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菌种安全保藏方法

菌种安全保藏方法菌种安全保藏方法点击：23食用菌由于生产投入少，经济效益高，近年来在农村兴起了食用菌生产热潮。

生产中食用菌菌丝繁殖快，容易老化，菌种保藏更难。

下面介绍七种简单易行的菌种保藏方法供广大农户参考：蒸馏水法适用于平菇、金针菇、香菇的苗种。

1、保藏平菇、金针菇菌种先将八成熟待保藏试管菌种移入接种箱内灭菌后，用注射器从试管栓内注入蒸馏水，将培养基面全部淹没至管口2厘米为止。

管口用矿蜡封闭，常温下置于阴凉处立放可以保藏1～1.5年。

2、保藏香菇、木耳菌种，用150×15毫米的指型管将培养至7成熟的固体或半固体试管种在接种箱内无菌操作下，放人25×200毫米的大试管内，向大试管内注入蒸馏水至管口1厘米处，封口用橡皮栓包好，并用矿蜡加固密封，置于阴凉处。

木耳可保藏7～8个月，香菇可保藏9～12个月。

此法在自然温度下也可以保藏其他菌种。

尿素暂存法在避光、干燥通风良好的地方放置袋装尿素，将试管菌种主体埋在尿素颗粒中，试管口露在外面，可保藏菌种活力30天之多。

此法在恒定低温环境下即可进行。

液体石蜡保藏法选用化学液体石蜡，高压灭菌后放入40℃恒温箱中数小时或干燥器中数日，用无菌吸管或注射器吸取液体石蜡注入菌种试管。

注入量应高出斜面尖端1厘米左右，管口塞上棉塞并用石蜡封好。

直立保藏在清洁、干燥、凉爽的低温处可以保藏5年。

麸皮保藏法取一定麸皮加水或营养液后拌匀即可备用。

将水麸皮装入试管经高压灭菌后拌入菌种，放在适温下培养，待菌丝体发育好后将试管放入室温下进行干燥。

然后在20℃以下干燥处保藏，可保藏3～5年。

生理盐水保藏法将菌种接入马铃薯培养液中，每250毫升三角瓶装60毫升养液，振动培养液或每天摇动5～10次，培养5～7天，然后将形成的菌丝球吸入装有5毫升无菌生理盐水的试管中，每管约移入4～5个菌丝球，塞上棉塞，用蜡封好管口。

低温可保藏1年。

麦粒保藏法取优质小麦淘洗后浸入20℃水中泡5小时，稍晾干后装管。

菌种保藏方法

菌种保藏方法
菌种保藏方法，如下：
1、传代保藏，传代保藏菌种是微生物保存中最常用的方法之一。

很多微生物在低温或者干燥处理时，会很快死亡，为了保存菌种的活性，就要定期不断的进行菌种转接、培养后再保存。

2、斜面低温保藏，将待保藏的菌种接种在合适的斜面培养基上，在相应的条件下培养至得到充足的菌体或者孢子，随后密封试管置于4℃左右保存，具体保存温度按照保存菌种设定。

保藏时间依微生物的种类从1个月到4个月不等。

3、冷冻干燥保藏，冷冻干燥保藏法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，这种方法适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年。

我国大多数生物制品菌种都是采用该法保藏。

4、半固体穿刺保藏，配制半固体培养基，高压湿热灭菌后倒于无菌试管中至约1/3，待培养基凝固，用接种环从平面培养基上挑取单菌落，穿入培养基若干次。

在合适的条件下进行培养至菌体旺盛生长，之后密封试管，根据菌种特点在4 ℃左右或者凉爽干燥处保存。

保存时间至少可以达到
1 年，对于有些菌种甚至能达到20 年之久。

5、液氮超低温保藏，液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。

液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。

常用菌株保藏方法

常用菌株保藏方法
常用菌株保藏方法：
1.琼脂斜面低温保藏法：此法是实验室菌种最常用的保藏方法，操
作简便，使用方便，具体方法是，用无菌的接种环挑取菌种一环，划线于适宜的琼脂斜面上（细菌为营养琼脂斜面；真菌为改良马丁琼脂斜面），细菌置35℃培养18~24小时，真菌置25℃培养18~24小时，必要时可延长培养时间，待菌生长充分后，放置2~4℃保存。

霉菌和芽孢菌可保存2~4个月，细菌可保存1~2个月，铜绿假单胞菌不能放在2~4℃保存。

2.甘油冷冻管保存法：用无菌接种环接种菌种在琼脂斜面上，置适
宜的培养条件培养后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接种环与试管壁之间的摩擦使细菌充分扩散到已装有0.9%氯化钠溶液中，加入等体积的、浓度为20%的无菌甘油，轻轻振摇，分装于无菌小试管中，置-30℃条件下保存。

此法应注意菌悬液的浓度应高一些，而且不能含有培养基等营养物质，以防止长时间保存造成菌数下降；另外甘油的浓度不宜过高，否则影响细菌细胞渗透压，引起细菌死亡；厌氧菌、霉菌不宜用此法保存。

3.半固体高层穿刺培养：用无菌接种针挑取菌落，垂直刺入半固体
培养基中，在适宜条件下培养后，放置2~4℃保存。

也可在半固体表面加入液体石蜡，使液体石蜡高出菌种表面1cm再保存，可延长保存时间至一年，霉菌、芽孢杆菌可保存2年。

菌种保藏方法_菌种应该怎么保存

菌种保藏方法_菌种应该怎么保存引导语：菌种应该怎么保存呢?以下是小编收集整理的关于菌种保藏方法相关内容，欢迎阅读参考!菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。

传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如*奶等常用生产菌种的保存。

传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。

培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。

若为产*菌种，则应在培养基中添加少量碳*钙。

一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。

传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传*状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原*、形成生理活*物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。

其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳*杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。

3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。

常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。

方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。

保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。

使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)，置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。

实验室菌种保藏的方法

实验室菌种保藏的方法菌种是主要的生物资源，也是食用菌生产首要的生产资料。

一个优良的菌种被选育出来以后，必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变，才不至于降低生产性能，能长期在生产中使用。

因此，菌种保藏在食用菌生产上具有重要的意义。

各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。

一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。

下面介绍几种常用的菌种保藏方法：1斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4。

C左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。

此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。

放线菌、霉菌和有芽匏的细菌一般可保存6个月左右，无芽抱的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。

如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4。

C冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。

这一改进可使菌种的保藏期延长。

此法由于采用低温保藏，大大减缓了微生物的代谢繁殖速度，降低突变频率；同时也减少了培养基的水分蒸发，使其不至于干裂。

该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。

其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。

2石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端IC明使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4。

C冰箱内保藏。

使用的液体石蜡要求优质无毒，化学纯规格，其灭菌条件是：150〜170。

C烘箱内灭菌Ih;或121。

C高压蒸汽灭菌60〜80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分。

微生物菌种保藏方法

微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。

以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。

这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。

2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。

干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。

3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。

这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。

4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。

这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。

5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。

这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。

长期保藏食用菌菌种的方法有哪些？

长期保藏食用菌菌种的方法有哪些？（1）矿物油保藏法。

食用菌的菌丝体都可用此法保藏。

矿物油即指质量好的医用液体石蜡。

在试管斜面上灌注液状石蜡可以防止培养基水分的散失；使菌丝体与空气隔绝，以降低新陈代谢，从而达到保藏的目的。

此法保藏菌种一般可贮藏 2～3年，但最好每1～2年移植1次；加了石蜡的菌种，置于室温下保藏比放在冰箱内更好。

将100毫升液状石蜡倒入250毫升三角瓶中，在121℃下灭菌2小时，再在40℃煤箱中烘烤几小时，蒸发水分备用。

然后在无菌操作条件下，在培养好了的斜面菌种上注入一层液状石蜡，注入量以高出斜面尖端1厘米为度。

使用矿物油保藏时，菌种必须置在小铁丝篓或试管架上垂直存放。

由于棉塞易受污染，最好将棉塞齐管口剪平，用矿蜡密封后再以塑料薄膜包扎贮于清洁、避光的木柜中。

（2）沙土保藏法。

此法比较简单方便，将食用菌的孢子保藏在干燥的无菌沙土中。

沙土装入小试管中，要经过严格灭菌后再将无菌孢子拌入沙中，用石蜡封口，放在盛有干燥器的大试管中密封保存。

（3）菌丝球生理盐水保藏法。

将待保藏菌种，在无菌操作下接入无菌的、不含琼脂的液体 PDA 培养基中，每250毫升三角瓶装60毫升，用摇床（以旋转式摇床为好）振荡培养5～7天（180转/分钟，25℃），然后将形成的菌丝球用无菌吸管吸入装有5 毫升无菌生理盐水的试管中，每管转入4～5个菌丝球。

试管用石蜡封口，放在4℃冰箱或常温下保藏。

（4）真空冷冻干燥法。

真空冷冻干燥法主要是采用真空、干燥和低温等三种手段对菌种进行保藏。

这种保藏方法对菌种的保藏期长，10～20年后仍不降低菌种原有的性能。

其保存的基本方法是将需要保藏的菌种悬浮液装在特制的安培管中，然后骤然冰冻，并立即抽真空，使培养物以固体形态升华脱水，熔封后在低温下保藏。

（5）液氮超低温保藏法。

液态氮温度在—195℃，由于液态氮的超低温能使食用菌的代谢水平降到最低限度，因此，采用液态氮超低温冰箱保藏法，能够保藏所有的微生物菌种，包括一些不能用冷冻干燥法保藏的菌种，甚至不耐低温的草菇菌种如用10%的甘油和5%～10%的二甲基矾做保护剂，也能在超低温冰箱中保藏。

食用菌菌种保藏的6种方法

食用菌菌种保藏的6种方法
菌种保藏的目的是通过降低菌种的代谢活力，使其处于休眠状态，减缓衰亡速度，保持菌种原有优良性状，防止杂菌污染；当恢复生活条件时，菌种能在很短时间内恢复生机，迅速生长繁殖。

母种的保藏有如下方法：
1.斜面冰箱保藏法：把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。

高温菌在16摄氏度为宜。

有效期3—6个月。

2.石蜡油保藏法：斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1—1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。

保存期可1—2年。

3.孢子保藏法：用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子，可参考孢子分离法，然后把带孢子的纸条放入无菌试管内，置干燥器内2—3天吸干水分，再改用胶塞。

在冰箱或室温内可保存多年。

4.菌丝球保藏法：常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介，把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个，移入媒介内，用胶塞封口，冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。

5.液氮保藏法：常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂，注入斜面母种管，刮下菌丝体成悬浮液或孢子液，吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管，
熔封管口，置液氮冷冻器内，每分钟降摄氏1度，1小时内使其温度降至摄氏负35度，其后迅速降至气相摄氏负150度，液相摄氏负196度保存。

保存期可超过10年。

6.自然基质保藏法：此法多用于原种保藏。

在一些欠设备的地区，也可作母种保藏法。

菌种保藏的方法

菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。

以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。

一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。

其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。

操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。

2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。

3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。

4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。

5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。

二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。

其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。

操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。

2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。

3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。

4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。

5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。

三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。

其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。

操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。

2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。

3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。

4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。

5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。

保藏菌种的方法

保藏菌种的方法
在微生物研究中，保藏菌种是非常重要的一环。

保藏菌种可以保证菌种的纯度和活力，并且方便长期保存和传递。

以下是一些常见的保藏菌种的方法：
1. 冷冻保藏法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用生理盐水或甘油溶液混合菌体，制成菌悬液，然后用干燥冰或液氮冷冻保存。

2. 真空干燥法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌水将菌体洗净，然后在真空条件下干燥保存。

3. 常温干燥法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌纸片或无菌土壤将菌体均匀涂抹在上面，然后在阴凉通风处晾干保存。

4. 液氮保藏法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌水将菌体洗净，然后用液氮冷冻保存。

在保藏菌种过程中，需要注意以下几点：
1. 保证菌株的纯度和活力，避免杂菌和死菌的混入。

2. 在保存菌种前，要对菌株进行鉴定和存档。

3. 在保存过程中，要保证温度、湿度、氧气和光照等环境条件
的稳定和适宜。

4. 定期检查保存的菌种，确保其纯度和活力。

综上所述，保藏菌种是微生物研究中不可或缺的一环。

通过选择合适的保藏方法和严格的管理，可以确保菌种的纯度和活力，方便长期保存和传递。

菌种的保藏方法

• 适用于丝状真菌、酵母及肠道科细菌，在10 ℃ 或室温下保藏比低温效果好。
• 一般可保藏一年或更长。
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低温保藏法(-20℃)
• 将液体培养物或从琼脂斜面培养物收获的细胞接到试管内，然后贮藏于温度范围在-5～-20℃的普通冰箱(-20℃)中。或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同上置于冰箱中保存。
• 在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是： 1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞； 2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞； 3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜； 4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超
低温冰箱中保藏。
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• 如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含10％甘油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰箱的冷冻速度一般控制在1-2℃／min。若干细菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活力不受影响。
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穿刺保藏法
• 操作：将菌种穿刺接种于半固体培养基上，然后覆盖2－3mm的液体石蜡，放入冰箱4℃保藏。一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
• 此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。特别对难于冷冻干燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢子的担子菌等的保藏更为有效。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。
• 当培养基中加入抗生素时，抗生素提供了一有利于携带质粒的细胞群体的极有用的生长选择压。而且在运用基因工程菌进行发酵时，抗生素的加入可帮助维持质粒复制与染色体复制的协调。

实验室最常用的五种菌种保藏方法

实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。

这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。

冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。

在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。

二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。

这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。

常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。

干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。

三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。

在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。

这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。

四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。

这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。

液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。

五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。

这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。

总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。

不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。

在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。

微生物实验菌种保藏方案[最终定稿]

微生物实验菌种保藏方案[最终定稿]第一篇：微生物实验菌种保藏方案一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。

保藏温度要求在-4～4℃下。

液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。

具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。

二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。

其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。

将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。

取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。

-20℃保存时间较短。

或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。

2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。

甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。

冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。

为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

实验室菌种的保藏方法

实验室菌种的保藏方法一、甘油悬液保藏法此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。

保藏温度若采用-20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用-70℃，保藏期可达10年。

将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使甘油的终浓度在10％～15％，再分装于小离心管中，置低温冰箱中保藏。

基因工程菌常采用本法保藏。

二、冷冻真空干燥保藏法冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。

它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。

并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。

常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。

由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。

除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。

但该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。

保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。

三、液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法。

它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法。

其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。

美国ATCC菌种保藏中心采用该法时，把菌悬液或带菌丝的琼脂块经控制致冷速度，以每分钟下降1℃/min的速度从0℃直降到-35℃，然后保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中。

菌种保存方法-

菌种保存方法-菌种保存方法：一.菌种保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。

病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

常用的有甘油菌保存：取灭过菌的1.5ml EP管，按照60%—80%甘油的加入量，保存零下80度。

例：取37°培养过夜的菌液2-4ml甘油6-8ml，充分混匀后分装于1.5ml EP管中，置于-80°冰箱即可。

6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

二.常用的器材所要保存的微生物；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。

14微生物菌种保藏

微生物的菌种保藏菌种保藏(culture preservation)▪是指保持微生物菌株的生活力和遗传性状的技术。

▪目的在于把从自然界分离到的野生型，或经人工选育得到的变异型纯种，使其存活、不污染、少变异，保持菌种原有的各种特征和生理活性。

▪基本原理是使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，使微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。

▪通常干燥、低温和隔绝空气是保证获得这种状态的主要措施。

1、传代培养保藏法▪对于经常使用中的菌种，实验室一般采用传代培养的方法进行保藏，包括斜面培养、穿刺培养等，培养后于4℃冰箱内保存。

▪这个方法主要是将菌种接种在适宜的固体斜面培养基或者穿刺培养基上，待菌充分生长后，石蜡膜封住硅胶塞或塑料盖，移至4℃的冰箱中保藏。

▪保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2-4个月，酵母菌两个月，细菌一般一个月。

然后移种一次。

2、冷冻保藏法▪这是目前实验室最常规使用的菌种保藏方法，主要原理是将菌种在合适的保护剂下，直接放入-80℃冰箱，进行长期保藏的方法。

适合各种微生物的菌种保藏，操作简便，保存期长，复活方便，一般菌种可以保藏10-15年左右。

▪主要操作方法是将待保藏菌种在液体或者固体培养基中培养好，转入含有20-30%甘油作为防冻保护剂的等渗液中。

3、载体保藏法▪载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

菌种保藏上交•每个组保藏自己分离得到的乳酸菌和其他菌种；•（用纸条写好标记，日期，姓名）乳酸菌rsp斜面1支，冻存管5支；放线菌M2斜面1支，冻存管5支；……实验报告要求1、你保藏的菌种有哪些，选用了什么保藏方法，原理是什么？2、讨论四大类微生物最合适的菌种保藏方法分别是什么？谢谢。

微生物菌种保藏原理与方法

1 简易保藏法
定期移植时间间隔：一般不产芽孢的细菌约2周至1个月；放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月；石蜡油封法一般可保藏1年。优缺点：操作简单，可随时观察菌种生长状况，
但较费时费力，因经常移植传代，微生物物易发生变异。
1.1斜面传代保藏法
贴标签：菌种菌株接种日期接种：对数生长期后期成熟的孢子培养：细菌—37℃，18~24h
收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种管直立放置于4 ℃冰箱中。
放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌及不产芽孢细菌可保1年。
2 甘油保藏法
保护剂： 40%左右的甘油机理：适当浓度甘油中，少量甘油分子进入细胞，
使菌种细胞在冷冻过程中缓解了其由于强烈脱水及胞内形成冰晶而引起的破坏。保藏温度：-20 ℃左右或-70 ℃ 特点:操作简单，保藏期长，保存期间取样测试方便，在基因工程中常用于保存含质粒的菌株，一般可保3~5年。
1.3石蜡油封法
石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超过总体积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸汽灭菌（121 ℃ ，30min），连续灭菌2次。然后在40 ℃温箱中放置2 周或置105~110 ℃烘箱中烘2h，除去石蜡油中的水分。
培养
加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中，加入量以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约1cm为宜。
该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、（除少数不产孢子或只产生丝状体真菌外）、酵母菌及病毒的保藏。
该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一般可达10~20年），存活率高，是目前最有效的菌种保藏方法之一。
4冷冻真空干燥保藏法
安瓿管
5液氮超低温保藏法