实验八 分光光度法条件实验及测定微量铁
实验八分光光度法测定铁
实验八分光光度法测定铁实验八分光光度法测定铁内容：P232-234一、实验目的1. 掌握邻菲咯啉分光光度法测定微量铁的原理和方法2. 掌握光吸收曲线的绘制及最适宜波长的确定3. 掌握分光光度计的基本原理和使用方法二、实验原理邻菲咯啉法是测定微量铁最常用和最灵敏的方法。
此法准确度高，重现性好，配合物十分稳定。
Fe2+离子与邻菲咯啉反应生成极稳定的桔红色配合物，反应式如下：N N N NFe2++Fe32+3该配合物的最大吸收波长为510 nm，摩尔吸收系数κ= 1.1×104 L·mol-1·cm-1。
由于Fe3+也会与邻菲咯啉反应，生成3:1的淡蓝色配合物，故必须先将Fe3+还原为Fe2+，再与邻菲咯啉反应。
一般用盐酸羟胺作为还原剂，显色前将Fe3+全部还原为Fe2+。
Fe2+与邻菲咯啉在pH = 2 ~ 9范围内都能显色，但为了尽量减少其它离子的影响，通常在微酸性（pH ≈ 5）溶液中显色。
本法选择性很高，相当于含Fe量40倍的Sn2+，Al3+，Ca2+，Mg2+，Zn2+，SiO32-；20倍的Cr3+，Mn2+，V（V），PO43-；5倍的Co2+，Cu2+等均不干扰测定。
三、实验仪器与试剂1. 仪器UV-9100紫外可见分光光度计容量瓶（50 mL）烧杯（250 mL）玻璃比色皿（1 cm）吸量管（1 mL，2 mL，5 mL，10 mL）洗耳球洗瓶2. 试剂铁标准溶液（100 mg·L-1）[1] 铁标准溶液（10 mg·L-1）[2]NaAc（1 mol·L-1）盐酸羟胺（10 %）（新配制）邻菲咯啉（0.15 %）（新配制）待测试液四、实验内容1. 溶液的配置取7只50 mL容量瓶，编号，分别用吸量管加入0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL 10 mg·L-1铁标准溶液，第7只容量瓶中加入5.00 mL待测试液，然后在各容量瓶中依次加入1.00 mL 10 %盐酸羟胺溶液，2.00 mL 0.15 %邻菲咯啉水溶液和5.00 mL 1 mol·L-1 NaAc溶液，用水定容至刻度，摇匀，显色。
分光光度法测定铁实验报告
分光光度法测定铁实验报告分光光度法测定铁实验报告引言：分光光度法是一种常用的分析方法，可以用于测定物质的浓度。
本实验旨在通过分光光度法测定铁的浓度，从而探究该方法的原理和应用。
实验目的：1. 了解分光光度法的基本原理；2. 掌握使用分光光度计进行测量的操作方法；3. 利用分光光度法测定铁的浓度。
实验原理：分光光度法利用物质对特定波长的光的吸收特性来测定其浓度。
在本实验中，我们将使用铁离子对可见光的吸收进行测量。
铁离子在紫外-可见光区域有明显的吸收峰，波长约为510 nm。
实验步骤：1. 准备工作：a. 清洗所使用的比色皿，确保其干净无污染；b. 使用去离子水冲洗分光光度计的比色皿槽，以确保无杂质干扰；c. 打开分光光度计，进行预热。
2. 标定分光光度计：a. 取一系列不同浓度的铁标准溶液，如0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L等；b. 分别将这些标准溶液转移到比色皿中，注意避免溅出；c. 将比色皿放入分光光度计的比色皿槽中，记录各标准溶液的吸光度值；d. 绘制吸光度与浓度的标准曲线。
3. 测定待测样品：a. 取待测样品，如含铁离子的水溶液；b. 将待测样品转移到比色皿中，注意避免溅出；c. 将比色皿放入分光光度计的比色皿槽中，记录待测样品的吸光度值。
4. 计算铁的浓度：a. 根据标准曲线，找到待测样品吸光度对应的浓度；b. 根据比色皿中待测样品的容积，计算出待测样品中铁的质量；c. 根据待测样品的总体积，计算出待测样品中铁的浓度。
实验结果与讨论：通过实验测定，我们得到了标准曲线如下所示：[插入标准曲线图]根据待测样品的吸光度值，通过标准曲线的插值计算，我们得到了待测样品中铁的浓度为X mg/L。
在实验过程中，我们注意到分光光度计对比色皿中液体的体积和透明度要求较高，因此在操作过程中要小心，避免溅出或污染。
实验结论：本实验使用分光光度法成功测定了待测样品中铁的浓度。
通过标准曲线的插值计算，我们得到了待测样品中铁的浓度为X mg/L。
邻二氮菲分光光度法测定铁的条件实验和测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定铁的条件实验和测定微量铁邻二氮菲是一种常用的有机染料，在化学分析中常用于铁离子的测定。
邻二氮菲与铁离子生成的络合物具有明显的吸收光谱峰，可以通过分光光度法进行定量分析。
本文将介绍邻二氮菲分光光度法测定铁的条件实验和测定微量铁的方法。
实验条件1. 试剂和仪器（1）邻二氮菲：纯度应在98%以上。
（3）盐酸：纯度应在37%以上，用于控制溶液的酸度。
（4）标准铁溶液：浓度为1000μg/mL。
（5）分光光度计：用于测定吸收光谱曲线。
2. 操作步骤（1）制备邻二氮菲工作溶液：将1g邻二氮菲溶于100mL 乙醇中，稀释至1000μg/mL。
（2）制备硝酸铁标准溶液：取适量的硝酸铁溶于水中，调节pH至5.5-6.5，使用标准铁溶液调节溶液浓度。
（3）取一定量的样品，加入盐酸和邻二氮菲工作溶液，使其浓度为3×10^-4 M，pH 为5.5-6.5。
（5）根据吸收光谱曲线计算出样品中铁离子的浓度。
测定微量铁针对微量铁的测定，可以采用前处理方法和放大测量方法，使得样品浓度达到设备测量范围的要求。
1. 前处理方法对于低浓度的样品，需要进行前处理以提高铁离子浓度，通常采用离子交换树脂柱、萃取和浓缩等方法。
离子交换树脂柱：树脂柱具有强的选择性，可以去除多余的离子，使得测量结果更加准确。
荧光光谱法测定铁离子萃取：使用萃取剂提取样品中的铁离子，可以增加铁离子的浓度，使得测量结果更加准确。
2. 放大测量方法放大测量方法可以克服微量铁浓度过低的问题，通常使用衍射法、磁光法和荧光法等方法。
荧光法：荧光法利用荧光染料与铁离子生成荧光复合物，测量荧光信号强度来定量分析铁离子的浓度。
总之，邻二氮菲分光光度法是一种方便可靠的测定铁离子的方法，而在测定微量铁时，需要采用前处理方法和放大测量方法。
这些方法不仅可以提高铁离子浓度，还可以克服微量铁浓度过低而带来的精度低下的问题，提高测量的准确性。
分光光度法测定微量铁
分光光度法测定微量铁分光光度法是指利用物质吸收和透过不同波长的可见光或紫外线，对试样中的成分进行测定的方法。
微量铁是指含铁浓度较低的样品。
本文将介绍如何利用分光光度法测定微量铁的原理、仪器、操作步骤及数据处理方法。
一、原理铁离子在紫外-可见吸收光谱中有很强的特征吸收峰。
在波长范围为200-800nm处，铁离子的最强吸收峰位于400-500nm区域内。
因此，利用紫外-可见分光光度法测定铁离子可以选定适当的波长进行测定。
对于微量铁的测定，常采用1，10-菌落素橙（1，10-phenanthroline orange）作为配合剂，形成铁离子和1，10-菌落素橙配合物，从而实现铁离子的高选择性分析。
配合物的吸收峰位于510～530nm，可以通过分光光度法进行测定。
二、仪器分光光度计三、操作步骤1、制备标准曲线：将铁标准溶液分别加入一系列标准量瓶中，其浓度可控制在0-1.2μg/mL之间，然后分别加入一定量的1,10-菌落素橙溶液，通常为1mL。
用去离子水稀释至刻度线，搅拌均匀。
最后在分光光度计上，以510-530nm为波长进行测定吸收度，根据标准曲线计算出所测样品中铁的浓度。
2、取待测样品：取适量的待测样品，加入足够的1,10-菌落素橙溶液，在水浴中加热混合溶液，待其冷却后取1mL加入10mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度线，搅拌均匀即可。
3、测量：在分光光度计上以510-530nm为波长进行测定吸收度，记录读数。
四、数据处理方法1、标准曲线的绘制：以铁标准溶液的浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制浓度-吸收度曲线。
2、计算未知样品的铁浓度：根据标准曲线计算出所测样品中铁的浓度。
3、参考范围：根据不同的样品类型和所测铁的含量确定参考范围。
分光光度法测定微量铁的含量实验报告
分光光度法测定微量铁的含量实验报告
实验目的：
通过分光光度法测定微量铁的含量。
实验原理：
实验仪器和试剂：
仪器：分光光度计、移液枪。
试剂：铁标准溶液、硝酸铵和硝酸亚铁、硫酸亚铁。
实验步骤：
1.取适量的硝酸铵和硝酸亚铁混合溶液，稀释成适宜的浓度。
2.在分光光度计上选择适当的波长，进行仪器的初步调试。
3.取一系列含有不同浓度的铁标准溶液，每个浓度分别进行三次测定，并计算平均值。
4.将测量所得的吸光度与浓度制成标准曲线。
5.将待测溶液纳入曲线范围内进行测定，计算出溶液中铁的含量。
实验结果和数据处理：
根据实验所得的吸光度和浓度数据，我们制成了铁的标准曲线。
通过
测量待测溶液的吸光度，我们进一步计算出溶液中铁的浓度。
实验讨论：
1.实验中所用的试剂的纯度对实验结果有重要影响。
如果试剂的纯度
不高，将会引入误差。
2.在实验过程中，仪器的选择和操作也会对实验结果产生一定的影响。
准确操作仪器，进行仪器的校准和调试是保证实验结果准确性的关键。
3.在实际应用中，还需要考虑样品的前处理，例如稀释、过滤等步骤。
4.在进行标准曲线绘制时，至少应该有三个不同浓度的标准溶液，每
个溶液进行三次测定，可以得到相对准确的结果。
实验结论：
通过分光光度法，我们成功测定了待测溶液中铁的含量。
该方法简便、准确，适用于微量铁含量的测定。
在实际应用中，我们应注意仪器的选择
和操作，以及试剂纯度对实验结果的影响。
通过合理的实验操作和数据处理，可以获得准确可靠的分析结果。
实验 分光光度法测定微量铁
分光光度法测定微量铁
姓名###专业 化学工程与工艺 学号 2904090120 日期 2011 年 11 月 9 日 星期三
一、实验原理
吸光光度法是根据溶液中物质对光选择性的吸收而进行的分析方法。它具有较高的灵敏 度和一定的准确度，特别适宜于微量祖坟的测定。 吸光光度法测定微量铁的显色剂， 目前大多数采用邻二氮菲为显色剂。 在 pH=2~9 的挑件下， 二价铁离子与邻二氮菲生成稳定的橘红色络合物，络合物的 lgK=21.3 ，摩尔吸光系数为 1.1*104。 显色前要用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子，测定是应控制溶液浓度在 pH=5 左右为宜。 分光光度法测定物质含量是应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色 反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物质的消除方 法等。 测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液。 本实验帮助学生研究邻二氮菲测铁摘入射光波长、 络合物肉 on 工业的稳定性、 显色剂浓度、 溶液 pH 值的影响等几个方面确定实验的最佳条件。
条件实验 显色剂用量的选择
取 7 个 50mL 的容量瓶， 各加入 1mL 铁标准溶液， 1mL 盐酸羟胺， 摇匀。 在分别加入 0.1、 0.3、0.5、0.8、1.0、2.0、4.0mL 邻二氮菲和 5mLNaAc 溶液，以水实施至刻度，摇匀，放置 10min。用 1cm 比色皿，以蒸馏水为参比溶液，在选择波长系测定各溶液的吸光度。以邻二 氮菲溶液的体积 V 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，绘制 A 与 V 的关系的显色剂用量影响曲 线。得出测定铁是显色剂的最适宜用量。
没有干扰离子。 2、本实验量取各种试剂时应分别采用何种量器较为合适？为什么？ 答：应采用移液管或是滴定管，因为要准确量取物质的体积。 3、对所做的条件实验进行讨论并选择适宜的测量条件。 答：显色剂为 2mL 的邻二氮菲溶液，显色时间 10min 为宜。
实验八-邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验八-邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验七邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的：（1）掌握研究显色反应的一般方法。
（2）掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法。
（3）熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长。
（4）学会制作标准曲线的方法。
（5）通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁在未知式样中的含量，掌握721型，723型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、原理：可见分光光度法测定无机离子，通常要经过两个过程，一是显色过程，二是测量过程。
为了使测定结果有较高灵敏度和准确度，必须选择合适的显色条件和测量条件，这些条件主要包括入射波长，显色剂用量，有色溶液稳定性，溶液酸度干扰的排除。
（1）入射光波长：一般情况下，应选择被测物质的最大吸收波长的光为入射光。
（2）显色剂用量：显色剂的合适用量可通过实验确定。
（3）溶液酸度：选择适合的酸度，可以在不同PH缓冲溶液中加入等量的被测离子和显色剂，测其吸光度，作DA-PH曲线，由曲线上选择合适的PH范围。
（4）有色配合物的稳定性：有色配合物的颜色应当稳定足够的时间。
（5）干扰的排除：当被测试液中有其他干扰组分共存时，必须争取一定的措施排除干扰。
邻二氮菲与Fe2+在PH2.0-9.0溶液中形成稳定橙红色配合物。
配合无的ε =1.1 ×104 L· mol ·cm-1。
配合物配合比为3：1，PH在2-9（一般维持在PH5-6）之间。
在还原剂存在下，颜色可保持几个月不变。
Fe3+与邻二氮菲作用形成淡蓝色配合物稳定性教差，因此在实际应用中加入还原剂使Fe 3+还原为Fe2+与显色剂邻二菲作用，在加入显色剂之前，用的还原剂是盐酸羟胺。
此方法选择性高Br3+、Ca2+、Hg 2+、Zn2+及Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀，干扰测定，相当于铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Sio32-，20倍的Cr3+、Mn2+、VPO3-45倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。
测铁含量实验报告
一、实验目的1. 熟悉分光光度法测定铁含量的原理和操作方法。
2. 掌握标准曲线法在定量分析中的应用。
3. 学会使用分光光度计进行实验操作。
二、实验原理分光光度法是一种基于物质对特定波长光的吸收特性进行定量分析的方法。
在本实验中，利用铁与邻二氮菲形成络合物，该络合物在特定波长下具有显著吸收，通过测定其吸光度，可以计算出铁的含量。
实验原理如下：1. 标准溶液配制：准确称取一定量的铁标准物质，用稀盐酸溶解，转移至容量瓶中，定容至一定体积，得到铁标准溶液。
2. 标准曲线绘制：分别取一定量的铁标准溶液，加入适量的邻二氮菲溶液，振荡均匀，放置一段时间后，以蒸馏水为参比，在特定波长下测定其吸光度，以铁的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取一定量的待测样品，按照与标准溶液相同的步骤进行处理，测定其吸光度，根据标准曲线计算出样品中铁的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分光光度计、电子天平、容量瓶、移液管、吸量管、锥形瓶、烧杯、玻璃棒等。
2. 试剂：铁标准溶液、邻二氮菲溶液、稀盐酸、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 标准溶液配制：准确称取0.1g铁标准物质，用稀盐酸溶解，转移至100ml容量瓶中，定容至刻度，得到浓度为1000mg/L的铁标准溶液。
2. 标准曲线绘制：分别取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml铁标准溶液，加入适量的邻二氮菲溶液，振荡均匀，放置10分钟，以蒸馏水为参比，在510nm波长下测定其吸光度，以铁的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取一定量的待测样品，按照与标准溶液相同的步骤进行处理，测定其吸光度，根据标准曲线计算出样品中铁的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
根据曲线方程，计算铁的标准浓度与吸光度之间的关系。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品中铁的含量。
六、实验总结本实验通过分光光度法测定铁含量，成功绘制了标准曲线，并利用该曲线对样品进行了定量分析。
分光光度法测定微量铁的含量实验报告(标准曲线的测绘与铁含量的测定)
分光光度法测定微量铁的含量实验报告（标准曲线的测绘与铁含量的测定）实验报告：分光光度法测定微量铁的含量一、实验目的1.学习分光光度法测定微量铁含量的原理和方法。
2.掌握标准曲线的测绘方法，了解线性回归方程及其应用。
3.学会利用分光光度计测定样品中微量铁的含量。
二、实验原理分光光度法是一种常用的定量分析方法，其原理基于朗伯-比尔定律。
当一束单色光通过溶液时，光被吸收的程度与溶液的浓度和液层厚度成正比。
在一定波长下，吸光度A与溶液浓度C和液层厚度L的乘积成正比，即A=εCL。
其中，ε为摩尔吸光系数，L为液层厚度，C为溶液浓度。
通过绘制标准曲线，可以求得铁的含量。
三、实验步骤1.准备试剂和仪器：硝酸、高氯酸、硫酸、铁标准溶液（100μg/mL）、分光光度计、比色皿、容量瓶（100mL）、吸量管（10mL、5mL、2mL）等。
2.绘制标准曲线：分别取10mL、5mL、2mL铁标准溶液于三个100mL容量瓶中，各加5mL硝酸，20mL硫酸，摇匀，用去离子水定容。
将各溶液分别移入比色皿中，用分光光度计在562nm波长下测量吸光度。
记录数据并绘制标准曲线。
3.测定样品中铁的含量：将样品溶液移入比色皿中，用分光光度计在562nm波长下测量吸光度。
根据标准曲线查得铁的浓度，计算样品中铁的含量。
四、结果与分析1.标准曲线测绘结果在坐标纸上绘制标准曲线，横坐标为铁标准溶液的浓度（μg/mL），纵坐标为吸光度。
根据实验数据绘制标准曲线（图1）。
可以看出，随着铁浓度的增加，吸光度也逐渐增大。
表明铁浓度与吸光度之间存在线性关系。
可以得出线性回归方程为：y=kx+b（k为斜率，b为截距）。
根据实验数据可计算出斜率k和截距b的值。
图1 标准曲线（请在此处插入标准曲线图）2.铁含量测定结果将样品溶液移入比色皿中，用分光光度计在562nm波长下测量吸光度。
根据标准曲线查得铁的浓度（μg/mL），计算样品中铁的含量（mg/L）。
结果如表1所示。
分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
⒊本试验测定工业盐酸中铁含量的原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc。
当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即工业盐酸中铁的含量。
⒋邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
⒌邻二氮菲法简介：邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
⒍邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。
在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
= 21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻此配合物的lgK稳二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
分光光度法测铁实验报告
分光光度法测铁实验报告实验报告-物质的吸收光谱——分光光度法测定铁实验报告一、实验名称：物质的吸收光谱——分光光度法测定铁二、实验目的：1. 了解物质的分子吸收光谱及其测定方法。
初步了解比尔定理所反映的物质吸光度与浓度的关系。
2. 学习分光光度计的使用和分光光度法测定的基本操作，测量溶液在不同波长处的吸光度。
3. 学习实验数据的列表与绘图方法，绘制吸收曲线。
三、实验原理：1. 各种物质分子各自对某些特定波长的光发生强的选择性吸收，形成各有特征的吸收光谱。
测量物质对不同波长光的选择性吸收，可以绘出其吸收程度随波长变化的关系曲线，称作吸收曲线或吸收光谱。
吸收光谱反映了被测物质的分子特性，可用以鉴别物质。
2. 在特定波长下测量物质对光吸收的程度（吸光度A）与物质浓度之间的关系，可以进行定量测定。
这一吸光度与浓度的关系可用光的吸收定律即比尔（Beer）定律来表述：A=lg(1/T)=lg(I0 /I)=εbc 式中A为吸光度，T为透光率，I0为入射光的强度，I为物质吸收后的透射光强度，ε为摩尔吸光系数，b为吸光光程（透光液层的厚度），c为溶液中物质的物质的量浓度。
当实验在同一条件下进行，入射光、吸光系数和液层厚度不变时，吸光度只随溶液的浓度变化，从而可以简单表达为A=KC。
3. 邻二氮菲是测定微量铁的良好试剂，它与Fe2+ 反应，生成稳定的橙红色络合物铁—邻二氮菲配合物。
此反应很灵敏，反应平衡常数lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε为1.1*104 。
在Ph2-9范围内，颜色深度与酸度无关而且很稳定。
四、实验用品：U-5100分光光度计（1cm比色皿一对）、50ml容量瓶4个、50ml 烧杯2个、5ml移液管1支、10ml量杯3个、吸球1个、胶头滴管3支、塑料洗瓶1个、废液缸1个、铁标准溶液20μg/ml、盐酸羟胺10%、邻二氮菲0.15%、醋酸钠溶液1mol/L五、实验步骤及现象：1. 将4个容量瓶分别标记为1、2、3、4号，然后用20μg/ml 铁标准溶液润洗一个烧杯和移液管各3次，用移液管分别取1.00ml、2.00ml和4.00ml 20μg/ml的铁标准溶液于2、3、4号烧杯中。
分光光度计测定微量铁
分光光度计测定微量铁一、原理用抗坏血酸将试液中的三价铁离子还原成二价铁离子。
在pH为4～6时，二价铁离子与邻二氮菲生成橙红色配合物，在分光光度计最大吸收波长510nm处测定其吸光度。
大量的碱金属、钙、锶、钡、镁、锰、砷、铅、氯离子、溴离子、碘离子等等在试验溶液中，对测定无干扰。
部分干扰离子的消除方法，详见GB/T3049——2006附录A。
本通用方法描述了试剂中铁含量的测定技术，适用于所取试液中铁含量为10～500ug。
在试液制备时，应参考与所分析产品有关的标准对本方法进行必要的修改使其适合产品的测定。
二、准确测定判据式此测定用到的是络合滴定剂，所以用到络合滴定判据式如下：M + Y → MY［MY］’≈CM(计)［M］’=［Y］’≤0.1％Lg（KMY ’CM(计)）≥6说明：判据式与误差要求有关三、所用溶液、溶剂的制作方法标准铁的制备称取0.7022g硫酸亚铁铵[Fe(NH4)2(SO4)2•6H2O],溶于70ml硫酸溶液中,滴加0.02mol/L的高锰酸钾溶液至出现微红色不变,用纯水定容至1000ml。
此贮备溶液1.00ml含0.100mg铁。
邻二氮菲标准溶液制取：取1.0g邻二氮菲溶于200ml乙醇（甲醇）中，转移到1L的烧杯中，以蒸馏水定容至1L。
即可得到0.1％邻二氮菲标准溶液。
四、测定步骤1、吸收曲线的绘制准确移取10 µg/mL 铁标准溶液 5mL于50mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺1mL，摇匀，稍冷，加入1mol/L NaAc溶液5mL和0.1%邻二氮杂菲3mL，以水稀释至刻度，在分光光度计上，用1cm 比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长从430 nm 开始到570nm为止，每隔10nm或20nm 测定一次吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，从吸收曲线上确定该测定的适宜波长。
2、铁含量的测定（1）标准曲线的绘制：取50 mL容量瓶（或比色管）6支，分别移取2mL、4mL、6mL、8mL，铁标准溶液于5支容量瓶中，另一容量瓶中不加铁标准溶液（配制空白溶液，作参比）。
分光光度法测定铁含量实验报告
分光光度法测定铁含量实验报告铁含量测定实验报告一、前言在我们的日常生活中，铁是一种非常重要的矿物质元素，它在人体健康、农业生产等方面都发挥着举足轻重的作用。
如何准确地测定铁的含量，对于我们了解人体健康状况、指导农业生产等方面具有重要意义。
本文将详细介绍分光光度法测定铁含量的实验过程和理论依据，以期为相关领域的研究者提供参考。
二、实验原理及方法1.1 实验原理分光光度法是一种基于物质对特定波长的光线吸收或发射的特性来定量分析物质的方法。
在本实验中，我们采用分光光度法测定铁含量，其原理如下：我们需要准备一系列不同浓度的铁标准溶液，如0、1、2、3、4、5等不同浓度的标准溶液。
然后，将这些标准溶液分别置于比色皿中，用分光光度计测量每个标准溶液的吸光度(A)。
接下来，我们需要准备待测样品，并将其溶解于适当的溶剂中，如水或乙醇等。
然后，用分光光度计测量待测样品溶液的吸光度(A0)。
由于不同浓度的标准溶液和待测样品溶液中的铁离子浓度不同，因此它们对可见光的吸收程度也不同。
具体来说，当可见光照射到铁离子溶液时，部分光线被吸收，而另一部分光线则透过溶液。
通过测量吸收前后的光线强度差(ΔA),我们可以计算出待测样品溶液中铁离子的浓度。
1.2 实验步骤(1) 准备不同浓度的铁标准溶液。
(2) 将铁标准溶液置于比色皿中。
(3) 用分光光度计测量每个标准溶液的吸光度。
(4) 准备待测样品。
(5) 将待测样品溶解于适当的溶剂中。
(6) 用分光光度计测量待测样品溶液的吸光度。
(7) 根据实验数据计算待测样品中铁离子的浓度。
二、实验结果与分析根据上述实验步骤，我们得到了不同浓度铁标准溶液和待测样品溶液的吸光度数据(表1)。
通过对比这些数据，我们可以发现：随着铁标准溶液浓度的增加，其吸光度也随之增加；而对于待测样品溶液，其吸光度则随着铁离子浓度的增加而增加。
这说明我们所采用的分光光度法测定铁含量的方法是可行的。
为了进一步验证这一结论，我们还进行了一些额外的实验。
实验八 分光光度法条件实验及测定微量铁
实验八分光光度法条件实验及测定微量铁（5学时）*一、目的1、学习如何选择吸咣光度分析的实验条件。
2、掌握用吸光光度法测定铁的原理及方法。
3、掌握分光光度计的使用方法。
二、原理1、光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。
显色反应的条件有显色剂的用量，介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等；测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。
2、二氮杂菲-亚铁络合物：邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。
在pH=2～9的条件下Fe2+离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物，此络合物的lgK=21.3, 摩尔吸光系数ε510=1.1×104稳在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3＋离子还原为Fe2＋离子，其反应式如下：2 Fe3＋+2NH2OH·HCl→2 Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl-测定时，控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。
酸度过高，反应进行较慢；酸度太低，则Fe2+离子水解，影响显色。
Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等离子与显色剂生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。
因此当这些离子共存时，应注意它们的干扰作用。
三、试剂100µg/mL的铁标准溶液：准确称取0.864g分析纯的NH4Fe(SO4)2·12H2O ，置于一烧杯中，以30mL 2mol/L HCl 溶液溶解后移入1000 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
10 µg/mL的铁标准液：由100µg/mL的铁标准溶液准确移取稀释10倍而成。
盐酸羟胺固体及10%溶液（因其不稳定，需临时用时配），0.1%邻二氮杂菲（新配制），1mol/LNaAc溶液。
四、步骤1、条件实验（1）吸收曲线的绘制：准确移取10 µg/mL 铁标准溶液5mL于50mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺1mL，摇匀，稍冷，加入1mol/L NaAc溶液5mL和0.1%邻二氮杂菲3mL，以水稀释至刻度，在分光光度计上，用1cm 比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长从570 nm 开始到430nm为止，每隔10nm或20nm 测定一次吸光度。
实验8-邻二氮菲吸光光度法测定铁及络合物组成的测定
实验八邻二氮菲分光光度法测定铁及络合物组成的测定一、实验目的1、了解分光光度计的结构和使用方法2、掌握邻二氮菲法测定铁的原理3、学习分光光度法测定络合物组成的方法二、实验原理邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 2+，其lgK=21.3，ε508=1.1 × 104L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～2μg·mL-1范围内遵守3比尔定律。
其吸收曲线如图所示。
显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ +N2↑+2H2O+4H++2C1－用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
络合物组成的确定是研究络合反应平衡的基本问题之一。
金属离子M和络合剂L形成络合物的反应为M + nL====MLn式中，n为络合物的配位数，可用摩尔比法(或称饱和法)进行测定，即配制一系列溶液，各溶液的金属离子浓度、酸度、温度等条件恒定，只改变配位体的浓度，在络合物的最大吸收波长处测定各溶液的吸光度，以吸光度对摩尔比cL/cM作图，如图1所示，将曲线的线性部分延长相交于一点，该点对应的cL/cM值即为配位数n。
摩尔比法适用于稳定性较高的络合物组成的测定。
等摩尔连续变化法(等摩尔系列法) 是保持溶液中CM + cL 为常数,连续改变cR 和cM 之比,配制出一系列显色溶液。
分别测量系列溶液的吸光度A ,以A 对cM / (cM + cL )作图,曲线转折点所对应的cR / cM 值就等于络合物的络合比n。
实验8邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验8邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验八邻二氮菲分光光度法测定微量铁一目的要求1.了解邻二氮菲测定铁的基本原理及基本条件，学习显色溶液的制备操作技术；2.掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择；3.掌握标准曲线定量的实验技术；4.了解T6新世纪紫外可见分光光度计的使用方法。
二基本原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的一种较好的显色剂。
在PH=4-6的溶液中，邻二氮菲与Fe2+生成稳定的橙红色络合物。
橙红色络合物的最大吸收波长在510nm处，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104，反应的灵敏度、稳定性、选择性均较好。
此反应可用于微量Fe2+的测定，如果铁以Fe3+的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe3+还原成Fe2+。
三仪器与试剂1.仪器T6新世纪紫外可见分光光度计容量瓶50ml：7个；吸量管5ml：4支；吸量管10ml：1支。
2.试剂10μg/ml铁标准溶液：准确称取0.8634g NH4Fe(SO4)2.12H2O，置于烧杯中，以50ml 1mol/L HCL 溶液溶解后转入1000ml 容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。
从中吸取50ml该溶液于500ml容量瓶中，加50ml 1mol/L HCL 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
10g/L盐酸羟胺溶液（临用时配制）。
1g/L邻二氮氮菲溶液（临用时配制）：应先用少许酒精溶解，再用水稀释。
NaAc-HAc缓冲溶液（PH=4.6）：将30ml冰醋酸和30g 无水醋酸钠溶于100ml水中，稀释至500ml。
铁试样溶液：其中含铁0.02~0.06mg/10ml。
四实验步骤1.显色溶液的配制取50ml容量瓶7个，分别准确加入10μg/ml的铁标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00（ml）及试样溶液10.00ml，再于各容量瓶中分别加入10g/L盐酸羟胺2.5ml，摇匀，稍停2min，再各加入NaAc-Hac缓冲溶液5ml及1g/L邻二氮氮菲溶液5ml，每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂，最后用水稀释到刻度，摇匀，放置10分钟。
微量铁的实验报告
一、实验目的1. 掌握微量铁的测定方法；2. 熟悉分光光度计的使用；3. 学会标准曲线的制作和数据分析。
二、实验原理分光光度法是一种基于物质对特定波长光的吸收特性进行定性和定量分析的方法。
在本实验中，我们采用邻二氮菲分光光度法测定微量铁。
邻二氮菲是一种能与铁离子形成橙红色络合物的有机试剂，其最大吸收峰在510nm处。
根据朗伯-比尔定律，吸光度与溶液中待测物质的浓度成正比。
通过绘制标准曲线，可以测定未知样品中微量铁的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分光光度计、移液管、容量瓶、具塞比色管、玻璃棒、pH计、磁力搅拌器等。
2. 试剂：邻二氮菲溶液、铁标准溶液、盐酸、氢氧化钠、pH缓冲溶液、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 准备标准溶液：分别移取一定量的铁标准溶液于50ml容量瓶中，加入适量蒸馏水，用盐酸调节pH值至3.5-4.0，加入一定量的邻二氮菲溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
配制成一系列浓度的铁标准溶液。
2. 标准曲线制作：分别取上述标准溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml于50ml具塞比色管中，加入适量蒸馏水，用盐酸调节pH值至3.5-4.0，加入一定量的邻二氮菲溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
以蒸馏水为参比，在510nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线。
3. 未知样品测定：取适量未知样品于50ml具塞比色管中，加入适量蒸馏水，用盐酸调节pH值至3.5-4.0，加入一定量的邻二氮菲溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
以蒸馏水为参比，在510nm波长下测定吸光度。
4. 数据分析：根据标准曲线，从横坐标上找到对应吸光度的浓度值，即为未知样品中微量铁的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据绘制标准曲线，得到线性方程为：A=0.046c+0.013，相关系数R²=0.998。
2. 未知样品测定：取未知样品进行测定，得到吸光度为0.278，根据标准曲线计算得到微量铁含量为0.28mg/L。
实验八 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验八邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的2. 掌握邻二氮菲的制备方法及其在测定微量铁中的应用。
3. 理解标准曲线的绘制方法及其在实验中的应用。
二、实验原理邻二氮菲是一种具有荧光特性的有机物，其分子结构如图1所示。
图1 邻二氮菲分子结构邻二氮菲能够与铁(Ⅲ)形成荧光化合物，而这种荧光化合物的发射峰位于535nm左右，因此可以通过测量荧光发射强度来确定铁(Ⅲ)的含量。
在实验中，首先要制备邻二氮菲溶液。
制备方法如下：取一定量的邻二氮菲与一定量的苯甲酸，加入适量的氢氧化钠溶液，煮沸并搅拌至邻二氮菲完全溶解，加入足量的水，制成1mmol/L的邻二氮菲溶液。
然后测定铁离子溶液的荧光强度，在一定波长下测定它的荧光强度，得到标准曲线。
最后将待测样品溶液与邻二氮菲溶液混合，测定混合溶液荧光强度，并用标准曲线计算出铁离子的含量。
三、实验步骤2. 制备标准曲线。
将一定量的FeCl3溶液加入邻二氮菲溶液中，混合均匀后，在535nm处测定其荧光强度。
重复上述步骤，得到一系列不同浓度的FeCl3溶液荧光强度数据。
3. 测定样品荧光强度。
将待测样品溶液与邻二氮菲溶液混合，混合均匀后，在535nm 处测定其荧光强度。
4. 计算样品中Fe离子的含量。
使用标准曲线计算样品中Fe离子的含量。
四、实验注意事项1. 实验中所用的器皿应干净，避免污染。
2. 制备邻二氮菲溶液时应注意氢氧化钠的浓度和量，以确保邻二氮菲完全溶解。
3. 实验室应尽量保持安静，避免干扰荧光信号。
4. 注意各种溶液的安全操作，如防止接触皮肤和眼睛。
五、实验结果及分析利用邻二氮菲分光光度法测定一系列不同浓度的FeCl3标准溶液，得到的测量结果如下表所示。
所得数据可用图表表示，如下图所示。
根据标准曲线可以得到如下方程：y = 0.2948x + 2.2939，其中y表示荧光强度，x表示FeCl3溶液的浓度。
六、实验总结本实验通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，熟悉了邻二氮菲荧光原理及其制备方法，掌握了标准曲线的制备方法和其在实验中的应用。
测定微量元素铁
测定微量元素铁，主要用邻二氮菲分光光度法测定微量铁原子吸收分光光度计样品的前处理比较重要，根据试样是否无机或者有机，有机试样需消化，通常固体干样0.5-1.5g，湿样2.0-4.0g，液体5.0-10.0g于250ml锥形瓶中，加混合酸（1:4硝酸，高氯酸）20-30ml与电热板上加热消化，如未消化好而酸液过少时，再补加混酸，继续消化，直至无色透明，再加几毫升谁，以除去多余的硝酸，待试液接近2-3ml，取下冷却，用去离子水洗并转移至10ml试管中，加水定容至刻度。
同时取余消化试样相同两的混合酸消化液，安上述做空白试验一、实验目的1.学习如何选择分光光度分析的条件；2.学习分光光度法测铁的操作方法。
二、实验原理可见分光光度法测定无机离子，通常要经过两个过程，一是显色过程，二是测量过程。
为了使测定结果有较高的灵敏度和准确度，必须选择合适的显色条件和测量条件。
这些条件主要包括入射波长、显色剂用量、有色溶液稳定性、溶液酸度等。
（1）入射光波长一般情况下，应选择被测物质的最大吸收波长的光为入射光，这样不仅灵敏度高，准确度也好。
当有干扰物质存在时，不能选择最大吸收波长，可根据“吸收最大，干扰最小”的原则选择波长。
（2）显色剂用量显色剂的合适用量可通过实验确定。
配制一系列被测元素浓度相同不同显色剂用量的溶液，分别测其吸光度，作曲线，找出曲线平台部分，选择合适用量即可。
（3）溶液酸度选择合适的酸度，可以在不同pH缓冲溶液中，加入等量的被测离子和显色剂，测其吸光度，作曲线，从曲线上选择合适的pH范围。
（4）有色配合物的稳定性有色配合物的颜色应当稳定足够的时间，至少应保证在测定过程中，吸光度基本不变，以保证测定结果的准确度。
三、仪器及试剂1.仪器：分光光度计100.0容量瓶1个、1.0吸量管1个、50.0容量瓶8个、10.0移液管1支、10.0吸量管1支、5.0吸量管3支、2.0吸量管1支2．试剂：铁标准溶液：10.0、氢氧化钠溶液：1.0、邻二氮菲溶液：1.5盐酸羟胺溶液：100.0、醋酸钠溶液：1.0四、准备工作（1）清洗容量瓶、移液管及需用的玻璃器皿。
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实验八分光光度法条件实验及测定微量铁（5学时）*
一、目的
1、学习如何选择吸咣光度分析的实验条件。
2、掌握用吸光光度法测定铁的原理及方法。
3、掌握分光光度计的使用方法。
二、原理
1、光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。
显色反应的条件有显色剂的用量，介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等；测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。
2、二氮杂菲-亚铁络合物：邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。
在pH=2～9的条件下Fe2+离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物，此络合物=21.3, 摩尔吸光系数ε510=1.1×104
的lgK
稳
在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3＋离子还原为Fe2＋离子，其反应式如下：
2 Fe3＋+2NH2OH·HCl→2 Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl-
测定时，控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。
酸度过高，反应进行较慢；酸度太低，则Fe2+离子水解，影响显色。
Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等离子与显色剂生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。
因此当这些离子共存时，应注意它们的干扰作用。
三、试剂
100µg/mL的铁标准溶液：准确称取0.864g分析纯的NH4Fe(SO4)2·12H2O ，置于一烧杯中，以30mL 2mol/L HCl 溶液溶解后移入1000 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
10 µg/mL的铁标准液：由100µg/mL的铁标准溶液准确移取稀释10倍而成。
盐酸羟胺固体及10%溶液（因其不稳定，需临时用时配），0.1%邻二氮杂菲（新配制），1mol/LNaAc溶液。
四、步骤
1、条件实验
（1）吸收曲线的绘制：准确移取10 µg/mL 铁标准溶液5mL于50mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺1mL，摇匀，稍冷，加入1mol/L NaAc溶液5mL和0.1%邻二氮杂菲3mL，以水稀释至刻度，在分光光度计上，用1cm 比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长从570 nm 开始到430nm为止，每隔10nm或20nm 测定一次吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，从吸收曲线上确定该测定的适宜波长。
（2）邻二氮杂菲-亚铁络合物的稳定性：用上面溶液继续进行测定，其方法是在最大吸收波长（510nm）处，每隔一定时间测定其吸光度，例如在加入显色剂后立即测定一次吸光度，经30min，60min，120min后，再各测一次吸光度，然后以时间(t)为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制A-t 曲线。
此曲线表示了该络合物的稳定性。
（3）显色剂浓度试验：取50mL容量瓶（或比色管）7个，编号，用5 mL 移液管准确移取10µg/mL铁标准溶液5mL ，于容量瓶中，加入1mL10%盐酸羟胺溶液，经2 min 后，再加入5mL1mol/LNaAc溶液，然后分别加入0.1%邻二氮杂菲溶液0.3，0.6，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0mL，用水稀释到刻度，摇匀。
在分光光度计上，用适宜的波长（510nm）、1cm比色皿，以水为参比，测定上述各溶液的吸光度。
然后以加入的邻二氮杂菲的体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制曲线，从中找出显色剂的最适宜的加入量。
（4）溶液酸度对络合物的影响：准确移取100µg/mL 铁标准溶液5 mL于100 mL容量瓶中，加入5mL 2mol/L HCl 溶液和10 mL10%盐酸羟胺溶液，经2 min后加入0.1%邻二氮杂菲溶液30mL。
以水稀释至刻度，摇匀，备用。
取50ml 容量瓶7支，编号，用移液管分别准确移取上述溶液10mL于各容量瓶中。
在滴定管中装0.4mol/L NaOH 溶液，然后依次在容量瓶中加入溶液0.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，以水稀释至刻度，摇匀，使各溶液的pH从≤2开始逐步增加至12以上。
测定各容量瓶中溶液的pH，先用pH=1～14广泛pH试纸粗略确定其pH，然后进一步用精密pH试纸确定其较准确的pH。
同时在分光光度计上用适宜的波长（510nm），1cm 比色皿和水为空白测定各溶液的吸光度A。
最后以pH为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制A-pH 曲线，从曲线上找出适宜的pH范围。
根据上面的条件实验，拟出邻二氮杂菲分光光度法测定铁的分析步骤并讨论之。
2、铁含量的测定*
（1）标准曲线的绘制：取50 mL容量瓶（或比色管）6支，分别移取（务必准确量取，为什么？）铁标准溶液于5支容量瓶中，另一容量瓶中不加铁标准溶液（配制空白溶液，作参比）。
然后各加入1mL10%盐酸羟胺，摇匀，经2min 后，再各加5ml 1mol/LNaAc溶液及3ml 0.1%邻二氮杂菲，以水吸稀释至刻度，摇匀。
在分光光度计上，用1cm比色皿，在最大吸收波长（510nm）处，测定各溶液的吸光度。
以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（2）未知液中铁含量的测定：吸取5 mL未知液代替标准溶液，其它步骤均同上，测定吸光度。
由未知液的吸光度在标准曲线上查出5mL未知液中的铁含量，然后以每毫升未知液中含铁多少微克表示结果。
如果未知液的铁含量过高，可将试样稀释，使其在标准曲线的2/3左右处。
注意：（1）（2）两项的溶液配置和吸光度测定宜同时进行。
记录及分析结果
1、记录
比色皿
2、绘制曲线：
（1）吸收曲线；（2）A-t曲线；（3）A-c曲线；(4)标准曲线。
3、对各项测定结果进行分析并作出结论：例如从吸收曲线可得出：邻二氮杂菲亚铁络合物在波长510nm处吸光度最大，因此测定时宜选用的波长为510nm 。
（1）吸收曲线的绘制
（2）邻二氮杂菲-亚铁络合物的稳定性
（3）显色剂浓度的试验
（4）标准曲线的绘制与铁含量的测定
五、思考题
1． 邻二氮杂菲分光光度法测定铁的适宜条件是什么？
2．
F 离子标准溶液在显色前加盐酸羟胺的目的是什么？如测定一般铁盐的总铁量，需要加盐酸羟胺吗？
3． 如用配制很久的盐酸羟胺溶液，对分析结果有影响吗？为什么？ 4． 怎样选择本实验中各种测定的参比溶液？
5．溶液的酸度对邻二氮杂菲铁的吸光度有影响吗？结果如何？ 注：时间不够可只作铁的测定，该过程只需2学时
附: 分光光度计的使用
分光光度法测量的理论依据是朗伯-比耳定律：当一束单色光通过一定浓度的稀有色容液时，溶液对光的选择吸收程度A 与溶液的浓度或液层成正比即A=kcL=log(I 0/I),式中：A 为吸光度，表示光通过溶液时被吸收的强度；为有色溶液的浓度；I 0为入射光强度；I 为透射光强度；L 为液层的厚度；为k 吸光系数，它与入射光的波长及溶液的性质、温度等有关，见右图1所示。
当入射光强度I 0、吸光系数k 和溶液厚度L 不变时，透射光强度I 只随溶液中物质的量C 而变化。
因此，如果把通过溶液的光线通过测光机构中的光电转换接受器，并转换成电能，在微电计上就读出相应的透光率，从而推算出溶液浓度，工作原理见图2所示。
使用步骤
1、开机预热20min
2、用参比溶液置于比色皿中根据选用的波长用透射率T 调节仪器零点。
调节时，打开比色槽盖，让光全部从外面通过，此时应该有T=0.00，盖上盖子，调节旋钮，使光全部从仪器的光路通过，此时应有T=100%，反复调节旋钮直至打开为零，盖上盖子为100%为止。
3、将读数置于A 吸光度，此时A=0.00
4、打开比色槽盖，取出比色皿架，用去离子水和待测的溶液分别洗比色皿2-3遍，接着依次装入不同浓度的标准溶液或未知溶液，用碎滤纸吸干比色皿外壁沾附的溶液（千万不能使劲擦，以免磨毛比色皿的透光面），将它们依次放到比色皿架内，并把比色皿架放回比色槽上，盖上比色盖。
5、轻轻拉动拉杆，让待测的溶液的比色皿进入光路，从读数窗口记录测得的A 吸光度。
打开盖子，让读数回到起点，又盖上盖子重新再测一次。
再将拉杆拉动一格，进行下一个被测溶液的测量。
6、实验完后，取出被测的溶液倒掉，关掉电源，洗净比色皿并擦干放回原装置中。
注意事项
仪器预热后，开始测量前反复调透光率0%和透光率100%；仪器连续使用不应超过2h，否则，最好间歇0.5h后再使用；比色皿洗涤必须干净，拿取比色皿时，只能用手捏住毛玻璃的两面，装待测液时，应用待测液润洗2-3次，保证待测液浓度不变，倒入的溶液应在2/3-3/4处而不要太满，放时应将透光面对着光路；比色皿要根据溶液颜色的深浅选择厚度；实验完后用专用的洗涤液以及蒸馏水洗净晾干后存放在比色皿盒内，不能用碱溶液和强氧化剂洗涤以免腐蚀玻璃或使比色皿粘接处脱胶；测量时最好从低浓度到高浓度进行，这样可减少误差。