非病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白在永生化神经前体细胞的表达.

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增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化

增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化作者：曲萍，隋延仿，叶菁，张秀敏作者单位：第四军医大学基础医学教学实验中心,西安,710033刊名：陕西医学杂志英文刊名：SHAANXI MEDICAL JOURNAL年，卷(期)：2006，35(10)被引用次数：1次1.周宇荀;魏东芝;王二力融合蛋白表达载体pGEX及其应用 1998(10)2.倪培华;温惠萍;王丹艺绿色荧光蛋白及其应用[期刊论文]-中国实验诊断学 2001(05)3.Cubitt AB;Heim R;Adams SR Understanding,improving and using green fluorescent protein 19954.Sien RY The green fluorescent protein 1998(0)5.Heim R;Cubitt AB;Tsien RY Improved green fluorescence 19956.Chalfie M;Kain S Green fluorescent protein:properties,applications and protocols 19981.外文期刊Peatman E.Bao B.Peng X.Baoprasertkul P.Brady Y.Liu Z Catfish CC chemokines: genomicclustering, duplications, and expression after bacterial infection with Edwardsiella ictaluri.Chemokines are a family of structurally related chemotactic cytokines that regulate the migration of leukocytes, under both physiological and inflammatory conditions. CC chemokines represent the largest subfamily of chemokines with 28 genes in mammals. Sequence conservation of chemokines between teleost fish and higher vertebrates is low and duplication and divergence may have occurred at a significantly faster rate than in other genes. One feature of CC chemokine genes known to be conserved is genomic clustering. CC chemokines are highly clustered within the genomes of human, mouse, and chicken. To exploit knowledge from comparative genome analysis between catfish and higher vertebrates, here we mapped to bacterial artificial chromosome (BAC) clones 26 previously identified catfish (Ictalurus sp.) chemokine cDNAs. Through a combination of hybridization and fluorescent fingerprinting, 18 fingerprinted contigs were assembled from BACs containing catfish CC chemokine genes. The catfish CC chemokine genes were found to be not only highly clustered in the catfish genome, but also extensively duplicated at various levels. Comparisons of the syntenic relationships of CC chemokines may help to explain the modes of duplication and divergence that resulted in the present repertoire of vertebrate CC chemokines. Here we have also analyzed the expression of the transcripts of the 26 catfish CC chemokines in head kidney and spleen in response to bacterial infection of Edwardsiella ictaluri, an economically devastating catfish pathogen. Such information should pinpoint research efforts on the CC chemokines most likely involved in inflammatory responses.2.外文期刊Xiao.H.Jiang.N.Schaffner.E.Stockinger.EJ.van-der-Knaap.E A retrotransposon-mediated geneduplication underlies morphological variation of tomato fruit.Edible fruits, such as that of the tomato plant and other vegetable crops, are markedly diverse in shape and size. SUN, one of the major genes controlling the elongated fruit shape of tomato, was positionally cloned and found to encode a member of the IQ67 domain-containing family. We show that the locus arose as a result of an unusual 24.7-kilobase gene duplication event mediated by the long terminal repeat retrotransposon Rider. This event resulted in a new genomic context that increased SUN expression relative to that of the ancestral copy, culminating in an elongated fruit shape. Our discovery demonstrates that retrotransposons may be a major driving force in genome evolution and gene duplication, resulting in phenotypic change in plants.3.学位论文苏志熙几种哺乳动物表达序列标签（EST）生物信息学分析2006自1991年Adams等测定609条表达序列标签(expressed sequence tags，EST)后，大规模EST测序的概念得到了普遍认可，大规模EST测序技术得到了越来越广泛的应用。

慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染的人脐静脉内皮细胞

慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染的人脐静脉内皮细胞丁强;杨波;王簕;尹飚;唐龙;章波【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2014(000)015【摘要】BACKGROUND:Human umbilical vein endothelial cells transfected with lentivirus containing enhanced green fluorescent protein can be easily traced. The optimal multiplicity of infection and time for producing strong fluorescence intensity can lay the foundation of tracing human umbilical vein endothelial cells in animal models. <br> OBJECTIVE:To observe expression of lentivirus containing enhanced green fluorescent protein in human umbilical vein endothelial cells, and thereby to find a stable method to label human umbilical vein endothelial cells. <br> METHODS:Using 0.1%col agenase perfusion digestion, we isolated human umbilical vein endothelial cells, which then were placed into a culture medium containing 20%fetal bovine serum and endothelial cellgrowth factor and observed under an inverted microscope. Fol owing digestion, centrifugation and suspension, the cells were counted and divided into four groups, 5.0×105 cells in each group. After cells were seededonto 24-wel plates, 10μL serum-free Dulbecco’s modified Eagle’s medium was added into the blank group, and lentiviruses containing enhanced green fluorescent protein were added into another three groups for celltransfection respectively at multiplicities of infection of 2, 3, 4. Therewere three dishes in each group. <br> RESULTS AND CONCLUSION:After cultured for 5-7 days, isolated cells grew into a single layer and exhibited a cobblestone-like arrangement under a light microscope. In addition, factor VIII related antigen test was positive. A green fluorescence was visible at 24 hours of transfection, and peaked at 72 hours. Transfection efficiency was in a linear growth with the multiplicity of infection. Up to the 21st day of transfection, the green fluorescence was stil visible. After 0, 7, 14, 21 days of transfection, the number of human umbilical vein endothelial cells showed no difference between the transfection group with the multiplicity of infection=3 and blank group, suggesting the proliferative ability of cells has no changes after transfection with lentivirus containing enhanced green fluorescent protein. These findings indicate that the lentivirus containing enhanced green fluorescent protein can highly transfect human umbilical vein endothelial cells, and green fluorescent protein can sustainably express for 21 days but cannot impact the cellproliferation.%背景：人脐静脉内皮细胞转染慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白方便后期示踪该细胞，掌握转染的最佳感染复数(MOI)和产生较强荧光强度的时间，可为后期观察人脐静脉内皮细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。

基于COL1A1启动子和增强型绿色荧光蛋白基因建立人肝星状细胞活化的细胞模型

人$型胶原蛋白由两条$型胶原蛋白 )" 肽链 ! B6AA<;84 $ )" B?<24"5SL"("# 和 " 条 ), 肽链组成"它们分别由 -L.)+) 和 -L.)+/ 编码(') + 本研究旨在用人 -L.)+) 启动子序列调控增强型绿色荧光蛋白! 84?<4B8: ;7884 IA=6783B84>976>824"WXUV# 基因的表达"在 L+*, 细胞中建立一个人肝星状细胞活化的可视化报告系统"这将为抗肝纤维化药物的研究提供新的细胞模型+
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利用慢病毒介导hTERT基因建立永生化髓核细胞系

利用慢病毒介导hTERT基因建立永生化髓核细胞系作者：李大鹏徐从艳金沧海刘勇来源：《青岛大学学报（医学版）》2020年第05期[摘要] 目的以慢病毒介导人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因转染体外培养的人髓核细胞，建立永生化髓核细胞系，为后期转基因与动物实验提供种子细胞。

方法利用机械与酶消化的方法获得正常的人椎间盘髓核细胞，将构建好的重组慢病毒-hTERT（pLVX-hTERT）转染第2代体外单层培养的髓核细胞。

用重组慢病毒-增强型绿色荧光蛋白作为标记物，在荧光电镜下观察细胞转染效率，按感染复数（MOI）40、60、80、100设组，选择出病毒转染的最佳MOI;设立pLVX-hTERT转染组、空病毒转染对照组及空白细胞对照组。

在倒置显微镜下观察髓核细胞的形态，用反转录聚合酶链反应、细胞免疫荧光技术检测转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达情况，用反转录聚合酶链反应检测髓核细胞Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达情况。

结果慢病毒转染细胞后第6天，MOI为100时转染效率最高，可达82.9%。

pLVX-hTERT转染组在转染后第7、15、30、60、90天均可检测到hTERT基因的表达，而两对照组则未见表达。

pLVX-hTERT转染组保持了髓核细胞的形态，两对照组的细胞则出现返祖现象。

pLVX-hTERT转染组细胞的蛋白多糖及Ⅱ型胶原基因表达水平较其他两组均明显增高（F=173.5、111.1，P0.05）。

结论 pLVX-hTERT成功转染人椎间盘髓核细胞，转染pLVX-hTERT后的髓核细胞持续表达hTERT，获得永生化的能力，且分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖的量增加。

[关键词] 末端转移酶端粒;慢病毒属;转染;髓核;胶原Ⅱ型;蛋白聚糖类[中图分类号] R394;R681.5 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532（2020）05-0531-05doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.122 [开放科学（资源服务）标识码（OSID）][ABSTRACT] Objective To construct an immortalized nucleus pulposus cell line using the human nucleus pulposus cells cultured in vitro and transfected with the lentivirus-mediated human telomerase reverse transcriptase （hTERT） gene， and to provide seed cells for transgenic and animal experiments in future. Methods The mechanical and enzymatic digestion method was used to obtain normal human nucleus pulposus cells of the intervertebral disc， and the second-generation monolayer nucleus pulposus cells cultured in vitro were transfected with recombinant lentivirus-hTERT （pLVX-hTERT）. With the recombinant lentivirus-enhanced green fluorescent protein as a marker， a fluorescent electron microscope was used to observe transfection efficiency. The cells were divided into groups based on a multiplicity of infection （MOI） of 40， 60， 80， and 100 to screen out the optimal MOI. The pLVX-hTERT transfection group， the empty virus transfection group， and the blank control group were established. An inverted microscope was used to observe the morphology of nucleus pulposus cells; RT-PCR and cell immunofluorescence were used to measure the expression of the hTERT gene in nucleus pulposus cells after transfection， and RT-PCR was used to measure the expression of type Ⅱ collagen and proteoglycan in nucleus pulposus cells. Results On day 6 after lentiviral transfection， the transfection efficiency reached the highest level of 82.9% at the MOI of 100. The expression of the hTERT gene was observed in the pLVX-hTERT transfection group on days 7，15，30，60， and 90 after transfection， while such expression was not observed in the two control groups. The morphology of the nucleus pulposus cells was maintained in the pLVX-hTERT transfection group， while atavism was observed in the two control groups. The pLVX-hTERT transfection group had significantly higher mRNA expression of proteoglycan and type Ⅱ collagen than the other two groups （F=173.5，111.1;P<0.05）， while there were no significant diffe-rences between the two control groups （P>0.05）. Conclusion Human nucleus pulposus cells of the intervertebral disc are successfully transfected with pLVX-hTERT， and after pLVX-hTERT transfection， nucleus pulposus cells have persistent expression of hTERT and thus acquire the ability for immortalization， with increases in the secretion of type Ⅱ collagen and proteoglycan.[KEY WORDS] lentivirus; nucleus pulposus; transfection; immortalized; collagen type Ⅱ; proteoglycans随着社会人口老龄化，腰椎间盘突出症和慢性腰痛的发病率逐年增高，而椎间盘内的髓核细胞逐渐衰老、凋亡是椎间盘退变的主要病因之一[1]。

增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞株的表达

增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞株的表达作者：高峰，田玉科，杨辉，安珂，张传汉【关键词】增强Gene expression of enhanced green fluorescent protein in immortalized neural progenitor cells strain of rat【Abstract】 AIM: To study the transfection efficiency and the expression of enhanced green fluorescent protein（eGFP）in immortalized neural progenitor cells（INPCs） mediated by recombinant adenoassociated virus（rAAV）. METHODS: The viral vector of rAAV containing eGFP was transfected into INPC. The expression of green fluorescent protein was observed since 24 h after transfection and the transfection efficiency was measured. Antinestin antibodies and simian virus 40 large T antigen gene (SV40Tag) antibodies were used to identify the transfected cells. The specific molecular markers of neurons and astrocytes were detected using immunocytochemistry method to investigate the capability of differentiation of the transfected cells after being induced by 50 mL/L fetal bovineserum. RESULTS: EGFP expression was detected as early as 24 h after transfection. The number of eGFP positive cells reached about 90% after 72 h. After being cultured for 8 weeks, 70%-75% INPCs were still eGFP positive. The transfected cells were confirmed as nestin positive and SV40Tag positive cells with immunocytochemistry and could be differentiated into neurons and astrocytes by the induction of fetal bovine serum. CONCLUSION: The viral vector of rAAV containing eGFP can be highly transfected into INPCs and the transfected cells show a stable and longterm eGFP expression in vitro. EGFP can be a valuable tracking tool for the study of neural progenitor cell transplantation.【Keywords】neural progenitor cell; recombinant adenoassociated virus; green fluorescent protein; gene transfection【摘要】目的：研究重组腺相关病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞的转染效率及其表达情况. 方法：携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺相关病毒转染永生化大鼠神经前体细胞，持续观察转基因神经前体细胞绿色荧光蛋白的表达情况，并计算转染效率. 应用巢蛋白抗体和抗猿肾病毒40大T抗原抗体进行细胞鉴定，50 mL/L胎牛血清诱导细胞分化后，应用神经元和星形胶质细胞特异性标志物抗体检测其分化能力. 结果：荧光显微镜观察显示转染后24 h神经前体细胞即有绿色荧光蛋白表达，转染后72 h，大部分细胞表达绿色荧光蛋白，转染效率可达90%. 经传代培养8 wk后，表达绿色荧光蛋白的阳性细胞仍可高达70%～75%. 免疫细胞化学结果显示转绿色荧光蛋白神经前体细胞巢蛋白和抗猿肾病毒40大T抗原抗体染色均为阳性，50 mL/L胎牛血清可诱导其分化为神经元和星形胶质细胞. 结论：携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺相关病毒可高效转染永生化大鼠神经前体细胞，并可在细胞中长期稳定地表达，绿色荧光蛋白作为良好的示踪剂可应用于神经前体细胞的体内移植.【关键词】神经前体细胞；重组腺相关病毒；绿色荧光蛋白；基因转染0引言神经前体细胞（neural progenitor cell, NPC）是一类可以分裂增殖、自我更新并具有多分化潜能的细胞［1］. 它可以作为神经细胞的种子细胞，在细胞移植治疗和细胞介导的基因治疗中具有潜在的临床应用价值［2-3］. 永生化神经前体细胞（immortalized neural progenitor cell, INPC）在体外培养中能够自我更新和无限扩增，可以为细胞移植提供大量表型、基因型稳定的NPC［4］. 我们将重组腺相关病毒（recombinant adenoassociated viral, rAAV）载体介导的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, eGFP）基因转染入大鼠INPC，并观察GFP的表达情况，以探讨eGFP作为细胞示踪标记的可行性，为今后INPC应用于体内移植奠定基础.1材料和方法材料基础培养基Neurobasal（GIBCO公司）；胎牛血清（Hyclone 公司）；碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）和表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）（PeproTech 公司）；B27, g/L多聚鸟氨酸和明胶（SIGMA公司）；小鼠抗大鼠巢蛋白（nestin）抗体、抗猿肾病毒40大T抗原（simian virus 40 large T antigen gene, SV40Tag）抗体、微管相关蛋白（microtubuleassociated protein2, MAP2）抗体和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）抗体（NeoMarkers 公司）；DAB免疫组化试剂盒（北京中山公司）.方法①细胞培养： SV40Tag转染原代大鼠NPC后建立的INPC株由本研究室构建［5］并保存. INPC应用含20 mL/L B27，20 μg/L bFGF，20 μg/L EGF的无血清Neurobasal培养基，在预先采用10 mg/L 多聚鸟氨酸和2 g/L明胶包被的培养瓶中进行贴壁培养. 每5~6 d 传代1次，待细胞长至80%汇合，用 g/L胰蛋白酶消化传代，以单个细胞形式贴壁继续培养. ②基因转染：待INPC长至80%汇合，按105 ./个细胞的浓度加入rAAV/eGFP病毒颗粒（本研究室构建）进行转染. 转染6 h后细胞换液，进行常规传代培养8 wk. 转染后24 h 开始荧光显微镜下观察GFP表达情况，并计算转染效率. ③转rAAV/eGFP INPC及其诱导分化的鉴定：转rAAV/eGFP INPC采用无水甲醇固定，应用免疫细胞化学法进行nestin，SV40鉴定. 细胞培养基中加入50 mL/L胎牛血清诱导INPC分化6 d，固定后应用神经元和星形胶质细胞标志物MAP2和GFAP相应抗体检测INPC分化情况. 2结果贴壁培养的INPC的形态以椭圆形或三角形为主，有两到三个短的突起，胞核较大，呈圆形，胞质较少. 可见到细胞的分裂相和增殖细胞，并可观察到细胞迁移现象. 转染rAAV/eGFP的INPC仍呈单层贴壁生长，细胞形态无变化. 荧光显微镜下观察可见INPC转染rAAV/eGFP 24 h后即有少量细胞表达GFP（图1）；48 h阳性细胞明显增多，荧光强度增强；至72 h大部分细胞表达GFP，转染效率可高达90％，多为明亮的绿色荧光，少数表达较高，呈黄绿色（图2）. 经传代培养8 wk后，表达GFP的阳性细胞仍可高达70%～75%，细胞生长特性未见明显改变.免疫细胞化学检测可见细胞呈nestin染色阳性，细胞染色部位在胞质，而胞核不着色呈空泡状（图3），同时细胞SV40染色为阳性（图4）. 在培养基中加入血清后，第3日可观察到大量不同形态的新生神经细胞，细胞主要呈现2种形态，即具有一个或两个长突起胞体呈圆形或椭圆形的神经元样细胞和具有多个粗长突起的星形胶质细胞样细胞. 荧光显微镜下观察到分化后的细胞仍表达GFP. 免疫细胞化学检测大多数细胞呈GFAP阳性（图5），少数细胞呈MAP2（图6），而nestin表达均为阴性.3讨论近年来的研究使人们相信，将体外培养的NPC移植入受损的中枢神经系统，有可能实现正常神经功能的重建，NPC移植有望成为神经系统疾病治疗的有效手段［2］. 而当NPC作为细胞载体携带目的基因移植入中枢神经系统后，亦可整合入移植区，与周围神经细胞建立突触联系，表达目的蛋白［6］. NPC移植入体内后，如何能够深入了解NPC在特定的周围微环境诱导下的存活、分裂以至最终分化成为形态和功能与周围宿主细胞相似的细胞类型的过程，仍是目前NPC移植研究的重点之一.1992年Prasher等［7］成功克隆出水母的GFP基因cDNA，GFP在一定波长的紫外线激发后即可发出明亮的绿色荧光. eGFP是一种优化的突变型GFP，产生的荧光比野生型GFP强35倍，已被作为一种报告分子用于细胞基因表达和蛋白定位的检测［8］, 而eGFP 因其结构稳定、高效表达、无种系依赖性等特点［8］，更适用于作为一种细胞示踪标记，应用于细胞移植研究. 本研究我们利用rAAV载体将eGFP转染入大鼠INPC，以期了解eGFP作为NPC示踪标记的可行性. 结果显示INPC转染rAAV/eGFP后早期即有GFP的表达，而在72 h后90％的NPC中可观察到明亮的绿色荧光. 而在经持续传代培养8 wk后，仍有70%～75%的细胞表达GFP. 这表明腺相关病毒介导的基因转染可在NPC中达到较高的转染效率，由于腺相关病毒可使外源基因定点的整合在细胞染色体上，因此在经过长期传代培养后，NPC 仍可持续稳定地表达外源性基因，且本结果已证实腺相关病毒介导的外源性基因定点整合对细胞本身的生长特性无明显影响. 当将eGFP 导入INPC后，NPC特异性标志nestin以及SV40的表达仍为阳性，而在培养基中加入血清诱导其分化后，转rAAV/eGFP INPC可分化为神经元和星形胶质细胞，分化后的细胞仍表达GFP，因此可见转rAAV/eGFP INPC仍保持了NPC的基本特性，eGFP对SV40Tag的表达无影响，且血清诱导NPC分化后INPC仍可稳定的表达eGFP. 以上结果均表明eGFP可在NPC中长期持续稳定的表达，并可作为细胞示踪标记以观察细胞的增殖、分化等特性.本研究证实携带eGFP的rAVV可高效转染INPC，eGFP在NPC 中可长期稳定表达，转rAAV/eGFP INPC保持了NPC的基本特性，eGFP 可作为良好的细胞示踪剂应用于NPC的体内移植，这为今后研究NPC 在体内的存活、增殖、分化过程奠定了基础.【参考文献】［1］ Galli R, Gritti A, Bonfanti L, et al. Neural stem cell: An overview［J］. Circ Res, 2003, 92(6): 596-608.［2］ Kelly S, Bliss TM, Shah AK, et al. Transplanted human fetal neural stem cells survive, migrate, and differentiate in ischemic rat cerebral cortex［J］. PNAS, 2004, 101(32): .［3］ Conti L, Cataudella T, Cattaneo E. Neural stem cells: A pharmacological tool for brain diseases?［J］ Pharmacol Res, 2003, 47(4): 289-297.［4］ Roy NS, Nakano T, Keyoung HM, et al. Telomeraseimmortalization of neuronally restricted progenitor cells derived from the human fetal spinal cord［J］. Nat Biotechnol，2004, 22(3): 297-305.［5］高峰，田玉科，杨辉，等. 猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建［J］. 中华麻醉学杂志, 2005,25(8):597-600.［6］Harrower T, Barker RA. Cell therapies for neurological disease-from bench to clinic to bench［J］. Expert Opin Biol Ther， 2005, 5(3): 289-291.［7］ Prasher DC, Eckenrode VK, Ward WW, et al. Primary structure of the aequorea victoria greenfluorescent protein ［J］. Gene， 1992, 111(2): 229-233.［8］ Heim R, Cubitt AB, Heim RA, et al. Improved green fluorescence［J］. Nature， 1995, 373(6516): 663-664.。

人雌激素受体β绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达

人雌激素受体β绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达李慧;安莲效;郭静;顾月清【摘要】目的构建人雌激素受体β(EBβ)绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体,并稳定转染乳腺癌MCF-7细胞.方法通过双酶切将pCMV5-hERβ中的人ERβ cDNA克隆到pEGFP-C3中,构建并鉴定重组质粒pEGFP-hERβ,然后转染乳腺癌MCF-7细胞,采用G418(500 μg/mL)筛选出稳定转染的细胞系,在荧光显微镜下观察融合蛋白质在真核细胞内的表达分布,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ERβ的mRNA转录水平.结果成功构建重组表达载体pEGFP-hERβ,有效转染并筛选出稳定转染ERβ基因的MCF-7细胞系,外源性ERβ基因在MCF-7细胞中获得了有效转录,并在细胞质和细胞核中均广泛分布.结论建立了稳定表达ERβ的MCF-7细胞系,为筛选ERβ调节荆和进一步研究ERβ在乳腺癌中的作用及其机制奠定基础.%Purpose To construct a es trogen receptor β (ERβ) green fluorescent protein eukaryotic expression vector and to transfect stably MCF-7 breast cancer cells.Methods The cDNA of human ERβgene was cloned into pEGFP-C3 from pCMV5-hERβ by double digestion to create recombinant plasmid pEGFP-hERβ.The recombinant plasmid was identified and transfected into MCF-7 cells.Then stable transfectants were selected byG418.The expression and localization of ERβ in MCF-7 cells were assayed by fluorescence microscopy.The transcription of ERβ in the s tably transfected cells was also examined by RT-PCR.Results The ERβ green fluorescent protein eukaryotic expressio vector was successfully constructed and effectively transfected into MCF-7 cells.Then the stably ERβ-transfected MCF-7 cell line was screened.The transcription ofexogenous ERβ in transfected cells was confirmed, and the ERβ was abroad distributed in the cytoplasm and nucleus.Conclusion The stably ERβ-transfected MCF-7 cell line was established.It has provided an important basis for screening E Rβ modulators and furtherly investigating the involvement of ERβ in breast cancer as well as its mechanism.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2011(032)001【总页数】4页(P18-21)【关键词】雌激素受体β;载体构建;转染;MCF-7细胞【作者】李慧;安莲效;郭静;顾月清【作者单位】中国药科大学,生命科学与技术学院,江苏,南京,210009;中国药科大学,生命科学与技术学院,江苏,南京,210009;中国药科大学,生命科学与技术学院,江苏,南京,210009;中国药科大学,生命科学与技术学院,江苏,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】Q78乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,其发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%。

增强型绿色荧光蛋白基因转染CHO细胞研究

增强型绿色荧光蛋白基因转染CHO细胞研究郑立恒;魏会平;许松梅;孙伟华;李保国;胡火珍;刘全胜【期刊名称】《神经药理学报》【年(卷),期】2006(023)001【摘要】目的:探讨增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在中华仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR)细胞中的作用.方法:将增强型绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-EGFP, 转染至培养的中华仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary, CHO-DHFR-)中.结果:成功表达并产生绿色荧光.结论:证明EGFP是一种良好的报告基因和筛选标志,为进一步研究应用最广泛的哺乳动物细胞表达系统-CHO细胞表达系统奠定了基础.【总页数】2页(P28-29)【作者】郑立恒;魏会平;许松梅;孙伟华;李保国;胡火珍;刘全胜【作者单位】四川大学生命科学学院细胞生物学教研室,四川,成都,610064;河北北方学院生物教研室,河北,张家口,075000;四川大学生命科学学院细胞生物学教研室,四川,成都,610064;四川大学华西医学中心解剖教研室,四川,成都,610064;四川大学华西医学中心生物医学工程教研室,四川,成都,610064;四川大学生命科学学院细胞生物学教研室,四川,成都,610064;四川大学生命科学学院细胞生物学教研室,四川,成都,610064【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因经角膜基质瓣转染兔角膜基质细胞的实验研究 [J], 汤明芳;陆晓和;马骊;温茜;罗微;周瑾;袁伟;宫玉波2.增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究 [J], 宁昌;胡锴勋;余长林3.1型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染人脐静脉内皮细胞的体外研究 [J], 汤明芳;陆晓和;高基民;钟彦彦;罗微;周明乾4.增强型绿色荧光蛋白基因转染兔间充质干细胞的实验研究 [J], 王冬梅;石蓓;许官学;刘志江;赵然尊5.腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究[J], 鲍庆东;刘太祥;罗鑫;田祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

绿色荧光蛋白作为神经干细胞示踪标记的实验研究

绿色荧光蛋白作为神经干细胞示踪标记的实验研究谭新杰;胡长林;蔡文琴【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2006(28)7【摘要】目的研究携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒感染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)后的荧光稳定性和持久性及其对NSCs 生物学特性的影响;探讨利用其作为NSCs示踪标记的可行性。

方法利用GFP-腺病毒空载体感染NSCs(NSCs-GFP),经G418筛选并连续传代,在相差显微镜下观察未感染NSCs和感染NSCs的形态以及在荧光显微镜下观察感染NSCs及其诱导分化后的GFP表达情况;并检测NSCs-GFP的细胞活性和细胞周期。

调整GFP标记神经干细胞浓度为1×105/μl,将其植入大鼠侧脑室内,观察其在脑内的表达。

结果未感染NSCs和感染NSCs的形态学、细胞活性和细胞周期等无明显差异(P>0.05)。

GFP在诱导分化后的NSCs-GFP子代细胞中有高表达,并且第1代和第20代NSCs-GFP的绿色荧光无明显差别。

在植入侧侧脑室周围可见绿色荧光的强表达,且持续时间较长。

结论GFP荧光稳定持久,对转染细胞的生物学特征无明显影响,并且移植后的荧光呈长时间强表达,因此可以将其作为神经干细胞的示踪标记,这将有利于神经干细胞移植后的可塑性研究。

【总页数】3页(P691-693)【关键词】绿色荧光蛋白;神经干细胞;移植;示踪【作者】谭新杰;胡长林;蔡文琴【作者单位】重庆医科大学附属第二医院神经内科;第三军医大学基础医学部神经生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R322.8;R329.2【相关文献】1.钩端螺旋病肺弥漫性出血实验模型肺微血管结构和机能变化的探讨-透射电镜、冰冻复型、扫描电镜、微血管铸型、胶体炭和铁蛋白示踪、荧光蛋白示踪等六种方法的动态 [J], 鲍朗2.小型猪骨髓间充质干细胞超顺磁氧化铁、增强型绿色荧光蛋白双标记及体外磁共振成像示踪的研究 [J], 唐宽晓;沈云峰;杨旭斌;顾慧敏;段何江;严朝霞;翁建平3.慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究 [J], 张瑶瑶; 吴国民; 张潇毅; 王琳; 肖艳菊; 王祥伸; 陈楷4.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法 [J], 朱慧; 朱文侠; 黄广智; 马小娜5.应用绿色荧光蛋白标记技术示踪细菌移位的实验研究 [J], 宋德胜;李幼生;于宝军;许哲;陈彻;黎介寿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

增强型绿色荧光蛋白与MAGE-n共表达载体的构建及表达

增强型绿色荧光蛋白与MAGE-n共表达载体的构建及表达黄亚渝;童卫;马加海;董海龙;叶菁;陈广生;张秀敏;隋延仿【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2006(14)7【摘要】目的:构建增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与人黑色素瘤抗原-n(melanoma antigen n,MAGE-n)真核共表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达.方法:采用酶切法从pLXSN-MAGE-n 中得到MAGE-n基因片段,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n.用脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中EGFP的表达,RT-PCR、Western blot和免疫组化分别检测阳性克隆中MAGE-n mRNA和蛋白的表达水平.结果:从pLXSN-MAGE-n重组质粒中酶切获得一条约950bp的片段,成功构建了真核共表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-n,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见到EGFP的表达,产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-n mRNA的表达,Western blot和免疫组化检测到MAGE-n蛋白的表达.结论:成功构建了共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n,获得了稳定共表达EGFP和MAGE-n的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为进一步研究MAGE-n在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础.【总页数】4页(P783-786)【作者】黄亚渝;童卫;马加海;董海龙;叶菁;陈广生;张秀敏;隋延仿【作者单位】第四军医大学西京医院血液科,陕西,西安,710032;第四军医大学西京医院医教部教务科,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R730.3【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达 [J], 刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞2.增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达 [J], 潘小霞;张顺;袁静;文喻玲;陈元鼎3.猪传染性胃肠炎病毒S与M基因融合表达载体及IRES连接双基因共表达载体的构建 [J], 贺小英;彭树英;杨瑞锋;张涌4.α2B-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建 [J], 王震;李玉蕾;周培岚;苏瑞斌;傅风华5.增强型绿色荧光蛋白与肝细胞生长因子共表达载体的构建及表达 [J], 李兴升;王志刚;苏琳;任建丽;杨春江;郑元义;冉海涛;李攀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达

小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达廖丽姿;肖金刚;杨苗苗;孔子任;孙钦策;田卫东【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2010(028)004【摘要】目的构建小鼠增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-过氧化物酶体增长因子活化受体(PPAR)γ2基因的腺病毒重组体,并检测其在感染病毒的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达.方法从pcDNA flag PPARγ质粒上切取目的片段PPARγ2,克隆入pEGFP-C1和pEGFP-N1,以pEGFP-C1-PPARγ2为模板通过PCR技术获得EGFP-PPARγ2基因,酶切DC315质粒,获得DC315-EGFP-PPARγ2质粒,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP-PPARγ2,酶切鉴定证实构建成功.转染HEK293细胞并检测其体外表达情况,经HEK293细胞扩增后,测定病毒滴度,转染小鼠BMSC,72h后鉴定其成脂分化情况.结果将pEGFP-C1-PPARγ2和pEGFP-N1-PPARγ2通过脂质体转染入HEK293细胞后,在倒置相差显微镜下观察,前者在细胞核内有较强的绿色荧光,后者的荧光强度则极低.对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定,证实含小鼠EGFP-PPARγ2的Ad5腺病毒载体构建成功.在倒置相差显微镜下观察到BMSC细胞核内有绿色荧光.结论成功构建含小鼠EGFP-PPARγ2的重组Ad5腺病毒载体,为基因辅助的脂肪组织工程技术、抗肿瘤研究等提供了安全有效的转基因载体.【总页数】5页(P430-434)【作者】廖丽姿;肖金刚;杨苗苗;孔子任;孙钦策;田卫东【作者单位】口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川,成都,610041;口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川,成都,610041;口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川,成都,610041;口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川,成都,610041;四川大学,生命科学学院,四川,成都,610064;口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】Q81【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白基因与人血管内皮生长因子受体KDR基因胞外1-3区域融合表达载体的构建 [J], 左玲;苏冠方;栾永昕2.大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体及在乳鼠心肌细胞中的表达☆ [J], 侯宁;袁文常;罗承锋;刘启才;罗健东3.大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体及在乳鼠心肌细胞中的表达 [J], 侯宁;袁文常;罗承锋;刘启才;罗健东4.小鼠角质化细胞生长因子及其受体的重组腺病毒表达载体的构建 [J], 陈力;黎檀实5.α2B-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建 [J], 王震;李玉蕾;周培岚;苏瑞斌;傅风华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲胎蛋白-增强型绿色荧光蛋白重组体的构建表达及其测量特性分析

甲胎蛋白-增强型绿色荧光蛋白重组体的构建表达及其测量特性分析张健;葛丹红;王雪亮【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】目的：构建增强型绿色荧光蛋白（eGFP）标记的甲胎蛋白（AFP）的融合蛋白，并对其稳定性和测量特性进行分析。

方法从pcDNA3．0质粒中扩增eGFP序列，插入质粒PET28a，构建eGFP表达质粒PET28a-eGFP。

根据美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中的AFP编码序列，应用序列合成方法合成AFP编码序列，并加入连接eGFP的铰链序列，与eGFP序列链接，构建表达质粒PET28a-eGFP-AFP。

分别表达和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，分析重组蛋白的荧光特性及稳定性。

结果成功构建和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，荧光光谱分析显示其激发和发射光谱一致。

最佳激发波长和发射波长分别为450和509 nm，且荧光可以稳定12个月。

表达的eGFP-AFP 蛋白可以与常规测定 AFP 的免疫试剂发生反应。

结论构建表达的重组蛋白eGFP-AFP的荧光特性与eGFP 蛋白一致，没有光谱特性变化，并可与常规AFP测定试剂发生反应，为研究eGFP标记的AFP用于校准品和质控品的研究奠定基础。

【总页数】5页(P659-663)【作者】张健;葛丹红;王雪亮【作者单位】上海市临床检验中心，上海200126;上海市临床检验中心，上海200126;上海市临床检验中心，上海200126【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达 [J], 刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞2.增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达 [J], 潘小霞;张顺;袁静;文喻玲;陈元鼎3.小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达 [J], 廖丽姿;肖金刚;杨苗苗;孔子任;孙钦策;田卫东4.人类TIM-4-EGFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析 [J], 陈治中;胡丽华;卿吉琳5.人类可溶性TNFR Ⅰ-GFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析 [J], 范玮;李卓娅;龚非力;姜晓丹;冯玮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达

绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达闫乃红;陈清英;曹桂群;卢亦路;张发强;袁琼兰;夏庆杰【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)034【摘要】目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值.方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行.以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack CMV中,与骨架质粒pAdEasy 1同源重组为腺病毒载体.线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达.结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653 bp个核苷酸,同源性比较该序列正确.②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL.③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经于细胞扩增出653 bp的带.结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达.【总页数】3页(P26-28)【作者】闫乃红;陈清英;曹桂群;卢亦路;张发强;袁琼兰;夏庆杰【作者单位】四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,610041;四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,610041;四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,610041;四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,610041;四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,610041;泸州医学院人体解剖学教研室,四川省泸州市,646000;四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室,四川省成都市,610041【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.胶质源性神经营养因子重组腺病毒载体构建及其表达的鉴定 [J], 严峻;龚筱倩;苏长青2.绿色荧光蛋白腺病毒表达载体在大鼠肌源性干细胞标记中的应用 [J], 杨彪;梅晰凡;刘福强;任甫3.大鼠胶质细胞源性神经营养因子真核表达载体的构建 [J], 牛立峰;刘钦毅;王景宏;赵红光4.胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体穿梭质粒的构建及鉴定 [J], 马春明;杨朝鲜;闫乃红;袁琼兰;高小青;邓莉5.胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体穿梭质粒的构建及鉴定 [J], 马春明;袁琼兰;杨朝鲜;高小青;邓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

恶性疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白突变株的建立及其在疟原虫体内的表达分析

恶性疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白突变株的建立及其在疟原虫体内的表达分析李学荣;吴银娟;尚梅;李晔;徐劲;余新炳;ATHAR Chishti【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2014(32)4【摘要】目的构建恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)信号肽肽酶(PfSPP)基因转染载体,筛选可在体内表达疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白(PfSPP-GFP)的疟原虫。

方法提取Trager-Jensen法培养的恶性疟原虫3D7株基因组DNA,PCR扩增PfSPP C端不含终止密码子的883 bp基因片段,克隆构建重组转染载体pSPPcGT。

重组载体经PCR和双酶切鉴定后送测序。

电转化法将重组载体转染入恶性疟原虫体内,采用5 nmol/L恶性疟原虫二氢叶酸还原酶抑制剂WR99210筛选转染后,恶性疟原虫经无水乙醇固定、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色后,荧光显微镜下观察PfSPP-GFP在其体内的表达分布情况。

提取筛选后恶性疟原虫全蛋白,Western blotting分析虫体内PfSPP-GFP蛋白的表达情况。

结果 PCR扩增获得PfSPP基因C端不含终止密码子的DNA片段,大小为883 bp。

构建的重组转染载体pSPPcGT经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序鉴定均正确。

荧光显微镜观察结果显示,筛选后恶性疟原虫细胞内有绿色荧光蛋白表达,主要位于细胞质中,表明PfSPP-GFP 已成功转染至恶性疟原虫并表达。

Western blotting分析结果显示,转染的恶性疟原虫可表达含PfSPP-GFP融合蛋白,与预期相对分子质量(Mr)64 000大小一致。

结论构建了恶性疟原虫PfSPP-GFP重组转染载体,筛选获得了能在疟原虫体内表达PfSPP-GFP的突变株。

【总页数】5页(P253-257)【关键词】恶性疟原虫;信号肽肽酶;绿色荧光蛋白;转染【作者】李学荣;吴银娟;尚梅;李晔;徐劲;余新炳;ATHAR Chishti【作者单位】中山大学中山医学院,广州510080;教育部热带病防治重点实验室,广州510080;Tufts University School of Medicine,Boston 02111,USA【正文语种】中文【中图分类】R382.312【相关文献】1.表达增强型绿色荧光蛋白的小鼠骨肉瘤体外和体内荷瘤模型的建立 [J], 杨晓;胡豇2.表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK-突变株的构建 [J], 范伟兴;宋建兰;魏荣;陈溥言;赵宏坤3.逆转录病毒介导的稳定表达E40rf1和绿色荧光蛋白的胎肝窦内皮细胞株的建立[J], 李慧琳;岳文;裴雪涛;谢小燕;王思涵;韩毅;范增;白云;何丽娟;南雪;裴海云4.恶性疟原虫海南株var2csa基因DBL区蛋白的原核表达及功能分析 [J], 康巍;常志广;陆慧君;姜宁;尹继刚;陈启军5.一株在HA831中复制并能提高绿色荧光蛋白表达水平的AcMNPV突变体的初步研究 [J], 夏霏;张琦;尹隽;钟江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

干细胞脑内移植有效标记研究:绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值

干细胞脑内移植有效标记研究：绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值关云谦;陈彪;刘平;邹春林;张愚【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2004(008)013【摘要】目的:观察绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)的效果,以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后,GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果.方法:首先利用感受态大肠杆菌提取大量高纯度GFP质粒DNA,然后将GFP质粒与脂质体孵育形成的转化复合物和小鼠胚胎干细胞共同孵育,使GFP质粒转入胚胎干细胞;筛选表达GFP的胚胎干细胞.将筛选后表达GFP的ESC移植入活体大鼠纹状体内,移植21 d后,观察表达绿色荧光蛋白的移植细胞的存活情况.结果:GFP质粒转化以后的ES细胞团和单细胞都表达亮绿色的GFP,细胞打散计数证实大约60%的细胞携带GFP,移植21 d后,大鼠脑内可见大量表达GFP的移植细胞.结论:脂质体可以将GFP质粒转入鼠的胚胎干细胞,携带有GFP的ES移植后21 d,GFP可以作为示踪剂观察移植细胞的存活状况.脂质体辅助的GFP质粒转化胚胎干细胞是移植示踪的较好方法.【总页数】3页(P2506-2508)【作者】关云谦;陈彪;刘平;邹春林;张愚【作者单位】首都医科大学北京宣武医院,北京老年医学研究所神经生物学室,北京市,100053;首都医科大学北京宣武医院,神经内科,北京市,100053;首都医科大学北京宣武医院,北京老年医学研究所神经生物学室,北京市,100053;首都医科大学北京宣武医院,神经内科,北京市,100053;首都医科大学北京宣武医院,北京老年医学研究所细胞治疗中心,北京市,100053;首都医科大学北京宣武医院,北京老年医学研究所细胞治疗中心,北京市,100053;首都医科大学北京宣武医院,北京老年医学研究所细胞治疗中心,北京市,100053【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞在脑缺血大鼠体内迁移的实验研究 [J], 王晔;邓宇斌;李燕;叶伟标;叶美红2.绿色荧光蛋白标记大鼠间充质干细胞的实验研究 [J], 付霞霏;何援利3.增强型绿色荧光蛋白慢病毒载体标记人牙周膜干细胞的实验研究 [J], 姜宝岐;文勇;黄海云;崔军;梁晋;马晓妮;兰晶;徐欣4.增强型绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞体外诱导分化成心肌样细胞研究 [J], 侯卫涛;高东来5.骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用术 [J], 江汕;江千里;裴国献;赵培冉;易正山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人单纯疱疹病毒加强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及表达

人单纯疱疹病毒加强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及表达李雷生;于红;张文卿【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2006(19)7【摘要】目的:构建人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)加强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达系统,用于HSV感染的快速诊断. 方法:通过PCR扩增HSV-2启动子 ICP10目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1,构建重组质粒pICP10-EGFP,脂质体法转染Vero细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株Vero-ICP10-EGFP.以不同量的HSV-2感染Vero-ICP10-EGFP细胞,分别于感染后6、8和10 h,于倒置荧光显微镜下检测EGFP荧光.同时以人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP10-EGFP细胞,检测其特异性. 结果:构建的重组质粒pICP10-EGFP经DNA测序鉴定,表明重组正确.重组质粒pICP10-EGFP转染Vero细胞后,经G418长期筛选建立稳定转染细胞株Vero-ICP10-EGFP,感染HSV-2后6 h,倒置荧光显微镜下即可检测到EGFP荧光.人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP10-EGFP细胞后6、10和24 h,均未检测到特异性荧光. 结论:成功构建了HSV-EGFP真核表达系统,其具有早期、快速、灵敏等优点,特异性较高,可望用于HSV感染的快速诊断.【总页数】4页(P583-585,后插10)【作者】李雷生;于红;张文卿【作者单位】青岛大学医学院微生物学教研室,山东青岛,266021;青岛大学医学院微生物学教研室,山东青岛,266021;青岛大学医学院微生物学教研室,山东青岛,266021【正文语种】中文【中图分类】R373.11【相关文献】1.人雌激素受体β绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达 [J], 李慧;安莲效;郭静;顾月清2.单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建 [J], 曾曙光;吴世卿;张积仁;章锦才;刘启才;艾伟健3.携带增强绿色荧光蛋白基因的人14-3-3σ真核表达载体的构建及其在转染乳腺癌MCF-7细胞的表达 [J], 郝苗;齐凤杰;马玲4.mCLCA3增强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及功能分析 [J], 吴庆田;侯霞;任继秋;崔刚;李丽秋;杨景云;马淑霞5.原核真核双表达加强型绿色荧光蛋白质粒的构建 [J], 张晓明;焦新安;潘志明;张小荣;马丽;顾健;郭荣;刘秀梵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HEK-293细胞复苏培养及冻存汇总

HEK－293细胞复苏培养及冻存作者：杨彪作者单位：辽宁医学院附属第一医院骨科【摘要】目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究，为进一步行干细胞标记实验奠定基础。

方法复苏培养人胚肾293细胞，倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率，绘制细胞生长曲线，冻存保留细胞。

结果人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好，6h后大部分细胞已经贴壁，8h细胞已完全贴壁。

结论人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的，为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础。

【关键词】人胚肾293细胞细胞培养冻存Anabiosis and Cultivation of HEK-293 Cells and CryopreservationYANG Biao1, MEI Xi-fan1, LIU Fu-qiang2(1.Department of Orthopaedics ，the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University;2.Department of Endocrine，the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University，Jinzhou 121000 China)【Abstract】Objective To lay foundation for establishing substructure of stem cells’ labeling and transplantation therapy experimentation through the research on anabiosis and cultivation of HEK-293 cells and cryopreservation. Methods By resuscitating and cultivating HEK-293 cells, observe them with inverted microscope，calculate adherence rate，draw growth curve， cryopreservate and reserve it. Results HEK-293 cells grow well in the common cultivating conditions. Most of the cells have adherenced after 6 hours, and all cells have adherenced after 8 hours. Conclusions It is convenient and feasible to adopted improved ways to resuscitate and cultivate HEK-293 cells. In this way, we have established substantial substructure of stem cells’ labeling.【Key words】 HEK-293 cells;cell culture;cryopreservation干细胞是近年医学研究的热点之一，并显示了良好的应用前景。