个人总结的MTT方法 - 360文档中心

MTT实验心得2

MTT实验心得MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。

MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。

由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。

1、培养好细胞点板。

养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。

如果知道了细胞的名字，就可以上检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。

当然可以根据自己实验要求进行修改。

由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞浓度是最难掌握的，这一点笔者的心得如下：自己先将细胞养一段时间，大概了解细胞的增殖情况，在MTT检测时实际上要求细胞大概能长满96-孔板的80-90%，如果打算养48小时就检测，根据细胞的生长情况反推点板时的细胞浓度状况。

这时可以将细胞不进行计数，将消化好的细胞混匀后（可能是10 ml）直接在一个废弃（最好进行过无菌处理）的96孔板中依次加入180、100、50微升细胞，将细胞放置几分钟就会沉到板底了，这时在显微镜下观察，推测哪个孔的细胞48 h能基本长满板底，假设50 微升的孔比较合适，而点板时没孔需点200 微升，那么就将细胞浓度再稀释4倍就可以正式点板了，这时顺便将细胞进行计数（因为实验记录要求写啊）。

这样就OK了！如果细胞还太多，将细胞稀释4倍后再重复以上操作。

注意：不要过分信赖细胞计数，因为细胞计数的取样量为20 微升左右，由于颗粒的分布不均匀，代表性是很差的。

建议：细胞计数一定要会，但不要完全依赖它。

点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，最好用排枪，否则，MTT的SD会狂大。

2、点板布局。

其实这一点很多人不懈一顾。

如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。

因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为“边缘效应”这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。

MTT总结--sssholy

药物MTT实验步骤(贴壁细胞)----个人改进版By sssholy (2012-10-22)(sssholy@)1. 边缘孔用无菌PBS充填。

收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度为50000个/ml，每孔加入100ul 细胞悬液(每孔5000个细胞)。

注：⑴每次加入细胞都使枪头贴着孔底边缘(最好相同位置)，缓慢加入100ul细胞悬液。

孔加入顺序：可从上到下，从左到右依次加入。

⑵为了保证细胞密度均匀，最好每加3-5列细胞混匀一下细胞悬液，避免因重力沉降导致细胞密度不均。

⑶每块96孔板加完细胞后，应拿起板子前后左右水平摇晃几下（勿旋转摇晃），使细胞均匀分散。

⑷一般设6个复孔（B-G行），对照孔非常重要，且变异大，故设2列（2，3列为对照孔），4-10或4-11列为给药孔。

⑸边缘孔用无菌PBS充填，2-11列均可加入细胞。

因为要设置调零孔（即不加细胞孔），所以可将第11列设为调零孔，也可将第12列的无菌PBS孔在第2天加药时改为调零孔。

2. 细胞放入培养箱培养，待贴壁后第二天给药（通常前一天下午或晚上铺板，第2天上午给药）。

给药方法：先配好药（用EP管配好药），再拿出96孔板，弃去原有培养液（可不用PBS洗，太麻烦了），加入药物。

注：⑴MTT加药时都是先配药再弃去原培养液，最后加入药物。

切勿先弃去原有培养液再配药，⑵药物是用母液溶于无血清培养基配成工作液，事先算好对照孔，药物孔，调零孔如何配制，如何设置加药顺序。

一般越靠中央的孔变异越小，故最重要的给药孔一般放在最中间，次要孔放边缘，⑶如果某个给药孔需加入2种药物，一般需要一种药物先预处理1-2h（预处理药物可用Ep管配好后再分别加入各孔），1-2h再加入另一种药物（直接加入各孔）。

3.细胞放入培养箱培养24h（或其他指定时间）。

4. 药物作用结束后，每孔加入20ul---MTT(5mg/ml)，培养3-4h。

若药物能与MTT反应，可先弃去原培养液，再加入含MTT的培养液（无血清培养液：MTT=5：1配制）。

MTT原理方法及操作步骤

MTT原理方法及操作步骤MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种常用的细胞增殖测定试剂，用于定量测定细胞的存活情况。

MTT的工作原理：MTT原理是基于还原型特种金属试剂Florida Cyanide。

MTT可进入细胞内部，被活细胞内的膜连蛋白酶还原为水溶性紫色化合物，甲基化噻唑胺盐（formazan）。

甲基化噻唑胺盐可溶于有机溶剂如DMSO或乙醇。

MTT的量越多，被还原为甲基化噻唑胺盐越多，即细胞活性越高。

MTT的操作步骤：1.预处理细胞将需要检测细胞的培养基倒入培养皿中，将获得的细胞悬液加入培养基中，根据实验要求进行设定浓度和培养时间。

2.处理试剂根据常规的MTT工作浓度（通常为0.5 mg/ml），将MTT试剂精确称取并溶解在无菌的溶剂（例如PBS）中。

3.细胞处理将培养中的细胞培养液抽取约100μl至新的96孔板孔中，并注意控制每个孔中细胞数相同时的培养基体积。

4.加入MTT试剂将所制备的MTT溶液以100μl的体积的溶液加入到培养细胞上，并尽量在操作中迅速搅拌均匀，以使MTT均匀分布。

5.细胞孔板孔的处理将MTT试剂添加到孔中后，覆盖板密封（如用保鲜膜密封）。

然后将培养皿放入暗处，37°C培养孔中的细胞进行inculbation与MTT碳酸酯酶的反应。

通常培养12至24小时，可以根据具体实验情况延长培养时间。

6.细胞孔中溶解甲基化噻唑胺盐将培养平皿中的培养液取出约50μl，悬浮溶解掉的甲基化噻唑胺盐，再加入200μlDMSO混合均匀。

7.测定吸光度将孔中的溶液分别转移到透明壁的96孔板，并使用微孔板阅读装置（Multiskan Spectrum）在570 nm波长下测定吸光度。

DMSO溶液作为空白参照，用作光强的基准。

8.数据分析根据检测吸光度得到的数据，计算出每个孔的平均值，并根据实验要求，进行数据图表分析。

总结：MTT法是一种可靠、灵敏、简单、可重复性好的细胞增殖测定方法。

干货分享MTT—想说爱你其实不难

干货分享MTT—想说爱你其实不难本人科研狗一只，整理了一篇与MTT实验相关联的细节操作和注意事项，虽然MTT在被CCK-8逐渐替代，但是一定有很多人和小编一样，在MTT上不断地入坑，再不断地爬出来。

日常实验中用MTT检测无非是药敏试验和细胞增值实验，实验成功的前提是细胞铺板的均匀性、一致性以及细胞活性。

所以一定要进行预实验：1、在预实验中，我们要摸清消化液的使用量。

比如说，小编养的是HUVEC(人脐静脉内皮细胞)，正常传代时使用0.25%+0.53mM EDTA胰酶消化液2ml，孵箱消化4-5min，但是在铺板时，建议不要消化太长时间，主要靠后期加入等量培养基缓慢吹打下细胞，因为96孔板并没有给细胞生长提供很大的空间，前期消化时不能太过破坏掉细胞的贴壁性。

2、在预实验中，我们要摸清楚细胞量。

用于MTT实验检测的细胞，需是处于对数期阶段的细胞，所谓的对数期，就是生长较快的那个阶段，可以通过牛鲍计数板或者细胞计数器进行计数，药敏试验调整到5000个/100ul，细胞增殖实验调整到10000个/100ul。

一、药敏试验1、如图所示，红线标注的边缘孔用PBS填充，每孔加入约5000个/100ul的细胞量，这里有个加细胞的小贴士：我们平时加细胞的时候会发现，明明枪头指向培养皿中间，但是待细胞贴壁后，还是边缘区多余中心区，所以在铺板时，每次加入细胞的枪头贴着96孔的四周，转圈缓慢加入。

2、一行12个孔，个人习惯设置两个PBS填充孔，两个对照孔，两个空白孔，6个复孔，即2-3列对照，4-9列复孔，10-11空白（对照孔加细胞、培养基和MTT试剂、DMSO;空白孔加培养基、MTT和DMSO）3、每块96 孔板加完细胞后，前后左右水平摇晃几下，使细胞均匀分散。

4、放入孵箱培养，待贴壁后加药（铺板后24小时即可加药）。

用基础培养基配制药物，配好后再弃去空中原有的培养基。

5、放入孵箱中培养指定的时间。

6、药物作用结束后，每孔加入50ulMTT试剂，培养4h。

MTT用法强大总结

MTT用法强大总结一、安装和使用MTT1.安装MTT- 在Linux系统上，可以通过包管理器（如apt、yum等）安装MTT。

2.使用MTT- 打开终端或命令提示符，输入“mtt”命令即可启动MTT。

二、常用命令和功能1.创建表格- 使用命令“create”或“c”可以创建一个新的表格。

-可以指定表格的行数和列数，或者直接在命令行中输入表格的内容。

2.插入和删除行列- 使用命令“insert row”或“ir”可以在指定位置插入一行。

- 使用命令“insert column”或“ic”可以在指定位置插入一列。

- 使用命令“delete row”或“dr”可以删除指定位置的行。

- 使用命令“delete column”或“dc”可以删除指定位置的列。

3.填充单元格- 使用命令“fill”或“f”可以填充表格的指定范围（行、列、或整个表格）。

-可以填充具体的数值、随机数、日期等。

-可以指定填充的规则和格式，如步长、小数位数等。

4.排序和筛选- 使用命令“sort”或“s”可以对表格的指定列进行排序。

-可以按升序或降序进行排序，也可以指定多个排序属性。

- 使用命令“filter”或“fl”可以根据指定的条件筛选表格的行。

5.合并和拆分单元格- 使用命令“merge”或“m”可以合并指定范围内的单元格。

- 使用命令“split”或“sp”可以拆分指定单元格为多个单元格。

6.导出和导入表格- 使用命令“export”或“e”可以将表格导出为各种格式，如Markdown、CSV、HTML等。

- 使用命令“import”或“i”可以从外部文件导入表格。

三、MTT的优势和应用场景2.支持大规模表格的处理。

-MTT可以处理大规模的表格，不受行列数限制，适用于处理复杂的数据表格。

3.提供灵活的数值填充和处理功能。

-MTT可以根据指定的规则和格式填充单元格，如根据数值序列、随机数、日期等填充。

-MTT还提供了一些常用的数值处理功能，如合计、平均值、最大最小值等。

【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全[修改版]

第一篇：【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全【整理总结】关于MTT实验总结－－心血啊！MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。

MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。

还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。

也可以用DMSO来溶解。

MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。

实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。

每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。

4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。

（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。

在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。

（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。

mtt 法

mtt 法
MTT法，即麻醉、体位、时间法，是临床常用的评估和管理术语，其目的是确保手术患者在手术过程中得到最佳的麻醉效果，减少手术过程中的危险因素，提高手术成功率和患者康复率。

麻醉是指通过药物或其他方法，使患者失去疼痛感觉和意识。

在手术前，麻醉师会对患者进行详细的麻醉评估，包括患者的身体状况、过敏史、用药史、家族病史等，以确定最合适的麻醉药物和剂量。

在手术过程中，麻醉师会不断监测患者的生命体征，如心率、血压、呼吸等，以确保患者在手术过程中的安全性。

体位是指手术患者在手术过程中的姿势。

正确的体位可以使手术过程更加顺利，同时减少手术风险。

例如，对于背部手术，患者应该采取平躺的姿势，以保持脊柱的稳定性。

对于腹部手术，患者应该采取半坐位或头低脚高的姿势，以减少手术过程中的出血量。

时间是指手术过程中的时间安排。

手术时间应该合理安排，避免手术时间过长或过短。

手术时间过长会增加手术风险和并发症的发生率，而手术时间过短则可能导致手术效果不佳。

因此，麻醉师和外科医生应该根据手术的复杂程度和患者的身体状况，合理安排手术时间。

除了麻醉、体位、时间外，MTT法还包括其他因素的考虑，例如手术器械和设备的准备、手术室的环境和卫生等。

这些因素的合理考
虑和管理，可以最大程度地保证手术的安全性和成功率，同时提高患者的康复率和生活质量。

MTT法是手术过程中重要的管理方法，麻醉师和外科医生应该认真考虑和实施，以确保手术的安全性和成功率。

同时，患者也应该积极配合，遵从医生的建议和指导，以获得最佳的手术效果和康复效果。

MTT方法总结

MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。

formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm 和570nm处进行比色。

所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。

2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。

MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。

(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。

终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。

(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。

以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。

MTT法原理步骤以及注意事项

MTT法原理步骤以及注意事项MTT法（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide法）是一种常用的细胞活力检测方法。

它通过测量细胞对MTT染料的还原能力来评估细胞的代谢活性和存活率。

MTT法的原理简单，步骤清晰，但也需要注意一些关键点以确保结果的准确性。

下面将详细介绍MTT法的原理、步骤以及注意事项。

1.原理：MTT是一种黄色的可溶性染料，它可以进入活细胞并被还原为紫色的形式，同时在还原过程中生成的产物能够积累在细胞内，形成紫色晶体结构。

这种紫色产物可以通过加入有机溶剂（如二甲基亚砜或二甲基甲酰胺）来溶解，并且通过测量其吸光度，可以对细胞的代谢活性进行定量分析。

2.步骤：MTT法通常包括以下步骤：步骤一：培养细胞首先，需要将细胞培养在含有适当培养基的组织培养皿中，并放置在37°C的恒温培养箱中培养到细胞达到一定密度。

步骤二：接种细胞将需要检测活力的细胞接种在96孔板中，每孔含有适当数量的细胞。

通常每孔含有约1×10^4至5×10^4个细胞。

步骤三：添加MTT染料将MTT染料溶液加入到每孔中，使其与细胞均匀接触。

染料浓度通常为0.5至1mg/mL。

步骤四：孵育细胞将96孔板放回恒温培养箱中，继续孵育细胞。

通常在37℃下孵育2至4小时，使细胞有足够的时间还原MTT染料。

步骤五：加入溶解剂去除培养液后，加入溶剂（如DMSO）溶解产生的紫色晶体。

溶剂的用量通常为100µL至200µL。

步骤六：测量吸光度用多通道酶标仪或分光光度计测量溶液的吸光度。

使用波长为570nm 至650nm的滤光片进行测量，同时使用一个基准波长（例如630nm）来进行校正。

3.注意事项：-MTT染料的浓度和作用时间应根据实验要求进行优化。

过高的浓度可能引起细胞中产生结晶体积过大，影响测量准确性。

-为了确保细胞的一致性和准确性，需要在实验开始前培养细胞的时间和条件相同。

mtt 法

mtt 法MTT法：一种有效的心理治疗方法MTT法是一种心理治疗方法，全称为“心理动态思维训练法”（Mental Dynamic Thought Training）。

它是由美国心理学家阿尔伯特·埃利斯（Albert Ellis）创立的，旨在帮助人们改变消极的思维模式，从而减轻心理压力和焦虑。

MTT法的基本原理是：人们的情绪和行为是由他们的思维方式所决定的。

如果一个人的思维方式是消极的，他就会感到沮丧、焦虑和无助。

相反，如果一个人的思维方式是积极的，他就会感到自信、乐观和有力量。

因此，MTT法的目的是帮助人们改变他们的思维方式，从而改变他们的情绪和行为。

MTT法的具体步骤如下：1. 识别消极思维模式需要识别自己的消极思维模式。

这些消极思维模式可能是“我不行”、“我一定会失败”、“我不值得被爱”等等。

这些思维模式会导致人们感到沮丧、焦虑和无助。

2. 挑战消极思维模式接下来，需要挑战这些消极思维模式。

这可以通过问自己一些问题来实现，比如：“这个想法是否真实？”、“我有证据证明这个想法是正确的吗？”、“这个想法是否有用？”等等。

通过这些问题，人们可以开始质疑自己的消极思维模式，并找到更积极的思维方式。

3. 替换消极思维模式一旦人们开始质疑自己的消极思维模式，就可以开始替换它们。

这可以通过找到更积极的思维方式来实现。

比如，如果一个人的消极思维模式是“我不行”，他可以替换为“我可以做到”。

这种积极的思维方式会让他感到更自信和有力量。

4. 实践新的思维方式需要实践新的思维方式。

这可以通过反复地告诉自己新的积极思维方式来实现。

比如，一个人可以在每天早上告诉自己“我可以做到”，并在遇到挑战时使用这种积极的思维方式。

通过反复实践，人们可以逐渐改变他们的思维方式，从而改变他们的情绪和行为。

MTT法的优点在于它是一种简单而有效的心理治疗方法。

它不需要人们去回忆过去的经历或者深入探讨他们的情感问题。

相反，它只需要人们关注他们的思维方式，并帮助他们改变它们。

MTT用法强大总结

MTT经验总结细胞：1.选择适当的细胞接种浓度。

一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。

但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。

这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。

否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。

2.药物浓度的设定。

一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。

根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。

切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。

3. 时间点的设定。

在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。

4.培养时间。

200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。

5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。

做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。

6.理论未必都是对的。

要根据自己的实际情况调整。

7.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。

调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。

对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。

8.避免血清干扰。

用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。

由于试验本底增加，会试验敏感性。

因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。

在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。

实验步骤贴壁细胞：1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

MTT原理及实验心得

MTT法原理：活细胞线粒体中的脱氢酶能够还原黄色的溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyiterazolium bromide,MTT]为篮紫色的不溶于水的甲瓉（formazan）,甲瓉的多少可通过酶标仪测定其在490nm处的OD值而得知。

因为甲瓉生成量在通常情况下与活细胞数成正比，因此可以通过OD值推测活细胞数目，了解药物抑制或杀伤肿瘤细胞的能力。

其原理是很清楚，但是我是做的海洋微生物抗肿瘤药物筛选，将发酵液作为筛选对象，有抗肿瘤活性的继续做，但是我做了很多样本，用SGC7901肿瘤细胞做筛选，结果用MTT法检测，得到抑制率都是负的％二百多，也就是好像有促进肿瘤细胞生长作用，我不知道为什么？是不是用MTT法检测有什么弊端，请各位大侠讨论一下。

1、可能你的药物有颜色，可以在细胞内沉积，又能被最后的溶剂溶解。

2、你的药液成份和浓度都不清楚，又不能定量，最好能够通过别的途径检测一下你的药液的主要成份和浓度。

或者能够知晓是哪类成份也有帮助。

3、MTT单次的结果可能不是很稳定，但多次结果是可信的。

4、跟操作方法有一定关系，96孔板的最外围36孔只能单加培养液，不能养细胞测OD值，只能使用中间的60孔测OD值，因有边缘效应存在。

5、可以将你的发酵液用膜过滤，分成几种不同粒径的样品，分别冻干，用培养基溶解。

我做过一些蛋白的抗肿瘤筛选，有的蛋白有明显促肿瘤增殖作用。

有的多糖也有促肿瘤生长作用。

所以我认为最关键的是样品的处理问题。

MTT法的操作要比较仔细，测定的细胞抑制率和IC50是可以重复的。

1.我的样品是发酵液，不会有染色，而且是在吸出培养液后在加入新鲜的培养液再加MTT的，所以药物的影响基本可以排除。

2.我的粗发酵液，只是粗筛，没办法弄出它是什么成分，如果弄出成分啦，我就毕业啦。

3.边缘效应不会有，在吸出培养液后在加入新鲜的培养液再加MTT的，所以边缘效应可以排除。

MTT使用讨论总结(附MTS测定方法)

本实验室也有人据此而仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增殖程度，做药物对细胞株生长的影响时，我想细胞增殖程度应该是比较重要的指标，怎可马虎行事。

请高手指点迷津！bengbu_bli 用普通血球计数板计数增殖细胞的数量，只要检测的细胞样本数量不是非常大，只要能够数得过来，而且一般来讲，都是熟练者计数的话，应该是比MTT法要准确的多。

据了解，国外许多档次不低的杂志都是认可这种经典或传统计数细胞的方法的。

midas丁香园主任是的，只要idea巧妙有创意，而用于证明他们的方法都是次要的！diandian眙盼蓝、MTT确实不是一个好的方法，国外的许多杂志已不太使用，国内还认可的。

关键是整篇文章的思路和结构，好的idea是很重要的。

我的一个师姐的文章就被提出眙盼蓝、MTT的问题，但最后编委认为整篇文章的思路很好，也就不计较眙盼蓝、MTT的问题了。

实属兴运。

杂志Cancer Research Therapywm_ni丁香园主任国内由于实验条件的问题，应用H3的还是不多，而以MTT为主，以我的经验眙盼蓝计数法误差确实很大，所以不知道bengbu_bli的观点源自何处，另外如果有一个好的idea，如果不能用好的方法去证实，实在是一种遗憾，当然发不发还是要看编辑了。

用于药物筛选的细胞毒性测定方法总结

用于药物筛选的细胞毒性测定方法总结简介药物筛选是新药研发过程中的重要环节之一。

细胞毒性测定方法是评估药物候选的安全性和毒性的常用手段。

本文档总结了常见的用于药物筛选的细胞毒性测定方法，并对其原理和应用进行了简要介绍。

细胞毒性测定方法1. MTT法MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）法是一种常用的细胞毒性测定方法。

该方法通过测定细胞内还原MTT为紫色形成的甲基蓝晶体的量来评估细胞的生存率。

MTT法简便、快速，适用于评估化学物质对细胞的毒性。

2. SRB法SRB（sulforhodamine B）法也是一种常见的细胞毒性测定方法。

该方法利用SRB染色与细胞蛋白质结合来评估细胞的生存率。

SRB 法具有操作简便、结果稳定的特点，广泛应用于药物筛选领域。

3. LDH法LDH（lactate dehydrogenase）法是衡量细胞膜完整性的常用方法之一。

该方法通过测定培养上清液中乳酸脱氢酶的活性来评估细胞膜的破坏程度。

LDH法对细胞毒性的灵敏度高，适用于评估药物的细胞毒性。

4. ATP酶法ATP酶法是通过测定细胞内ATP酶的活性来评估细胞的生存能力的方法。

该方法适用于高通量筛选，可以同时评估大量化合物对细胞的毒性。

ATP酶法操作简单、快速，是药物筛选中常用的细胞毒性测定方法之一。

结论细胞毒性测定方法在药物筛选中扮演着重要的角色。

本文总结了常见的MTT法、SRB法、LDH法和ATP酶法，这些方法具有操作简便、结果可靠的特点，适用于评估药物候选的细胞毒性。

根据具体需求和实验条件选择合适的细胞毒性测定方法，将有助于提高药物筛选的效率和准确性。

团队成员MTT本周个人工作总结：成就与提升方向

团队成员MTT本周个人工作总结：成就与提升方向2023年，MTT团队的每个成员在过去一周中都有了不同的成就和提升方向。

以下是每个成员的个人工作总结：赵明：本周我专注于研究大数据处理技术。

我参加了一些研讨会并学习了大数据处理的最新趋势和方法。

我还与同事合作制定了一份最新的大数据处理方案，将为我们的客户带来巨大的商业价值。

关于提升方向，我认为我需要更深入地学习人工智能技术，以便将它们应用于我们的产品和服务中。

李华：本周我在我们的产品测试中提前发现了一个重要的缺陷，并及时通知了开发团队。

我的行动节省了我们客户的时间和金钱，并提高了我们团队的生产效率。

作为提升方向，我会加强我的编程技能，特别是在自动化测试方面，以便更快地识别并修复缺陷。

陈宇：本周，我是我们团队的Scrum Master。

我确保了我们团队的每个成员都按时完成任务，并及时准确地报告了项目进度。

我还与其他团队合作，制定了一项新的产品计划，以满足我们客户的需求。

我的提升方向是学习更多的领导技能，成为更好的指导者和管理者。

王建国：本周我完成了一个重要的订单，获得了一个新的客户。

我通过深入了解客户需求，并与他们的技术团队合作，成功地实现了这个订单。

我的提升方向是学习更多的客户关系管理技巧，以便更好地与客户沟通，并增加我们的客户数量和忠诚度。

张琳：本周我负责设计我们新产品的用户界面。

我确保了产品的易用性和美观性，并准确地传达了我们的品牌价值。

我的提升方向是学习更多的用户界面设计技巧，并与我们的客户建立更紧密的联系，了解他们的需求和反馈。

总之，我们团队的每个成员都有不同的成就和提升方向。

我们将继续努力学习和改进，以使我们的团队在未来更加成功和创新。

MTT方法总结

MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。

formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm和570nm处进行比色。

所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。

2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。

MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。

(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT 溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。

终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO 振荡10min，使结晶物充分溶解。

(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。

以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。

MTT方法总结详解

MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。

formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm 和570nm处进行比色。

所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。

2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。

MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。

(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。

终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。

(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。

以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。

MTT原理及实验心得

MTT原理及实验心得MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）是一种常用的细胞代谢活性检测试剂，其原理是通过测量细胞对MTT的还原能力来评估细胞的存活率和代谢活性。

MTT溶液进入细胞内后，被细胞内还原酶（如线粒体呼吸链中的NADH和NADPH）还原为可溶的紫色产物，然后用溶剂将细胞中的紫色产物溶解出来，最后通过测量溶液的吸光度来评估细胞代谢活性。

MTT实验在细胞生物学和药物筛选中广泛应用，在实验中需要注意以下几点：1.细胞密度和培养时间：MTT实验中，细胞的初始密度和培养时间是影响实验结果的重要因素。

一般来说，细胞密度不能过低，否则会导致实验结果的可靠性降低；同时，培养时间也要控制好，细胞培养时间过长可能导致细胞的过度增殖，从而影响细胞的代谢活性。

2.MTT处理的时间和浓度：MTT的处理时间和浓度需要根据实验的需求和细胞的特性来确定。

一般来说，处理时间通常介于1-4小时之间，而处理浓度则需要根据具体细胞的特性来确定。

在实验中，不同的细胞对MTT的还原能力可能会有差异，因此需要进行实验优化和控制。

3.MTT颜色的溶解：MTT的还原产物是紫色的，所以在溶解过程中需要使用适当的溶剂。

常用的溶剂有二甲基亚砜（DMSO），其溶解能力较强，适用于大多数细胞。

在溶解过程中，需要充分摇匀，使细胞内的还原产物完全溶解，以确保实验结果的准确性。

4. 数据的分析：MTT实验得到的结果可以通过测量吸光度来评估细胞的代谢活性，常用的测量波长是570 nm。

一般来说，MTT实验得到的吸光度值越高，代表细胞的代谢活性越强。

然而，由于MTT实验只能评估细胞的整体代谢活性，而不能区分不同细胞群体中的代谢活性差异，因此在实验中需要结合其他方法来进一步分析数据。

在进行MTT实验的过程中，需要注意以下几点心得：1.优化实验条件：MTT实验的结果受到实验条件的影响很大，包括细胞密度、培养时间、MTT处理时间和浓度等。

MTT实验跟踪总结

MTT实验MTT实验第一阶段细胞培养：细胞传代与冻存…（此处略，苹果你已会！）MTT实验第二阶段（自己总结）细胞种板：往96孔板中接种适宜数量的细胞，并保证细胞在96孔板小孔中均匀分布，正常生长，是MTT实验成功的首要条件。

主要步骤：（1）.细胞生长：保证细胞处于对数生长期，简而言之就是将已基本铺满培养瓶底的细胞进行消化，但不传代，就是将旧的培养基换掉，让贴壁的细胞悬浮，并培养一天。

此时细胞处于对数生长期，细胞活力最好，有利于MTT实验的结果。

（2）.细胞消化：将昨天的细胞吸去旧的培养基（将死细胞吸走，可用过滤灭菌的PBS 溶液轻轻冲洗细胞），加入胰酶消化，随后加入适宜培养基（不宜过多，勿将细胞稀释的过稀，达不到种板所需的细胞浓度要求）。

切记利用吹打管将细胞吹打均匀（大量细胞会聚集在一起，细胞分散不均，吹打不匀会影响细胞计数的准确性及随后种板的均一性）；但吹打过猛过多也会影响细胞活力。

（3）.细胞计数：计数之前，应用75%酒精将计数器其载玻片擦拭干净，以免上面残留杂质影响细胞计数。

取一小滴（估计20ul左右）吹打均匀的细胞培养液沿细胞计数器上端凹槽轻轻缓慢打出滴下，此时小液滴会自动（虹吸原理）铺满细胞计算器的上部小方块（如图1）；将细胞计算器放置于显微镜下观察计数，找到左上、左下、右上、右下各4块16格的区域（如图2），数下各块区域的细胞数目，并记录数据（计数原则：当有细胞压16格外线时，记上不记下，记左不记右）。

得到细胞浓度。

计算公式为：细胞浓度=[（A1+A2+A3+A4）/4]*104/ml（4）.细胞稀释：就是将细胞稀释到接种于96孔板时细胞接种数目浓度。

每孔加入200ul，细胞数目（5000左右，个人认为）。

在稀释细胞是既要考虑接种浓度，也要考虑接种总共所需的细胞培养液体积（避免细胞浓度适宜，但体积不够接种于所需加样的小孔）（5）.细胞加样：每次加样前需要将细胞培养液振荡，加几孔最好吹打一下细胞培养液（防止有的细胞沉降），目的是将细胞混合均匀，保证种板的均一性。

MTT法原理、步骤以及注意事项

MTT法原理、步骤以及注意事项MTT法原理、步骤以及注意事项MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。

是一种黄颜色的染料。

MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。

其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

它的特点是灵敏度高、经济。

缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。

这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。

MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。

因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml 的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。

在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。

实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。

在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。

MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。