第17节糖化血红蛋白电泳操作与扫描
糖化血红蛋白标准检测方法
糖化血红蛋白标准检测方法一、免疫学检测法免疫学检测法是利用抗原抗体反应的原理，检测糖化血红蛋白的一种常用方法。
该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，常用于临床常规检测。
常用的免疫学检测法包括放射免疫分析法、酶联免疫吸附法和化学发光法等。
二、电泳法电泳法是一种利用电场对带电分子的迁移作用进行分离和检测的方法。
在糖化血红蛋白的检测中，电泳法可以将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，从而进行定性和定量分析。
该方法具有分辨率高、重复性好等优点，但操作相对复杂，需要一定的技术和设备支持。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种分离和检测复杂混合物中单个组分的方法。
在糖化血红蛋白的检测中，高效液相色谱法可以利用不同的色谱柱和洗脱液将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，然后通过检测器进行定量分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、重复性好等优点，但操作复杂，需要专业技术人员操作。
四、酶法酶法是一种利用酶促反应进行定量分析的方法。
在糖化血红蛋白的检测中，酶法可以利用特定的酶将糖化血红蛋白分解成可测定的产物，然后通过检测这些产物进行定量分析。
该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但操作复杂，需要特殊的酶和底物。
五、亲和色谱法亲和色谱法是一种利用生物分子间的特异性相互作用进行分离和检测的方法。
在糖化血红蛋白的检测中，亲和色谱法可以利用特定的亲和柱将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，然后通过检测器进行定量分析。
该方法具有分离效果好、特异性强等优点，但需要特殊的亲和柱和检测器。
六、离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用离子交换剂对带电分子进行分离和检测的方法。
在糖化血红蛋白的检测中，离子交换色谱法可以利用特定的离子交换柱将糖化血红蛋白与其他血红蛋白分离，然后通过检测器进行定量分析。
该方法具有分辨率高、灵敏度高、重复性好等优点，但操作相对复杂，需要一定的技术和设备支持。
七、荧光光度法荧光光度法是一种利用荧光物质发出荧光的特性进行定量分析的方法。
糖化血红蛋白尿微量白蛋白快速检测仪的标准操作程序
糖化血红蛋白尿微量白蛋白快速检测仪的标准操作程序一、目的：提供糖化血红蛋白和尿微量白蛋白（包括尿微量白蛋白、尿肌酐、白蛋白/肌酐比率三项参数）定量检测，其中糖化血红蛋白适用于糖尿病的检测和诊断，而尿微量白蛋白、尿肌酐、白蛋白/肌酐比率三项参数则适用于早期肾病的检测和诊断。
二、适用范围：糖尿病患者，糖尿病肾病患者，高血压肾病患者等。
三、定义：糖化血红蛋白：糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。
血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度。
糖化血红蛋白的英文代号为HbA1c。
糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8～12周的血糖控制情况。
微量白蛋白尿：微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。
白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。
微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。
四、职责规定齐宁宁负责本SOP的编写与修订规定董军梅负责本SOP的培训规定刘雪梅负责本SOP的执行五、程序：1.糖化血红蛋白的操作流程：①核对医嘱，评估患者一般情况，相关病情，既往病史。
②评估患者的心理状态，对健康知识的掌握情况及合作程度，告知其操作的目的和配合要点，取得合作。
③护士洗手、戴口罩，携用物至病人床旁。
④用75%酒精按照无菌原则消毒患者手指后采血，用采样针吸血至淀粉塞上方的横线处。
⑤将采血后的采样针卡入试剂盒内，将条形码面向右侧，在扫描槽内进行试剂盒扫描。
⑥按显示屏显示打开舱门，将试剂盒嵌入卡槽内，条码向右，缓慢而有力的拔出银色标签。
⑦在显示屏上填写患者信息。
⑧按开始按钮，测量开始，等待6分钟后自动打印出结果。
⑨打开舱门，拔出试剂盒，置于医用垃圾桶内，关机。
⑩洗手，记录结果。
2.尿微量白蛋白的操作流程①核对医嘱，评估患者一般情况，相关病情，既往病史。
②评估患者的心理状态，对健康知识的掌握情况及合作程度，告知其操作的目的和配合要点，取得合作。
血红蛋白电泳操作规程
血红蛋白电泳操作规程一．项目名称血红蛋白电泳（HYDRAGEL HEMOGLOBIN）二．检验方法名称琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约45个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约半小时4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）试剂盒HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：70测试/150测试（3）货号：PN4106/ PN41262．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540(4) 成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．生理盐水（二）配套品血红蛋白质控（1）商标：SEBIA(2) 包装规格：Pack for 1×1ml(3) 货号：PN4791七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
蛋白电泳检测操作规程
1. 目的：规范蛋白电泳检测操作2. 范围：适用于蛋白电泳检测3. 职责：实验室人员对本操作规程的实施负责。
4. 内容：4.1 稀释取900ul超纯水放入离心管中，再加入100ul样品混合均匀制成稀释液。
另取呈梯度的BSA10ul加入到90ul超纯水中稀释十倍。
4.2 酶解取稀释液20ul置于另外一组离心管中,加入5ul Loading Buffer混合均匀，盖紧离心管盖，沸水浴10min。
4.3 离心完成沸水浴后，置于离心机中13000rpm离心3-5min，离心待用。
4.4 准备电泳取出预制凝胶，撕去底部封条，黑色条朝外放入电泳槽中，加入缓冲液检测是否渗漏，如渗漏则重新安装凝胶。
4.5 加样电泳按照顺序，使用移液枪以及加样枪头将待用样品和BSA依次加10ul到凝胶点样孔中，盖上电泳槽，开启电泳仪，调节电压至80V，开始电泳；半小时后调节电压至120V，继续电泳过程直至电泳条带至凝胶底部。
4.6 后处理取出凝胶，清水冲洗后置于容器中加入染色液，在摇床中50rpm染色1.5h。
染色完成后，倒出染色液，清水冲洗干净后，加入脱色液，在摇床中50rpm脱色30min，然后倾去脱色液，换用新的脱色液重复脱色30min，脱色过程重复三次。
置于观察灯上拍照，利用image处理图片（具体操作见image使用流程）5. 注意事项5.1 预制凝胶底部封条一定要撕去。
5.2 BSA的配制必须精确，必须使用中性缓冲液配制。
5.3 凝胶加样过程必须使用配套加样枪头，使样品下沉。
5.4 电泳缓冲液可重复利用，但建议重复次数不超过三次；染色液也可重复使用，建议重复次数不超过三次。
6．附录6.1 染色液（1L）配制方法考马斯亮蓝R250 2.5g、乙醇400ml、乙酸100ml、水500ml。
6.2 脱色液（500ml）配制方法乙醇50ml、乙酸100ml、水350ml。
6.3 缓冲液配制方法缓冲液制剂一袋溶入1L水中混合均匀。
糖化血红蛋白(HbA1c)测定标准操作程序SOP文件
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-25
糖化血红蛋白（HbA1c）测定
版序：ABCD
页码：第1页，共3页
1测定方法
免疫抑制比浊法
2测定原理
标本中的HbA1c与anti- HbA1c抗体发生反应，形成可溶性的抗原-抗体复合物。因为在HBA1C分子上只有一个特异性的HbA1c抗体的结合位点，所以不能形成凝集反应。过量的抗HbA1c抗体与试剂中的多半抗原反应形成不可溶的抗体-多半抗原复合物，可以通过浊度进行检测，然后在另外一个通道中检测血红蛋白的浓度。
糖化血红蛋白（HbA1c）测定
版序：ABCD
页码：第3页，共3页
9注意事项
9.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.2仅应用于体外诊断。
9.3计算公式：
公式1：糖化血红蛋白的浓度以%形式报告。
%HBA1C=HbA1c(g/dl)÷Hb(g/dl)×100
公式2：经DCCT研究与HPLC相关好。
3标本
3.1标本收集：
毛细血管血及肝素/EDTA抗凝血浆，处理方法见标本准备。
稳定性：15－25℃3天
2-8℃7天
-20℃6月
3.2标本准备：
3.2.1毛细血管血：
使用一次性的毛细血管采取毛细血管血液，将该血液与溶血剂进行1：100倍配比（例如20ul毛细血管血液配比2000ul溶血剂）。小心混匀后使用。当血液从红色变为棕榈色后即可使用（大约1-2分钟）。
溶血后的稳定时间：2-8℃24小时
-20℃6月
再使用前将溶血剂放入室温稳定15分钟。
3.2.2 EDTA/肝素抗凝血：
将抗凝全血混匀避免形成泡沫。取血液10ul，加入溶血剂1000ul。当血液从红色变为棕榈色后即可使用（大约1-2分钟）。
血红蛋白电泳简易操作流程
血红蛋白电泳简易操作流程样本的制备：1）洗涤红细胞。
取400μL血细胞加4mL生理盐水，上下颠倒5次或吹打混匀。
2）用3000转速的离心机离心全血5分钟并弃去浮在表面上的悬浮液3）重复1）和2）步骤，尽量吸走红细胞表面多余的生理盐水。
6) 取40l RBC于一试管中，加150l裂解液7) 充分混匀，放置15-20分钟。
说明：RBC及裂解液比例浓度可据标本情况调整。
注意：1、每次洗涤需要充分混匀。
2、吸取40l RBC时，需要枪头深入至压积红细胞内部或底部，完全吸取40l 之后再提起枪头，避免吸到生理盐水，保证RBC的量。
3、裂解时间最少15分钟，以保证裂解充分。
电泳前准备：1. 打开电脑以及电泳仪器右侧的主开关。
2. 试剂检查及准备：每次在开始新的电泳前，应检查如下内容：染色液是否在Min-Max标记线之间，染色液用过10次染色循环后不能再使用；脱色液及蒸馏水是否过少；点样器是否放置在准确的位置中；废液是否清空。
3. 放置海绵条：用干净的镊子把海绵条插入电泳槽的两侧电极中，轻轻压平。
注意：请勿将海绵条插入到中间的电极中。
4. 样本装载：从仪器中抽出样盘托，取开吸磁铁片，将一次性载样盘放置样盘托中，盖好铁片，然后按1-13号顺序每孔加入30ul裂解后的样本，并将其插入仪器相应位置中。
5. 胶片准备：取胶片一块用配套滤纸沿同一方向将多余的缓冲液吸走，应保证滤纸完全贴在胶片的表面，然后快速移走滤纸。
将胶片装在胶片架上，装胶片时抓住胶片有条形码侧的一角，将有凝胶面向上，箭头向胶片架上方，沿上下卡口轻轻插入，然后将胶片架放回电泳仪对应位置。
注：滤纸在胶片上约5s就必须要移走，防止胶片脱水。
6. 检查各项准备情况，完全准备好后切记要合上仪器盖。
电泳分析软件操作：1. 双击电脑桌面上的电泳扫描图标（Elfolab）→ 数据库（Database）→ 打开数据库（Open Database）→ 数据库（Database）→ 工作数据库（Working Database）→ 新的工作数据库（New working Database）→ 在胶片1中选择血红蛋白→ OK。
血红蛋白电泳实验操简易作步骤
血红蛋白电泳实验简易操作步骤1. 洗涤红细胞：取离心后的红细胞200ul，10倍体积的0.9%的生理盐水洗涤，3000转/5分钟，离心后去掉上层。
洗涤2-3次。
2. 溶血：130ul溶血素+10ul洗涤后的红细胞3. 加样：加样梳每孔中加溶血后的液体10ul后放入保湿盒中4. 选择7/15Hb程序，在黑色方框的中下1/3处加入200ul（15人份）蒸馏水、130ul（7人份）蒸馏水，放上已经吸水后的琼脂板（注意放入黑色方框内）和缓冲条，并将加样梳从保湿盒中取出放在4号位（加样梳有字的一面朝向自己）5. 开始电泳，20多分钟后听到“嘣”的一声电泳结束，弃去加样梳和缓冲条6. 选择Hb程序进行染色，取出琼脂板放在染色架上进行染色，30分钟后取出琼脂板进行扫描7. 点击胶片扫描图标, 启动扫描程序。
9. 在软件操作界面上, 选择进入工作单界面。
10. 在每个即将扫描的标本的信息, 都可以在这一界面下进行录入.11. 在扫描仪上, 放入胶片。
将胶片的正面朝下, 放于扫描仪上。
12. 将胶片放置于胶片支架内, 根据支架内胶片类型和规格, 选择扫描程序。
13. 关闭扫描仪机盖，点击开始扫描键。
（提示: 如果多次扫描胶片, 请更改扫描程序中的开始扫描的样品编号, 否则, 后面的扫描结果, 会覆盖上一次的扫描结果. 如果一次同时扫描多个胶片, 软件会自动分配样品编号.）14. 检查扫描的居中范围线，仔细察看居中线是否对齐, 具体操作请查阅仪器使用手册.15. 编辑曲线，电泳胶片扫描结束后, 关闭窗口, 然后点击“编辑曲线”键进入曲线编辑模式进行曲线编辑, 添加病例的IF 图片和注释。
16. 曲线编辑完成后, 就可以进行结果报告。
所有的报告单必须有相关负责人员的签名及日期, 同时, 遵守医院的相关程序进行数据保管。
血红蛋白电泳检查（电泳法）
血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用ED TA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150test s6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
糖化血红蛋白电泳
检测HbA1c (或相当于HbA1c)
测定仪器、方法30多种
BEYOND SEPARATION
糖化血红蛋白的检测
基于 电荷差异
• 液相色谱法 • 电泳法
基于 结构差异
• 亲和层析法 • 免疫法 • 酶法
BEYOND SEPARATION
亲和层析法
A：患者的红细胞裂解液注入到含有结合了硼 酸基团的树脂的分析柱中。
糖基化和非糖基化的链N末端六肽片段
HbA1c (m/z= 429.2)
Val
His
Le u
Thr Pro Glu Glu Lys
HbA0 (m/z= 348.2)
BEYOND SEPARATION
IFCC建立国际统一的参考方法
2nd step: 检测
1. 酶解
B：在pH高于8.0时，血红蛋白被糖化后产生 一个特殊的顺式二糖醇基团与硼酸基团发生 反应。
C：糖化的血红蛋白被绑定在分析柱中，而非 糖化的血红蛋白组分直接流出。
D酸性缓冲液被使用，使得糖化的血红蛋白从 分析柱内释放出来。
图E是一种简化的色谱图（蓝线），显示了非 糖化和糖化血红蛋白组分的分离。
Hb
成人 Hb
HbA (ßß)
97%
HbA2 ()
2.5%
HbF ()
胎儿 Hb
0.5%
非糖化的
HbA1b HbA1c 60%~70%
BEYOND SEPARATION
糖化血红蛋白概述
糖基化血红蛋白
亚基：α链、β链、 γ链、δ链、异常 血红蛋白链 位点：任何氨基酸
酶法
A： 图示是糖化的HbA的β链的前 8个氨基酸，患者的红细胞裂解液 在蛋白酶存在的情况下，氨基酸和 小段肽链被释放, 包括HbA1c的氨 基酸末端糖化的缬氨酸
糖化血红蛋白操作步骤
糖化血红蛋白操作步骤
嘿，朋友们！今天咱来唠唠糖化血红蛋白的操作步骤。
这可不是个
简单事儿，就好像你要做一道超级复杂的大菜一样。
首先呢，得把要检测的样本准备好呀。
这就好比做菜前得先把食材
都备好，可不能马虎。
然后呢，选择合适的检测方法和试剂，这就跟
你挑对了调料一样重要。
接下来，就是具体操作啦！按照要求精确地进行各种步骤，一点都
不能错。
这就像走钢丝，得小心翼翼的。
比如说，要准确地吸取样本量，多一点少一点都不行，就好像做菜时盐放多了或者放少了都会影
响味道。
然后要进行一系列的化学反应，这过程可神奇了，就跟变魔术似的。
看着那些物质在各种条件下发生变化，真的很有意思。
在操作过程中，可得注意环境条件啊，温度啦、湿度啦，都得控制好。
这就跟人得待在舒服的环境里一样，环境不好，人也不舒服呀。
还有啊，仪器设备也得维护好，就像你得爱护你的宝贝厨具一样，
不然关键时刻掉链子可咋办。
整个操作过程中，每一步都得认真对待，不能有丝毫的马虎。
这就
跟盖房子一样，一块砖没砌好，可能整座房子都不牢固。
检测完了，还得对结果进行准确的分析和判断。
这可需要经验和专
业知识呢，可不是随便看看就行的。
总之啊，糖化血红蛋白的操作步骤可不简单，需要我们细心、耐心、用心地去对待。
只有这样，才能得出准确可靠的结果，为医疗诊断和
治疗提供有力的支持呀！大家可千万要记住这些要点哦！。
糖化血红蛋白液相色谱仪操作流程
糖化血红蛋白液相色谱仪操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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糖化血红蛋白液相色谱仪操作流程
糖化血红蛋白液相色谱仪操作流程1.首先确保糖化血红蛋白检测试剂盒中的所有试剂和标准品未过期。
First, ensure that all reagents and standards in the glycated hemoglobin test kit have not expired.2.打开色谱仪仪器，按照仪器说明书的指示进行初始化操作。
Turn on the chromatograph instrument and follow the instructions in the instrument manual for initialization.3.准备样本，使用吸管或自动吸取器将糖化血红蛋白样本吸取到专用的色谱仪样本瓶中。
Prepare the sample by using a pipette or automatic sampler to draw the glycated hemoglobin sample into the dedicated chromatograph sample bottle.4.加入适量的样本稀释液到样本瓶中，混匀使样本充分溶解。
Add an appropriate amount of sample diluent to the sample bottle, mix well to fully dissolve the sample.5.根据试剂盒说明书，加入相应的试剂到样本中，并混匀。
According to the kit instructions, add the corresponding reagent to the sample and mix well.6.载入样本瓶到色谱仪的样本架上，并关闭样本瓶盖。
Load the sample bottle onto the sample rack of the chromatograph and close the sample bottle cap.7.打开色谱仪的软件，设定分析方法和参数，包括流速、柱温等。
血红蛋白电泳检查(电泳法)
血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。
氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。
本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。
多余的染色液用酸性液体洗去。
待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。
运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。
血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。
血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。
常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。
清洁试管中，充分混匀。
3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150tests6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
有效期两年。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：SEBIA电泳仪7.2 仪器厂家：法国Sebia公司7.3 仪器型号：HYDRASYS8. 操作步骤8.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。
第17节糖化血红蛋白电泳操作与扫描
第18节糖化血红蛋白电泳操作与扫描血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络合铁原子的叶琳。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
血红蛋白的蛋白部分（多肽链）称之为球蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ四种形式。
红细胞内的血红蛋白主要有三种类型：HbA，HbA2和胎儿血红蛋白（HbF）,它们都由两条α链和两条非α链组成。
血红蛋白的主要功能是在体内运输输氧和二氧化碳。
血红蛋白糖基化是红细胞内的葡萄糖和血红蛋白β链N末端氨基之间的一非酶促反应过程，是一种不可逆反应。
这一反应发生于细胞整个生命周期。
糖化血红蛋白的形成速率与血糖浓度（红细胞内的葡萄糖浓度）有关，而与胰岛素无关；糖化血红蛋白存在于红细胞整个120天的生命周期中。
糖化血红蛋白（Hb A1）通常占总血红蛋白的 5～8％，由 HbA1a。
、HbA1b和HbA1c三种成分组成。
HbA1c。
占 HbA1的 70 %～90％，其血红蛋白β链 N一末端颉氨基残基通过非酶促糖化作用以共价键与葡萄糖分子相连接。
HbA1c的形成仅仅与葡萄糖有关，特异性地反映体内葡萄糖水平。
糖化血红蛋白的水平与测定前数周（一般认为6～8周）内的血糖水平有关，糖化血红蛋白比例高，并发症相对严重，预后相对较差。
糖化血红蛋白的量还可作为评价治疗效果的一项指标。
因为Hb A1C的测量较为客观，不依赖于病人的其他条件（如饮食、服用降糖药、抽血、时间等），所以逐渐被临床广泛应用。
糖化血红蛋白电泳操作与血红蛋白电泳操作完全一样但不须要染色。
简述如下：样品处理：抗凝血标本离心（5000转）5分钟，去除血浆。
用10倍生理盐水洗涤红细胞2次取：红细胞10μL + 溶血素130μL 。
震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟。
加样10μL-→保湿5分钟-→挂缓冲条-→电泳底版加200μL蒸馏水-→吸去胶片表面水分-→放进电泳舱-→放下电极架-→放入加样梳-→关上电泳盖-→电泳选项目-→按确定键-→按开始键检查染脱色液--→胶片放入染脱色舱--→选染脱色项目--→按确定键--→按开始键加样梳：15人份－4号位。
毛细管电泳法快速检测糖化血红蛋白概要
[4]郝贤 , 吴茜 , 杨丰源 . 2型糖尿病胰岛素抵抗的实验与临床研究进展 [J]. 中国初级卫生保健 , 2006, 20(8 :60.[5]毛晓明 , 刘志民 . 氧化应激在糖尿病糖代谢中的作用 [J]. 江苏医药 , 2005, 31(3 :212.[6]赵宝珍 , 白秀平 , 荣青峰 . 实验性 2型糖尿病大鼠模型的研究 [J].中国药物与临床 , 2002, 2(6 :383.[7]郭昆全 , 湛冯岚 . 硫酸镁对 2型搪尿病及糖耐量异常 (IGT 患者胰岛素敏感性的影响 [J]. 中国糖尿病杂志 , 2001, 9(6 :355. [8]梁丽 , 李成江 . 低血镁与糖尿病的关系 [J]. 浙江医学 , 2005, 27(12:958.[9]杨月莲 , 梁瑜祯 . 氧化应激与 2型糖尿病 [J]. 医学综述 , 2008, 14(3 :429.[10]Firdlyand LE, Phlipson LH. Reactive s pecies and early manifes tation ofins ulin resis tance i n type 2diabetes [J ]. Di abtes Obes M etab, 2006, 8(2 :136.[11]张秋梅 . 氧化应激与 2型糖尿病的关系及 a 硫辛酸的应用 [J ].医学综述 , 2007, 13(24 :1984.[12]范晓岚 , 杨军 , 糜漫天 , 等 . B -胡萝卜素的抗氧化作用与疾病预防 [J]. 中国公共卫生 , 2003, 19(4 :479.(收稿日期 :2008-11-20基金项目 :江苏省医学重点建设学科资助 (X K200723 *通讯作者文章编号 :1007-4287(2009 06-0738-03毛细管电泳法快速检测糖化血红蛋白郑慧斐 , 王惠民 *, 丛辉 , 倪红兵 , 景蓉蓉 , 孙宝兰(南通大学附属医院检验医学中心 ; 南通大学公共卫生学院 , 江苏南通 226001摘要 :目的建立毛细管电泳法快速检测糖化血红蛋白 (HbA 1C 的方法并初步探讨其临床应用价值。
糖化血红蛋白仪使用手册
血红仪HbA1c 1海奥生物独家代理糖化血红蛋白仪使用手册血红仪HbA1c 2海奥生物独家代理目录概述打开糖化血红蛋白仪的包装储存要求特征显示糖化血红蛋白仪测试系统原理糖化血红蛋白仪质控杯的操作糖化血红蛋白检测显示储存结果校正10μl 微量加样器的使用性能特征疑难处理技术支持安全关机信息耗材处理性能参数质量保证联系我们参考文献血红仪HbA1c 3海奥生物独家代理概述使用范围糖化血红蛋白仪是一种小型便携式产品，与糖化血红蛋白检测试剂同时使用，进行指血或全血（肝素或EDTA 抗凝）体外血红蛋白A1c（HbA1c）定量检测。
每次实验前，糖化血红蛋白仪可进行自检，使用糖化血红蛋白仪质控杯和质控试剂对仪器性能进行检验。
本公司建议质控杯应在每次检测前使用。
糖化血红蛋白仪由12V 直流电供电，变压设备随机提供。
请不要使用其它电源以免导致结果错误或机器损坏。
本手册介绍了糖化血红蛋白仪的使用，您在使用前还应详细参阅糖化血红蛋白检测试剂的使用说明。
请保管本手册以备后用。
打开糖化血红蛋白仪的包装仔细观察外包装有无破损，如有任何损坏请联系我们。
组成：1 糖化血红蛋白仪（DCCT 版P901036D）1 标准电源插头和变压器1 使用手册1 快速指导1 糖化血红蛋白仪质控杯（单独包装）储存要求糖化血红蛋白仪应储存于10~35℃。
储存时请务必盖好，以避免灰尘进入。
确保糖化血红蛋白仪质控杯不受阳光直射，储存湿度应小于60%特征血红仪HbA1c 4海奥生物独家代理显示杯子符Cartridge这个图标配以“上”“下”箭头以提示插入或拔出测试杯。
沙漏符Hourglass提示您应等待，有时候旁边还有倒计时数字显示。
杯子旋转符Rotate Cartridge提示旋转杯子，同时杯子周边部位的信号灯会闪烁，指示应将杯子旋至此处。
错误信息Error Message显示一个数字表示出错代码。
倾倒溶液符Pour Solution提示将测试杯试管中的液体倒入漏斗中。
糖化血红蛋白操作规程
糖化血红蛋白定量测定操作程序
（1）加入5ul全血标本于处理管内﹑混匀，室温放置2―3分钟。
（2）混匀，取25ul垂直加样于反应板加样孔内，待椮透。
（3）加入25ul洗涤液，待椮透。
（4）在5分钟以内用NycoCard Reader Ⅱ定量检测结果。
（5）取下检测笔（Pen）的笔帽，将其插入笔架中。
（6）按下“on”键，开机，仪器进行自身散射光调整（Adjusting），该过程约需要15秒钟左右的时间，等待。
（7）听到“嘀”一声，提示散射光调整结束。
仪器自动进入下一程序，进行调零（calibrate），按下确认键（enter），仪器
提示打开调零白板（open lid），放上检测笔（place pen）按下，仪器自动检测，等待（calibrating,wait……），听
到“嘀”一声，提示调零结束。
（8）仪器自动进入下一个程序，等待选择检测项目（enter test）按下确认键（enter），利用“on”键进行项目的选择。
确定
检测项目，按下确认键（enter），进行确认。
此时即可进行
检测。
（9）检测结束，按下退出键（quit），进入关机（off）菜单，按下确认键（enter），关机。
或10分钟内不进行任何操作，
仪器将自动关机。
（10）正常参考值：4.5-6.3%。
糖化血红蛋白操作程序
糖化血红蛋白操作程序一、检测方法离子交换层析法二、方法学原理H50采用基于离子交换的高效液相色谱检测原理，测量血红蛋白色谱图，计算相关参数。
基于高效离子交换的液相色谱检测原理，测量时先将含有各种血红蛋白的血液样本载入层析柱，在选定的低离子强度缓冲液及pH条件下，血液样本中的HbA1c几乎不带正电荷，首先被洗脱；血液样本中的HbA0带正电荷，用高离子强度的洗脱液最后洗脱出来，得到相应的血红蛋白层析谱，然后算出HbA1c峰值和总Hb的比值。
三、试剂品牌、包装规格、内含物3.1试剂品牌：迈瑞3.2试剂成分和规格3.2.1：离子交换层析柱：规格：1*13.2.2糖化血红蛋白溶血剂：磷酸缓冲液规格：2L*33.2.3糖化血红蛋白洗脱液A：琥珀酸缓冲液规格：900ml*43.2.4糖化血红蛋白洗脱液B：磷酸缓冲液规格100ml*23.3储存温度：2℃—30℃3.4开瓶有效期：100day。
四、仪器品牌、型号品牌型号：迈瑞H-50五、操作程序5.1开机程序5.1.1按主机上的电源开关，接通电源；5.1.2仪器自动执行一项自检操作，包括系统检查、关机检查和机械初始化。
整个过程约持续15分钟；5.1.3系统自检完成后，弹出登录对话框。
在对话框中输入用户名和密码后，点击“登陆”；5.1.4“液路初始化”完成后进入主界面，进行样本分析；5.2质控程序5.2.1容器类型1.使用离心管或微量杯，分别使用各自的适配器，放入质控品试管架，试管架上部有CRL标贴。
2.仪器会自动识别试管架，采用预稀释模式测量。
5.2.2质控品样本液的制备5.2.2.1厂家质控1.对于新开瓶质控品，首先将其自2~8℃冰箱中取出；2.轻敲瓶盖，确保冻干样品全部散落在瓶底，小心地打开瓶盖和橡皮塞，使瓶盖朝上，当心瓶盖上黏附的冰冻粉末被风吹下造成内容物的损失；3.获取2mL糖化血红蛋白溶血剂，缓慢注入两个水平的质控品瓶中，仔细盖上橡皮塞后，轻缓翻转小瓶10秒进行混匀，然后避光放置约2-3分钟（期间轻缓翻转小瓶，确保内容物完全溶解，翻转过程避免产生泡沫）；4.待其完全复溶后混匀，可用移液器分别取两个水平的质控品各200ul置于两个预稀释样本杯或1.5ml EP管中（剩余的质控品可置于2～8℃低温下保存14天，使用前从低温环境下取出即可直接使用），每一瓶质控品开瓶后均需在瓶身上记录开瓶日期，5.每一批质控品开瓶后第一次使用时均需在仪器上录入质控品试剂的参考值、批号和有效期：点击“质控”菜单→“设定”→选择新的文件号→点击“编辑”→选择质控水平、参考值类型，偏差限格式，输入批号、有效期、参考值和偏差限，每个水平质控建立一个相对应的文件夹并勾选“在用”列，仪器后续质控测试将默认保存在该文件夹中直到有效期失效。
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第18节糖化血红蛋白电泳操作与扫描血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。
每一条链含有血红素和络
合铁原子的叶琳。
所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。
血红蛋白的蛋
白部分（多肽链）称之为球蛋白。
正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ四种形式。
红细胞内的血红蛋白主要有三种类型：HbA，HbA2和胎儿血红蛋白
（HbF）,它们都由两条α链和两条非α链组成。
血红蛋白的主要功能是在体内运输输氧和二氧化碳。
血红蛋白糖基化是红细胞内的葡萄糖和血红蛋白β链N末端氨基之间
的一非酶促反应过程，是一种不可逆反应。
这一反应发生于细胞整个生命
周期。
糖化血红蛋白的形成速率与血糖浓度（红细胞内的葡萄糖浓度）有关，
而与胰岛素无关；糖化血红蛋白存在于红细胞整个120天的生命周期中。
糖化血红蛋白（Hb A1）通常占总血红蛋白的 5～8％，由 HbA1a。
、HbA1b
和HbA1c三种成分组成。
HbA1c。
占 HbA1的 70 %～90％，其血红蛋
白β链 N一末端颉氨基残基通过非酶促糖化作用以共价键与葡萄糖
分子相连接。
HbA1c的形成仅仅与葡萄糖有关，特异性地反映体内葡萄糖水平。
糖化血红蛋白的水平与测定前数周（一般认为6～8周）内的血糖水
平有关，糖化血红蛋白比例高，并发症相对严重，预后相对较差。
糖化血
红蛋白的量还可作为评价治疗效果的一项指标。
因为Hb A1C的测量较为客观，不依赖于病人的其他条件（如饮食、服用降糖药、抽血、时间等），所以逐渐被临床广泛应用。
糖化血红蛋白电泳操作与血红蛋白电泳操作完全一样但不须要染色。
简述如下：
样品处理：抗凝血标本离心（5000转）5分钟，去除血浆。
用10倍生理盐水洗涤红细胞2次
取：红细胞10μL + 溶血素130μL 。
震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟。
加样10μL-→保湿5分钟-→挂缓冲条-→电泳底版加200μL蒸馏水-→吸去胶片表面水分-→放进电泳舱-→放下电极架-→放入加样梳-→关上电泳盖-→电泳选项目-→按确定键-→按开始键
检查染脱色液--→胶片放入染脱色舱--→选染脱色项目--→按确定键--→按开始键
加样梳：15人份－4号位。
糖化血红蛋白电胶片
糖化血红蛋白电泳的扫描与血红蛋白操作也完全一样
正常标本的扫描条带如图少儿标本的扫描条带如图Hb A0
Hb A1c < 6%
Hb A1(a+b)
附一高血糖标本报
告单：
：
复习题：
1．简述糖化血红蛋白电泳的操作与扫描步骤。
2．糖化血红蛋白电泳标本的前处理是怎样进行的？
糖化血红蛋白电泳中常见哪些条带？其异常标准是什么？
3．。