肿瘤干细胞的分离与纯化研究进展
肿瘤生物学的新发现
肿瘤生物学的新发现肿瘤生物学作为生物医学领域的一个重要分支，一直在不断探索和发现新知识，为肿瘤的预防、诊断和治疗提供了重要的理论基础和实践指导。
近年来，随着科学技术的不断进步，肿瘤生物学领域也涌现出许多新的发现，为人类战胜癌症带来了新的希望和机遇。
本文将介绍一些近年来在肿瘤生物学领域取得的新发现。
一、肿瘤干细胞的发现肿瘤干细胞是一类具有干细胞特性的肿瘤细胞，具有自我更新和多向分化的能力，能够不断产生肿瘤细胞，是肿瘤发生、发展和复发的关键。
近年来，研究人员通过一系列实验和技术手段，成功地从肿瘤组织中分离和鉴定出肿瘤干细胞，揭示了肿瘤干细胞在肿瘤发生和发展中的重要作用。
肿瘤干细胞的发现为深入理解肿瘤的发生机制和寻找新的治疗靶点提供了重要线索。
二、免疫治疗的突破免疫治疗作为肿瘤治疗的一种新兴手段，通过激活机体免疫系统来攻击肿瘤细胞，具有独特的治疗机制和显著的疗效。
近年来，免疫治疗取得了一系列突破性进展，如免疫检查点抑制剂的成功应用、CAR-T细胞疗法的突破、肿瘤疫苗的研发等，为肿瘤治疗带来了新的曙光。
免疫治疗的突破不仅改变了传统肿瘤治疗的模式，也为普通患者提供了更多的治疗选择。
三、肿瘤代谢的新认识肿瘤细胞与正常细胞在代谢特性上存在明显差异，肿瘤细胞具有高度依赖糖类代谢和严重的酸化微环境等特点。
近年来，研究人员通过对肿瘤代谢的深入研究，揭示了肿瘤代谢异常与肿瘤发生、发展的密切关系，发现了一些新的代谢靶点和药物，为肿瘤治疗提供了新的思路和方法。
肿瘤代谢的新认识不仅有助于揭示肿瘤的发生机制，也为个性化治疗和靶向治疗提供了重要依据。
四、液体活检技术的应用液体活检技术是一种通过检测体液中的肿瘤标志物或肿瘤细胞来实现肿瘤诊断和监测的新技术。
近年来，液体活检技术得到了广泛应用，已成为肿瘤诊断和监测的重要手段。
通过对血液、尿液、脑脊液等体液中的肿瘤标志物或肿瘤细胞进行检测，可以实现早期肿瘤的筛查和诊断，监测肿瘤治疗效果，评估肿瘤的预后等，为临床医生提供了更多的信息和选择。
干细胞研究进展
干细胞研究进展【摘要】干细胞是人体及其各种组织细胞的最初来源，具有高度自我复制，高度增殖和多向分化的潜能。
干细胞研究正在向现代生命科学和医学的各个领域交叉渗透，干细胞技术也从一种实验室概念逐渐转变成能够看得见的现实。
干细胞研究已成为生命科学中的热点。
基于此，本篇文章就干细胞的最新研究进展情况进行了综述，旨在为读者提供了解干细胞研究的平台。
【关键词】干细胞；肿瘤干细胞；神经干细胞干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下它可以分化成多种功能细胞。
干细胞的用途非常广泛，涉及到医学的多个领域。
目前科学家已经能够在体外鉴别、分离、纯化、扩增和培养人体胚胎干细胞，并以这样的干细胞为“种子”，培育出一些人的组织器官。
干细胞及其衍生组织器官的广泛临床应用，将产生一种全新的医疗技术，也就是再造人体正常的甚至年轻的组织器官，从而使人能够用上自己的或他人的干细胞或由干细胞所衍生出的新的组织器官，来替换自身病变的或衰老的组织器官。
本文将对肿瘤干细胞、心肌干细胞以及神经干细胞的研究做如下综述。
1、肿瘤干细胞概述1.1肿瘤干细胞学说的提出。
1960年以来，许多动物实验证明只有当肿瘤细胞数大于100万时才可以形成新的肿瘤。
一些研究显示并不是所有的肿瘤细胞都能增殖，可能只有小部分肿瘤细胞具有滞留源性，而大部分是肿瘤起始细胞或肿瘤干细胞。
随着对干细胞研究的不断深入，发现干细胞和肿瘤干细胞之间具有许多共同特征：他们都具有多向分化潜能和自我更新能力，以及相似的细胞表面标志和相同的信号调节通路等[1]。
于是提出肿瘤起源于肿瘤干细胞，是一种干细胞疾病，肿瘤是正常干细胞累计突变的结果，“肿瘤干细胞学说”应运而生。
1.2肿瘤干细胞的分离和鉴定。
近年来，干细胞研究的发展很大程度上依赖于细胞分化抗原的研究进展，细胞表面特异性标志的确定是肿瘤干细胞分离的第一步。
一般原则为结合谱系标志，正常干细胞特异标志（如btsc的cd133与分离lsc的cd34）以及正常组织特异性标志等综合评价[2]，很多学者认为结合阳性标志和阴性标志可以更有效地分离干细胞。
干细胞的研究进展及临床应用
干细胞的研究进展及临床应用摘要由于干细胞的多潜能性，使得干细胞是人类疾病治疗的前景可观的细胞来源。
随着对干细胞研究的不断扩展，干细胞用于疾病的临床治疗也在不断地发展，再加上各国政府的支持，干细胞的研究有望为疾病的临床治疗开辟新的天地。
本文中结了近几年来干细胞的研究进展以及其临床应用的现状。
关键词干细胞研究进展临床应用1干细胞的研究进展1964 年Lewis Kleinsmith and Barry Pierce 第一次分离和培养了畸胎瘤组织块的干细胞，1981年英国的Evans和Kaufman用延缓着床的胚泡首次成功地分离了小鼠胚胎干细胞,从而在全球掀起了有关干细胞的研究热潮。
1997年2月英国苏格兰罗斯林研究所威尔穆特博士等成功克隆出“多利”绵羊，1998年11月,美国Thomson和Gearhart分别用胚胎干细胞和胚胎生殖细胞建立了人的胚胎干细胞系,在体细胞与生殖细胞间架起了桥梁,为研究胚胎干细胞的发育,在体外培养人体细胞和组织,利用ES细胞治疗疾病提供了广阔的发展前景。
此后,干细胞的研究便进入了一个全新的时代。
Friedenstein证明来自BM的成纤维细胞样细胞在体内具有成骨的作用，这种细胞被认为是MSC，到1990s确定了MSC可以从不同于BM的来源分离出来（Erices A, Conget P, Minguell JJ. Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood. Br J Haematol 2000;109(1):235–242）。
现在整个医学界进入了用脂肪组织分化来的MSC用于组织损伤的状态。
间充质干细胞是潜在的治疗人类疾病的丰富的来源，一些临床试验正在运用这一丰富的来源。
2006年Takahashi and Y amanaka第一次成功的用Oct3/4，Sox2，Kif4和c-Myc四个因子将鼠的纤维细胞诱导成为具有干细胞特性的细胞即诱导多能干细胞。
肿瘤干细胞的分离方法
肿瘤干细胞的分离方法肿瘤干细胞（tumor stem cells）是肿瘤组织中一小部分细胞群的亚群，具有自我更新、自我复制和多向分化的能力，能够发起和维持肿瘤的生长和进展。
肿瘤干细胞的存在被认为是肿瘤的一个重要特征，因为它们在肿瘤的发展、转移和复发中起着重要的作用。
因此，肿瘤干细胞的分离与研究对于了解肿瘤的发生机制、寻找新的治疗策略以及改善临床预后具有重要的价值。
下面将介绍几种常用的肿瘤干细胞的分离方法。
1. 黑色素瘤干细胞（melanoma stem cells）分离方法：a. 表面标记法：利用特定的细胞表面标记物，如CD271、ABCB5等，可以通过荧光激活细胞分选（fluorescence-activated cell sorting，FACS）技术，将肿瘤干细胞从肿瘤组织中分离出来。
例如，采用CD271阳性细胞的FACS来分选肿瘤组织，可以得到具有肿瘤干细胞特性的细胞亚群。
b. 功能分选法：通过肿瘤干细胞的自我更新和多向分化能力，可以利用体外球形培养（spheroid culture）技术分离肿瘤干细胞。
相比于非干细胞，干细胞可以形成独立的球形结构，并表达特定的干细胞特性标记物，如ALDH1（aldehyde dehydrogenase 1）等。
2. 乳腺癌干细胞（breast cancer stem cells）分离方法：a. 流式细胞术：利用特定的细胞表面标记物，如CD44和CD24，可以通过流式细胞术将肿瘤干细胞从乳腺癌组织中分离出来。
例如，CD44+/CD24-细胞的分选可以得到乳腺癌中富含干细胞的细胞亚群。
b. 磁性珠分选法：通过特定的标记物，如EpCAM（epithelial cell adhesion molecule）和CD44，可利用磁性珠（magnetic beads）结合的方法将肿瘤干细胞从乳腺癌组织中分离出来。
3. 前列腺癌干细胞（prostate cancer stem cells）分离方法：a. 表面标记法：利用特定的细胞表面标记物，如CD44和CD133，可以通过流式细胞术或磁性珠分选法将肿瘤干细胞从前列腺癌组织中分离出来。
肿瘤干细胞研究：一个漫长且不寻常的旅程
种 骨髓 瘤 细胞 体外 克 隆培 养 ，仅 有００％～ ％的肿 瘤 研 究结果 支持 。 ．１ １ 细 胞 可 以 形成 克 隆 集 落 ，与体 内进 行 的脾 脏 克 隆 形 关于 肿瘤 干细 胞 的起源 ，Ｒ ｙ Ｎ ｅａ 通过 比较 造血 干
￣ Ｐ ｅ ｃ Ⅲ 分 析 前 人 研 究 成 果 之 后 ，认 为 肿 瘤 细 型 的细 胞 。 因此 ，认 为 肿 瘤干 细胞 很 可 能是 起 源 于 Ｎ ｉｒ ｅ 在
胞 也 和 正 常组 织 细 胞 一 样存 在 分 化 、成熟 ，如 果 阻 正 常 的干 细 胞 ，因为 从 干 细 胞 突变 成 肿 瘤干 细 胞 要
１ 瘤干细胞的认知之路 肿
肿 瘤 干 细 胞 的 证 据 可 以 追 溯 到 十 九 世 纪 ７ 年 ０
新 的肿瘤 。
２ ０ 年 ，Ｃｌｒ ｅ ０２ ａｋ 的研 究 小组 利 用荧 光活 化细 胞
代 ，早 在 １７年 ，病 理 学家Ｃ ｈ ｈ ｉ ８５ ｏ ｎ ｅｍ在用 显微 镜 对 分 离技术（ ｌｏｅｃｎ ｅ ｔ ａｅ ｅｌ ｏ ｉｇ ＡＣ ） Ｆｕ ｒｓｅ ｃ ｉ ｔｄＣ ｌＳ ￣ｎ ，Ｆ Ｓ Ａｃ ｖ 肿 瘤 组 织和 胚 胎 组 织进 行 观 察 和 比较 时 ，发 现 两者 即流 式 细 胞 术首 次 从 乳 腺 癌肿 分 离 出 肿瘤 干 细 胞 。 ０３ 一 ｊ Ｈａ ｉ— 很 相 似 ，因而 认 为 ，肿瘤 可 能 来 源 于位 置错 误 的 残 ２ ０ 年Ａ１ ｊ等 通过 特 异 性 的细 胞 表 面标 志 Ｌ ｎ 余胚 胎样 细胞 。到 上个 世纪 初 ，学 者Ｒ ｔ ｒ ｏｔ 通过 研 究 ＥＳ ｅ Ａ ＣＤ４ ４ＣＤ２ ‘ｏ ４／ ｗ分 离纯化 出乳 腺癌干 细胞 ，这 ｌ
肿瘤干细胞的分选技术
肿瘤干细胞的分选技术肿瘤干细胞（CSCs）是肿瘤中的一小部分细胞，它们具有自我更新和分化成多种细胞类型的能力，因此被认为是肿瘤再生和传播的主要驱动力。
从理论上讲，如果我们能够特异地杀死CSCs，那么我们就可以远离癌症的恶性复发。
于是，分选出CSCs变得尤为重要。
在本文中，我们将探讨一些主要的CSCs分选技术。
流式细胞术流式细胞术（FACS）利用现代电子学、光学、生物化学、计算机和细胞培养技术，将细胞根据它们表面的分子特性进行分选。
FACS操作时，通过特异性荧光标记CSCs表面的分子，从而实现对CSCs的识别和纯化。
FACS可以高速便捷地纯化癌细胞物质，但也需要专业的仪器和熟练的实验人员，并且存在标记的荧光染料会影响到细胞的功能等问题。
磁性分选技术磁性分选技术（MACS）是一种快速分选单个CSCs的方法。
通过现代分子技术，与CSCs表面相互作用的磁珠和受体可作为靶向识别分子进行设计和合成。
然后，通过把经由表面修饰的磁珠与抗体或其他分子连接在一起，这些活性珠可与选择性成像靶分子结合，并直接通过简单的磁场分离细胞。
利用细胞内荧光标记获得细胞样品另一种方法是通过利用特定标记在细胞内部获得细胞样品。
特定标记一般是由病毒、质粒或转座子DNA构成的，这些标记会在细胞内的某些特定部位进行转录，从而标记CSCs。
然后，可以对这些标记进行检测，从而确认CSCs的存在。
虽然该技术相对快捷和简便，但仍需要先验知识和经验，而且对于CSCs的检测和分离方法还没有得到充分的发展。
纳米颗粒分离技术传统的CSCs分选方法主要是通过细胞表面标记筛选以实现CSCs的分离，但近年来纳米颗粒分离技术逐渐被人们所关注。
纳米颗粒技术利用了纳米科技中的一些应用，将纳米颗粒与瘤细胞表面的受体或成像靶分子相结合，并介入极大数量的纳米颗粒；通过一个过滤器，可以将获得的细胞样品从纳米颗粒中分离出来。
这种技术的主要优点是可以快速而不需要使用任何荧光标记剂，减少了CSCs被污染的可能性。
肿瘤干细胞的研究现状和展望
肿瘤干细胞的研究现状和展望一、引言随着医学技术的不断发展，人们对于癌症的认知也在不断深入。
其中，肿瘤干细胞作为癌症的关键成分，越来越引起科学家们的重视。
本文将从肿瘤干细胞的定义、特点和研究现状三个方面展开，探讨其展望和未来研究方向。
二、肿瘤干细胞的定义肿瘤干细胞，又称癌干细胞或干癌细胞，是指癌组织中具有自我复制能力和多向分化潜能的一小部分细胞。
相较于普通肿瘤细胞，肿瘤干细胞的繁殖能力更强、增殖速度更快、对放疗和化疗的抵抗力更大。
三、肿瘤干细胞的特点1、自我更新能力：肿瘤干细胞可以自我复制，维持自身的克隆数量。
2、不对治疗敏感：肿瘤干细胞对传统放化疗的致死剂量有很高的抵抗力，使得癌症在治疗后很快复发。
3、多向分化潜能：肿瘤干细胞有着乳腺，神经，卡介苗等多向分化的潜能，所以常被称为多功能性干细胞。
4、微环境保护：周围环境的微调节可以控制肿瘤干细胞水平，维持其生长和转移，并且在失去特定的认知负担性状时，会放弃肝、骨和肺等的限制性选择。
四、肿瘤干细胞的研究现状1、肿瘤干细胞来源的研究：肿瘤干细胞可能源于普通肿瘤细胞和干细胞，有通过肿瘤化疗和放疗途径诱导的，也可以通过自体移植的方式进入体内。
当前的研究集中于肿瘤干细胞的起源和特性，以及新的肿瘤干细胞的治疗方法的研究。
2、肿瘤干细胞治疗方法的研究：肿瘤干细胞目前仍是难以治愈的一种肿瘤类型，为此，当前的研究主要集中于肿瘤干细胞抑制剂的研究，以减少肿瘤干细胞的数量，增加普通肿瘤细胞的敏感性，或是通过局部治疗，将肿瘤干细胞与普通肿瘤细胞区分开，使得治疗对于后者的影响相对较小。
3、肿瘤干细胞的转移机制研究：肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞的转移机制有较大的差异，肿瘤干细胞的转移远比普通肿瘤细胞更复杂，对研究人员而言，这更加强调肿瘤干细胞的研究机制的重要性。
五、肿瘤干细胞的展望和未来研究方向在肿瘤干细胞的研究中，我们需要关注的不仅仅是它的基本属性和起源，更加需要考虑如何充分探索其内部的机理和更具体的治疗手段。
胃癌干细胞的研究进展
ｒ ｅ ａ ｃ ｈ ｅ ｄ ， ｔ ｈ ｅ ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ｈ ａ ｓ ｎ ｏ ｔ ｂ ｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｎ ｉ ｆ ｒ ｍｅ ｄ ｙ ｅ ｔ ．Ｓ ｏ ａｒ ｆ ， ａ ｇ ｒ ｅ ａ ｔ ｎ ｕ ｍｂ ｅ ｒ ｏ ｆ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｅ ｓ ｈ ａ ｖ ｅ ｒ ｅ ｐ ｏ ｌｅ ｆ ｄ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ
导致 胃癌干细胞表面标志物未能明确。至今 已有 多项研 究先后报 道 了不 同表面标 志物 的 胃癌干样 细胞 ， 它们 中的大部分都
可分化为其他具有不同表型的 胃癌细胞 ， 并可 以在体外克 隆成球及 在免疫缺 陷小 鼠体 内成瘤 ， 符合 肿瘤干细 胞 自我更新 、 多
向分 化 、 高 效 致 瘤 等 特 征 。本 文 就 近 年 胃癌 干 细 胞 及 其 分 离 鉴 定 方 面 的 研究 进展 进行 综 述 。
・
９５ ２・
志 ２ ０ １ ３年 １ ０月 第 ｌ ８卷 第 １ ０期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｏｎ ｃ ｏ ｌ ｏ ￣． Ｏｃ ｔ ．２ ０ １ ３． Ｖｏ １ ． １ ８． Ｎ ｏ ． １ ０
胃 癌 干 细 胞 的 研 究 进 展
３ ５ ０ ０ ２ ５ 福州 福 建 医科大 学福 总临床 医学院 陈建新 ，陈 雄 ，欧 阳学农
ｓ ｔ ｅ ｍ— ｌ ｉ ｋ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｔ ｉ ｎ ｇ ｌ ｙ ｐ ｏ ｓ ｓ ｅ ｓ ｓ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｃ ａ ｎｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｃ ｌ ｕｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｐｌ ａ ｔ ｅ ｅ ｈ ｍｅ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ， ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔ ｕｍｏ ｒ ｉ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ． Ｔｈ ｅ ｐａ ｓ ｓ ａ ｇ ｅ ｗｉ ｌ ｌ ｓ ｕ ｍ ｍａ ｒ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈｅ ｓ ｏ ｎ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｒ ｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｙｅ ａ ｒ ｓ ．
肿瘤干细胞研究进展_胡博
中 图 分 类 号 Ｒ７３０．２１ 文 献 标 识 码 Ａ
Hale Waihona Puke Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ＨＵ Ｂｏ１ ＳＵＮ Ｄｉｎｇ２ ＸＵ Ｙａｎｇ１ １．Ｌｉｖｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００３２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｏｏｃｈｏｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ ２１５０００，Ｃｈｉｎａ
中 国 临 床 医 学 ２０１３ 年 ２ 月 第 ２０ 卷 第 １ 期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１３．Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．１
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肿瘤干细胞研究进展
·综述·
胡 博１ 孙 鼎２ 徐 泱１ （１．复 旦 大 学 附 属 中 山 医 院 肝 癌 研 究 所 ，上 海 ２０００３２；２．苏 州 大 学 附 属 第 一 医 院 ，江 苏 苏 州 ２１５０００）
基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 （编 号 ：８１０７１６６１） 通 讯 作 者 徐 泱 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｒｘｕｙａｎｇ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ
ＣＳＣ 理论认为，肿瘤起 源 于 少 数 具 有 自 我 更 新 能 力 和多向分化潜能的 ＣＳＣ，在 众 多 实 体 瘤 中 皆 有 ＣＳＣ 存在的可能，目 前 这 一 观 点 得 到 了 广 泛 认 可。 现 已 在血液系统肿瘤、脑 肿 瘤、乳 腺 癌 肿 瘤、前 列 腺 癌 肿 瘤、结肠癌肿瘤、胰 腺 癌 肿 瘤 等 中 证 实 了 ＣＳＣ 的 存 在。
肝癌干细胞样的自 我 更 新 和 分 化 能 力，因 此 具 有 作 为候选 ＬＣＳＣｓ标 志 物 的 重 要 价 值。 除 存 在 于 正 常 成人肝细胞之外，ＥｐＣＡＭ 在胚 胎 肝 母 细 胞、胆 管 上 皮 、肝 干 细 胞 、癌 前 病 变 肝 组 织 的 肝 细 胞 及 肝 癌 细 胞 中均高度 表 达。 越 来 越 多 研 究 显 示，ＥｐＣＡＭ 在 细 胞增殖、迁移及有丝 分 裂 信 号 传 导 方 面 扮 演 着 重 要 角色。肝癌 ＥｐＣＡＭ＋细胞比 ＥｐＣＡＭ－细胞具有 更 强的成瘤及侵袭能力［１３］。Ｋｉｍｕｒａ等［１４］研究结果 表 明，ＥｐＣＡＭ ＋ 与 ＥｐＣＡＭ－肝 癌 细 胞 群 间 存 在 本 质 的生物学 差 异，ＥｐＣＡＭ＋ 细 胞 群 包 含 ＣＳＣ 样 的 高 度 致 瘤 性 细 胞。Ｙａｍａｓｈｉｔａ 等［１２］进 一 步 证 实，与 ＥｐＣＡＭ－ＡＦＰ－（ａ－ｆｏｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ）肝 癌 细 胞 相 比，Ｅｐ－ ＣＡＭ＋ＡＦＰ＋肝癌细胞对门静脉侵犯更加 常 见，使 患者生存 时 间 明 显 缩 短。 由 于 ＥｐＣＡＭ 是 Ｗｎｔ／β－ ｃａｔｅｎｉｎ通路的 靶 基 因，通 过 阻 断 Ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ 通 路来抑制 ＥｐＣＡＭ＋ 肝 癌 细 胞 增 殖，将 为 治 疗 肝 癌 提供新的思路。 ２．４ 卵 圆 细 胞 抗 原 （ＯＶ６） 肝 卵 圆 细 胞 于 １９４４ 年 在大鼠 化 学 诱 导 癌 的 生 成 过 程 中 发 现。１９５６ 年， Ｆａｒｂｅｒ首次将其命名 为 卵 圆 细 胞。 其 体 积 较 小，细 胞 核 占 据 大 部 分 细 胞 质 ，呈 卵 圆 形 ，细 胞 质 嗜 碱 性 且 浅染，表现出未 分 化 细 胞 的 特 点。 卵 圆 细 胞 是 肝 脏 的 干 细 胞 ，具 备 多 向 分 化 潜 能 ，体 内 外 实 验 证 实 其 可 以分化为肝细胞、胆 管 细 胞、胰 腺 及 肠 型 上 皮 细 胞。 Ｙａｎｇ等 研 ［１５］ 究 表 明，肝 卵 圆 细 胞 能 表 达 卵 圆 细 胞 特异标志物 ＯＶ６，在 ＳＭＭＣ－７７２１ 细 胞 系 中 ＣＤ１３３ 表达的细胞仅 为 ０．１２ ％，几 乎 都 出 现 在 ＯＶ６＋ 亚 群细胞中，提示 ＯＶ６＋可以作为肝 癌 干 细 胞 的 标 志 物。将 ＯＶ６＋ＳＭＭＣ７７２１细胞植入 ＮＯＤ／ＳＣＩＤ 小 鼠体内后，可 以 形 成 较 大 肿 瘤，而 ＯＶ６－ 细 胞 则 不 能或只 能 形 成 很 小 的 肿 瘤。 此 外，需 要 ５０～１００ 倍 于 ＯＶ６＋的细 胞 浓 度 的 ＯＶ６－ 细 胞 才 能 在 ＮＯＤ－ ＳＣＩＤ 小鼠体内形成近似于 ＯＶ６＋ 所 形 成 的 肿 瘤 大 小。 ２．５ ＣＤ９０ ＣＤ９０又称 Ｔｈｙ－１，为免 疫 球 蛋 白 超 家 族中的分子量最小 的 成 员，是 一 种 分 子 量 为 ２５ ０００ ～３７ ０００的糖基磷脂 酰 肌 醇 锚 定 糖 蛋 白，主 要 表 达 于 造 血 干 细 胞 ，并 参 与 细 胞 与 细 胞 、细 胞 与 基 质 间 的 相互作用。Ｙａｎｇ等 研 ［１５］ 究显示，ＣＤ９０是肝 癌 ＣＳＣ 的候选标志物。从肝 癌 细 胞 系 中 分 离 的 ＣＤ９０＋ 细 胞能促进免疫缺陷小鼠体内肿瘤的形成与转移。作 为标 志 物，ＣＤ９０ 在 肝 干／祖 细 胞、小 鼠 乳 腺 ＣＳＣ 以 及原代培 养 的 ＣＤ１３３＋ 胶 质 母 细 胞 瘤 表 面 均 有 表 达。在所有肝癌标本及 ９０ ％ 以 上 的 肝 癌 患 者 血 样
肿瘤干细胞临床应用研究进展
肿瘤干细胞临床应用研究进展目前恶性肿瘤患者5年生存率大幅提高，这与早筛选、早诊断、早治疗以及新型治疗手段的出现密切相关。
但也仍有部分患者会发生肿瘤复发或转移，甚至在多次治疗后出现治疗耐药，最终导致治疗失败。
既往研究证实这些现象的产生与肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSCs）的存在密切相关。
CSCs最初是在乳腺癌和白血病中发现，它们是肿瘤组织内的一小部分具有逆分化、自我更新能力的细胞，具有潜在的迁徙和转移细胞特征，且对传统化疗和放疗均耐药。
因此，针对难治性癌细胞的后续化疗大多预后较差。
此外，研究表明CSCs可以分别从遗传学和表观遗传学途径上通过细胞的内外分子调控CSCs异质性，其中mRNA也发挥重要的调控作用。
在乳腺癌研究中显示，mRNA-200c/141通过上调蛋白激酶1，激活β-catenin而调节CSCs 异质性，促进肿瘤细胞侵袭，是肿瘤细胞存活及逃逸的重要原因。
CSCs通过表观遗传学修饰改变代谢途径和表型特征也是肿瘤细胞侵袭转移及耐药的重要原因。
这些特征及其临床意义都表明了研究CSCs的重要性。
目前也已开发不少靶向CSCs的治疗手段，但是由于缺乏特异性的靶向生物标志物，治疗效果仍然不理想。
本文概述了CSCs在肿瘤发生和发展中的重要作用，以及对临床诊断及预后的影响及其靶向治疗的研究新进展，为进一步探索CSCs潜在治疗靶点提供线索。
01CSCs的特征1.1 CSCs基因及转录特征干细胞是能够自我更新的多能细胞，并具有分化成任何细胞类型的潜力，其主要代表为胚胎干细胞。
成体干细胞是器官中存在的少量未分化的干细胞。
在正常细胞更新或损伤时，成体干细胞便可增殖分化补充受损细胞。
CSCs可由正常干细胞经过基因突变累积，增殖分化能力失去控制而产生。
在肿瘤发生过程中常常累积许多突变，而最初的致癌突变可能发生在干细胞中。
一项关于急性髓性白血病（acutemyeloid leukemia，AML）患者的单细胞测序研究显示，在正常造血干细胞中通常携带有一种或两种突变，并同时存在于AML原始细胞中。
肿瘤干细胞的研究进展
课程考核论文课程名称：肿瘤干细胞的研究进展成绩：肿瘤干细胞的研究进展摘要：肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新能力和分化潜能，能产生异质性细胞的细胞。
本文简要阐述了肿瘤干细胞的来源、分离技术及鉴定，并对以肿瘤干细胞分化、临床应用前景和问题进行了综述。
关键词：肿瘤、干细胞、应用肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSC)理论认为，肿瘤组织中绝大多数细胞增殖能力有限，不能自我更新，不会导致肿瘤的复发、转移；CSC只占肿瘤细胞中的极少部分，却是肿瘤发生、发展的关键。
CSC研究有可能阐明肿瘤的发生机制，使肿瘤治愈，从而引发肿瘤学领域的革命性变革，意义重大。
本文拟就CSC 的起源和鉴定等作一简要综述。
一、肿瘤干细胞的来源肿瘤干细胞起源目前有两种学说：(1)由于正常干细胞突变形成肿瘤干细胞；(2)一些已经开始分化的原始细胞或成熟细胞去分化变为幼稚细胞并具有分裂能力。
Sell 认为恶性肿瘤的产生和发展是由于干细胞的分化受阻，而不是成熟细胞的去分化；干细胞是起始事件或“第一次打击”(即获得永生性)突变的靶标，干细胞本身具有永生性，只需获得异常增殖的突变即可；体细胞的突变不会形成肿瘤，是因为成熟细胞的半衰期短，一个正常细胞形成转化细胞至少需要几年至几十年，在促进事件或”第二次打击”(即获得异常增殖能力)，细胞通常早已死亡。
尽管缺乏直接的实验证据，但也有研究人员认为CSC是正常SC同其他细胞融合的结果。
因为骨髓细胞容易与其他类型的细胞发生融合，Marx等_6认为，Houghton等在胃上皮细胞观察到的骨髓细胞是骨髓细胞与上皮细胞融合所形成的。
细胞融合因子CD 是乳腺癌干细胞的阳性标记，暗示CSC可能具有与其它细胞融合的能力。
Bjerkvij等观察到在病理条件下，SC和已经出现肿瘤相关基因突变的细胞发生融合，这种融合后的细胞具有sC的特性。
胚胎干细胞是指胚胎内细胞团或原始生殖细胞，具有发育全能性，在理论上可以诱导分化为机体内所有类型的细胞，在体外可以大量扩增、筛选、冻存和复苏而不会丧失其原有的特性。
肿瘤干细胞培养技术
肿瘤干细胞培养技术随着干细胞生物学以及肿瘤学研究的不断深入，肿瘤干细胞已成为当前肿瘤研究的热点。
肿瘤干细胞的体外培养在肿瘤干细胞研究领域具有不可替代的重要地位，通过分离、纯化及培养肿瘤干细胞可以对其生物学特性如异质性、肿瘤的演化、转移和抗药性等进行研究，为肿瘤的早期诊断与治疗提供了新的思路和策略。
肿瘤干细胞的体外培养多采用无血清培养基(serum free medium, SFM)，根据不同的细胞类型加入适当的细胞因子联合培养以防止其分化。
肿瘤细胞系或者是临床肿瘤组织联合采用机械和胶原酶消化肿瘤组织得到单细胞悬液，经过流式细胞仪或者免疫磁珠分选的方法得到肿瘤干细胞使用无血清培养基在37℃，5％饱和湿度的条件下进行体外培养，但值得注意的是临床肿瘤组织的获取应该CO2越新鲜越好，最好是在外科手术后1小时内进行处理否则将影响肿瘤干细胞细胞的活性，不利于体外培养。
无血清培养基有很多种，针对不同的细胞类型有专门的无血清营养液出售。
无血清培养基具有以下的优点：各批产品之间成分相对明确、质量相对一致；便于控制培养的生理环境；特殊细胞类型的优化配方有利于提高细胞的稳定性，使不同类型的细胞能在最有利于各自生长的环境中持续传代培养；依据不同类型的细胞、甚至不同的细胞系(株)都可能有各自的无血清培养基。
总的来说可以分为基础营养基及附加成分两大部分[1]。
基础培养基一般采用人工合成的培养基主要有DMEM、DMEM/F12、UltraCULTURETM、神经干细胞专用无血清培养基、黑色素瘤专用培养基等其中以DMEM/F12(1:1，Invitrogen)最为常用。
附加成分是指在基础培养基中加入各种不同细胞生长所需的营养成分，包括①营养因子：胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠、牛血清白蛋白、B27、L－谷氨酰胺；②细胞因子：白血病抑制因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、血小板衍化生长因子等。
使用无血清培养基培养的细胞经胰酶消化传代后不使用血清终止胰酶的作用，可使用0.1％－0.5%大豆胰酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor)。
肺癌肿瘤干细胞研究新进展
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关键词：肺肿瘤；干细胞；ＢＡＳＣｓ；综述
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相似的细胞表面标志和相同 的信号调节通路等。于是提 出肿瘤起源于肿瘤干细胞， 是一种干细胞疾病，是正常 干细胞累积突变的结果。 “肿瘤干细胞学说”认为肿 瘤组织由异质性的细胞群体 组成，肿瘤组织中存在的一 小部分具有干细胞性质的肿 瘤干细胞具有无限的自我更 新能力，可以产生与上一代 完全相同的子代细胞，并且 具有多种分化潜能和高度增
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人类肿瘤干细胞的分离和归巢机制
人类肿瘤干细胞的分离和归巢机制人类肿瘤干细胞（cancer stem cells）是指在肿瘤中具有多能性、自我更新和能够重建肿瘤组织结构的一种特殊的细胞群体。
它们是肿瘤发生和发展的关键，也是目前治疗肿瘤的难点所在。
因此，分离和归巢机制（homoeostasis）的研究对于深入了解肿瘤的形成和治疗机制具有重要意义。
一、肿瘤干细胞的发现和特征肿瘤干细胞的概念最早由美国科学家Bonnet和Dick在1997年提出。
他们将人类急性髓系白血病细胞分离出来，并发现其中只有极少数细胞具有造血干细胞的特性和功能。
这些细胞可以进行自我更新并重建髓系，从而形成了白血病干细胞。
相应地，肿瘤干细胞是指在肿瘤细胞群体中具有类似特性和功能的细胞。
肿瘤干细胞最显著的特征是具有多能性。
它们可以向不同的组织、器官和细胞方向分化，从而重建组织结构和功能。
此外，肿瘤干细胞还具有自我更新能力，可以不断产生新的同质细胞，并维持肿瘤的生长和扩散。
这种自我更新能力与正常细胞和肿瘤非干细胞有所不同，因为后者的增殖和细胞周期受到外界和内部环境的控制和调节。
二、肿瘤干细胞的分离方法肿瘤干细胞因为其数量极少、分布广泛、形态异质和特异性差异，所以分离和鉴定方法比较困难。
常用的分离方法有两种，一种是表面标记鉴定法（marker identification），另一种是功能鉴定法（functional identification）。
表面标记鉴定法是通过筛选特定的表面标记蛋白，如CD133、CD44和EpCAM等，来分离肿瘤干细胞。
这种方法存在很多局限性，比如肿瘤干细胞不一定具有特定的表面标记，容易受到处理过程、血管内皮细胞等非肿瘤细胞的污染，同时还需要进行更加深入的表征和验证。
功能鉴定法则是通过用体外和体内实验来鉴定细胞是否具有尽可能广泛的自我更新、分化和重建组织的能力，以此来确定肿瘤干细胞。
这种方法需要反复的细胞处理和检测，时间和费用成本较高，但能够比较准确地反映肿瘤干细胞的特点。
肿瘤干细胞分离方法的研究进展
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肿瘤干细胞实验方法
肿瘤干细胞实验方法肿瘤干细胞是一种新型细胞，具有自我更新，自我修复，多向分化和肿瘤形成的潜能。
它们在肿瘤的形成、发展和复发过程中扮演着重要的角色，因此对肿瘤干细胞的实验研究具有重要的意义。
本文将介绍肿瘤干细胞实验的基本方法。
1. 肿瘤干细胞培养肿瘤干细胞可通过单细胞克隆形成球体的方式进行培养，这种方法又被称为肿瘤球体培养。
其步骤如下：1) 确定肿瘤细胞株中的肿瘤干细胞含量。
2) 将肿瘤细胞株悬浮在无血清培养基中，添加必须的生长因子如EGF和FGF等，使其形成肿瘤球体。
3) 观察肿瘤球体的形成和生长情况，并进行维持和分离。
肿瘤球体与普通二维培养方式相比，具有较高的肿瘤干细胞含量，并具有良好的体外模拟肿瘤生长和浸润的特性。
此外，肿瘤球体可直接用于药物筛选和肿瘤干细胞信号机制的研究。
肿瘤干细胞的鉴定是肿瘤干细胞研究的重要环节。
主要通过以下两种方法进行：1) 流式细胞术通过肿瘤干细胞表面标志物表达的差异，通过流式细胞仪的分析来鉴定和筛选肿瘤干细胞。
常用的肿瘤干细胞表面标志物有CD133、CD44、CD24和ESA等。
2) 功能性鉴定法此方法是通过肿瘤干细胞的自我更新和多向分化的特性来进行鉴定。
肿瘤干细胞应该具有自我更新的能力，同时还具有多向分化的潜能，可以分化成多种类型的细胞。
通过上述方法鉴定出的肿瘤干细胞，需要进一步进行分选。
常用的方法有磁珠分选、流式细胞术和细胞筛等。
磁珠分选法是利用与表面标志物相关的磁珠对肿瘤干细胞进行筛选和富集。
流式细胞术，是利用表面标志物和细胞生物学特性进行筛选和富集。
细胞筛法是根据肿瘤干细胞的体积和生长特性进行富集。
4. 肿瘤干细胞治疗效果评价1) 体内治疗将肿瘤干细胞或肿瘤球体种植到动物体内，并进行药物治疗，以评价药物对于肿瘤干细胞的杀伤效果。
例如, 免疫缺陷小鼠移植瘤模型。
2) 体外药物筛选3) 分子生物学方法通过单细胞的特异性PCR和实时荧光PCR等分子生物学方法，检测肿瘤干细胞相对于肿瘤非干细胞的基因差异，从而评价治疗效果。
癌症干细胞研究与治疗前景
癌症干细胞研究与治疗前景癌症干细胞研究已经成为当前医学领域的热点，其所揭示的干细胞在肿瘤发生、发展和治疗中的作用备受关注。
随着科技的不断进步，人们对于癌症的认识不断深入，干细胞研究在癌症治疗方面展示出了重要的潜力。
本文将就癌症干细胞的研究进展以及治疗前景进行探讨。
一、癌症干细胞研究的进展在传统的癌症理论中，肿瘤被认为是由一群相同特征的癌细胞构成的。
然而，随着干细胞研究的深入，科学家们开始意识到癌症中的癌细胞并非都是相同的。
事实上，癌症中存在着具有自我更新和多能分化能力的癌症干细胞，它们是肿瘤发展和复发的根源。
针对癌症干细胞的研究旨在揭示癌症发生和发展的机制，以及寻找新的治疗策略。
通过利用干细胞标记物的研究方法，科学家们能够准确地鉴定出癌症中的干细胞群体，加深我们对癌症的认识。
二、癌症干细胞在治疗中的应用前景癌症干细胞在治疗中的应用前景非常广阔，其所具备的特点使其成为了一种理想的治疗目标。
首先，癌症干细胞具有多能分化能力，可以分化成肿瘤中的各种细胞类型，包括癌细胞。
因此，针对癌症干细胞的治疗策略能够更有效地杀灭肿瘤，减少肿瘤复发的可能性。
其次，癌症干细胞具有自我更新的能力，这使得它们能够在肿瘤治疗后幸存下来并继续分裂，从而导致肿瘤复发。
因此，研究人员寻找针对癌症干细胞的治疗方法，旨在彻底消除癌症的根源。
最后，癌症干细胞对于化疗药物的耐药性普遍存在。
这是由于癌症干细胞具有较高的ABC转运蛋白表达水平，使得化疗药物难以进入细胞内部。
因此，针对癌症干细胞的治疗方法能够解决目前化疗耐药性问题，提高治疗效果。
三、目前的癌症干细胞治疗方法目前，针对癌症干细胞的治疗方法主要包括药物疗法、基因治疗和免疫疗法。
药物疗法方面，研究人员发现某些化合物可以抑制癌症干细胞的增殖和分化，并对肿瘤产生抗增殖作用。
通过研究这些化合物的作用机制，可以针对癌症干细胞设计更加有效的治疗药物。
基因治疗方面，科学家们希望通过改变癌症干细胞的基因表达模式来消除它们的肿瘤性活性。
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摘要 ：随着肿瘤干细胞 学说 的 日 趋成熟 ， 针对干细胞 的靶 向治疗 已成为新 的理论 ， 分离与纯化肿瘤干细胞是研 究的重要组成 部分。目前国内外主要根据肿瘤干细胞 已知 的细胞表型和生物学特性 ，用 流式细胞仪分选法 、磁性激 活细胞 分选法和旁群细 胞 分选法来分离与纯化肿瘤干细胞 ，为肿瘤的临床诊断与治疗提供了依据。 关键词 ：肿瘤干细胞；分离；纯化 王榕 ，蒋敬庭，杨伊林 ， 昌平 ． 吴 肿瘤干细胞 的分离与纯化研究进展【 ． Ｊ 中国组织工程 研究与临床康复 ，２ ０ ，１ （） ６ ：６ 】 ０ ９ ３ １： １１ ４ １ 【ｔ ： ｗ ． ｔｒ ｒ ｈ ｐ ｃ ． ｌ ｆ ｏ 】 ｈ ｐ １ ｗｃ ｅ ． ｇ ￣ ： ｎｚ ｃ ． ｍ ｔ／ ｗ ｒ ｏ Ｈ ｇ ｋｃ
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综 述
肿瘤干细胞的分离与纯化研究进展
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