2015-11-体内药物分析s_489303169
体内药物分析
第一节 体内药物分析的目的和意义
1、生物样本分析方法的建立 2、生物样本的测定
3、药物的体内研究评价
第一节 体内药物分析的目的和意义
给药方案与效应关系
给药
药代动力学
药物
ADME
药效学
药物效 应与不 良反应
药物进入机体后，产生的两种不同的效应。
体内药物分析概述
二、体内药物分析的对象
临床人体 试验
(clinical）
非临床动 物试验 (preclinical
血液
药物代 谢物
尿液
常用样 本种类
唾液
头发
粪便
体内药物分析概述
三、体内药物分析特点
➢ 干扰物质多，内源性物质多，与药物有结合、缀合，需 经过分离、纯化。
➢ 样品浓度低，测定前需浓缩、富集。 ➢ 取样量少 ➢ 工作量大 ➢ 对仪器设备要求高（如需要样本冷贮、萃取、离心、富
特点
优缺点
• 优点: 样本易得，样品量 大; 尿液中药物浓度较高， 易于检测；无需去蛋白处 理。
• 缺点: 易受食物种类、饮 水多少、排汗情况等的影 响，个体差异常常很大。
• 直接测定，萃取 分离测定
• 采用化学方法或 酶解法游离缀合 状态药物。
尿样的 尿样的 制备 采集
• 自然排尿法
• 随时尿、晨尿、白天 尿、夜间尿、及特定 时间段尿液。
阐明药物在体内ADME过程和 特点，提供药动学参数，揭示 药物在体内动态变化的规律性
阐明代谢物的结构、转化途径 及其动力学
为药效学和毒理学评价提供重 要的线索
目的
药物研发过程中的体内药物试验和分析
体外PK/PD 动物PK/PD
毒性
体内药物分析答案
1、体内药物分析主要与哪几门学科关系密切？药物动力学、生物药剂学、临床药物治疗学、临床药理学。
2.体内药物分析的对象、任务及特点体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物任务：培养学生具有强烈的药品全面质量控制的观念，使学生通过各种现代分析技术手段，了解药物在体内的数量和质量的变化进行分析，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内的转变、代谢的方式、途径等信息运用分析手段.特点：样品量少，不易重新获得样品复杂，干扰杂质多供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施。
实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作。
工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。
需相关学科参与8、分析方法地设立与建立的一般步骤以纯品进行测定、以处理过的空白样品进行、测定体内实际样品测定、测定回收率、以水代替空白样品添加标准品测定、以空白样品添加标准品测定15、抗原决定簇是决定抗原性的特殊化学基团。
大多存在于抗原物质的表面，有些存在于抗原物质的内部，须经酶或其他方式处理后才暴露出来。
一般抗原决定簇是由6－12氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列（蛋白质一级结构）组成或由不连续的蛋白质三维结构组成。
16.简述生物样品中待测组分浓集的必要性及浓集的两种方法生物样品中待测组分浓集的必要性及浓集的两种方法浓集的必要性样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组分量可能达不到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定两种浓集方法：末次提取时加入提取液尽量少；挥去提取溶剂法21.体内药物分析方法设立的主要依据方法设计的主要依据：1)明确分析方法的目的要求2)、调研文献了解待测药物的特性3)、仪器设备与实验室条件1.药物分子结构与荧光的关系药物及其代谢物在光照射下吸收紫外或可见光的能量，使外层电子由基态跃迁到较高能级的激发态。
体内药物分析概述
03
拓展应用领域
将体内药物分析拓展到临床诊断、 毒理学研究、环境监测等领域， 扩大其应用范围。
05
体内药物分析的实验设 计
实验目的与要求
确定研究目的
明确实验的目标，例如研究药物在体内的代 谢过程、药效学特性或毒理学特性等。
确定实验要求
根据研究目的，确定所需的实验参数和指标， 例如药物浓度、代谢产物的鉴定等。
指导临床用药
体内药物分析结果可为医生提 供参考，指导临床合理用药， 制定个体化治疗方案。
研究药物动力学
通过体内药物分析，研究药物 的吸收、分布、代谢和排泄等 动力学过程，为新药研发提供
重要依据。
重要性
• 体内药物分析在临床药物治疗、药物研发、毒理学研究等领域 具有重要意义，有助于提高药物治疗效果、保障用药安全、促 进新药研发进程。
03
利用同位素标记等技术，研究药物在体内的代谢途径和转化过
程。
体内药物分析的新技术
微透析技术
通过探针植入生物体内，实时收集代 谢物样品，具有采样量小、实时监测 的特点。
液相微萃取技术
表面增强拉曼光谱技术
利用拉曼光谱法测定生物样品中的药 物成分，具有高灵敏度和高分辨率的 特点。
利用微型化萃取装置，在生物样品中 富集微量药物成分，提高检测灵敏度。
04
体内药物分析的挑战与 前景
挑战
生物样本的复杂性
生物样本（如血液、尿液等）成分复杂， 药物及其代谢产物在其中的浓度低，给
准确测定带来困难。
分析方法的特异性
体内药物分析需要高特异性的分析方 法，以区分药物及其代谢产物与内源
性物质。
药物代谢的多样性
药物在体内的代谢过程复杂，可能产 生多种代谢产物，需要同时对多种物 质进行测定。
体内药物分析
生物样本中的脂肪、蛋白、不溶性颗粒等杂质污染仪器
二.样品制备时应考虑的问题
1.药物的理化性质和存在形式
A:药物的酸碱性、未电离分子的亲脂性、挥发性 B:药物光谱性及官能团 C:药物在体内的存在形式及蛋白结合率
2.待测样品的浓度范围
A:生物样本中药物浓度个体差异大 B:浓度高的对样品与处理要求低，低的要求高
对药物未电离的分子可溶，电离分子不溶
溶剂沸点低，易挥发浓集
与水不相混溶 无毒，不易燃烧 不易形成乳化 具有较高化学稳定性和惰性
不影响检测
C:有机溶剂的体积 样品与提取溶剂体积比1:（1-2） D:样品溶液的pH
碱性药物最佳pH要高于pKa1-2单位
酸性药物最佳pH要低于pKa1-2单位 原则是酸性药物在酸性，碱性药物在碱性环境提取 待测药物多为碱性的，内源杂质多为酸性的
第二节 生物样品的预处理和制备
一 生物样品预处理的目的
1.使药物从缀合物及结合物中释放出来，以便测定其总浓度
2.生物样品成分复杂、干扰多、含量低。经预处理达到纯 化、富集等目的 3.为了适应和符合测定方法的灵敏度
A:免疫分析法可不作预处理 B:紫外、荧光分析法样品预处理十分必要
4.为了防止分析仪器的污染、劣化，提高灵敏度、准
四. 药物的排泄：
器官（肾脏、肝胆、肠道等）。 1.肾排泄 肾脏是排泄药物和代谢物的重要器官。 2.胆汁排泄 是排泄药物消除的另一重要途径。原 型药物的排泄较少，代谢物排泄多。 3.其他排泄途径 呼吸道、外分泌腺等
生物样品与样品制备
第一节 生物样品的种类、采集、制备与贮存
一.生物样品的种类、采集和制备
A:加入强酸可与蛋白质阳离子形成不溶性的盐
体内药物分析
数据分析和解释
通过统计学和模型建立等方 法，对分析结果进行解释和 评估。
体内药物分析的未来发展趋势
随着技术的不断进步，体内药物分析将更加精准和高效。人工智能和大数据分析将在药物研发和个体化 用药中起到重要作用。
结论和总结
体内药物分析是现代药物研发和临床实践中不可或缺的一部分。通过准确评 估药物的代谢和药代动力学，可以实现个体化治疗和提高治疗效果。
常用的体内药物分析方法
液相色谱法
通过分离和测定药物成分，快速和准确地分析 药物浓度。
质谱法
通过分析药物的质谱图谱，检测药物的代谢产物。
免疫分析法
利用抗体和抗原的特异性反应，检测药物的含 量和浓度。
药动学分析
通过建立数学模型，研究药物在体内的吸收、 分布、代谢和排泄。
体内药物分析的应用领域
1
药物研发
体内药物分析
体内药物分析是研究药物在人体内的分布、代谢和排泄的过程。它在制药行 业和临床实践中起着至关重要的作用。
药物分析的定义
分析药物成分
通过分离和定量测量药物的化学成分，确定 药物的纯度和质量。
检测药物浓度
测定血浆或尿液中的药物浓度，评估药物的 吸收、分布和排泄。
研究药物代谢
追踪和测量药物在体内的转化和代谢途径， 了解药物的药代动力学。
监测治疗效果
评估药物治疗效果和安全性，为个体化用药 提供依据。
体内药物分析的重要性
1 个体差异
不同个体对药物的代谢和反应有所不同，体内药物分析可以实现个性化治疗。
2 疗效优化
通过监测药物浓度，调整剂量和给药方案，最大限度地发挥药物疗效。
3 安全性评估
体内药物分析
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体内药物分析
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二、分析方法的建立
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
➢ 分析方法建立之前
查阅文献资料——充分了解药物在体内的动力学过程，使所 拟定的分析方法
——避免受到代谢产物的干扰适用于实际生物样品测定
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二、分析方法的建立
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
体内药物分析的目的——影响分析方法的应用
药代动力学——研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程 ——血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢产物
要求 ——同时测定原形药物和代谢产物 检测 ——宽线性范围(Cmax～Cmax的1/20)、高灵敏度(10-9g/ml)和高专属
三、生物样品的类型与预处理方法
生物样品的类型与预处理方法——决定分析方法的应用
以血浆或血清为分析样品 采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术 ——分析样品较为“干净”，可用HPLC检测
用RIA分析 ——样品的预处理方法可较为粗放 ——经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测定
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体内药物分析
性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离) 方法 ——不必强调方法的简便、快速；
——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
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体内药物分析
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测 有效治疗浓度范围内药物浓度
体内药物分析
[P]· [Df] K= Db
解离常数
血浆蛋白结合率： Β= Db = Db+Df 1 1+K/np+Df/np
结合力强的药物可以置换结合力弱的药物，通过竞
争蛋白是药物相互作用类型之一。 由此可见，K、np是影响β的重要因素 np↓ K↓ β↓ β↑
药物在足够高浓度时使结合部位饱和，浓度再增高， 多余的药物均呈游离状态，结合部分比率降低，药物血 浆蛋白结合率是药代动力学的重要参数之一。
《Textbook of Biopharmaceutic Analysis》
1981
2．国内情况
80年代初，药物分析工作者倡导，1980年版《药物
分析》教材中纳入部分内容，第二、三版增加体内药物 分析一章。第四版、第五版取消，各学校开设体内药物 分析课程。 80 年代开始在医院进行临床药学工作，主要测定药 物浓度。
-70℃加入稳
二、生物样品的预处理
（一）预处理的目的
①存在形式的多样性 游离 结合 代谢物 ②浓度低，杂质多（分离浓缩） ③出现浑浊和沉淀 ④与试剂起反应 ⑤影响色谱柱寿命
（二）处理方法选择的一般原则
1．药物理化性质
pKa 亲脂性 挥发性 溶解度 光谱特征 稳定性 2．浓度范围 灵敏的方法 3．测定的目的 定性 定量 母体 代谢 4．生物样品的种类 5．样品处理与分析方法的选择 ① 专一性 ② 灵敏性
（四）生物样品缀合物水解
1．酸水解
2．酶水解
β-葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶 混合酶
pH4.5-7.0 37℃
3．溶剂解
某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发生分解，
同时提取有机溶剂中
（五）生物样品的萃取
体内药物与毒物分析
体内药物与毒物分析体内药物和毒物分析是一种关键性的检测方法，它可以揭示该个体体内药物和毒物的负荷，并应用于药代动力学和药物安全性评价等方面。
在本篇文章中，我们将探讨体内药物和毒物分析的基本原理、常见方法以及其相关应用。
一、体内药物分析体内药物分析主要应用于以下方面：（1）药代动力学，即药物在体内的过程；（2）药物安全性评价，即药物在体内的剂量与毒性；（3）药物疗效评价，即药物在体内的作用机制及有效性。
体内药物分析的主要方法包括：（1）毛细管电泳；（2）气相色谱质谱联用（GC-MS）；（3）高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）；（4）放射性同位素标记法。
在体内药物分析中，常用的指标包括Cmax、AUC、T1/2、CL、Vd等。
其含义分别为：最高血药浓度、药物曲线下面积、半衰期、清除率和分布容积。
二、体内毒物分析体内毒物分析主要应用于以下方面：（1）毒物监测，即对个体体内毒物负荷的监测；（2）毒物剂量评估，即毒物在体内的剂量与毒性；（3）毒物治疗，即通过毒物分析进行毒物治疗的规划和实施。
体内毒物分析的主要方法包括：（1）毛细管电泳；（2）气相色谱质谱联用（GC-MS）；（3）高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）；（4）放射性同位素标记法。
在体内毒物分析中，常用的指标包括LD50、ED50、TD50、NOAEL等。
其含义分别为：半数致死剂量、半数有效剂量、半数中毒剂量和无不良毒性的最高剂量。
三、体内药物与毒物分析的应用体内药物和毒物分析在临床和药物开发中有广泛的应用。
在临床中，它可用于评估药物的安全性、疗效和药代动力学。
在药物开发中，它可用于药物的代谢和毒性评估、体内药物分布和药物动力学分析等。
最近，体内药物和毒物分析还被用于新型药物的研发中。
例如，基因编辑药物的安全性评估和代谢动力学分析已成为该领域的热点。
此外，基于群体药代动力学研究和药物安全性评价等方面的新兴分析方法也日益被广泛应用。
总之，体内药物和毒物分析是一种关键性的检测方法，它可以揭示个体体内药物和毒物的负荷，并应用于药代动力学和药物安全性评价等方面。
体内药物分析方法
体内药物分析方法药物分析是指对药物在体内的各种性质进行研究和分析的方法。
它在药物研发、药代动力学研究和临床药物监测上发挥着重要的作用。
为了准确评估药物的疗效和安全性，科学家们不断努力开发出各种分析方法来解决药物体内的分析问题。
一、药物代谢动力学研究药物代谢动力学研究是药物分析的重要内容之一。
通过研究药物在体内的代谢过程，可以了解药物的代谢途径、代谢产物以及代谢动力学参数等。
常用的药物代谢动力学研究方法包括高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）、气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）和核磁共振技术（NMR）等。
这些方法可以对药物的代谢产物进行定性和定量分析，从而全面评估药物在体内的代谢特征。
二、药物浓度监测药物浓度监测是临床药物应用的关键环节之一。
通过监测药物在体内的浓度变化，可以实时调整药物剂量，确保药物疗效的有效性和安全性。
常用的药物浓度监测方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和荧光法等。
这些方法具有高灵敏度、高选择性和准确性的特点，能够对药物的浓度进行精确测定，为临床治疗提供科学依据。
三、药物质量控制药物质量控制是确保药物疗效和安全性的关键环节之一。
通过对药物中有关成分的分析和检测，可以评估药物的纯度、含量和质量稳定性等。
常用的药物质量控制方法包括红外光谱法（IR）、紫外分光光度法（UV）和质谱法等。
这些方法具有快速、准确的特点，可以对药物中的有关成分进行定性和定量分析，确保药物质量的合格性。
四、药物分布与转运研究药物分布与转运研究是了解药物在体内分布和吸收转运的重要手段。
通过研究药物在组织器官中的分布情况和转运过程，可以了解药物的组织选择性和跨膜转运特征。
常用的药物分布与转运研究方法包括荧光显微镜法、电子显微镜法和放射性同位素示踪法等。
这些方法可以对药物在体内的分布情况进行观察和分析，为药物的合理使用提供科学依据。
综上所述，体内药物分析方法在药物研发和临床应用中具有重要地位和作用。
体内药物分析
学科介绍
学科特点
基本概念
学科关联
体内药物浓度，尤其是血浆（或血清）药物浓度直接与药效相关，并受多种因素影响。例如，不同给药途径 （如口服、吸人、静脉注射、肌肉注射、透皮等）可直接影响药物的吸收、分布、代谢和排泄，从而影响体内药 物的浓度以及经时行为，并最终影响疗效。患者的生理因素（性别、年龄等），病理状态（疾病的类型和程度）， 基因类型，吸收、代谢及分泌排泄功能，都影响药物在体内的经时行为。许多药物需经肝脏代谢或经肾脏排泄， 所以对于肝或肾病患者，由于他们的肝脏生物转化及代谢功能降低、或肾脏的分泌排泄功能降低，往往会造成药 物在体内蓄积，进而发生药物毒性反应。
2.血浆的制备
将采集的全血置含有抗凝剂的试管中，混匀后，以约1000×g力离心5～10分钟，促进血红细胞沉降分离，分 取上清液即为血浆。
3.血清的制备
将采集的全血在室温下放置至少0.
尿液样品尿液包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几种。健康成人一日排尿量为1～5L，尿液的pH 值在4.8～8.0之间。尿液的主要成分是水、含氮化合物（其中大部分是尿素）及盐类。
药物它们主要应用于放射免疫分析法（RIA）、同位素逆稀释分析，或作为GC - MS分析中的内标，以及在药 物分离中作示踪应用等。
利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较样品与药物标准品两者对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小， 借以测定样品内抗生素的浓度。
样品种类
采集时间 血样
尿液 唾液
体内样品的采集时间对测定结果的临床价值影响很大，是开展临床治疗药物监测必须考虑的基本问题。采集 时间应在药代动力学理论的指导下，根据临床治疗药物监测的不同目的确定。
体内药物清除主要是通过肾脏排泄，经尿液排出。采集的尿液应该是自然排尿。尿液在放置时可因细菌繁殖 而变混浊，因此，尿液采集后应立即测定。若不能立即测定（如需收集24小时的尿液），必须采集后立即处置、 或低温保存、或加入防腐剂后冷藏保存。常用的防腐剂有二甲苯、三氯甲烷、醋酸或盐酸等。二甲苯等有机溶剂 可以在尿液的表面形成薄膜，醋酸等可以改变尿液的酸碱性，以抑制细菌的繁殖。保存时间在36小时以内，可置 冰箱冷藏；若需长时间保存，则应冰冻贮藏。
体内药物分析概述(一)
体内药物分析概述(一)体内药物分析概述随着药物的广泛应用以及化学合成技术的进步，对于药物在体内的代谢和药效的评价成为药学研究中的重要部分。
体内药物分析是一种研究药物化学成分、药代动力学和药效学的技术，为药物的开发和研究提供了有力的支持。
本文将简单介绍体内药物分析的方法、应用和发展方向。
一、体内药物分析的方法1. 化学分析法：通过化学方法对药物在体内的降解、代谢和分布进行定性、定量分析，如高效液相色谱（HPLC）、气相色谱质谱联用（GC-MS）等。
2. 生物学分析法：对药物在体内产生的生物学响应进行测定分析，如生物光子技术和串联质谱（LC-MS/MS）等。
3. 分子生物学分析法：通过分子生物学技术对药物在体内的遗传学基础进行研究，如PCR技术分析药物靶点的基因表达和DNA分子构象变化等。
二、体内药物分析的应用1. 药效评价：体内药物分析可以定量测定药物在体内的分布、代谢和药代动力学特性，从而评价药物的药效和安全性。
2. 药代动力学研究：通过无标记或有标记化合物的给药和测定药物在血浆、组织中的浓度和排泄率等维度，研究药物的代谢途径和药代动力学特性。
3. 临床应用：利用体内药物分析技术对药代动力学的评价，可以推导出个体化用药的方案，指导药物剂量的选择和给药方式的调整，实现药物治疗的精准、有效和安全。
三、体内药物分析的发展方向1. 药物代谢和脑血流动力学方面的深入研究，从分子层面和大脑功能层面全新理解药物的代谢和作用机制。
2. 精准分析技术的发展，如高灵敏度高质量分析技术、微采样分析等，提高药物在生物体内的检测精度和分析效率。
3. 动态药代学研究，揭示药物代谢过程中的动态变化规律和临床应用的基础，为药物个体化治疗提供理论依据。
伴随着人们对生命科学的不断探索和突破，体内药物分析技术正在不断发展，为药学和医学研究提供了广阔的空间和新时代的机会。
体内药物分析在临床的应用
体内药物分析在临床的应用随着医学技术的不断发展，体内药物分析在临床上的应用越来越广泛。
体内药物分析是通过检测患者体内药物浓度来评估药物的疗效和毒副作用，为临床药物治疗提供了重要的依据。
本文将介绍体内药物分析在临床上的应用，包括药物浓度监测、个体化用药、毒副作用监测等方面。
1. 药物浓度监测
体内药物分析可以帮助医生监测患者体内药物浓度，了解药物在体内的代谢和排泄情况。
通过监测药物浓度，医生可以调整药物的剂量和给药频率，确保患者获得最佳的治疗效果。
例如，某些药物的治疗窗口比较窄，需要定期监测药物浓度，避免药物过量或者浓度不足导致治疗失败。
2. 个体化用药
通过体内药物分析可以了解患者对药物的代谢能力，预测患者对药物的反应。
不同患者对同一种药物的代谢能力有所不同，有些患者代谢能力较快，需要增加药物剂量；有些患者代谢能力较慢，需要减少药物剂量。
因此，个体化用药可以减少药物的毒副作用，提高治疗效果。
3. 毒副作用监测
体内药物分析可以帮助医生监测药物的毒副作用，及时调整药物剂量或者更换其他药物。
有些药物在体内代谢产生的活性代谢物会引起
毒副作用，通过监测这些代谢物的浓度可以及早发现毒副作用的发生，避免严重后果的发生。
综上所述，体内药物分析在临床上的应用非常重要，可以帮助医生
更好地了解药物在体内的代谢和排泄情况，个体化调整药物治疗方案，减少毒副作用的发生。
随着医学技术的不断进步，体内药物分析在临
床上的应用将会越来越广泛，为患者的治疗带来更多的好处。
体内药物分析
体内药物分析摘要】本文通过查阅近年来国内外有关体内药物分析理论的文献，结合个人的实践经验和认识，对其测定前样品的处理以及测定的基本程序等方面进行了综述。
【关键词】体内药物分析样品处理样品测定体内药物分析是药物分析的重要分支，具有自身独特的理论体系。
该理论是研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学，从而获得药物代谢动力学的各种参数、及代谢的方式、途径等信息，有助于药物的研究和临床合理应用。
1 体内药物分析中的样品预处理体内药物分析的样品成分复杂，被测组分含量低。
因此，测定前样品需经过分离、纯化、富集、改变属性等处理后，方可进行测定。
根据样品的种类、所用的测定手段、被测药物的种类及浓度等不同，预处理方法各异。
1.1 预处理的基本方法1.1.1 蛋白质的去除沉淀蛋白的方法有多种，依据沉淀试剂种类的不同，析出的蛋白质的形状亦不同，且所得上清液的pH值也稍有差别。
1.1.2 样品的分离与纯化萃取法是应用最多的分离、纯化方法，包括液—液萃取法（LLE）和液—固萃取法（LSE）。
1.1.3 样品的浓集样品分离纯化后，其微量的组分分布在较大体积的萃取溶剂中。
因此，常需要使被测组分浓集后再测定。
浓集的方法有两种：一是在末次萃取时加入的萃取液尽量少，使被测组分萃取到小体积溶剂中，然后直接吸出适量供测定；二是挥去萃取容积法。
1.1.4 样品的化学衍生化该处理可使样品中的药物转变成具有可被分离的性质，从而增强药物的稳定性，提高检测的灵敏度和对光学异构体分离的能力等。
药物分子中含有活泼H者，如含—COOH、-OH、-NH2、-NH、-SH等官能团的药物都可被衍生化。
1.2 预处理的新技术1.2.1 固相萃取技术(SPE)1.2.2 固相微萃取技术(SPME)1.2.3 微透析取样技术(MD)1.2.4 柱切换(CS)技术1.2.5 浊点萃取法(CPE)2 体内药物分析中的样品测定2.1 分离体内药物分析中的样品经预处理后，大多需要再分离。
体内药物分析
——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS
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体内药物分析
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第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
二、分析测定的目的与要求
临床治疗药物监测 有效治疗浓度范围内药物浓度
——在待测药物(或特定的活性代谢物、内标物质等)的“信号窗” （信号附近的有限范围）内不应出现内源性物质信号
07.04.2021
体内药物分析
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3. 模拟生物样品试验
第四章 分析方法的建立与验证 第二节 分析方法的建立步骤
模拟生物样品(质量控制,QC样品)——空白生物基质中加入待测药物 ——照 “1. 空白溶剂试验” 项下方法操作
结构已知的特定活性代谢物的测定
——必要时通过HPLC-DAD和LC-MS确证色谱峰的单纯性和同一性
对于结构未知的代谢产物的测定
——可采用LC-LC-NMR进行结构的初步推测后，考察其干扰情况
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体内药物分析
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3. 伍用药物的干扰
第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求
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四、实验室条件
第四章 分析方法的建立与验证 第一节 分析方法的设计依据
在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑 到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪 器装备，合理选择可行的分析方法。
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第四章 分析方法的建立与验证
第二节 分析方法 建立的一般步骤
一、分析方法的选择 二、分析方法的建立
——色谱峰的 tR、n 和 T 是否与水溶液的一致 色谱峰是否为单一成分 标准曲线的截距是否显著偏离零点等
《体内药物分析》 (1)
－真正确保药物应用的安全和有效
一、体内药物分析的意义
二十世纪六十年代以来，在药学领域 中发展了两门与临床实践直接有关的学科： 临床药理学（Clinical Pharmacology）和生 物药剂学（Biopharmaceutics； Biopharmacy）。
临床药理学（Clinical Pharmacology）的研究
经济学研究、药物情报信息研究等。
临床药学的主要任务
参与合理用药 治疗药物监测 药物不良反应监察 药物信息的收集与咨询服务 药物相互作用研究和配伍研究 药代动力学与生物利用度研究 新制剂及新剂型研究
药物的个体差异
不同病人对同一种药物的反应存在着量与质 的差别，即使病人的年龄、性别和生活条件完全 相同，对于同一剂量的同一种药也可有不同反应， 这种个体与个体间的差异，称药物的个体差异。
体内药物分析的任务
（二）为药物体内研究提供数据 1．新药研制：提供药代动力学参数、生物利
用度及血浆蛋白结合率等基本数据。 2．已经应用于临床的药物，仍有必要进行深
入的体内研究。
体内药物分析的任务
（三）开展各种生物样品的常规测定
主要是对生物体液（血液、尿液等）、脏器组织、 头发等生物材料中的药物进行测定。 如 临床药理研究：需了解血药浓度与药物效应之间 的关系。 如 临床药学研究：为实行给药方案个体化提供准确 的血药浓度测定值。
临床药学的研究范围
主要研究药物的剂型及其合理使用， 具体范围包括：
1. 剂型的设计 包括研制和开发新的药 物制剂以适合不同病人的需要。提供针 对性和科学性强的剂型和制剂。
临床药学的研究范围
2.剂型中药物（及赋形剂）的作用机制及其 安全性和危害性 包括介绍新药、新剂型 的作用机制、剂量、药物相互作用、禁忌 证、药物动力学参数、不良反应、血药浓 度监测方法等新药信息、研究药物在体内 和体外相互作用机制、研究药物临床剂量 的代谢机制、药物不良反应监察、药物过 量情况下的代谢机制以及处理方法等。
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1. 去除蛋白质方法
加入与水混溶 的有机溶剂, 蛋白析出→药 物释放 乙腈,甲醇,丙 酮,四氢呋喃 等 血浆/血清与 有机溶剂的体 积比1∶(2-3) 饱和硫酸铵,硫 酸钠,硫酸镁, 氯化钠等 血清与饱和硫 酸铵溶液的比 1∶2 10%三氯醋酸 或6%高氯酸 溶液 血清与强酸的 比1∶0.6 上清液呈强酸 性(pH≤4) 酸性分解的药 物不宜用 热变性蛋白 质沉淀 通常90C
4. 化学衍生化
仪器 分析法
GC: ①提高药物的挥发性; ②增加药物的稳定性; ③生成非对映异构体 HPLC: ①提高检测灵敏度; ②改善色谱分离
1. 在GC中的应用 (1) 硅烷化: 三甲基硅烷(TMCS) (2) 酰化: 三氟乙酸酐(TFAA) (3) 烷基化: 碘庚烷(C7H15I) (4) 不对称衍生化: (S)-N-三氟
沸点(℃) 69 81
285
220 220 285
111
68 35 149
①辅助试剂的使用 乙醚(1.2%水): 氯化钠 ②混合溶剂的使用 正己烷-异丙醇(95:5)
三氯甲烷
甲基异丁基酮 醋酸乙酯 正丁醇
245
230 260 215
61
116 77 118
*:含过氧化物；:肝脏毒性, 有致癌作用可换成二氯甲烷
静脉, 1-5ml ≤1/10
2. 血浆的制备
抗凝剂（肝素）, 1000g离心 5-10min 淡黄色上清液
1. 尿样的特点
原形,代谢物及缀 合物 药物浓度较高 收集量大 (1~5mL)
1. 唾液的组成
腮腺, 舌下腺和 颌下腺
2. 唾液的采集
漱口15min, 安 静状态, 自然 流出的唾液 物理或化学方 法刺激
4.参比方法
参比方法横坐 标(x), 拟定方法 纵坐标(y), 最小 二乘 y=a+bx a恒定干扰 b比例干扰(如,
标记抗原不纯, 交叉 免疫)
(二) 标准曲线与定量范围
线性回归: 最小二乘法或加权最小二乘法 自变量(x)为药物浓度, 因变量(y)为响应信号强度
1. 标准曲线的建立
(1) 系列标准溶液: n≥6(不包括0点); 等比系列(2~3);
血液样品的处理
血浆（plasma）：全血+抗凝剂
离心
上清液
常用的抗凝剂：肝素、EDTA、草酸盐、枸橼酸盐等
血清（serum）：全血
离心
上清液
全血（whole blood）：全血 + 抗凝剂
混合
药时曲线（drug concentration-time curve)
最低中毒浓度
血 药 浓 度 （ mg/L ） 潜伏期 Latent period
通常为100~1000倍
(2) 内标溶液: 浓度相当于系列标准溶液的几何平均浓度 (3) 系列标准样品: 空白生物介质, 加入系列标准溶液 ( 二 ) (4) 标准曲线的绘制: 药物浓度, 以单位体积(如血浆)或质量(如肝脏)
的生物介质中加入标准物质的量表示
(二) 标准曲线与定量范围
2. 限度要求
1. 样品的制备
制成水性基质匀 浆溶液
3. 血清的制备
30min-1h 1000g离心 5-10min 上层淡黄色液体
2. 尿样的采集
自然排尿 规定时间段(68h)(时间尿)
2. 样品的处理
(1)沉淀蛋白法 (2)酸/碱水解法 (3)酶水解法 蛋白水解酶中的 枯草菌溶素
4. 全血的制备
抗凝剂, 不离心
血液
组织
一、体内药物分析方法的应用
非临床的药理/毒理研究
药代动力学研究：药物在人体或动物体内的吸收、分布、生物转化 （代谢）、排泄是否有合适的药代动力学特征。 个体差异用药（用药窗口宽窄）：监测血药浓度 动物体；I~IV期临床（健康人群与病患的代谢不同，剂量的调整） 除静脉注射外，口服、皮下等药需要经过生物膜的筛选，才能进入 全身循环 仿药（药代动力学曲线基本一致，生物等效性要85%-115%）
第一题：
不饱和度1， IR谱：1748cm-1处有羰基强吸收，在1235cm-1和1040cm-1处有C-O-C 强吸收，这是典型的酯类吸收峰。
COOR基团小结： 1742 cm-1，3484 cm-1 C=O伸缩振动及其倍频 1364 cm-1 -CH2 弯曲振动 1241 cm-1 O-C(O)-C 伸缩振动 1048 cm-1 C-O 伸缩振动
通常用至少6个浓度建立标准曲线
非线性相关则需要更多浓度点
定量范围覆盖全部待测样品浓度范围
定量上限(ULOQ)高于用药后的峰浓度(Cmax) 定量下限(LLOQ)低于Cmax的10%~5%(1/10~1/20)
标准曲线各浓度点的回归计算值(x’)与标示值(x)之间的偏 差在可接受的范围之内
临床药理研究
药代动力学
生物利用度的研究
生物等效性研究
二、体内样品的收集和保存 特点
体内药物分析的特点 主要来自于体内样品的特点
1. 体内样品的特点
(1) 采样量少: ml~µl级; 且不易 重新获得 (2) 待测物浓度低: µg/ml ~ng/ml级, 甚至pg/ml (3) 干扰物质多: 尤其是血样和 组织中的蛋白质
去活性
采样后立即终止酶的活性 常用方法: 液氮速冻, 微波照射, 匀浆/沉淀, 加酶活性阻断 剂(氟化钠)或抗氧剂(VC), 煮沸
三、体内样品的前处理
目的：去除内源性干扰；分离、富集、纯化 1. 使待测 血浆蛋白结合物; 缀合物 组分游离 使待测药物/代谢物释放测定
药物/代谢物总浓度
3. 改善 2. 满足 分析环境 前处理 测定方法 的要求
H Cl
(A)
Cl
O C
O C N CH3 C4 H9
N
H N
N
CH3 CH3
(B)
第十一章 体内药物分析
一、体内药物分析方法的应用 二、体内样品的收集和保存 三、体内样品的前处理 四、定量分析方法的建立和验证 五、体内药物分析举例
药物的体内过程
肝脏
肾脏
给药
吸收
分布
代谢
排泄
口服、吸入、 注射、透皮
因此，未知物的结构是： CH3
-裂解 O C O CH2 CH2 N(CH3)2 m/z 131 -裂解
O C O CH2 CH2 N(CH3)2
CH3 C O CH2 N(CH3)2 CH2 CH N(CH3)2 m/z 43 m/z 58 m/z 71
CH3
-H迁移 - CH3COOH
第三题： 现分离一含A和B的试样， 键合相有十八硅烷基硅胶和氰基硅胶可供选择 ；流动相有25％甲醇－水和20％四氢呋喃－己烷可供选择。为了测定B 中微量A，应选何种固定液和流动相？说明如此选择的原因，并解释出 峰的次序。A和B 的结构式为：
(2) 溶剂的用量
有机相与水相(样品)体积比为1:1~5:1
(3) 水相的pH
碱性药物pH高于pKa 1~2单位 酸性药物pH低于pKa 1~2单位 碱性下提取, 可减少内源性物质(酸性)的干扰 碱性下不稳定, 在中性用三氯甲烷和异丙醇提取
(4) 提取操作
提取1次 若提取回收率较低(低于50%), 提取2~3次 脂溶性干扰物, 可进行小体积水溶液反提取
代谢产物对待测物,内标物的干扰 配伍用药的干扰
分析方法的验证
(一) 特异性
方法
(二)
(三)
标准曲线与定量范围
定量下限
(四)
精密度与准确度
样品稳定性
样品 分析
(五)
(六) (七)
提取回收率 分析过程的质量控制
(八) 未知样品浓度超限的处理
(一) 特异性
特异性(specificity), 又称专属性或专一性, 通常与选择性(selectivity)互用
1.内源性物质 2.未知代谢物
比较标准物质 与6个不同个体 的空白生物介 质和QC样品 软电离质谱 (LC-MS)介质 效应 比较QC样品 和至少6个不 同个体用药后 的实际样品 必要时LCDAD/MS确证 峰的单一/同 一
3.伍用药物
比较待测药 物, 同服药物, 待测药物的 QC样品和添 加有同服药物 的干扰样品
RIA, EIA, FIA; 适用于大分子 临床应用较多
抗生素生物利用度, 等效性 应用较少
分析方法建立的一般程序
色谱分析法为例
1. 色谱条件 的筛选
待测物,内标(必要时)的标准物质 色谱柱(填料),流动相,溶剂,进样量
2. 色谱条件 的优化
3. 实际样品 的测试
试剂/溶剂试验; 生物介质试验 质控样品试验
2. 体内药物分析的特点
(1) 样品需经纯化浓集, 或化学 衍生化处理 (2) 对分析方法的灵敏度及专属 性要求较高 (3) 分析工作量大, 数据处理和 结果阐明繁杂
1. 体内样品的种类
体液
血液;
唾液;脑脊液; 胃液;胆汁;乳 汁;精液;泪液
排泄物
尿液
组织
胃;肠;肝;肾; 肺,脑;肌肉; 头发
粪便; 汗液
重峰，有理由认为是相连的-CH2-CH2-, 考虑到其化学位移值，它 们应该连在酯基的氧原子上：
1H-NMR谱：d4.05和d2.45有两组相同裂分、相等积分面积的三
CH3
O C O CH2 CH2
这个结构也正好解释了d1.95 处单峰的来源，它是与羰基相连的 CH3的吸收信号。 位于dH 2.20处的单峰相当于6个H，其结构中应该有-(CH3)2