免疫原和抗血清的制备
免疫原和抗血清的制备
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1.组织匀浆的制备通常需要先将来源于人和动物的组织和细胞破碎，再经一定的方法纯化，才能获得所需的抗原。
细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2.细胞的破碎除上述机械捣碎获取外，尚有酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶，可获得游离的单个细胞。
细胞抗原分膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）、细胞核与核膜抗原，制备这些抗原前均需将细胞破碎，方法有：（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段、Fc片段、轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清。
制备方法有：（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂（2）共价键解离法（3）溴化氰裂解法（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶.木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段；胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab′）2个片段及数个小片段；胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化1.超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
免疫原和抗血清的制备
免疫原和抗血清的制备免疫原和抗血清的制备抗原和抗体是免疫反应的基本条件也是免疫检验的两大重要因素。
抗原是制备特异性抗体的前提条件，抗体可用于纯化抗原和检测抗原，也是医学检验中用于疾病诊断和研究的重要物质。
免疫原的制备免疫佐剂抗血清的制备抗血清的鉴定和保存抗血清的纯化颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞抗原和细菌抗原,制备的方法较简单,通过分离或纯培养即可得到。
细胞抗原——绵羊红细胞。
细菌抗原——菌体O抗原。
可溶性抗原的制备可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。
（一）组织可溶性抗原的粗提（二）可溶性抗原的纯化（三）纯化抗原的鉴定（一）组织可溶性抗原的粗提1.组织均浆的制备：高速组织捣碎机法、研磨法；2.细胞的破碎：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法。
（二）可溶性抗原的提取和纯化1.超速离心法；2.选择性沉淀法：核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法；3.凝胶过滤法；4.离子交换层析法；5.亲和层析法；6.电泳法。
（三）纯化抗原的鉴定主要包括蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定等。
半抗原性免疫原的制备半抗原只具有抗原性而无免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分子量的药物等。
半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原性。
（一）载体1.蛋白质类：牛血白蛋白等；2.多肽聚合物：多聚赖氨酸等；3.大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯吡咯烷酮等。
（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硫酸葡聚糖、羧甲基纤维素等。
2.化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。
如碳二亚胺法、戊二醛法等。
（三）半抗原性免疫原的鉴定与载体结合的半抗原数目与免疫原性密切相关。
所以，应测定半抗原与载体的比例，方法有：①吸收光谱分析法：②放射性核素标记半抗原渗入法。
免疫佐剂指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答的物质。
2021-2022学年河南省安阳市临床执业医师其它真题二卷(含答案)
2021-2022学年河南省安阳市临床执业医师其它真题二卷(含答案)学校:________ 班级:________ 姓名:________ 考号:________一、单选题(10题)1.注射液配制过程中，去除微粒杂质的关键操作是A.容器的处理B.配液C.滤过D.灌封E.灭菌2.关于良性肿瘤的描述哪项是错误的?A.细胞分化程度较高B.多呈膨胀性生长C.表面光滑，活动D.从不危及生命E.不发生转移3.肌力测定的分级描述中，错误的是（）A.1级：肌完全不能收缩，为完全瘫痪B.2级：肌收缩可使关节活动，但不能对抗重力C.3级：肌仅有抗重力，无抗阻力收缩D.4级：肌有抗重力和抗阻力收缩E.5级：肌有对抗强阻力收缩4.采用0～5级的肌力六级分级法，如果肌肉可收缩，但不能产生动作，属于( )A.肌力0级B.肌力1级C.肌力2级D.肌力3级5.肺结核大咯血患者最危险且较常见的并发症是：( )A.严重贫血B.休克C.窒息D.继发感染E.肺不张6. 男，65岁，右腹股沟内侧肿物2年余。
查体：右腹股沟区可见一球形肿块，未进入阴囊，回纳肿物后压内环并增加腹压肿物复出，最可能的诊断是：A.右腹股沟斜疝B.右腹股沟直疝C.右股疝D.右精索鞘膜积液E.交通性鞘膜积液7.乳腺的淋巴输出途径，哪一项是不正确的?A.锁骨下和锁骨上淋巴结之间互相有交通B.两恻乳房间皮下有交通淋巴管C.两侧胸骨旁淋巴结没有直接的淋巴文通D.胸骨旁淋巴结主要在第2、3肋间，沿胸廓内动静脉分布E.一些淋巴结位于胸大小肌之间8.骨软骨瘤的临床表现为A.生长较快，伴明显疼痛B.肿块明显，表面皮肤有静脉怒张C.X线可见骨膜反应D.本身无症状，但可压迫周围组织，影响功能E.肿物与周围界线不清9.髋关节脱位发生率最高的是A.前脱位B.后脱位C.中心性脱位D.合并股骨头骨折的脱位E.合并髋臼骨折的脱位10.最易发生嵌顿的疝为：A.切口疝B.难复性疝C.滑疝D.股疝E.直疝二、1.A1型题(10题)11. 肿瘤细胞表面（）A.HLA-Ⅰ类抗原显著减少B.HLA-Ⅰ类抗原显著增加C.HLA-Ⅰ类抗原显著增加D.HLA-Ⅰ类抗原显著减少E.HLA-Ⅰ和Ⅰ类抗原表达均降低12.判断骨髓穿刺成功的指标不包括A.抽出骨髓瞬间，病人有特殊疼痛感B.涂片上可见骨髓小粒C.涂片上可见脂肪滴D.显微镜下可见骨髓特有细胞如浆细胞、各类有核细胞E.骨髓中杆状核细胞与分叶核细胞之比小于外周血13.对放疗最敏感的卵巢肿瘤是（）。
免疫原和抗血清制备技术.pptx
组织和细胞成分混合抗原制备程序
所用材料必须是新鲜或低温保存的
洗去血迹 及污物
脏器进行灌洗
NS内含0.5g／L NaN2
去除包 膜或结 缔组织
冷浴中组织剪碎
装入捣碎机简内高速 粉碎制成组织匀浆液
上清液 澄清
去除细胞碎片 及微小组织
3000r／min×10min
取上清液
离心
及评价
细胞破碎技术
1.酶处理法 2.冻融法 3.超声破碎法 4.表面活性剂处理
亲和层析法示意图
正常细胞 标记细胞 标记细胞 加入特异 其它蛋白 SDS-PAGE
＋ 洗滴
被酶裂解 性抗体 洗涤流失 分离蛋白
核酸抗原制备
•大分子的核酸具有免疫原性。 •提取核酸的主要步骤：
破碎细胞
核酸从细胞中游离出来 酚和氯仿
酸沉淀核
除去蛋白质 乙醇
类脂多糖抗原制备
•苯酚法提取LPS： 同温的苯酚
• 常用方法：盐析沉淀法（不同盐浓度则溶解 度不同）；常用33～50％饱和度的硫酸胺。
• 特点：简单方便，纯度不高，粗提球蛋白。 • 应用：在大量制备中先用此法粗提，再纯化。
3．凝胶层析法（凝胶过滤法） •原理：凝胶具有三维空间多孔网状结构的物质， 经适当溶液平衡后，装入层析柱。当含有各种
分子大小不一的混合物加在凝胶床面时，大分 子物质不能进入凝胶颗粒的网孔结构内，在凝 胶颗粒之间的空隙中很快地通过凝胶床，短时 间内被洗脱出来；而分子较小的物质则进入凝 胶网孔结构内，反复受到阻滞，洗脱较慢。分 成大、中、小三种类型。
干燥菌体 或湿菌体
水中 混匀
加热
Байду номын сангаас
激烈搅匀 冰水 加热5min 急冷
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)讲义第三章免疫原和抗血清的制备
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1组.织匀浆的制备（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2细.胞的破碎（）反复冻融法：℃冷冻，〜7融化。
（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶。
（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠。
3免.疫球蛋白片段的制备（）非共价键解离法：改变环境或用变性剂。
（2）共价键解离法：还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
选择性沉淀法：（1）核酸去除法：核糖核酸降解法更简便。
（2）盐析法：常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。
（3）有机溶剂沉淀法：常采用乙醇或丙酮。
（）聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物，如聚乙二醇（）G凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
离子交换层析法：利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
5亲.和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体等。
电泳法：蛋白质在同一环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定和的吸光度（）值。
2024年四川省眉山市护士执业资格考试《实践能力》题库及答案解析
2024年四川省眉山市护士执业资格考试《实践能力》题库及答案解析毕业院校：__________ 姓名：__________ 考场：__________ 考号：__________一、选择题1．测定恒定误差的实验是A、重复性试验B、回收实验C、线性实验D、干扰实验E、检测能力实验答案：D答案解析：测定恒定误差的试验是干扰试验2．肠梗阻非手术治疗期间，梗阻解除的标志是A、胃肠减压后腹痛减轻B、呕吐后腹胀减轻D、肛门排便、排气E、肠鸣音亢进转为消失答案：D3．符合压力反应警告期临床表现的是A、肌肉紧张度增加B、心跳减慢C、血压下降D、呼吸减慢E、血糖降低答案：A4．若抢救过程中患者突然心搏骤停，急救方法为A、立即静脉注射肾上腺素B、心内注射异丙肾上腺素C、行胸外心脏按压建立循环E、注射洛贝林以兴奋呼吸答案：C5．初级卫生保健的承担者一般是A、基层医院B、社区卫生工作者C、卫生行政部门D、综合性医院的医师E、综合性医院的医师和护士答案：B6．热湿敷的水温是A、30~40℃B、40~45℃C、45~50℃D、50~60℃答案：D7．患者，男，25岁。
支气管肺炎。
医嘱：青霉素40万单位肌内注射，注射前先行青霉素皮试。
青霉素皮试结果为阴性，护士遵医嘱给予肌内注射青霉素，宜选择的注射部位是A、上臂三角肌B、两侧腹壁肌肉C、臀大肌D、臀中肌、臀小肌E、股外侧肌答案：C8．应为该患者安置的体位是A、去枕仰卧位，头偏向一侧B、中凹卧位C、左侧卧位D、右侧卧位E、半坐卧位答案：A9．绿脓杆菌感染患者用过的剪刀，其消毒灭菌的步骤是A、清洁后用高压蒸汽灭菌B、直接采取燃烧法达到灭菌C、与其他器械先浸泡消毒后，再分别消毒灭菌D、彻底清洗后，用化学消毒剂浸泡消毒E、灭菌、清洁、再灭菌答案：E10．在医院感染中，间接接触传播最常见的传播媒介是A、水源B、食物C、医疗设备D、昆虫答案：E11．患者，女，35岁。
注射青霉素后发生过敏性休克，最佳的处理方法是A、停药、平卧、注射盐酸肾上腺素、保暖、吸氧B、停药、吸氧、保暖、注射阿托品、平卧C、停药、平卧、测血压、注射呼吸兴奋剂、保暖D、停药、吸氧、保暖、注射地塞米松、平卧E、停药、平卧、吸氧、注射抗组胺药物、保暖答案：A12．易燃易爆，应单独存放、远离明火的药物是A、肾上腺素B、氨茶碱C、维生素CD、乙醇E、胰岛素13．阵发性睡眠性血红蛋白尿,确诊试验为A、冷凝集素试验B、Coombs试验C、酸化血清溶血试验D、异丙醇沉淀试验E、红细胞渗透脆性试验答案：C答案解析：酸化血清溶血试验是 PNH 的确诊试验14．适宜的鼻饲液温度为A、40~42℃B、30~38℃C、35~37℃D、38~40℃E、42~45℃15．结核分枝杆菌感染的免疫学方法有A、结核菌素试验B、分枝杆菌抗体检测C、全血干扰素检测D、结核杆菌抗原检测E、以上都是答案：E答案解析：结核分枝杆菌感染的免疫学方法有: 结核菌素试验、分枝杆菌抗体检测、全血干扰素检测、结核杆菌抗原检测,所以这一题答案是 E16．重度缺氧时SaO2可降到小于A、60%B、75%C、70%D、65%E、80%答案：A17．某患者血清学检测 HBsAg(十)、 HBeAg(十) ,则说明该患者A、服用了抗 HBV药物B、处于恢复期C、曾经感染过HBVD、对 HBV具有免疫力E、传染性较强答案：E答案解析：乙肝病毒感染的标志之一 ,它可以表示过去感染过乙肝病毒,或者目前正在受到乙肝病毒的感染而 HBeAg是人体感染 HBV 后跟随 HBsAg出现的第2个血清学抗原标志物,,HBeAg在乙肝活动期检出率升高,表明肝细胞有较严重的损伤,病人有很强的传染性18．下列哪相不属于沉淀实验A、单向免疫扩散实验B、双向免疫扩散实验D、Coombs试验E、免疫比浊法答案：D答案解析：Coombs试验是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法,属于凝集反应19．盐析法沉淀蛋白的原理是A、与蛋白结合形成不溶性盐B、降低蛋白质的电常数C、调节蛋白质溶液的等电点D、使蛋白质溶液呈电中性E、破坏水化膜答案：E答案解析：本题考査盐析法沉淀蛋白的.原理,蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失同时,中性盐加人蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀20．不属于红细胞生成减少所致的贫血是A、再生障碍性贫血B、骨髓病性贫血C、红细胞酶缺陷性贫血D、缺铁性贫血E、巨幼细胞性贫血答案：C21．肝功能受损时,血中A、清蛋白含量升高B、球蛋白含量下降C、清蛋白含量升高,球蛋白含量下降D、清蛋白含量下降,球蛋白含量升高或相对升高E、清蛋白和球蛋白含量都正常答案：D答案解析：Alb由肝实质细胞合成,肝脏功能受损,Alb合成减少,球蛋自代偿性增高以维持血浆胶体渗透压.22．以下疾病中性粒细胞碱性磷酸酶积分不减低的是A、急性粒细胞白血病B、骨髓增生异常综合征C、慢性粒细胞白血病合并细菌感染D、慢性粒细胞白血病慢性期E、PNH答案：C答案解析：慢性粒细胞白血病合并细菌感染中性粒细胞碱性磷酸酶积分不减低.其余4 种疾病中性粒细胞碱性磷酸酶积分均减低23．卵磷脂小体明显减少常见于A、精囊炎B、前列腺炎C、尿道炎D、尿道旁腺炎E、睾丸炎答案：B答案解析：前列腺炎时卵磷月言小体数量常减少或消失24．抗Sm抗体与下列那种疾病最相关A、类风湿关节炎B、SLEC、原发性胆汁性肝硬化D、皮肌炎E、自身免疫性肝炎答案：B答案解析：系统性红斑狼疮(SLE)的患者体内出现多种自身抗体和免疫复合物,抗 ds- DNA抗体和抗 Sm抗体是本病的特征性标志25．关于III型高脂血症描述错误的是A、IDL↑B、血清外观浑浊C、电泳宽β带D、常见原因为LDL 异化速度加快E、以上都对答案：D答案解析：考査高脂蛋白血症的分型和生化特征,发生 III型高脂蛋白血症的常见原因为 LDL异化速度降低26．男性,25岁,头晕乏力、面色苍白1年余。
抗血清 的制备
抗血清的制备抗血清制备是一种常见的免疫学实验技术，用于检测特定物质的存在和数量。
下面将对抗血清制备的原理、步骤及注意事项进行详细介绍。
一、原理抗血清是由动物免疫某种抗原制备得到的一种免疫血清，其中包含了特异性抗体。
抗血清制备的原理是通过注射一定量的特异性抗原到动物体内，使其产生特异性抗体，然后收集抗血清。
二、材料和试剂1.抗原：需要制备抗血清的特定抗原。
2.兔、小鼠等动物。
3.盐酸：用于调整兔抗血清的pH值。
4.取血器：用于采集动物血液。
5.离心管、离心机：用于收集血清。
6.不含菌的容器：用于保存抗血清。
三、步骤根据实验要求，制备特定抗原，可以是蛋白质、细胞、病毒、细菌等。
2.制作与抗原相应的抗体兔/小鼠选择适宜种类的动物，注射免疫原，隔一段时间后，在动物体内试验特异性抗体的出现，出现后即可采血制血清。
一般来讲，兔子被认为是制备抗血清的最佳动物，而小鼠常常会出现交叉反应。
3.采集兔血液注射完最后一次免疫原后一周左右，在一个清洁的容器上臂处用取血器采血2-3ml。
离心采集到的兔血液，定量将其分离出血清，再加入盐酸，调节pH值，即可得到兔抗血清。
5.评价抗血清的质量评价抗血清的质量，主要是通过测定抗体滴度来判断抗血清的特异性和强度。
四、注意事项1.严格控制免疫原和免疫过程，确保抗原和抗体的特异性和纯度。
2.合理选择免疫动物种类，不同种类免疫动物会对抗原产生不同反应。
3.采血时要注意安全和卫生，防止感染病毒和细菌。
4.在制备抗血清的过程中需要注意保护动物的健康和福利，并严格按照实验室安全规范操作。
抗血清制备
抗血清制备抗血清是一种广泛应用于医学、生物学、农业等领域的重要抗体。
它可以通过对动物实验的刺激来制备，具有较高的特异性和灵敏性。
本文将介绍抗血清的制备过程和应用领域。
一、抗血清的制备抗血清的制备需要对动物实验进行免疫刺激，让其产生免疫反应，生成相应的抗体。
制备抗体的方法有多种，包括:1. 多次免疫法：将抗原与适当的佐剂混合后注射给动物，每次注射间隔时间大于1个星期。
免疫周期主要根据抗原型以及免疫状态来确定。
一般情况下，需要多次免疫才能达到所需的浓度。
2. 单次免疫法：在抗原一侧布局NMDA表达杂交的细胞，给兔子单偏免疫或初免疫后再进行免疫，以提高抗体效价。
3. 聚集物制备法：将抗原加入雄鹰蛋白中，然后注射到家兔或小猪体内，以选育出抗体。
以上三种方法都有它们的优缺点，适用于不同的条件下。
二、抗血清的应用抗体在医学、生物学、农业等领域都有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 诊断：通过抗血清与疾病相关物质的特异性结合可以进行诊断，如HIV、狂犬病、乙肝等病毒感染的检测。
2. 治疗：抗体被广泛应用于治疗各种疾病，如肿瘤、自身免疫性疾病、传染病等。
3. 细胞学：抗体可用于细胞学实验，用于检测细胞内、细胞表面或细胞核内的成分，如检测肿瘤细胞、细胞分离、特定蛋白识别等。
4. 农业：抗血清可用于畜牧业和农业生产，如检测动物或植物病毒感染、食品中添加的污染物等。
三、注意事项在制备抗血清时，需要注意以下几点：1. 选择优质的抗原，并进行适当的保护、存储。
2. 用药量应适当，尽量不要过多。
3. 对免疫动物的饲养和体温要求高。
4. 在注射时要注意卫生和安全问题，防止交叉感染。
5. 制备后需要进行充分的检测和鉴定，以确定抗体的特异性和效价。
抗血清的制备是一项重要的实验技术，应用领域广泛，但同时也需要谨慎和责任心。
只有严格遵守操作规定和注意事项，才能制备出优质的抗血清，促进科学的发展。
第3章免疫原和抗血清的制备
二、免疫程序
免疫原的剂量
中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 特异性要求高，应小量短程，可溶性抗原加用佐剂。对效价 要求高，则可大量长程加佐剂。
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
一、特异性IgG抗体
盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维 素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层 析柱
二、单价特异性抗血清
亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱 吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗
使包膜的渗透压改变而溶解。
优点是: 作用温和 适用于:破碎细菌、破碎细胞（提取核酸)
3、免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变 性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶
IgG片段的制备
1.酶裂解法：
IgG
木瓜酶
Fc+2Fab
Fc段可用于制备抗重链血清。
透析除去未反应
的半抗原
得人工免疫原 （半抗原+载体）
2.戊二醛法：
半抗 原氨 基
N-CH-(CH2)3-CH-N
载体 氨基
第二节 免疫佐剂
免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与 抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原 的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质 称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。
小结
免疫原是诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的 物质。半抗原是指仅有抗原性而无免疫原性的物质， 与载体结合后可具有免疫原性。
免疫血清的制备实验报告
六、教师评价
3。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体。
4.多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外,还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂，以增强免疫性。
四、实验过程及步骤
1.免疫接种
1)取一只健康大白兔固定在兔笼中
2）酒精消毒大白兔皮肤后，通过皮下或皮内注射方式接种大白兔，共计注射8-10个位置，每一处约0。1ml.
3)为提高免疫血清效价，通常需要进行2—3次加强免疫，每次免疫间隔10—15天。然后再接免疫结束后的血清采集过程。
4）注射完毕，将大白兔从兔台取下，放回饲养笼.
3）用结扎细线2根穿过颈动脉,远心端结扎，近心端备用。动脉夹夹住颈动脉近心端，用眼科镊手柄处将颈动脉抬起,然后用眼科剪斜向近心端剪开血管,插入动脉导管，两端分别用预留的结扎细线固定，打开动脉夹取血至锥形瓶后密封.
3.获得免疫血清
1）将采集的动脉血放到37℃温箱中，静置1小时。
2)在4℃冰箱内放置6-8小时,待血清析出。
3）将析出的血清转移至50ml离心管。离心管配平后，在4℃，以2000rpm转速离心5min。
4）待血清析出后,用移液器将其转移至离心管中离心，离心结束后,上层血清即为免疫血清，用移液器将其转移到离心管中，放置于-20℃冰箱冻存备用。
五、实验总结
1。多克隆抗体的制备很复杂,一般要多次间隔免疫，以便产生更多抗体.还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等.
2.2 免疫原和抗血清的制备
思考题
佐剂的生物学作用是什么？ 常用的抗血清制备的免疫途径有哪些？
1. 福氏佐剂 (Freund adjuvant,FA) 是目 前动物免疫中最常应用的佐剂 , 可分为 福氏不完全佐剂 ( 石蜡油 + 羊毛脂 ) 和福氏完全佐剂 ( 石蜡油 + 羊毛脂 + 卡介苗 ) 两种 。 2. 细胞因子佐剂 细胞因子佐剂与抗原 合用 , 可 以更有效地激发机体的免疫 功能 , 增强免疫反应。
三、动物采血法
动物免疫 3~5 次后, 如抗血清抗体效价经测 定合格后即可放血。如血清效价不理想可追 加免疫 1~2 次后再行放血。应选择在末次免 疫后 5~7 天及时采血, 否则抗体效价会下降。
目前较常用的采血方法有以下三种。
1. 颈动脉放血法 这是最常用的方法。 2. 心脏采血法 一只家兔一次可取血 20~30ml。 3. 静脉多次采血法 家兔可取耳中心静脉 , 山羊和绵羊可取颈静脉采血。
③抗血清的要求 : 抗血清可分为 R(rabbit) 型与H (horse) 型。R 型抗血清能和很小量的抗原结合, 形 成可见的沉淀线 , 具有 较宽的抗原抗体比例范围 ； H 型抗血清用于沉淀反应 , 较难掌握 , 因而极少应 用。 ④抗原的选择: 对蛋白质抗原 , 大部分动物皆适 合, 较常用的是家兔与山羊； ⑤甾体激素及酶 : 简体激素免疫多用家兔 , 酶类 免疫多用豚鼠。
(四) 凝胶过滤
凝胶过滤又名分子筛层析，凝胶是具有 三维空间多孔网状结构的物质，经过处 理平衡后，装入层析柱内成为分子筛的 支撑物。
(五) 离子交换层析
离子交换层析是利用一些带电离子基团 的凝胶或纤维素，吸附交换带有相反电 荷的蛋白质抗原。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(免疫原和抗血清的
临床医学检验技师初级（师）临床免疫学及检验（免疫原和抗血清的制备）模拟试卷1(题后含答案及解析)题型有：1. A1型题 2. B1型题 3. B1型题 4. B1型题1．组织和细胞粗抗原制备方法不包括A．机械破碎法B．超声破碎法C．酶处理法D．表面活性剂法E．ELISA法正确答案：E解析：常见破碎法包括物理性的机械破碎法、超声破碎法、一20℃的反复冻融法等，也有生物化学类的酶处理法、自溶法和表面活性剂处理法等。
ELISA 法为常用的免疫学检测方法。
知识模块：免疫原和抗血清的制备2．下列属于可溶性抗原的是A．绵羊红细胞B．家兔红细胞C．鼠伤寒沙门菌D．细菌毒素E．鞭虫卵正确答案：D解析：常见的颗粒性抗原包括各种细胞、细菌、寄生虫；常见的可溶性抗原包括各种蛋白质、核酸、细菌毒素等。
知识模块：免疫原和抗血清的制备3．从免疫血清中粗提γ球蛋白最简便的方法为A．亲和层析B．离子交换层析C．凝胶过滤D．超速离心E．硫酸铵盐析正确答案：E解析：免疫球蛋白纯化的方法很多，有单一法，但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵盐析为基础，再经过层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。
知识模块：免疫原和抗血清的制备4．以下具有免疫原性的佐剂是A．石蜡油B．羊毛脂C．磷酸钙D．卡介苗E．表面活性剂正确答案：D解析：卡介苗是结核杆菌经过反复的减毒、传代后，使细菌逐渐失去了致病力，最后制成减毒活疫苗，但仍具有免疫原性，人体接种后，使机体产生对结核的免疫力。
知识模块：免疫原和抗血清的制备5．常用的亲和层析支持物不包括A．琼脂糖珠B．琼脂糖C．聚丙乙烯酰胺D．多空玻璃球E．聚氯乙烯(PVC)保鲜膜正确答案：E解析：常用的亲和层析支持物有琼脂糖珠、琼脂糖、聚丙乙烯酰胺、多空玻璃球，不包括聚氯乙烯(PVC)保鲜膜。
知识模块：免疫原和抗血清的制备6．纯化抗原的纯度鉴定方法不包括A．SDS-PAGEB．毛细管电泳C．醋酸纤维素膜电泳D．高效液相层析法E．双向免疫扩散法正确答案：E解析：常用的纯化抗原的纯度鉴定方法包括SDS-PAGE法、毛细管电泳法、醋酸纤维素膜电泳法、高效液相层析法，而双向免疫扩散法属于免疫活性的鉴定法。
免疫原和抗血清的制备
第三章免疫原和抗血清的制备Preparation of immunogen and antiserum第四章特异性抗体的制备技术Preparation of SpeCifiC Antibody第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：抗原和抗体的概念类型、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理；第二部分测试题熟悉：常用颗粒性和蛋白质抗原制备的方法、多克隆抗体制备的影响因素，常用佐剂种类；了解：抗血清的鉴定，基因工程抗体的类型。
二、教学内容1．常见免疫原的种类和制备及佐剂。
2．免疫血清的制备，抗血清的鉴定与保存。
3．单克隆抗体制备技术。
4．基因工程抗体技术。
(一)单项选择题(A型题)1．配制绵羊红细胞免疫原一般细胞浓度为A．102／ml B．104／m1 C． 105／mlD．106／ml E．108／ml2．细菌鞭毛免疫原常规的制备方法A． 0．5％甲醛处理 B．100℃加温2h处理 C．1％氯化钙处理D． 75％乙醇处理 E．2％氯仿处理3．细菌的菌体免疫原常规的制备方法A．75％乙醇处理 B．100℃加温2h处理 C．0．5％甲醛处理D．1％氯化钙处理 E．2％氯仿处理4．要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法A．盐析法 B．凝胶过滤法 C．离子交换层析法D．免疫亲和层析法 E．免疫电泳法5．制备人工抗原时，最常用于偶联半抗原的载体A．免疫球蛋白 B．人甲状腺球蛋白 C．人血清白蛋白D．牛血清白蛋白 E．葡萄球菌A蛋白6．蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫A．7～10天B．10一20 天 C．20～30天D．30—60天 E．3个月7．鉴定抗体的效价，常用下列哪一种方法A．间接凝集试验 B．单向免疫扩散法 C．双向免疫扩散法D．免疫亲和层析法 E．聚丙烯酰胺凝胶电泳法8．纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体A．盐析法 B．凝胶过滤法 C．离子交换层析法D．免疫亲和层析法 E．免疫电泳法9．根据抗原分子所带电荷不同进行分离纯化的方法称为A．盐析法 B．凝胶过滤法 C．离子交换层析法D．免疫亲和层析法 E．免疫电泳法10．单克隆抗体目前效果较好的纯化方法A．亲和层析法 B．凝胶过滤法 C．离子交换层析法D．超速离心法 E．盐析法11．完全佐剂的组成A．液体石蜡+羊毛脂B．羊毛脂+氢氧化铝C．液体石蜡+卡介苗+氢氧化铝D．卡介苗+氢氧化铝+羊毛脂E．卡介苗+液体石蜡+羊毛脂12．要使半抗原与载体结合具有免疫原性、半抗原分子的数目数至少要达到A．10个以上 B．15个以上 C．20个以上D．50个以上 E．100个以上13．颗粒性抗原免疫接种方法一般采用A．淋巴结注射 B．静脉注射 C．皮内注射D．皮下注射 E．肌肉内注射14．免疫小鼠采血通常采用A．心脏采血或断尾法 B．颈动脉放血或断尾法C．颈静脉或摘除眼球采血D．摘除眼球或断尾法 E．耳静脉采血或摘除眼球15．较长时间(4—5年)保存抗体，通常采用A．4℃保存 B．一10℃保存 C．一20℃保存D．一30℃保存 E．真空干燥保存16．在HAT选择培养基中可长期存活者是A．细胞多聚体 B．融合的脾细胞与瘤细胞 C．融合的瘤细胞与瘤细胞 D．未融合的瘤细胞E．未融合的脾细胞17．属于颗粒性抗原的是A．脂多糖 B．球蛋白 C．白蛋白D．DNA E．血小板18．属于可溶性抗原的是A．荚膜 B．菌毛 C．鞭毛D．IgG E．SRBC19．最常用的半抗原载体为A．牛血清白蛋白 B．牛甲状腺球蛋白 C．人血清白蛋白D．人甲状腺球蛋白 E．球蛋白20．亲合层析支持物最常用的是A．sepharose2B B．sepharose4B C．sepharose6BD．多孔玻璃球E．琼脂粉21．破碎组织细胞制备蛋白质抗原最常用的方法为A．反复冻融法B．超声破碎法C．表面活性剂处理法D．自溶法E．酶处理法22．连接在载体上的半抗原数目应在多少以上,才能有效地产生抗体? A．4 B．8 C．10D．15 E．2023．制备抗重链血清时,用于裂解免疫球蛋白的酶最好选用A．木瓜蛋白酶B．胃蛋白酶C．胰蛋白酶D．限制性核酸内切酶E．胰肽酶24．某抗原需制备10ml抗血清,应选择何种动物A．家兔B．小白鼠C．马D．绵羊E．猴25．可有效激发机体抗肿瘤效应的佐剂为A．福氏佐剂B．胞壁肽C．细胞因子D．羊毛脂E．多聚核苷酸26．从免疫血清中粗提γ球蛋白最简便的方法为A．亲合层析B．离子交换层析C．凝胶过滤D．超速离心E．硫酸铵盐析27．具有免疫原性的佐剂为A．脂多糖B．氢氧化铝C．石蜡油D．羊毛脂E．多聚核苷酸28．免疫接种后易引起局部持久溃疡和形成肉芽肿的佐剂为A．福氏完全佐剂B．福氏不完全佐剂C．细胞因子佐剂D．内毒素E．多聚核苷酸29．制备人血清蛋白与福氏完全佐剂的乳化抗原时,两者比例最好为A．1:1 B．2:1 C．3:1D．4:1 E．0．5:130．某免疫原有10μg,制备抗血清应选择哪种途径免疫A．淋巴结内注射B．皮内注射C．腹腔注射D．肌肉注射E．静脉注射31．首次与第二次免疫接种的时间间隔最好为A．1W 内 B．7～10 天C．10～20 天D．20～30 天 E．30 天以上32．第二次免疫接种后,免疫接种的间隔时间最好为A．1W 内 B．7～10 天C．10～20 天D．20～30 天 E．30 天以上33．分离亚细胞成分或大分子蛋白质最常用的方法为A．超速离心法B．低速离心法C．高速离心法D．选择性沉淀法E．凝胶过滤法34．免疫小鼠的采血方法常为A．静脉采血法B．心脏采血法C．颈动脉放血法D．断眼法或摘除眼球法E．股动脉放血法35．制备针对伤寒沙门菌H 抗原的抗血清常选用的接种途径为A．静脉注射B．淋巴结注射 C．腹腔注射D．皮内注射E．肌肉注射36．厂家生产的抗IgG制剂一般的保存方法为A．液体4℃保存 B．液体-20℃保存C．真空干燥保存D．25℃保存E．加叠氮钠保存(二)多项选择题(x型题)1．从组织细胞中提纯某可溶性抗原，一般需经过下列哪些步骤A．破碎细胞B．选择性沉淀C．亲和层析D．与载体偶联E．纯度鉴定2．可用于破碎组织细胞制备可溶性抗原的方法有A．超声破碎法B．冻融法C．超速离心法D．酶处理法E．表面活性剂处理法3．提取蛋白质免疫原所用的沉淀法包括A．盐析法B．高分子聚合物沉淀法C．有机溶剂沉淀法D．核酸沉淀法E．醋酸沉淀法4．提取蛋白质免疫原的技术有A．选择性沉淀B．超速离心C．凝胶层析D．离子交换层析E．亲和层析5．免疫血清制备的过程涉及A．选择免疫动物B．免疫方法C．动物采血D．免疫血清的纯化E．抗血清的鉴定6．单克隆抗体纯化的方法A．亲和层析法B．凝胶过滤法C．离子交换层析法D．超速离心法E．盐析法7．单克隆抗体制备的流程A．抗原的免疫和细胞融合B．抗体初筛与克隆化C．杂交瘤细胞的冻存与复苏D．单克隆抗体的批量生产E．单克隆抗体的纯化与鉴定8．用于抗血清的免疫球蛋白片段的主要制备方法A．分离非共价键法B．分离共价键法C．溴化氰裂解法D．酶裂解法E．乙醇裂解法9．目前认为佐剂增强免疫应答的机理A．增加抗原的表面积和改变抗原构型B．佐剂与抗原结合改变抗原的物理性状C．增强巨噬细胞的吞噬作用D．佐剂与抗原结合后直接激活NK细胞发挥效应E．直接激活B细胞产生抗体二、填空题1．根据抗体制备的技术方法不同进行区分，人工制备的抗体可分为( ),( )和( )三大类型。
临床医学检验临床免疫技术：免疫原和抗血清制备题库
临床医学检验临床免疫技术：免疫原和抗血清制备题库1、单选抗体特异性鉴定常采用（）A.对流免疫电泳和区带电泳B.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法C.火箭电泳和血凝法D.凝胶电泳和血凝法E.双向免疫扩（江南博哥）散法正确答案：E参考解析：抗体特异性鉴定常采用双向免疫扩散法；抗体的效价的鉴定常采用双向免疫扩散法；抗体的纯度鉴定常用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。
考点：抗血清的鉴定和保存2、单选为提取高纯度特异性IgG通常采用的方法是（）A.超速离心B.区带电泳C.亲和层析D.选择性沉淀E.凝胶过滤正确答案：C3、单选提取高纯度特异性IgG的方法是（）A.亲和层析B.离子交换层析C.凝胶过滤D.超速离心法E.血清区带电泳正确答案：A4、单选沉淀免疫复合物所用PEC6000浓度为（）A.3％～4％B.6％～7％C.8％～12％D.12％～15％E.25％正确答案：A5、单选测定某一种组织抽提物的蛋白质含量，用（）A.双缩脲法B.凯氏定氮法C.酚试剂法D.紫外分光光度法E.染料结合法正确答案：C6、单选制备人血清蛋白与弗氏完全佐剂的乳化抗原时，两者比例最好为（）A.1：1B.2：1C.3：1D.4：1E.0.5：1正确答案：A参考解析：制备人血清蛋白与弗氏完全佐剂的乳化抗原时，两者比例为1：1。
7、单选分离亚细胞成分或大分子蛋白质最常用的方法为（）A.超速离心法B.低速离心法C.高速离心法D.选择性沉淀法E.凝胶过滤法正确答案：A8、单选欲鉴定抗原是否纯化应采用下列哪种方法（）A.单向免疫扩散法B.血凝法C.沉淀试验D.免疫电泳法E.补体结合试验正确答案：D参考解析：纯化抗原的鉴定：主要对纯化抗原的含量、理化性质、纯化及免疫活性进行鉴定，常用方法有酚试剂法、聚丙烯酰凝胶电泳法、免疫电泳法、免疫双扩散法等9、单选长期保存细胞的温度为（）A.－196°FB.－85°FC.－196℃D.－85℃E.20℃正确答案：C参考解析：长期保存细胞的技术要求：液氮深低温（－196℃）环境，加入二甲亚砜为保护剂。
免疫原和抗血清的制备
离子交换层析法： 利用蛋白质带电荷不同进行分离 离子交换剂（带有离子基团）：在惰性载体上引入带有 电荷的活性基团即离子交换剂 离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子交换树脂 阳离子交换剂 — 带负电荷，与阳离子交换 阴离子交换剂 — 带正电荷，与阴离子交换
增加离子强度（增 加介导常数）或减 少pH(减少蛋白质电 荷），使蛋白质从 离子交换剂上解吸 附
6％～7％可沉淀IgM，8％～12％可沉淀IgG，12％～ 15％可沉淀其他球蛋白，25％可沉淀白蛋白。最突
出的应用是用3％～4％的PEG沉淀免疫复合物，未结
合的抗原和抗体留在溶液中。按此原理设计了快速
测定比浊法和循环免疫复合物测定法。
层析法： 凝胶层析法：
利用凝胶的分子筛作用，对分子量不同的蛋白质 进行分离
（二）可溶性抗原的纯化
超速离心法：根据抗原比重特点进行分离 差速离心法－低速和高速离心交替进行 适用用于分离大小差别较大的抗原：大分子抗原 （IgM(800kD)、C1q(410kD)),小分子抗原（载脂蛋白A28.3kD) 特点：方法较简单，但分辨率不高，沉淀系数在同一个数量 级内的各种粒子不容易分开，常用于其他分离手段之前的粗 制品提取。 密度梯度离心法－区带离心法 离心时先将样品溶液臵于一个由梯度材料（蔗糖、甘油）形 成的密度梯度液体柱中，离心后被分离组分以区带层分布于 梯度柱中 可以同时使样品中几个或全部组分分离，具有良好的分辨率
柱
二、抗血清的保存
2℃～8℃保存：短期保存
冰冻保存：保存5年
真空干燥保存：保存5～10年
多克隆抗体的实际意义： 预防：治疗感染性疾病（人工被动免疫）
如：破伤风抗毒素血清（副作用是超敏反应）
诊断：肥大氏反应（诊断伤寒、副伤寒）
免疫原及抗血清制备
稀碱、浓盐、加温等）时又可将抗原抗体解离。如果将抗原或抗体固定在不溶 性的载体上能从液相中专一性分出抗体或抗原。
• 根据这一原理，将可溶性抗原（或抗体）用化学方法偶联到不溶性载体上，当将相
应的抗血清（或抗原）按层析方法加入柱中，抗血清中的相应的抗体与抗原特异性 结合。其他蛋白成分随洗脱液流出。再改变缓冲液的PH值和离子强度，则可以使
• 1.含量鉴定：
生化方法 酚试剂法
双缩脲法 可见光吸收法
紫外吸收法 Ag宝贵，少
2纯度的鉴定：醋酸纤维薄膜电泳法－－
•
经典常用 聚丙烯酰胺凝胶电泳法
免疫电泳法
免疫双扩散法
ELISA或RIA（放免）－－
不纯，也可能是同一物质的聚合体或降解物
较纯，也不能排除在这条带中有其他成分
所以单一方法，可信度差。因而几种方法联用较可靠
消化细菌和组织cell
（6）表面活性剂处理法
第四页，编辑于星期日：十七点 四十分。
蛋白质抗原的制备和纯化：
可溶性抗原绝大部分为蛋白质
1.超速离心和梯度密度离心法： 用来分离亚细胞部分及大分子蛋白质
1）差速离心：高低速交替进行。将大分子物质分离 2）梯度密度离心：区带分离法，通过梯度密度来维持重力的稳 定性，通常分离的悬液中的颗粒比液体重，要使之上浮，必须加 入第三种成份，其密度连续或不连续升高，即所谓梯度 3）第三种成份多用甘油、蔗糖氯化色，氯化铷 适合于少部分大分子抗原，对于大量的中、小分子量的蛋白质抗原 不适用此法
免疫原和抗血清的制备
第一页，编辑于星期日：十七点 四十分。
第一节免疫原的制备
•
免疫原是能够引起机体产生抗体，并能与之发生反应的 物质
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利用分子量和电荷量不同进行分离
（三）纯化抗原的鉴定
蛋白含量测定：紫外吸收法、双缩脲法、酚试剂法
分子量测定：SDS-PAGE、凝胶过滤
纯度鉴定：醋酸纤维膜电泳、SDS-PAGE、毛细管电 泳、等电聚焦、高效液相层析 免疫活性鉴定：双向免疫扩散、免疫电泳、ELISA
第二节 免疫佐剂
免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
三、动物采血法
颈动脉采血法：家兔、绵羊、山羊
心脏采血法： 家兔、豚鼠、大鼠、鸡
静脉采血法： 家兔、山羊、绵羊
第四节 抗血清的鉴定和保存
一、抗血清的鉴定
抗体特异性的鉴定：双向免疫扩散法 抗体效价的鉴定：凝集试验 、双向免疫扩散试验、ELISA
凝胶过滤法： 利用凝胶的分子筛作用，对分子量不同的蛋白质 进行分离
离子交换层析法：
利用蛋白质带电荷不同进行分离 离子交换剂： 离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子交换树脂
亲和层析法：利用生物大分子之间具有的专一性亲和力
(1)亲和层析支持物的选择：
①非特异性吸附低； ②液体流速快；
③在各种pH和高浓度盐溶液中稳定；
抗体纯度的鉴定：SDS-PAGE 、双向免疫扩散试验、免疫电泳
抗体亲合力的鉴定：平衡透析法、ELISA、RIA竞争结合试验
二、抗血清的保存
2℃～8℃保存：短期保存
冰冻保存：保存5年真空干燥存：保存5～10年第五节 抗血清的纯化
抗原免疫动物制备的抗血清是成分复
杂的混合物，除含有特异性抗体外，还存 在与目的抗体不相关的成分。纯化目的是 除去这些不相关成分，防止抗血清中其他 杂抗体干扰试验结果。
原混合液制成固相吸附剂
思考题
1．什么是免疫原？ 2．如何制备可溶性抗原？ 3．常用的细胞破碎方法有哪些？ 4．连接半抗原的载体有哪些？制备半抗原性免疫原的方 法有哪些？ 5．纯化抗原的鉴定包括有哪些内容？ 6．什么是免疫佐剂？免疫佐剂有哪些种类？免疫佐剂的 作用机制有哪些？ 7．什么是抗血清？什么是多克隆抗体？ 8．如何制备抗血清？ 9．动物采血有哪些方法？ 10．抗血清的鉴定包括哪些内容？
一、特异性IgG抗体
盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法
离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤
维素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层 析柱
二、单价特异性抗血清
亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱
吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗
非共价键解离法－改变pH 、利用强变
性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶
（二）可溶性抗原的纯化
超速离心法： 差速离心法－低速和高速离心交替进行
密度梯度离心法－区带离心法
选择性沉淀法：
核酸去除法－氯化锰、硫酸鱼精蛋、
链霉素 盐析法－硫酸铵、硫酸钠 有机溶剂沉淀法－乙醇、丙酮 聚合物沉淀法－聚乙二醇
抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原 的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质 称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。
一、佐剂的种类
化合物:氢氧化铝、明矾、矿物油、吐温-80、弗氏不完全佐剂以及人
工合成的多聚肌苷酸∶ 胞苷酸(poly I∶C)、脂质体
生物制剂:处理改造的细菌及代谢产物，如卡介苗、短小棒状杆菌、百 日咳杆菌及CTB、LPS和类脂A、胞壁酰二肽等；细胞因子及热休克蛋白
第一节 免疫原的制备
免疫原(immunogen)是能诱导机体产生抗体 并能与抗体发生反应的物质 颗粒性抗原－细胞、细菌、寄生虫 可溶性抗原－蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸
一、颗粒性抗原的制备
细胞抗原：绵羊红细胞 细菌抗原：菌体抗原、鞭毛抗原 寄生虫体抗原：虫卵
二、可溶性抗原的制备和纯化
（一）可溶性抗原的制备
用于人体的佐剂：氢氧化铝、明矾、poly I∶C、胞壁酰二肽、细
胞因子、热休克蛋白
常用于动物实验的佐剂：弗氏佐剂(Freund’s adjuvant)
二、佐剂的作用机制
改变抗原物理性状，延缓其降解和排除，更有效刺激免疫系 统。 刺激单核-吞噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力。 刺激淋巴细胞增殖和分化。
基琼脂糖、羧基琼脂糖、溴乙酰琼脂糖、
重氮盐衍生物琼脂糖、疏基琼脂糖。
(4)亲和层析条件的选择：
①封闭活性基团：用无关蛋白质或三乙醇胺
过柱；
②除去未结合和结合不牢的蛋白：先用 NaHCO3洗脱，再用解脱剂处理； 解脱剂：3mol/L 硫氰酸钾（或钠）、0.1mol/L pH2.4甘氨酸缓冲液
电泳法：
④有合适丰富的化学基团，与蛋白质或其它化合物结 合； ⑤有丰富的微孔，以增加结合容量。 最常用的支持物是Separose4B
(2)配体的选择条件： ①抗原或抗体必须单一特异性；
②抗原与抗体必须具有较高的亲和力；
③配体必须有一个适当的化学基团。
(3)抗原或抗体与支持物的结合： ①活化：溴化氰；
②接“手臂”：带“手臂”琼脂糖有氨
多克隆抗体(polyclonal antibody,pcAb)：天然抗
原刺激多种B淋巴细胞克
隆产生的多种抗体的混合 物
多克隆抗体的产生示意图
一、免疫动物的选择
抗原来源与动物种属的关系
种属差异越远，免疫原性越强
动物个体的选择
适龄、健康、体重符合要求
抗原的性质
二、免疫程序
免疫原的剂量
中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体
组织细胞抗原的制备： 高速捣碎法－组织捣碎机捣碎
研磨法－用玻璃匀浆器或乳钵研磨
组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备： 反复冻融法－-20℃冻结，然后室温融化
超声破碎法－超声波（1～20kHz）
自溶法－自身酶系
酶处理法－溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶
表面活性剂处理法－SDS、去氧胆酸钠、 二乙基十六烷基溴
免疫球蛋白片段的制备：
第三章 免疫原和抗血清的制备
第一节 免疫原的制备 一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备和纯化 三、半抗原性免疫原的制备
第二节 免疫佐剂 一、佐剂的种类 二、佐剂的作用机制 第三节 抗血清的制备 一、免疫动物的选择 二、免疫程序 三、动物采血法
第四节 抗血清的鉴定和保存 一、抗血清的鉴定 二、抗血清的保存 第五节 抗血清的纯化 一、特异性IgG抗体 二、单价特异性抗血清 思考题 小结