HPLC法测定自制止痒液中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

HP LC法测定自制止痒液中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量武警医学院附属医院药剂科　朱铁梁　张　莉①　郝素云②　(天津300162)关键词　反相高效液相色谱法　醋酸曲安奈德　氯霉素 止痒液是我院配制的院内制剂,主要含醋酸曲安奈德和氯霉素,用于治疗湿疹、痱子、痤疮等。

本文用RP-HP LC法同时测定止痒液中醋酸曲安奈德、氯霉素二组分含量,方法简便、快速、分离效果好,适合该制剂的质量控制。

1　仪器和试药111　仪器　SHI M ADZ U型色谱仪,LC-10AT vp泵,CT O-10ASvp柱箱,SPD-10Avp UV检测器,C-R8A积分仪。

112　药品与试剂　醋酸曲安奈德、氯霉素、地塞米松对照品(均由中国药品生物制品检定所提供)。

止痒液(本院制剂室配制):醋酸曲安奈德0106g/L,氯霉素215g/L,薄荷脑115g/L,冰片115g/L。

甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水。

2　方法和结果211　色谱条件　色谱柱:Shim-pack VP-ODS柱(416mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水(70∶30v/v);紫外检测波长:240nm;柱箱温度:50℃;积分仪:衰减(ATTE N)=6;纸速:2mm/min。

地塞米松为内标,进样量10μl。

在本文液相色谱分离条件下,当信噪比为2时,测得醋酸曲安奈德和氯霉素的最低检出量分别为2ng和10ng。

色谱图见图1。

图1　HP LC色谱图 11氯霉素 t R=2.4min 21地塞米松 t R=3.8min 31醋酸曲安奈德　t R=6.9min212　标准曲线建立　分别精密称取醋酸曲安奈德对照品150mg、氯霉素对照品200mg、地塞米松对照品100mg,各置1000ml量瓶中,以甲醇水(50∶50)溶解并稀释至刻度,制成对照储备液。

分别精密量取对照储备液适量,制成混合对照液,其中醋酸曲安奈德浓度为115,3,6,9,12mg/L,氯霉素浓度为50,100,200,300,400mg/L,内标地塞米松均为20mg/L,在选定的色谱条件下,10μl进样,以样品峰面积与内标峰面积比值A i/A内标(R)对药物浓度(C)进行回归运算,得醋酸曲安奈德线性方程:C(mg/L)=45.17R-2.08,r=0.9914(n =3),得氯霉素线性方程:C(mg/L)=96.33R-29.44,r=0. 9976(n=3),可见醋酸曲安奈德在115～12mg/L范围内,氯霉素在50～400mg/L范围内线性关系良好。

213　重现性考察　在上述色谱条件下取样品溶液1ml置10 ml量瓶中,精密加内标液2ml,用甲醇水(50∶50)稀释至刻度,摇匀,分别在日内的不同时间(0,2,4,6,8h)和日间(1,2, 3,4,5,6,7,8d)进样10μl,进行HP LC分析。

结果醋酸曲安奈德日内精密度为RS D=2129%(n=5),日间为RS D= 2145%(n=8);氯霉素日内精密度为RS D=1173%(n=5),日间为RS D=2109%(n=8)。

表明方法的重现性较好。

214　精密度实验　在上述色谱条件下取样品溶液置10ml 量瓶中,精密加内标液2ml,用甲醇水(50∶50)稀释至刻度,摇匀,取10μl进样,测得醋酸曲安奈德RS D=1108%(n=5),氯霉素RS D=01416%(n=5)。

表明方法的精密度良好。

215　加样回收率实验　精密量取已知确切含量的样品1ml 置10ml量瓶中,加入内标对照储备液2ml、醋酸曲安奈德对照储备液200μl、氯霉素对照储备液1ml,用甲醇水(50∶50)稀释至刻度,摇匀,过滤,取10μl进样,进行色谱分析,计算加样回收率。

结果:醋酸曲安奈德的平均回收率为103134% (RS D=2175%,n=5),氯霉素的平均回收率为102182% (RS D=2115%,n=5)。

216　样品含量测定　取止痒液样品3批,分别精密量取样品1ml,置10ml量瓶中,精密加内标液2ml,用甲醇水(50∶50)稀释至刻度,摇匀,过滤,进样10μl进行色谱分析。

结果见表1。

表1　样品含量测定结果(%; x±s)批号醋酸曲安奈德标示量RS D氯霉素标示量RS D 01042591.06±0.290.3298.80±0.480.4801060795.73±1.52 1.5998.87±0.080.08010725103.00±2.12 2.06102.11±0.680.66①②武警医学院附属医院内一科武警医学院药剂学教研室3　讨论311　检测波长的选择　醋酸曲安奈德、地塞米松在240nm 处有最大吸收,氯霉素的最大吸收值在278nm处,而氯霉素在240nm处恰有最小吸收1,2,但由于处方中醋酸曲安奈德(0106g/L)、氯霉素(215g/L)含量差异较大,为了提高醋酸曲安奈德的检测灵敏度,实验选择240nm作为测定波长。

本文曾试用多种物质作为内标物,但在本实验色谱条件下,选用地塞米松的分离效果最好。

312　流动相流速变化对主成分t R的影响　流速为2ml/min 时,t R缩短,内标峰、样品峰基线分离不好。

流速为015ml/ min时,t R延长,内标和被测物的峰形、分离度与1ml/min时差异不显著,但考虑到样品快速检测的需要选择流速为1 ml/min,内标和被测物的峰形、分离度好,因此t R较为适宜。

313　流动相的选择　中国药典(2000年版)规定醋酸曲安奈德用HP LC法测定含量,其流动相为甲醇-水-乙醚体系,流动相在配制和使用过程中为保证组成和分析结果的稳定,需防止乙醚挥发,且操作要求较高,夏季高温时节难使测定条件保持一致。

我们曾尝试用甲醇-磷酸盐缓冲液做流动相,但分离效果不好。

通过研究甲醇-水体系不同配比为流动相的分离情况,最后选定以甲醇-水(70∶30v/v)为流动相。

在本实验条件下,两组分与内标物的峰形尖锐,分离效果好,保留时间短。

中国药典(2000年版)将氯霉素的含量测定规定为紫外分光光度法、抗生素微生物效价测定法,而HP LC的应用,使氯霉素复方制剂的定量分析方法更加灵敏、快捷、简便和精确,可同时用于鉴别试验,含量测定以及杂质检查,具有一法多用的特点。

4　参考文献1　国家药典委员会1中华人民共和国药典(二部)1北京:化学工业出版社,20001221～10212　雷嘉川,罗顺德,周　健等1复方醋酸泼尼松搽剂的HP LC测定1广东药学院学报,1997,13(2):122～123(2002-01-10收稿,责任编辑　梁秋野)苦参素治疗慢性乙型肝炎40例临床分析武警上海总队医院传染科　黄祝青　龚守军　孙永年　徐　斌　韩丽红　(上海201103)关键词　苦参素　乙型病毒性肝炎 苦参素主要成分为氧化苦参碱(占98%),是从植物中药苦豆子的苦参根中提取出的生物碱。

在临床上具有免疫调节、保护肝细胞及抗病毒等作用。

本文通过应用苦参素治疗40例慢性乙型肝炎(CH B)患者,观察其症状、体征、生化及乙肝标志物等指标的变化,以进一步评价其临床疗效。

1　材料和方法111　一般资料　66例病例均为我科住院或门诊患者,治疗时间为1998年1月～1999年8月间。

治疗组40例,男26例,女14例,平均年龄34岁。

对照组26例,男16例,女10例,平均年龄31岁。

病程均1～5a,均符合1995年5月北京传染病与寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准1。

治疗前H BsAg、H BeAg、抗H Bc3项及H BV-DNA均为阳性, A LT>100U/L。

且未用抗病毒治疗或免疫调节药物,排除重叠感染者。

两组病例具有可比性。

112　治疗方法　治疗组给予苦参素(宁夏制药厂生产)400 mg肌注,1次/d,并加用一般护肝药物,疗程3个月。

对照组仅给予一般护肝药物治疗。

113　观察指标　症状、体征变化和用药后不良反应,治疗前后每半月检查肝功能、血常规等生化指标(K one全自动生化检测仪检测),每3个月检测血清乙肝病毒标志物H BsAg、H BeAg、抗-H Bc(上海实业科华生物技术有限公司提供试剂,酶免疫法)和H BV-DNA(中山医科大学生物技术研究所提供试剂,荧光定量PCR法)及肝纤维化指标透明质酸(H A)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)(上海海军医学研究所提供试剂,放射免疫法)。

114　统计学处理　采用两样本 x±s比较的t检验和两样本率比较的u检验。

2　结果211　治疗前后H BeAg、H BV-DNA变化比较　治疗组与对照组在疗程结束时,H BeAg转阴率各为4215%与1115%,H BV -DNA转阴率各为4715%与1514%。

停药1a后H BeAg持续转阴率各为3215%与717%,H BV-DNA持续转阴率各为3510%与1115%,两组比较差异有显著性意义(P<0105)。

见表1。

212　治疗前后A LT比较　两组患者经治疗后A LT均明显下降。

治疗组3个月及1a后A LT复常率为7510%和6510%,而对照组治疗3个月及1a后的复常率为7311%和5118%。

两者差异无显著性意义(P>0105)。

见表2。

213　治疗前后H A、PCⅢ的变化　在治疗3个月后,治疗组H A、PCⅢ水平较前显著下降(P<0101)。

而对照组患者H A、PCⅢ水平治疗前后无显著差异(P>0105)。

见表3。