2021年石蜡切片和冷冻切片之欧阳学文创编
石蜡切片与冰冻切片培训教程石蜡切片和冰冻切片优缺点比较项目
石蜡切片与冰冻切片培训教程石蜡切片和冰冻切片优缺点比较冰冻切片概述：冰冻切片是将活组织迅速冰冻、切片、染色，进行病理诊断的方法。
主要应用:（1）快速病理诊断（2）显示组织中的脂质（3）在组织化学上显示酶活性（4）神经组织学的镀银和镀金染色法（5）免疫荧光的研究准备材料：（1）切片机刀片（2）冰冻包埋剂（3）液氮罐（4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪（7）培养皿（8）生理盐水（9）粘附载玻片冰冻切片机仪器说明功能键说明灯光开关按钮，用于冷冻箱照明。
手动除霜按钮，用于激活和终止手动除霜。
入的参数。
要锁定或解锁定，按下约5秒。
用箭头所指的+和-键在钟型标记的面板上可以设置实际时间。
按下或按钮超过1秒，时间值连续增加或减少（自动重复功能）。
功能键说明紫外灯开关按钮，用于冷冻箱消毒，开启后30分钟后自动熄灭用箭头所指的+和-键设置自动除霜循环的起始。
同时，时和分标记之间的LED闪烁。
自动除霜循环每24小时进行一次。
用+和-键设置冷冻箱的温度。
实际温度是标准读数。
要显示需要的数值，触摸+和-键。
用+和-键置需要的数值。
按下或按钮超过1秒，冷冻盒温度值连续增加或减少。
完成设置后5秒将显示实际值。
用于激活Peltier元件冷冻快速冷冻站。
一旦激活，制冷系统的压缩机将在40秒后启动以加强热传导效应。
仪器无Peltier元件显示为“LL”，有Peltier元件显示为“PE”。
功能键说明粗调后退按钮，用于标本远离刀片的快速移动。
微调后退按钮，用于标本远离刀片的慢速移动。
粗调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。
微调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。
（注意：以上粗调和微调按钮均可采用点按步进移动或长按连续移动。
）冰冻切片操作流程①取材：手术过程中取下的新鲜组织，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，大小约为24×24×2mm；②设定冷冻温度：应视不同的组织选择不同的冷冻箱冷温度,冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎，如：a 软骨、睾丸、脾脏等高密度组织，冷冻箱温度在-10 ～15℃；b 甲状腺、脑、心脏、肌肉等组织，温度在-15～25℃；c 肝、乳腺、膀胱等含脂肪的组织，温度在-25℃以下。
石蜡切片和冷冻切片制作流程
石蜡切片和冷冻切片制作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!石蜡切片制作流程。
1. 固定，将组织浸泡在固定液中（如福尔马林），使组织蛋白凝固。
甲状腺术中冰冻切片与术后石蜡切片的诊断结果比较
甲状腺术中冰冻切片与术后石蜡切片的诊断结果比较摘要】目的：比较甲状腺术中冰冻切片与术后石蜡切片的诊断结果。
方法：选取我院自2015年1月-2018年12月收治的65例甲状腺手术患者，所有患者于术中行冰冻切片与术后石蜡切片，比较分析诊断结果。
结果：术中冰冻切片与术后石蜡切片符合率为96.92%。
结论：术中冰冻切片与术后石蜡切片有较高一致性，且术中冰冻切片可为临床手术方式、范围的选择提供指导，术后石蜡切片可作为术后病理确诊提供参考。
【关键词】甲状腺；术中冰冻切片；术后石蜡切片；病理诊断【中图分类号】R581 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）08-0109-02甲状腺疾病是临床常见疾病及多发病，临床多采用彩色多普勒超声检查，有较高诊断率，但术前仍有部分患者无法鉴别甲状腺结节性质，增加了临床诊断难度，耽误了最佳时间[1]。
因此，提高早期诊断具有重要意义。
1.资料与方法1.1一般资料本次研究的65例甲状腺手术患者均来源于我院自2015年1月-2018年12月收治的住院病人，男性患者9例，女性患者56例；年龄17～76岁，平均年龄（51.05±14.23）岁。
类型包括甲状腺炎2例，结节性甲状腺肿30例，甲状腺腺瘤18例，甲状腺癌15例。
1.2方法术中冰冻切片术中取新鲜甲状腺病变组织，未经固定组织平行切开，采用恒温冷冻切片机行OCT包埋剂包埋及快速冷冻。
于-17℃～-20℃下保存，冷冻时间约3分钟，切面厚度约6μm，HE染色后在光镜下得以观察。
术后石蜡切片：术中剩下组织实施术后石蜡切片，于10%的中性甲醛溶液中得以固定处理，在石蜡包埋、切片及HE染色后，通过光镜观察病理组织。
1.3诊断标准观察并计算术中冰冻切片与术后石蜡切片对不同甲状腺疾病的符合率。
分为完全符合、基本符合、误诊及不能明确性质，完全符合：两种检查方法结果完全一致；基本符合：两种检查在良恶性上一致，但在分类上有一定差别；误诊：两种检查完全相反或者有较大区别；不能明确性质：冰冻切片不能明确性质需待石蜡切片诊断。
分析卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断结果
分析卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断结果【摘要】目的对比卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断价值。
方法于2020年8月-2021年7月开展卵巢肿瘤诊断方式的研究，将70例卵巢肿瘤患者纳入研究，分别进行快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断，对比各自的诊断价值。
结果快速冰冻切片病理诊断卵巢肿瘤误诊恶性肿瘤5例，石蜡切片的准确性为100%,石蜡切片病理诊断准确性更高（P<0.05）。
快速冰冻切片病理诊断时间较石蜡切片病理诊断时间短（P<0.05）。
结论快速冰冻切片病理诊断卵巢肿瘤的诊断时间较更短（P<0.05），但石蜡切片病理诊断准确性更高。
【关键词】卵巢肿瘤；病理诊断；快速冰冻切片；石蜡切片[Abstract] Objective To compare the value of rapid frozen section and paraffin section in the pathological diagnosis of ovarian tumors. Methods the diagnostic methods of ovarian tumors were studied from August 2020 to July 2021. 70 patients with ovarian tumors wereincluded in the study. The pathological diagnosis of rapid frozen section and paraffin section were carried out respectively, and their diagnostic values were compared. Results the accuracy of Paraffin section in the diagnosis of ovarian tumors was 100%. rapid frozen section was misdiagnosed as benign tumors in 5 cases, and the accuracy of rapid frozen section was higher (P < 0.05). The time ofpathological diagnosis of rapid frozen section was shorter than thatof paraffin section (P < 0.05). Conclusion the diagnostic accuracy of paraffin section is higher an， the diagnostic time is longer thanthat of rapid frozen section (P < 0.05).【 key words 】 ovarian tumor; Pathological diagnosis; Rapid frozen section; Paraffin section卵巢囊肿属于常见妇科疾病，一般在中老年女性当中多发。
实验十五、石蜡切片法(四)染色、封藏(附：冰冻切片法)
(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。 (11) 1%伊红水溶液1~5min。 (12) 70%酒精数秒。 (13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。 (14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。 (15) 二甲苯5—10min。 (16) 封藏: 封藏于中性树胶中。
2. 封藏的方法 在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从 二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在 切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再 进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧， 稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下， 避免产生气泡。
四、注意事项 1、脱蜡应彻底； 2、水洗时水流不能太急； 3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好； 4、脱水要彻底； 5、适量滴加封藏剂。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
五、实验结果 细胞核蓝色，细胞质粉红色。
六、思考题 1. 在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？ 应如何解决？
附：冰冻切片法 冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等） 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优 点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的 制片。 制片。
一、操 作 程 序 1. 取 材：取新鲜的组织。 取新鲜的组织。 2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林 冰冻切片。 中性福尔马林,冰冻切片 组织固定于 中性福尔马林 冰冻切片。 3. 切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 调整切片角度，安装切片刀。 调整切片角度，安装切片刀。 (2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定， 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 (3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移 将样品放到样品头上， 近刀口，利用慢进按钮开始修片， 近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝， 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出 后染色观察。 后染色观察。
[原创]石蜡包埋切片制作法
![[原创]石蜡包埋切片制作法](https://img.taocdn.com/s3/m/37fb33260812a21614791711cc7931b765ce7be6.png)
一、制备显微标本的切片法一石蜡包埋切片制作法这是最常用的切片法。
以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，最后凝固成均匀一致的固态结构。
用切片机制取极薄的切片。
为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。
过程大致如下：⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。
因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。
凡供永久保存的标本都需经固定处理。
常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。
还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。
⑵脱水：是将组织细胞所含水分除去。
通常用乙醇（Alcohol，酒精），浓度递升到100%。
此过程还使组织块进一步硬化。
⑶透明：是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。
通常用二甲苯（xylene）为透明剂。
⑷浸蜡：在温箱内进行。
已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质。
⑸包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋。
⑹切片：用切片机。
常用的切片机有轮转式、平推式的。
用轮转式的易于切出连续切片。
切片厚度随制片目的而调整。
教学标本厚度多是5~6μm。
⑺贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。
染色后用树胶、盖坡片封固，可永久保存。
二冷冻切片法冷冻切片法是借组织在低温下，冻结变硬而达到符合切片要求。
冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。
恒冷切片机是高级冷冻切片设备。
它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。
恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。
切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。
冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以最大限度地保持组织的新鲜状态。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都是质谱成像分析中常用的技术。
它们各自具有优点，可以根据实验需求进行选择。
石蜡切片法是将组织样本固定在石蜡块中，然后用切片机切成非常薄的切片(通常在20-50微米之间)。
这种方法的优点在于其切割厚度均匀，可以提供高质量的细胞和组织的图像。
此外，由于使用的是石蜡作为固定剂，因此可以得到长期保存的切片。
石蜡切片也有其缺点。
石蜡本身是一种有机物质，可能会对某些生物分子产生影响。
石蜡切片需要经过一系列复杂的处理步骤，包括脱水、包埋、切片等，这可能增加实验的复杂性和时间成本。
相比之下，冰冻切片法则是在冷冻状态下快速切割生物组织并立即冻结以保留其完整性。
这种方法的优点在于它可以提供实时观察的活体细胞和组织结构，对于研究动态过程非常有用。
此外，冰冻切片不需要使用石蜡或其他固定剂，因此不会对生物分子产生影响。
然而，冰冻切片也有其挑战。
由于是在冷冻状态下进行切割，因此切片的质量可能受到冷冻损伤的影响。
此外，冰冻切片需要在极短的时间内完成，这可能对切片机的性能要求较高。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析，选择哪种方法取决于具体
的实验需求。
如果需要长期保存的高质量图像，或者需要研究静态结构和三维形态，那么石蜡切片可能是更好的选择。
而如果需要实时观察活体细胞和组织结构，或者对时间敏感，那么冰冻切片可能更合适。
卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的对比效果分析
卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的对比效果分析【摘要】目的探讨卵巢肿瘤石蜡切片和快速冰冻切片病理诊断的对比效果。
方法选择2020年1月-12月接受治疗的卵巢肿瘤患者40例，均在术中选择快速冰冻切片与石蜡切片进行病理诊断，对比两种诊断技术诊断结果。
结果石蜡切片诊断确诊率（55.00%）同快速冰冻切片（30.00%）相比较高，P<0.05。
结论两种诊断方式对该病的病理诊断均具有一定的优势，临床可根据具体情况进行选择。
【关键词】石蜡切片；快速冰冻切片；卵巢肿瘤；病理诊断卵巢肿瘤属于女性常见疾病，好发对象为中青年女性，其可因囊肿组织病变程度分为恶性、生理性及良性，发病早期无明显临床症状出现，随着肿瘤体积的增大，部分患者会出现腹痛及腹胀等临床症状，并可触摸到腹部肿块[1]。
恶性肿瘤会出现全身转移的症状，严重会影响女性生育能力，且伴有肌体感染等并发症，对女性身心健康造成严重威胁[2]。
由于该病早期症状不明显，需通过定期体检及常规妇科检查，才可反映出病症，为了更好检验卵巢囊肿病理变化将囊肿病变组织切片进行分析[3]。
本文实验采用快速冰冻切片与石蜡切片切片进行该病的病理诊断，比较两组之间效果，取得理想的实验效果，具体分析如下。
1资料与方法1.1一般资料选择2020年1月-12月接受治疗的卵巢肿瘤患者40例，所有患者均在术中选择快速冰冻切片与石蜡切片进行病理诊断，年龄20～70岁，平均（60.12±5.68）岁。
纳入标准：所有患者经医务人员临床确诊且常规B超检查判断为卵巢囊肿。
排除标准：存在手术禁忌症；肝肾功能异常者；严重精神疾病者。
1.2方法两组均进行基本手术治疗，均由医护人员对患者病变组织进行处理，切除一些新鲜病变组织，快速冰冻切片进行病理诊断，将病理组织放入零下温度的液氮中，冷冻时间为3分钟，等冰冻快速形成后和切片处理后在实施固定和染色，采用机器将组织切片保持在5um左右即可，后在显微镜进行观察并分析。
脑病变组织快速石蜡切片和冷冻切片的比较
１２２ ．
速石 蜡切片 使用 Ｐ Ｔ ４０型病理样 品快 速超 声 Ｉ－ ４ ０
处 理仪 【 上海震 康 医疗器 材有 限公 司 ） 水浴锅 温 度 为 ６ ， ５～
７ ℃， Ｏ 组织 （ 个别组 织太小 ， 擦镜 纸包裹 ） １％福尔 马林 用 经 ０ 液 加ｒ 固定 ２ ｍｉ， ｒ Ｉ １ ～３ ｎ 去陈表面液 体 ； 用纯丙酮 ３ ｒ 脱水 ２ ０ｒ Ｉ １ — ３ ，ｍｎ次 （ 次 ３ｉ ／ 根据组织大小 、 类定 ） 组织脱 水后变 白且疏 种 ： 松， 浸蜡后将 已凝 固好 的蜡 块表面烫熔 ， 包埋组织 ， 待表面稍 凝将蜡块 平压于玻 璃表 面． 组织 包埋 面平整 ， 使 快速 挣冻 后 切片 （ ５ ）裱 片后用干燥 的滤 纸将 表面水 分吸干 ， ３～ ； 酒精 灯烘 烤 ｌ ～１ｓ快速 Ｈ Ｏ ５， Ｅ染色 ＝由 ３位病 理医师双盲 观察。
【 图分类号 ｌ Ｒ ４ 中 ４６８
【 文献标识码 】 Ｂ
【 文章编 号】０ ７ ｏ ６ ２ｔ １ｌ Ｏ ５ １０ 一ｓ９ （ｏ２ｏ — Ｏ４—０ ｒ １
３ 讨 论
快速病理切 片分为 持 陈切 片 和快速石 蜡切 片两 种。脑 组织快速进检标本 由于组织较小且 质地疏松 、 以制 成优质 难 的快 速病 理切片 。本文 就使 用超声 渡处理 仪对脑 组织 进行 快速石蜡切片并 和冷冻切片进行 比较 。
・
学 习班 通 知 ・
全军皮肤 病中心 、 空军 总医院与北京协 和医院皮肤科将 于 ２ Ｏ 年 ４月上 中旬在北 京联 台举 办为期 ２ 的皮肤病理 学 习 ０２ － 周
班（ 第二期 ）参加者授予医学继续教育学分 加 分。奉 次学习班 由北京协 和医 院王家 璧教授 和空军 总医院赵广 主任医师 主要 ．
石蜡切片和冷冻切片制作流程
石蜡切片和冷冻切片制作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!一、石蜡切片制作流程1. 取材：从生物体上取下需要观察的组织或器官，切成适当大小的块状。
组织病理切片以及HE染色之欧阳育创编
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处之欧阳与创编
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么1、2、从一抗的选择方面来看。
有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
2、从研究目的来看。
石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
3、从抗原的保真性来看。
冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
4、从操作步骤的繁琐程度看。
染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。
5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。
这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。
当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
编辑本段冰冻切片的应用（1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。
（2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。
冰冻切片详细说明之欧阳引擎创编
冰冻切片详细说明欧阳引擎（2021.01.01）切片技术最早期是从冰冻切片开始，后来逐步有了发展和更新，冰冻切片弥补了石蜡切片和火棉胶切片之不足，石蜡切片和火棉胶切片需时太久，且在制片中要使用许多化学试剂，石蜡切片还需要加温过程，因而某些重要的不稳定的组织成分如脂类、酶以及抗体等，可能被溶解和破坏。
冰冻切片过程较简单，无须经过上述步骤，组织中的水分起着包埋剂的作用，组织经固定或不固定即可进行冰冻切片，切片厚度一般可在6-8微米，组织没有收缩，易保持生活时原有状态，是保存脂肪组织，许多神经组织特殊染色方法和组织化学方法，特别是酶的活性十分理想的切片方法，对于外科临床诊断和现代免疫荧光诊断，冰冻切片也很重要。
其缺点是组织过大不易冰冻，连续切片困难。
5微米以下切片不易成功。
但是随着现在冰冻包埋液的不断改进，已经能切出少于3微米的切片一、直接冰冻切片法冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。
组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。
1．恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。
目前恒冷箱切片机的品种较多。
此种切片适用于科研和教学上的连续切片。
要求预先开动电源（预冷准备），配多种固定组织台，以便更换组织。
2．甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制，其冷却速度比较快，属于开放式，作一般常规冰冻切片用。
3．二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。
打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，将二氧化碳关闭，即可切片。
若组织冷冻过硬则切片易碎；组织冷冻硬度不足，则切片呈粥糜状，需用间歇方法继续冷却。
硬度一般在刚开始解冻时最合适，应迅速切片。
4．半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上，滴加少许蒸馏水，调好切片机的厚度。
先接通热器的循环流水，然后接通电源，电源的正负极切勿接反，用整流电源控制温度。
二、明胶冰冻切片法明胶包埋法一般多用于冰冻切片易破碎的组织，特别是某些有树枝状突起的组织，当其切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失，某些间隙较多的组织，有时会因发生散乱而失去相互间的联系，可形成移位现象。
术中快速冰冻诊断之欧阳文创编
1、什么叫“冰冻切片”？冷冻切片是利用物理降温的方法将新鲜的组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片的技术方法。
与石蜡切片相比，由于冷冻切片不需脱水包埋因此制片速度快，是为手术进行中的临床医师提供病理诊断的良好方法。
冷冻切片的不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。
冷冻切片目前最广泛应用于临床手术中的病理诊断，手术医生根据病理诊断结果决定手术范围。
2、什么叫“术中快速冰冻切片病理诊断（快速活检）”？手术中快速活体组织病理学检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题请求病理医师快速进行的急会诊，它是一种高技术、高难度、高风险的项目，是临床病理实践中最重要、最难的一项工作。
快速活检要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片（或快速石蜡切片）的观察，向手术医师提供的参考性病理诊断意见。
与常规石蜡切片的病理诊断相比，快速活检会诊具有更多的局限性和误诊的可能性。
有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。
因此，应向临床医师说明快速活检的：①局限性、②适用范围、③慎用范围和④不宜应用范围。
3、“快速活检”的适用范围：①需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤／良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本。
②了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。
③确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。
④确认切除的组织，例如甲状旁腺、输卵管、输精管及异位组织等。
4、“快速活检”的慎用范围：涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。
需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。
5、“快速活检”的不宜应用范围：①疑为恶性淋巴瘤。
②过小的标本（检材长径≤0.2cm者）。
③术前易于进行常规活检者。
④脂肪组织、骨组织和钙化组织。
⑤需要依据核分裂象计数判断良、恶性的软组织肿瘤。
⑥主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。
石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法之欧阳治创编
石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法时间2021.03.10 创作：欧阳治1、组织的采集、固定和保存：采取组织后，方法一：4%多聚甲醛（4%PFA）4 C 固定1小时（根据组织大小和致密程度调整固定时间）或过夜方法二：采用bouin’s固定RT 2h（6-8d tesis）or RT 过夜（成年 tesis）PBS缓冲液洗三次，每次5min，4C保存于70%乙醇中。
2、组织的包埋、切片、展片及保存：：固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，52-54C石蜡包埋，常规切片，切片厚4 -10m，贴于处理过的干净载玻片上，37C烤片过夜，之后收集于载片盒中，RT密封保存。
石蜡包埋：保存于4 C 70%乙醇中的组织样品80%乙醇 15 min95%乙醇 15 min100%乙醇 15min 21/2乙醇1/2二甲苯 15 min二甲苯透明 5-10 min1/2二甲苯1/2石蜡 30 min石蜡（1） 1.5hr石蜡（2） 1.5-2.5hr石蜡（3）包埋RT保存3、石蜡组织切片的免疫组化方法：密封保存于RT的组织切片二甲苯(1) 20 min二甲苯(2) 20 min100%乙醇20min95%乙醇10 min80%乙醇10 min通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈切片在PBS中浸泡 5 min*20.4%Tritonx RT 10 min切片在PBS中浸泡 5 min*33%H2O2 RT 10min切片在PBS中浸泡 5 min*30.25%胰酶RT 10min切片在PBS中浸泡 5 min*3Blockingbuffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS) RT 60min倾去blocking buffer，勿洗一抗4 C overnight in blocking buffer取出切片复温1h，切片在PBS中浸泡5 min*3二抗in blocking buffer GAR1：200 （GAM1：100），RT 1h切片在PBS中浸泡 5 min*3DAB显色5-10min（50微升A+50微升B+900微升PBS+5微升3%H2O2）如果是增强型DAB只要1min即可。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA 固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
石蜡切片和冷冻切片之欧阳法创编
石蜡切片和冷冻切片——傻傻分不清楚系列在组织实验中，组织切片和冷冻切片是最常见的两种切片方法，两种优缺点明显，在实验的应用上也大有不同。
而两个实验的相同点都是应用免疫学基本原理——即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内蛋白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究。
一、石蜡切片组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
1、固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2、脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3、透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4、浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5、包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6、切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为5微米，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7、贴片与烤片：将水浴中展片捞至玻片上铺正，然后将载玻片放入37℃温箱中干燥。
8、切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9、染色：经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
冰冻切片与石蜡切片的区别之欧阳引擎创编
1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。
其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。
欧阳引擎（2021.01.01）冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。
一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。
冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。
因此，应尽量降低冰晶的数量。
Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。
C,从-30。
C降至-43。
C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。
基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。
（1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。
C43。
C的时间，减少冰晶的形成。
其方法有二：①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。
将组织（大小为1cm×0.8cm×0.5cm）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。
②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。
（2）将组织置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。
石蜡切片详细步骤之欧阳法创编
石蜡切片1.2.仪器石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2. 试剂FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
3.取材幼嫩的油菜植株叶片和茎4.方法与步骤(参照)1．固定：FAA固定液固定48小时以上。
2．脱水：50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。
每级2h。
100%酒精中1.5h。
其中70%酒精处可长期保存。
3．透明：1/2二甲苯+1/2无水乙醇(2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h)4．浸蜡：将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。
5．包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。
6．切片对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。
但不可太多。
切面的上、下边平行。
用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。
检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。
7．粘片将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。
最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。
8．脱蜡脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(10-20min)→纯二甲苯(5-10min) 9．染色将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→1%番红染色(4h以上)→50％酒精→70％酒精→85％酒精→95％酒精→0.5%固绿(1min)→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min)10．胶封滴加加拿大树胶封藏。
卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的比较分析
卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的比较分析发布时间：2023-04-21T05:53:38.609Z 来源：《中国医学人文》2023年2期作者：杨艳青[导读] 目的对比研究卵巢肿瘤疾病患者采用快速冰冻切片与石蜡切片技术实施病理诊断的临床价值杨艳青哈尔滨市第四医院黑龙江哈尔滨150026【摘要】目的对比研究卵巢肿瘤疾病患者采用快速冰冻切片与石蜡切片技术实施病理诊断的临床价值。
方法选择2021年1月-2022年6月在我院接受手术治疗后证实为卵巢肿瘤疾病的患者70例，根据病理学检查切片技术的不同将其分成对照组和研究组。
对照组中35例患者采用石蜡切片技术；研究组中35例患者采用快速冰冻切片技术。
对比两组操作时间、病情确诊时间、住院时间、误诊率、漏诊率、延迟确诊率。
结果研究组研究对象操作时间、病情确诊时间、住院时间短于对照组，组间数据比较差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组误诊率、漏诊率、延迟确诊率低于对照组，组间数据比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论卵巢肿瘤疾病患者采用快速冰冻切片实施病理诊断，不仅仅能够大幅度缩短操作时间、病情确诊时间、住院时间，还能够降低误诊率、漏诊率、延迟确诊率，使诊断的准确性提高。
【关键词】卵巢肿瘤；快速冰冻切片；石蜡切片；病理；诊断卵巢肿瘤属于病理类型相对较多，组织学形态表现较为复杂的一种女性生殖系统肿瘤类疾病。
没有生产史、绝经晚、月经初潮早的女性属于该病的高发人群。
由于卵巢肿瘤病灶通常处于人体腹腔的深部位置，常规影像学技术在病变性质判断方面的表现往往不是十分理想，误诊、漏诊等不良事件发生的风险程度也会因此加大，术后转移、复发等情况时有发生。
为使上述现状能够尽可能得以扭转，临床研究认为在术前对卵巢肿瘤的病理类型进行充分明确显得较为关键[1]。
本文对比研究卵巢肿瘤疾病患者采用快速冰冻切片与石蜡切片技术实施病理诊断的临床价值。
汇报如下。
1 资料和方法1.1 一般资料选择2021年1月-2022年6月在我院接受手术治疗后证实为卵巢肿瘤疾病的患者70例，根据病理学检查切片技术的不同将其分成对照组和研究组。
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石蜡切片和冷冻切片——傻傻分不清楚系列
欧阳光明（2021.03.07）
在组织实验中，组织切片和冷冻切片是最常见的两种切片方法，两种优缺点明显，在实验的应用上也大有不同。
而两个实验的相同点都是应用免疫学基本原理——即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内蛋白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究。
一、石蜡切片
组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
1、固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组
织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2、脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3、透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不
能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4、浸蜡：
先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5、包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6、切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为5微米，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7、贴片与烤片：将水浴中展片捞至玻片上铺正，然后将载玻片放入37℃温箱中干燥。
8、切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9、染色：
经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
二、冰冻切片：
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因多应用
于手术中的快速病理诊断。
一、取材：应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。
二、速冻：
1、将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）。
2、如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内。
3、当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
4、在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
5、若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
三、固定：
1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。
2、取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
3、组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min。
四，切片：
1、恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-10μm。
2、切片时，低温室内温度以-15℃ ~ -20℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
3、切好室温放置30min后，入4℃丙酮固定5-10min，烘箱干燥20min。
PBS洗5min×3。
4、进行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却。
可用3%H2O2孵育5-10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
五、免疫荧光染色：
1、冰冻切片室温晾干15min，可用含10%正常山羊血清的PBS室温封闭切片1小时（此步可不洗）。
2、滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液（抗体的量视组织大小而定，原则是可以均匀覆盖组织面，且保证整个过程中不会使组织干涸）。
3、将切片放在加了PBS的免疫组化湿盒，室温孵育2小时或4℃过夜。
4、第二天先将湿盒放到37℃回温1h，然后吸取片上的一抗进行回收，将切片插入到小染缸PBS冲洗。
5、滴加用PBS稀释好的二抗（避光）置于分子杂交箱中37℃孵育1小时。
回收二抗，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次。
6、滴加DAPI工作液染核，室温10-20min（工作浓度0.1%染色
15min）。
7、回收DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减封片剂或中性树胶，用处理干净的盖玻片封片，即可到荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察拍照。
8、做好的切片放在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周左右。
对比：。