分子生物学实验室常用试剂的配制
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一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）:
溶解
2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：
溶解
3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用
0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：
加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于
9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：
在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加
32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加
0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：
溶解
78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：
溶解
7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：
溶解
40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至
5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:
配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（
0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取
186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（
6.8-
8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至
91.4ml的水中。
25mg/mlIPGT：
溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl
2:溶解
20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/LPMSF：
溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：
将200mg的蛋白酶L加入到
9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：
溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH
5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至
7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：
溶解
29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：
溶解400g氢氧化钠颗粒于约
0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至
1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：
称取100gSDS慢慢转移到约含
0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：
溶解
36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为
100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:
在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：
溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2g
2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2g
2%BSA（组分V）2g
水加水至总体积为100ml
依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L贮液
100mmol/L MgCl21ml 1mol/L贮液
100mmol/L DTT1ml 1mol/L贮液
2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L贮液
5mmol/L盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L贮液
0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）
0.5ml 10 mg/mL贮液水2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度
配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP贮液
10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP贮液
10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP贮液