学说周报第1101-22期
躯体交界部位止血器材在创伤急救中的应用进展
第59卷 第4期2023年08月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .4A u gu s t 2023[收稿日期]2023-02-06; [修订日期]2023-06-09[基金项目]军队卫勤保障能力创新与生成专项(21WQ 019);青岛市市南区科技局科技计划项目(2022-2-017-Y Y )[第一作者]徐丰瀛(1988-),男,博士,主治医师㊂[通信作者]王额尔敦(1975-),男,硕士,副主任医师㊂E -m a i l :e r d u n _w a n g@163.c o m ㊂躯体交界部位止血器材在创伤急救中的应用进展徐丰瀛,刘猛,王额尔敦(中国人民解放军海军第971医院麻醉科,山东青岛 266071)[摘要] 在战场环境中躯体交界部位出血是重要的致死原因㊂近年来出现了一些新的止血器械㊂本文介绍了国外躯体交界部位止血器械的概况,总结已发表的个案报道和对照研究,评价了这些器械的优点和不足,为其应用及研发提供参考㊂[关键词] 止血技术;身体部位;外科器械;创伤和损伤;急救医疗服务;综述[中图分类号] R 605.972 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)04-0617-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.129[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /37.1517.R.20230925.0919.002;2023-09-26 10:33:49A D V A N C E S I N A P P L I C A T I O N O FJ U N C T I O N A L H E M O R R H A G E C O N T R O L D E V I C E SI N F I R S T A I D F O R T R A U M A X U F e n g y i n g ,L I U M e n g ,WA N G E e r d u n (D e p a r t m e n to fA n e s t h e s i o l o g y ,N o .971H o s p i t a lo fP L A N a v y ,Q i n g d a o266071,C h i n a)[A B S T R A C T ] B l e e d i n g i n t h e j u n c t i o n a l a r e a s o f t h eb o d y i s a n i m po r t a n t c a u s eo f d e a t h i n t h eb a t t l e f i e l d .N e wh e m o s t a t i c d e v i c e sh a v e e m e r g e d i n r e c e n t y e a r s .T h i s a r t i c l e i n t r o d u c e d t h eo v e r v i e wo f i n t e r n a t i o n a l j u n c t i o n a l h e m o r r h a ge c o n t r o l d e v i c e s ,a n ds u mm a r i z e d r e l e v a n t c a s e r e p o r t s a n d c o n t r o l l e d s t u d i e s t o e v a l u a t e t h e a d v a n t a g e s a n d d i s a d v a n t a g e s of t h e s e d e v i c e s .W e h o pe t o p r o v i d e a r ef e r e n c e f o r t h e i r a p p l i c a t i o na n d f u t u r e d e v e l o p m e n t .[K E Y W O R D S ] h e m o s t a t i c t e c h n i q u e s ;b o d y r eg i o n s ;s u r g i c a l i n s t r u m e n t s ;w o u n d sa n d i n j u r i e s ;e m e r g e n c y me d i c a l s e r -v i c e s ;r e v i e w躯体交界部位是躯干与肢体的连接部位,如颈部㊁腋窝㊁腹股沟等[1]㊂由于止血带的广泛应用,肢体出血已得到有效控制[2-3]㊂躯体交界部位无法绑扎止血带,只能依靠压迫止血㊂美军的数据表明,交界部位出血占院前死亡的17.5%,是战伤可存活伤员死亡的首要原因[4]㊂因此,外军非常重视交界部位止血器材的研发[5]㊂2013年,美军因阿富汗战争提出紧急研发相关器械的要求[6]㊂此后,国外出现了多种专用止血器械,但均未在我国出售㊂本文简要介绍这些专业止血器械,并对其在创伤急救中的应用作一综述㊂1 躯体交界部位止血器材简介本文介绍5种躯体交界部位止血器材(图1),其大概情况如下㊂1.1 腹主动脉与交界区止血带(A A J T )A A J T 由美国C o m pr e s s i o n W o r k s 公司制造,其质量为482g ,采用充气式设计,可通过充气压力阻断交界部位动脉血流㊂可用在腋窝和腹股沟等部位,最长使用时限4h[7]㊂1.2 快速战伤止血夹(C R o C )C R o C 由美国C o m b a tM e d i c a l S ys t e m s 公司制造,主体为铝合金材质,质量720g,携带时可平放,使用时以旋转杆在交界部位施加压力阻断血流,最长使用时限为4h[8]㊂1.3 交界区急救工具(J E T T )J E T T 由美国N o r t h A m e r i c a nR e s c u e 公司制造,由皮带㊁两个T 型手柄和梯形衬垫组成,质量为675g ㊂可以同时阻断双下肢血流,还被批准用于骨盆骨折,最长使用时限为4h[9]㊂1.4 S AM 交界部位止血带(S J T )S J T 由美国S a m M e d i c a lP r o d u c t s 公司制造,外观与J E T T 相近,质量450g ,与J E T T 不同,S J T 配备两个充气套囊,也可用于骨盆骨折,最长使用时限为4h[10]㊂1.5 i T C l a m p 止血夹i T C l a m p 由加拿大iT r a u m a C a r e 公司制造,形似日常使用的夹子,质量37.1g ,用于四肢㊁腋窝㊁腹股沟和头颈部的止血㊂与前述器械不同,它通过合拢伤口边缘,形成创面内血肿压迫受损血管以控制出血[11]㊂2 躯体交界部位止血器材的应用本部分简要介绍4种躯体交界部位止血器械在军民创伤急救中的相关报道㊂2.1 A A J T 的应用关于A A J T 应用有3篇病例报道[12-14]㊂例1:为阿富汗战争中的伤员,双下肢离断伤,双侧大腿使用了止血带,在转运时已无颈动脉搏动㊂经高流量吸氧㊁胸骨穿刺予全血和新鲜冷冻血浆㊁快速序贯诱导气管插管后生命体征仍持续恶化㊂此时使用A A J T ,操作时间不详,气囊压力达39.9k P aCopyright ©博看网. All Rights Reserved.618青岛大学学报(医学版)59卷A:A A J T;B:C R o C;C:J E T T;D:S J T;E:i T C l a m p;图片来源于官方网站㊂图15种躯体交界部位止血器械时出血停止,伤员最终存活,随访未出现肾功能衰竭或肠道缺血[12]㊂例2:为平民,子弹贯穿上臂和腋部后进入胸腔,伤员低血压伴心动过速,输注浓缩红细胞后使用A A J T,压力为33.2k P a时出血停止,后因体动致A A J T移位而再次出血,给予肌松药后重新固定A A J T,伤员经手术后康复[13]㊂例3:为平民,双下肢受3处火器伤,呈低血压伴心动过速,输注浓缩红细胞的同时使用A A J T,压力为33.2k P a时出血停止,转运途中A A J T在位良好,止血效果明显,随访未发现相关并发症[14]㊂2.2 C R o C的应用C R o C应用目前仅有1篇病例报道[15]㊂伤员在战场遭受左下肢离断伤,直升机转运途中使用了C R o C,耗时90s 成功止血,但因后方医院资源有限,未能成功救治㊂2.3 S J T的应用S J T应用目前仅有1篇病例报道[16]㊂伤员在战场左大腿受火器伤,使用了绷带和止血带后仍有出血,伤后1h被送至救助点,暴露后发现伤口在肢体近端,止血带无效㊂去除止血带并按压3m i n后放置S J T,耗时3m i n,止血后伤员送后方医院期间S J T在位良好,经手术治疗伤员康复㊂2.4i T C l a m p的应用i T C l a m p应用有多篇病例报道[17-18]㊂例1:为老年女性,被螺丝刀刺伤头部,造成6c m的头皮损伤伴动脉出血,估计失血量500m L,使用i T C l a m p成功控制出血[17]㊂例2:为青年男性吸毒者,腹股沟慢性感染伴股静脉暴露,反复静脉注射致活动性出血,估计失血量1000m L,使用i T C l a m p 后2h出血停止[17]㊂例3:伤者右大腿受7.62mm枪弹伤伴动脉出血,使用了i T C l a m p后转运行手术治疗[18]㊂例4:伤者左大腿受弹片伤伴动静脉出血,使用i T C l a m p成功闭合创面[18]㊂i T C l a m p应用还有2项病例系列研究[19-20]㊂其一分析了i T C l a m p在216例平民创伤中的应用情况[19],伤员平均年龄53.3岁,37%为头面部损伤,机械性损伤(坠落伤㊁机动车伤等)较常见㊂62.5%的i T C l a m p应用于院前急救;平均每位伤员使用了(1.2ʃ0.5)个止血夹,最多的使用了4个;41.3%的i T C l a m p放置时间不超过1m i n,56.3%的病例未报道放置时间;87.5%的伤员成功止血,7例伤员需要重新安置止血夹;i T C l a m p使用失败的原因主要是皮肤组织破碎,无法放置㊂其二分析了全球245例病人使用i T C l a m p的经验,其中81%的案例成功止血,3个最常使用的部位依次是头皮(37%)㊁上肢(20%)和下肢(19%)[20]㊂3躯体交界部位止血器材应用的比较研究本部分介绍了几种器械之间的比较研究,从止血成功率㊁安全性㊁操作时间和使用者评价等多个方面进行对比㊂由于模拟研究无法对受试者造成真实创伤,常通过超声评估远端血管的血流信号以代表是否成功止血[21]㊂3.1专业人员使用止血器械的比较K R A G H等[22]报道中,2名军队医疗人员对10名志愿者进行了测试㊂在每名受试者的腹股沟区使用4种止血器械(A A J T㊁C R o C㊁J E T T和S J T)各3次,间隔5m i n㊂监测受试者的生命体征;使用多普勒超声诊断仪检测远端血流作为出血的替代指标;记录操作耗费的时间;使用视觉模拟评分法(V A S)判定疼痛程度,并评估其他不适症状;测试者和受试者依据主观感受对4种止血器械进行打分㊂结果表明,4种止血器械安全性相似;止血成功率最高的是C R o C,A A J T 低于其他3种器械,原因是造成了受试者的疼痛;4种器械操作时间为123~203s,差异无统计学意义;主观上受试者认为C R o C最佳,测试者则认为C R o C和S J T最佳㊂在另一项研究中,9名军队医疗人员使用4种止血器械对受试者模拟止血,评估止血成功率㊁操作时间和使用者倾向等指标,每人每种器械各评估2次㊂研究结果表明,4种器械都是安全的,S J T和C R o C成功率最高,花费时间也最短,但与其他器械间的差异无统计学意义㊂医疗人员优先选择的也是S J T 和C R o C[23]㊂C H E N等[24]报道中,14名以色列军队医疗人员评价了4种止血器材的安全性㊁止血成功率㊁操作时间和使用者倾向等指标㊂4种止血器材的安全性均较好,C R o C和A A J T 止血成功率最高,使用S J T和J E T T速度最快㊂值得注意的是,在前5个受试者使用完后,3个A A J T均损坏㊂与前两个研究不同,受试者最青睐的是A A J T和S J T㊂T H E OD O-R I D I S等[25]对来自多个国家的75名特种作战部队医疗人员进行问卷调查,比较C R o C和JE T T战场止血成功率㊁便捷性㊁操作时间㊁是否易移位等,测试者对J E T T的评价高于C R o C㊂M E U S N I E R等[26]将84名模拟伤员随机分配至接受C R o C或S J T止血两组,从止血成功率㊁操作时间和主观评价三方面进行对比,结果显示,两组止血成功率均接近90%,差异无显著性,但S J T的操作时间显著短于C R o C㊂3.2非专业人员使用止血器械的比较前几项研究的测试者都是专业人员,而2018年的一项研究则同时在医疗专业和非医疗专业战斗人员中开展,对比Copyright©博看网. All Rights Reserved.4期徐丰瀛,等.躯体交界部位止血器材在创伤急救中的应用进展619了J E T T和S J T的操作时间和止血成功率[27]㊂共227人参与了该项研究㊂研究要求在240s内将止血器械压力升至23.9k P a以上判为放置成功,结果只有40%的医疗专业人员和28%的非医疗专业人员能够成功放置止血器械,且医疗专业人员用时更短㊂两类人员均倾向于选择S J T,并且认为S J T可由单人放置㊂而测试者所受的培训不充分可能是该研究中的成功率低于以往研究的原因㊂3.3移动中止血器械的比较前述几项研究均在固定场所开展,2019年的一项研究则对比了转运过程中3种止血器械(C R o C㊁J E T T和S J T)的止血成功率和使用者倾向[28]㊂49名来自美国海军的受试者参加,每名受试者均需扮演伤员和测试者,随机次序使用3种止血器械㊂通过多普勒超声诊断仪检测足背动脉搏动评判止血效果㊂在放置止血器械后,测试者和助手将受试者抬至担架上,转运4.5m的距离后再次检测足背动脉搏动㊂结果表明,放置C R o C的时间长于J E T T和S J T;转运对止血器械的效果影响较大,3种器械表现均不理想;转运前3种止血器械的成功率无差异,转运后S J T成功率优于C R o C和J E T T;测试者对S J T的评价也高于C R o C和J E T T㊂4小结与展望压迫是躯体交界部位主要的止血方式[29]㊂而i T C l a m p 的原理不同,其通过封闭创面产生组织内压力达到止血的目的,主要用于头颈部创伤,操作简便且效果良好[30]㊂目前,在躯体交界部位止血器材的研究方面还存在一些问题㊂首先,这些器械在创伤急救领域还没有进行成规模运用的随机对照研究[31]㊂因此,大范围地推广这5种止血器械仍需谨慎,需要更多的证据支持,近期一项系统评价和m e t a分析得出了类似的结论[32]㊂此外,非专业人士使用这些器械能否达到预期效果仍然存疑[33]㊂最后,躯体交界部位止血器械本身并不能起到完全止血的作用[34],在转运过程中还可能导致止血效果降低或失效,而更长时间使用就意味着感染和组织损伤的风险增加[35]㊂面对存在的问题,在以后的研究中应改良现有器械的缺点,继续深入研究其材料和结构,开发更为先进的器械和止血技术,提高止血效果和减少不良反应㊂例如,已有研究将止血器材与止血粉等药物联合用于创伤救治[36]㊂此外,应加强相关人员的培训,提高其熟练使用器械的能力㊂我国未来必定会出现拥有自主产权的同类产品[37],应当加强对此类器械的标准化管理,确保器械质量和安全性㊂还应当将躯体交界部位止血器械的使用纳入到现有的军民创伤救治体系中[38],以提高应急处置的成功率和效率㊂[参考文献][1]K O TWA LRS,B U T L E RFKJ r,G R O S SK,e t a l.M a n a g e-m e n to f j u n c t i o n a l h e m o r r h a g ei n t a c t i c a lc o m b a tc a s u a l t yc a r e:T C C CG u ide l i n e s?P r o p o s e d c h a n g e13-03[J].J o u r n a l o fS p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:a P e e rR e v i e w e d J o u r n a l f o r S O FM e d i c a l P r o f e s s i o n a l s,2013,13(4):85-93.[2]S M I T H A A,O C H O A JE,WO N G S,e ta l.P r e h o s p i t a lt o u r n i q u e tu s ei n p e n e t r a t i n g e x t r e m i t y t r a u m a:d e c r e a s e db l o o d t r a n s f u s i o n sa n d l i m bc o m p l i c a t i o n s[J].T h eJ o u r n a l o fT r a u m a a n dA c u t eC a r eS u r g e r y,2019,86(1):43-51. 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All Rights Reserved.620青岛大学学报(医学版)59卷M e d i c i n e:aP e e rR e v i e w e dJ o u r n a l f o rS O F M e d i c a lP r o f e s-s i o n a l s,2013,13(3):1-4.[14]C R O U S H O R NJ.A b d o m i n a l a o r t i ca n d j u n c t i o n a l t o u r n i q u e tc o n t r o l sh e m o r r h a g e f r o m a g u n s h o tw o u n do f t h e l e f t g r o i n[J].J o u r n a l o fS p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:aP e e rR e v i e w e d J o u r n a l f o r S O F M e d i c a l P r o f e s s i o n a l s,2014,14(2):6-8.[15]T O VMA S S I A N R V,K R A G HJFJ r,D U B I C K M A,e t a l.C o m b a t r e a d y c l a m p m e d i ct e c h n i q u e[J].J o u r n a lo fS p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:aP e e rR e v i e w e d J o u r n a l f o rS O F M e d i-c a l P r o f e s s i o n a l s,2012,12(4):72-78.[16]K L O T ZJK,L E O M,A N D E R S E NBL,e t a l.F i r s t c a s e r e-p o r t o fS AM(r)J u n c t i o n a l t o u r n i q u e tu s e i n A f g h a n i s t a nt oc o n t r o l i n g u i n a lh e m o r r h a g eo nt h eb a t t l e f i e l d[J].J o u r n a lo fS p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:a P e e rR e v i e w e d J o u r n a l f o r S O FM e d i c a l P r o f e s s i o n a l s,2014,14(2):1-5.[17]B A R N U N GS,S T E I NM E T ZJ.A p r e h o s p i t a l u s e o f I T C l a m pf o r h a e m o s t a t i cc o n t r o l a n df i x a t i o no f ac h e s t t u b e[J].A c t aA n a e s t h e s i o l o g i c aS c a n d i n a v i c a,2014,58(2):251-253.[18]K I R K P A T R I C KA W,M C K E EJ L.T a c t i c a l h e m o r r h a g e c o n-t r o l c a s es t u d i e su s i n g a p o i n t-o f-c a r e m e c h a n i c a ld i r e c t p r e s-s u r ed e v i c e[J].J o u r n a l o f S p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:aP e e r R e v i e w e dJ o u r n a lf o r S O F M e d i c a lP r o f e s s i o n a l s,2014,14(4):7-10.[19]M C K E EJ L,M C K E E IA,B A L LCG,e t a l.T h e i T C l a m p i nt h e t r e a t m e n t o f p r e h o s p i t a l c r a n i o m a x i l l o f a c i a l i n j u r y:ac a s e s e r i e s s t u d y[J].J o u r n a l o f I n j u r y&V i o l e n c eR e s e a r c h,2019, 11(1):29-34.[20]M C K E EJL,K I R K P A T R I C K A W,B E N N E T T BL,e t a l.W o r l d w i d e c a s e r e p o r t s u s i n g t h e i T C l a m p f o r e x t e r n a l h e m o r-r h a g e c o n t r o l[J].J o u r n a lo fS p e c i a lO p e r a t i o n s M e d i c i n e:a P e e rR e v i e w e dJ o u r n a l f o rS O F M e d i c a lP r o f e s s i o n a l s,2018, 18(3):39-44.[21]D O UMA M J,P I C A R D C,O'D O C H A R T A I G H D,e ta l.P r o x i m a le x t e r n a la o r t i cc o m p r e s s i o nf o r l i f e-t h r e a t e n i n g a b-d o m i n a l-pe l v i c a n d j u n c t i o n a l h e m o r r h a g e:a nu l t r a s o n o g r a p h i cs t u d y i na d u l tv o l u n t e e r s[J].P r e h o s p i t a lE m e r g e n c y C a r e, 2019,23(4):538-542.[22]K R A G HJF,K O TWA LRS,C A P A P,e t a l.P e r f o r m a n c eo f j u n c t i o n a l t o u r n i q u e t s i nn o r m a l h u m a nv o l u n t e e r s[J].P r e-h o s p i t a l E m e r g e n c y C a r e,2015,19(3):391-398.[23]K R A G HJFJ r,P A R S O N SDL,K O TWA LRS,e t a l.T e s-t i n g o f j u n c t i o n a lt o u r n i q u e t sb y m i l i t a r y m e d i c st oc o n t r o l s i m u l a t e d g r o i nh e m o r r h a g e[J].J o u r n a l o f S p e c i a lO p e r a t i o n s M e d i c i n e:aP e e rR e v i e w e dJ o u r n a l f o rS O F M e d i c a lP r o f e s-s i o n a l s,2014,14(3):58-63.[24]C H E NJ,B E N O V A,N A D L E R R,e t a l.T e s t i n g o f j u n c t i o-n a l t o u r n i q u e t s b y m e d i c s o f t h e I s r a e l i d e f e n s e f o r c e i n c o n t r o l o f s i m u l a t e d g r o i nh e m o r r h a g e[J].J o u r n a l o fS p e c i a lO p e r a-t i o n sM e d i c i n e:aP e e rR e v i e w e d J o u r n a l f o r S O F M e d i c a l P r o-f e s s i o n a l s,2016,16(1):36-42.[25]T H E O D O R I D I SCA,K A F K A K E,P E R E Z A M,e t a l.E-v a l u a t i o na n d t e s t i n g o f j u n c t i o n a l t o u r n i q u e t s b y s p e c i a l o p e r a-t i o n f o r c e s p e r s o n n e l:a c o m p a r i s o no f t h e c o m b a t r e a d y c l a m pa n dt h e j u n c t i o n a le m e r g e n c y t r e a t m e n tt o o l[J].J o u r n a lo fS p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:a P e e rR e v i e w e d J o u r n a l f o r S O FM e d i c a l P r o f e s s i o n a l s,2016,16(1):44-50.[26]M E U S N I E RJG,D E WA R C,MA V R O V IE,e t a l.E v a l u a-t i o no f t w o j u n c t i o n a l t o u r n i q u e t s u s e d o n t h e b a t t l e f i e l d:c o m-b a t r e a d yc l a m p v e r s u sS AM j u n c t i o n a l t o u r n i q u e t[J].J o u r n a l o f S p e c i a lO p e r a t i o n sM e d i c i n e:aP e e rR e v i e w e d J o u r-n a l f o r S O F M e d i c a l P r o f e s s i o n a l s,2016,16(3):41-46.[27]F L E C HAI,N A Y L O RJ F,S C HA U E RSG,e t a l.C o m b a t l i-f e s a v e r-t r a i n e d,f i r s t-r e s p o n d e ra p p l i c a t i o no f j u n c t i o n a l t o u r-n i q u e t s:a p r o s p e c t i v e,r a n d o m i z e d,c r o s s o v e r t r i a l[J].M i l i-t a r y M e d i c a lR e s e a r c h,2018,5(1):31.[28]G A S P A R Y MJ,Z A R OW GJ,B A R R Y MJ,e t a l.C o m p a r i-s o no f t h r e e j u n c t i o n a l t o u r n i q u e t s u s i n g a r a n d o m i z e d t r i a l d e-s i g n[J].P r e h o s p i t a l E m e r g e n c y C a r e,2019,23(2):187-194.[29]魏苗,秦小波.美军战术战伤救治的特点与启示[J].人民军医,2020,63(12):1183-1185.[30]T A NEC,P E T E R S JH,M C K E EJL,e t a l.T h e i T C l a m p i nt h em a n a g e m e n t o f p r e h o s p i t a l h a e m o r r h a g e[J].I n j u r y,2016, 47(5):1012-1015.[31]徐坤,张大庆.医学灰色文献:开放科学环境下医学信息资源建设的新挑战[J].医学与哲学,2022,43(8):76-80. 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抗青枯病基因 RRS1 的研究进展
生命科学Chinese Bulletin of Life Sciences第22卷 第2期2010年2月Vol. 22, No. 2Feb., 2010文章编号 ：1004-0374(2010)02-0143-07收稿日期：2009-07-20；修回日期：2009-12-28基金项目：国家自然科学基金项目(30771463；30871709)；重庆大学研究生创新团队建设项目(200909B1007)*通讯作者：E-mail: huzongli71@抗青枯病基因RRS1的研究进展高建阁，胡宗利*，陈国平（重庆大学生物工程学院，重庆400044）摘 要：RRS1是被发现的第一个青枯病抗性基因，能介导多个Ralstonia solanacearum 小种的广谱抗性反应，也是至今第一例依赖NDR1蛋白的TIR-NBS-LRR 类R 基因。
该文综述了目前分子机制研究最为详尽的拟南芥抗青枯病基因RRS1的克隆、功能和表达作用模式的研究进展，对其他作物青枯病抗性的分子机理研究提供科学的依据和启示。
关键词：R R S 1；抗青枯病；拟南芥中图分类号：Q943.2；S435.621 文献标识码：AResearch advance in RRS1 gene of resistance to Ralstonia solanacearumGAO Jian-ge, HU Zong-li*, CHEN Guo-ping(Bioengineering College of Chongqing University, Chongqing 400044, China)Abstract: RRS1 was the first gene of resistance to Ralstonia solanacearum found in Arabidopsis thaliana , which confers broad-spectrum resistance to several strains of R. solanacearum . It was also the first R gene of the TIR-NBS-LRR subclass, depended on NDR1 protein. In this paper, we review the cloning, function and expressive model of RRS1 in A. thaliana , and hope to provide the science evidence and useful enlightenment for the molecular mechanism research of resistance to R. solanacearum in other crops.Key words: RRS1; resistance to Ralstonia solanacearum ; Arabidopsis thaliana茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum )曾用名Pseudomonas solanacearum ，属于革兰氏阴性β蛋白类细菌[1]。
载药静电纺丝纤维研究及应用进展
第59卷 第1期2023年02月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .1F e b r u a r y2023㊃综述㊃[收稿日期]2021-05-27; [修订日期]2022-11-13[基金项目]国家自然科学基金面上项目(81672197)[第一作者]于超群(1998-),男,硕士研究生㊂[通信作者]张海宁(1976-),男,博士,主任医师,博士生导师㊂E -m a i l :h a i n i n g c h e u n g@163.c o m ㊂载药静电纺丝纤维研究及应用进展于超群1,龙云泽2,刘现峰2,王学艳2,刘一楷1,张海宁1(青岛大学,山东青岛 266100 1 附属医院关节外科; 2 物理科学学院)[摘要] 随着科学技术和医学研究的进步,纳米材料在药物载体中发挥着越来越重要的作用㊂静电纺丝技术为生产纳米纤维最常用的技术之一,静电纺丝纤维因具有比表面积大㊁孔隙率高等优点,得到研究者的广泛关注㊂在生物医学领域,多种材料和技术方法被用于制备静电纺丝纤维,可实现理想包封和负载多种药物,通过调整支架对药物的释放,发挥良好的抗癌㊁抗感染以及诱导细胞分化等作用㊂本文就载药静电纺丝纤维的研究及应用进展作一综述㊂[关键词] 静电纺丝;纳米纤维;药物载体;药物释放系统[中图分类号] R 452;R 944.9 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)01-0147-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.048[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /37.1517.R.20230308.1034.007.h t m l ;2023-03-09 17:02:50A D V A N C E S I NT H ER E S E A R C HA N D A P P L I C A T I O N O FD R U G -L O A D E DE L E C T R O S P I N N I N G N A N O F I B E R S Y U C h a o qu n ,L O N GY u n z e ,L I U X i a n f e n g ,WA N G X u e y a n ,L I UY i k a i ,Z HA N G H a i n i n g (D e p a r t m e n t o f J o i n t S u r g e r y ,A f f i l i a t e dH o s -p i t a l o fQ i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266100,C h i n a )[A B S T R A C T ] W i t h t h ede v e l o p m e n tof s c i e n c ea n d m e d i c a l r e s e a r c h ,n a n o m a t e r i a l s p l a y a n i n c r e a s i ng l y i m po r t a n t r o l e i n d r u g d e l i v e r y .T h e e l e c t r o s p i n n i n g t e c h n i q u e i s o n e o f t h em o s t c o mm o n l y u s e dm e t h o d s f o r f a b r i c a t i n g n a n o f i b e r s ,a n d e l e c t r o s p i n -n i n g n a n o f i b e r sh a v e a t t r a c t e dw i d e a t t e n t i o n d u e t o t h e a d v a n t a g e s s u c h a s l a r g e s p e c i f i c s u r f a c e a r e a a n d h i g h p o r o s i t y.I n t h e f i e l d o f b i o m e d i c i n e ,v a r i o u sm a t e r i a l s a n d t e c h n i q u e s h a v e b e e nu s e d t o f a b r i c a t e e l e c t r o s p i n n i n g f i b e r s a n d c a nh e l p t o a c h i e v e i d e a l e n -c a p s u l a t i o na n d t h e l o a d i n g o fm u l t i p l e d r u g s ,a n d t h e r e l e a s e o f d r u g t h r o u g h s t e n t s i s a d ju s t e d t o e x e r t g o o d a n t i t u m o r a n d a n t i -i n f e c t i v e e f f e c t s a n d p l a y a r o l e i n i n d u c i n g c e l l d i f f e r e n t i a t i o n .T h i s a r t i c l e r e v i e w s t h e r e c e n t a d v a n c e s i n t h e r e s e a r c h a n d a p p l i c a -t i o no f d r u g -l o a d e d e l e c t r o s p i n n i n g na n o f ib e r s .[K E Y W O R D S ] e l ec t r o s p i n n i n g ;n a n o f i b e r s ;d r u g c a r r ie r s ;d r u g d e l i v e r y s ys t e m s 静电纺丝(电纺)即聚合物溶液或熔体在强电场中喷射纺丝,在电场作用下,针头处的液滴会由球形变为圆锥形(即泰勒锥),并从圆锥尖端延展得到纤维细丝㊂将药物溶解或分散于聚合物溶液中,通过电纺技术可制成负载药物的电纺支架㊂电纺纤维具有原料来源广泛㊁生物相容性好㊁生物可降解性㊁比表面积大㊁孔隙率高等优点,在各领域的应用广泛[1],并且,电纺纤维在载药领域所具有的优势亦引起了研究者的广泛关注㊂本文对电纺纤维作为药物支架的研究及应用进展进行综述㊂1 载药电纺纤维的应用电纺材料来源广泛,可负载多种类型的药物,如抗癌药㊁抗生素㊁蛋白质㊁D N A 和R N A 等[2]㊂与此同时,随着电纺技术的发展,多种方法可用于药物负载,如共混㊁表面改性㊁同轴电纺㊁乳化等,通过选择合适的方法可提高纤维支架药物负载能力,保证药物的封装性能[3]㊂由于材料选择的广泛性和合成方法的多样性,电纺纤维的应用多种多样,如辅助化疗㊁制备伤口辅料及组织工程支架等㊂1.1 肿瘤化疗大部分抗癌药物均具有溶解度不高㊁在肿瘤细胞中浓度低及对正常细胞毒性大等缺点[4],而电纺纤维适用于抗癌药物的递送,尤其是肿瘤病人术后的局部化疗,其应用可弥补传统药物载体的不足,如载药量小㊁非靶向运输和不适当的药物释放等[5]㊂多种抗癌药物,如多柔比星㊁紫杉醇(P T X )㊁顺铂和二氯乙酸等可与聚乳酸(P L A )㊁聚乳酸-羟基乙酸共聚物(P L G A )和左旋聚乳酸等聚合物一起用于术后化疗[3]㊂L V 等[6]将非水溶性的抗癌药物P T X 载入表面改性的介孔空心氧化锡纳米纤维,用于肝癌的治疗,体外细胞实验和体内抗肿瘤实验结果均表明,电纺纤维能有效地抑制肝癌细胞的生长,显示了电纺纤维在化疗中的应用价值㊂X U 等[7]设计并合成了P T X -琥珀酸的偶联物,并将其制备成超分子纳米纤维,所得电纺纤维的载药率达89.5%,体内和体外动物模型实验结果均显示,P T X 的持续释放可有效抑制人肺腺癌细胞的增殖㊂为了降低抗癌药物的副作用和生物毒性,M E L L A T -Y A R 等[8]利用负载17-二甲氨基乙基氨基-17-二甲氧基格尔丹霉素(17-D MA G )的P C L /P E G 聚合物纤维支架,研究了可植入支架对肺癌的治疗作用,体外释放实验表明该支架Copyright ©博看网. All Rights Reserved.148青岛大学学报(医学版)59卷具有良好的释放药物性能,6h时大约96%的药物从支架中释放出来;M T T法检测结果显示,P C L/P E G/17-D MA G纳米纤维对肿瘤细胞具有杀伤作用㊂负载17-D MA G的可植入支架为肺癌术后残留肿瘤细胞㊁避免肿瘤局部复发治疗提供了新的选择,有望成为肿瘤术后局部化疗的新工具㊂此外,电纺纤维具有的缓释性能可避免重复给药,提高了病人的依从性㊂1.2伤口敷料应用电纺制作伤口敷料具有得天独厚的优势,电纺纤维垫具有高比表面积,可有效吸收渗出液,可调节伤口的水分并促进皮肤细胞无瘢痕再生;此外,电纺纤维的高孔隙率为组织的定植㊁生长与迁移提供了适宜环境㊂应用该敷料可保护伤口免受外部微生物的侵害,吸收或吸附伤口渗出物,防止伤口感染,加速伤口愈合㊂在一项关于抗菌敷料的研究中,研究者将阿莫西林通过同轴电纺载入电纺纤维,研究敷料的抗菌性能㊂实验结果表明,新型纳米纤维无生物毒性,在延长有效药物释放的同时明显降低了药物突释作用,并且抗菌测试表明该电纺纤维对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑制作用[9]㊂此外,L I U 等[10]将溶菌酶载入P L G A纤维支架中,探讨蛋白质药物结合电纺纤维用于伤口愈合的可行性,在载入过程中溶菌酶的活性与原料相比几乎没有发生变化,并在支架中加入P E G 增加支架的亲水性,提高了溶菌酶的释放量并促进了小鼠成纤维细胞在支架上的生长㊂该项研究为电纺装载生物大分子生产功能化的伤口敷料提供了参考㊂金属离子或化合物㊁纳米颗粒㊁盐类等作为抗菌剂受到越来越多的关注㊂氧化铁㊁银㊁T i O2㊁氧化锌单独或结合其他盐类(或离子)制得的纳米纤维表现出良好的抑菌能力㊂其中,银可干扰细菌细胞壁合成㊁阻断细菌细胞周期,被视为最有效的抗菌剂[11]㊂N E J A D D E H B A S H I等[12]制备了具有3层结构的电纺纤维支架,中间层载入表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子,底层载入磺胺嘧啶银㊂然后在大鼠的背上切开一个400mm伤口并用硅胶环包围以控制周围组织收缩,将具有或不具有生长因子的电纺纤维支架用作伤口敷料,并在第14天评估愈合效果㊂结果显示,与未添加生长因子的对照组相比,新型敷料组切口显示出更快的上皮化生和血管生成,且具有良好的抗菌能力㊂另有研究显示,当细菌接触高电荷的纳米纤维如阳离子壳聚糖时,细菌的细胞壁会失去其完整性,并最终导致细菌溶解[13]㊂这种非药物释放的抗菌系统抗菌活性持续时间较长,为抗感染治疗和新型敷料的研制提供了新的思路㊂1.3药物递送临床中有许多药物对于某些疾病具有良好的治疗作用,但因药物本身的副作用限制了它们在临床中的应用㊂为克服这些限制,研究者尝试通过电纺改变药物传统的给药方式,或在电纺纤维中加入其他药物以减少或避免药物的不良反应,进一步扩展药物的临床应用㊂目前,临床非甾体类抗炎药(N S A I D s)应用广泛,具有良好的解热㊁镇痛和抗凝血活性,然而N S A I D s具有许多严重的副作用,包括胃肠道溃疡㊁肾脏损害等㊂为了提高N S A I D s的治疗效果㊁达到预期的治疗目标,研究者引入电纺用于负载N S A I D s,通过经皮给药递送药物,包括皮肤局部药物递送系统和经皮给药递送系统(T D D S),以减小药物的不良反应㊂P O T RĈ等[14]将布洛芬载入P C L纳米纤维支架,通过口腔黏膜局部给药治疗口腔溃疡病人,几乎全部药物在4h内均从电纺纤维支架中释放出来㊂心绞痛和心肌梗死在人群中发病率高㊂治疗心绞痛药物尼可地尔因其生物利用率低㊁起效缓慢以及黏膜溃疡等副作用限制了该药在临床中的应用㊂S I N G H等[15]将尼可地尔载入由P V A㊁核糖黄素和HA构成的电纺纤维中制成可舌下含服的抗心绞痛纤维支架,其中核糖黄素可治疗黏膜溃疡,HA可使损伤组织的炎症快速恢复㊂药代动力学研究表明,该新型电纺纤维可长效释放药物,药物的生物半衰期较市售尼可地尔延长4倍,且无黏膜溃疡等副作用发生㊂2电纺支架研究的新进展2.1新技术的应用传统电纺技术仅可以处理一种工作液,难以生产具有复杂结构的纳米纤维㊂而多流体电纺技术的发展,使复杂的工艺流程简单化[16]㊂通过选择合适的喷丝头㊁调整工作液的相容性和其他一些特殊的操作参数,可成功实现多流体电纺工艺[17]㊂多流体电纺许多特性是传统电纺所不具备的,尤其是所应用的工作液不需要都是可进行电纺的,这极大扩展了电纺的原料范围,提高了多流体电纺技术制备新型结构纳米纤维的能力㊂Y A N G等[18]改进了传统三轴电纺设备,应用多流体电纺技术制备新型核-壳纳米结构,实验中仅核心溶液(布洛芬和醇溶蛋白混合物)是可进行电纺的,而中间液(醋酸纤维素)和外层液(丙酮和乙酸混合物)不可进行电纺,核心溶液电纺过程中形成纤维丝,中层液则以 纳米涂层 的形式沉积在其上,外侧液则保证电纺过程的稳定性和连续性㊂因仅要求核心溶液可进行电纺,这大大增加了可供选择的中间液和外层液的种类和数量,增加了生产新型材料的可能性㊂2.2新材料的使用近年来,纳米载体因其出色的药物递送能力引起了研究者们的广泛关注㊂然而,单纯将药物载入纳米载体通常会引起药物的突释,为了解决这一问题,研究者们将纳米载体载入电纺纤维,提高了药物的递送能力[19]㊂囊泡和胶束作为纳米载体主要的优点为:其具有亲水和疏水两种不同性质结构,可同时负载两种不同的药物,实现双重药物释放㊂L I 等[20]利用十六烷基三甲基溴化铵(C T A B)和十二烷基苯磺酸钠(S D B S)制作囊泡,将亲水性药物5-氟尿嘧啶和疏水性药物丹皮酚载入囊泡,后将其与聚环氧乙烷混合电纺,研究了不同C T A B/S D B S摩尔比制备的电纺纳米纤维膜的释药能力,结果表明随着C T A B/S D B S摩尔比的增大,亲水性药物的释放量呈上升趋势,疏水性药物的释放量呈下降趋势㊂Copyright©博看网. All Rights Reserved.1期于超群,等.载药静电纺丝纤维研究及应用进展149此外,利用C T A B/S D B S的摩尔比还可以方便地控制药物的释放量㊂新材料的使用也引入了新的治疗思路㊂Z HA N G等[21]利用碳纳米管负载化疗药物阿霉素(D o x,C27H29N O11),并将其载入左旋聚乳酸制备的纤维支架中,测试其对肿瘤的治疗效果㊂结果表明,该新型支架对肿瘤细胞有良好的杀伤作用,在无红外线辐射时,D o x的释放十分有限;当存在近红外辐射时(2W/c m2)D o x的释放显著增加,并且在近红外辐射后肿瘤局部的温度显著增加,可起到良好的治疗作用㊂S A-S I K A L A等[22]将F e3O4纳米颗粒与聚苯乙烯混合电纺形成纤维支架,对其磁热效应进行测试,结果表明,在交变磁场的作用下,纤维支架产生的磁热效应对人卵巢癌细胞具有明显的杀伤作用,该支架产热后不会丧失产热和释放磁性纳米颗粒的能力,可重复应用;并且该新型支架可通过M R I体内定位㊂提示融合了碳纳米管㊁金或磁性纳米颗粒的新型电纺纤维对肿瘤组织的杀伤作用不仅来源于其负载的化疗药物,还有纳米颗粒的磁热效应或光热效应㊂此外,S O A R E S等[23]探索了电纺纤维与纳米颗粒结合制作生物感应器的可能性,其以聚烯丙胺盐酸盐和聚酰胺6为原料制备电纺纤维,表面覆盖碳纳米管,结合生物标志物C A19-9制成生物感受器检测早期胰腺癌,通过抗原-抗体不可逆结合使传感器具有高灵敏度,后利用电化学阻抗法测定C A19-9水平实现对胰腺癌的检测,为肿瘤早期的检测提供了一种简单㊁可靠的方法㊂2.3条件控制释放功能化载药电纺纤维可提高治疗效率,减小药物不良反应㊂在条件响应释放系统中,可通过改变外部因素,调控纤维支架中药物的释放㊂其中最常用的为p H值诱导的药物释放,对p H值敏感的材料有壳聚糖㊁丙烯酸树脂以及藻酸纤维等[24]㊂S AMA D I等[25]应用壳聚糖/P L A负载氧化石墨烯㊁二氧化钛以及化疗药物D o x用于肺癌的治疗,壳聚糖为p H值敏感材料,纤维支架只有在酸性微环境中才释放D o x,因肿瘤较正常组织代谢率高,故肿瘤部位p H值偏低,且氧化石墨烯提高了支架的细胞膜蛋白的黏附性和生物相容性,使得纤维支架可在肿瘤处释放更多药物,因此该纤维支架对肺癌细胞具有较强的靶向抑制作用㊂除p H值诱导药物释放外,还有研究利用纳米颗粒本身的特性,对载药模型的调控进行了探索㊂F A K H R I等[26]将新霉素载入二硫化钨(W S2)-壳聚糖和W S2-P C L制成的纳米纤维中,利用W S2纳米粒子的光催化活性,实现了光催化诱导新霉素释放,当p H值为7㊁紫外线照射40m i n时,两种纤维支架中新霉素的释放率均优于传统支架;当p H值为3㊁紫外线照射40m i n时新型纤维支架抑菌活性最强㊂MA H-D A V I N I A等[27]将磁性材料F e3O4以原位合成的方式整合到电纺纤维中,测试其磁调控药物释放性能,结果表明新型支架具有磁响应性能,且药物释放量与交变磁场的强度呈正相关㊂其原理为:交变磁场加剧了磁性纳米颗粒的固有运动,使电纺纤维发生形变,从而增加了药物的释放㊂此外,K HO R S H I D I等[28]发明了一种新型海藻酸钠纤维支架,其可实现超声辅助药物释放,超声刺激可干扰海藻酸钠网络离子的交联,当超声刺激的强度为15W/c m2时,药物的释放量提高3倍,可有效抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌㊂超声辅助药物释放为条件响应释放系统提供了新的参考㊂3不足与展望目前电纺纤维在肿瘤化疗㊁伤口敷料㊁药物递送方面虽已取得部分进展,但是大部分材料仍停留于实验室阶段,距离临床试验阶段还有一段距离㊂为了使纳米技术得到广泛应用,还需要进行大量深入的研究㊂电纺技术无论在实验室还是工业制造中都是可靠的纳米纤维制造技术㊂因其纤维具有比表面积大㊁孔隙率高等优点,电纺技术在生物医学领域得到了广泛关注㊂相信随着对电纺技术研究不断进展,会出现更多新技术㊁新材料及满足要求的新型电纺支架㊂电纺技术在支架材料㊁伤口敷料㊁药物递送系统等生物医学领域会有更加广泛的应用㊂[参考文献][1]S HA H R I A RS MS,MO N D A LJ,H A S A N M N,e t a l.E l e c-t r o s p i n n i n g n a n o f i b e r s f o r t h e r a p e u t i c s d e l i v e r y[J].N a n o m a t e-r i a l s(B a s e l,S w i t z e r l a n d),2019,9(4):532.[2]Z E L KÓR,L AM P R O U DA,S E B E I.R e c e n t d e v e l o p m e n t o fe l e c t r o s p i n n i n gf o r d r ug d e l i v e r y[J].Ph a r m a c e u ti c s,2019,12(1):5.[3]B H A T T A R A IRS,B A C HU RD,B O D D USHS,e t a l.B i o-m e d i c a l a p p l i c a t i o n s o f e l e c t r o s p u nn a n o f i b e r s:d r u g a n dn a n o-p a r t i c l e d e l i v e r y[J].P h a r m a c e u t i c s,2018,11(1):5. 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All Rights Reserved.150青岛大学学报(医学版)59卷n a n o m i c e l l e-i n-n a n o f i b e rs y s t e m f o rl o n g-t e r m a n t i b a c t e r i a l m e d i c a l d r e s s i n g s[J].J o u r n a l o fB i o m a t e r i a l sS c i e n c eP o l y m e rE d i t i o n,2019,30(1):64-76.[10]L I U XL,N I E L S E N L H,Q U H Y,e t a l.S t a b i l i t y o f l y s o-z y m ei n c o r p o r a t e di n t oe l e c t r o s p u nf i b r o u s m a t sf o r w o u n dh e a l i n g[J].E u r o p e a nJ o u r n a lo fP h a r m a c e u t i c sa n dB i o p h a r-m a c e u t i c s,2019,136:240-249.[11]C A L AMA KS,S HA H B A Z IR,E R O G L UI,e t a l.A no v e r-v i e wo fn a n o f i b e r-b a s e da n t i b a c t e r i a ld r u g d e s i g n[J].E x p e r t O p i n i o no nD r u g D i s c o v e r y,2017,12(4):391-406.[12]N E J A D D E H B A S H IF,H A S H E M I T A B A R M,B A Y A T IV,e t a l.A p p l i c a t i o nof p o l y c a p r o l a c t o n e,c h i t o s a n,a n dc o l l ag e nc o m p o s i t e a s an a n o f i b r o u sm a t l o ade dw i t hs i l v e r s u lf a d i a z i n ea n d g r o w t h f a c t o r s f o rw o u n dd r e s s i n g[J].A r t i f i c i a lO r g a n s,2019,43(4):413-423.[13]R A S O U L I R,B A R HO UM A,B E C H E L A N Y M,e ta l.N a n o f i b e r s f o r b i o m e d i c a l a n dh e a l t h c a r e a p p l i c a t i o n s[J].M a c-r o m o l e c u l a rB i o s c i e n c e,2019,19(2):e1800256. 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23257625_纤维支气管镜检查行支气管肺泡灌洗术在儿童慢性肺炎中的诊断与应用价值
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[收稿日期]
2019-07-12
[基金项目]河北省医学科学研究重点课题计划(
20160426)
[作者简介]吴会芳(
1981- ),女,河北石家庄人,河北省儿童医院
主治医师,医学硕士,从事儿科疾病诊治研究。
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免疫沉淀分离外泌体对PC12细胞上清中α-syn含量的影响
第59卷 第3期2023年06月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .3J u n e 2023[收稿日期]2022-11-06; [修订日期]2023-06-18[基金项目]国家自然科学基金面上项目(31871049)[第一作者]杨桐桐(1997-),女,硕士研究生㊂[通信作者]宋宁(1980-),女,博士,教授,博士生导师㊂E -m a i l :n i n g s o n g@q d u .e d u .c n ㊂免疫沉淀分离外泌体对P C 12细胞上清中α-s yn 含量的影响杨桐桐,王晓婷,谢俊霞,宋宁(青岛大学医学部基础医学院生理学与病理生理学系,山东青岛 266071)[摘要] 目的 探讨采用免疫沉淀方法分离P C 12多巴胺能细胞上清中外泌体对细胞上清中α-突触核蛋白(α-s y n )含量的影响㊂方法 利用多西环素诱导P C 12细胞高表达α-s y n ,培养24h 后收集细胞上清液,采用免疫沉淀方法进行外泌体的分离纯化,采用酶联免疫吸附测定方法测定外泌体分离前后细胞上清中α-s y n 的含量㊂结果采用免疫沉淀方法可以分离出细胞上清中的外泌体,分离出的外泌体表达特异性标记物a l i x 和C D 63㊂外泌体分离后,上清中α-s y n 的含量从(2999.0ʃ193.0)n g /L 下降为(2276.0ʃ81.8)n g /L ,降低了(723.0ʃ111.2)n g/L (t =4.580,P <0.05)㊂结论 免疫沉淀分离外泌体能够降低P C 12细胞上清中α-s yn 的水平㊂[关键词] α突触核蛋白;外泌体;免疫沉淀法;P C 12细胞[中图分类号] R 338.2 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)03-0329-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.087[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s 2/d e t a i l /37.1517.R.20230731.1057.003.h t m l ;2023-07-31 15:48:26E F F E C TO FE X O S O M E I S O L A T I O NB Y I MM U N O P R E C I P I T A T I O NO NΑ-S Y N U C L E I NL E V E L I NT H ES U P E R N A T A N TO FP C 12C E L L S Y A N GT o n g t o n g ,WA N G X i a o t i n g ,X I EJ u n x i a ,S O N G N i n g (D e p a r t m e n to fP h y s i o l o g y a n dP a t h o p h y s i o l o g y ,S c h o o l o f B a s i cM e d i c i n e ,Q i n g d a oU n i v e r s i t y M e d i c a l C o l l e g e ,Q i n gd a o 266071,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t o f i s o l a t i o no f e x o s o m e s f r o mt h e s u p e r n a t a n t o f P C 12d o p a m i n e rg i c c e l l s b y i mm u n o p r e c i p i t a t i o no nth eα-s y n u c l ei n (α-s y n )l e v e l i nc e l l s u p e r n a t a n t . M e t h o d s D o x y c y c l i n ew a su s e dt o i n d u c eα-s yn o v e r -e x p r e s s i o n i nP C 12c e l l s .A f t e r 24ho f c u l t u r e ,t h e s u p e r n a t a n tw a s c o l l e c t e d ,a n d t h e e x o s o m e sw e r e i s o l a t e d a n d p u r i f i e d b yi mm u n o p r e c i p i t a t i o n .T h e l e v e l o f α-s y n i n t h e s u p e r n a t a n t b e f o r e a n d a f t e r e x o s o m e i s o l a t i o nw a s d e t e r m i n e d b y e n z y m e -l i n k e d i m -m u n o s o r b e n t a s s a y . R e s u l t s E x o s o m e s i nc e l l s u p e r n a t a n t c o u l db e i s o l a t e db y i mm u n o p r e c i p i t a t i o n ,a n ds p e c i f i cm a r k e r s a l i x a n dC D 63w e r e e x p r e s s e d i n t h e i s o l a t e d e x o s o m e s .A f t e r e x o s o m e i s o l a t i o n ,t h e l e v e l o f α-s y n i n t h e s u p e r n a t a n t d e c r e a s e d f r o m (2999.0ʃ193.0)n g /Lt o (2276.0ʃ81.8)n g /Lb y (723.0ʃ111.2)n g/L (t =4.580,P <0.05). C o n c l u s i o n E x o s o m e i s o l a t i o n b y i mm u n o p r e c i p i t a t i o nc a n r e d u c e t h e l e v e l o f α-s y n i n t h e s u pe r n a t a n t of P C 12c e l l s .[K E Y W O R D S ] a l p h a -s y n u c l e i n ;e x o s o m e s ;i mm u n o p r e c i pi t a t i o n ;P C 12c e l l s 帕金森病(P D )是一种常见的神经退行性疾病,遗传㊁环境以及年龄因素均可能参与P D 发病[1-2]㊂P D 的主要病理学表现为黑质中多巴胺能神经元的丢失以及黑质残存多巴胺能神经元中形成路易小体和路易神经突,路易小体的主要成分是聚集形式的α-突触核蛋白(α-s y n )㊂近年来研究发现,α-s yn 具有阮病毒样特征,可以在细胞间传播[3]㊂外泌体是一种直径30~150n m 的囊泡,可以携带包括α-s y n 在内的细胞内成分在细胞间进行传递[4]㊂由于外泌体特殊的脂膜结构,其内含有的致病蛋白更不容易被细胞间隙的蛋白酶水解且容易被细胞摄取,因此值得进一步研究[5]㊂然而,对于在细胞间传播的外泌体形式的α-s y n 所占比例仍存在较大争议㊂有研究表明,利用免疫沉淀方法可以从细胞上清中分离外泌体[6-7]㊂本实验旨在探讨采用免疫沉淀方法分离P C 12多巴胺能细胞上清中外泌体对细胞上清中α-s y n 含量的影响㊂1 材料和方法1.1 实验材料可诱导高表达α-s y nP C 12细胞由D A V I D C .R U B I N S Z T E I N 教授馈赠;D M E M 高糖培养液购自H y c l o n e 公司;胎牛血清和马血清购自依科赛公司;多西环素购自S i gm a 公司;C D 63抗体购自N o -v u s 公司;蛋白A /G 琼脂糖珠购自S a n t aC r u z 公司;f l o t i l l i n -1抗体购自A b c a m 公司;a l i x 抗体购自Copyright ©博看网. All Rights Reserved.330青岛大学学报(医学版)59卷C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司;酶联免疫吸附测定(E L I S A)试剂盒购于B i o l e g e n d公司;E C L发光液购于雅酶公司㊂1.2高表达α-s y nP C12细胞的培养和细胞上清液的收集将状态良好的P C12细胞计数后接种于6孔板中,待其密度达到60%左右时,加入2m g/L多西环素作用24h诱导细胞高表达α-s y n㊂更换为无血清培养液,再次培养24h细胞密度达到90%~95%,收集上清液㊂上清液在4ħ下以3500r/m i n离心15m i n,去除细胞碎片和死细胞㊂1.3免疫沉淀分离细胞上清中的外泌体将牛血清清蛋白(B S A)溶解于磷酸盐缓冲液(P B S)中,配制成2g/L缓冲液㊂取500μLP B S/ B S A缓冲液稀释50μL蛋白A/G琼脂糖珠并在4ħ下孵育过夜㊂以P B S洗涤珠子3次后重悬于100μL抗f l o t i l l i n-1抗体(用2g/LP B S/B S A缓冲液以1ʒ100比例稀释)中,4ħ孵育4h㊂以P B S洗涤珠子3次后收集蛋白A/G琼脂糖珠,加入离心后的细胞上清液200μL,4ħ孵育3h㊂在4ħ下以1000r/m i n离心1m i n,去除蛋白A/G琼脂糖珠后收集上清液㊂1.4 E L I S A检测采用E L I S A法测定外泌体分离前后细胞上清中α-s y n的含量,严格按照试剂盒要求进行操作㊂1.5蛋白质免疫印迹检测用10g/LS D S细胞裂解液洗脱上述的琼脂糖珠,用于免疫印迹检测㊂蛋白质用80g/LS D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并转移到硝酸纤维素膜上㊂膜在4ħ下孵育过夜,使用外泌体特异标记蛋白一抗a l i x(1ʒ1000)和C D63(1ʒ1000)检验免疫沉淀的效果,加辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠二抗(1ʒ10000)孵育,用E C L发光液显影㊂使用I m a g e J软件进行条带灰度值分析㊂1.6统计学处理应用P r i s m5软件进行统计学分析,所得计量资料数据以 xʃs表示,采用配对t检验进行两组均数的比较,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1免疫沉淀分离外泌体的鉴定用f l o t i l l i n-1抗体下拉细胞上清液中的外泌体,使用外泌体标记蛋白a l i x和C D63进行免疫印迹检测㊂结果显示,未经免疫沉淀处理的细胞上清液无蛋白质印迹,琼脂糖珠洗脱液有明显的蛋白质富集,表明采用免疫沉淀方法可以从细胞上清中分离外泌体㊂见图1㊂2.2分离外泌体对P C12细胞上清中α-s y n含量的影响E L I S A检测结果显示,外泌体分离前后的细胞上清液中α-s y n的浓度分别为(2999.0ʃ193.0)㊁(2276.0ʃ81.8)n g/L,外泌体分离后较分离前降低了(723.0ʃ111.2)n g/L,差异具有统计学意义(t= 4.580,P<0.05)㊂I n p u t:未经免疫沉淀处理的细胞上清液;P u l l d o w n:经免疫沉淀处理的细胞上清液㊂图1免疫沉淀分离细胞上清中外泌体的鉴定3讨论α-s y n主要存在于中枢神经系统(C N S),尤其在皮质㊁海马㊁纹状体㊁丘脑和小脑等脑区高度表达㊂据报道,α-s y n能调节突触膜的各种生理过程和性质,例如囊泡的大小,突触囊泡的运输㊁对接和回收以及神经递质释放等[8-9]㊂生理条件下,α-s y n呈舒展的可溶性结构,但基因突变㊁α-s y n翻译后修饰㊁α-s y n浓度升高以及环境因素都可能引起α-s y n聚集形成寡聚体或者不溶性的纤维结构[1]㊂α-s y n的聚集是P D最明显的神经病理学特征,目前研究认为,α-s y n的病理改变在P D的发病机制中起着核心作用[10-12]㊂越来越多来自P D病人㊁动物模型以及培养细胞的证据表明,α-s y n可以在细胞之间传播,而且细胞外α-s y n在P D发生发展的过程中起着重要作用[13-14]㊂外泌体是由多种细胞分泌的小囊泡,可以携带包括α-s y n在内的多种细胞内成分在细胞之间进行传递[4,15]㊂早期内体膜向内出芽形成的管腔内泡(I L V s)逐渐成熟为多泡体(MV B s),MV B s与质膜融合,被释放到细胞外的I L V s即为外泌体[16-18]㊂Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期杨桐桐,等.免疫沉淀分离外泌体对P C12细胞上清中α-s y n含量的影响331外泌体从各种细胞分泌并释放到细胞外空间,参与了细胞间的物质传递,许多致病蛋白已被证实与外泌体有关,例如阿尔茨海默病中的β淀粉样蛋白(Aβ)[19-20]和t a u[21]㊁P D中的α-s y n[22-23]㊂此外,狭小的空间可以使大分子处于高浓度状态,从而产生 大分子拥挤现象 ,可以促进致病蛋白的聚集,因此通过外泌体形式进行传播的致病蛋白致病效率更高㊁更值得关注[24]㊂外泌体α-s y n是细胞外α-s y n在细胞间传播的重要形式㊂有研究显示,使用来自P D病人脑脊液的外泌体处理H4细胞,在受体细胞内诱导了α-s y n 的进一步聚集,表明了脑脊液外泌体α-s y n在疾病进展中的可能作用[22]㊂该研究还表明,脑脊液中外泌体形式的α-s y n含量只占到2.17%,大部分的α-s y n都是以游离形式存在㊂另外一项研究表明,与健康对照相比,P D病人脑脊液外泌体中总α-s y n和聚集形式的α-s y n含量均显著降低,这通常被认为是α-s y n在脑内过度沉积的证明[25]㊂然而,血浆中C N S来源的外泌体形式的α-s y n含量增加[26]㊂这可能是由于P D病人C N S中过量有害的α-s y n外排清除导致的㊂α-s y n一般在溶酶体降解,据报道P D 病人的溶酶体功能降低[27]㊂这些需要溶酶体降解的蛋白进入MV B s,MV B s与质膜融合,将外泌体释放到胞外,这可能是病理条件下,神经元清除α-s y n 的机制[28]㊂最近有研究报道,血浆外泌体α-s y n还可用于P D㊁多系统萎缩(M S A)等神经变性疾病的诊断,例如P D病人血浆中神经细胞来源的外泌体α-s y n显著升高[26],M S A病人血浆中少突胶质细胞来源的外泌体α-s y n显著降低[29]㊂由于血浆来源的外泌体更易获得,因此血浆外泌体中α-s y n或其他致病蛋白的水平变化,可能是神经相关疾病诊断的新靶点[30-32]㊂有研究认为,外泌体α-s y n只占分泌至细胞外α-s y n的一小部分,对疾病的传播没有显著影响[24]㊂但如上所述,少量脑脊液中的外泌体α-s y n足以引起受体细胞内源性α-s y n聚集[22]㊂因此有理由认为,P D病人脑脊液外泌体中α-s y n的含量虽然很低,但足以在疾病进展中起到关键作用㊂另一项研究在体外培养过表达α-s y n的S H-S Y5Y多巴胺能细胞系,利用免疫磁珠从细胞上清液中特异性分离外泌体,发现细胞上清液中大约75%的α-s y n来源于外泌体[6]㊂在本实验中,通过免疫磁珠分离外泌体后,上清液中α-s y n下降了大约30%㊂这些结果表明,外泌体α-s y n在细胞外液中的比例可能与不同细胞类型有关,对比脑脊液,可能体外培养的神经细胞系上清中外泌体形式的α-s y n比例更高㊂但无论细胞外液中外泌体α-s y n的比例高低,由于在各种体液成分中容易获得,外泌体α-s y n在包括P D在内神经变性疾病的发病机制㊁早期诊断和治疗策略中的作用都值得进一步关注㊂[参考文献][1]H A Y E S M T.P a r k i n s o n sd i s e a s e a n dP a r k i n s o n i s m[J].T h eA m e r i c a n J o u r n a l o fM e d i c i n e,2019,132(7):802-807.[2]J A N K O V I CJ.P a r k i n s o n s d i s e a s e:c l i n i c a l f e a t u r e s a n dd i a g-n o s i s[J].J o u r n a lo fN e u r o l o g y,N e u r o s u r g e r y,a n dP s y c h i a-t r y,2008,79(4):368-376.[3]E MMA N O U I L I D O U E,M E L A C H R O I N O U K,R O UM E-L I O T I ST,e t a l.C e l l-p r o d u c e d a l p h a-s y n u c l e i n i s s e c r e t e d i n ac a l c i u m-de p e n d e n tm a n n e rb y e x o s o m e sa n d i m p a c t sn e u r o n a ls u r v i v a l[J].T h e J o u r n a l o fN e u r o s c i e n c e:t h eO f f i c i a l J o u r n a l o f t h eS o c i e t y f o rN e u r o s c i e n c e,2010,30(20):6838-6851.[4]Y U A NL,L I JY.E x o s o m e s i nP a r k i n s o n sd i s e a s e:c u r r e n tp e r s p e c t i v e s a n d f u t u r ec h a l l e n g e s[J].A C SC h e m i c a lN e u r o-s c i e n c e,2019,10(2):964-972.[5]G U P T A A,P U L L I AM L.E x o s o m e s a sm e d i a t o r s o f n e u r o i n-f l a mm a t i o n[J].J o u r n a l o fN e u r o i n f l a mm a t i o n,2014,11:68.[6]A L V A R E Z-E R V I T IL,S E OW Y,S C HA P I R A A H,e ta l.L y s o s o m a ld y s f u n c t i o ni n c r e a s e se x o s o m e-m e d i a t e da l p h a-s y-n u c l e i n r e l e a s e a n d t r a n s m i s s i o n[J].N e u r o b i o l o g y o fD i s e a s e, 2011,42(3):360-367.[7]B E N J AM I N SJA,N E D E L K O S K AL,T O U I LH,e t a l.E x o-s o m e-e n r i c h e d f r a c t i o n s f r o m M SBc e l l s i n d u c eo l i g o d e n d r o-c y t ede a t h[J].N e u r o l o g y(R)N e u r o i mm u n o l o g y&N e u r o i n-f l a mm a t i o n,2019,6(3):e550.[8]I WA IA,MA S L I A HE,Y O S H I MO T O M,e t a l.T h e p r e c u r-s o r p r o t e i no fn o n-ab e t ac o m p o n e n to fA l z h e i m e r sd i s e a s ea m y l o i d i s a p r e s y n a p t i c p r o t e i no f t h e c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m[J].N e u r o n,1995,14(2):467-475.[9]G A L V I NJE,S C HU C K T M,L E E V M,e t a l.D i f f e r e n t i a le x p r e s s i o na n d d i s t r i b u t i o n of a l p h a-,b e t a-,a n dg a mm a-s y n u-c l e i n i n t h ede v e l o p i n g h u m a n s u b s t a n t i a n i g r a[J].E x p e r i m e n-t a lN e u r o l o g y,2001,168(2):347-355.[10]S P I L L A N T I N IM G,S C HM I D T M L,L E E V M,e t a l.A l-p h a-s y n u c l e i n i nL e w y b o d i e s[J].N a t u r e,1997,388(6645): 839-840.[11]M E H R A S,S A H A Y S,MA J IS K.α-s y n u c l e i n m i s f o l d i n ga n da g g r e g a t i o n:i m p l i c a t i o n s i nP a r k i n s o n sd i s e a s e p a t h o g e-n e s i s[J].B i o c h i m i c a e t B i o p h y s i c a A c t a P r o t e i n s a n d P r o-t e o m i c s,2019,1867(10):890-908.[12]JÉŠK O H,L E N K I E W I C ZA M,W I L K A N I E CA,e t a l.T h ei n t e r p l a y b e t w e e n p a r k i na n da l p h a-s y n u c l e i n;p o s s i b l e i m p l i-c a t i o n sf o rt h e p a t h o g e n e s i so fP a r k i n s o n sd i se a s e[J].A c t aCopyright©博看网. 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学界对刘国光《谈经济学教学和研究中的一些问题》一文的反映综述
该报还发表了«刘国光访谈文章补充».１
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８日,
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论研究»刊登了主题为“马克思主义经济学与西方经
并配发编者按说:“他(刘国光)的观点在理论界引起
巨大反响”,开辟这 个 专 栏 的 目 的 是 “为 了 使 这 一 不
仅涉及教育界、经济学界,而且事关中国经济体制改
革指导思想的争论能得以展开,以期深入探讨”.
待西方经济理论和 新 自 由 主 义 经 济 学、我 国 经 济 体
及华岳论坛等众多 网 站 发 布,引 起 社 会 各 界 的 广 泛
制改革的指导思想等问题进行了研讨.«光明日报»
关注.１０ 月 ２２ 日,全 国 高 校 社 会 主 义 经 济 理 论 与
实践研讨会第十九 次 大 会 在 北 京 召 开,教 育 部 和 中
发展必须以马克思 主 义 为 指 导,经 济 学 教 学 和 研 究
价了刘国光的 经 济 思 想 和 突 出 贡 献. 文 章 最 后 说:
也要坚持以马克思 主 义 政 治 经 济 学 为 指 导,一 切 淡
“刘老忧心地说,现在经济学教育研究领域里盲目推
崇西方经济学的趋向值得警觉.马克思主义经济学
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１１ 月 ５ 日,由 中 国 历 史 唯 物 主 义 学 会 “毛 泽 东
的人民历 史 观”课 题 组、北 京 大 地 微 微 文 化 发 展 中
心、北京“乌有之乡”书社联合召开了“刘国光经济学
新论研讨 会”(第 二 次 会 议). 一 些 老 同 志、中 央 党
校、中国社科院、在京高校的专家学者以及青年学生
举行.中国社科院、首 都 各 高 校 及 其 他 研 究 机 构 的
作学术报告,受 到 与 会 学 者 的 热 烈 欢 迎. 在 大 会 发
郑新启学说周报0801班第47、48期
（第45期）序号 题 目 作 者02 迎新音乐会 陈俊畅 03 分香蕉 王雨瑶 06 评宋词 章 典 10 团圆夜 颜 菡 13 汉字文化真奇妙 池一锴（第46期）序号 题 目 作 者01 我胖了吗 蔡凌翼 03 贪玩的表弟 舒 瑀 08 我的“爆裂巨拳”陀螺 王铭扬 09 我的五辆坐骑 黄昕宇 14 精彩两分钟 金蕙孜01 有趣的空间 ( )祝林鑫要说起我们班的课间，那可是十天十夜都说不完，用“活泼”来形容我们班，那就再合适不过了。
每逢课间，便会从我们班里传出朗朗的说话声，聊什么都有，你如果从门外经过，务必要捂上耳朵，因为实在是太吵了。
仅仅只有说话声吗？当然不是，融在说话声中的还有脚步声，原来是玥姐正在追捕祝家豪，那沉重的步伐不把地板陷一个洞才怪呢。
还有的行为使我差点要笑掉大牙，童文昊和范衍甫等人总喜欢绕着教室走，晃悠晃悠东，晃悠晃悠西，我就搞不懂了，一个教室有什么好逛的呢？“铃声呼解散，班里吵翻天。
追跑携尖叫，声音遍校园。
几人结一伙，话语似长篇，玩耍能心悦，开心苦变甜。
”课间活动真是丰富多彩呀。
02 名如其人 ( )陈俊畅在我们的学校有一位大名鼎鼎的国学大师，而他就是我们班的班主任郑新启老师。
以前我们班的同学都很调皮，经常会把来上课的才师给气走。
而郑老师来后，这样的事情从未发生过，我想他能管住我们正是因为他名如其人。
首先我们先来看一下第一个字。
“郑”即“镇”也，可以把我们给hold 住。
郑老师好像似一把锋利的降妖剑，一亮出来我们就闻风丧胆，乖乖的听话了。
比如上次我们课堂上很吵，郑老师用他的四只火眼睛睛一看，中气十足大声说“安静”，我们就像被打麻醉药似的变的格外的安静，郑老师的威力好强哦！其次我们来看“新”字。
郑老师他会创出很多新鲜的东西。
比如让我们学习诗、词、成语接龙等知识，这些都是教课书不曾有的新知识，同学们一个个都成了小诗人，也让我们领略到很多国学知识的精华，我们学的很快乐！最后我们来看“启”――“奇”字。
211123539_利用审校软件提高编辑效率的探索
新闻研究导刊 Journal of News Research 225第14卷第04期 Vol.14 No.042023年2月 February 2023随着图书出版行业对图书质量的重视程度不断提升，出版业正经历着由高速增长阶段转变为高质量发展阶段的关键时刻。
图书质量是一个出版社的生命线，而内容质量又是出版物的灵魂所在，如果完全由人工进行编校质量把关，势必影响工作效率。
智能审校软件的使用可缓解编校人员的工作压力［1］。
现代科技迅猛发展，越来越多的工作可以通过人工智能完成，把人从烦琐重复的劳动中解放出来［2］，使其有更多精力去检查书中的知识性错误等。
图书出版过程中，编辑的工作十分复杂。
一名编辑可能同时运作三五本甚至十几本图书。
因此，对于如此忙碌的编辑工作，借助电脑技术对其进行优化是极为必要的［3］。
图书编辑要想进一步提高工作效率，就要及时转变工作方式［4］。
笔者单位在2020年8月初步尝试使用审校软件以来，通过两年多时间，已逐步熟练并积累了相关经验。
为提升编辑整体水平，提高图书质量，笔者现结合具体实践作出相关分析，探讨审校软件在编辑出版工作中对工作效率的提高起到的作用。
一、审校软件的特点和优势在出版行业高质量发展要求背景下，图书编辑要将质量意识根植于内心深处［5］。
笔者单位所使用的审校软件，为编辑在图书出版过程中提高工作效率提供了有益帮助。
图书出版编辑工作中审稿是开端，也是最为重要的工作［6］。
编辑收到符合出版要求的稿件后，可以先利用审校软件对常见的错别字、敏感字等进行检查，还可以检查文档中的阿拉伯数字及英文字母等是否使用全角或半角格式，一键审校文档中可能存在的内容重复、逻辑错误和字词错误等。
软件还能找到文章中出现的敏感词，规避潜在的出版风险，不断增强自身的政治 意识［7］。
对稿件进行全面检测后，及时纠正稿件中可能出现的错误问题，帮助编辑找到不符合文章逻辑关系的句子及错误的文字等，编辑根据检查结果进行独立或批量修改，节约编辑加工时间，也可减轻后期排版和校对人员的工作压力，缩短出版周期。
不同程度近视青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度检测
第59卷 第4期2023年08月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .4A u gu s t 2023[收稿日期]2022-12-30; [修订日期]2023-06-26[基金项目]北京白求恩公益基金会资助项目(B J -L M 2018006)[第一作者]张婷(1992-),女,硕士研究生㊂[通信作者]公慧敏(1980-),女,博士,副主任医师,硕士生导师㊂E -m a i l :139********@163.c o m ㊂不同程度近视青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度检测张婷,于蓝,张乐宵,公慧敏(青岛大学第三临床医学院(青岛市市立医院)眼科,山东青岛 266071)[摘要] 目的 观察不同近视程度青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度的变化,分析其与等效球镜度数(S E R )㊁黄斑中心凹下脉络膜厚度(S F C T )㊁眼轴长度(A L )等的相关性㊂方法 收集青少年150例共150只眼,根据S E R 分为正视组(-0.50D<S E Rɤ+0.75D )㊁低度近视组(-3.00D<S E Rɤ-0.50D )㊁中度近视组(-6.00D<S E Rɤ-3.00D )㊁高度近视组(S E Rɤ-6.00D ),用光学相干断层扫描血管成像技术获取黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管层图像㊂结果 4组年龄㊁S E R ㊁A L ㊁S F C T 差异均有统计学意义(F =23.847~140.092,P <0.05);4组黄斑区与视盘周围脉络膜毛细血管血流密度差异均有显著性(F =60.627㊁34.450,P <0.05),其中正视组㊁低度近视组㊁中度近视组黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度均高于高度近视组,差异有统计学意义(P <0.05),低度近视组㊁中度近视组黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度差异无统计学意义(P >0.05)㊂相关性分析显示,黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度均与A L 呈负相关(r =-0.490㊁-0.316,P <0.01),与S E R ㊁S F C T 呈正相关(r =0.434~0.616,P <0.01)㊂结论 随着近视屈光度的增加,青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度均呈下降趋势,与A L ㊁S F C T 具有高度相关性㊂[关键词] 青少年;近视;黄斑;视盘;微血管密度;脉络膜[中图分类号] R 774.1 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)04-0490-05d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.124[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /37.1517.R.20230921.1132.001;2023-09-22 11:04:00V E S S E LD E N S I T YO FC H O R O I D A LC A P I L L A R I E SI N M A C U L A R A R E A A N D O P T I C D I S CI N A D O L E S C E N T S W I T H D I F F E -R E N TD E G R E E SO F M Y O P I A Z HA N GT i n g ,Y UL a n ,Z HA N GL e x i a o ,G O N G H u i m i n (D e p a r t m e n t o fO p h t h a l m o l o g y ,Q i n g d a oM u n i c i p a lH o s p i t a lA f f i l i a t e d t oQ i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266071,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e c h a n g e i n v e s s e l d e n s i t y of c h o r o i d a l c a p i l l a r i e s i n t h em a c u l a r a r e a a n d o p t i c d i s c o f a d o l e s c e n t sw i t h d i f f e r e n t d eg r e e s o fm y o p i a ,a sw e l l a s i t s c o r r e l a t i o nw i th s p h e ri c a l e q u i v a l e n t d e g r e e (S E R ),s u b f o v e a l c h o r o i -d a l t h i c k n e s s (S F C T ),a n d a x i a l l e n g t h (A L ). M e t h o d s At o t a l o f 150a d o l e s c e n t s (150e y e s )w e r e c o l l e c t e d ,a n d a c c o r d i n g t o S E R ,t h e a d o l e s c e n t sw e r e d i v i d e d i n t o e mm e t r o p i a g r o u p (-0.50D <S E R ɤ+0.75D ),l o w m y o p i a g r o u p (-3.00D <S E R ɤ-0.50D ),m o d e r a t em y o p i a g r o u p (-6.00D <S E R ɤ-3.00D ),a n dh i g hm y o p i a g r o u p (S E R ɤ-6.00D ).O pt i c a l c o h e r e n c e t o m o g r a p h y a n g i o g r a p h y w a s u s e d t oo b t a i n t h e i m a g e so f t h e c h o r i o c a p i l l a r i s l a y e r i nt h em a c u l a r a r e aa n do pt i cd i s c . R e s u l t s T h e r ew e r e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s i na g e ,S E R ,A L ,a n dS F C Tb e t w e e n t h e f o u r g r o u p s (F =23.847-140.092,P <0.05).T h e r e w a s a l s o a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n t h e v e s s e l d e n s i t y o f c h o r o i d c a p i l l a r i e s i n t h em a c u l a r a r e a a n d o p t i c d i s c b e t w e e n t h e f o u r g r o u ps (F =60.627,34.450,P <0.05),a n d t h e e mm e t r o p i a g r o u p ,t h e l o w m y o p i a g r o u p ,a n dt h em o d e r a t em y o p i ah a das i g n i f i c a n t l yh i g h e r v e s s e l d e n s i t y t h a n t h eh i g hm y o p i a g r o u p (P <0.05);t h e r ew a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i nv e s s e l d e n s i t y be t w e e n t h e l o w m y o p i a g r o u p a n d t h em o d e r a t em y o p i a g r o u p (P >0.05).T h e c o r r e l a t i o n a n a l y s i s s h o w e d t h a t t h e v e s s e l d e n s i t y of c h o r o i d a l c a pi l -l a r i e s i n t h em a c u l a r a r e a a n d o p t i c d i s cw e r e n e g a t i v e l y c o r r e l a t e dw i t hA L (r =-0.490,-0.316,P <0.01)a n dw a s p o s i t i v e l y c o r -r e l a t e dw i t hS E Ra n dS F C T (r =0.434-0.616,P <0.01). C o n c l u s i o n T h ev e s s e l d e n s i t y o f c h o r o i dc a p i l l a r i e s i n t h em a c u l a r a r e a a n do p t i c d i s c d e c r e a s e sw i t h t h e i n c r e a s e i n t h e d i o p t e r o fm y o p i a i n a d o l e s c e n t s ,a n d t h e r e d u c t i o n i nv e s s e l d e n s i t y i s h i g h l yc o r r e l a t e dw i t hA La n dS F C T.[K E Y W O R D S ] a d o l e s c e n t ;m y o p i a ;m a c u l a l u t e a ;o p t i c d i s c ;v e s s e l d e n s i t y;c h o r o i d 近视被列为世界三大疾病之一,尤其青少年近视已成为全球重大的公共卫生问题㊂相关研究表明,预计到2050年将有13%的青少年成为高度近视[1-2]㊂随着近视程度的加深,其相应并发症如视网膜脱离㊁黄斑裂孔㊁脉络膜萎缩㊁脉络膜新生血管等发生概率增大,严重损害病人视功能[3]㊂因此,对近Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期张婷,等.不同程度近视青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度检测491视发病机制㊁发生发展过程进行多角度深入研究有重要意义[4]㊂以往大量近视研究主要集中在眼轴长度(A L)㊁黄斑区深层及浅层视网膜血流密度及脉络膜厚度(S F C T)方面,且对黄斑中心凹下S F C T的研究也主要集中在高度近视及病理近视上[5];对低中度近视研究较少并缺少正视组的对照,对视盘周围脉络膜血流情况研究较少㊂光学相干断层扫描血管成像技术(O C T A)使脉络膜层面的成像质量大幅度提高,其高分辨率㊁无创㊁三维的获取方式为脉络膜定量分析提供可靠依据[6-9]㊂基于此,本文按照正视㊁低度近视㊁中度近视㊁高度近视进行分组研究,探讨不同近视程度青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度与A L㊁S F C T等的相关性㊂1对象与方法1.1研究对象收集2022年1月 2022年9月于我科就诊的青少年150例作为研究对象,男72例,女78例;年龄7~19岁,平均(11.92ʃ2.88)岁㊂均取右眼入组,正视组38例,低㊁中度近视组各38例,高度近视组36例,等效球镜度数(S E R)为-11.00~+0.25 (-3.36ʃ3.34)D㊂纳入标准:①年龄为7~19岁近视及正视青少年;②眼压为1.330~2.793k P a,裂隙灯检查眼前段无明显异常;③最佳矫正视力ȡ1.0,正视组-0.50D<S E Rɤ+0.75D,低度近视组-3.00D<S E Rɤ-0.50D,中度近视组-6.00D< S E Rɤ-3.00D,高度近视组S E Rɤ-6.00D㊂排除标准:①有眼部外伤史或手术史者;②应用其他治疗近视的药物及仪器者;③患有可能影响视力和屈光度变化的眼部疾病,如白内障㊁青光眼或视网膜脉络膜疾病及有糖尿病㊁高血压等可能影响视网膜脉络膜结构的系统疾病者;④患有显性斜视及弱视者;⑤无法固视视标,无法获取清晰脉络膜图像者㊂本研究经我院伦理委员会审核通过,受试者及其家属均知情同意㊂1.2检查指标及方法1.2.1黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度测量使用光学相干断层扫描仪(C i r r u s H D-O C T5000),扫描模式设置为O C T A,扫描范围设为3mmˑ3mm,脉络膜毛细血管层自动设置为B r u c h膜上9μm至B r u c h膜下30μm之间,测量过程中嘱病人尽量配合,最大限度减少采集过程中因病人固视改变或眨眼所产生的图像伪迹,排除扫描质量低于8/10的图像,并点击去除伪影及去除导航线按钮;将处理好的脉络膜毛细血管层原始图像导入I m a g e J软件,参照文献的方法[10]对图像进行二值化处理,计算黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度(图1)㊂以上检查均由同一经验丰富技师操作完成㊂1.2.2S F C T测量黄斑中心凹下S F C T为视网膜色素上皮层(R P E)高反射线外缘至巩膜内层反射线的垂直距离㊂测量仪器采用光学相干断层扫描仪(C i r r u sH D-O C T5000),扫描模式为深度增强成像模式(E D I-O C T模式),以6mm的扫描线对后极部黄斑中心凹进行水平方位21线扫描,选取其中经过黄斑中心凹且图像清晰的截面,利用系统自带测径工具测量中心凹下S F C T(图2)㊂测量由两位经验丰富的技师独立完成,每位技师测量3次,取两位技师测量值的平均值作为最终S F C T测量结果[11]㊂1.2.3 A L测量使用光学生物测量仪(C a r l Z e i s s,I O L M a s t e r500)测量A L,重复测量5次,排除信噪比<2的测量值后取平均值㊂所有测量均由同一经验丰富技师操作完成㊂1.2.4屈光度测量受试者散瞳后,使用电脑验光仪(T O P C O N,R M.8800)及带状光检影镜(苏州六六视觉科技股份有限公司,Y Z24)进行客观验光+插片主观验光,记录验光结果换算成S E R㊂检查均由同一经验丰富的技师完成㊂1.3统计学方法采用S P S S25.0软件进行统计分析㊂计数资料用例数描述,数据间比较采用χ2检验;连续变量采用 xʃs描述,多组变量数据比较采用单因素方差分析,两两比较采用L S D法㊂变量间的相关性分析采用S p e a r m a n相关分析㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1各组基线资料及黄斑区、视盘周围脉络膜毛细血管血流密度比较各组性别差异无统计学意义(P>0.05),各组年龄㊁S E R㊁A L㊁S F C T差异有显著性(F=23.847~ 140.092,P<0.001)㊂见表1㊂各组黄斑区㊁视盘周围脉络膜毛细血管血流密度差异具有统计学意义(F=60.627㊁34.450,P<0.001),组间两两比较,正视组㊁低度近视组㊁中度近视组黄斑区以及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度均高于高度近视组(P<Copyright©博看网. All Rights Reserved.492青 岛 大 学 学 报 (医 学 版)59卷A :3mmˑ3mm 黄斑区脉络膜毛细血管层;B :黄斑区二值化图像(设置阈值);C :黄斑区二值化图像(计算像素点数);D :3mmˑ3mm 视盘周围脉络膜毛细血管层;E :视盘周围二值化图像(设置阈值);F :视盘周围二值化图像(计算像素点数)㊂图1黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度测量示意图图2 O C T -E D I 模式测量S F C T 示意图0.001),低度近视组与中度近视组比较差异无统计学意义(P >0.05)㊂见表2㊂2.2 黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度与其他变量的相关性S pe a r m a n 相关分析显示,黄斑区㊁视盘周围的脉络膜毛细血管血流密度均与A L 呈负相关(r =-0.490㊁-0.316,P <0.01);黄斑区的脉络膜毛细血管血流密度与年龄呈负相关(r =-0.237,P <0.05),视盘周围脉络膜毛细血管血流密度与年龄不相关(r =-0.133,P >0.05)㊂黄斑区㊁视盘周围脉络膜毛细血管血流密度均与S E R ㊁S F C T 呈正相关(r =0.434~0.616,P <0.01)㊂见表3㊂3 讨 论青少年近视已成为全球性公共问题,尤其东亚及东南亚国家青少年因高强度教育和有限的户外时间,其近视患病率更为突出㊂随着青少年近视发生的低龄化及高发性,其后续带来的眼底问题也受到医学者的广泛关注㊂近年市场上各种预防及治疗近视的药物㊁仪器频出,如阿托品㊁角膜塑形镜及低强度激光理疗仪等[12],其中部分仪器用于治疗近视短期效果显著但长期作用效果如何,治疗机制是否明确,支撑理论是否被认可,是否会对眼底造成不可逆性损伤等都有待追踪研究㊂只有真正了解近视发生发展机制,理清近视发生原理,才能从源头上寻求更好的方法来预防近视发生,延缓近视发展,阻止近视并发症的发生㊂近年来O C T A 飞速发展,它具有无创㊁高分辨率㊁重复性强等优点[6-7,13],其应用使眼后节组织结构的观察不再局限于以动物实验为主的解剖学及病Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期张婷,等.不同程度近视青少年黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度检测493表1各组基线资料相关指标比较( xʃs)组别n年龄(岁)男/女(例)S E R(D)A L(l/mm)S F C T(l/mm)正视组3810.58ʃ2.0917/21-0.06ʃ0.2223.33ʃ0.81306.55ʃ39.50低度近视组3810.87ʃ2.47*21/17-1.87ʃ0.45*24.25ʃ0.63*263.76ʃ32.78*中度近视组3811.61ʃ2.57*16/22-4.02ʃ0.55*24.55ʃ0.82*245.97ʃ39.50*高度近视组3614.78ʃ2.39*18/18-7.71ʃ1.28*26.52ʃ1.04*195.97ʃ40.45*注:各组年龄㊁S E R㊁A L㊁S F C T比较,F=23.847~140.092,P<0.001;与正视组比较,*P<0.05㊂表2各组黄斑区㊁视盘周围脉络膜毛细血管血流密度比较(χ/%, xʃs)组别n黄斑区视盘周围正视组3849.16ʃ3.7045.71ʃ3.60低度近视组3844.90ʃ3.21*42.45ʃ3.04*中度近视组3844.51ʃ4.58*42.26ʃ4.69*高度近视组3639.65ʃ4.14*38.98ʃ5.18*注:与正视组比较,*F=60.627㊁34.450,P<0.001㊂表3黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管密度与其他变量间的相关性变量黄斑区脉络膜毛细血管密度r P视盘周围脉络膜毛细血管密度r P年龄-0.2370.004-0.1330.104S E R0.597<0.0010.435<0.001A L-0.490<0.001-0.316<0.001S F C T0.616<0.0010.434<0.001理等方面,近视发病机制研究也从外在因素转移到内部结构上,脉络膜在近视发生发展中的作用也逐渐被广泛重视㊂脉络膜是眼睛血管最丰富的组织,位于视网膜色素上皮层和巩膜之间,从视神经边缘延伸至睫状体扁平部,分为B r u c h膜㊁毛细血管层㊁中血管层及大血管层和脉络膜上腔㊂其主要功能是为外层视网膜提供氧气和营养㊁吸收光㊁调节体温和眼压等[14-15]㊂相关研究显示,与正视眼相比,近视眼黄斑区中心凹下S F C T与A L呈显著负相关[16-18]㊂脉络膜主要是由血管组成,即脉络膜血流的变化与S F C T存在一定的相关性㊂近年来,研究学者将近视的研究重点转移至脉络膜层面上,关于脉络膜毛细血管血流密度与近视的关系存在两种观点:一种认为近视眼与正视眼黄斑区脉络膜毛细血管灌注区域面积(即血流密度)与近视屈光度无显著相关性[19];另一种观点认为,近视眼与正视眼比较,黄斑区脉络膜毛细血管血流灌注减少,无血流供应区面积增加,即黄斑区脉络膜毛细血管血流密度减小[18]㊂此外,多项研究显示黄斑区脉络膜毛细血管血流密度与S F C T存在正相关性[11,20]㊂本研究结果显示,黄斑区及视盘周围脉络膜毛细血管血流密度与S F C T呈正相关,近视眼黄斑区脉络膜毛细血管血流密度与年龄和A L存在显著负相关,正视与不同近视程度眼的脉络膜毛细血管血流密度差异有统计学意义,这与第二种观点相符合㊂此外,本研究结果还显示,不同近视程度视盘周围脉络膜毛细血管血流密度差异有统计学意义,视盘周围脉络膜毛细血管血流密度与S F C T存在正相关性,与S E R及A L存在负相关性,与刘帆等[20]的研究结果相符合㊂有研究显示,近视眼睛随着A L的增长,相应的视网膜㊁脉络膜和巩膜的生物力学拉伸,会导致血管一定程度变直㊁变窄,脉络膜毛细血管网整体疏散及脉络膜血流阻力增加,从而导致脉络膜毛细血管密度降低,脉络膜基质及血管变薄,进而脉络膜变薄[3,16,21]㊂还有学者认为,脉络膜血流本身存在着自主神经调节以及自身调节[10,12]㊂①自主神经系统[22]:交感神经系统分泌神经递质,如神经肽Y㊁肾上腺素㊁A T P等支配脉络膜血管,使其收缩,血流减少[12,22-23];副交感神经系统分泌的血管活性肽㊁乙酰胆碱㊁神经元型一氧化氮合酶调节脉络膜血管使其扩大,血流增加[12,22,24]㊂三叉神经感觉纤维来源的降钙素相关肽等物质调节脉络膜前动脉,使其直径增大,血流增加㊂②自身调节:脉络膜本身具有弹性纤维网格,在调节过程中,睫状肌向前拉动脉络膜弹性纤维网格,可能改变脉络膜血管的位置和直径,进而影响脉络膜血流[12,22]㊂另外,低氧对近视的影响研究表明,脉络膜血流为内层视网膜和外层巩膜提供大部分的氧气和营养供应,当脉络膜血流减少时,巩膜㊁视网膜的氧气供应不足,这可能会引起巩膜和视网膜功能或者结构发生变化,导致近视的发生和发展及眼轴增长[25]㊂以上各种调节机制在脉络膜血流调节的不同时段发挥着不同的作用,其作用机制复杂,需进一步研究㊂综上所述,近视的发生发展与脉络膜血流存在着一定相关性㊂广大研究者和医生不仅要关注青少年的近视矫正,同时要深入探究近视发生发展机制,特别是近视眼中脉络膜血流㊁S F C T㊁A L等的相互Copyright©博看网. All Rights Reserved.494青岛大学学报(医学版)59卷作用机制,这对近视防控尤为重要㊂本研究存在以下不足之处:①O C T A仪器无自带测量脉络膜毛细血管层血流密度的软件,视盘周围脉络膜毛细血管层血流密度的测量可能不是非常精确,特别是在目前还没有形成统一标准的情况下;②由于受目前技术水平的限制,E D I-O C T不能自动识别R P E外界和脉络膜巩膜交界处,因而需要测量者主观判断,而且S F C T测量是采用机器自带的卡尺手动测量,虽多次测量取平均值,仍不可避免存在测量误差㊂[参考文献][1]H O L D E NBA,F R I C K E T R,W I L S O N D A,e ta l.G l o b a lp r e v a l e n c eo f m y o p i aa n d h i g h m y o p i aa n dt e m p o r a lt r e n d sf r o m2000t h r o ug h2050[J].O ph t h a l m o l o g y,2016,123(5):1036-1042.[2]B R E MO N D-G I G N A C D.M y o p i ai n c h i l d r e n[J].M e d e c i n eS c i e n c e s:M/S,2020,36(8-9):763-768.[3]J O N A SJB,WA N G Y X,D O N GL,e t a l.A d v a n c e s i nm y o-p i a r e s e a r c ha n a t o m i c a l f i n d i n g s i nh i g h l y m y o p i c e y e s[J].E y ea n dV i s i o n,2020,7:45.[4]MO R G A NIG,F R E N C H A N,A S H B YRS,e t a l.T h e e p i-d e m i c s o f m y o p i a:a e t i o l o g y a n d p r e v e n t i o n[J].P r o g r e s s i nR e t i n a l a n dE y eR e s e a r c h,2018,62:134-149.[5]B U L L I MO R E M A,R I C H D A L E K.M y o p i aC o n t r o l2020:w h e r e a r ew e a n dw h e r e a r ew eh e a d i n g[J].O p h t h a l m i c&P h y s i o l o g i c a lO p t i c s:t h eJ o u r n a lo ft h e B r i t i s h C o l l e g e o f O p h t h a l m i cO p t i c i a n s(O p t o m e t r i s t s),2020,40(3):254-270.[6]A R Y A M,R A S H A D R,S O R O U R O,e ta l.O p t i c a l c o h e-r e n c e t o m o g r a p h y a n g i o g r a p h y(O C T A)f l o ws p e e d m a p p i n g t e c h n o l o g y f o r r e t i n a ld i s e a s e s[J].E x p e r tR e v i e w o f M e d i c a lD e v i c e s,2018,15(12):875-882.[7]N A S E R I P O U R M,G HA S E M I F A L A V A R J A N I K,M I R-S H A H IR,e ta l.O p t i c a l c o h e r e n c et o m o g r a p h y a n g i o g r a p h y (O C T A)a p p l i c a t i o n s i no c u l a ro n c o l o g y[J].E y e,2020,34(9):1535-1545.[8]孙姣,王艳玲,王佳琳.光相干断层扫描血管成像在近视中的应用研究进展[J].中华眼底病杂志,2018(1):83-86. 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沙库巴曲缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖的影响
第59卷 第5期2023年10月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .5O c t o b e r 2023[收稿日期]2022-11-18; [修订日期]2023-06-26[基金项目]山东省重点研发项目(2018G S F 118241);中华国际医学交流基金会心血管多学科整合思维研究基金(Z -2016-23-2001-25);青大附院临床医学+X 科研项目(Q D F Y+X 2021051);山东省老年医学学会科技攻关计划(L K J G G 2021W 076);青岛市医药卫生科研指导项目(2022-W J Z D 182)[第一作者]徐从凤(1996-),女,硕士研究生㊂[通信作者]李永红(1966-),女,博士,主任医师,硕士生导师㊂E -m a i l :l i y o n g h o n g-66@163.c o m ㊂沙库巴曲缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖的影响徐从凤,王妮,赵明明,张宁,王立韧,李永红(青岛大学附属医院心血管内科,山东青岛 266100)[摘要] 目的 探讨沙库巴曲缬沙坦(E n t r e s t o )对血管紧张素Ⅱ(A n gⅡ)刺激下血管平滑肌细胞(V S M C s )增殖的影响㊂方法 体外培养人主动脉V S M C s ,随机分为A n g Ⅱ组(用A n g Ⅱ处理)㊁A n g Ⅱ+E n t r e s t o 组(E n t r e s t o 处理细胞1h ,换液后再加入A n g Ⅱ处理细胞)㊁对照组(不加药物处理),各组均培养24h ㊂应用C C K 8方法检测细胞增殖,划痕实验方法检测细胞迁移活性,实时荧光定量P C R 及W e s t e r nb l o t 方法检测增殖细胞核抗原(P C N A )及基质金属蛋白酶9(MM P -9)的表达水平㊂结果 与对照组比较,A n g Ⅱ组V S M C s 细胞增殖率㊁迁移活性㊁P C N A 及MM P -9表达增高(F =16.54~177.20,P <0.05);与A n g Ⅱ组相比较,A n g Ⅱ+En t r e s t o 组V S M C s 细胞增殖率㊁迁移活性㊁P C N A 及MM P -9表达降低(P <0.05)㊂结论 E n t r e s t o 能抑制A n gⅡ诱导的V S M C s 增殖及迁移㊂[关键词] 肌细胞,平滑肌;肌,平滑,血管;沙库巴曲缬沙坦;细胞增殖[中图分类号] R 541.4 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)05-0679-05d o i :10.11712/j m s .2096-5532.2023.59.158[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /37.1517.R.20231128.1537.004;2023-11-30 09:17:17E F F E C TO FE N T R E S T OO NT H EP R O L I F E R A T I O N O FV A S C U L A RS M O O T H M U S C L EC E L L S X U C o n g f e n g ,WA N G Ni ,Z HA O M i n g m i n g ,Z HA N G N i n g ,WA N GL i r e n ,L IY o n g h o n g (D e p a r t m e n t o fC a r d i o l o g y ,T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fQ i n g -d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266100,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t o f E n t r e s t o (s a c u b i t r i l /v a l s a r t a n )o n t h e p r o l i f e r a t i o no f v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l s (V S M C s )s t i m u l a t e db y a ng i o t e n s i n Ⅱ(A n g Ⅱ). M e th o d s H u m a n a o r ti cV S M C sw e r e c u l t u r e d i nv i t r o a n d r a n -d o m l y d i v i d e d i n t oA n g Ⅱg r o u p (t r e a t e dw i t hA n g Ⅱ),A n g Ⅱ+E n t r e s t o g r o u p (t r e a t e dw i t hE n t r e s t o f o r 1h ,f o l l o w e d b y A n g Ⅱt r e a t m e n t a f t e rm e d i u mc h a n g e ),a n d c o n t r o l g r o u p (w i t h o u t d r u g t r e a t m e n t ).A l l g r o u p sw e r e c u l t u r e d f o r 24h .C C K 8a s s a y w a s u s e d t om e a s u r e c e l l p r o l i f e r a t i o n ;s c r a t c ha s s a y w a su s e d t om e a s u r e c e l lm i g r a t i o na c t i v i t y ;qu a n t i t a t i v e r e a l -t i m eP C Ra n d W e s t e r nb l o tw e r e u s e d t om e a s u r e t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f p r o l i f e r a t i n g c e l l n u c l e a r a n t i g e n (P C N A )a n dm a t r i xm e t a l l o pr o t e i n a s e -9(MM P -9). R e s u l t s C o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o l g r o u p ,t h eA n g Ⅱg r o u p h a d s i g n i f i c a n t i n c r e a s e s i n c e l l p r o l i f e r a t i o n r a t e ,m i -g r a t i o na c t i v i t y ,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f P C N Aa n d MM P -9i nV S M C s (F =16.54-177.20,P <0.05).C o m p a r e dw i t ht h e A n g Ⅱg r o u p ,t h eA n g Ⅱ+E n t r e s t o g r o u p h a d s i g n i f i c a n t r e d u c t i o n s i n c e l l p r o l i f e r a t i o n r a t e ,m i g r a t i o n a c t i v i t y ,a n d t h e e x p r e s -s i o n l e v e l s o f P C N Aa n d MM P -9i n V S M C s (P <0.05). C o n c l u s i o n E n t r e s t oc a ni n h i b i t t h e p r o l i f e r a t i o na n d m i gr a t i o no f V S M C s i n d u c e db y A n g Ⅱ.[K E Y W O R D S ] m y o c y t e s ,s m o o t hm u s c l e ;m u s c l e ,s m o o t h ,v a s c u l a r ;v a l s a r t a n /s a c u b i t r i l ;c e l l pr o l i f e r a t i o n 缺血性心脏病是目前威胁人类健康的主要原因[1],经皮冠状动脉介入术(P C I )是冠心病病人重要治疗方法,血管支架尤其是药物洗脱支架应用极大程度改善了冠心病病人的疗效和预后[2-3]㊂然而,该疗法存在支架内再狭窄(I S R )的并发症,严重影响了P C I 的疗效,也是目前医学领域面临的尚未解决的难题之一[3]㊂I S R 的病理生理学机制复杂[4],所涉及的主要机制包括血管内皮损伤㊁血管平滑肌细胞(V S M C s )的增殖和迁移㊁炎症反应㊁血管外基质重构等,V S M C s 的异常增殖和迁移是冠状动脉粥样硬化和冠状动脉I S R 的主要病理基础[5]㊂沙库巴曲缬沙坦(E n t r e s t o )是一种治疗心力衰竭药物[6],主要由血管紧张素受体抑制剂缬沙坦(V a l -s a r t a n)和脑啡肽酶抑制剂沙库巴曲组成[7]㊂脑啡肽酶抑制剂沙库巴曲可以抑制脑啡肽酶(N E P )活性,并减少N E P 对利钠肽(N P )以及其他血管活性肽的降解[8]㊂N P 主要包括A 型利钠肽(A N P )㊁B型利钠肽(B N P )㊁C 型利钠肽(C N P ),N P 与受体结合后能增加细胞内第二信使c GM P 的含量,并作用于下游信号通路发挥抑制V S M C s 增殖的作用[9-10]㊂相关研究证明,V a l s a r t a n 可以通过多条信号通路抑制V S M C s 的增殖[11]㊂目前,E n t r e s t o 对V S M C s680青岛大学学报(医学版)59卷增殖与迁移影响的研究较少㊂本研究观察E n t r e s t o 对血管紧张素Ⅱ(A n gⅡ)刺激下人主动脉平滑肌细胞(H A-V S M C s)增殖与迁移的影响,探讨E n t r e s t o 在预防I S R中的作用及机制㊂1材料与方法1.1实验材料H A-V S M C s加入D M E M培养液(含10g/L 青霉素-链霉素和体积分数0.10胎牛血清),培养箱中培养㊂A n gⅡ㊁E n t r e s t o购自A b M o l e,增殖细胞核抗原(P C N A)㊁基质金属蛋白酶9(MM P-9)抗体购自上海爱必信生物科技有限公司,C C K8试剂盒㊁蛋白浓度测定(B C A)试剂盒㊁E C L化学发光剂㊁胰蛋白酶㊁胎牛血清㊁高糖D M E M培养液等购自大连美仑生物技术有限公司,R N A提取试剂T r i z o l购自北京博迈斯科技发展有限公司,实时荧光定量P C R(q R T-P C R)试剂盒来自艾科瑞生物,引物由青岛德罗海达生物技术有限公司合成㊂1.2实验方法1.2.1实验分组将H A-V S M C s接种于6孔培养板中,无血清培养液饥饿培养24h后,按以下方法进行分组处理:A n gⅡ组(B组),加入A n gⅡ(1ˑ10-6m o l/L);A n gⅡ+E n t r e s t o组(C组),加入E n-t r e s t o(1ˑ10-5m o l/L)作用1h之后再加入A n gⅡ(1ˑ10-6m o l/L);对照组(A组),不加A n gⅡ和E n t r e s t o㊂各组均培养24h㊂1.2.2 C C K8检测细胞增殖将HA-V S M C s接种在96孔板中,待细胞融合至80%时,换无血清培养液饥饿处理24h㊂按1.2.1方法分组并加入相应药物培养24h,向每孔中加入10μLC C K8试剂继续培养2h,在酶标仪上检测450n m波长处各孔的光密度(O D)值,以其表示细胞增殖活性㊂每组设5个复孔,实验重复3次㊂1.2.3细胞划痕实验检测细胞迁移活性将H A-V S M C s接种到6孔板中,待细胞贴壁生长至密度70%~80%时,更换为无血清培养液饥饿处理24h㊂使用1000μL的无菌枪头垂直在细胞板上均匀划线,造成几条划痕㊂P B S洗涤3次去除划掉的细胞,加含体积分数0.10胎牛血清的D M E M培养液,按1.2.1方法分组并加入相应药物,每隔12h显微镜下观察细胞划痕开口率,并采集图像㊂1.2.4q R T-P C R检测P C N A及MMP-9m R N A 表达 H A-V S M C s按照1.2.1方法分组并加入相应药物,培养24h后弃去培养液,每孔细胞加入500μLT r i z o l裂解核蛋白提取总m R N A,应用逆转录试剂盒逆转录得到c D N A;根据S Y B R G r e e n P r e m i xP r oT a q H S q P C R K i t说明书将所获得的c D N A进行q R T-P C R,检测P C N A以及MMP-9 m R N A表达㊂P C R引物及其序列见表1㊂表1P C R引物及其序列引物名称位置序列P C N A上游5'-G C T A G T A T T T G A A G C A C C A A A C C A-3'下游5'-T C T C G G C A T A T A C G T G C A A A T T-3' MMP-9上游5'-C C C G G A C C A A G G A T A C A G T T T-3'下游5'-G T G C C G G A T G C C A T T C A C-3'G A P DH上游5'-A A G G T C G G A G T C A A C G G A T T-3'下游5'-A G T G A T G G C A T G G A C T G T G G-3' 1.2.5 W e s t e r nb l o t检测P C N A及MM P-9蛋白表达按1.2.1方法分组并加入相应药物,作用24h 后弃去培养液,P B S洗3次后,加含蛋白酶抑制剂的蛋白裂解液充分裂解,应用B C A试剂盒测定蛋白浓度㊂取20μg蛋白样品加样,行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,三明治法转膜,250m A恒流1h,应用快速封闭液封闭15m i n后洗膜㊂将膜分别加入P C N A抗体(1ʒ1000)㊁MM P-9抗体(1ʒ1000)㊁β-a c t i n抗体(1ʒ1000)中,4ħ摇床孵育过夜,洗涤后放入二抗(1ʒ5000)中室温孵育2h㊂采用E C L化学发光方法显影后,在蛋白凝胶成像系统上采集条带,以β-a c t i n进行标定,采用I m a g eJ软件对各条带灰度值进行分析,计算各组V S M C s中P C N A及MM P-9蛋白相对表达水平㊂1.3统计学处理应用G r a p h P a dP r i s m8软件对数据进行分析㊂计量资料数据用 xʃs表示,数据间比较采用单因素方差分析(O n e-W a y A N O V A),并继以T u k e y方法进行两两比较㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1各组V S M C s增殖活性比较对照组㊁A n gⅡ组及A n gⅡ+E n t r e s t o组的O D 值分别为1.00ʃ0.06㊁2.08ʃ0.12㊁1.01ʃ0.12,各组之间相比较差异有统计学意义(F=164.10,P< 0.05)㊂两两比较显示,A n gⅡ组V S M C s增殖活性较对照组升高(t=17.67,P<0.05),A n gⅡ+E n-t r e s t o组V S M C s增殖活性较A n gⅡ组降低(t= 13.55,P<0.05)㊂5期徐从凤,等.沙库巴曲缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖的影响6812.2各组V S M C s迁移活性比较划痕实验显示,各组0h时的划痕开口率差异无显著性(P>0.05),在12~36h划痕开口率组间差异有统计学意义(F=16.54~58.64,P<0.05)㊂与对照组相比较,A n gⅡ组V S M C s的划痕开口率在12~36h明显降低(t=4.04~8.78,P<0.05),提示V S M C s的迁移程度增加;与A n gⅡ组相比较, A n gⅡ+E n t r e s t o组V S M C s的划痕开口率在12~ 36h更高(t=5.79~9.32,P<0.05)㊂见图1㊂A:各组划痕实验结果;B:各组0~36h划痕开口率比较㊂图1各组V S M C s迁移活性比较2.3各组V S M C s中P C N A、MMP-9m R N A和蛋白表达比较各组V S M C s中P C N A及MMP-9的m R N A 和蛋白表达差异均有显著性(F=33.32~177.20, P<0.05)㊂与对照组相比较,A n gⅡ组V S M C s中P C N A㊁MMP-9的m R N A和蛋白表达量增加(t=7.07~22.93,P<0.05);与A n gⅡ组相比,A n gⅡ+E n t r e s t o组V S M C s中P C N A㊁MMP-9的m R N A 及蛋白表达均降低(t=5.78~15.82,P<0.05)㊂见图2和表2㊂3讨论V S M C s的异常增殖与迁移是I S R最主要的病A:对照组;B:A n gⅡ组;C:A n gⅡ+E n t r e s t o组㊂图2W e s t e r nb l o t检测V S M C s中P C N A㊁MM P-9蛋白表达表2各组V S M C s中P C N A㊁MM P-9m R N A及蛋白表达比较(n=3, xʃs)组别P C N Am R N A蛋白MM P-9m R N A蛋白A组1.00ʃ0.230.52ʃ0.061.00ʃ0.180.55ʃ0.03 B组2.73ʃ0.31*1.03ʃ0.03*2.56ʃ0.34*1.11ʃ0.01* C组1.40ʃ0.11#0.63ʃ0.06#1.22ʃ0.22#0.58ʃ0.04#注:多组P C N A㊁MM P-9蛋白及m R N A相比较,F=33.32~ 177.20,P<0.05;与A组比较,*t=7.07~22.93,P<0.05;与B组比较,#t=5.78~15.82,P<0.05㊂理生理机制[12]㊂正常生理情况下,V S M C s存在于血管中膜,组成血管壁结构及调节血管张力以维持血压[13-14]㊂支架植入术后血管内皮损伤,内膜下成分如胶原纤维㊁纤维连接蛋白等暴露,使血小板活化,聚集黏附在损伤处形成局部血栓[15]㊂单核细胞释放炎性介质及趋化因子[16],促进V S M C s由收缩表型转变为合成表型迁入内膜中,细胞的增殖及迁移能力增加[17],V S M C s分泌大量的血小板源性生长因子(P D G F)㊁α成纤维细胞生长因子㊁T G F-β等细胞因子及细胞外基质[18],致病理性内膜新生的进程加快,导致I S R的发生㊂E n t r e s t o主要由沙库巴曲和V a l s a r t a n以钠盐复合物1ʒ1的摩尔比例结合而成[19],这种结合可解决两种病理生理机制:肾素-血管紧张素-醛固酮系统(R A A S)的激活和对N P敏感性的下降[20]㊂有研究表明,E n t r e s t o对来自特发性肺动脉高压病人的人肺动脉平滑肌细胞具有抗增殖作用[21],但是其对H A-V S M C s增殖的影响尚未见有报道㊂P C N A是评估细胞增殖状态的常用指标,在细胞各周期中均有表达[22]㊂MM P-9又被命名为明胶酶B,属于基质金属蛋白酶家族,能够降解血管基膜和细胞外基质[23],是细胞迁移过程中重要的标志指标㊂已有研究显示,MM P-9的过度表达可以促进V S M C s迁移至血管内膜,减少内膜基质含量[24]㊂本研究C C K8及细胞迁移实验结果显示,E n t r e s t o 可以抑制A n gⅡ诱导的V S M C s增殖活性及迁移程度,且使P C N A及MM P-9的表达量较A n gⅡ组降682青岛大学学报(医学版)59卷低㊂说明E n t r e s t o能够抑制A n gⅡ诱导的V S M C s 增殖及迁移㊂其可能的作用机制如下㊂①A n gⅡ与A T1受体(A T1R)结合,V a l s a r t a n作为A T1R的拮抗剂抑制其促V S M C s增殖与迁移作用[11]㊂有研究结果表明,V a l s a r t a n能够降低A n gⅡ诱导的P38丝裂素活化蛋白激酶(MA P K)蛋白表达水平,进而抑制V S M C s的迁移和增殖[25]㊂除此之外,N o t c h㊁P I3K/A K T相关信号通路㊁T G F-β及下游信号分子㊁W n t信号通路等均参与了V S M C的增殖和迁移的过程[26-29],V a l s a r t a n可能通过阻断这些通路从而发挥抑制V S M C s增殖的作用㊂同时,沙库巴曲在抑制脑啡肽酶分解的同时,也抑制了A n gⅠ㊁A n g Ⅱ等多种肽类的降解[30-31],从而使A n gⅡ的浓度升高促进V S M C s的增殖㊂V a l s a r t a n很好地弥补了沙库巴曲的缺点[32]㊂A n gⅡ浓度增高可以对抗传统A C E-A n gⅡ-A T1轴促V S M C s增殖迁移的作用[33]㊂②N P除了具有利尿㊁利钠㊁扩张血管㊁抗心肌肥厚和纤维化㊁抑制R A A S㊁内皮素和交感神经活性等作用外,N P家族成员A N P㊁B N P及C N P与受体结合后,均能影响V S M C s的增殖[10]㊂A N P和C N P可以通过鸟苷酸偶联受体介导降低MA P K活性,两者均可以呈剂量依赖性抑制P D G F诱导的V S M C s增殖[34-35]㊂相关研究还表明,大鼠过表达C N P可引起c GM P级联激活以诱导G1期V S M C s 生长抑制,调节V S M C s表型[36]㊂B N P可通过鸟苷酸偶联受体A降低细胞内活性氧和N A D(P)H氧化酶的活性,进而抑制A n gⅡ诱导的V S M C s增殖[37]㊂此外,N P还有抑制成纤维细胞增殖及心肌细胞增生肥大的作用[38],故E n t r e s t o与支架术后再狭窄的发展过程密切相关,可能会降低支架植入后的再狭窄率㊂综上所述,E n t r e s t o可抑制V S M C s的移行㊁增殖,对P C I后再狭窄的防治具有潜在价值㊂但其具体信号转导机制㊁体内研究结果及在临床实践中的应用尚有待于进一步探讨㊂[参考文献][1]G B DC A U S E SO FD E A T H C O L L A B O R A T O R S.G l o b a l,r e-g i o n a l,a n dn a t i o n a l a g e-s e x-s p e c i f i c m o r t a l i t y f o r282c a u s e so f d e a t h i n195c o u n t r i e sa n dt e r r i t o r i e s,1980 2017:as y s-t e m a t i c a n a l y s i s f o r t h eG l o b a lB u r d e no fD i s e a s eS t u d y2017[J].L a n c e t,2018,392(10159):1736-1788.[2]B H A T TDL.P e r c u t a n e o u s c o r o n a r y i n t e r v e n t i o n i n2018[J].J AMA,2018,319(20):2127-2128.[3]G I U S T I N O G,C O L OM B O A,C AMA JA,e ta l.C o r o n a r yI n-s t e n t r e s t e n o s i s:J A C Cs t a t e-o 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i o m y o c y t eh y p e r t r o p h y t h r o u g hm i-t o g e n-a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e p h o s p h a t a s e-1[J].B i o c h e m i c a la n dB i o p h y s i c a l R e s e a r c hC o mm u n i c a t i o n s,2004,322(1):310-319.(本文编辑黄建乡)。
脂质代谢与多发性骨髓瘤相关研究进展
第59卷 第4期2023年08月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .4A u gu s t 2023[收稿日期]2022-11-17; [修订日期]2023-05-06[基金项目]北京市自然科学基金资助项目(7162067)[第一作者]于倩茹(1998-),女,硕士研究生㊂[通信作者]钟玉萍(1972-),女,博士,主任医师,硕士生导师㊂E -m a i l :z h o n g y p3352@126.c o m ㊂脂质代谢与多发性骨髓瘤相关研究进展于倩茹1,钟玉萍2(1 潍坊医学院临床医学院,山东潍坊 261000; 2 青岛市市立医院(集团)康复大学(筹)青岛医院血液内科)[摘要] 多发性骨髓瘤是血液系统的第二大常见的恶性肿瘤㊂脂代谢与多发性骨髓瘤之间的联系近年来日益得到重视,其临床和基础研究虽取得了一定的成果,但具体联系仍不明确㊂本文从病因㊁发病机制㊁临床表现㊁治疗等方面对脂质代谢与多发性骨髓瘤相关的研究进展进行综述,旨在为多发性骨髓瘤的诊断㊁治疗及预防等提供新的思路㊂[关键词] 多发性骨髓瘤;脂类代谢;综述[中图分类号] R 733.3 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)04-0629-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.141[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /37.1517.R.20230926.1417.008;2023-09-27 08:51:30R E S E A R C HP R O G R E S SO FL I P I D M E T A B O L I S M A N D M U L T I P L E M Y E L O M A Y U Q i a n r u ,Z H O N G Y u p i n g (S c h o o lo f C l i n i c a lM e d i c i n e ,W e i f a n g M e d i c a lU n i v e r s i t y ,W e i f a n g 261000,C h i n a )[A B S T R A C T ] M u l t i p l em y e l o m a i s t h e s e c o n dm o s t c o mm o nh e m a t o l o g i c a lm a l i g n a n c y .T h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n l i pi dm e -t a b o l i s ma n dm u l t i p l em y e l o m a h a s r e c e i v e d i n c r e a s i n g a t t e n t i o n i n r e c e n t y e a r s .A l t h o u gh c e r t a i n a c h i e v e m e n t s h a v e b e e nm a d e o n c l i n i c a l a n d b a s i c r e s e a r c h ,t h e s p e c i f i c r e l a t i o n s h i p i s s t i l l u n c l e a r .T h i s p a p e r r e v i e w s t h e r e s e a r c h p r o g r e s s r e l a t e d t o l i pi dm e t a b o -l i s ma n dm u l t i p l em y e l o m a f r o ms e v e r a l a s p e c t s ,i n c l u d i n g e t i o l o g y ,p a t h o g e n e s i s ,c l i n i c a lm a n i f e s t a t i o n s ,a n d t r e a t m e n t ,h o p i n g t o p r o v i d e n e wi d e a s f o r t h e d i a g n o s i s ,t r e a t m e n t ,a n d p r e v e n t i o no fm u l t i p l em ye l o m a .[K E Y W O R D S ] m u l t i p l em y e l o m a ;l i pi dm e t a b o l i s m ;r e v i e w 多发性骨髓瘤(MM )是血液系统的第二大常见的恶性肿瘤,其临床表现包括正常造血功能缺陷㊁骨损害和肾损害㊁免疫功能抑制以及多器官的侵袭性特征损害等㊂目前,MM 通过积极治疗虽已可达到较长的缓解状态,但仍然被认为是一种不可治愈的疾病,其5年相对生存率为57.9%(2012 2018)[1]㊂脂质在细胞的生长和增殖过程中起到了重要的作用,流行病学研究显示,血清中的脂质水平与未来的癌症风险相关,包括乳癌㊁前列腺癌㊁结肠癌等[2]㊂本文对近年来MM 与脂质代谢相关的病因㊁发病机制㊁治疗等方面的研究进展进行综述,以期为MM 的预防㊁治疗等提供思路㊂1 血脂异常与MMMM 病人的诊断年龄多在65~74岁之间[1],病人经常有并发疾病,如高血压㊁糖尿病等,血脂异常也是其中之一㊂血脂异常指的是血脂水平的异常及血液中脂质变异性的差异㊂回顾性研究显示,MM 病人血液中的总胆固醇(T C )㊁低密度脂蛋白胆固醇(L D L -C )及高密度脂蛋白胆固醇(H D L -C )水平均低于正常对照组[3]㊂以色列特拉维夫医学中心(T A S M C )对2008 2015年间诊断的105例MM 病人㊁48例冒烟型骨髓瘤(S MM )病人及正常对照人群随访研究结果显示,与正常对照组比较,S MM 病人诊断时血脂异常的发生率差异有统计学意义,而MM 病人诊断时血脂异常的发生率差异则无统计学意义㊂但无论S MM 病人还是MM 病人,在初诊后的第1㊁3㊁5年均出现有统计学意义的血脂异常高风险[4]㊂也有一些研究显示,血脂水平与血液系统肿瘤发生有相关性㊂如一项韩国研究显示,血高密度脂蛋白(H D L )水平低的病人具有更高的血液系统肿瘤的发生风险,包括MM [5];一项样本量为24208例绝经后女性的研究结果也显示,血中H D L -C 水平与MM 发生风险之间呈负相关[6]㊂近期,一项样本量为107341例的研究结果显示,低水平H D L -C 能够增加MM 疾病的发生风险[7]㊂2007 2016年,L I U 等[8]对307例不同国际分期系统(I S S )分期MM 病人血脂指标,包括载脂蛋白A 1(A P O A 1)㊁载脂蛋白B (A P O B )㊁总胆固醇(T C )㊁三酰甘油(T G )㊁低密度脂蛋白(L D L )㊁H D L 研究显示,血中高水平A P O A 1与更长的总生存率㊁无进展生存期(P F S )有关,其余指标与总生存率㊁P F S 无相关性㊂人体内的血脂水平处在波动的状态中,故血脂水平的变异性引起了人们的关注[9]㊂近期的流行病学研究显示,血脂变异性与多种疾病相关,如冠心病㊁卒中及死亡[10]㊂C HO I等[11]进行的回顾性队列研究显示,较低的血T C ㊁L D L -C ㊁H D L -C 和T G 水平以及较高的H D L -C 血脂变异性病人有较高的MM 发生风险㊂2 肥胖与MM目前有研究显示,病态肥胖被认为是包括MM 在内的Copyright ©博看网. All Rights Reserved.630青岛大学学报(医学版)59卷13种癌症的危险因素之一,并且与肥胖的表现型息息相关[12]㊂M e t a分析结果显示,高体质量指数(B M I)是MM的独立危险因素[13]㊂还有研究显示,中年期B M I增高是意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MG U S)病人发展为MM的诱因之一[14]㊂B U L L W I N K L E等[15]研究显示,肥胖个体的脂肪组织能够对MM细胞系的增殖和黏附起到支持作用㊂在众多的生物因素中,胰岛素抵抗㊁胰岛素样生长因子-1信号通路的改变㊁性激素的生物合成㊁低级别的慢性炎症以及氧化应激被认为发挥了促进病态肥胖病人发生MM的作用[16]㊂3MM与硫酸肝素蛋白多糖(H S P G)有研究发现,H S P G可能通过吸引循环中的脂蛋白分子靠近细胞膜,以及使这些脂蛋白分子与低密度脂蛋白受体(L D L R)㊁低密度脂蛋白受体相关蛋白1(L R P1)㊁极低密度脂蛋白受体(V L D L R)等受体结合,从而在脂蛋白降解的整个过程中发挥重要的作用[17]㊂H S P G主要成分为多配体蛋白聚糖1(s y n d e c a n-1),是一种在肝脏中针对富含T G的脂蛋白残余体的一个独立的受体㊂s y n d e c a n-1被发现存在于MM细胞膜上并在骨髓瘤细胞与骨髓微环境的相互作用中发挥了重要的作用㊂骨髓瘤细胞以细胞膜上高表达s y n d e-c a n-1为特征[18]㊂s y n d e c a n-1同样被发现可作为增殖诱导配体(A P R I L) 骨髓微环境中的一个重要的对骨髓瘤细胞的生存起支持作用的因子的共受体发挥作用[19]㊂转换后的H S P G(硫酸肝素链被其相关酶,如硫酸酯酶和肝素酶降解后)在肿瘤微环境中会影响信号事件的发生以及癌症的进展㊂因此,这些酶类可以被用作肿瘤的治疗性靶点,特别是MM㊂MM病人骨髓中肝素酶的过表达与其更短的无事件生存期(E F S)相关,其机制可能与肝素酶诱导破骨细胞生成以及骨丢失,进而导致骨髓微环境内信号的改变有关[20]㊂目前,肝素酶抑制剂罗尼哌他正在Ⅰ期临床试验中[21]㊂4MM与骨髓脂肪细胞(B M A s)B MA s在骨髓瘤细胞生物活动中扮演重要的角色㊂由于源于非造血源性的骨髓基质细胞,B MA s作为能量储存库及内分泌器官兼具白色和棕色脂肪组织的特点[22]㊂MM病人的骨髓相较于正常病人的骨髓倾向于拥有更多的前体脂肪细胞及更大的成熟脂肪细胞[23]㊂B MA s可以通过诱导浆细胞内自噬蛋白的生成,使骨髓瘤细胞产生化疗抵抗来促进瘤细胞的生长并保护恶性细胞[24]㊂B MA s对急性髓系白血病(AM L)细胞的生长发挥促进作用[25],但在T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-A L L)的动物模型体内研究则显示其抑制了瘤细胞的生长[26]㊂B MA s还可能促进骨髓的重构㊂有研究显示,MM细胞可以使B MA s重组,重组的脂肪细胞可以阻止疾病缓解后骨损害的逆转[27]㊂一方面,重组的脂肪细胞因为发生了过氧化物酶体增殖物激活受体γ(P P A Rγ)启动子的甲基化, P P A Rγ表达减少[27];另一方面,浆细胞群分泌的脂联素表达下调,脂联素是由B MA s及其他脂肪细胞表达的一种具有抗肿瘤活性㊁参与脂肪酸代谢的脂肪因子,其参与的生物反应可以抑制I L-6的生成,故而其表达的下调能够间接促进MM的进展[28]㊂年龄㊁肥胖㊁脂代谢异常以及代谢综合征与MM及B MA s的生长都有紧密关联㊂5调血脂药与蛋白酶体抑制剂联合治疗MM作为以单克隆浆细胞的恶性增殖为特点的血液系统肿瘤,MM细胞可以分泌并在肿瘤细胞内积累大量的未折叠及错误折叠的蛋白质,导致肿瘤细胞内质网的压力增大[29],因此,MM细胞极度依赖泛素-蛋白酶体途径降解对瘤细胞有毒性的错误蛋白质㊂同时,骨髓瘤细胞必须启动胞外囊泡分泌系统,使大量的免疫球蛋白通过囊泡分泌至细胞间隙,这可能有助于减轻瘤细胞内部内质网的压力以实现骨髓瘤细胞的适应性生存[30]㊂蛋白酶体抑制剂通过抑制蛋白酶体的活性干扰了内质网相关的降解系统的平衡,使错误蛋白质的降解受阻,从而导致内质网的压力过载进而实现骨髓瘤细胞的诱导凋亡㊂脂质对于分泌囊泡的合成及囊泡的分泌功能发挥都是十分重要的组成成分[31]㊂体外实验显示,骨髓瘤细胞在蛋白酶体抑制剂的作用下,细胞内积累了大量未降解的有害蛋白质的同时,其细胞内脂质(主要是磷脂和T G)水平上升,继而出现了有害蛋白质的胞外囊泡分泌㊂在此基础上进一步研究发现,在蛋白酶体抑制剂的作用下,同时进行调脂治疗杀灭骨髓瘤细胞与不进行调脂治疗相比呈现出杀灭骨髓瘤细胞的协同作用㊂研究发现,蛋白酶体抑制剂与他汀类(主要调节磷脂水平)及非诺贝特(主要调节T G水平)等多种分别对不同脂质有调节作用的调脂药物联合应用,可以提升其药物体外抗肿瘤的效果[31]㊂这提示蛋白酶体抑制剂与一种或多种调脂药物的联合使用可能成为一个新的有前景的骨髓瘤治疗方案㊂6改变细胞膜流动性治疗MM一般情况下,无论是正常细胞还是恶性肿瘤细胞,细胞膜流动性的高低均与细胞的功能特性密切相关,其对于正常细胞的移动以及恶性肿瘤细胞的转移都起到了重要的作用㊂现有的证据表明,肿瘤细胞膜流动性的不同很大程度依赖于肿瘤的种类㊂相较于正常细胞,肝癌细胞细胞膜流动性减低,乳癌[32]㊁神经系统肿瘤[33]等多种恶性肿瘤细胞膜流动性增高㊂也有研究显示,肿瘤病人细胞膜的流动性越强,肿瘤的恶性程度越高[34]㊂而细胞膜中胆固醇组分的改变可能影响细胞膜的流动性㊁细胞膜的结构㊁抗原性等[35]㊂B E S S E等[36]研究结果表明,肿瘤细胞的多药抵抗与细胞膜流动性以及细胞膜的磷脂㊁胆固醇㊁不饱和脂肪酸链等组成成分关系密切,在体外环境下,降低细胞膜流动性的药物奈非那韦对于蛋白酶体抑制剂抵抗的MM细胞可以产生一定的抗肿瘤效果㊂恶性肿瘤治疗中改变细胞膜的流动性是一个新兴靶点,其可行性仍有Copyright©博看网. All Rights Reserved.4期于倩茹,等.脂质代谢与多发性骨髓瘤相关研究进展631待于进一步研究㊂7研究局限性与未来展望MM的发病机制受多种因素影响㊂目前,脂蛋白是最常用的生物标志,一些研究探讨了脂蛋白与MM之间的关系㊂研究发现,除脂质的含量之外,其功能性才是它们发挥生物学活性的关键[37],其中H D L-C的功能性分子在众多的生物学通路和程序中发挥重要的作用㊂但是H D L-C的数量与其发挥的作用有时并不匹配,这也是H D L-C水平与MM的研究结果之间互相冲突的原因㊂目前仍未有功能性的H D L 分子与MM生存期之间关系的研究㊂大量的脂蛋白分子对于调节内环境脂质稳态以及调节不同细胞膜的功能性起到了重要的作用,进行血清脂蛋白的功能性分析可能有助于阐明MM疾病进展的新机制㊂明确脂蛋白在MM病理生理过程中的作用也有助于为临床医生提供新的临床诊治思路[38]㊂骨髓微环境是MM发病机制中的重要组成部分,其中骨髓基质细胞与骨髓瘤细胞间的相互作用也是骨髓微环境中影响骨髓瘤发病的一个重要因素,B MA s可能在其中扮演了重要的角色,干预二者之间的相互作用是否可能成为干预MM进展的一项可行措施?蛋白酶体抑制剂作用后的MM细胞内会出现异常的脂质沉积现象,这种现象可能为临床上治疗MM提供新的思路,即蛋白酶体抑制剂与多种类型的调脂药物联合㊂已有体外实验及动物实验验证了其可行性,但其生物效果仍需进行临床试验来进一步证实㊂综上所述,MM诊断后数年的病人更容易出现血脂异常㊂使用蛋白酶体抑制剂的同时加用一种或多种调脂药物治疗可能成为治疗MM的新思路㊂病态肥胖也可能是MM 的促进因素之一㊂干预骨髓瘤病人骨髓微环境中B MA s与骨髓瘤细胞的相互作用也可能对于MM有治疗作用㊂破坏骨髓瘤细胞表面H S P G的结构也可能对骨髓瘤有一定治疗作用,目前针对此靶点的药物正在进行临床试验中㊂已有体外实验证实,改变细胞膜流动性的药物具有一定的抗肿瘤作用,其具体疗效和安全性目前仍待进一步证实㊂[参考文献][1]S t a t i s t i c s a ta G l a n c e.C a n c e rs t a t f a c t s:M y e l o m a.h t t p s://s e e r.c a n c e r.g o v/s t a t f a c t s/h t m l/m u l m y.h t m l(a c c e s s e d M a y 18,2022).[2]K I T A H A R A C M,B E R R I N G T O N D E G O N ZÁL E Z A,F R E E D MA N ND,e t a l.T o t a l c h o l e s t e r o l a n d c a n c e r r i s k i n al a r g e p r o s p e c t i v e s t u d y i nK o r e a[J].J o u r n a l o fC l i n i c a lO n c o-l o g y:O f f i c i a l J o u r n a l o f t h eA m e r i c a nS o c i e t y o fC l i n i c a lO n-c o l o g y,2011,29(12):1592-1598.[3]Y A V A S O G L UI,T OM B U L O G L U M,K A D I K O Y L U G,e ta l.C h o l e s t e r o l l e v e l s i n p a t i e n t s w i t h m u l t i p l e m y e l o m a[J].A n n a l s o fH e m a t o l o g y,2008,87(3):223-228.[4]MA R K U SE,T R E S T MA NS,C O H E NY,e t a l.C o m p o n e n t so fm e t a b o l i c s y n d r o m e i n p a t i e n t sw i t h m u l t i p l em y e l o m aa n d s m o l d e r i n g m u l t i p l em y e l o m a[J].B M CC a n c e r,2020,20(1): 489.[5]J E O N G S M,C HO IT,K I M D,e ta l.A s s o c i a t i o nb e t w e e nh i g h-d e n s i t y l i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l l e v e l a n dr i s ko fh e m a t o-l o g i cm a l i g n a n c y[J].L e u k e m i a,2021,35(5):1356-1364. 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不同月龄A53T小鼠背根神经节中α-Syn表达变化
第59卷 第3期2023年06月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .3J u n e 2023[收稿日期]2022-09-01; [修订日期]2023-05-23[基金项目]国家自然科学基金面上项目(32171131)[第一作者]韩帆(1997-),女,硕士研究生㊂[通信作者]陈曦(1980-),女,博士,副教授,硕士生导师㊂E -m a i l :c a s e y1201@163.c o m ㊂不同月龄A 53T 小鼠背根神经节中α-S yn 表达变化韩帆,焦倩,杜希恂,阎春玲,姜宏,陈曦(青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东青岛 266071)[摘要] 目的 探讨不同月龄A 53T 转基因(A 53T )小鼠脊髓背根神经节(D R G )中α-突触核蛋白(α-S yn )表达水平的变化㊂方法 6月龄和12月龄野生型(WT )小鼠和A 53T 小鼠经乌拉坦腹腔麻醉后处死,在体视显微镜下取出胸段㊁腰段和荐段的D R G 组织,采用蛋白免疫印迹法检测D R G 中α-S y n 的表达水平㊂结果 与相同月龄WT 小鼠相比,6月龄及12月龄A 53T 小鼠D R G 中α-S yn 表达量显著增加(F =59.164㊁55.681,P <0.01);与6月龄A 53T 小鼠相比,12月龄A 53T 小鼠D R G 中α-S yn 的表达量显著增加(F =13.802,P <0.05)㊂结论 A 53T 小鼠D R G 中α-S yn 表达量高于同月龄WT 小鼠,且其表达量随年龄增长而增加㊂[关键词] α突触核蛋白;帕金森病;小鼠,转基因;神经节,脊[中图分类号] R 338.2 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)03-0337-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.075[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s 2/d e t a i l /37.1517.R.20230719.1618.003.h t m l ;2023-07-20 14:53:22E X P R E S S I O NO Fα-S Y N U C L E I NI N T H E D O R S A L R O O T G A N G L I O N O FA 53T M I C E W I T H D I F F E R E N T A G E SI N M O N T H S HA N F a n ,J I A OQ i a n ,D UX i x u n ,Y A NC h u n l i n g ,J I A N G H o n g ,C H E N X i (S t a t eK e yD i s c i p l i n e :P h y s i o l o g y (i n I n c u b a -t i o n ),D e p a r t m e n t o f P h y s i o l o g y ,Q i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266071,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ee x p r e s s i o n l e v e l of α-s y n u c l e i n (α-S y n )i nt h ed o r s a l r o o tg a n g l i o n (D R G )o f A 53Tt r a n s g e n i cm i c ew i t hd i f f e r e n t a g e s i nm o n th s . M e t h o d s Wi l d -t y p e (WT )m i c ea n dA 53T m i c e ,a ge d6o r 12m o n t h s ,w e r e s a c r if i c e da f t e r i n t r a p e r i t o n e a l a n e s t h e s i aw i t hu r e t h a n e .D R Gt i s s u es a m p l e so f t h e t h o r a c i c ,l u m b a r ,a n ds a c r a l s eg m e n t s w e r e c o l l e c t e d u n d e r a s t e r e o m i c r o s c o p e ,a n dW e s t e r n b l o t t i n g w a s u s e d t om e a s u r e th e e x p r e s si o n l e v e l o f α-S yn . R e s u l t s C o m -p a r e dw i t h t h eWT m i c ew i t h t h e s a m e a g e i nm o n t h s ,t h eA 53T m i c e a g e d 6o r 12m o n t h s h a d a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i n t h e e x p r e s -s i o n l e v e l o f α-S y n i nD R G (F =59.164,55.681;P <0.01).C o m p a r e dw i t h t h eA 53T m i c e a g e d 6m o n t h s ,t h eA 53T m i c e a ge d 12m o n t h sh a d a s i g n if i c a n t i n c r e a s e i n t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f α-S y n i nD R G (F =13.802,P <0.05). C o n c l u s i o n A 53T m i c e h a v e a h igh e r e x p r e s si o n l e v e l o f α-S y n i nD R Gt h a n WT m i c ew i t h t h e s a m ea g e i n m o n t h s ,a n d t h ee x p r e s s i o n l e v e l o f α-S y n i n c r e a s e s w i t ha ge .[K E Y W O R D S ] a l p h a -s y n u c l e i n ;P a r k i n s o nd i s e a s e ;m i c e ,t r a n s g e n i c ;g a n g l i a ,s pi n a l 帕金森病(P D )是一种主要影响运动功能的神经退行性疾病,其发病率随着年龄增加而逐渐上升[1-3]㊂目前,P D 发生的确切原因和机制仍不完全清楚,但大量研究表明,基因突变是重要的因素之一[4-7]㊂A 53T 转基因(A 53T )小鼠是一种常见的P D 模型小鼠,其体内携带的人类A 53T 突变型α-突触核蛋白(α-S y n )基因可改变α-S y n 的结构,使原本可溶性的α-S y n 单体转变为不溶性的多聚体,可在动物体内重现由α-S yn 聚集起始的P D 病理过程[8-12]㊂根据B R A A K 学说可知,胃肠道可能是α-S y n 发生病变的起始部位[13-16],且这些病理性α-S yn 会通过外周神经系统逐渐向中枢传播[17]㊂已有大量实验证实迷走神经在α-S y n 的肠-脑传播中承担主要作用,但是消化道与中枢之间还存在其他神经联络,如交感神经,其传入纤维的胞体主要汇聚在脊髓背根神经节(D R G )中㊂为明确D R G 中是否也存在着α-S yn 高表达,本实验观察了不同月龄A 53T 小鼠D R G 中α-S y n 的含量变化,从而为交感神经传入纤维参与α-S y n 从胃肠道传播至中枢的可能作用提供证据㊂现将结果报告如下㊂1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 A 53T 小鼠(品系名称:B 6;C 3-T g (P r n p-S N C A *A 53T )83V l e /J ),S P F 级,购于南京大学模式动物研究所㊂小鼠饲养于清洁级动物房中,可自由进食饮水,饲养环境为光照模拟自然昼夜节律,12h 明暗交替,温度保持在20~24ħ,相Copyright ©博看网. All Rights Reserved.338青岛大学学报(医学版)59卷对湿度保持在40%~60%㊂选用6月龄和12月龄的纯合子A53T小鼠作为实验组,同窝相同月龄的野生型(WT)小鼠作为对照组㊂1.1.2试剂α-S y n抗体㊁β-t u b u l i n抗体购于美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司;山羊抗兔和山羊抗鼠抗体购于英国T h e r m oF i s h e rS c i e n t i f i c公司;0.45μm P V D F转印膜㊁E C L化学发光液均购于美国M i l l i p o r e公司:R I P A裂解液购于中国C o m W i n B i o t e c h公司㊂A53T小鼠基因型鉴定P C R试剂盒购于中国V a z y m e生物科技有限公司㊂1.2实验方法1.2.1 A53T小鼠基因鉴定 A53T纯合子小鼠由A53T杂合子小鼠配种育得,饲养至1月龄进行分笼和鉴定㊂于尾尖部截取0.5c m长鼠尾组织提取D N A,按照试剂盒(T a q P r o H S U+P r o b e M a s t e r M i x,V a z y m e生物科技有限公司)说明配制实时荧光定量P C R反应体系并进行实验㊂根据P C R数据计算әC t值,通过比较实验组与对照组纯合子目的基因的әC t值,确定基因型㊂1.2.2蛋白免疫印迹法检测D R G中α-S y n表达小鼠经乌拉坦腹腔麻醉处死后取出脊柱,于体视显微镜下取出胸段㊁腰段和荐段的D R G组织放入E P 管中,先用剪刀将组织剪碎,再加入配制好的R I P A 裂解液,充分磨碎组织㊂冰上静置裂解30m i n后,应用高速离心机在4ħ下以12000r/m i n离心20m i n,吸取上清液转移至新的1.5m L E P管中,利用B C A试剂盒和酶标仪进行蛋白质定量,计算上样量㊂按比例加入l o a d i n g b u f f e r,充分混匀,100ħ煮沸10m i n使蛋白充分变性,-20ħ冻存㊂蛋白样品经S D S-P A G E电泳(90V㊁30m i n,120V㊁60m i n)分离后,湿法转至孔径为0.45μm的P V D F 膜上,按蛋白M a r k e r将目标蛋白裁剪出来,经脱脂奶粉封闭㊁一抗孵育㊁H R P-I g G二抗孵育后,用T B S T缓冲液洗净,将膜与E C L超敏发光液反应后置于凝胶成像系统内进行观察并拍摄图像㊂采用I m a g e J分析软件对蛋白条带进行灰度计算,目的蛋白表达水平以α-S y n和β-t u b u l i n g条带灰度值的比值表示㊂1.3统计学处理应用S P S S25.0软件进行统计学处理㊂小鼠D R G中α-S y n的表达量以 xʃs表示,不同月龄WT和A53T小鼠D R G中α-S y n表达水平比较采用析因设计的方差分析,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2结果2.1 A53T小鼠鉴定P C R结果显示,对照组和实验组纯合子目的基因әC t平均值分别为5.84ʃ0.57和6.11ʃ0.47㊂әC t值大于对照组纯合子目的基因әC t值的小鼠为A53T纯合子小鼠㊂共选取10只A53T纯合子小鼠进行实验㊂2.2不同月龄WT和A53T小鼠D R G中α-S y n表达比较蛋白免疫印迹法检测结果显示,6月龄WT组(n=6)㊁6月龄A53T组(n=6)㊁12月龄WT组(n=4)和12月龄A53T组(n=4)小鼠D R G中α-S y n表达水平分别为0.18ʃ0.07㊁1.09ʃ0.21㊁0.46ʃ0.22和1.63ʃ0.35㊂析因设计方差分析结果显示: F月龄=17.417,P<0.01;F组别=112.168,P<0.01; F月龄ˑ组别=1.727,P>0.05㊂与同月龄WT组小鼠相比,6月龄㊁12月龄A53T组小鼠D R G中α-S y n 表达量显著增高,分别增加了505.56%和254.35%,差异均具有统计学意义(F=59.164㊁55.681,P< 0.01);12月龄A53T组小鼠D R G中α-S y n表达量比6月龄A53T组小鼠增加了50.46%,两组相比差异具有统计学意义(F=13.802,P<0.05)㊂表明A53T小鼠D R G中α-S y n的表达远高于同月龄WT小鼠,且随年龄的增长,其表达量增加㊂3讨论大量临床数据表明,在典型的P D运动症状出现之前,胃肠道功能障碍就已经在P D病人身上长期存在,包括便秘㊁胃轻瘫等[18-24]㊂德国的B R A A K 教授于2003年提出了经典的P D分期学说,该学说指出胃肠道是病理性α-S y n蛋白传播的起源地,并且通过肠脑轴逐渐蔓延至中枢神经系统[25-26]㊂其中,α-S y n通过迷走神经传播进入迷走神经运动背核(D MV)是肠脑轴传播的重要组成部分㊂后续有实验表明,迷走神经切断术可以使P D的发展进程大幅减缓,并且使P D的患病风险大大降低[27-30]㊂但该法仍不能完全杜绝P D,这提示α-S y n在胃肠与中枢之间传播可能还有其他的通道㊂支配消化道的神经除迷走神经外,还有交感神经,其传入纤维的胞体主要汇聚在脊髓D R G中,可感受消化道内机械刺激(如管壁扩张㊁胃肠道蠕动等)㊁化学刺激(如管Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期韩帆,等.不同月龄A53T小鼠背根神经节中α-S y n表达变化339腔内毒性物质㊁酸碱度等)以及温度的变化等,并将这些信息传入中枢神经系统㊂与迷走神经类似,交感神经在消化道和中枢神经系统之间也起桥梁作用,那么它是否在α-S y n的传播过程中起某些作用呢?本研究对此进行了探讨㊂本实验选取小鼠胸椎㊁腰椎和荐椎处的D R G 组织进行检测,来自消化道的交感神经传入纤维主要通过以上部位进入脊髓,可充分反映交感神经传入纤维在病理性α-S y n肠脑传播中的作用㊂实验结果显示,与同月龄WT组小鼠相比,6月龄㊁12月龄A53T组小鼠D R G中α-S y n表达量显著增加,且随年龄的增长,A53T小鼠D R G中α-S y n表达量会进一步增加,表明交感神经中确实存在病理性α-S y n㊂值得注意的是,本实验所取组织来源于A53T小鼠,该小鼠是一种携带人类A53T突变型α-S y n基因的P D模型小鼠,其体内存在广泛的人A53T突变型α-S y n过表达㊂那么,本实验中小鼠D R G中α-S y n 增多的原因,是否仅与该部位的基因突变相关呢?已有实验表明,3月龄A53T小鼠小肠组织中α-S y n 的表达已经明显升高,且出现了消化道功能障碍,但此时中枢神经系统内并未出现病理性的α-S y n,此种情况甚至会持续到6月龄以后,提示老龄A53T 小鼠中枢病理性α-S y n的增多可能亦与该蛋白从外周至中枢的传播有关[31-33]㊂故作者推测A53T小鼠D R G中α-S y n的增多也可能与交感神经在此传播过程中的作用相关㊂有其他研究也报道了交感神经的可能作用,如P D病人肾上腺中存在α-S y n的沉积,肾上腺髓质中包含由交感神经胞体组成的神经节,在这些神经节及发出的神经纤维中均观察到α-S y n聚集的现象[34-35];在膀胱和生殖器官附近的交感神经神经节中同样出现了路易小体[24,36]㊂这些证据均表明交感神经可能参与了P D进展,并且可能与病理性α-S y n的传播有关㊂综上所述,A53T小鼠D R G中α-S y n的表达量显著增加,且其表达量随年龄的增长同步上升,提示交感神经在P D进展中可能发挥作用㊂本实验结果可为P D发生机制研究提供实验依据,同时为通过阻断α-S y n由外周向中枢传播来治疗P D提供了新的思路㊂[参考文献][1]W E R N E R M H,O L A N OW C W.P a r k i n s o n s d i s e a s em o d i f i-c a t i o n t h r o u g h a b l k i n a s e i n h i b i t i o n:a n o p p o r t u n i t y[J].M o v e-m e n tD i s o r d e r s:O f f i c i a lJ o u r n a lo ft h e M o v e m e n t D i s o r d e rS o c i e t y,2022,37(1):6-15.[2]T O L O S AE,G A R R I D O A,S C HO L ZS W,e t a l.C h a l l e n g e si n t h e d i a g n o s i s o f P a r k i n s o n s d i s e a s e[J].T h eL a n c e tN e u r o-l o g y,2021,20(5):385-397.[3]L IG,MAJF,C U I SS,e t a l.P a r k i n s o n s d i s e a s e i nC h i n a:a f o r t y-y e a r g r o w i n g t r a c ko fb e d s i d ew o r k[J].T r a n s l a t i o n a lN e u r o d e g e n e r a t i o n,2019,8:22.[4]F A R R OW SL,S C H I E R D I N G W,G O K U L A D H A SS,e t a l.E s t a b l i s h i n gg e n er e g u l a t o r y n e t w o r k sf r o m P a r k i n s o n sd i-s e a s e r i s k l o c i[J].B r a i n:aJ o u r n a lo fN e u r o l o g y,2022,145(7):2422-2435.[5]Z H O USQ,T I A N Y,S O N GXJ,e t a l.B r a i n p r o t e o m e-w i d ea n dt r a n s c r i p t o m e-w i d ea s s o-c i a t i o ns t u d i e s,B a y e s i a nc o l o c a-l i z a t i o n,a n d M e n d e l i a nr a n d o m i z a t i o na n a l y s e sr e v e a lc a u s a lg e n e s o f P a r k i n s o n s d i s e a s e[J].T h e J o u r n a l s o fG e r o n t o l o g yS e r i e sA,B i o l o g i c a lS c i e n c e sa n d M e d i c a lS c i e n c e s,2023,78(4):563-568.[6]Y IM H,L IJX,J I A N SJ,e ta l.Q u a n t i t a t i v ea n dc a u s a la n a l y s i s f o r i n f l a mm a t o r y g e n e s a n d t h e r i s k o f P a r k i n s o n s d i-s e a s e[J].F r o n t i e r s i n I mm u n o l o g y,2023,14:1119315. 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融媒体时代新闻记者复合能力构建路径探究
新闻研究导刊 Journal of News Research 87第14卷第08期 Vol.14 No.082023年4月 April 2023社会在发展，时代在进步，新闻记者与时俱进提升专业素养，成为综合能力强大的复合人才是大势所趋。
在强调个性化发展的时代，新闻记者个人能力在很大程度上影响着新闻机构的影响力，优秀的新闻记者甚至是新闻机构的门面和金字招牌，能为新闻机构增光添彩。
因此新闻记者背负的使命越来越大，拥有的舞台也越来越广，新闻记者必须抓住时代机遇，努力提升自己的采访、撰稿和创新等能力，构建出完善的复合能力，确保自己成为多面手，能快速与编辑、策划等人员完成新闻的生产和传播，加速传统媒体的转型发展进程。
一、融媒体时代新闻记者构建复合能力的必要性融媒体时代，受众获取新闻信息的渠道非常广泛，信息获取成本很低，在新闻阅读方面具有极大的自主选择权。
受众的时间也呈现出碎片化特征，背负的生活压力和心理压力也越来越大，为了释放情绪、缓解压力，他们更喜欢叙事精简、语言幽默、内容接地气的新闻，希望阅读到具有解压功能或者能给自己生活提供实际帮助的新闻［1］。
新闻记者要坚持以人民为中心的工作导向，强化媒体与受众的连接，了解受众的新闻需求和阅读习惯，生产受众更喜爱的内容，这要求新闻记者具备出色的互动能力、调研能力和文稿创新能力。
此外，融媒体时代强调个性，新闻记者在采访、撰稿、报道等环节都必须尊重当事人的意见，重视受众的态度和反馈，增强受众的新闻参与感，以开放平台吸引广大用户参与信息生产传播，这对新闻记者的采访沟通能力提出了更高要求。
短视频新闻传播平台的出现扩大了新闻报道的场域，各种视频剪辑软件加快了短视频新闻的制作速度，为新闻直播报道、现场报道、快速跟踪报道提供了强大支持，新闻记者只有具备强大的信息处理能力和丰富的新媒体技能，才能够快速制作出时效性强的新闻，在新闻报道方面占据先机。
与此同时，融媒体时代的新闻素材海量而庞杂，这些信息鱼龙混杂，既包含有深度和热度的真实信息，又包含许多虚假低俗的信息，新闻记者只有具备较高的政治素养和道德水平，才能精准把握报道方向，生产出健康积极的新闻内容，并确保新闻内容具有人文性、思想性、真实性和权威性［2］。
211092763_早期五行说及其政治思维——以“和实生物”旧说与新说为中心
为：
“《诗经》中有若干禹，但尧舜不曾一见。
《尚书》中除了后出的《尧典》
《皋陶谟》，有若干禹，但尧舜也
不曾一见。故尧舜禹的传说，禹先起，尧舜后起，是无疑义的。”②除了《诗经》外，还可以补充的证据是，
禹治水的故事见于西周金文，而尧舜禅让的故事却不见于西周金文。据此推断，
生于四方观念。四方加中央即为时空上的五元，并且此种五元观念得到了大邑商政治化的疆域观的强化。最先提出
五行说滥觞于四方和四方风说的学者是胡厚宣，多数学者如郭沫若、杨向奎、庞朴、萧良琼、常正光等同意此说。参见
胡厚宣：
《甲骨文四方风名考证》
《论殷代五方观念及“中国”称谓之起源》，见氏著：
《甲骨学商史论丛初集》第二册，济
“ 和而不同”的三大命题。第三个时期是五行说
收稿日期：2022-11-21
作者信息：丁四新，哲学博士，清华大学人文学院哲学系教授，博士生导师，从事中国哲学、儒家经学和简帛思想的
研究。
基金项目：国家社科基金重大项目“出土简帛四古本《老子》综合研究”
（15ZDB006）。
①
五元思维先于五行思维，水、火、木、金、土的五行大概是在五元思维的作用下产生出来的。而五元思维又诞
足人们生产和生活实践的需要，且其产生受到了五元思维的直接影响和作用。换言之，五行观念的
产生晚于五元思维。而五元思维又很可能是在五方（四方＋中央）观念及其政治化的作用下形成
的。①第二个时期是西周末期至春秋晚期，是“五行和生”观念产生并发生影响的时期。在这一时期，
史伯、晏婴和孔子分别提出了“和实生物”
“ 和与同异”
一、禹平水土与彝伦攸叙
达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗老年糖尿病合并射血分数保留心衰的效果
第60卷 第1期2024年02月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .60,N o .1F e b r u a r y2024[收稿日期]2023-01-23; [修订日期]2023-07-17[基金项目]国家自然科学基金资助项目(82000417)[第一作者]洪叶枫(1995-),男,硕士研究生㊂[通信作者]张文忠(1980-),男,博士,教授,硕士生导师㊂E -m a i l :x x m c z w z @q d u .e d u .c n㊂达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗老年糖尿病合并射血分数保留心衰的效果洪叶枫,阮士苗,郭梦琪,刘松,张文忠(青岛大学附属医院心内科,山东青岛 266003)[摘要] 目的 探讨达格列净联合沙库巴曲缬沙坦对老年糖尿病合并射血分数保留心衰(H F pE F )病人的临床疗效㊂方法 收集老年H F p E F 合并糖尿病病人180例,分别应用达格列净+沙库巴曲缬沙坦治疗(C 组)㊁沙库巴曲缬沙坦治疗(B 组)㊁常规心衰治疗(对照组,A 组),各60例,治疗时间6个月㊂检测并比较各组治疗前后心功能指标左室舒张末径(L V E D D )㊁左房内径(L A D )㊁左心室射血分数(L V E F )㊁左心室舒张早期二尖瓣血流最大速度/舒张早期二尖瓣环峰值速度(E /e )㊁血压㊁N 端前体脑利钠肽(N T -P r o B N P )及治疗效果㊂结果 治疗前各组基线资料差异无显著性(P >0.05)㊂治疗后各组血压㊁N T -pr o B N P ㊁L V E D D ㊁L A D ㊁E /e 均较治疗前明显降低(t =5.82~26.31,P <0.05);C 组治疗后血压㊁N T -p r o B N P 下降较A 组㊁B 组更明显(F =11.53㊁33.14,H =42.48,P <0.01),L V E D D ㊁L A D ㊁E /e 下降较A 组更明显(F =10.53~14.07,P <0.01),C 组L V E D D ㊁L A D ㊁E /e 下降与B 组比较差异无显著性(P >0.05)㊂C 组治疗后总体有效率较其他两组明显升高(χ2=22.047,P <0.05)㊂随访6个月,心血管原因再入院病人C 组5例(8.3%),B 组8例(13.3%),A 组18例(30.0%),B 组㊁C 组再入院率较A 组明显降低(χ2=11.446㊁6.730,P <0.05),但B 组与C 组差异无显著性(P >0.05)㊂各组均无明显药物不良反应㊂结论达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗老年糖尿病并H F p E F 病人短期内即可起到降压㊁降低N T -p r o B N P 水平的作用,二者在改善病人心功能方面发挥协同作用,且安全性高㊂[关键词] 心力衰竭,舒张性;糖尿病,2型;达格列净;沙库巴曲缬沙坦;治疗结果[中图分类号] R 541.6 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2024)01-0052-05d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2024.60.010[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /37.1517.R.20240311.1555.003;2024-03-12 15:29:39E f f i c a c y o f d a p a g l i f l o z i n c o m b i n e dw i t h s a c u b i t r i l /v a l s a r t a n i n e l d e r l y pa t i e n t s w i t h d i ab e t e sm e l l i t u s a n d h e a r t f a i l u r ew i t h p r e s e r v e d e -je c t i o nf r a c t i o n H O N GY e f e ng ,R U A NShi m i a o ,G U O M e n g q i ,L I US o n g ,Z HA N G W e n z h o n g (D e p a r t m e n t o f C a r d i o l o g y ,A f f i l i a t e dH o s p i t a l o fQ i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266003,C h i n a )[A b s t r a c t ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ec l i n i c a l ef f i c a c y o fd a p ag l i f l o z i nc o m b i n e dw i t hs a c u b i t r i l /v a l s a r t a n i ne l d e r l yp a -t i e n t sw i t hd i a b e t e sm e l l i t u s a n dh e a r t f ai l u r ew i t h p r e s e r v e d ej e c t i o n f r a c t i o n (H F p E F ). M e t h o d s E l d e r l y p a t i e n t sw i t hH F pE F a n dd i a b e t e sm e l l i t u s (n =180)w e r e t r e a t e d f o r 6m o n t h sw i t hd a p a g l i f l o z i n +s a c u b i t r i l /v a l s a r t a n (g r o u p C ,n =60),s a c u b i t r i l /v a l s a r t a n (g r o u p B ,n =60),a n d c o n v e n t i o n a l h e a r t f a i l u r e t h e r a p y (g r o u p A ,n =60).T h e e f f i c a c y w a s c o m pa r e db a s e do n t h ec a rd i a c f u n c t i o n i n d i c a t o r s s u c ha s lef t v e n t r i c u l a r e n d -d i a s t o l i c d i m e n s i o n (L V E D D ),l e f t a t r i a l d i a m e t e r (L A D ),l e f t v e n t r i c u l a r e j e c t i o n f r a c t i o n (L V E F ),r a t i o o f t h e e a r l y d i a s t o l i c v e l o c i t y o fm i t r a l i n f l o wt o t h e e a r l y d i a s t o l i c v e l o c i t y o fm i t r a l a n n u l a rm o t i o n (E /e ),b l o o d p r e s s u r e ,a n dN -t e r m i n a l p r o h o r m o n e o f b r a i nn a t r i u r e t i c p e pt i d e (N T -P r o B N P )b e f o r e a n d a f t e r t r e a t m e n t . R e -s u l t s T h e r ew e r e n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e g r o u p s a t b a s e l i n e b e f o r e t r e a t m e n t (P >0.05).B l o o d p r e s s u r e ,N T -p r o -B N P ,L V E D D ,L A D ,a n dE /e w e r e s i g n i f i c a n t l y l o w e r a f t e r t r e a t m e n t (t =5.82-26.31,P <0.05).B l o o d p r e s s u r e a n dN T -p r o -B N Pd e c r e a s e dm o r e s i g n i f i c a n t l y i n g r o u p C t h a n i n t h e o t h e r t w o g r o u ps (F =11.53,33.14;H =42.48,P <0.01).L V E D D ,L A D ,a n dE /e d e c r e a s e dm o r e s i g n i f i c a n t l y i n g r o u p C t h a n i n g r o u p A (F =10.53-14.07,P <0.01).T h e d e c r e a s e s i nL V E D D ,L A D ,a n dE /e w e r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n tb e t w e e n g r o u p sCa n dB (P >0.05),T h eo v e r a l l e f f i c i e n c y w a ss i g n i f i c a n t l y h i g h e r i n g r o u p Cc o m p a r e d t o t h e o t h e r t w o g r o u p s (χ2=22.047,P <0.05).R e a d m i s s i o n f o r c a r d i o v a s c u l a r r e a s o n s a t 6m o n t h s o f f o l l o w -u p o c c u r r e d i n5p a t i e n t s (8.3%)i n g r o u p C ,8p a t i e n t s (13.3%)i n g r o u p B ,a n d 18p a t i e n t s (30.0%)i n g r o u p A ,w i t h a s i g n i f i -c a n t l y l o w e r r a t e o f c a r d i o v a s c u l a r r e a d m i s s i o n i n g r o u p sBa n dCc o m p a r e d t o g r o u p A (χ2=11.446,6.730;P <0.05).T h e r ew a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eb e t w e e n g r o u p sBa n dC (P >0.05).T h e r ew e r en o s i g n i f i c a n t a d v e r s e r e a c t i o n s i n g r o u ps . C o n c l u s i o n D a p a g l i f l o z i nc o m b i n e d w i t hs a c u b i t r i l /v a l s a r t a nc a nr a p i d l y lo w e r b l o o d p r e s s u r ea n d N T -p r o B N Pl e v e l si nt h et r e a t m e n to fe l d e r l yp a t i e n t sw i t hd i a b e t e s m e l l i t u sa n d H F p E F ,a n d p l a y as y n e r gi s t i c r o l e i n i m p r o v i n gp a t i e n t s c a r d i a c f u n c t i o nw i t hah i g hs a f e t ypr o -f i l e .1期洪叶枫,等.达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗老年糖尿病合并射血分数保留心衰的效果53 [K e y w o r d s]h e a r t f a i l u r e,d i a s t o l i c;d i a b e t e sm e l l i t u s,t y p e2;d a p a g l i f l o z i n;s a c u b i t r i l/v a l s a r t a n;t r e a t m e n t o u t c o m e心力衰竭(H F)病人超过一半为射血分数保留心衰(H F p E F),且其比例继续增加[1]㊂H F p E F病人具有H F的临床症状和体征,但左心室射血分数(L V E F)正常或接近正常,其诊断困难,发病机制高度异质[2]㊂与H F p E F相关的疾病患病率和住院率正在增加,尚无有效治疗方法[3]㊂H F p E F病人中合并糖尿病的比例高且与H F p E F的发病率和死亡率增加有关[4]㊂沙库巴曲缬沙坦属于血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂(A R N I)类药物,主要作用为抗血管重塑和心肌重构[5]㊂达格列净属于钠葡萄糖协同转运蛋白2型抑制剂(S G L T2i)类药物,能够减少葡萄糖的重新吸收,降低血糖,有助于减轻体质量和血压[6]㊂最新的H F治疗专家共识中指出,S G L T2i 和A R N I均为基础的 新四联 规范化H F治疗药物,在H F p E F病人中也被推荐使用[7-8]㊂本研究回顾性分析老年H F p E F合并糖尿病病人应用达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗的临床效果,现将结果报告如下㊂1资料与方法1.1研究对象收集2021年1 12月我院收治老年H F p E F 合并糖尿病病人180例,男83例,女97例;年龄65~83岁,平均(72.63ʃ4.36)岁㊂病人纳入标准:①年龄ȡ65岁;②符合‘2018年中国心力衰竭与治疗指南“H F p E F诊断标准[9];③2型糖尿病诊断采用‘中国2型糖尿病防治指南(2020年版)“标准[10],病人病程超过3个月且规律服用降糖药物㊂排除标准:①严重心脏瓣膜病㊁扩张型心肌病㊁肥厚型心肌病病人;②合并肝肾功能衰竭病人;③1型糖尿病及酮症酸中毒病人;④低血压症状或收缩压<12k P a 病人;⑤急性感染性疾病㊁系统性红斑狼疮或类风湿性关节炎㊁动脉炎等疾病病人;⑥严重凝血功能障碍者;⑦严重精神障碍者;⑧对诺欣妥或达格列净过敏的病人;⑨过量饮用乙醇或吸毒病人㊂其中应用达格列净+沙库巴曲缬沙坦治疗(C组)60例,沙库巴曲缬沙坦治疗(B组)60例,常规治疗60例(对照组,A组)㊂3组性别㊁年龄㊁合并疾病㊁血压等指标比较差异无显著性(P>0.05)㊂见表1㊂病人临床资料来源于青岛大学附属医院门诊及住院电子病历系统,病人部分资料通过电话㊁微信随访及门诊复查等方式得到㊂本文研究已获得青岛大学附属医院伦理委员会批准㊂1.2治疗方法本文3组均给予基础治疗,包括改善生活方式㊁积极治疗原发病㊁抗H F及心室重构治疗(琥珀酸美托洛尔㊁厄贝沙坦㊁螺内酯等)㊁降糖治疗(以阿卡波糖㊁二甲双胍为主,血糖控制不佳者加用胰岛素)㊂在此基础上,C组口服沙库巴曲缬沙坦(北京诺华制药有限公司)200m g每天2次+达格列净(阿斯利康制药有限公司)10m g每天1次;B组口服沙库巴曲缬沙坦200m g每天2次;A组仅给予基础H F治疗㊂各组治疗中不再使用厄贝沙坦等血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂类药物㊂治疗时间6个月㊂1.3检测指标1.3.1血清及心功能指标检测采集病人静脉血,检测血清中N端前体脑利钠肽(N T-P r o B N P)㊁糖化血红蛋白(H b A1c)及血肌酐(S c r)的浓度㊂应用心脏彩超检测病人左室舒张末径(L V E D D)㊁左房内径(L A D)㊁L V E F㊁左心室舒张早期二尖瓣血流最大速度/舒张早期二尖瓣环峰值速度(E/e )㊂血压测量采用鱼跃电子血压计,晨测病人坐位血压2次,取平均值㊂1.3.2疗效观察治疗结束后,根据美国纽约心脏病学会(N Y H A)心功能分级进行疗效判定㊂显效:心功能改善大于2级,胸闷㊁气短等症状基本消失,日常生活能够自理;有效:心功能改善大于1级,胸闷㊁气短等症状明显改善,可在他人协助下完成大多数日常活动;无效:治疗后病人各项症状与体征均无明显改善甚至恶化㊂总有效率=(显效+有效)/总例数ˑ100%㊂1.3.3药物不良反应及心血管再入院率治疗期间观察病人有无肌肉酸痛㊁心肌酶谱异常㊁肝功能转氨酶ȡ正常值3倍等药物不良反应以及病人因为H F原因再入院及死亡情况㊂1.4统计学处理采用I B MS P S S25.0软件进行统计学分析㊂正态分布的定量资料以 xʃs表示,组内治疗前后比较采用配对t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两两比较使用L S D法㊂非正态分布的定量资料以M(Q1,Q3)形式表示,组内治疗前后比较采用配对样本W i l c o x o n秩和检验;多组间数据比较采用K r u s k a l-W a l l i s检验㊂计数资料以百分率表示,数54青 岛 大 学 学 报 (医 学 版)60卷据间的比较采用χ2检验㊂生存分析采用K a pl a n -M e i e r 法,两两比较采用L o g -r a n k 检验㊂P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 各组治疗前后血压水平比较治疗前各组收缩压(S B P )㊁舒张压(D B P )差异无显著性(P >0.05)㊂与治疗前比较,治疗后3组S B P ㊁D B P 均明显下降,差异具有统计学意义(t =15.56~26.31,P <0.01)㊂治疗后各组间S B P ㊁D B P 及治疗前后其差值比较,差异有统计学意义(F =11.53~33.14,P <0.01),C 组S B P ㊁D B P 及治疗前后差值与其他两组比较差异有显著性(P <0.01)㊂见表2㊂2.2 各组治疗前后N T -pr o B N P 水平比较各组治疗前N T -p r o B N P 差异无显著性(P >0.05)㊂与治疗前比较,治疗后3组N T -p r o B N P 均明显下降,差异有统计学意义(Z =-6.74~-6.33,P <0.01)㊂治疗后各组间N T -p r o B N P 及治疗前后其差值比较,差异有显著性(H =42.48㊁37.11,P <0.01),C 组的N T -pr o B N P 及治疗前后差值与其他两组比较差异有统计学意义(P <0.05)㊂见表3㊂表1 3组病人基线资料比较(n =60)组别年龄(岁, x ʃs )男(例(χ/%))女(例(χ/%))饮酒(例(χ/%))吸烟(例(χ/%))B M I(k g /m 2, x ʃs )L V E F(χ/%,M (Q 1,Q 3))A 组72.32ʃ4.3424(40.0)36(60.0)8(13.3)9(8.3)25.55ʃ3.1358(54,61)B 组72.55ʃ4.2226(43.3)34(56.7)6(10.0)9(8.3)25.73ʃ3.3558(55,60)C 组73.03ʃ4.5633(55.0)27(45.0)5(8.3)7(11.7)25.58ʃ2.9359(55,61)组别房颤(例(χ/%))S c r(c /μm o l ㊃L -1, x ʃs )H b A 1c(χ/%, x ʃs )应用降糖药(例(χ/%))阿卡波糖二甲双胍胰岛素A 组9(15.0)79.78ʃ16.497.23ʃ0.4241(68.3)26(43.3)3(5.0)B 组13(21.6)79.27ʃ17.367.27ʃ0.3446(76.7)25(41.7)6(10.0)C 组11(18.3)79.60ʃ15.917.28ʃ0.3642(70.0)22(36.7)4(6.7)表2 各组治疗前后S B P 和D B P 比较(n =60,p/k P a , x ʃs )组别S B P治疗前治疗后差值D B P治疗前治疗后差值A 组18.87ʃ2.0517.69ʃ1.58*1.16ʃ0.5811.56ʃ1.0310.69ʃ0.87*0.87ʃ0.39B 组18.62ʃ2.4516.93ʃ1.82*1.69ʃ0.6911.40ʃ0.9610.37ʃ0.74*1.02ʃ0.40C 组18.39ʃ2.2716.23ʃ1.58*2.16ʃ0.73#11.21ʃ0.979.90ʃ0.73*1.32ʃ0.39# 注:与治疗前比较,*t =15.56~26.31,P <0.05㊂治疗后各组S B P 和D B P 及其差值比较,F =11.53~33.14,P <0.01;#与其他两组比较,P <0.01㊂表3 各组治疗前后N T -p r o B N P 比较(n =60,ρ/n g ㊃L -1,M (Q 1,Q 3))组别治疗前治疗后差值A 组1650.6(1011.3,3231.0)1460.0(815.3,2727.8)*262.1(100.8,497.3)B 组1545.0(637.0,2467.0)833.5(413.8,1161.3)*742.0(201.8,1211.0)C 组1549.5(736.4,2965.5)469.0(333.0,968.3)*# 2061.5(1064.5,2061.5)# 注:与治疗前比较,*Z =-6.74~-6.33,P <0.01;与其他两组比较,#H =42.48㊁37.11,P <0.05㊂2.3 各组治疗前后心脏结构及功能指标比较治疗前各组L V E D D ㊁L A D ㊁E /e差异无显著性(P >0.05)㊂与治疗前比较,治疗后3组L V E D D ㊁L A D ㊁E /e 均明显下降,差异具有统计学意义(t =5.82~18.74,P <0.01)㊂治疗后3组的L V E D D ㊁L A D ㊁E /e 及治疗前后差值比较差异有统计学意义(F =10.53~14.07,H =33.65~57.61,P <0.01);两两比较显示,C 组与A 组差异有统计学意义(P <0.01)㊂见表4㊂2.4 各组治疗后临床总有效率比较本文3组治疗后总有效率比较,差异有统计学意义(χ2=22.047,P <0.01);两两比较结果显示,C组总有效率较A 组㊁B 组增高(χ2=20.833㊁5.926,P <0.05)㊂见表5㊂2.5 各组药物不良反应及心血管再入院率比较3组治疗过程中无明显药物不良反应,无低血压㊁低血糖症状㊂治疗6个月后各组心血管再入院率分别为:C 组5例(8.3%),B 组8例(13.3%),A1期洪叶枫,等.达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗老年糖尿病合并射血分数保留心衰的效果55组18例(30.0%)㊂C 组和B 组心血管再入院率较A 组明显降低(χ2=11.446㊁6.730,P <0.05),C 组与B 组差异无显著性(P >0.05)㊂各组不同时间累计心血管再入院率见图1㊂表4 各组治疗前后心脏结构及功能指标比较(n =60, x ʃs )组别L V E D D (d /mm )治疗前治疗后差值L A D (d /mm )治疗前治疗后差值E /e治疗前治疗后差值A 组48.30ʃ3.2647.22ʃ3.56*1(0,2)43.56ʃ3.5942.35ʃ3.06*1(1,2)16.25ʃ3.29 14.99ʃ3.04*1.20(0.63,1.90)B 组48.13ʃ3.6245.50ʃ3.26*3(1,3)42.88ʃ4.0340.45ʃ3.39*2(2,3)15.40ʃ3.08 12.87ʃ2.32*2.40(1.63,3.18)C 组47.55ʃ3.1344.63ʃ2.50*& 3(1,4)#42.25ʃ3.9039.75ʃ3.12*& 2(2,3)#15.86ʃ3.2712.75ʃ2.37*& 3.15(2.23,4.00)# 注:各指标差值数据为M (Q 1,Q 3)形式㊂与治疗前比较,*t =5.82~18.74,P <0.05;与A 组比较,&F =10.53~14.08,P <0.05;#H =33.65~57.61,P <0.05㊂表5 3组疗效比较(n =60,例(χ/%))组别显效有效无效总有效A 组16(26.67)22(36.67)22(36.67)38(63.33)B 组27(45.00)23(38.33)10(16.67)50(83.33)C 组38(63.33)20(33.33)2(3.33) 58(96.67)# 注:3组总有效率比较,χ2=22.047,P <0.01;与A 组㊁B 组比较,#χ2=20.833㊁5.926,P <0.05㊂图1 3组不同时间累计心血管再入院率3 讨 论糖尿病为危害老年人健康的主要原因之一,其合并H F 的风险较高,使得病人死亡率增加而且预后恶化[11]㊂伴有糖尿病的H F pE F 病人的特点是L V D D 障碍㊁左心室腔减小伴充盈压升高以及冠状微血管功能障碍[12]㊂糖尿病使病人心脏暴露在富含脂肪酸和细胞因子的高糖血症环境中[4],并且高糖血症会导致心肌功能障碍[13]㊂此外,糖尿病所引发的代谢变化㊁炎症反应㊁纤维化和心肌僵硬,均为H F pE F 的表型[14]㊂糖尿病所导致的代谢异常与高糖血症㊁促炎反应和脂肪毒性也在H F pE F 的发展中发挥重要作用[15]㊂本文研究结果显示,经过6个月的治疗,达格列净+沙库巴曲缬沙坦组治疗总体有效率高于其他两组,病人的临床症状减轻㊂达格列净可以起到良好的抗炎效果,与沙库巴曲缬沙坦协同进一步拮抗交感系统与肾素-血管紧张素系统,减轻病人的症状,病人的生活质量随之提高㊂高血压为最重要和最常见的H F pE F 病因,控制血压可改善病人的预后[8]㊂沙库巴曲缬沙坦可以减少血管收缩和醛固酮的产生,起到降压的作用[5]㊂既往研究显示,钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂同样也可以起到降血压的作用[16]㊂本文研究结果显示,达格列净+沙库巴曲缬沙坦组病人治疗后S B P 和D B P 较治疗前明显下降,且其下降程度较其他两组更加显著,表明达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗可以更加有效地控制病人的血压,起到保护心血管作用[17]㊂N T -p r o B N P 是目前应用最为广泛的H F 标记物[18],其升高提示病人H F 负荷较重㊁预后不佳[19]㊂有研究使用沙库巴曲缬沙坦治疗H F p E F 病人,治疗12周时病人N T -pr o B N P 的降幅比使用缬沙坦治疗的H F pE F 病人更大[20]㊂本文达格列净+沙库巴曲缬沙坦组病人治疗后N T -p r o B N P 较沙库巴曲缬沙坦组下降更明显,提示达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗具有协同作用㊂L V E D D ㊁L A D 为心脏超声检查中的常规指标,在一定程度上提示病人心脏的形态和重构情况;E /e值是评估心脏舒张功能的可靠指标,可较好地反映左心室的充盈压[9]㊂本文研究结果显示,治疗后达格列净+沙库巴曲缬沙坦组L V E D D ㊁L A D ㊁E /e 较对照组下降明显,但与沙库巴曲缬沙坦组比较下降值差异无统计学意义,提示达格列净治疗早期即可发挥降压功效,达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗对心脏重构和功能的影响还需进一步长期随访㊂达格列净治疗可以改善糖尿病病人的心血管和肾脏结局,包括因H F 而导致的住院[21]㊂本研究结果显示,达格列净+沙库巴曲缬沙坦治疗组和沙库巴曲缬沙坦治疗组病人的心血管再入院风险均较对照组降低,说明沙库巴曲缬沙坦的应用可以使病人的H F 状态趋于稳定㊂虽然达格列净+沙库巴曲缬沙坦组病人心血管再入院率较沙库巴曲缬沙坦组有56青岛大学学报(医学版)60卷所降低,但差异无统计学意义,这可能是由于本研究纳入人群数量较少和随访时间有限造成,还需进一步扩大纳入人群数量和延长随访时间㊂综上所述,达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗老年糖尿病合并H F p E F病人,短期内即可起到降压㊁降低N T-p r o B N P水平的作用,两种药物在改善病人心功能方面发挥协同作用,且安全性高㊂老年糖尿病合并H F p E F病人可选择应用达格列净联合沙库巴曲缬沙坦治疗提高生活质量,改善预后㊂由于本研究是回顾性研究,达格列净联合沙库巴曲缬沙坦在临床使用中纳入样本数量㊁随访时间有限,需大样本多中心㊁高质量㊁长期随机对照研究进一步证实二者联合应用在抗心肌重构方面的有效性㊂[参考文献][1]G R O E N E W E G E N A,R U T T E N F H,MO S T E R D A,e t a l.E p i d e m i o l o g y o fh e a r t f a i l u r e[J].E u r o p e a nJ o u r n a lo fH e a r tF a i l u r e,2020,22(8):1342-1356.[2]S E N N IM,P A U L U S W J,G A V A Z Z IA,e t a l.N e ws t r a t e-g i e s f o r h e a r t f a i l u r ew i t h p r e s e r v e de j e c t i o nf r a c t i o n:t h e i m-p o r t a n c e o f t a r g e t e d t h e r a p i e s f o r h e 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老年人视频头脉冲试验参考值范围的建立
第59卷 第3期2023年06月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .3J u n e 2023[收稿日期]2023-03-06; [修订日期]2023-05-09[基金项目]青岛市医药卫生科研计划项目(2021-W J Z D 230,2021-W J Z D 229)[第一作者]欧阳汤鹏(1990-),男,博士,主治医师㊂[通信作者]于辛(1971-),女,博士,副主任医师㊂E -m a i l :132********@163.c o m ㊂老年人视频头脉冲试验参考值范围的建立欧阳汤鹏,蔡金晓,于辛,王楠楠,王慧敏,林茜(中国人民解放军海军第971医院神经内科,山东青岛 266071)[摘要] 目的 通过分析老年人视频头脉冲试验(v H I T )的各种参数,建立老年人v H I T 的参考值范围㊂方法选取103例无前庭疾病老年人进行v H I T 检测,分析各半规管的前庭-眼动反射(V O R )增益值㊁共轭半规管V O R 增益不对称比及生理性扫视个数㊂结果 103例老年人左侧外㊁前㊁后半规管V O R 增益值参考值范围为0.72~1.20㊁0.53~1.00和0.57~0.97;右侧分别为0.75~1.25㊁0.53~1.04和0.60~0.96㊂双侧外半规管㊁左前右后及右前左后共轭半规管V O R 增益不对称比参考值上限分别为13.19%㊁15.55%和16.66%㊂103例受试者左侧的外㊁前㊁后半规管生理性扫视个数参考值上限分别为5.54㊁5.01和5.38;右侧则分别为5.94㊁4.98和5.17㊂结论 本研究建立了老年人v H I T 检测的参考值范围,为老年人前庭功能的准确评估提供了参考依据㊂[关键词] 前庭功能试验;甩头试验;半规管;参考值;老年人[中图分类号] R 770.4;R 339.34 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)03-0430-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.102[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /37.1517.R.20230807.1617.009;2023-08-08 12:36:52E S T A B L I S H M E N TO FR EF E R E N C EV A L U E SO FV I D E O H E A DI M P U L S ET E S TF O R E L D E R L YP E O P L E O U Y A NG T a n g-p e n g ,C A IJ i n x i a o ,Y U X i n ,WA N G N a n n a n ,WA N G H u i m i n ,L I N Q i a n (D e p a r t m e n t o fN e u r o l o g y ,N o .971H o s p i t a l o f P L A N a v y ,Q i n gd a o 266071,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e p a r a m e t e r s of t h e v i d e o h e a d i m p u l s e t e s t (v H I T )a m o ng e l d e r l y p e o p l e ,a n d t o e s t a b l i sh t h e r e f e r e n c e v a l u e s o f v H I Tf o r e l d e r l yp e o p l e . M e t h o d s W e e n r o l l e d 103e l d e r l yp e o pl ew i t h o u t v e s t i b u l a r d i s e a s e t o r e c e i v e v H I T.T h e v e s t i b u l o -o c u l a r r e f l e x (V O R )g a i nv a l u e o f e a c h s e m i c i r c u l a r c a n a l ,t h eV O R g a i n a s y mm e t r y r a t i o s o f c o n j u -g a t e s e m i c i r c u l a r c a n a l s ,a n dt h en u m b e ro f p h y s i o l o g i c a l s a c c a d e sw e r ea n a l y z e d . R e s u l t s F o r t h e103e l d e r l y s u b j e c t s ,t h e V O R g a i n r e f e r e n c e v a l u e s o f t h e l a t e r a l ,a n t e r i o r ,a n d p o s t e r i o r s e m i c i r c u l a r c a n a l sw e r e 0.72-1.20,0.53-1.00,a n d 0.57-0.97o n t h e l e f t s i d e ,r e s p e c t i v e l y ;a n d 0.75-1.25,0.53-1.04,a n d 0.60-0.96o n t h e r i g h t s i d e ,r e s p e c t i v e l y .T h e u p p e r r e f e r e n c e l i -m i t s o fV O R g a i na s y mm e t r y r a t i o s o f l e f t l a t e r a l -r i g h t l a t e r a l ,l e f t a n t e r i o r -r i g h t p o s t e r i o r ,a n d r i gh t a n t e r i o r -l e f t p o s t e r i o r s e m i -c i r c u l a r c a n a l sw e r e 13.19%,15.55%,a n d16.66%,r e s p e c t i v e l y .T h eu p p e r r e f e r e n c e l i m i t s o f p h y s i o l o g i c a l s a c c a d e s o f t h e l a t e -r a l ,a n t e r i o r ,a n d p o s t e r i o r s e m i c i r c u l a r c a n a l sw e r e 5.54,5.01,a n d 5.38o n t h e l e f t s i d e ,r e s p e c t i v e l y ;a n d 5.94,4.98,a n d5.17o n t h e r i g h t s i d e ,r e s p e c t i v e l y . C o n c l u s i o n T h i s s t u d y h a s e s t a b l i s h e d t h e r e f e r e n c e v a l u e s o f v H I T f o r e l d e r l y p e o p l e ,p r o v i d i n ga r e f e r e n c e f o r a c c u r a t e e v a l u a t i o no f v e s t ib u l a r f u nc t i o n i n t h e e lde r l y.[K E Y W O R D S ] v e s t i b u l a r f u n c t i o n t e s t s ;h e a d i m p u l s e t e s t ;s e m i c i r c u l a r c a n a l s ;r e f e r e n c e v a l u e s ;a ge d 头晕/眩晕是老年人群就诊排名第一位的主诉,其中前庭功能障碍是导致头晕/眩晕的主要原因之一[1-2]㊂因此,准确评估老年人群的前庭功能对于头晕/眩晕相关疾病的临床诊治具有重要意义㊂视频头脉冲试验(v H I T )检测技术能够定量评估人体6个半规管前庭-眼动反射(V O R )的高频功能,自从其在巴拉尼学会作为一项新的前庭功能检测提出后,已在临床中逐步推广和使用[3-4]㊂但每个研究中心的参考值范围尚未统一,目前多采用国外的参考值范围㊂研究表明,老年人群前庭功能随年龄增长呈下降趋势[5],因此现行v H I T 参考值范围给老年人群的结果判读造成困难,限制了v H I T 在老年人群前庭功能检测中的应用㊂本研究拟通过对无前庭相关疾病的老年人群的v H I T 结果分析,建立本研究中心的参考值范围,为老年人群头晕/眩晕疾病的诊治提供参考㊂1 资料与方法1.1 研究对象2022年1 12月,选择中国人民解放军海军第971医院神经内科诊治㊁符合纳入标准的103例老年人为研究对象,其中男46例(44.7%),女57例(55.3%),年龄61~93岁,平均(68.92ʃ7.44)岁㊂纳Copyright ©博看网. All Rights Reserved.3期欧阳汤鹏,等.老年人视频头脉冲试验参考值范围的建立431入标准:①年龄>60岁;②主诉无眩晕㊁头晕㊁前庭-觉症状及前庭-姿势症状;③无中耳炎与内耳病史,无神经㊁骨骼肌肉系统病史;④检测前48h内未服用中枢兴奋或抑制性药物㊂1.2研究方法应用丹麦O t o m e t r i c s公司生产的视频头脉冲试验仪(I C SI m p u l s e)进行v H I T检查㊂检测时受试者取端坐位,双眼距正前方的视靶1.5m,调节座椅使双眼与视靶处于同一高度,佩戴整合视频眼震摄像头和内置头动传感器的头戴式眼罩㊂检查者站立于受试者后方,收紧头带后按照软件提示进行瞳孔定位以及校准㊂检测者逐步测试双侧外半规管㊁左前半规管/右后半规管及右前半规管/左后半规管,在受试者无预判的情况下甩动头部,甩头过程中受试者双眼必须始终盯住正前方的视靶㊂每个方向采集20次头脉冲甩头结果,甩头幅度控制在15ʎ~ 20ʎ,头动峰速度则控制在100~250(ʎ)/s㊂使用检测仪器附带的软件计算以下参数:①6个半规管的V O R增益值,V O R增益值=眼动速度/头动速度;②共轭半规管V O R增益值的不对称比,V O R增益不对称比=(1-低增益/高增益)ˑ100%㊂1.3统计学分析采用S P S S18.0软件进行统计学分析㊂计量资料以 xʃs表示㊂在计算参考值范围时,首先进行正态性检验,对服从正态分布的数据,采用正态分布法计算参考值范围㊂半规管V O R增益值参考值范围按( x-1.96s)~( x+1.96s)计算;共轭半规管V O R增益不对称比及半规管生理性扫视个数的参考值上限按 x+1.64s计算㊂两组间均数的比较采用两独立样本的t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1双侧6个半规管V O R增益值比较数据符合正态分布㊂103例受试者左侧外㊁前㊁后半规管V O R增益值分别为0.96ʃ0.12㊁0.76ʃ0.12和0.77ʃ0.10;右侧分别为1.00ʃ0.13㊁0.78ʃ0.09和0.79ʃ0.13㊂左侧外㊁前㊁后半规管V O R增益值参考值范围分别为0.72~1.20㊁0.53~1.00和0.57~0.97;右侧分别为0.75~1.25㊁0.53~1.04和0.60~0.96㊂其中,左侧外半规管与左侧前半规管㊁右侧后半规管㊁左侧后半规管㊁右侧前半规管的V O R增益值相比较,右侧外半规管与左侧前半规管㊁右侧后半规管㊁左侧后半规管㊁右侧前半规管的V O R增益值相比较,差异均具有统计学意义(t= 8.124~11.700,P<0.05)㊂见表1㊂2.2共轭半规管V O R增益不对称比的比较数据符合正态分布㊂103例受试者双侧外半规管㊁左前右后半规管㊁右前左后半规管V O R增益不对称比分别为(6.20ʃ4.26)%㊁(8.15ʃ4.51)%和(8.44ʃ5.01)%,其参考值上限分别为13.19%㊁15.55%和16.66%㊂其中双侧外半规管与左前右后半规管㊁右前左后半规管V O R增益不对称比相比较,差异具有显著性(t=2.717㊁2.948,P<0.05);而左前右后半规管㊁右前左后半规管V O R增益不对称比相比较,差异无显著性(P>0.05)㊂见表2㊂2.3双侧6个半规管生理性扫视个数比较数据符合正态分布㊂103例受试者左侧外㊁前㊁后半规管的生理性扫视个数分别为2.77ʃ1.69㊁2.55ʃ1.50和2.82ʃ1.56,右侧分别为3.04ʃ1.77㊁2.53ʃ1.61和2.86ʃ1.29;左侧外㊁前㊁后半规管生理性扫视个数参考值上限分别为5.54㊁5.01和5.38,右侧分别为5.94㊁4.98和5.17㊂各半规管之间生理性扫视个数比较,差异均无统计学意义(t=0.029~ 1.839,P>0.05)㊂见表3㊂表16个半规管V O R增益值及参考值(n=103, xʃs)位置V O R增益值参考值下限参考值上限左侧外0.96ʃ0.120.721.20右侧外1.00ʃ0.130.751.25左侧前 0.76ʃ0.12*#0.531.00右侧后 0.79ʃ0.13*#0.531.04左侧后 0.77ʃ0.10*#0.570.97右侧前 0.78ʃ0.09*#0.600.96与左侧外半规管比较,*t=8.124~10.550,P<0.05;与右侧外半规管比较,#t=9.333~11.700,P<0.05㊂表2共轭半规管V O R增益值不对称比及参考值(n= 103,χ/%, xʃs)共轭半规管不对称比参考值上限双侧外半规管6.20ʃ4.2613.19左前右后半规管8.15ʃ4.51*15.55右前左后半规管8.44ʃ5.01*16.66与双侧外半规管比较,*t=2.717㊁2.948,P<0.05㊂3讨论v H I T是在床旁头脉冲试验(H I T)基础上发展而来,主要用于评估受试者V O R功能㊂相比H I T, v H I T不仅可以分别评估6个半规管的功能是否完Copyright©博看网. All Rights Reserved.432青岛大学学报(医学版)59卷表36个半规管生理性扫视个数及参考值(n=103, xʃs)位置扫视个数参考值上限左侧外2.77ʃ1.695.54右侧外3.04ʃ1.775.94左侧前2.55ʃ1.505.01右侧后2.86ʃ1.294.98左侧后2.82ʃ1.565.38右侧前2.53ʃ1.615.17各半规管之间比较,t=0.029~1.839,P>0.05㊂整,而且还能够对半规管的受损程度进行定量评估[6-7]㊂更重要的是,v H I T可以敏感地捕捉到肉眼无法观察到的隐性扫视,这对于鉴别中枢和外周前庭疾病至关重要[8-10]㊂相对其他常用的前庭功能检测手段,v H I T所检测的半规管高频功能更接近人类日常活动频率,还能够评估以往难以检测的垂直半规管功能,同时具有重复性好㊁操作简便和敏感性高的特点,使其在临床中逐渐广泛应用[11-13]㊂由于老年人前庭功能随年龄增长而逐渐退化,而现在各实验室参考值范围均由18~60岁健康成年人经检测得出,不利于准确判读老年人群v H I T结果㊂本研究收集了103名无相关前庭疾病老年人检测结果,建立了本实验室老年人v H I T参考值范围㊂V O R增益值是v H I T检测的重要的指标,反映V O R慢相中眼动与头动的比值关系㊂理想状态下正常人在头部甩动过程中能够保持双眼始终注视视靶,眼动速度与头动速度一致,增益值为1.0[14-15]㊂在实际检测过程中v H I T会受到多种因素的影响,包括校准的精确度㊁眼罩固定的松紧程度㊁操作者的熟练程度及受试者的配合程度等,导致眼动速度与头动速度并非完全相等[16-17]㊂使得单次甩头测试所得半规管的V O R增益值之间会存在一定微小的差异㊂为了减少此种系统误差,操作软件通过计算20次测试的V O R增益平均值从而得出最终检测结果,使得检测结果尽可能地接近受试者半规管V O R 真实情况㊂本实验所使用检测仪器的参考值范围:外半规管V O R增益值为1.0ʃ0.2,垂直半规管的V O R增益值均为1.0ʃ0.3㊂本研究结果显示,103名老年人半规管V O R增益值均在仪器自带参考值范围之外㊂本实验室所使用检测仪器V O R参考值范围由18~60岁人群得出,提示现行的参考值范围不适用于准确评估老年人半规管功能㊂与其他以18~60岁人群为对象的研究相比,本研究外半规管V O R增益与其一致,垂直半规管的V O R增益明显下降[18-19]㊂导致此种结果的原因可能有如下因素㊂①年龄因素:目前虽然缺乏60岁以上人群v H I T检测研究,但是林颖等[20]对80例18~60岁正常人进行v H I T检测并通过年龄分组发现,V O R增益随年龄增长呈下降趋势;②前庭习服:研究表明,前庭习服可以提高V O R功能,徐先荣等[21]对176名歼击机飞行员进行v H I T检测显示,其V O R增益值相比普通人群离散趋势更小,可能与飞行员长期进行前庭功能锻炼有关㊂对于老年人群,在日常活动中水平方向转动头部频率要明显多于垂直方向转头㊂因此,有可能通过这种无意识 前庭习服 使得外半规管的V O R增益下降不明显,而垂直半规管V O R 增益下降更明显㊂除V O R增益值外,不对称比也是一项重要的参考指标㊂该指标主要反映共轭半规管V O R增益值对称情况,一侧半规管功能受损时,不对称性比值增大[22]㊂本研究结果显示,103例老年人共轭半规管不对称比值均在仪器自带参考值范围之内,但外半规管V O R增益值不对称比参考值范围较垂直半规管更小,共轭垂直半规管间差异无统计学意义㊂该结果表明,老年人群外半规管V O R增益较垂直共轭半规管平面的稳定性更好,另一方面提示随年龄增长,垂直半规管V O R增益值虽然下降,但相应共轭半规管呈对称性下降,故不影响不对称比值㊂与其他18~60岁人群v H I T检测结果相比[23],本研究v H I T不对称比与之基本一致㊂因此,本研究认为老年因素对v H I T的V O R增益不对称比无明显影响㊂v H I T检测指标除了增益值及不对称比之外,还包括扫视㊂扫视分为病理性扫视和生理性扫视㊂病理性扫视包括显性扫视和隐性扫视,是由眼球在头部运动过程中不能凝视视靶而在头动终末期产生的一个与甩头方向相反的补偿眼球运动,阳性表明V O R通路异常㊂本研究中103例老年人均未见病理性扫视,提示老年人群虽然前庭功能下降,但正常老年人v H I T检测不应出现病理性扫视㊂生理性扫视指在头动结束后出现的与眼动方向相反的小幅度㊁低速的扫视[24-25],但是目前前庭医学界对于生理性扫视的个数尚未达成一致㊂有学者报道,健康人群生理性扫视的个数应为0~4个[26],本研究103例老年人生理性扫视结果与之基本一致㊂综上所述,本研究证实了随年龄增长,老年人群垂直半规管v H I T的V O R增益值明显下降㊂v H I T 作为一种方便㊁快捷㊁无创和病人易耐受的前庭功能Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期欧阳汤鹏,等.老年人视频头脉冲试验参考值范围的建立433检测技术,是一种可靠的评估半规管V O R高频功能的手段㊂建立老年人群v H I T检测参考值范围,有助于精准评判老年人群前庭功能,对老年人群头晕/眩晕相关疾病的临床诊治具有重要的参考意义㊂[参考文献][1]S T AM H,V A N V U G T V A,TW I S K J W R,e ta l.T h ep r e v a l e n c e a n d p e r s i s t e n c e o f d i z z i n e s s i no l d e rE u r o p e a nh o m ec a r e r e c i p i e n t s:a p r o s p e c t i v ec o h o r t s t ud y[J].J o u r n a l o f t h eA m e r i c a n M e d i c a lD i r e c t o r s A s s o c i a t i o n,2020,21(3):338-343.e1.[2]C A S A N IA P,G U F O N I M,C A P O B I A N C O S.C u r r e n t i n-s i g h t s i n t ot r e a t i n g V e r t i g o i n o l d e ra d u l t s[J].D r u g s&A g i n g,2021,38(8):655-670.[3]HA B E K M.V i d e oh e a d i m p u l s e t e s t:a p o w e r f u l y e ts i m p l et e s t f o r r e s e a r c ho f v e s t i b u l a r f u n c t i o n[J].C l i n i c a lN e u r o p h y-s i o l o g y:O f f i c i a lJ o u r n a lo ft h eI n t e r n a t i o n a l F e d e r a t i o n o fC l i n i c a lN e u r 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新自由主义从学说变到政策：国际金融危机的深刻根源
新自由主义从学说变到政策：国际金融危机的深刻根源
田春生
【期刊名称】《中共杭州市委党校学报》
【年(卷),期】2011(000)006
【摘要】就目前的研究来看，人们关于国际金融危机原因的讨论，更多地是来自
于对“金融危机”本身的认知，更多的结论是从金融全球化和国际金融体系弊端之视角所做的分析。
新自由主义从一种学说演变为世界主要国家的经济政策，其思想基础是新自由主义思潮的泛滥，新自由主义从一种经济学思想演变为“华盛顿共识”政策并传散到各国，是国际金融危机及其延伸到当前全球经济“二次探底”的风险的根源。
由此，通过对新自由主义思潮（思想）和“华盛顿共识”政策对中国的影响进行论析，并且认为，因这次经济危机将可能导致经济学思想的变革。
【总页数】7页(P8-14)
【作者】田春生
【作者单位】中国青年政治学院,100089
【正文语种】中文
【中图分类】F019.6
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关于儒家人生维度的哲学思考
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（第1101-20期） 序号 题 目 作 者04 春天最美丽 陈映妤 05 怎样过生日 吴佳钰 08 折 星 星 叶可人 10 明媚的春天 周奕衡 13 游玩塔石乡 赵一歌01 我的斜桌（ ）叶可人大家都有同桌，可你们不知道有斜桌吧，其实斜桌就是你后面旁边的人。
我的斜桌是周杰伦。
听到名字，你肯定会很激动：“周杰伦！周杰伦！他在哪？我要找他签名！”不过，我的回答可能会让你很沮丧。
因为他们只是碰巧同名同姓。
平常的时候，它的脸黝黑，我估计他可能是包青天第76代。
生气的时候，他的脸大红，头上冒起层层火焰，眼里喷出个个火星。
他握紧拳头，好像随时准备揍你一顿。
我怀疑他早上吃的不是鸡蛋，而是炸弹。
这时，你要小心了，唯一的办法就是——快跑！玩游戏的时候，周杰伦是最幽默的，时时让我们笑破肚子。
看！他一会儿做鬼脸，一会儿做让人捧腹大笑的动作，活脱脱的是个小丑。
他可是我们班的开心果，如果没有他，不知道班上会有多少冷清。
他对女生可好了，比其他男生好多少倍都不知道。
其他男生只知道来打我们，而周杰伦恰恰相反。
有一次，杨泰予来打我，周杰伦连忙打过去，边打边说：“欺负女生，要不要脸啊，有胆和我来斗啊！”杨泰予被吓得仓皇而逃。
有了“保镖”周杰伦，我再也不怕被杨泰予欺负了,Yes!他还很助人为乐：看见教室桌子歪了，他会主动上前去移；杨智浩打架了，他会冒着“生命危险”去劝架••••••周杰伦，你只要改掉脾气不好的坏习惯，你就会很棒。
加油！02 比美大赛（ ）徐宇轩春天来了，公园里的植物先生和植物小姐来了一场重大的比美大赛。
第一个参赛者是美丽的花之王后——玫瑰王后，她一直保持灿烂的微笑，发出浓浓的香味，好像一下子就能把对手迷幻在甜美的梦中。
第二个选手是花之国的国王——牡丹花，他的颜色明丽，姿态非常优雅，和玫瑰王后可以相提并论。
第三个参赛者是有着长发的长发公主——柳树姑娘，她有着天然的绿色长发，她热爱跳舞，跳得非常迷人。
一阵风拂过，她就能在微风中舞蹈，还跳得更好呢！身上还有特殊的清香。
第四个参赛者是人人都爱看他表演运动项目的体育冠军——铁树先生，他肌肉发达，身体强壮。
他还吸引了众多植物小姐，她们都想和他做朋友。
最后一个参赛者就是可爱王者——桃花小姐，她有着粉红色的衣服，苗条的身材，脸（从上往下看的桃花）可爱又美丽，让人一看就非常喜欢她。
说到这里，我问你一个问题，你知道他（她）们的排名吗？有些人应该猜到了吧！今年的比美大赛真是有史以来最棒的呀！03 人 生（ ）夏益涵“人生是什么？”，很多人会不经问起。
我认为人生就是生到死，这就是人生！那有些人又问：“人生应该怎么过呢？”我再告诉你：“人生就是应该活得快乐，在这个世界上不要留下任何遗憾。
”人生就像时间一样会不知不觉的一点一点流失。
所以必须懂得珍惜人生和时间的宝贵，人生和时间没有第二次只有一次，不珍惜人生，就等于慢性自杀，所以人生和时间是非常宝贵的一定要珍惜。
自从上个星期起，我家的所有电视被拿掉了连接器，就连电脑也设置了密码。
其实我知道父母为什么要这么做，他们想让我的人生有一个好的前程，让我去做一些有意义的事，比如：打篮球、打羽毛球、学乐器……古代的时候为什么会有那么多杰出的科学家、数学家、书法家，因为他们善于开动脑筋，用他们自己的聪明才智为人类造福，他们是我们的好榜样。
星期六下午我闲来无事，就去找朋友们去打了一场篮球。
经过一个小时的开心篮球，我可以用一瓶牛奶名称来形容，叫做“爽歪歪”。
人生是一辈子的大事，不能把他当作儿戏，而是应该认真对待。
04 写作文的烦恼（ ）应昇睿不知道同学们有没有和我一样的烦恼――怕写作文！有一次，我星期六把大部分作业都完成了，就剩下一篇作文，我一直拖啊拖，左思右想、绞尽22-1脑汁也没有写出来，一直到星期天晚上9点还没有完成，我一开始写就想睡觉了。
我一直写啊写，写了很多错别字，我又写了一大段，可是工写30行才行，我才写了12行，过了两个小时我才写好，我给妈妈检查，妈妈说：“这样是流水涨，没有什么意象深刻的地方。
”我的作文又缺少出彩的部分，让人没有兴趣看下去。
我想这个学期里，我要多看课外书，学成语应用，多写多读，学习好的写作手法，把自己的真情实感写出来，让大家看了都点赞，让我们一起加油吧！05 眼镜盒（）杨茗我有一个眼镜盒，它是去年10月份左右和我在一起的，眼镜和眼镜盒是叔叔一起交给我的。
因为配眼镜的地方是眼科医院那的，所以在盒上弄了一个火柴人，这就是它们医院的标识，还有“金华眼科医院”这四个大字，显得十分有力。
因为它是凹下去。
当然，在这大字下面有和这几个大字的英文比较小，也是凹上去的，而且没有用过任何什么颜料的。
盒子的形状和汉堡差不多，不过更像个“大嘴巴”。
旁边夹得紧紧的，中间却露出细细的缝，可以清清楚楚地看到里面。
这“大嘴巴”似乎在流口水，好像想吃东西，脑中就有个幻想，它把嘴张得大大的，看上去十分恐怖。
嘴上边是个半圆形，还要扁一点，下面和上面差不多，只是可以站得稳稳的。
“大嘴”下面是黑色的，下面像蛇纹，就像老奶奶头上的“花纹”。
上面是奶白色的，还有用比较深的奶白色来装饰。
那深奶白色的形状就像树叶，斜起来的。
就像一只只蝴蝶在空中跳着欢乐的舞蹈。
把它们合起来看，嗯，好像很好吃的样子。
眼镜盒，没有你的话我要把眼镜放在哪里，没有你的话我把眼镜早就丢掉了，你是放眼镜最好的东西了，我会把你保管得好好的。
把眼镜盒打开来，有些破旧，上面有被我用笔画上去，哎，都怪我，把你弄成这样。
06 我的姐姐（）周杰伦天哪！姐姐回来了！怎么办？我的姐姐叫周心茹，在家里排第三，也就是老三。
她有一双水汪汪的大眼睛，嗅觉灵敏的鼻子上架着一副和我一模一样的眼睛，性格开朗又暴力，是一个好姐姐。
姐姐非常漂亮但却是一个名副其实的虐待狂！记得一次，姐姐放学回来，她一扔下书包，就冲过来抓住我，发出恐怖的笑声说：“嘻嘻嘻，乐乐，好久不见，看看你的内功有没有什么长进。
”我疑惑不解地说：“纳尼，神马情况？”姐姐咬着牙说：“废话少说，看招。
”只见她紧紧抓着我的手，坐下来，仰着头往后翻。
我满脑子都是？？？？？，待那儿发呆。
过了一会儿，我说：“咦？脚下怎么空空的？”姐姐听了一笑，说了一声呵呵，一用力，“哎呀呀，疼~”没想到姐姐力气这么大，把我从沙发的一头“拎”到了另一头，我的头猛烈地撞到沙发上，痛死了！！！这还不算什么，我有一个表哥叫珂珂。
一次，我到他家去玩，不知前面聊了什么，聊到了姐姐，他说：“你姐姐了......唉~，悲惨的童年啊！”我好奇地说：“谁？你？我？多多（我堂哥）？”珂珂说：“猜，猜对有奖。
”“是你！对不？”我立即说道，他说：“恭喜你答对了！”“奖奖，快给我。
”“好，给你个巴掌！”我摇摇手说：“谢谢，我不要了。
快说，怎么个悲惨的童年？“珂珂做着一副悲惨的表情说：”那天，天还是那么蓝，地还是那么大，哎呀（被我打了）。
“‘别卖关子”“好，就是那时我大概才6岁，你姐姐8岁，再多多家门口，你姐姐不知道干嘛，拿我头发玩，还玩拔头发，拔一根数一下，痛个半死，我那时头发本来就少，被她拔拔光。
她拔完又扭我胳膊......我在她手下哭的连亲妈都不认识了。
“听到这，扭胳膊，我也想哭了，我现在胳膊上还有N块淤青呢！当然了，这不是姐姐弄的，而是范雪莹和叶可人！姐姐的虐待历史写也写不玩，就总结一下：我姐姐虐待是天下第一，谁不服，就来挑战我姐姐吧！07 塔石的旅程（）陈映妤今天，爸爸妈妈带我去肖宇扬哥哥的家乡做客。
一到，我和表哥就缠着肖宇扬哥哥带我们去玩水。
哇，那里的水真清呀！可以清清楚楚地看见许多的小鱼自由的穿梭其中，那里的鱼有一个特点，就是游的非常快，就像闪电似的，我想：也许是很轻很小的缘故吧！那水里的鹅卵石五颜六色，有白色，有紫色，有绿色……漂亮极了。
那里的水，摸上去冰冰的，在炎热的夏天可以擦一擦满头大汗的你。
飞流而下的泉水，“叮叮咚咚……”像一首十分美妙的乐曲。
那里的笋十分粗壮，大片大片的长在树丛里，长大成“人”的笋，有一个寓意就是节节高。
妈妈把我叫来说：“尝尝生的笋是什么味，”我迫不及待的接过生笋心想：也不知是什么味，跟熟的笋有什么区别？果然，吃了才有答案，它是甜甜的，香香的，脆脆的。
塔石在我的心里滑过一条美丽的彩虹。
08 我和男生的约定（）吕卓君就在今天，我和许多男生做了一个奇妙、不可思议的约定。
约定内容暂时保密。
在这之前，我和陈俊宝就做了这个即奇妙又不可思议的约定，这是个试验，而他却不知道。
试验期为一个月，一个月后检验了这是可以做得到的，要求并不过分。
为了再次确定，我就和我的同桌—徐宇轩身上做了同样的试验，同样的约定，结果和效果都一样。
证明男生可信度是很高的。
因为不遵守的话，就会有双倍的报复性，所以男生们都怕了。
当然和我做约定的男生都会同意，因为对他们也有好处，也有坏处，不够更多的是好处。
好了，现在告诉你实验了，可以告诉你约定了，约定有三条，慢慢听我说：1、你不打我，我不打你；2、你不骂我，我不骂你；22-23、如果做到以上2点，我投你文明好少年。
就这样，我们井水不犯河水，你走你的阳关道，我过我的独木桥。
这个约定真不错。
辅导老师陈俊宝09“小肉团”（）方文沛我们班有个同学，外号叫“小肉团”，听到这个名字，你就会知道他非常胖，脸上的肉笑起来时，还会一颤一颤的。
让人不可思议的是他有96斤重，在班里，几乎没有人比他重，而且他非常矮，准确来说是在我眼里他非常矮，虽然他有1米4。
肉团当然是软软的，而我们班的“小肉团”也很软，这个外号有个故事：在三年级时，徐老师在上课，而“小肉团’’却趴在桌子上。
许老师发现了他的所作所为，就说他软软的，上课都做不正，于是赐名“小肉团”。
而这团“小肉团”的名字是杜炫霖，他很懒，戴着副黑眼镜，坐在我前面，很贪吃，只要我带了吃的，他就好像只小狗，很听话。
“小肉团”可名副其实，他不管什么时候都像肉团，早操****时，他软塌塌的站着，上课时趴在桌上，站也站不直。
而这个杜炫霖就像个开心果，会在你心情最差的时刻也能让你笑起来。
我还记得一个笑话，是杜炫霖对我说的，一个女人和一个男人在公园里，女的问:“你喜欢听什么歌？”男人回答：“流行歌曲。
”女人说：“唱来听听。
”男人唱：“喜羊羊，美羊羊•••••”我在最难过的时候，开心的笑了，就是这个“小肉团”带给了我欢笑。
10 挖笋去喽（）杜炫霖今天，我和优优妹姀（杜奕轩）来到了弟弟于展翔的家乡下于村去挖笋。
下于村的外面有一个精致的雕像，是一只马一只脚蹬在一个地球上。
首先，我们先去下于村外面的菜市场买菜，外公外婆下车去我们在车上，外公外婆买了一些蕃薯草莓香蕉，带上姑婆就走。
之后，我们来到了下于村里面，我和优优立刻跑下去来到了于展翔家，于展翔说：＂全全哥哥!全全哥哥!你总算来了!＂我们带着香蕉草莓走了进去，我丶优优和于展翔立刻拿了草莓吃起来。