9 毛细管电泳

合集下载

毛细管电泳法

毛细管电泳法
毛细管电泳法
Capillary Electrophoresis, CE
毛细管电泳是带电粒子在 电场力的驱动下,在毛细 管中按其淌度或和分配系 数不同进行高效、快速分 离的电泳新技术,也称为 高效毛细管电泳。
20世纪30-40年代 蒂塞利乌斯 (A.W.K.Tiselius) 建立了移动界面电泳,将电泳发 展成分离技术 获得1948年诺贝尔化学奖
实验中,只发生电泳时有效淌度
μef =υef ﹒ (L /V) =( l / tm )﹒(L /V)
毛细管有效长度
迁移时间 毛毛细管细电泳管法 总长度
电压
2 电泳和电渗
电渗
与固液界面的双电层有着密切的关系
在毛细管壁双电层的扩散层中的阳离子,相对于毛 细管壁的负电荷表面,形成一个圆筒形的阳离子鞘, 在电场作用下,溶剂化了的阳离子,沿滑动面与紧 密层作相对运动,携带着溶剂一起向阴极迁移,便 形成了电渗流(electroosmotic flow , EOF)。
1981年 J.W.Jorgenson,K.D.Lukacs实验上和理论 上为毛细管电泳的发展奠定了基础。 上一世纪后二十多年分析化学领域中发展最迅速的分离 分析方法。
主要内容
毛细管电泳的原理 分离模式 进样与检测 毛细管电泳的应用
一 毛细管电泳的原理
1 装置
电极 缓冲液
毛细管
数据处理
毛细管电泳法
2 电泳和电渗
µeo正比于Zeta电势和介质的 介电常数
改变电渗流的方法
反比于介质的黏度
Zeta电势正比于双电层厚度 和界面有效电荷密度
1. 改变外加径向电场
反比于介质的介电常数
2. 改变缓冲液成分和浓度
Zeta电势
3. 改变缓冲液pH 4. 加入添加剂

毛细管电泳仪的优势介绍

毛细管电泳仪的优势介绍

毛细管电泳仪的优势介绍毛细管电泳仪是在分子生物学领域中广泛应用的分离和分析技术之一。

毛细管电泳仪的原理是将带电的DNA、RNA、蛋白质等生物分子在电场的作用下通过毛细管中的电泳缓冲液分离。

毛细管电泳仪的优势主要体现在以下几个方面。

高分辨率毛细管电泳仪具有高分辨率的优势。

由于毛细管内径只有数十微米,分子在得到相同电荷后在这么小的空间内分离,因此能够实现对分子的高分辨率分离。

这种高分辨率不仅能够分离不同大小的分子,还能够分离同分子不同异构体和不同修饰状态的分子,比如糖基化和磷酸化等。

快速高效毛细管电泳仪具有快速高效的优势。

由于毛细管内径小,缓冲液量少,所需的电场强度低,因此分析时间较短,通常只需要数分钟至半小时不等。

同时,由于分子在电场作用下迁移速度较快,分子的分离效率较高,对于一些具有快速分离、高通量分析需求的实验,毛细管电泳仪是一个理想的选择。

操作简便毛细管电泳仪具有操作简便的优势。

毛细管电泳仪的使用无需费时费力地制备大量试剂和设备,操作简便、样品准备简单,省去了复杂的前处理步骤,即可获得高灵敏度的分离结果,是一种快捷高效的实验方法。

灵敏度高毛细管电泳仪具有灵敏度高的优势。

由于毛细管内径小,对于小分子、低浓度样品的分析具有很高的灵敏度,常用于微量生物分子的分离和检测。

此外,在近年来的发展中,一些高灵敏度检测技术如荧光检测、激光诱导荧光检测等结合了毛细管电泳技术,使其灵敏度更加提高。

成本低毛细管电泳仪具有成本低的优势。

相比于传统的大型仪器,毛细管电泳仪體積小,占用空间少,使用维护成本低。

同时,毛细管电泳仪适用于多样品分析,不同基因跑不同的配置文件,不需要额外的分析时间和费用。

综上,毛细管电泳仪以其高分辨率、快速高效、操作简便、灵敏度高和成本低等优势成为现代分子生物学实验中应用广泛的分离和分析技术之一。

面对分子生物学中越来越多的实验需求,毛细管电泳仪必将发挥更加重要的作用。

说明毛细管电泳特点及应用

说明毛细管电泳特点及应用

说明毛细管电泳特点及应用
毛细管电泳是一种高效液相色谱技术,其基本原理是利用电场将带电粒子在毛细管中的移动速率和荷电量的差异进行分离和富集。

毛细管电泳具有高分离效率、快速分离、小量样品、自动化程度高等特点,已经成为了化学、生物、环境学等领域的一个重要分析工具。

其主要应用领域和特点如下:
1.分离生化分子
毛细管电泳可以用于分离和富集DNA、RNA、蛋白质、糖类和小分子有机物等生物分子。

这些生物分子在酸碱性、水解、氧化还原等条件下有不同的化学性质和电荷性质,可以被毛细管电泳技术精确分离和定量。

例如在DNA分离和定量方面,毛细管电泳已经成为PCR扩增产物检测、基因测序、DNA指纹鉴定等分子生物学技术中的重要手段。

2.分析环境污染物
毛细管电泳可以用于环境监测和食品安全检测等领域,可以对水、空气、土壤和食品中的有机和无机污染物进行快速准确定量分析。

例如利用毛细管电泳技术可以分析环境中的氨、硝酸盐、荧光增白剂、PESTICIDE 等有害物质含量,以及酒类中的苯甲酸、乙酸等有害物质。

3.分析药品和代谢产物
毛细管电泳可以快速、灵敏地分离和鉴定药品和代谢产物,具有药动学和毒理学研究的重要意义。

毛细管电泳技术节省反应时间,减少实验操作时间,可对液-液、液-固、固-液等反应进行分离和分析,得到精确的数据和结果。

如利用毛细管电泳技术,可以分析身体内的有机酸、氨基酸、代谢产物等物质。

总之,毛细管电泳技术在化学分析和生物分析中均有广泛应用,且已成为学术研究和工业生产的一种重要分离分析手段。

毛细管电泳仪

毛细管电泳仪

毛细管电泳仪一、引言毛细管电泳仪是一种重要的分析仪器,被广泛应用于生物、医药、环境等领域。

它利用毛细管中的电动作用来分离和测量化合物。

本文将介绍毛细管电泳仪的工作原理、仪器结构和应用领域。

二、工作原理毛细管电泳仪的工作原理基于电动机理以及化合物迁移速率的差异。

首先,将样品注入到毛细管中,然后在两端施加不同电压。

由于带电的分子在电场中会迁移,具有不同电荷的分子会被引导向不同方向。

根据物质的特性,可以选择正负电荷,使其向阳极(正极)或阴极(负极)迁移。

不同的物质在电场中的迁移速率也不同,所以通过测量它们从注射口到检测器的时间可以分析和鉴定样品中的各种化合物。

三、仪器结构毛细管电泳仪的基本结构包括毛细管系统、电源系统、检测系统和数据处理系统。

1. 毛细管系统毛细管系统主要包括供样器、毛细管、电极和载气管道。

供样器用于将样品引入到毛细管中,毛细管是实现分离的主要部件,电极用于施加电场,载气管道则用于排除气泡。

2. 电源系统电源系统提供电场,其主要包括电源、电源开关和调节器。

电源负责提供稳定的直流电场,电源开关用于控制电场的开关,调节器则用于调整电场的强度。

3. 检测系统检测系统用于检测样品的迁移,常用的检测方法包括紫外可见光谱检测、荧光检测和电导率检测。

根据需要不同的分析任务,可以选择不同的检测方法。

4. 数据处理系统数据处理系统主要包括数据采集和处理软件,用于记录和分析样品的迁移时间、峰面积等数据。

四、应用领域毛细管电泳仪在生物、医药、环境等领域有广泛的应用。

1. 生物领域在生物领域,毛细管电泳仪常用于蛋白质分析、核酸分析、糖类分析等。

它可以用于测定蛋白质的氨基酸序列和分离不同大小的DNA 片段,对于研究生物学过程和遗传变异有重要意义。

2. 医药领域毛细管电泳仪在医药领域的应用也非常广泛。

它可以用于药物代谢动力学的研究、药物分析和质量控制等。

通过毛细管电泳仪可以快速准确地分析药物的含量和纯度, 对药物研发起到关键作用。

毛细管电泳的分离原理

毛细管电泳的分离原理

毛细管电泳的分离原理
毛细管电泳(CE)是一种基于电动力和色谱分离原理的分析技术。

它利用毛细管中载带电荷的离子在电场作用下的迁移速率的差异来实现分离。

在毛细管电泳中,首先将样品注入到一条非常细的毛细管内,然后通过使毛细管两端施加电场来产生电动力。

当电场施加到毛细管上时,带电的分析物会受到电场力的作用而在毛细管内迁移。

不同的物质由于自身的特性,比如大小、电荷等,会以不同的速率迁移。

具体来说,有两种常用的毛细管电泳模式:
1. 毛细管凝胶电泳(CGE):在该模式下,毛细管内填充了哑离子聚合物凝胶,通过凝胶的孔道来实现分离。

样品中的离子在电场作用下,根据尺寸的不同,在凝胶中迁移速度也不同,从而实现分离。

2. 毛细管毛细管区带电泳(CZE):在该模式下,毛细管内不填充任何分离介质。

样品中的离子自行在毛细管中迁移,根据大小和电荷的不同,迁移速度也不同,从而实现分离。

总的来说,毛细管电泳的分离原理是利用样品中离子在电场作用下的迁移速率差异,根据大小和电荷特性,在毛细管中实现分离。

毛细管电泳法

毛细管电泳法

毛细管电泳法概述毛细管电泳法是一种分离和测定化合物的方法,主要通过在毛细管中施加电场,利用化合物在电场作用下的电荷性质和分子大小来实现分离。

毛细管电泳法具有快速、高效、高分辨率、高灵敏度和易于自动化等特点,广泛应用于生命科学、化学分析和药物研发等领域。

原理毛细管电泳法的原理基于化合物在溶液中的电荷性质和分子大小。

在毛细管中施加电场后,带正电荷的化合物(称为阳离子)会向负极移动,带负电荷的化合物(称为阴离子)会向正极移动。

此外,较小的分子会比较大的分子更快地移动。

毛细管电泳法通常涉及两种类型:区域电泳和溶剂前移电泳。

区域电泳区域电泳是毛细管电泳法中常用的方法。

在区域电泳中,毛细管中的电场强度不均匀,其中一个区域的电场强度较弱,另一个区域的电场强度较强。

样品被注入到电场强度较弱的区域,然后通过施加电场使样品向较强的电场区域移动。

不同化合物的迁移速度取决于它们的电荷和分子大小,因此可以实现化合物的分离。

溶剂前移电泳溶剂前移电泳是另一种常用的毛细管电泳法。

在溶剂前移电泳中,毛细管中的电场强度是均匀的。

样品被注入到毛细管中,然后施加电场使样品移动。

不同化合物的迁移速度取决于它们在溶剂中的溶解度和电荷性质,因此可以实现化合物的分离。

仪器和操作步骤进行毛细管电泳法需要一些特定的仪器和材料,如毛细管电泳仪、毛细管、高电压电源、样品注射器、电解质缓冲液等。

下面是一般的操作步骤:1.准备工作:检查仪器是否正常工作,准备所需的电解质缓冲液和样品。

2.毛细管准备:将毛细管切割为适当长度,并连接到毛细管电泳仪。

3.缓冲液填充:将电解质缓冲液注入毛细管的两端,确保整个毛细管都充满缓冲液。

4.样品注射:使用样品注射器将待分离的样品缓慢而均匀地注入到毛细管中。

注射点距离电极一定距离。

5.施加电场:从高电压电源上施加适当的电场,在实验过程中保持稳定电场。

6.记录结果:观察样品的迁移情况,根据需要调整电场强度和时间,记录分离结果。

色谱分析法第九章 毛细管电泳法简介-精品文档

色谱分析法第九章 毛细管电泳法简介-精品文档

5)CGE中使用改性剂
9.5.4毛细管等电聚焦(CIEF) 1)毛细管等电聚焦原理
毛细管等电聚焦属于毛细管电泳中的一种聚焦技术类型,其溶
质通常是蛋白质,分离基于蛋白质等电点(PI)的差异。毛细管内充 满两性电解质和蛋白质溶液,加上一个电场,在毛细管中产生一个
pH梯度。各种蛋白质因为它们的等电点不同,而在毛细管内聚焦为
图9.6 溶质通过毛细管的顺序
图9.7阳离子、中性分子、阴离子 的电泳谱图
8页
退出
色谱分析法
出版社 社文分社
1)电渗流的作用 2)电渗流的产生
图9.8 电渗流的产生
9页
退出
色谱分析法
出版社 社文分社
图9.9 不同驱动力的流型和相应的谱带峰形 3)电渗流的速度和迁移率 (1)电场强度
(2)缓冲液的pH值
子的尺寸和离子所带电荷的大小和符号。
2页
退出
色谱分析法
出版社 社文分社
图9.1 毛细管电泳示意图 9.1.2区带电泳 9.1.3引起区带扩散的因素 9.1.4管的直径对对流扩散的影响
9.1.5介质中的电泳
9.1.6毛细管电泳
3页
退出
色谱分析法
出版社 社文分社
9.2毛细管电泳体系 9.2.1概述 从概念上来讲,毛细管电泳体系比较简单。如图9.2所示,其 主要组成有样品池、入口池、出口池、毛细管、检测器、高压电 源、数字结果处理设备,如一台分析仪或一台计算机。
许多狭小的区带。毛细管内的溶液在动力作用下通过检测器而产生 电泳图。
15 页
退出
色谱分析法
出版社 社文分社
2)毛细管内形成pH梯度 3)等电聚焦
图9.13 CIEF分离机理示意图

毛细管电泳原理

毛细管电泳原理
辨率。
纳米材料
纳米材料具有独特的物理和化学性 质,在毛细管电泳中可提高检测灵 敏度和分离性能。
生物材料
利用生物活性物质如蛋白质、酶等 作为分离介质,实现生物分子间的 分离和检测。
新型分离模式的开发
多维分离
将多种分离模式结合,实现复杂样品的高效分离。
反相毛细管电泳
采用反相介质作为分离介质,实现对极性分子的分离。
亲和毛细管电泳
利用生物分子间的特异性亲和力进行分离和检测。
微型化与集成化的发展趋势
微型化
减小设备体积,提高分析速度和降低试剂消耗。
集成化
将多个分离步骤集成在一个系统中,实现全自动化分析。
微流控芯片
将毛细管电泳与微流控技术相结合,实现高效、快速和便携的分 析。
感谢您的观看
THANKS
检测技术
紫外可见光谱检测
电化学检测
紫外可见光谱检测是毛细管电泳中最 常用的检测方法之一。该方法通过检 测样品在紫外可见光下的吸收光谱来 进行分析。
电化学检测利用电极反应来测量样品 中的离子或分子。该方法具有高选择 性、高灵敏度和低背景干扰等优点。
荧光检测
荧光检测具有高灵敏度和高选择性, 因此在毛细管电泳中也被广泛应用。 该方法通过测量样品在特定波长下的 荧光强度来进行分析。
选择合适的毛细管电泳实验条 件,如分离电压、电解质浓度 和pH值等,可以提高分析准 确性和灵敏度。
通过优化进样方式和洗脱液的 组成和浓度,可以改善实验条 件。
实验条件的标准化和规范化也 是毛细管电泳改进的重要方向 之一。
06
毛细管电泳研究前沿与展 望
新材料在毛细管电泳中的应用
高分子材料
利用高分子材料作为毛细管电泳 的分离介质,提高分离效率和分

毛细管电泳

毛细管电泳
分离、单细胞分离。
毛细管电泳(CE)分离
开始阶段,样品自由迁移,位置由速 度决定
组分分开后,位置由介质性质决定
自由迁移
tR

L V
组分沿毛细管轴的速度V 一定时间t所迁移距离L
定长分离:固定位置安装检 测器记录分子通过该位置的 情况(tR),可得图形信号- -电泳谱图
电泳介质
不连续介质:由前导(TE)+终末(TE)电解质组成。
检测方法
紫外吸收、激光诱导荧光
数据记录
参量:峰面积、峰高、峰间 距
毛细管电泳在蛋白质分析的应用
分子量的测定 等电点的测定 肽谱分析(指纹图)测定蛋白质的 一级结构 迁移率的测定
标准曲线法
先测出标准蛋白,如左图显示 了由214nm紫外吸收检测得 到的谱图,由此可以求算出如 下图分子量-迁移时间工作曲 线图或计算出回归曲线方程
毛细管电泳
03081148 刘林娜
电泳
毛细管电泳(CE) 毛细管电泳(CE)分离 毛细管电泳仪基本结构图 毛细管电泳在蛋白质分析的应用
电泳
带电悬浮颗粒或大分子在一定介质 中因电场作用而发生移位运动的物理化 学现象。
颗粒或大分子的迁移速率取决于电 势差、颗粒带电量和颗粒大小、形状。
各组分分开形成的区带按速度大 小排列,区
带与LE,TE都以 VLE 等速前进。
连续介质:区带相互分开,以各自速度独立迁移. PH梯度:弱解离样品变速迁移--按平均速度分析。两性样
品在PH=PI(等电点)位置,没有净电荷,不受电
场位作置用上。VPI 0 .分离区带停止在各自对讲演全集》
《诺贝尔奖讲演全集》编译委员会编译 福建人民出版社
《电泳》何忠效,张树政主编

毛细管电泳仪原理

毛细管电泳仪原理

毛细管电泳仪原理
毛细管电泳仪是一种利用毛细管中的电泳现象进行物质分离的仪器。

其原理简述如下:
1. 毛细管: 毛细管是一种细长而细腻的玻璃管或石英管,内径通常为10-100微米。

毛细管的内壁具有一定的静电性质,可以吸附带电物质。

2. 缓冲液: 毛细管中填充有一种称为缓冲液的溶液。

缓冲液可以调节溶液的pH值,并提供离子,以保持毛细管内部电荷平衡。

3. 样品注入: 需要分离的样品溶液通过吸管或注射器被注入毛细管中。

4. 应用电场: 在毛细管的两端施加电压,产生电场。

由于毛细管内部具有一定的电导性,电场会导致带电物质在毛细管中移动。

5. 分离过程: 带电物质在电场的作用下,根据其电荷大小和分子大小的不同,会以不同的速度向毛细管两端移动。

带电物质移动的速度与其电荷量和分子大小成反比。

6. 检测: 分离过程中,可以通过光散射、荧光等方法对物质进行检测。

常见的检测方法包括紫外吸收检测和荧光检测。

通过调节电场强度、缓冲液pH值和样品注入量等参数,可以
实现对不同样品的有效分离和检测。

毛细管电泳仪因其高效、高灵敏度和快速的优点,在生化、制药、环境监测等领域有广泛的应用。

毛细管电泳法

毛细管电泳法

物质的分离
毛细管电泳法特点
与传统电泳技术相比:
分离效率高:解决了因提高电压带来的焦耳热问题
分离模式多:由电渗流和电泳流共同作用结果,故有多种分类 应用范围广:有机、无机小分子,多肽、蛋白质大分子
带电离子,中性分子
最小检出限低 分析成本低:毛细管本身成本低,溶剂和试剂消耗量少
样品用量少:仅为纳升级(10-9L)
CE-MS构造
电喷雾电离(ESI)接口技术于1984年在MS中提出,溶液在高 场中毛细管端以1-10ul/min的流速喷射进入MS检测器。接着, whitehouse等人[8]的LC不能直接由CE-MS加以利用,主要原因有两个:一是 CE流量小、流速慢(大多为10~100nl/min),不能满足各种接口 对流速的要求(2~10ul/min);二是由于毛细管端不存在缓冲液 中,所以必须解决CE操作中的电接触问题,保证提供分离电流 回路。不过基于whitehouse等人的LC-MS接口理论,smith等[9] 将CE分离毛细管的出口端作喷射源,首先实现了CE-ESI-MS的 在线偶合。电喷雾(ESI)接口作为最早出现的在线联用接口技 术,使得被分析物带上多电荷后采用质谱仪可以检测相对分子质 量达几万甚至十几万的生物大分子。由于ESI自身的优势以及 CE-ESI-MS接口技术的日益趋于成熟, 使CE-ESI-MS已成为CEMS联用技术中占主导地位的方法。CE-ESI-MS接口主要分为鞘 液接口和无鞘液接口两种。
目录
毛细管电泳法基本原理 毛细管电泳法仪器构造 毛细管电泳法类型
毛细管电泳法特点 CE-MS构造
毛细管电泳法基本原理
•CE统指以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道, 依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现 分离的一类液相分离技术。 •通常采用25~74μm内径、长38~80cm的弹性石英毛细 管,使用10~30kV直流电压,形成高强度电场。由于细 管径的毛细管电阻率大、电流小,有效地抑制了焦耳热 效应,而且具有较大的散热比表面积,也限制了电泳过 程中溶液温度升高,使得分离柱效高,分离速度快。

毛细管电泳原理及分析策略CE

毛细管电泳原理及分析策略CE

电源系统
电源要求
毛细管电泳仪的电源系统需要提供稳定的直流电,以保证仪器的 正常运行和实验结果的准确性。
电压调节
毛细管电泳仪的电压调节范围通常很宽,可以从几千伏到几十万伏, 以满足不同实验条件的需求。
电流控制
为了保护仪器和保证实验结果的准确性,电源系统通常需要具备电 流控制功能,能够限制电流的大小和方向。
工业废水等。
重金属离子分析
02
毛细管电泳可以用于分离和测定环境中的重金属离子,如铅、
汞、镉等。
营养物质与毒素分析
03
毛细管电泳可以用于分离和测定环境中的营养物质与毒素,如
硝酸盐、亚硝酸盐等。
04 毛细管电泳的优缺点
CHAPTER
优点
高分离效率
毛细管电泳采用微米级别的分离通道, 能够实现高分离效率,尤其适用于复 杂样品的分析。
毛细管电泳可以分为多种类型, 如自由溶液毛细管电泳、凝胶毛 细管电泳、等电聚焦毛细管电泳、
亲和毛细管电泳等。
根据检测方式分类
毛细管电泳也可以分为多种类型, 如紫外可见吸收光谱检测、荧光检 测、质谱检测等。
根据应用领域分类
毛细管电泳还可以分为临床检测、 生物分子分析、环境监测等领域。
02 毛细管电泳仪器
在药物分析中的应用
药物成分分离
毛细管电泳能够快速分离和测定药物中的有效成分和杂质。
药物代谢产物分析
毛细管电泳可以用于药物代谢产物的分离和鉴定,有助于药物代 谢动力学研究。
药物质量控制
毛细管电泳可用于药物质量控制,确保药物的有效性和安全性。
在环境监测中的应用
有机污染物分析
01
毛细管电泳可以用于分离和测定环境中的有机污染物,如农药、

毛细管电泳的基本原理及应用剖析

毛细管电泳的基本原理及应用剖析

毛细管电泳的基本原理及应用剖析毛细管电泳(CE)是一种基于电场作用的色谱分离技术,广泛应用于生物学、医药、环境、食品等领域。

它通过在毛细管中施加电场,利用样品中的带电粒子在电场作用下发生迁移分离,最终在检测器上形成峰。

毛细管电泳具有分离效率高、样品消耗量少、实验时间短等优点,因此被广泛研究和应用。

电动力作用是指在电场作用下,带电粒子会迁移,其迁移速率与电荷大小、电场强度和粒子大小有关。

这个原理形成了毛细管电泳的分离能力。

在毛细管电泳中,带有不同电荷的离子在电场作用下会迁移到不同的位置,实现了分离。

电渗流作用是指在电场作用下,电解质溶液中的离子在毛细管内部形成一个电化学双层,从而形成了定向的流动,这种流动称为电渗流。

电渗流的作用是维持溶液流动的速度和方向,使得样品能够快速地通过毛细管。

1.生物学:毛细管电泳在DNA分析、蛋白质分析和细胞生物学中有重要应用。

例如,DNA测序、突变分析和基因检测等都可以通过毛细管电泳实现。

此外,毛细管电泳还可以用于血清蛋白质分析,从而帮助研究疾病的诊断和治疗。

2.医药:毛细管电泳在药物分析中有广泛的应用。

例如,在药物代谢研究中,毛细管电泳可以用于分析药物及其代谢产物。

此外,毛细管电泳还可以用于药物纯度和含量的测定,以及药物的质量控制和研发。

3.环境:毛细管电泳在环境监测中有重要的应用。

例如,通过毛细管电泳可以分析水、土壤和大气样品中的有机物、金属和其他污染物。

此外,毛细管电泳还可以用于监测和分析环境中的微量物质,如重金属、农药残留、有机污染物等。

4.食品:毛细管电泳在食品检测和质量控制中有广泛应用。

例如,可以利用毛细管电泳对食品中的营养成分、添加剂和农药进行分析和检测。

此外,也可以通过毛细管电泳对食品中的毒素和致病菌进行检测,确保食品的安全性。

综上所述,毛细管电泳是一种重要的色谱分离技术,其基本原理是利用电场作用使带电粒子在毛细管中迁移分离,并且具有分离效率高、样品消耗量少等优点。

毛细管电泳

毛细管电泳

带电粒子在直流电场作用下于一定介质(溶剂)中所发生的定向运动称为电泳。单位电场下的电泳速度称为 淌度。在无限稀释溶液中(稀溶液数据外推)测得的淌度称为绝对淌度。
电场中带电离子运动除了受到电场力的作用外,还会受到溶剂阻力的作用。一定时间后,两种力的作用就会 达到平衡,此时离子作匀速运动,电泳进入稳态。实际溶液的活度不同,特别是酸碱度的不同,所以样品分子的 离解度不同,电荷也将发生变化,这时的淌度可称为有效电泳淌度。一般来说,离子所带电荷越多、离解度越大、 体积越小,电泳速度就越快。
基础理论
Zeta电势
双电层
淌度
双电层是指两相之间的分离表面由相对固定和游离的两部分离子组成的。
双电层是与表面异号的离子层,凡是浸没在液体中的界面都会产生双电层。在毛细管电泳中,无论是带电粒 子的表面还是毛细管管壁的表面都有双电层。
电介质溶液中,任何带电粒子都可被看成是一个双电层系统的一部分,离子自身的电荷被异号的带电离子中 和,这些异号离子中有一些被不可逆的吸附到离子上,而另一些则游离在附近,并扩散到电介质中进行离子交换。 “固定”离子有一个切平面,它和离得最近的离子之间的电势则被称之为离子的Zeta电势。
电渗、电渗流和表观淌度电渗是推动样品迁移的另一种重要动力。所谓电渗是指毛细管中的溶剂因轴向直流 电场作用而发生的定向流动。电渗是由定域电荷引起。定域电荷是指牢固结合在管壁上、在电场作用下不能迁移 的离子或带电基团。在定域电荷吸引溶液中的反号离子并与其构成的双电层,致使溶剂在电场作用(以及碰撞作 用)下整体定向移动而形成电渗流(毛细管中的电渗流为平头塞状)。
毛细管电泳仪度随pH的升高而升高,电渗流也随之升高。因此,pH为分离条件优化时不可忽视的因素。
在CE中,分离电压也是控制电渗的一个重要参数。高电压是实现CE快速、高效的前提,电压升高,样品的迁 移加大,分析时间缩短,但毛细管中焦耳热增大,基线稳定性降低,灵敏度降低;分离电压越低,分离效果越好, 分析时间延长,峰形变宽,导致分离效率降低。因此,相对较高的分离电压会提高分离度和缩短分析时间,但电 压过高又会使谱带变宽而降低分离效率。电解质浓度相同时,非水介质中的电流值和焦耳热均比水相介质中小得 多,因而在非水介质中允许使用更高的分离电压。

毛细管电泳仪的原理

毛细管电泳仪的原理

毛细管电泳仪的原理
毛细管电泳仪(Capillary Electrophoresis, CE)是一种高效分离和分析生物分子的技术,它利用电泳原理在毛细管中进行分离。

毛细管电泳仪的原理涉及电泳、毛细管和检测三个关键部分。

首先,让我们来了解一下电泳原理。

电泳是利用物质在电场中的迁移速度差异进行分离的一种技术。

当物质带有电荷时,置于电场中会受到电场力的作用而产生迁移。

根据迁移速度的不同,可以实现物质的分离。

毛细管电泳仪利用电泳原理,将带有电荷的生物分子在毛细管中进行分离。

其次,毛细管是毛细管电泳仪中的关键组件。

毛细管通常由石英或玻璃制成,具有非常小的内径,通常在25至100微米之间。

毛细管内壁经过特殊处理,可以带有不同的表面电荷,从而影响生物分子在毛细管中的迁移速度。

毛细管的小内径和表面电荷的特性使得毛细管电泳具有高效分离的特点。

最后,检测是毛细管电泳仪中的最后一步。

毛细管电泳仪通常配备不同类型的检测器,如紫外检测器、荧光检测器等。

这些检测器可以实时监测毛细管中生物分子的迁移情况,并将信号转换为电信号进行记录和分析。

通过检测器的信号,可以获取生物分子的浓度、迁移时间等信息,从而实现对样品的分析和定量。

综上所述,毛细管电泳仪的原理涉及电泳、毛细管和检测三个关键部分。

通过电泳原理,利用毛细管的特性进行高效分离,最后通过检测器对生物分子进行分析和定量。

毛细管电泳仪在生物分析领域具有广泛的应用,例如蛋白质分析、核酸分析等,其原理的深入理解对于技术的应用和发展具有重要意义。

毛细管电泳的基本原理

毛细管电泳的基本原理

毛细管电泳的基本原理
毛细管电泳是一种基于电场作用的分离和分析技术。

它利用细管内的电泳作用使不同化学物质在电场作用下按照不同迁移率分离开来。

在毛细管电泳中,样品被注入到毛细管的一个端口。

然后,在毛细管的两端施加电场,其中一端带正电,另一端带负电。

这样,就建立了一个电动势,使得带电的离子在电场作用下向相反电极移动。

移动的速率取决于离子的电荷和尺寸。

具有较小电荷和较小尺寸的离子会更快地迁移,而具有较大电荷和较大尺寸的离子会移动得更慢。

当离子在毛细管中移动时,它们会在溶剂中扩散。

由于离子的扩散速率取决于它们的分子量和形状,因此不同离子会以不同速率扩散。

通过调整电场强度和分析时间,可以使不同离子达到分离。

分离后的离子可以通过检测器进行检测和识别。

常用的检测器包括紫外吸收检测器、荧光检测器和电导检测器等。

毛细管电泳广泛应用于分析化学、生物化学和药物分析等领域。

它具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快等优点,是一种非常有效的分离和分析技术。

了解毛细管电泳仪的工作原理(标准版)

了解毛细管电泳仪的工作原理(标准版)

了解毛细管电泳仪的工作原理
毛细管电泳仪是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力
的新型液相分离技术。

实际上包含电泳、色谱及其交叉内容,它使分析化学
得以从微升水平进入纳升水平,并使单细胞分析,乃至单分子分析成为可能。

毛细管电泳仪是根据在电解质溶液中,带电粒子在高压电场作用下,以不同
的速度定向迁移的现象来达到组分分离的目的。

各组分分离后通过检测器进
行检测,并根据各组分的迁移时间和响应值进行定性、定量分析。

工作原理:
毛细管两端分别浸入缓冲液中,而缓冲液中分别插入连有高压电源的电极,根据被分离物之间电荷和体积的不同,带电荷分子朝相反极性的电极方向移动。

又利用毛细管内壁上的电荷和应用的势能而引起的电解质移动,毛细管
内表面带有硅羟基基团,当毛细管内充满缓冲溶液时,毛细管壁上的硅羟基
发生解离,生成氢离子溶解在溶液中,这样就使毛细管壁上形成双电层,管
壁是负电荷层,溶液是正电荷层。

在毛细管的两端加上直流电场后,带正电
的溶液就会整体向负极的一端移动,形成了电渗流。

无论是带正电、带负电
或不带电的粒子,都在电渗流的作用下,向阴极迁移,带正电的,受到同方
向的电场力作用,迁移快,不带电的迁移速度次之,带负电的迁移速度慢,
从而实现各蛋白组分的分离。

精品资料欢迎下载。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
制柱方法:将反应溶液注入毛细管,促发聚合反应. 特点: 1. 制备方法简单(无柱塞烧制) 2. 多孔结构,渗透性好;
CEC特点
分离效率高
选择性比CE高 分析速度快 可实现样品富集
CE技术应用
应用领域
药物 分析 ……
元素 分析
刑侦 分析
生命 分析
CE
手性 识别
环境 分析
药物分析(CZE)
Ye NS, et al., Biomedical Chromatography, 2001, 15: 509-512
2
光 程 短 检 测 难
3
柱 吸 附 问 题
4
定 量 控 制 电 渗
分离模式
常见模式
1.
2. 3. 4. 5.
毛细管区带电泳(CZE)
非水毛细管电泳(NACE) 胶束电动色谱 (MEKC) 毛细管凝胶电泳 (CGE) 毛细管等电聚焦(CIEF)
常规毛细管电泳
6.
7. 8.
毛细管等速电泳(CITP)
毛细管电色谱(CEC) 亲和毛细管电泳(ACE)
阵列式毛细管电泳
毛细管区带电泳
Capillary Zone Electrophoresis, CZE
分离原理:基于试样中各组分荷质比的差异
CZE 基本操作条件
毛细管(是否涂层;内径;长度)
电压 (影响电渗及电泳速度)
缓冲溶液种类与浓度 (双电层厚度) 缓冲溶液pH (调节电渗流及目标组分的带电性质) 添加剂及其含量 (控制电渗流;降低吸附)
正电荷越多,速
度越大; 负电荷越多,速
正离子:半径越
大,速度越小; 负离子:半径越
中性粒子 Vapp = VEOF
负离子
度越小
大,速度越大
思考:三种不同微粒之间可以分离,中性微粒之间如何分离?
分离度
(trA - trB) Rs = ½(W +W ) A B trB trA
Rs : 分离度 tr :迁移时间
A B C D
电压输出变化低于1%
连续可调高压直流电源(0-30 kV)
电压、电流、功率 输出模式任意可选
毛细管及其温度控制
总长度
有效长度
柱温控制:冷凝液(套管)
缓冲溶液
缓冲溶液
A B C 磷酸盐体系(宽pH范围) Tris-HCl体系(低pH范围)
思考:与HPLC相比较?优势?
硼砂体系(高pH范围) HAC-NaAC体系 (适用于CE-MS体系)
仪器 商品化
MECC
HGP
CIEF CGE

1809 1937 1967 1981 1983~1985 1988 2001
年份
Web of Science Topic:capillary electrophoresis
内容概要
1 基本理论
2 仪器装置
3 分离模式
4 技术应用
1 基本理论
电 泳 现 象 (electrophoresis)
(涂渍或键合)到毛细管中,
作用为分离机制,以电渗流
为驱动力的色谱过程。
CEC色谱柱的制作
填充柱 (packed column) 柱塞制作:水玻璃烧制或填料直接烧制 填充方法:高压匀浆法和电动法 常用填料:ODS固定相及混合官能团固定相
方法优势:具有选择性 不利方面:气泡干扰柱效
CEC色谱柱的制作
阳离子型:溴化十六烷基三甲胺(CTAB) 2. 胆汁酸表面活性剂 天然阴离子表面活性剂(螺旋形胶束)兼手性拆分试剂 3. 高分子质量表面活性剂
MEKC与CZE的比较
CZE
MEKC
毛细管电色谱(Capillary Electrochromatography, CEC)
将 HPLC 固 定 相 颗 粒 填 充 以试样与固定相之间的相互
食品分析-茶叶鉴定(MEKC-LIF)
Ye NS, et al., Chromatographia, 2010, 71: 529-532-486
生命分析:基因组学(CGE)
96通道
阵列式毛细管电泳
12通道
384通道
生命分析:蛋白质组学(CZE)
A: Normal (正常肺组织) B: SCLC (小细胞肺癌) C: SQCLC (肺鳞癌)
D
注意事项:两边溶液等量;定期更换缓冲溶液
进样系统
电动进样: 组分歧视
压力进样: 背景复杂
方法特点:样品需求量少(nL级);而且进样量可控
检测系统
1. 紫外可见检测器
2. 电化学检测器 3. 荧光检测器 4. 激光诱导荧光检测器 5. 质谱检测器 (通用型)
MS
思考:CE检测方式与HPLC检测方式有何不同?
手性分离(CZE)
毛细管电泳与手性分离 关键在于:构建手性识别环境 常用的手性添加剂: 环糊精、蛋白质、氨基酸等
Ye NS, et al., Journal of Chromatographic Science, 2007, 45: 246-250
刑侦分析:字迹鉴定(NACE)
Zou H, Wang ZY, Ye NS, et al., Chromatographia, 2008, 67: 483-486
W: 峰宽
WB
WA
影响柱效的因素
理论塔板数
n
U appV 2D
U app 表观迁移率; V 外加电压 D 组分扩散系数
原理小结
以毛细管为分离通道
以高压直流电场为驱动力
新型液相分离检测技术
2 仪器装置
仪器基本结构
高压电源
铂电极
缓冲溶液池
样品池
毛细管
检测器 记录仪
电源及其回路
安全保护策略
常用检测方法
浓度检测限(M)
10
-14
~10
-16
激光诱导荧光 电化学检测 质谱检测
10
-10
~10
-11
10 ~10 10 ~10
-5
-8
-9
-8
紫外-可见光吸收
数据系统
控制
软件
数据 分析
毛细管电泳技术分析特点
环境友好
高效
自动化程度高
CE
快速分析
多模式 成本低
低样本量
不足之处
1
制 备 能 力 低
Deng B, Ye NS, et al., J. Nanosci. Nanotechnol., 2005, 5: 1193-1198.
Reviews on CE
课程小结
基本概念-电渗、电泳
以CZE为例说明CE的分离原理 CE仪器系统 常见CE分离模式及其应用
本章作业
1. 简述电渗流产生的原因。
人类基因组学计划(HGP)
Feb 15,2001
Feb 16,2001
ABI DNA analyzer
基因
蛋白质
细胞
毛细管电泳法
Capillary Electrophoresis
技 术 发 展 (History of CE)
事 件
电泳 现象 现代 电泳
区带 电泳 区带 75 μm 电泳 3 mm
2. 毛细管区带电泳的原理。
3. 列举毛细管电泳的分离模式。
色谱部分总结
GC 色谱 LC CE
对比
胶束电动色谱法(MEKC)
Micellar Electrokinetic Electrophoresis,MEKC
SDS及胶束的形成
分离原理: 基于组分在溶液相与胶束相之间的相互作用。
方法优势:可以实现中性微粒间的分离,扩大CE技术应用范围
常用的表面活性剂
1. 长链烷基表面活性剂
阴离子型:十二烷基磺酸钠(SDS)
分离原理
VEOF
正离子Vapp =VEOF + VEP
负离子Vapp =VEOF -VEP
中性粒子 Vapp = VEOF
分离原理
+
正离子Vapp =VEOF + V;
2
电荷数
A+
A 2+
-
EOF
1
电荷种类
负离子Vapp =VEOF -VEP
3
微粒大小
依次是
正离子、 中性微粒、
pH > 10; Si-OH 电离完全,电渗流变化很小
电渗流的控制
影响
电场强度 ↑ 毛细管柱温度 ↑
VEOF EOF E
电渗淌度
电渗
流的
因素
缓冲溶液浓度 ↓ 添加剂 ↑↓
管壁涂层 ↑↓
0 w EO F w 管壁Zeta电势 - 介质粘度
电渗流可从实验中测定
毛细管内微粒电泳行为
+
【思考】如何检测各种微粒?
-
电渗现象(electroosmosis)的形成
SiO2
Si-OH
Si-O-
+
其移动速度称为电渗流
EOF
-
在电场中液体对于一个固体固定相的相对移动称为电渗
电渗流的控制
pH对电渗流的影响
pH < 2.5; Si-OH 不电离,电渗流接近于零
pH 4 ~ 10 范围内,电渗流随pH上升而迅速增加
开管柱 (open tube column)
实施方法:在毛细管内壁键合或涂层固定相
制柱方法:涂层聚合物、化学键合及溶胶-凝胶技术 特点: 1. 制备简单(无须烧制柱塞) 2. 无气泡影响
3.
4.
柱效高(无涡流扩散)
柱容量小
CEC色谱柱的制作
整体柱(monolithic column)
实施方法:柱内聚合形成交联聚合物
相关文档
最新文档