2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

生物法：灭活的病毒（特有的方法）
细胞完成融合的标志： 细胞核融合为一个核
融合后形成具有原来两个或多个 细胞遗传信息的单核细胞，成为 杂交细胞
意义：突破了有性杂交方法的局限，使远 缘杂交成为可能
5、动物细胞融合的应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤 和生物新品种培育等的重要手段 制备单克隆抗体（重要应用）
植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 细胞融合的方法 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 植物细胞全能性
酶解法去除细胞壁后 用胰蛋白酶处理使细 诱导原生质体融合 胞分散后诱导细胞融 合
诱导方法
物理、化学方法 （同左） 生物：灭活的病毒 化学（聚乙二醇） 物理（离心、 振动、电刺激）
动物细胞工程 2.2.2.动物细胞融合与
单克隆抗体
一、动物细胞融合：
1、概念：《选修3》P.52
动物细胞融合也称细胞杂 交，是指两个或多个动物 细胞结合形成一个细胞的 过程。
2、原理：
细胞膜具有一定的流动性
3、过程：
（与植物细胞融合的基本原理相同） 物理法： 诱导方式
离心、电激、振动
化学法：
聚乙二醇
2、单克隆抗体的制备过程：
①将抗原注入小鼠体内获得效应B 淋巴细胞
获得杂交瘤细胞 ②效应B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 融合 ③用特定培养基筛选出杂交瘤细胞 ①筛选能够产生所需抗体的细胞群 动物细胞培养
②再在培养液或小鼠腹腔中培养
提取单克隆抗体
从培养液或小鼠腹水中提取
细胞融合后培养液中有几种细胞
5种
未融合的细胞： B细胞、 骨髓瘤细胞 自身融合的细胞： B与B融合、瘤瘤融合
B细胞与骨髓瘤细胞融合 杂交瘤细胞：
源自文库
在整个制备的过程中要经过几次筛选？
Ⅰ筛选得到杂交瘤 细胞， Ⅱ筛选先在多孔培 养板上，在每孔只 有一个杂交瘤细胞 下培养筛选出特异 抗体的细胞群
3、单克隆制备过程中用到的 生物技术手段
获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体
用途
二、单克隆抗体：
关于抗体
提 问
⑴其由何种细胞产生？
⑵主要分布在哪里？
⑶如何得到抗体？
？
抗原
刺激
动物体内
效应B
细胞
抗体
不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异 性差，灵敏度低 抗原
刺激
动物体内
效应B 细胞
抗体
抗体不纯
抗原不纯
筛选单一的效应B细胞
（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）
动物细胞融合 动物细胞培养
4、单克隆抗体的应用:
应用: 疾病的诊断、治疗和预防。 优点:特异性强、灵敏度高，产量大 实例: ①各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌 及血吸虫等数百种疾病的诊断； ②在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士, 能识别“自己”与“异己”，一旦发现 致病 因素便与之结合将其杀死。 ③若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”， 将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌 细胞又不会伤害健康细胞。
B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因
1、每一个B淋巴细胞只能分泌一种特 异性抗体，不同种类的B淋巴细胞分泌 的抗体不同 2、B淋巴细胞在体外培养时不能无限 增值，骨髓瘤细胞能够无限增值

制备单克隆抗体
1、原理： B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细 胞能无限增殖，杂交瘤细胞具有两个亲本 的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足 够数量的单一抗体。