织块离体器官或离体细胞。
3.胚状体：由外植体或愈伤组织产⽣的与正常受精卵发育成的胚相类似的胚胎状结构。
据来源分为体细胞胚与⽣殖细胞胚。
4.极性：⾼等植物均具⼀主轴，各器官沿此主轴有顺序的进⾏⽣长分化。
主轴的⾸尾两端在⽣理形态上都有着明显差异，通常⾸段⽣芽尾端长根（形态学上端下端）这种现象叫极性。
5.植株再⽣：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官等培养成完整植株的过程。
6.形态发⽣（形态建成）：指⽣物个体发育或再⽣过程中⽣物体及其器官的形态结构的形成过程。
7.试管苗：指在⽆菌离体条件下的⼈⼯培养基上对植物细胞、组织或器官进⾏培养所获得的再⽣植株。
8.玻璃苗：指外表呈玻璃状，幼茎、叶⽚呈现半透明⽔渍状态的畸形试管植物。
9.体细胞⽆性系：指由同⼀个外植体反复进⾏继代培养后得到的⼀系列后代。
在细胞培养中，由单细胞形成的后代叫但细胞⽆性系。
10.培养基：⽤于满⾜植物正常发育所需各种营养物质的总和。
11.初代培养：指从植物体上分离外植体进⾏的第⼀次培养。
12.继代培养：将初代培养的培养物（愈伤组织、芽等）重新切割转移到新的培养基上继续扩⼤培养的过程。
13.固体培养：指加⼊琼脂等固化剂使培养基呈固体状态所进⾏的培养。
14.液体培养：指不加Agar等固化剂使培养基呈液体状态所进⾏的培养。
U11、细胞⼯程：按照⼀定的设计⽅案，通过在细胞、亚细胞或组织⽔平上进⾏实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性⽣物⼯程。
2、摇床：常⽤来进⾏细胞悬浮培养，可根据震荡⽅式分为⽔平往复式和回旋式两种，震荡速度因培养材料和培养⽬的的不同⽽不同，常⽤的震荡速度为100r/min.3、培养瓶：⼀般的植物组织和细胞培养常⽤玻璃三⾓瓶、试管、各种⼤⼩的⼴⼝玻璃瓶时，有时甚⾄⽜奶瓶和罐头瓶也都可以利⽤，特别是在进⾏快速繁殖时更常⽤造价较低的培养器⽫。
细胞计数实验报告讨论
细胞计数实验报告讨论1. 引言细胞计数是细胞生物学和医学领域中非常重要的实验方法，用于评估细胞的数量和生存状态。
细胞计数的准确性很大程度上决定了后续实验结果的可靠性。
在本实验中，我们使用了经典的容积计数法和显微镜计数法进行细胞计数，比较了两种方法的优缺点，并讨论了结果的可靠性与误差来源。
2. 实验方法我们首先收集了细胞培养物，并将其转移到计数室板中进行操作。
对于容积计数法，我们使用了血细胞计数板，将细胞悬浮液染色后在计数板上进行视觉计数。
对于显微镜计数法，我们使用了显微镜和计数室板，在显微镜下直接对细胞进行计数。
3. 实验结果我们对同一细胞悬浮液使用了容积计数法和显微镜计数法进行计数，并记录了两种方法的计数结果。
容积计数法得到的结果为每个视野中细胞的平均数目，例如第一次计数的结果为40个细胞，第二次为45个细胞，第三次为42个细胞，那么容积计数法得到的结果为42个细胞。
显微镜计数法则是在显微镜下直接计数细胞的数量，例如计数得到的结果为每个视野中细胞的数目为35个，那么显微镜计数法得到的结果为35个细胞。
4. 讨论与分析4.1 容积计数法的优缺点容积计数法的优点是操作简单、快速，并且不需要高级的仪器设备。
而且通过多次计数可以增加结果的准确性。
然而，容积计数法的缺点也是显而易见的。
首先，容积计数法只能提供细胞数目的平均值，并不能提供每个视野中细胞数量的详细信息。
其次，容积计数法对于聚集的细胞较为困难，因为聚集的细胞会导致计数不准确。
最后，如果细胞浓度过高，容积计数法会出现低估的情况。
4.2 显微镜计数法的优缺点显微镜计数法的优点是可以提供每个视野中细胞数量的详细信息，并且可以观察到细胞的形态特征。
显微镜计数法也可以应对聚集的细胞，因为我们可以通过调整显微镜的聚焦来分辨聚集细胞的数目。
然而，显微镜计数法也存在一些缺点。
首先，显微镜计数法需要较长时间来进行操作，所以在大规模计数时效率较低。
其次，显微镜计数法受到视野选择的影响，如果选择的视野中细胞数量较少或较多，可能会导致结果的误差。
微生物计数方法
微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。
正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。
下面将介绍几种常用的微生物计数方法。
血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。
该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。
此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。
流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。
该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。
自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。
该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。
平板计数法是一种常用的细菌计数方法。
该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。
此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。
不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。
为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。
微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。
通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。
选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。
培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。
制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。
细胞计数仪的使用方法与结果解读
细胞计数仪的使用方法与结果解读细胞计数仪是一种用于准确计数和分析细胞数量的实验室工具。
它广泛应用于生物医学研究和临床实践中，能够对各种类型的细胞进行快速、方便和准确的计数。
本文将介绍细胞计数仪的使用方法，并提供一些关于细胞计数结果的解读。
一、细胞计数仪的使用方法细胞计数仪的使用方法通常分为以下几个步骤：1. 准备样本：将待检测的细胞样本制备成适当的悬浮液，确保悬浮液均匀且细胞密度适中，避免过高或过低的细胞浓度对计数结果产生影响。
2. 校准仪器：仪器通常需要进行校准，以确保结果的准确性。
校准步骤通常包括零点校准和参考样本校准。
零点校准是将样本室中的计数槽清空，使细胞计数仪认定该位置为零细胞计数；参考样本校准是使用已知细胞数目的样本进行校准，确保仪器对细胞的计数准确。
3. 收集数据：将制备好的样本注入细胞计数仪中，按照仪器操作说明进行测量。
一般情况下，细胞计数仪会自动吸取适量的样本并进行计数。
4. 记录结果：细胞计数仪会显示细胞计数和浓度等结果。
将结果记录下来，以备后续分析和解读使用。
二、结果解读细胞计数仪的结果解读包括两个方面：细胞计数和浓度。
下面分别进行解读：1. 细胞计数：细胞计数指的是在给定体积的样本中计算出的细胞数。
细胞计数结果可以用于评估细胞生长情况、细胞浓度和细胞活性等。
通常情况下，细胞计数较高可能表示细胞增殖活跃，而较低的计数值可能与细胞凋亡或生长停滞有关。
2. 细胞浓度：细胞浓度是指在单位体积中存在的细胞数量。
它是通过将总细胞数除以样本的体积来计算得出的。
细胞浓度的高低可以反映细胞的密度和稀释程度。
高浓度的细胞样本可能需要进一步稀释，以便进行后续实验或操作。
而低浓度的细胞样本则可能需要进行浓缩或寻找其他方法增加样本的细胞数量。
细胞计数仪的使用方法和结果解读需要根据具体实验目的和细胞类型进行调整和优化。
此外，操作时应注意消毒和清洁的问题，以避免细菌和其他污染物对实验造成干扰。
总结起来，细胞计数仪是一种非常有用的实验工具，它能够快速、准确地计数和分析细胞数量。
细胞增殖及细胞活力检测方法1
细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖是指细胞数量的增加，是生物体生长和发育的基础过程。
细胞活力是指细胞代谢水平和功能状态的综合体现。
细胞增殖和细胞活力的检测方法在细胞生物学和生物医学研究中非常重要。
本文将介绍一些常用的细胞增殖和细胞活力检测方法。
一、细胞增殖检测方法1.平板计数法：平板计数法是一种直接计数方法，通过显微镜观察计数细胞数量。
首先，将细胞悬液均匀地涂布在显微镜滑片上。
然后，使用显微镜对细胞进行计数。
这种方法简单直接，但在大量细胞计数时比较耗时。
2.显微镜观察法：显微镜观察法是另一种直接计数方法。
通过显微镜观察细胞在培养皿中的覆盖度，以评估细胞增殖。
这种方法可以快速获得细胞增殖信息，但由于操作主观性较强，结果可能存在一定的误差。
3. MTT法：MTT法是一种间接计数方法，通过测定细胞代谢能力来估计细胞增殖。
首先，将MTT试剂加入细胞培养皿中，MTT会被活细胞还原成紫色的甲基化四氮唑盐（formazan）。
然后，通过比色法测定培养基中的甲基化四氮唑盐含量，从而间接反映细胞的增殖情况。
MTT法具有操作简便、结果可重复性好的优点。
4.WST-1法：WST-1法也是一种间接计数方法，通过测定细胞膜透过性来估计细胞增殖。
首先，将WST-1试剂加入细胞培养皿中，WST-1会被细胞色素P450酶一氧化还原成形成可溶性产物。
然后，通过光密度测定产生的产物浓度，从而间接反映细胞的增殖情况。
WST-1法灵敏度高，操作简单。
二、细胞活力检测方法1.ATP酶联反应法：ATP酶联反应法是一种直接测定细胞活力的方法。
ATP是细胞内的能量分子，可以反映细胞代谢水平。
通过酶联反应，将ATP转化为发光物质，然后使用发光仪测定发光强度，间接反映细胞活力。
这种方法灵敏度高，但样品处理复杂。
2.细胞膜透过性检测法：细胞膜透过性检测法是一种间接测定细胞活力的方法。
细胞在不同状态下，细胞膜透过性会发生变化。
细胞计数原理
细胞计数原理
细胞计数是生物学和医学领域中常用的实验技术之一，用于确定给定样本中细胞的数量。
细胞计数原理基于显微镜下观察细胞形态、结构和数量的方法。
以下是细胞计数的原理及其步骤。
1. 样本制备：首先，从待测样本中取得一定数量的细胞。
样本可以是细胞培养物、血液样本、组织样本等。
确保样本取得的方式不会破坏细胞的完整性。
2. 稀释样本：根据细胞的浓度，将样本适当稀释。
这样有助于将细胞分散开来，使其更容易被计数和观察。
3. 准备计数室：可以使用计数室或者用带有方格的显微镜载片。
计数室有预定的区域，用来放置需要计数的细胞。
4. 抹片制作：在计数室或者显微镜载片上制作细胞抹片。
将少量稀释的细胞放在载玻片上，然后用另一块载玻片将其涂抹开来，形成一个薄层的细胞悬液。
5. 显微镜观察：在显微镜下使用适当的放大倍率观察制作好的细胞抹片。
细胞通常可见为圆形或不规则形状。
6. 细胞计数：通过目视细胞数量和位置进行计数。
通常是在计数室或方格中选择一个特定的区域计数，然后根据所选择的区域的大小和形状进行计算。
7. 计算细胞浓度：使用计数的结果可以计算出细胞的浓度。
假
设样本已经稀释了，可以将计数的细胞数乘以稀释倍数来计算初始样本中的细胞数量。
细胞计数是许多实验和研究中必不可少的步骤。
通过了解细胞计数的原理和步骤，可以对细胞样本的数量和浓度进行准确的评估。
细胞计数原理
细胞计数原理
细胞计数是生物学和医学领域中常用的实验技术，用于确定液体中细胞数量的
方法。
细胞计数的原理是利用显微镜观察和计数显微镜视野中的细胞数量，通过统计来推断整个液体中细胞的浓度。
细胞计数的准确性对于许多实验和临床诊断至关重要，因此了解其原理对于科研工作者和医务人员来说是非常重要的。
首先，细胞计数需要使用一种叫做“计数室”的专用仪器，计数室通常是一个
有标定刻度的盖玻片，上面有一个已知面积的方形格子。
在进行细胞计数时，需要将待测液体与一种叫做“计数液”的稀释液混合，然后将混合液吸入计数室中。
混合液中的细胞会随机分布在计数室的方形格子中，然后通过显微镜观察和计数格子中的细胞数量。
其次，为了保证细胞计数的准确性，通常需要统计多个视野中的细胞数量，然
后取平均值作为最终结果。
在统计细胞数量时，需要注意排除重叠在边缘的细胞和碎片，以免影响计数结果的准确性。
细胞计数的原理基于统计学的概念，通过在已知面积的计数室中统计细胞数量，然后根据统计学原理推断整个液体中细胞的浓度。
在实际操作中，需要注意的是稀释液的浓度选择和混合液的制备，以及显微镜的放大倍数的选择，这些因素都会影响最终的计数结果。
总之，细胞计数是一种常用的实验技术，通过利用显微镜观察和计数显微镜视
野中的细胞数量来推断整个液体中细胞的浓度。
细胞计数的原理基于统计学的概念，通过在已知面积的计数室中统计细胞数量，然后根据统计学原理推断整个液体中细胞的浓度。
细胞计数的准确性对于许多实验和临床诊断至关重要，因此在进行细胞计数时需要注意操作的规范性和准确性，以确保实验结果的可靠性。
小鼠淋巴细胞增殖测定步骤
小鼠淋巴细胞增殖测定步骤
小鼠淋巴细胞增殖测定是用来评估免疫功能和细胞毒性的常用方法。
以下是一般的小鼠淋巴细胞增殖测定的步骤：
1. 准备小鼠：选择合适的小鼠品系和年龄，并确保小鼠健康。
2. 分离淋巴细胞：采集小鼠淋巴组织（例如脾脏或淋巴结）并进行细胞分离。
常用的方法包括机械破碎和离心分离。
3. 细胞计数与稀释：用血细胞计数器或显微镜计数细胞数目，并进行适当的稀释以获得合适的细胞密度。
4. 细胞悬液制备：将分离的淋巴细胞与培养基混合，使细胞悬浮于培养基中。
5. 细胞培养：将细胞悬液移至培养皿中，并在37°C、5% CO2
的条件下培养一段时间。
一般培养24-72小时。
6. 刺激因子处理：在培养皿中添加适当的刺激因子（如细胞激动剂或抗原），以刺激细胞增殖。
7. 溶菌酶处理：在培养结束后，加入溶菌酶等溶解剂，使未被细胞内的放射性同位素取代的DNA释放到培养基中。
8. 获得DNA：收集并离心细胞上清液，将其中的DNA沉淀。
9. 放射性测定：使用放射性技术，如液体闪烁计数器，测量
DNA中的放射性同位素含量。
10. 统计分析：根据放射性同位素的计数，计算细胞增殖水平，并进行统计分析。
这些步骤可以根据具体实验目的和方法的需求进行适当的调整和修改。
细胞计数方法------细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。
2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。
然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。
所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
检测细胞增殖能力的方法
检测细胞增殖能力的方法细胞增殖能力是生物学和医学研究中极为重要的指标，它反映了细胞的生长、繁殖和生命活力。
本文将详细介绍几种常用的检测细胞增殖能力的方法，以供研究者参考。
一、MTT法MTT法（甲基噻唑基四唑法）是一种经典的检测细胞增殖的方法。
其原理是利用活细胞内的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为蓝紫色的甲臜，甲臜的量与活细胞数成正比。
具体步骤如下：1.将细胞接种于96孔板中；2.加入MTT溶液，培养一定时间；3.弃去上清，加入DMSO溶解甲臜；4.使用酶标仪测定吸光度，判断细胞增殖能力。
二、CCK-8法CCK-8法（细胞计数试剂盒-8）与MTT法类似，但操作更简便，毒性更低。
CCK-8试剂在细胞内被还原后生成橙色的甲臜，通过测定吸光度可以评估细胞增殖能力。
三、EdU法EdU法（5-乙炯基-2"-脱氧尿嘧啶法）是一种新兴的细胞增殖检测方法。
EdU是胸腺嘧啶类似物，可以代替胸腺嘧啶插入到DNA中。
通过荧光显微镜或流式细胞仪检测EdU标记的DNA，可以评估细胞增殖情况。
四、Brdu法Brdu法（5-溴脱氧尿嘧啶法）与EdU法类似，也是一种检测细胞增殖的经典方法。
Brdu在细胞周期中代替胸腺嘧啶插入DNA，通过免疫荧光或免疫组化方法检测Brdu标记的DNA，从而评估细胞增殖能力。
五、细胞计数法细胞计数法是最直接的检测细胞增殖能力的方法。
通过细胞计数板或流式细胞仪对细胞进行计数，可以直接得到细胞数量，从而判断细胞增殖能力。
六、其他方法除了以上几种方法外，还有其他检测细胞增殖能力的方法，如：1.克隆形成实验：通过测定细胞克隆的形成数量来评估细胞增殖能力；2.细胞周期分析：利用流式细胞仪检测细胞周期各阶段的细胞比例，间接反映细胞增殖能力；3.报告基因法：通过构建带有报告基因的细胞株，检测报告基因的表达水平来评估细胞增殖能力。
综上所述，检测细胞增殖能力的方法多种多样，研究者可以根据实验需求和条件选择合适的方法。
细胞定量方法
细胞定量方法细胞定量方法是一种用于测量和计算细胞数量的技术。
它在生物学研究和医学诊断中被广泛应用，可以帮助科学家和医生了解细胞的生长、分裂和死亡等过程，以及细胞在不同条件下的响应和变化。
本文将介绍几种常见的细胞定量方法，并探讨其原理和应用。
1. 显微镜计数法显微镜计数法是最直接和常用的细胞定量方法之一。
它通过观察显微镜下的细胞图像，使用目视或计数器等工具记录细胞的数量。
然后根据所观察的视野面积和细胞的密度，计算出整个样品中细胞的数量。
这种方法简单易行，但需要一定的操作经验和技巧，而且对细胞的形态和大小有一定的要求。
2. 细胞计数仪细胞计数仪是一种自动化的细胞定量设备，它通过光学原理和图像处理技术，可以快速、准确地测量细胞数量。
细胞计数仪的工作原理是将细胞悬浮液通过流式细胞计数仪的流动池，细胞在流动池中逐个通过激光束，同时记录细胞的大小、形态和荧光等信息。
然后通过计算机软件分析处理数据，得出细胞的数量和其他相关参数。
细胞计数仪具有高通量、高精度和高灵敏度的特点，广泛应用于细胞培养、药物筛选和临床诊断等领域。
3. 细胞增殖试验细胞增殖试验是一种利用细胞的增殖能力进行定量分析的方法。
它通过测量细胞在特定时间内的增殖率或增殖指数，来评估细胞的生长状态和活力。
常用的细胞增殖试验包括MTT法、CCK-8法和细胞计数法等。
这些方法利用细胞内还原酶的活性或细胞代谢产物的浓度，间接反映细胞数量的变化。
细胞增殖试验可用于评估细胞增殖的影响因素、筛选抗肿瘤药物和评估细胞毒性等。
4. 荧光染色法荧光染色法是一种利用细胞内或细胞表面的荧光标记物进行细胞定量的方法。
通过染色剂与细胞内的特定分子结合，产生荧光信号，然后通过荧光显微镜或流式细胞仪等设备观察和记录荧光信号的强度。
根据荧光信号的强度和标准曲线，可以计算出细胞的数量或特定分子的含量。
常用的荧光染色方法有DAPI染色、细胞膜标记染色和细胞内特定蛋白染色等。
荧光染色法可用于研究细胞的分子分布和定量分析。
细胞计数实验报告
细胞计数实验报告细胞计数实验报告细胞计数是生物学和医学研究中常用的实验方法之一，通过对细胞数量进行定量测量，可以了解细胞生长、分裂以及细胞死亡等重要生物学过程。
本实验旨在通过显微镜观察和显微图像处理技术，对细胞进行计数，并分析不同条件下细胞数量的变化。
实验材料和方法：1. 细胞培养物：选取细胞系A和B作为实验样本，分别在含有适宜培养基的培养皿中培养。
2. 显微镜和显微图像处理软件：使用高倍显微镜观察细胞，将显微图像导入计算机，并使用图像处理软件进行细胞计数。
3. 细胞计数盒：使用带有标定刻度的细胞计数盒，以便准确计数细胞数量。
4. 细胞染色剂：为了提高细胞的可视性，使用荧光染色剂对细胞进行染色。
实验步骤：1. 准备细胞培养物：将细胞系A和B分别接种到含有培养基的培养皿中，放置在恒温恒湿的培养箱中，维持适宜的生长条件。
2. 细胞染色：将培养皿中的细胞用荧光染色剂进行染色，使其在显微镜下更加明显可见。
3. 观察细胞：使用高倍显微镜观察染色后的细胞，并通过调节放大倍数和焦距，使细胞清晰可见。
4. 拍摄细胞图像：使用显微图像处理软件，将显微镜观察到的细胞图像导入计算机，保存为数字图像文件。
5. 细胞计数：使用图像处理软件，对细胞图像进行分析和计数。
可以利用软件提供的自动计数功能，也可以手动计数并记录结果。
6. 统计数据：根据细胞计数结果，将不同条件下的细胞数量进行统计和比较。
实验结果和讨论：通过细胞计数实验，我们得到了细胞系A和B在不同条件下的数量数据。
根据统计结果，我们发现在培养基A中，细胞系A的数量明显高于细胞系B，而在培养基B中，细胞系B的数量明显高于细胞系A。
这表明不同培养基对不同细胞系的生长具有不同的影响。
进一步分析发现，在培养基A中，细胞系A的增殖速度明显快于细胞系B，而在培养基B中，细胞系B的增殖速度明显快于细胞系A。
这可能与培养基中的营养物质和生长因子的组成有关。
培养基A可能提供了细胞系A所需的特定营养物质，从而促进了其增殖。
生物细胞的计数实验报告
生物细胞的计数实验报告一、引言细胞计数是生物学实验中常用的重要手段，它可以帮助我们了解生物体内细胞的数量及相关现象的变化。
本次实验旨在通过计数细胞的数量，进一步了解细胞的特点和活性，为后续的生物学研究和医学应用提供有效数据支持。
二、实验方法1. 实验材料- 细胞培养物：本实验中选取了人体肺癌细胞株A549作为研究对象。
- 细胞培养基：选择适宜的细胞培养基，其中包含必需的营养物质和培养细胞所必需的生长因子。
- 显微镜和细胞计数板：为观察和计数细胞提供必要工具和设备。
- 0.4% 尝试啶蓝溶液：用于染色细胞，以便更加清晰地观察和计数。
2. 实验步骤- 步骤一：将细胞培养物均匀取一小部分（如100μL）放入离心管中。
- 步骤二：使用显微镜观察培养物中细胞的形态、颜色和大小。
- 步骤三：取1:1的比例混合细胞培养物和0.4% 尝试啶蓝溶液，并在计数板中排放好。
- 步骤四：在显微镜下进行细胞计数，计数每个小方格内的细胞数量，并计算平均值。
- 步骤五：根据计数板上的标尺，计算出细胞密度并求出总细胞数量。
三、实验结果经过实验观察和计算，得出以下结果：在计数板的10个小方格中，每个方格内的细胞数量分别为30、28、33、32、29、31、34、27、30、33个。
取平均值计算总细胞数量。
综合计算可得，本次实验观察到的细胞总数为301个。
四、讨论与分析通过细胞计数实验，我们成功地获取了细胞的数量，并得出细胞总数为301个。
这一数据为我们后续实验和研究提供了重要依据。
同时，我们还观察到细胞在培养物中的形态、颜色和大小等特征，这些观察结果对衡量细胞的生长状态和活性也具有重要参考价值。
然而，本次实验也存在一些不确定因素和可改进之处。
首先，由于细胞在培养物中不断生长和分裂，其数量可能会随时间的变化而有所波动。
因此，在实际应用中应多次重复实验，并取平均值以增加数据的可靠性。
其次，在实验过程中，使用0.4% 尝试啶蓝溶液染色可以使细胞更加清晰可见，但染色不当可能会对细胞自身产生影响。
细胞计数的实验报告
细胞计数的实验报告细胞计数的实验报告细胞计数是生物学研究中常见的实验操作，通过对细胞数量的准确测定，可以为后续的实验设计和数据分析提供重要依据。
本次实验旨在探究不同细胞计数方法的准确性和可行性，并比较它们在不同实验条件下的适用性。
一、实验目的本次实验的主要目的是比较常用的细胞计数方法，包括显微镜计数法和细胞计数仪法在细胞计数中的应用优势和局限性，探究它们在不同实验条件下的准确性和可行性。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 显微镜- 细胞计数板- 细胞培养物- 小型离心机- 细胞计数仪2. 实验方法：- 显微镜计数法：a. 取适量细胞培养物，将其均匀悬浮于一定体积的培养基中。
b. 取一块细胞计数板，将悬浮液滴于计数板的特定区域。
c. 使用显微镜观察计数板上的细胞数量，计数细胞数量并记录。
- 细胞计数仪法：a. 取适量细胞培养物，将其均匀悬浮于一定体积的培养基中。
b. 使用小型离心机离心细胞悬浮液，以沉淀细胞。
c. 倒掉上清液，用适量缓冲液洗涤细胞沉淀。
d. 将细胞沉淀重新悬浮于缓冲液中。
e. 使用细胞计数仪准确测定细胞数量。
三、实验结果与讨论在本次实验中，我们选取了两种常用的细胞计数方法，即显微镜计数法和细胞计数仪法。
通过对比它们在实验中的应用情况，我们可以得出以下结论：1. 显微镜计数法的优势：显微镜计数法是一种传统且常用的细胞计数方法，其优势在于操作简单、成本低廉。
只需要使用显微镜即可对细胞数量进行直接观察和计数。
此外，显微镜计数法适用于各种类型的细胞，无需特殊处理。
2. 显微镜计数法的局限性：显微镜计数法的局限性主要体现在对细胞数量的准确性和可重复性方面。
由于人眼的视觉限制和主观性，显微镜计数法在高密度细胞计数时容易出现误差，并且对于小型细胞的计数也存在困难。
此外，显微镜计数法需要操作者具备一定的经验和技巧，否则可能导致计数结果的不准确。
3. 细胞计数仪法的优势：细胞计数仪法是一种自动化的细胞计数方法，其优势在于高度准确和可重复性。
细胞计数与细胞增
细胞污染
细菌污染 真菌污染 细菌和真菌的清除 支原体污染 支原体的清除
细菌污染
细胞培养常见的污染 最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰
氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。 污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
⑤在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液时，加液量不要溢出盖 片，也不要过少或带气泡。
⑥在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左 不数右的原则进行计数。
⑦染色标本在计数细胞时必须在15分钟内检查计数完毕。因为台盼蓝染液可 以将死细胞迅速地染上蓝色，再延长时间则活细胞也将逐渐着色。
细胞增殖实验（MTT法）
④镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数， 计细胞活力。
死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞， 活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。另外，活力 测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液 对原细胞悬液的加倍稀释作用。
细胞计数时的注意事项
①消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。否则 会影响细胞计数结果。
过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限. 如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等，氨基糖苷
类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。 通常，滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。 药物辅助高温处理法 • 先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀 死支原体，但对细胞有不良影响。 支原体特异性血清法 • 用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原 体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。
ctg 细胞增殖公式
ctg 细胞增殖公式
CTG细胞增殖公式是一种用于描述细胞增殖过程的数学公式。
在细胞生物学中，细胞增殖是指细胞数量的增加，这是生物体生长和发育的基础。
CTG细胞增殖公式通过描述细胞的分裂和增殖过程，帮助我们理解细胞生长的规律和机制。
细胞增殖是一个复杂的过程，涉及到细胞的DNA复制、有丝分裂和细胞分裂等一系列步骤。
CTG细胞增殖公式通过数学方式将这些步骤表示出来，从而使我们能够更好地理解细胞增殖的过程。
在CTG细胞增殖公式中，C表示细胞数目，T表示时间，G表示细胞的增殖速率。
细胞增殖速率可以通过测量单位时间内细胞数目的变化来计算。
根据CTG细胞增殖公式，细胞增殖速率与细胞初始数目和时间的关系是非线性的，即细胞增殖速率随着时间的增长而逐渐减缓。
CTG细胞增殖公式的应用范围广泛。
在医学和生物科学研究中，我们可以利用CTG细胞增殖公式来研究肿瘤的生长过程，评估抗癌药物的疗效，以及预测细胞增殖的趋势。
此外，CTG细胞增殖公式还可以用于农业领域，研究植物的生长和发育过程，提高农作物的产量和质量。
CTG细胞增殖公式是一种重要的数学工具，用于描述细胞增殖的规律和机制。
通过研究细胞增殖过程，我们可以更好地理解细胞生长
的规律，为医学和生物科学的发展做出贡献。
细胞增殖速度实验报告
一、实验目的本研究旨在通过细胞培养实验，观察细胞在不同条件下增殖速度的差异，分析影响细胞增殖的因素，为细胞生物学研究和相关疾病的治疗提供理论依据。
二、实验材料1. 实验细胞：人肺腺癌细胞株（A549）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养试剂：胎牛血清、青霉素-链霉素双抗、胰蛋白酶4. 实验仪器：细胞培养箱、显微镜、酶标仪、离心机等5. 实验试剂：CCK-8试剂盒、MTT试剂盒、细胞计数板等三、实验方法1. 细胞培养：将人肺腺癌细胞株A549接种于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期时进行实验。
2. 细胞增殖实验：（1）MTT实验：将细胞接种于96孔板，每孔100μl，分别设置实验组和对照组，实验组加入不同浓度的药物处理，对照组加入等量DMEM培养基。
培养24小时后，加入20μl MTT溶液，继续培养4小时。
弃去上清液，加入150μl DMSO，用酶标仪测定各孔吸光度值（OD值）。
（2）CCK-8实验：将细胞接种于96孔板，每孔100μl，分别设置实验组和对照组，实验组加入不同浓度的药物处理，对照组加入等量DMEM培养基。
培养24小时后，加入10μl CCK-8溶液，继续培养2小时。
用酶标仪测定各孔OD值。
（3）细胞计数实验：将细胞接种于细胞计数板，在显微镜下观察并计数细胞数量。
3. 数据分析：采用SPSS 21.0软件对实验数据进行统计分析，比较各组间差异。
四、实验结果1. MTT实验：实验结果显示，随着药物浓度的增加，细胞增殖能力逐渐减弱，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. CCK-8实验：实验结果显示，随着药物浓度的增加，细胞增殖能力逐渐减弱，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 细胞计数实验：实验结果显示，随着药物浓度的增加，细胞数量逐渐减少，与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
药片细胞实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同药片对细胞增殖的影响，了解药片中的活性成分对细胞生长的调节作用，为进一步研究药片的药理作用提供实验依据。
二、实验原理细胞增殖是生物体生长发育、组织修复和再生的重要过程。
本实验通过将细胞培养在含有不同药片的培养基中，观察细胞生长状况，分析药片对细胞增殖的影响。
实验中，细胞增殖情况通过细胞计数和细胞周期分析进行评估。
三、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293细胞）2. 药片：A药片、B药片、C药片（含有不同活性成分）3. 培养基：DMEM培养基4. 胎牛血清5. 胰蛋白酶6. 细胞计数板7. 流式细胞仪8. 移液器9. 移液枪10. 微量离心管11. 酶标仪四、实验步骤1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于6孔板，加入DMEM培养基和胎牛血清，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 药片处理：将A、B、C三种药片分别用适量DMEM培养基溶解，配制成不同浓度的药片溶液。
3. 实验分组：将细胞分为四组，分别为空白对照组、A药片组、B药片组、C药片组。
4. 药片作用：将药片溶液加入各组细胞培养基中，置于培养箱中培养24小时。
5. 细胞计数：用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞，用细胞计数板计数，计算细胞密度。
6. 细胞周期分析：收集细胞，用流式细胞仪检测细胞周期分布。
7. 数据分析：对实验数据进行统计分析，比较各组细胞增殖差异。
五、实验结果1. 细胞计数结果：A药片组、B药片组、C药片组细胞密度均高于空白对照组，且随着药片浓度的增加，细胞密度呈上升趋势。
2. 细胞周期分析结果：A药片组、B药片组、C药片组细胞G0/G1期比例低于空白对照组，S期比例高于空白对照组，表明药片能促进细胞增殖。
六、实验分析与讨论1. 药片对细胞增殖的影响：实验结果表明，A、B、C三种药片均能促进细胞增殖，且随着药片浓度的增加，细胞增殖作用增强。
这可能与药片中的活性成分有关，说明药片具有一定的药理活性。
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荧光染料Hoechst33258染色法检测支原体 荧光染料Hoechst33258染色法检测支原体
荧光染色法(33258)显示染色体，细胞周围亮点为支原体
Giemsa染色法，附于胞质上黑点为支原体
扫描电镜法显示支原体，附于细胞表面众多的圆 形颗粒为支原体
支原体的清除
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支原体清除剂MRA （Mycoplasma Removal Agent）处理法 支原体清除剂 ） 天换一次液， 每4天换一次液，连续处理 天 天换一次液 连续处理15天 清洗纯化法 细胞营养驯化→优质细胞群的筛选 细胞清洗→反复离心洗涤 优质细胞群的筛选→细胞清洗 细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤 原理：由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生， 原理：由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生，所以通 过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限. 过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限 如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 药物辅助高温处理法 先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时 小时， 先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在 ℃培养 小时，可杀 死支原体，但对细胞有不良影响。 死支原体，但对细胞有不良影响。 支原体特异性血清法 的兔支原体免疫血清可去除支原体污染， 用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原 的兔支原体免疫血清可去除支原体污染 体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性 并且5个月后仍为阴性 天即转为阴性， 个月后仍为阴性。 体生长，故经抗血清处理后 天即转为阴性，并且 个月后仍为阴性。
生长特点 排列成放射状， 排列成放射状，漩涡状 放射状 并不紧靠连成片， 并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而 细胞 细胞接触易断开而 单独行动 游离的单独的成纤维样细胞， 游离的单独的成纤维样细胞， 单独的成纤维样细胞 常有几个伸长的细胞突起 常有几个伸长的细胞突起
培养细胞形态不稳定 血清 Hela pH Hela 高血清 低血清
分类 根据形态大致的不同，主要 类 根据形态大致的不同，主要2类： 上皮样 成纤维细胞样 其它， 其它，不定型
上皮样细胞型
名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于 名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于-来源：来源于外胚层，内胚层细胞 来源：来源于外胚层， 如：皮肤及其衍生物 消化道，乳腺， 消化道，乳腺，肺泡 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞 形态：类似体内的上皮细胞 体内的 扁平，不规则多角形， 扁平，不规则多角形，中有圆形核
优点 生存空间大， 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化 传代方便 不需消化) 不需消化 易于收获 可获得稳定状态 缺点 观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞 很多细胞不能悬浮生长 尤以正常细胞) 尤以正常细胞
贴壁细胞在生长状态良好时，细胞内颗粒少，看不到有空泡， 细胞边缘清楚，培养基内看不到悬浮的细胞和碎片，培养液 清澈透明，而当细胞内颗粒较多，透明差，空泡多时，表明 生长较差。当瓶内培养基混浊时，应想到细菌真菌污染的可 能。悬浮细胞当边缘清楚，透明发亮时，生长较好；反之， 则较差或已死亡。由于培养基内有 pH 指示剂的存在，因此 它的颜色往往可以间接地表明细胞的生长状态。呈橙黄色时， 细胞一般生长状态较好；呈淡黄色时，则可能是培养时问过 长，营养不足，死亡细胞过多；如呈紫红色，则可能是细胞 生长状态不好，或已死亡。
2．细胞活力 ． ①将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 ②加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。 ③吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。 ④镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数， 计细胞活力。 死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞， 活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。另外，活力 测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液 对原细胞悬液的加倍稀释作用。
Hemocytometer Cell Counts
Hemocytometer
The most common routine method for cell counting which is efficient and accurate is with the use of a hemocytometer.
支原体污染
95％以上是以下四种支原体： 95％以上是以下四种支原体：
•口腔支原体（M.orale） 口腔支原体（ orale） 口腔支原体 •精氨酸支原体（M.arginini） 精氨酸支原体（ arginini） 精氨酸支原体 •猪鼻支原体（M.hyorhinis） 猪鼻支原体（ hyorhinis） 猪鼻支原体 •牛莱氏无胆甾原体（idlawii） 牛莱氏无胆甾原体（ laidlawii） 牛莱氏无胆甾原体
!
真菌污染
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作 用而使细胞脱落死亡。
细菌和真菌的清除
使用抗生素
抗生素对杀灭细菌较有效。（当在无血清培养基中添 加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度 的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血 清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到 毒性水平）。 联合用药比单独用药效果好。 预防用药比污染后再用药效果好，一般用双抗生素。 污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍药物冲洗 法，于加药后作用24～48小时再换常规培养液。此 法在污染早期有效。
成纤维细胞样
太酸或太碱
上皮样细胞
标准pH 标准
成纤维细胞样
细胞密度 3T3 生长状态改变 悬浮或贴附 转化与否 低密度
上皮样细胞
高密度
成纤维细胞样
悬浮
上皮样细胞
贴附
圆形
未转化
成纤维或上皮样
转化后
成纤维样
可成上皮样
悬浮生长型
概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源自血，脾或骨髓， 来源自 脾或骨髓， 特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形， 细胞圆形，单个或小细胞团 圆形 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能
细胞污染
细菌污染 真菌污染 细菌和真菌的清除 支原体污染 支原体的清除
细菌污染
细胞培养常见的污染 最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰 氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。 污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
⑦染色标本在计数细胞时必须在15分钟内检查计数完毕。因为台盼蓝染液可 以将死细胞迅速地染上蓝色，再延长时间则活细胞也将逐渐着色。
细胞增殖实验（ 细胞增殖实验（MTT法） 法
(一)原理 MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT（噻唑蓝）为 基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作 用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶， formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥 珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan 结晶可以用DMSO来溶解，利用酶标仪测定570 nm处的光 密度OD值，以反映出活细胞数目。
支原体污染检测
荧光染色法 电镜检查：扫描电镜、透射电镜 电镜检查：扫描电镜、 支原体培养 聚合酶链反应(PCR)法 法 聚合酶链反应
支原体污染表现
细胞营养液常常仍清亮但变黄,细胞生长变缓， 细胞营养液常常仍清亮但变黄 细胞生长变缓，部分细胞发 细胞生长变缓 生脱落等等，细胞间隙可见铺满细沙样小点。 生脱落等等，细胞间隙可见铺满细沙样小点。
1 mm 0.1 mm 1 mm Volume : 0.1mm3 1 ml = 1 cm3 = 1000 mm3
Dead cell
细胞计数及活力
细胞计数时的注意事项 ①消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。否则 会影响细胞计数结果。 ②取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时尤应注意 这一点。否则，前后计数结果会有很大误差。 ③镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计数。 如细胞团占10%以上，说明消化不充分。 ④细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，说明稀释不当， 200 /10mm2 500 /10mm2 需重新制备细胞悬液。 ⑤在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液时，加液量不要溢出盖 片，也不要过少或带气泡。 ⑥在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左 不数右的原则进行计数。
培养时：这些细胞被放到体外环境中以后, 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某 一固相表面才能生存和生长， 一固相表面才能生存和生长，因而 属于粘附型细胞。 属于粘附型细胞。 粘附(锚定或锚着)依赖型( 粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能 细胞： 生存的细胞
类型 细胞在体内、外的粘附方式：存在差异 细胞在体内、 粘附方式： 方式 体内：粘附是 体内：粘附是全方位 外形具有复杂的立体特征 外形具有复杂的立体特征 具有 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 外形一般 一般与体内时明显不同 外形一般与体内时明显不同 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型
贴壁(粘附) 贴壁(粘附)型细胞
粘附:是大多数有机体细胞在体内 粘附:是大多数有机体细胞在体内 细胞 生存和生长发育的 生存和生长发育的基本存在方式 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 有机体的绝大多数细胞必须 粘附于一固相表面 粘附于一固相表面 于一 才能生存和生长。 才能生存和生长。 生存