荧光定量PCR在疟疾实验室诊断中的应用_李素华
荧光定量PCR技术在医学检测中的应用研究
荧光定量PCR技术在医学检测中的应用研究一、引言PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种能够扩增DNA 分子序列的技术，广泛应用于医学诊断、环境监测、生物学研究等领域。
其中，荧光定量PCR技术作为PCR技术的一种变种，具有高灵敏度、高特异性和高准确度等优点，在医学检测中得到广泛应用。
二、荧光定量PCR技术原理荧光定量PCR技术是一种基于荧光探针检测PCR扩增产物的技术。
当PCR反应进行到合成新链阶段时，荧光探针与PCR产物结合，导致荧光信号的释放。
通过检测反应体系中的荧光信号强度，可以确定模板DNA的初始数量和扩增情况。
具体而言，荧光定量PCR技术分为两类。
一类是多重实时荧光定量PCR技术（Real-time PCR），它可以同时检测多个抗原或位点，具有高通量、高速度和高灵敏度等特点。
另一类是数字PCR 技术（Digital PCR），它则可以对DNA分子进行分子计数，具有更高的准确性和可靠性。
三、荧光定量PCR技术在医学检测中的应用1. 检测病原体荧光定量PCR技术可以快速、准确地检测病原体，例如呼吸道病毒、肠病毒、流感病毒等。
采用多重实时荧光定量PCR技术可以实现多个病原体的同时检测，对于快速诊断和治疗有着重要意义。
2. 遗传疾病诊断荧光定量PCR技术可以对基因突变进行检测，为遗传疾病的早期诊断和治疗提供了有效手段。
例如，使用荧光定量PCR技术可以检测肌萎缩侧索硬化症相关基因的突变，为临床医学提供重要的参考数据。
3. 检测癌症荧光定量PCR技术可以检测肿瘤标志物，并对肿瘤进行定量分析。
例如，在乳腺癌的筛查中，可以采用荧光定量PCR技术检测乳腺癌相关基因的表达情况，为肿瘤的早期诊断和治疗提供参考数据。
4. 检测基因表达荧光定量PCR技术可以对基因表达进行定量检测，为研究基因功能及表达调控提供了有效手段。
例如，在研究心脏病发病机制中，可以采用荧光定量PCR技术检测心脏病相关基因的表达情况，从而揭示其发病机制。
疟疾的实时荧光PCR快速检测方法
状体区分开， 虫种 鉴 别 较 难， 容易 出 现 误 诊， 并 只 按 单 一疟 原 虫感染进行治疗; 输入性的卵 形 疟 和 三 日疟 在 国 内较 少 见， 准 确 鉴 别 有 难 度 。因 此 ， 准 确 的 诊断 和鉴定 疟 原 虫 种 对 疟疾 防 治具有重要的实用意义。 最近国内外开始将实时荧光 PCR 技术应用于 疟疾 的 快速 ， 它 能 在 短 时 间 内 判 断 疑似 病 例 或 可 疑 媒 介 是否感染疟疾或携带疟原虫， 及 时 采 取 必 要 的 防 控 措 施， 防止 检测 和 分型
［1 ］ 镜检难以查到原虫， 容易出现 漏 诊 ; 当 发 生 疟 原 虫 混 合感 染 时， 镜检不易将恶 性 疟 的 环 状 体 或 早 期 滋 养 体 与 间 日疟 的 环
该传染病疫情在国境口岸的 传 入 和 传 出， 为 早 期 筛查、 快速 诊 断、 有效监测和 控 制 疾 病的 发 生 和 传 播 提 供 支 持 和 依据。 本 文根据疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸( SSU rRNA) 基因序列 ［6 ］ 的高度保守性 ， 建立了疟疾的通用型实时荧光 PCR 方法， 对 60 例血样进行了检测， 并比较 了 该 方法 同 镜检 和 巢 式 PCR 间 的敏感性和阳性检出率。 1 1． 1 材料与方法
中国卫生检验杂志 2011 年 3 月 第 21 卷 第 3 期
Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Mar 2011 ; Vol 21
No 3
625
【微生物检测方法】
疟疾 的实 时荧 光 PCR 快速 检 测方法
师永霞， 苏锦坤， 洪烨， 李小波， 郑夔， 黄吉城， 幸检疫技术中心， 广州 510700 ) ［ 摘要］ 目的: 建立疟疾的实时荧光 PCR 检测方法并 用 于 疟疾 的 快速 检测。 方法: 设 计 了 疟 原 虫 通 用 型 实 时 荧光 PCR 检测的引物和探针， 建立了疟疾的实时荧光 PCR 检测方法。对 40 份 疟疾 镜检 阳 性 样 本 和 20 份 镜检 阴 性 样 本 进 行 实 时 20 分 钟 即 可 完 成。40 荧光 PCR 检测， 并和巢式 PCR 方法检测结果进行了比较。 结 果: 疟疾 实 时 荧光 PCR 检测 速 度 快， PCR 2 PCR ; 20 份镜检阳性样本的荧光 检测均为阳性， 份样本的 巢 式 结果为阴性 份 镜检 阴 性 样 本 中 有 3 份 样 本 为 实 时 荧光 PCR 阳性， 其余 17 份样本为实时荧光 PCR 阴性， 与疟疾巢式 PCR 检测结果相同。结论: 该 实 时 荧光 PCR 方法检测 速度 快 ， 特异性强， 准确性高， 阳性率高， 不易漏检， 适用于疟疾的快速检验， 这对防止 该 病在 国 境 口 岸 的 传 入 提 供了 技术 依据。 ［ 关键词］ 疟疾; 小亚单位核糖体核糖核酸; 实时荧光 PCR; 巢式 PCR ［ ［ ［ 中图分类号］ R531． 3 文献标识码］ A 文章编号］ 1004 － 8685 ( 2011 ) 03 － 0625 － 03
荧光定量PCR技术在基因诊断中的应用
荧光定量PCR技术在基因诊断中的应用随着科学技术的发展，越来越多的医学领域应用到PCR技术。
其中，荧光定量PCR技术（qPCR）是一种常用的PCR技术。
它的特点是可以在反应过程中实时监测PCR产物的数量，从而实现对异物DNA定量测量及扩增效率、扩增特异性的监测，使得荧光定量PCR技术在基因诊断中得到广泛的应用。
一、荧光定量PCR技术原理荧光定量PCR技术是一种使用一种实时检测方法来测定DNA放大的产物的数量的PCR技术。
其原理是在每次放大后添加一种特定标记物，并通过实时检测PCR产物的数量来计算最初所拥有的基因或片段的数量。
使用荧光定量PCR技术，可以在反应中实时测量细胞核酸（DNA或RNA）的数量或浓度，可以将反应分为两个不同的阶段：指数和平台阶段。
在指数阶段，PCR产物的数量随着反应温度的增加而指数倍增长。
在平台阶段，PCR放大反应逐渐停滞，达到反应容量的极限。
在该技术中，所添加的标记物是一种特定的DNA染料或荧光探针，它能够与合成的PCR产物结合，从而表现出一定的荧光强度，并实现对PCR产物进行实时检测。
当PCR产物数量达到一定浓度时，检测到的荧光信号就比较高。
通过测定荧光强度的变化来确定PCR产物和细胞核酸模板的数量。
二、荧光定量PCR技术在基因诊断领域中的应用非常广泛。
下面我们就来简单介绍一下。
1. 重复序列测定多种人类遗传疾病与重复序列的变异有关。
细胞中有两种类型的DNA序列：核糖核酸基因（编码蛋白质的基因）和非编码DNA（其他DNA序列）。
其中，许多非编码DNA包括了高度重复的DNA序列。
荧光定量PCR技术可以从DNA样本中分离出重复序列并测量它们的数量。
通过这种方法，可以检测出多种与重复序列变异相关的疾病，如肌萎缩性侧索硬化症等。
2. 微生物检测荧光定量PCR技术可以用于检测微生物。
比如，在糖尿病、肿瘤等临床诊断中，常常需要进行微生物感染的检测。
通过荧光定量PCR技术可以检测到微生物DNA，从而实现对微生物感染的快速、准确检测。
荧光定量PCR技术在医学诊断中的应用
荧光定量PCR技术在医学诊断中的应用PCR(聚合酶链式反应)技术的发明极大的推动了现代生物医学领域的进展，而荧光定量PCR技术则更是在基因检测和药物筛选领域中得到了广泛应用。
PCR技术是一种通过体外放大目标DNA序列的技术，而荧光定量PCR技术则可以通过荧光检测放大的DNA序列的数量，还可以通过正常化和标准曲线等方法来精确测量。
因此，荧光定量PCR技术被广泛用于医学诊断、药物研究、环境监测和生物学研究领域。
本文将重点讨论荧光定量PCR技术在医学诊断中的应用。
一、概述PCR技术已成为当前医学诊断中常用的一种技术。
通过使用PCR技术，可以在短时间内从临床样本中检测出病原体和基因突变等。
由于PCR技术所放大的DNA序列数量极少，因此常常无法直接检测PCR产物。
为解决这个问题，荧光定量PCR技术应运而生。
荧光定量PCR技术可以通过荧光检测来定量放大目标DNA 序列的数量。
荧光分子与PCR产物结合后，会发出一个荧光信号，荧光信号越强，说明PCR产物数量越多。
二、应用1、基因突变检测荧光定量PCR技术可以在临床检测中用于筛选基因突变。
这对于诸如肿瘤等疾病的早期和准确检测非常重要。
荧光定量PCR技术可以用于检测各种基因变异，如单核苷酸多态性(SNPs)、缺失和插入突变等。
此外，荧光定量PCR技术还可以用于检测病原体基因突变，以便为疾病的诊断和治疗提供有力支持。
2、病毒和微生物检测荧光定量PCR技术也可以用于病毒和微生物的快速筛查和定量测量。
病毒和微生物数量通常非常少，因此需要进行放大和测量。
荧光定量PCR技术可以测量不同生物体系中的某些基因序列的RNA/DNA量，从而快速确定病原体存在与否。
此外，荧光定量PCR技术还可以确定微生物和病毒载量，这为疾病治疗和公共卫生方面的决策提供了有效的支持。
3、肿瘤标志物检测荧光定量PCR技术也可以用于检测肿瘤标志物。
肿瘤标志物是一种体内指示肿瘤存在的分子标志物。
荧光定量PCR技术可以用于检测这些标志物，可以更敏感和精确地检测肿瘤，从而提高了诊断和治疗的准确性和追踪效果。
荧光定量pcr技术的临床应用
疗效评估与预后判
断
通过荧光定量PCR技术，可以监 测肿瘤在治疗过程中的变化情况， 评估治疗效果和预测预后。
遗传性疾病检测
单基因遗传病检测
荧光定量PCR技术的临床 应用
• 荧光定量PCR技术概述 • 荧光定量PCR的临床应用 • 荧光定量PCR技术的优势与局限性 • 荧光定量PCR技术的实验操作流程 • 荧光定量PCR技术的质量控制与标准
化 • 荧光定量PCR技术在临床研究中的应
用案例
01
荧光定量PCR技术概述
定义与原理
定义
荧光定量PCR技术是一种在PCR 反应过程中，通过荧光信号的实 时监测，对DNA或RNA进行定量 分析的方法。
化
实验室设计与布局
实验室分区
根据实验需求，将实验室划分为试剂准备区、样品处理区、 扩增区和产物分析区，各区域之间应有物理隔离和明确的标 识。
实验室环境
实验室应保持清洁、干燥，温度和湿度应控制在适宜范围内 ，定期进行环境监测和消毒。
仪器设备与试剂选择
仪器设备
选择性能稳定、精度高、易于操作的荧光定量PCR仪，定期进行仪器校准和维护。
自动化程度高
随着技术的发展，荧光定量 PCR已经实现了自动化，提高
了检测效率和准确性。
局限性
成本较高
对操作人员要求高
荧光定量PCR技术需要特定的仪器和试剂， 成本相对较高，限制了其在一些基层医疗 单位的应用。
荧光定量PCR技术需要专业的操作人员，对 实验条件和操作过程要求较高，否则会影 响结果的准确性和可靠性。
VS
荧光定量pcr技术及在动物疫病检测中的应用
荧光定量pcr技术及在动物疫病检测中的应用
荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR，RT-PCR）是一种实时监测DNA及RNA扩增
过程并量化扩增产物，这种反应把一种无荧光探针或荧光标记后的探针添加到反应组分中，同时，该探针会特异性结合样品中的特性序列，从而实现荧光信号的产生。
当扩增的反应
产物的数量与样品的终末浓度呈正比时，荧光定量聚合酶链反应就可以推断出样品中特异
性序列的存在性。
荧光定量PCR技术由聚合酶链反应（PCR）和荧光定量技术结合而成，可用于快速，
准确，灵敏地检测动物DNA及RNA水平，尤其是病原体检测，比如病毒、细菌及其他微生
物等。
目前荧光定量PCR技术被广泛应用于动物疫病检测，其核心技术是根据病原体的特性
序列选择特异性探针，在设计制备的PCR 试剂盒中添加其它必要成分，在特定的温度及时间范围内反复扩增，其最终结果可以在实验过程及最后结果中反映出，能够更精确的检测
到一些低检出限的病原体，有效提高检测速度和准确性。
荧光定量PCR技术在动物疫病检测中有以下优点：1.检测灵敏度高，能够以少量样品
快速、准确检测出病原体定量；2.试剂、耗材及仪器成本低廉，可有效节约检测成本；3.
可以同时实现多项检测，样品及检测条件敏感；4.实时荧光反应可以直接在PCR反应完
成时监测样品中扩增片段的变化。
总之，荧光定量聚合酶链反应技术已经成功的应用于动物疫病检测，其良好的检测性能，低廉的成本，实用性强及可靠性，使其在动物疫病领域中地位日益显著。
荧光定量PCR技术在生物医学领域中的应用分析
荧光定量PCR技术在生物医学领域中的应用分析引言PCR技术是现代生命科学领域中的重要技术之一，广泛应用于医学和生物学领域。
荧光定量PCR技术是一种新型的PCR技术，比传统PCR技术更精确，灵敏，可靠，并且能够定量表达目标基因。
本文将主要着重探讨荧光定量PCR技术在生物医学领域中的应用现状和未来发展。
第一章荧光定量PCR技术简介1.1 PCR技术的概述PCR技术是一种用于体外扩增特定DNA片段的技术。
PCR技术的基本原理是基于DNA的复制机制，即在DNA双链分离的基础上，引物与模板DNA互补配对，并通过核酸酶的催化作用将两个引物延长成同向的链，从而扩增出目标DNA片段。
1.2 荧光定量PCR技术的优劣势与传统PCR技术相比，荧光定量PCR技术具有以下优点：（1）更高的灵敏度：荧光定量PCR技术的基本原理是利用荧光标记的探针对扩增出的目标DNA进行实时检测，比传统PCR技术更具有灵敏度。
（2）更高的特异性：荧光定量PCR技术的末端探针可以设计为具有序列特异性，因此能够避免非特异性扩增产物的干扰。
（3）更高的精度：荧光定量PCR技术的实时检测和定量效果更好，能够更准确地定量目标基因的表达水平。
（4）更快的实验速度：荧光定量PCR技术的扩增过程能够在较短时间内进行，并且不需要后续步骤，因此可以更快地获取结果。
1.3 荧光定量PCR技术的基本原理荧光定量PCR技术的基本原理是利用一个荧光标记的探针，该探针上有一个荧光发射器和一个荧光信号抑制器。
在扩增反应中，荧光探针会与模板DNA的目标序列互补结合，核酸酶会将探针切割，并释放出荧光发射器，导致荧光信号的释放。
荧光信号的数量取决于扩增出的DNA的数量，因此能够实时监测扩增反应，并给出精确的定量结果。
第二章荧光定量PCR技术在生物医学领域的应用2.1 荧光定量PCR技术在基因表达研究中的应用荧光定量PCR技术在基因表达研究中的应用非常广泛。
例如，使用荧光定量PCR技术可以定量表达不同类型的基因在不同细胞和组织类型中的表达水平，寻找不同基因的表达模式，分析基因调控机制等。
荧光定量pcr实验原理与应用
荧光定量pcr实验原理与应用荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种基于PCR技术的一种变种，它利用荧光探针实现对PCR产物的定量检测。
荧光定量PCR结合了PCR扩增和实时荧光检测技术，能够快速、准确地检测目标DNA的含量。
本文将介绍荧光定量PCR的原理及其在科研和临床应用中的重要性。
一、荧光定量PCR的原理荧光定量PCR的原理基本与常规PCR相似，也包括三个步骤：变性、退火和延伸。
其区别在于，在PCR反应体系中加入了含有荧光素的探针，这些探针与目标DNA序列特异性结合，并在PCR反应中被DNA聚合酶酶切，导致荧光信号的释放。
在PCR反应进行过程中，荧光信号与PCR产物量成正比，通过检测荧光信号的强度，可以实时监测PCR反应的进程，从而实现对目标DNA的定量检测。
荧光定量PCR可以通过不同的荧光探针来检测多个靶标，实现多重PCR检测。
二、荧光定量PCR的应用1. 病原微生物检测：荧光定量PCR广泛应用于病原微生物的检测，包括细菌、病毒、真菌等。
通过荧光定量PCR技术，可以实现对微生物的快速、准确的检测，有助于早期诊断和治疗。
2. 癌症诊断：荧光定量PCR可用于癌症早期筛查和诊断。
通过检测癌基因的表达水平，可以帮助医生判断肿瘤的类型、分级和预后，指导个体化治疗方案。
3. 遗传病检测：荧光定量PCR可用于遗传病的基因检测。
通过对患者DNA样本进行荧光定量PCR分析，可以准确检测遗传突变，帮助家庭规划和遗传咨询。
4. 食品安全监测：荧光定量PCR可以用于食品中致病微生物和转基因成分的检测。
通过对食品样品中目标DNA的定量检测，可以确保食品安全，保障公众健康。
5. 环境微生物监测：荧光定量PCR可用于环境微生物的监测和鉴定。
通过对环境样品中微生物的定量检测，可以了解微生物种类和数量，指导环境保护和生态恢复工作。
荧光定量PCR作为一种高灵敏、高特异性的分子生物学技术，在医学、生物学、食品安全和环境科学等领域发挥着重要作用。
医学检验技术专业优秀毕业论文范本荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究
医学检验技术专业优秀毕业论文范本荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究在医学检验技术专业中，荧光定量PCR技术被广泛应用于病原微生物的检测。
本文将探讨荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用，并提供一份优秀毕业论文范本供参考。
一、引言随着医学科技的不断进步，病原微生物的准确检测对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。
荧光定量PCR技术作为一种高灵敏度、高特异性的检测方法，被广泛应用于病原微生物的快速检测和定量分析。
二、荧光定量PCR技术概述荧光定量PCR技术是PCR技术的一种改进和升级，它结合了PCR扩增和荧光探针技术的优势。
通过引入特定的荧光探针，可以实现对PCR产物的实时监测和定量分析，从而提高了检测的准确性和灵敏度。
三、荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究1. 病原微生物的筛查和鉴定荧光定量PCR技术可以通过引入特定的引物和探针，快速筛查和鉴定病原微生物。
例如，在流行病学调查中，可以利用荧光定量PCR技术迅速检测出特定的病原微生物，并对其进行定量分析，为后续的疫情防控提供科学依据。
2. 药物耐药基因的检测病原微生物的耐药性是制约抗生素治疗疗效的重要因素。
荧光定量PCR技术可以检测和定量分析病原微生物耐药基因的存在和表达水平，从而为制定个体化的治疗方案提供重要参考。
3. 感染病的早期诊断许多感染疾病在早期症状不明显，传统的检测方法往往需要较长时间才能得出结果。
而荧光定量PCR技术具有高灵敏度和快速性的优势，可以在早期对患者进行感染病的检测和诊断，有助于及时采取有效的治疗措施。
四、结论荧光定量PCR技术作为一种高灵敏度、高特异性的检测方法，在病原微生物的检测中具有广泛的应用前景。
其在筛查和鉴定病原微生物、检测药物耐药基因和早期诊断感染病等方面表现出巨大的优势，为疾病的预防和治疗提供了重要的支持和依据。
附：医学检验技术专业优秀毕业论文范本论文题目：荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究摘要：本研究旨在探索荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用，并通过实验验证了其在病原微生物鉴定和药物耐药基因检测方面的准确性和可行性。
实时荧光定量PCR技术理论研究及其在医学方面的应用
实时荧光定量PCR技术理论研究及其在医学方面的应用
兰静;李秋根
【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2011(051)010
【摘要】实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)是在传统PCR定性技术基础上发展起来的核定量技术.它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.该技术与传统PCR技术相比,不仅实现了对DNA模板的定量,具有更高特异性和可靠性,而且灵敏度高、重复性好、定量准确、自动化程度高、全封闭反应、无污染性、具实时性和准确性等特点,目前已广泛应用于分子生物学研究和医学研究等领域[1].
【总页数】4页(P97-100)
【作者】兰静;李秋根
【作者单位】南昌大学研究生院医学部2010级;江西省人民医院呼吸内科,南昌330006
【正文语种】中文
【中图分类】R446.9
【相关文献】
1.实时荧光定量RT-PCR技术在疾病相关mRNA定量检测方面的应用进展 [J], 刘永萍;凌扬
2.在医学检验中应用实时荧光定量PCR技术的研究进展 [J], 王林
3.实时荧光定量PCR技术研究及其在医学领域的应用 [J], 鲍鑫;刘向国;刘茜
4.实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用 [J], 刘小荣;张笠;王勇平
5.实时荧光定量PCR技术理论研究及其在医学方面的应用 [J], 兰静;李秋根
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荧光定量pcr实验原理与应用
荧光定量PCR实验原理与应用一、引言荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR），是一种高灵敏、高特异性的基因定量技术。
它通过检测PCR反应过程中产生的荧光信号，可以快速、准确地测量目标DNA的数量。
荧光定量PCR不仅可以用于基因表达分析、突变检测等生物学研究，还在医学诊断、农业育种等领域得到了广泛应用。
二、原理荧光定量PCR基于传统PCR技术，结合了荧光探针技术，能够实时监测PCR反应过程中荧光信号的累积。
在PCR反应中，DNA模板经过多轮的变性、退火和延伸，产生指数级增加的目标DNA片段。
而将荧光探针引入PCR反应体系中，该探针由一个互补于模板DNA的序列和一个荧光物质构成。
在延伸过程中，荧光探针被3’-5’外切酶降解，导致荧光信号的释放。
通过荧光信号的监测，即可获得PCR反应过程中目标DNA的相对数量。
三、实验步骤荧光定量PCR实验通常包括以下几个步骤：1. DNA提取首先需要从样本中提取目标DNA。
DNA提取方法根据样本的来源，可以采用不同的方法，如酚-氯仿法、盐析法、商用DNA提取试剂盒等。
2. PCR反应体系准备根据实验设计确定PCR反应所需的试剂和体积。
PCR反应体系通常包括模板DNA、引物、荧光探针、核酸酶、聚合酶等。
其中，引物用于定义PCR扩增区域，荧光探针用于监测PCR反应过程中产生的荧光信号。
3. qPCR仪设置将PCR反应体系加载到qPCR仪中，设置PCR反应的温度和周期参数。
qPCR仪通过控制温度，实现PCR反应的变性、退火和延伸过程，并监测PCR反应过程中的荧光信号。
4. PCR反应进行将PCR反应体系置于qPCR仪中，开始PCR反应。
qPCR仪会根据设定的温度和周期参数依次进行PCR反应。
在反应过程中，qPCR仪会实时监测PCR反应体系中的荧光信号，并将信号数据输出。
5. 数据分析通过数据分析软件对荧光信号进行处理，得到PCR曲线和相应的荧光阈值。
荧光定量PCR技术在临床检测中的应用
PCR循环
PCR循环次数与DNA产量关系
循环次数 1 21 DNA的链数 2
2
3 10 20 30
22
23 210 220 230
4
8 1024 1,048,576 1,073,741,824 10亿
PCR特点：高效扩增、忠实复制
PCR反应的特点
• • • • • 灵敏度高 快捷 简便 对样品纯度要求低 可以相对定量
HBV感染与干扰素治疗 治疗中：
a: 病毒复制水平迅速降低者，有望治愈。 b: 相反，治疗期间HBV DNA复制水平下降较慢， 或下降幅度较小，或者变化不明显者，大多是 干扰素治疗无效。
•HBV感染与干扰素治疗 治疗后：
• a: 治疗结束后，采用PCR定量法检测，HBV DNA <103 copy/ml 者，可能不再复发。 b: 终止治疗后HBV DNA 仍保持较低水平者，
FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不 反应体内病毒复制水平与感染程度。
HBV
（二） HBV-DNA与“两对半”
3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋) HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
HBV
(三)
HBV-DNA定量检测的临床意义
4. HBV-DNA定量有助于指导怀孕与孕期，哺乳期检查 5. 肝脏移植与HBV-DNA
Mazzaferro等报告：< 103copy /ml 无一例再发肝炎 >105copy /ml 发生了严重HBV再感染
6. 血液制品和献血员的筛选
荧光定量PCR技术在疾病诊断中的应用
荧光定量PCR技术在疾病诊断中的应用随着生物技术的不断发展，PCR技术在临床诊断中的应用越来越广泛。
而荧光定量PCR技术作为PCR技术的一种变种，在疾病诊断中发挥着越来越重要的作用。
本文将从介绍PCR技术和荧光定量PCR技术的基本原理开始，探讨荧光定量PCR技术在疾病诊断中的应用，并展望其未来的发展趋势。
一、PCR技术和荧光定量PCR技术的基本原理PCR技术是一种体外扩增DNA分子的技术，其原理是通过特定引物将DNA序列进行反复复制，从而产生大量的DNA分子。
PCR技术的基本步骤包括：DNA模板的退火和变性、引物的结合、DNA链延伸和复制。
与传统的PCR技术相比，荧光定量PCR技术则是在PCR反应过程中添加荧光探针，通过探针与PCR扩增过程中生成的DNA结合，从而实现DNA产物的荧光定量检测。
二、荧光定量PCR技术广泛应用于疾病诊断领域中。
其优点在于，能够高敏感、高特异地检测病原体DNA分子，并且具有快速、准确、可靠的检测结果。
下面我们将介绍荧光定量PCR技术在不同疾病领域中的应用。
1. 感染病诊断荧光定量PCR技术在感染病诊断中的应用十分广泛。
例如，对于肺结核的诊断，荧光定量PCR技术能够快速准确地检测病原体菌株，从而确定肺结核感染的存在。
此外，荧光定量PCR技术还能够检测人乳头瘤病毒（HPV）等多种病原体，从而实现这些病原体的分子诊断和治疗。
2. 癌症诊断荧光定量PCR技术还被广泛应用于癌症诊断领域。
例如，荧光定量PCR技术可以检测肝癌、肺癌、乳腺癌和直肠癌等多种癌症的细胞标志物。
同时，荧光定量PCR技术还可以检测多种与癌症相关的基因突变和表达水平的变化。
3. 遗传性疾病诊断荧光定量PCR技术不仅在感染病和癌症领域中发挥着重要作用，在遗传性疾病诊断中也有着广泛的应用。
例如，针对囊性纤维化这种遗传性疾病，荧光定量PCR技术可以进行基因突变的检测，从而帮助医生制定相应的治疗方案。
三、荧光定量PCR技术未来的发展趋势随着生物技术的不断发展，荧光定量PCR技术也将得到广泛应用，并不断完善。
荧光定量PCR技术在疟疾诊断中的应用
Ｄ ｐ ｒ ｅｔｏ ｌ ｉ ｌＬ ｂｒｔｙ ｅ ｎ ｔｎＨ ｓｉ ｌ ａ ｉｌＭｅｉ ｌＵ ｉ ｒｔ，Ｂ ｉｎ ０ ０ ５ ｅａｔ ｎ ｆ Ｃｉ ｃ ａ ｏ ｏ ，Ｂ ｉ Ｄｉ ｏ ｔ ，Ｃ ｐｔ ｄ ａ ｎｖ ｓｙ ｅ ｇ １０ １ ， ｍ ｎａ ａｒ ｆ ｇ ａ ｐａ ａ ｃ ｅｉ
焦炳 欣 郭杰 陈志 海 李兴 旺 杨 晓玲 何 艳群 周淳 周茹 华 文浩
【 摘要 】 目的 探讨荧光定 量 Ｐ Ｒ技术在疟疾诊断 中的临床应用价值 。方法 收集本 院 ２１ Ｃ ００
年１ 月至 ２ １ ０ ２年 ３月疑似疟疾患者 的血样共 ６ ７份和健康人血样 ２ Ｏ份 ， 采用荧光定量 Ｐ Ｒ法进行疟 Ｃ 原 虫检测 ， 并与镜检法和胶体金 免疫层析法 的敏感性和特异性进行对 比分析 。对临床确诊 的 ２ ０例疟 疾 患者在抗疟药 治疗前后 的虫体 密度与 ３种 方法检 测的疟原 虫结果进 行对 比分析 。结 果 ６ ７份 患 者血样用荧光定量 Ｐ Ｒ法 、 Ｃ 镜检法和胶体金免疫层析法检测的疟原虫阳性 率 ， 分别 为 ６ ． ％ 、６ ７ ２７ ５．％ 和 ５ ．％ ， ２２ 差异无 统计 学意义（ Ｐ＝０ ４ １ 。３ 方法 检测 ２ ．７ ） 种 ０份健 康人 血样结果 均为疟原 虫 阴性 ， 特 异 性为 １０ ０ ％。荧 光定 量 Ｐ Ｒ检测 结果 与镜 检虫体密度呈直线相关 （ ＝０９ ８Ｐ＝０ ０ ２ 。原虫血 Ｃ ｒ ．５ ， ．４ ） 症 较高水平 时 ３种方法 的检测结果差异无统计学意义 （ Ｐ＞０ ０ ） 在药 物治疗后原虫 血症较低水 平 ．５ ；
荧光定量PCR在临床医学中的应用
HBsAg和抗HBs同时阳性：
01
窗口期
02
检测试剂不够灵敏
03
隐匿性慢性乙肝（S基因变异）
04
重叠HCV感染（干扰HBsAg合成）
为什么HBsAg阴性不能排除HBV感染？
抗HBs阳性就万无一失了吗？
单一抗HBs阳性HBV DNA检出率0-11.8% 先后感染了不同的HBV亚型 HBV病毒S基因变异
03
取材范围广：血清、痰液、体液、毛发等多种样本
04
全封闭反应：无需PCR后处理，降低污染
05
定量准确：利用标准曲线法，采用对数期分析
06
自动化程度高：操作安全，避免人为判断
07
荧光定量PCR技术的优点
Roche LightCycler
病毒性肝炎（HBV、HBV-YMDD、HCV）的基因检测
1
1
荧光染料：SYBR Green I、EVA Green 荧光探针：TaqMan、 Hybridization Probes 、Molecular Beacon
2
荧光定量PCR技术
特异性强：直接扩增病原体的特异DNA或异常基因片段
01
灵敏度高：可检测到极少量的DNA，有效降低漏诊率
02
高效省时：扩增周期短，有利于快速诊断
对症状轻者或无症状的淋球菌感染者做到早期诊断和鉴别诊断
可用于疗效考核
对女性疑似淋球菌引起的各种炎症的诊断及鉴别诊断起决定性作用
可在短时间内快速、准确地直接从临床各种标本中检出含量极低的病原菌
荧光定量PCR检测NG的优势
沙眼衣原体
近年来在欧美等国，沙眼衣原体的感染率和危害性已超过淋球菌
实时荧光定量PCR技术在传染病诊断中的应用
实时荧光定量PCR技术在传染病诊断中的应用实时荧光定量PCR技术（Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction，简称qPCR）是一种高灵敏、高特异的核酸检测技术，在传染病的早期诊断、病原体监测和药物研发中具有广泛的应用前景。
本文将重点探讨qPCR技术在传染病诊断中的应用，并简要介绍其原理和优势。
一、qPCR技术原理qPCR技术基于传统的聚合酶链反应（PCR），通过在PCR过程中引入荧光探针或染料来实时检测PCR反应体系中的DNA扩增产物。
其主要原理包括：1. 反应基质的选择：选择合适的DNA或RNA提取方法，从患者样本中纯化并提取目标核酸。
2. 引物和探针设计：合理设计引物和探针，确保其与目标序列高度特异性结合。
3. 扩增和探针结合：通过PCR反应，扩增目标序列的数量，并使探针与目标序列结合。
4. 荧光信号检测：在PCR反应中，使用特定仪器检测并记录荧光信号的变化，从而实时监测扩增过程。
5. 数据分析：根据荧光信号的变化可以计算出目标序列的起始含量，并通过计算机软件进行数据分析和结果解读。
二、qPCR技术在传染病诊断中的应用qPCR技术在传染病诊断中具有以下几个方面的应用价值：1. 早期诊断：qPCR技术具有高灵敏度和特异性，能够在症状出现之前检测出目标病原体的核酸，从而实现早期诊断。
例如，在流行性感冒的早期诊断中，可通过qPCR技术快速检测出流感病毒的核酸，对患者及时采取措施，避免疾病的进一步传播。
2. 病原体监测：qPCR技术能够准确检测低浓度的病原体核酸，对传染病的发生和传播进行监测。
例如，在疫情暴发期间，通过qPCR技术可以迅速筛查患者样本中的病原体，并及时采取隔离和治疗措施，遏制疫情蔓延。
3. 药物研发：qPCR技术可以用于评估抗微生物药物的疗效，监测病原体对药物的敏感性变化。
通过检测药物作用后病原体核酸的变化，可以对药物的疗效进行定量评估和监测，为临床治疗提供依据。
荧光定量PCR检测TB-DNA在各类检样中的阳性率分析
荧光定量PCR检测TB-DNA在各类检样中的阳性率分析李素华;陈莉;王欢【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2007(17)6【摘要】目的:分析各类检样使用荧光定量PCR法检测TB-DNA的阳性率情况.方法:收集我院2006年7月～2007年4月期间临床疑似或确诊为结核病患者的各类检样192例,使用荧光定量PCR法进行TB-DNA检测.其中136例检样同时进行抗酸染色查找结核分支杆菌.结果:192例检样中检出TB-DNA阳性28例,总阳性率为14.6%.其中脓液、肺泡灌洗液、痰液和胸水中的阳性率最高,分别达到47.4%、25.7%、30.4%、8.7%.抗酸染色阳性率为7.4%、两种方法结果一致率为95%.结论:荧光定量PCR法检测各类检样中的TB-DNA具有特异、敏感、快速、准确、阴、阳性预测值高的优点.优于传统的涂片、培养等方法,应作为结核病病原学诊断的首选项目使用.【总页数】2页(P752-753)【作者】李素华;陈莉;王欢【作者单位】成都军区总医院检验科,四川,成都,610083;成都军区总医院检验科,四川,成都,610083;成都军区总医院检验科,四川,成都,610083【正文语种】中文【中图分类】R378.911【相关文献】1.荧光定量PCR检测24小时尿沉渣TB-DNA对临床诊断泌尿系结核价值分析[J], 刘佳;唐佩军;王霞芳2.对比实时荧光定量PCR检测TB-DNA与痰涂片在肺结核诊断中的应用 [J], 姜赵华;肖勇武3.对比实时荧光定量PCR检测TB-DNA与痰涂片在肺结核诊断中的应用 [J], 姜赵华;肖勇武4.胸膜活检术在胸腔积液中检测阳性率的分析 [J], 文绮霞;徐廷甫5.荧光定量PCR检测TB-DNA与抗酸染色阳性率的比较 [J], 向成玉;邓正华;邓剑;林燕英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
荧光定量pcr应用
荧光定量pcr应用荧光定量PCR应用一、引言荧光定量PCR（quantitative polymerase chain reaction）是一种基于PCR技术的方法，用于定量检测DNA或RNA的特定序列。
相比于传统的PCR方法，荧光定量PCR不仅能够检测目标序列的有无，还能够准确测量目标序列的相对数量，具有高灵敏度、高特异性和高准确性等优点。
因此，荧光定量PCR在医学诊断、基因表达分析、遗传疾病研究等领域得到了广泛的应用。
二、荧光定量PCR的原理荧光定量PCR利用DNA聚合酶在适当的温度条件下，在DNA模板的引导下，通过DNA链的扩增合成，最终形成大量的目标序列。
与传统PCR不同的是，荧光定量PCR在扩增反应中加入了特定的荧光探针或荧光染料，并利用荧光信号的强度来定量目标序列的含量。
荧光探针一般由一个荧光素和一个荧光淬灭剂组成，当探针与目标序列特异性结合时，荧光素与淬灭剂之间的距离缩短，荧光信号得以释放，从而产生荧光信号。
利用荧光信号的强度与目标序列的含量呈正相关关系，可以通过测定荧光信号的强度来确定目标序列的相对数量。
三、荧光定量PCR的应用1. 医学诊断荧光定量PCR在医学诊断中具有重要的应用价值。
例如，在感染病原体的检测中，可以利用荧光定量PCR来检测特定的病原体DNA或RNA序列，从而快速、准确地确定感染的类型和病原体的数量。
此外，荧光定量PCR还可以用于遗传疾病的分子诊断，通过检测患者体内特定基因的突变，判断是否患有遗传疾病，以及确定突变基因的相对数量。
2. 基因表达分析荧光定量PCR在基因表达分析中的应用也十分广泛。
通过荧光定量PCR可以快速、准确地测定不同样本中特定基因的表达水平，从而揭示基因在不同生理或病理状态下的表达差异。
荧光定量PCR可以定量测定目标基因的mRNA水平，进而评估基因的转录水平变化，并与蛋白质水平的变化进行比较，为进一步研究基因功能提供重要依据。
3. 遗传多态性研究荧光定量PCR还可以用于遗传多态性研究。
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1 材料与方法 1.1 血样来源
外周 血 吉 氏 染 色 厚尧 薄 血 涂 片 和 EDTA鄄抗 凝 全 血 来 源 于河南省2015-2016年疟疾发热病例袁 由河南省各省市 疾病 预防控制中心送交至河南省疾病预防控制中心寄生虫病预 防控制所进行实验室复核确认遥 1.2 主要仪器和试剂
全血基因组核酸提取试剂盒购自苏州天隆生物科技有 限公 司袁 PCR Master Mix购自 美 国Promega公 司 袁 疟 原 虫 分 型 核 酸检 测 试 剂 盒 渊 PCR 荧 光探 针 法 冤 购 自上 海 科 华 生 物 工程股份有限公司遥 显微镜 渊CX21冤 为日本Olympus公司产 品袁 PCR扩增仪 渊iQ5冤 为 美国 BioRad 公 司产 品 袁 凝 胶 成 像 系统 渊Geldoc XR冤 为美国Bio鄄Rad公司产品遥 1.3 方法 1.3.1 涂片染色镜检 按照中华人民共和国卫生行业标准鄄 疟疾诊断标准 渊WS259鄄2015冤 附录B 叶病原学检查曳 规范要 求袁 对收集到的血涂片在油镜视野 渊 伊1 000冤 下进行镜检 观察袁 并鉴定疟原虫虫种遥 1.3.2 疟原虫DNA提取 参照全血基因组核酸提取试剂盒 说明书提取抗凝全血DNA袁 提取的DNA于-20 益保存备用遥 1.3.3 巢 氏 PCR 检 测 提 取 的 抗 凝 全血 DNA进 行 疟原 虫 巢 氏PCR扩增袁 疟 原 虫 18S rRNA 基 因 引 物 序 列 由 上 海 生 工 生 物 工 程 有 限 公 司 合 成 袁 引物序列见表1遥 PCR反应体系 渊50 滋l冤院 2伊PCR预混液25 滋l袁 上尧 下游引物各1.5 滋l袁 模板DNA 渊50 ng/滋l冤 5 滋l袁 ddH2O补至50 滋l 渊第1轮冤遥 反应条件院 94 益 3 min曰 94 益 30 s袁 58 益 30 s袁 72 益 60 s袁 35个循环遥 72 益延 伸5 min遥 取 第1轮扩 增产 物2 滋l作 为第 2轮 PCR扩 增
出版确认：纸质期刊编辑部通过与《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司签约，在《中国 学术期刊（网络版）》出版传播平台上创办与纸质期刊内容一致的网络版，以单篇或整期出版形式，在印刷 出版之前刊发论文的录用定稿、排版定稿、整期汇编定稿。因为《中国学术期刊（网络版）》是国家新闻出 版广电总局批准的网络连续型出版物（ISSN 2096-4188，CN 11-6037/Z），所以签约期刊的网络版上网络首 发论文视为正式出版。
作者单位院 1 河南省疾病预防控制中心袁 郑州 450016曰 2 河南国 际旅行卫生保健中心袁 郑州 450046
* 通讯作者袁 E鄄mail院 819482937@
渊P. malariae 冤遥 随着消除疟疾的进展袁 我国大部分地区已无 本地疟疾病例袁 但由于社会经济一体化及日益频繁的贸易 往来袁 以及劳务输出等人员的流动袁 境外输入病例出现增 多趋势咱2暂袁 我国疟疾形势依然充满挑战遥
疟疾是由带有疟原虫的雌性按蚊叮咬人体而感染袁 是 全球热带尧 亚热带最严重的公共卫生问题之一咱1暂袁 主要有4 种致病疟原虫院 恶性疟原虫 渊Plasmodium falciparum冤尧 间日 疟原虫 渊P. vivax冤尧 卵形疟原虫 渊P. ovale 冤 和三日 疟原 虫
基 金 项 目 院 2017 年 度 河 南 省 医 学 科 技 攻 关 计 划 项 目 渊 No. 201702274冤曰 2016 年度河南省医学科技攻关计划项目 渊 No. 162102310066冤 曰 河 南 省 科 技 攻 关 项 目 渊 No. 162102310035冤
目前袁 临床疟疾诊断最常规的方法是临床症状观察尧 镜检疟原虫和抗原检测袁 但其准确性和灵敏性均有待提高遥 PCR是一种灵敏性和特异性均较高的分子生物学方法袁 在疟 原虫分型鉴定中有特殊优势遥 巢氏PCR 尧 咱3鄄4暂 一步法单管多 重PCR咱5暂尧 荧光定量 PCR 渊 qPCR冤 咱6暂尧 环介 导等温 扩增 PCR 渊LAMP冤 等是目前用于疟原虫分型的主要方法遥
揖Key words铱 Malaria; Microscopy; Nested PCR; Fluorescence quantitative PCR
Suppoal Science and Technology of Henan Province 渊 No. 201702274 & No. 162102310066冤, Science and Technology of Henan Province 渊No. 162102310035冤 * Corresponding author袁 E鄄mail院 819482937@
中国寄生虫学与寄生虫病杂志 Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases ISSN 1000-7423,CN 31-1248/R
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》网络首发论文
题目： 作者：
收稿日期： 网络首发日期： 引用格式：
荧光定量 PCR 在疟疾实验室诊断中的应用 李素华，李静，高丽君，张雅兰，周瑞敏，钱丹，杨成运，刘颖，赵玉玲， 张红卫 2018-07-16 2018-10-15 李素华，李静，高丽君，张雅兰，周瑞敏，钱丹，杨成运，刘颖，赵玉玲， 张红卫．荧光定量 PCR 在疟疾实验室诊断中的应用[J/OL]．中国寄生虫学与 寄生虫病杂志. /kcms/detail/31.1248.r.20181010.1552.006.html
网络首发：在编辑部工作流程中，稿件从录用到出版要经历录用定稿、排版定稿、整期汇编定稿等阶 段。录用定稿指内容已经确定，且通过同行评议、主编终审同意刊用的稿件。排版定稿指录用定稿按照期 刊特定版式（包括网络呈现版式）排版后的稿件，可暂不确定出版年、卷、期和页码。整期汇编定稿指出 版年、卷、期、页码均已确定的印刷或数字出版的整期汇编稿件。录用定稿网络首发稿件内容必须符合《出 版管理条例》和《期刊出版管理规定》的有关规定；学术研究成果具有创新性、科学性和先进性，符合编 辑部对刊文的录用要求，不存在学术不端行为及其他侵权行为；稿件内容应基本符合国家有关书刊编辑、 出版的技术标准，正确使用和统一规范语言文字、符号、数字、外文字母、法定计量单位及地图标注等。 为确保录用定稿网络首发的严肃性，录用定稿一经发布，不得修改论文题目、作者、机构名称和学术内容， 只可基于编辑规范进行少量文字的修改。
窑1窑
文 章 编 号 院 1000 鄄 7423 渊 2018 冤 鄄 05 鄄 0000 鄄 03
荧光定量 PCR 在疟疾实验室诊断中的应用
揖研究简报铱
李素华 1，李静 2，高丽君 1，张雅兰 1，周瑞敏 1，钱丹 1，杨成运 1，刘颖 1，赵玉玲 1*，张红卫 1
【提要】 分别采用镜检尧 巢氏 PCR 和荧光定量 PCR 等 3 种检测方法对收集到的 79 份疟疾血样进行检测袁 并 对检测结果进行比较分析遥 结合患者临床症状和 3 种检测结果 袁 79 份 血样最 终确 诊 74 份 袁 阳 性率为 93.7%袁 其 中镜检检出率为 82.3%袁 巢氏 PCR 检出率为 82.3%袁 荧光定量 PCR 检出率为 93.7%袁 荧光定量 PCR 检 出率 高 于 其他两种方法 渊P < 0.05冤遥 镜检和巢氏 PCR 的一致率为 78.4%袁 镜检和荧光定量 PCR 的一 致率为 63.5%袁 巢 氏 PCR 和荧光定量 PCR 的一致率为 83.8%遥 相比镜检和巢氏 PCR袁 荧光定量 PCR 敏感性和检 出率更高袁 且用时 更短遥
渊1 Henan Center for Disease Control and Prevention, Zhengzhou 450016, China; 2 Henan International Travel Healthcare Center, Zhengzhou 450046, China冤
揖 Abstract铱 Seventy鄄nine malaria samples were examined by microscopy, nested PCR and fluorescence quantitative PCR, and the detection rate was analyzed among the three methods. After combining clinical symptoms of the patients and results of the three methods, 74 of the 79 samples were confirmed to be malaria samples, with a positive rate of 93.7% . Specifically, the detection rate of microscopy, nested PCR and fluorescence quantitative PCR were 82.3% , 82.3% and 93.7% , respectively. The concordance rate between microscopy and nested PCR was 78.4% , and that between microscopy and fluorescence quantitative PCR was 65.3% 袁 between nested PCR and fluorescence quantitative PCR was 83.8%. In addition, the detection rate of fluorescence quantitative PCR 渊93.7%冤 was significantly higher than that of the nested PCR 渊82.3%冤 渊P < 0.05冤. Compared with microscopy and nested PCR, the fluorescence quantitative PCR has higher sensitivity and positive detection rate, and is less time鄄consuming.