第二章 试管苗快速繁殖
第二章 植物离体繁殖
一、 植物快繁的器官形成方式
由于植物种类不同，器官再生及快速繁殖的方式也不同。 1、短枝发生型：外植体为带叶单芽茎段，培养 为完整植株。 特点：一次成苗，培养过程简单，容易移栽成 活，遗传性状稳定。 例如：葡萄、红薯等试管苗繁殖。
2、器官型（Organ type）：外植体带有顶芽或 腋芽。培养后形成丛生芽，转入生根培养基， 诱导生根成苗，扩大繁殖。 特点：由单芽到丛芽，繁殖速度快，遗传性状 稳定，多数花卉、苗木的快繁属于此类。
选取遗传性状优良、稳定，生长健壮、无病虫害植株上的外植体， 经适当有效灭菌处理后，接种在培养基上，诱导其产生芽（腑 芽或不定芽）和愈伤组织。
注意:培养基激素配比，取材的年龄、大小和生理状态。
初代培养的启动生长方式:腋芽被刺激后生长;茎段、叶片、其它器 官伤口处产生不定芽；外植体切口产生愈伤组织。此阶段一般 需要4-6周。 ↗愈伤组织
控制：减少培养基中容易诱导变异的物质、定期清除不正常
三、玻璃化：
玻璃化苗： 是由于试管苗发生生理失调，而形成的发育不正常的组培苗。 常常表现为叶片皱缩、易碎、嫩叶呈水浸透明状。移栽后常 死亡。
原因： 防止措施: ① 培养基中琼脂与蔗 ① 加入琼脂提高培养基硬度； 糖的浓度低； ② 提高蔗糖含量，降低培养基的渗透 ② 细胞分裂素与生长 压； 素比例失调； ③ 减少含氮成分； ③ 培养基中含氮量高； ④ 降低温度或变温处理、提高光照。 ④ 培养温度高； ⑤ 添加抗玻璃化的化学物质：活性炭、 ⑤ 光照不足。 聚乙烯醇、多效唑、青霉素等。
土豆扦插实验报告
土豆扦插实验报告学号XX姓名XX土豆扦插实验实验时间：X年X月X日实验内容1、马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制。
2、马铃薯试管苗的快速繁殖4马铃薯试管薯的诱导5马铃薯幼苗的移栽一实验目的。
通过本次实验，能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。
通过本次实验，掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。
熟悉马铃薯快繁培养基及试管薯诱导培养基的配置方法。
通过本次实验，进一步掌握无菌操作技术。
了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。
作为植物营养繁殖的一个新手段，植物组织培养技术现正日益普及。
利用植物组织培养技术，在无菌条件下对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法称为植物离体无性繁殖。
植物离体无性繁殖又称植物快繁或微繁，它是植物组织培养技术在农业生产中应用最广泛、产生经济效益最大的研究领域，涉及的植物种类繁多，技术日益成熟并程序化，繁殖速度突破了植物自然繁殖的界限，成就了工厂化育苗的梦想。
植物快繁与传统营养繁殖相比，其特点表现，繁殖效率高。
由于不受季节和灾害性气候的影响，材料可周年繁殖。
生长速度快，材料能以几何级数增殖。
培养条件可控性强。
培养材料完全是在人为提供的培养基质和小气候环境条件下生长，便于对各种环境条件进行调控。
占用空间小。
土豆试管苗在光照条件下进行自养的程度大于异养。
相反，在高浓度的糖类存在的情况下，以及在无光照的限制条件下，土豆向着诱导生成试管薯的过程。
这样生长出来的试管薯称之为原种种薯。
对实验现象、实验结果的分析及其结论1、光照对苗的快繁影响较大。
中期观察发现，苗未直立生长，且整体向一个方向倾斜，有较明显的向光生长趋势。
后期对培养瓶移位，改变捕光方向和位置后，有明显改善。
这是由于培养架内各处光照不均匀，以至偏向角落的苗向光生长。
2、马铃薯试管苗快繁过程中发现，有些同学的苗始终不长高，且不生根。
2.1 植物细胞工程(第2课时)高二生物下学期课件(人教版2019选择性必修3)
单倍体育种获得的隐性纯合体
提高变异的频率，加速育种进程。 大幅度地改良某些性状。
缺点：
如 抗花叶病毒的甘蔗、抗盐碱的烟草等 难以控制突变方向，有利性状比较少， 需要大量处理实验材料。
课堂检测
下列有关植物组织培养的叙述，正确的是 ( D ) A．愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞 B．二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株 C．用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子 D．植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得
1、微型繁殖
实例：
兰花的快速繁殖
兰花花色鲜艳，形态各 异，品位优雅，深受人 们的喜爱。
兰花传统的繁殖速度慢， 不能满足市场需要，且 病毒病感染影响生长和 观赏价值。
通过组织培养方法有数 百种兰花可以进行快速 繁殖，实现工厂化的规 模化生产。
1960年，荷兰科学家通过对兰花茎尖进行培养，获得了快速繁殖 的脱毒兰花，随后在国内外进行了“兰花试管苗产业化”。
传突变的理想材料。
大多数单倍体植株的细胞中只含一套 染色体，染色体加倍后得到的植株的隐性 性状容易显现。
作物新品种的培育
2.突变体的利用
①突变体：在植物组织培养过程中，由于培养细胞一直处于不断地分生
状态，容易受培养条件和外界压力（射线、化学物质）的影 响而发生突变（基因突变、染色体变异），这样发育成的个 体称为突变体。
②诱变方法 化学诱变一般是利用一些化学诱变剂进行处理。
常见的有甲基磺酸乙酯（EMS)和叠氮化钠（SA) 等。
物理诱变一般釆用电离辐射处理。 电离辐射主要包括γ射线、 β射线、中子等。
③利用： 突变体育种（获得突变体后筛选出对人们有利的，进而培育出新品种） ④实例：抗病、抗盐、高产、高蛋白等品种的选育
人教版高中生物选择性必修三课件——第2章 第 1 节 二 植物细胞工程的应用
2.通过植物组织培养技术可以快速繁殖、生产药物及培育无病毒的植物等。据 图甲、表乙回答问题:
表乙 植物的花芽分别在含有不同比例的吲哚乙酸和细胞分裂素的培养基中的 生长状况
吲哚乙 酸
细胞分 裂素
花芽生 长状况
A组 B组
C组
D组 E组
0 3 ppm 3 ppm 0.03 ppm 0
0 0.2 ppm 0.002 ppm
带病毒。
探究点二 作物新品种的培育和细胞产物的工厂化生产 1.单倍体育种(科学思维): 【实验情境】通过植物的组织培养进行单倍体育种流程图
请据图分析: (1)图中①和②分别代表:①_杂__交__,②_花__药__离__体__培__养__。③通常是指_秋__水__仙__素__处__理__, 目的是_使__染__色__体__数__目__加__倍__,形成纯合子。
(2)单倍体育种的原理以及涉及的生物学技术分别是什么? 提示:单倍体育种的原理是生殖细胞的全能性(花药离体培养为单倍体植株);染色 体数目的变异(秋水仙素诱导单倍体幼苗细胞染色体数目加倍)。涉及的生物学 技术是植物组织培养。 (3)单倍体育种的优点和缺点分别是什么? 提示:单倍体育种的优点是后代稳定遗传,都是纯合子;明显缩短育种年限。缺点 是技术相对复杂,需要与杂交育种结合。
单育1号烟草品种、中 花8号、11号水稻和京
花1号小麦等
产生新基因,大 幅度改良某些
性状
抗花叶病毒的甘蔗、抗 盐碱的野生烟草等
【定向训练】 如图表示植物组织培养的大致过程,据此判断不正确的是
()
A. 若①是来自不同植物体细胞融合的杂种细胞,则④可能出现不同植物的遗传特 性 B.若①是花粉,则④是单倍体植株,经染色体加倍后可得到稳定遗传的品种 C.若①是人参细胞,对②进行扩大培养可提高细胞产物人参皂苷的产量 D.若①是具有杂种优势的农作物细胞,则用③进行繁育一定会发生性状分离
组培实验六 试管苗的增殖和生根培养
实验六试管苗的增殖和生根培养一．实验目的1、掌握生根培养阶段培养基类型的选择及配制方法2、掌握试管苗生根培养的转接技术3、掌握试管苗生根培养的环境条件控制4、了解不同植物不同繁殖体的增殖扩繁方式5、掌握不同增殖扩繁方式试管苗的转接技术6、要求试管苗和试管苗繁殖体的切割分离方法正确，操作规范熟练。
二．实验原理试管繁殖往往诱导产生大量的丛生芽或丛生茎、原球茎，再转入生根培养基中生根或直接栽入基质中，进一步长大成苗。
试管苗的繁殖（一）试管苗快速繁殖的类型1.无菌短枝型：将待繁殖的材料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，一定时间后可成苗，再剪成带一叶的单芽茎段，继代又可成苗。
2.丛生芽增殖型：从芽到芽。
3.器官发生型：分为直接和间接两种形式，直接的器官发生是指较少发生或不发生愈伤组织而直接从外植体表面再生不定芽。
4.胚状体发生型从植物叶片、子房、花药、未成熟胚等诱导体细胞发生。
其发生和成苗过程类似合子胚或种子。
这种胚状体具有数量多、结构完整、易成苗和繁殖速度快的特点，是植物离体无性繁殖最快的方法，是人工种子和细胞工程的前提，受到国内外的普遍重视。
（二）.试管苗的生根培养：是使无根苗生根形成完整植株的过程，这个过程的目的就是使试管苗生出浓密而粗壮的不定根，以提高试管苗对外界环境的适应力及驯化移栽的成活率，获得更多高质量的商品苗。
试管苗的生根一般需转入生根培养基中或直接栽入基质中促进其生根，并进一步长大成苗。
试管苗的生根可分为试管内生根和试管外生根两种方式。
1、试管内生根植物离体培养中根的发生都来自不定根，根原基的形成与生长素有关，但根原基的伸长和生长可以在没有外源生长素的条件下实现2、试管外生根为了提高试管苗的生根和移栽成活率，针对有些植物种类在试管中难以生根或根系发育不良，吸收功能极弱，移栽后不易成活的特点，同时为了缩短育苗周期，降低生产成本，国内外许多学者，就现有的生根和驯化程序进行了改进，从而产生了试管苗瓶外生根技术。
矮化菊花试管苗快速繁殖研究
０ｍ ／ 、．５ ｍ／ 、 ． ｇ Ｌ和 ０ ７ ｓ Ｌ４个 水平 ； Ａ ｇ Ｌ ０ ２ ｇＬ ０ ５ ｍ ／ ． ５ｍ ／ Ｎ Ａ
浓度 ０ １ ／ 、．７ ｇ Ｌ ００ ｓ Ｌ ０ｍｓＬ ． Ｌ ０ ０ ５ｍ ／ 、 ．５ｍ ／ 、 ／ 。培养基编号 ｍｇ
２ 结 果 与 分析
在培养后 １ ， ０ｄ 矮化菊花试管苗在继代 培养基 中 中最
先分化 出芽体 ， 芽体呈簇生状态 ， 随着 培养 时间的增加簇生的 幼苗逐渐展开 ， 形成有茎形态 的无根试 管苗 。从培养 后 １ ５ｄ
试验用材料 为侯 仁 浩等 经 过矮化 获 得 的试 管 苗 。将 其在齐 向英 等 筛 选 的 ＭＳ＋１ ０ ｍ／ ． ｒＬ ６一Ｂ Ａ＋０ ５ｍｇＬ ． ／ ＩＡ＋ ． １ｍ ／ Ｄ Ｂ ００ ｇ ＬＴ Ｚ中培养 ２ ５ｄ作为试验用材料。
养基 中外植体无法分化 出芽体 。适合矮化菊花试管苗快繁 的最佳外源激素组合为 １５ｍ ／ Ｂ Ｏ０ ５ｍｇＬＮ Ａ。 ． ｇＬ６一 Ａ＋ ．７ ／ Ａ
关键词 ： 矮化 菊花 ； 试管苗 ； 生根 中图分类号 ： ６ ２ １ ０ ４ ￥ ８ ． １． 文献标 志码 ： Ａ 文章编 号 ：０ ２—１０ （０ ２ Ｏ １０ ３２ ２ １ ）９—０ ５ ０ １９－ ２
０ １ｍ ／ Ａ Ｍ ３ ０ｍｇＬＢ ０ １ ｇ ＬＮ Ａ的 增殖 培 ． ｇＬＮ Ａ、 Ｓ＋ ． ／ Ａ＋ ． ／ Ａ ｍ
２ ３ Ｎ Ａ对矮化 菊花试管苗继代培 养的影响 ． Ａ 随 Ｎ Ａ浓度 的降低 ， Ａ 矮化菊花试管苗的繁殖 系数呈现先
升高后 降低 的趋势 。在 Ｎ Ａ浓度为 ０ １０ ０５ ０ ０ 、 ｇ Ｌ Ａ ． 、．７ 、．５ ０ｍ ／ 时 ， 化 菊 花 试 管 苗 的 繁殖 系 数 分别 为 ６ ８２ ５ ７ １５ 矮 ． ４ 、 ．６ 、
实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制
（３）调节培养基的酸碱性至pH5.8
由于培养基的pH值直接影响到培养物对离 子的吸收，因而过酸或过碱都对植物材料 的生长有很大影响。此外，琼脂培养基的 pH值还影响到凝固情况。所以，当培养基 配制好后应立即进行pH值的调整。最好用 酸度计测试，既快又准，如无条件也可用 精密pH试纸。培养基若偏酸时用lmol· L-1 NaOH来调节，偏碱则可用lmol· L-1 HCl来 调节。一般来说，当pH值高于6.0时，培 养基将会变硬；pH值低于5.0时，琼脂不能 很好地凝固。
（４）培养基的分装
配制好的培养基要趁培养容器加注量占其容积 的1/4～1/3为宜，果酱瓶每瓶20～30ml， 太多既浪费培养基，又减少了培养材料的 生长空间；太少又会因营养不良影响生长。 培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并 用橡皮筋扎紧。
5 马铃薯试管苗快速繁殖培养基 的配方设计及配制体积
培养基配方设计：（1）根据培养的目的选 择一种培养基为基本培养基。（2）确定培 养基中各种激素的浓度及相对比例 配方： MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗 糖 配制体积：每小组配制0.5L
6 马铃薯试管苗快速繁殖 培养基的配制流程
6.2 培养基的配制步骤
（１）根据需要配制的培养基的量称好所 需的琼脂（0.７～0.８％），撕碎后放入 医用口杯中，加入适量的蒸馏水（估计加 入母液后不超过配制总量）置于电磁炉上 加热溶解，边加热边用玻棒搅动。
（２）待琼脂完全溶解后，加入规定用量 的母液（可事先取好放于一烧杯中），再 加入规定用量的蔗糖，继续加温并不断搅 拌，待琼脂煮透后端离火源，根据培养基 配方及培养基体积加入所需要的生长调节 物质，最后加蒸馏水至所需体积。
3 主要实验用具和仪器
冰箱、普通天平、三角瓶、果酱瓶、移液 管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用 口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、 称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、棉线、 电炉、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉等。
马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖与移栽(实验报告)
学号
114120***
姓名
￥ * @
学院 生命科学学院 实验课程名称 教师及职称 开课学期 填报时间 2013பைடு நூலகம்2014 至
专业、班级 11 应用生物教育？班 植物组织培养实验 龙 维 彪（讲师） 2014 年 6 学年 月 下 10 学期 日
云南师范大学教务处编印
一．实验设计方案
2） 、实验结果
马铃薯试管苗培养情况（已培养 5 周） ： 实验结果记录表 总接种瓶数 污染瓶数 未污染瓶数 生长情况 2瓶 总接种茎段数 每瓶中各有 9 棵马铃薯苗 0瓶 2瓶 根分生多，白色，粗短，且有结节状膨大。部分苗茎 瘦弱，分支情况差，有叶片枯黄。 马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖 （条件培养基培养 5 周） 共得到马铃薯微型薯 2 瓶，两瓶均无污染。马铃薯脱毒试管薯苗根分生多，白色，粗短，且有结节状膨大。 苗茎瘦弱，分支情况差，有叶片枯黄。
教师评语及评分：
签名： 年 月 日
2） 、实验结果
马铃薯脱毒试管薯苗快速繁殖得到的 2 瓶共 1 8 株马铃薯苗种下后，长势较好， 有新的芽和叶子长出，少部分被虫要过，有的被雨点淋过以后由于植株不是十分健 壮，呈现出倒伏的样子。具体情况如下图：
2、对实验现象、实验结果的分析及其结论 （1） 、马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖
1） 、实验中共进行两瓶马铃薯快繁，长势均良好，说明实验的操作过程没有出现污 染问题，培养基的营养素搭配得当；两瓶快繁苗中培养基量均明显减少，原因为其 中的水分和营养物质被植株所消耗。 2） 、马铃薯苗有的叶子发黄，可能是长时间的培养后，培养基中的营养成分缺乏， 也会造成微型薯营养不良。 3） 、光照对苗的快繁影响较大。中期观察发现，苗未直立生长，且整体向一个方 向倾斜，有较明显的向光生长趋势。后期对培养瓶移位，改变捕光方向和位置后， 有明显改善。这是由于培养架内各处光照不均匀，以至偏向角落的苗向光生长。 4） 、马铃薯试管苗快繁过程中发现，有的苗始终不长高，且不生根。这是由于扦插 时，违背了其形态学特性，故不生根。
提高繁殖速度的方法
提高繁殖速度的方法1、 试管繁殖速率及计算统计试管苗增殖速度，有以苗为单位，也有以芽或未生根的小茎作单位的，以原球茎球状体或胚状体因难以统计，则以瓶为单位。
大多数以芽和苗作单位。
由于试管苗在无菌条件下生长，营养充足，温度适宜，光照充分，100%的相对湿度，又不受季节、气候的限制，也无病虫的危害，故增殖极快，那么，怎样计算其增殖速度呢？计算增殖速率有理论计算和实际计算两种。
实践中要受到多种因素制约，困难很多，因此实际产苗要远远低于理论数字。
但理论计算可以作为一个计算产量的指标，提供参考，有它的积极意义。
试管苗理论上一年能繁殖多少，可用下面的简单公式计算：Y=mXnY= 年繁殖数m=无菌母株苗数X=每个培养周期增殖的倍数n=全年可增殖的周期次数例如月季每5周转接一次，甲品种每次增殖3倍，乙品种每次增殖5倍，丙品种每次增殖7倍，假定一开始都是一个芽，那么这三个品种一年能繁殖多少呢？根据公式可知：n= =10.4，即每年可转接10次，那么这三个品种年繁殖率分别计算如下：甲品种Y=1×310=59000=5.9×104乙品种Y=1×510=9760000=9.76×106丙品种Y=1×710=282000000=2.82×1082、 提高繁殖速度的方法不仅试管苗的繁殖类型不同，而且在试管内又受到基因型、外植体来源、年龄、部位、培养基种类、附加成分和培养环境等多种因素的影响，应通过具体试验来摸索每种植物最快最好的繁殖方法。
1.改进培养基长期以来，根据培养的组织不同，目的不同，已设计了许多种培养基。
初代培养能否进行增殖，培养基的选择是一个关键。
MS培养基可以适用于许多植物的培养，但在大量组织器官培养中发现，由于其无机盐浓度较高，对某些植物来说出现了抑制生长甚至毒害作用，例如，扑虫堇（pinguicula moranensis）的叶，接种到1/2LS培养基中死亡率很高（LS和MS的无机盐一样），在1/5LS培养基中效果很好，而越橘的嫩茎在1/4MS培养基中生长良好，作为热带气生兰的许多种类均需要较低的盐浓度。
实验二 试管苗增殖与生根培养
植物组织培养过程
1
离体条件 5 2
3
4
White培养基配方（mg/L）
成份 Na2SO4 含量 200
KNO3
CaNO3.4H2O MgSO4.7H2O NaH2PO4.H2O
80
300 720 16.5
KCl
H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O MoO3 FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇
② White培养基（1963） White1963设计 特点 具有较低的无机盐。 细胞分化过程中对无机盐要求较低，有利于 分化。特别适用于根的分化。
三、实验操作
无菌操作同前
增殖培养基(有标签 Z)
生根培养基
三、实验操作
(一)试管苗增殖培养
1.实验材料：文心兰 2.增殖培养基配方： MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L
65
1.5 7
3
0.0001 5560 7460
100
0.3 0.1 0.1 3
盐酸硫胺素
甘氨酸
①MS培养基
1962年日本的Murashige 和美国的Skoog 二人为烟草 培养设计。是最常用的，也是最基本的培养基。
特点 无机盐含量较高，配比合理，符合植物细胞生长的营 养生理需求；硝酸盐含量和氨离子浓度较高。
文心兰试管苗继代增殖
3.操作步骤 3.1 铺开无菌纸，将一丛文心兰试管苗置于无菌纸 上，分离成单株。 3.2用手术刀认真清理基部的老叶、黄叶和残留培 养基。 3.3接种至增殖培养基上，4个单株/人。 3.4标签上记录姓名、日期。
植物快速繁殖技术实验指导
《植物快速繁殖技术》实验指导国平编生态与资源工程系2014年 1月 8日目录前言 III学生实验守则IV实验一观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术1实验二金线莲的快速繁殖技术3实验三铁皮石斛的快速繁殖技术5实验四一种植物的组织培养与快速繁殖8前言植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官 ( 如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体 , 在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
近 40 年以来，植物组培技术已渗透到植物生理学、病理学、遗传学、药学、育种以及生物化学等各个研究领域，为快速繁育优良品种，培育无毒苗木，进行突变筛选培育，药用植物工厂化生产，种质保存和基因库建立等方面开辟了新途径，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。
现如今，植物组织培养技术具有保持花卉优良性状、培育脱毒苗木、保存种质资源等优势，根据这些优势，植物栽培技术也被广泛应用于花卉的种苗繁殖与生产之中。
学生实验守则一、自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室安静，注意环境卫生，不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。
二、实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。
贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。
三、爱护实验仪器设备，厉行节约。
仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。
凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。
四、实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。
若需借用应办理借物手续。
五、注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。
六、实验结束，由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备，学生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。
实验一观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术一、实验目的掌握利用种子作为外植体进行快速繁殖的方法；掌握试管花卉的培养技术；了解植物开花的影响因素。
植物快速繁殖技教案5篇
植物快速繁殖技教案5篇第一篇：植物快速繁殖技教案植物快速繁殖技术（教案）5.1植物快速繁殖技术概述概念就是应用组织培养基本技术，快速繁殖名优新品种，使其在较短的时间内繁衍较多植株；快速繁衍珍稀濒危植物，使植物得以保存。
也叫组培快繁、组培苗生产、试管苗生产。
特点：第一个形成产业生产力的技术体系；农业育种方面具有重要应用价值；实现种苗繁殖产业化和商业化。
一、组培快繁方式的优势1、2、3、可在短时间内实现高质量、大批量的植物快速目标；繁殖系数高、繁殖过程不受季节和环境的影响；不存在种子（有性）繁殖中存在的世代（由于基因改变致使性状改变）的问题；4、高效的植物繁殖方法。
二、组培快繁的实质1、有性繁殖（种子繁殖）：采用种子繁殖的自然方法。
其后代形状会发生改变。
2、无性繁殖（营养繁殖）：采用营养体或组织培养技术进行繁殖的方法。
其后代能够有效保持母本的性状。
三、组培快繁的途径及方法1、用植物的根、茎、叶、叶柄、花等片段、孢子体作为外植体进行组培；2、取茎尖、腋芽进行离体培养。
3、4、植物快速繁殖的类型及方式，见表5—1（P.65）影响器官分化的因素：（1）、培养材料的种类、外植体的部位和生理状态；（2）、培养基的种类、植物激素的配比和浓度；（3）、温度、湿度、光照时间和强度、通气状况等培养环境。
四、外植体材料的选择和处理1、繁殖能力或再生能力：作为快速繁殖的外植体应该具有营养芽的枝条、幼嫩的组织或器官。
2、再生方式的遗传稳定性：外植体种类不同会影响繁殖植株的方式→影响繁殖种苗的遗传稳定性。
变异会影响群体中各个个体的性状表现或对产品质量难以预料和把握。
五、实现组培快繁的一般方式1、侧芽繁殖方法：控制好细胞分裂素的浓度，培养周期为20—30天，增值率为3—5倍。
2、外植体直接产生不定芽或补丁胚的方法：受植物本身特性的影响，只有少数种类的植物适用于此方法。
3、经过愈伤组织阶段或不定胚的发生途径：种类不同，繁殖率高低不同；新植株变异大。
植物快速繁殖
植物病毒在植物体内的分布
• 病毒侵柑植株的叶片后，经过一段时间，即向 附近的细胞增殖转移。转移速度很慢，每小时 只有几微米。当叶片内病毒浓度增大到一定量 时，就转移到韧皮部，随后通过维管束转移到 其它部分。由于病毒转移速度慢，加上茎尖分 生组织无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递， 赶丌上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的 病毒数量极少，几乎检测丌出。茎尖培养时， 切取的茎尖越小，带病毒的可能性就越小。— —茎尖脱毒的基本原理 • 必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，丌 是绝对的。
离体无性繁殖的程序
植物脱毒
植物病毒
• 定义： 由植物病毒寄生引起的病害。 • 症状： 变色、坏死、畸形等。
现已发现的植物病毒有500多种，一些植物病毒 相当严重，给生产造成极大损失，如葡萄扇叶病 毒。使葡萄减产10%~50%，花卉病毒使球根、 宿根等花卉严重退化，致使花少而小，甚至造成 畸变和变色。利用组织培养脱毒后所得到的无毒 植株，形状明显优于原来柑病植株。
植物快速繁殖技术是植物细胞工程技术的一个重 要组成部分，在生产中起的作用最大，应用也最 广泛。 加速育种 提高物种优良性状 工殖周期长，数量也现对较少，一粒种子发 育成一株新植株。而运用快速无性繁殖技术可在短期内 获得大量遗传性一致的植株，如石刁柏一个腋芽半年可 以繁殖1200倍，一株的腋芽一年可繁殖7万株。 传统的的无性繁殖方法如扦插、分根、压条、嫁接等方 法 繁殖系数低、速度慢，丌能适应现代化生产要求，但 快速无性繁殖技术周期短、速度快、效率高 ，在植物优 良品种的快速繁殖及推广方面取得了巨大成功。 同时可用于珍稀植物的快速繁殖，抢救不繁殖珍、稀、 濒危植物，比如红豆杉。
低温处理
• 亦称冷疗法。例如菊花在摄氏5度条件 下分别处理4个月或7.5个月，无菊花 矮化病毒苗分别是67%和73%。无菊 花褪绿斑驳病毒苗占22%和49%，未 经处理的茎尖则无脱毒效果。
快速繁殖资料.
园林植物快繁技术说明试题题型与题量比较题：5个小题，每小题6分，共30分。
简述题：5个小题，每小题8分，共40分。
论述题：2个小题，每小题15分，共30分。
考试范围全书其他问题考试时间2小时满分为100，及格分为60分考试时无需带工具绪论1、植物离体培养是指通过无菌操作，使植物体的各类结构材料(外植体)，接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下，进行离体培养的一套技术与方法，通常称之为植物组织培养或植物的细胞与组织培养。
2、离体培养技术体系胚胎培养及以胚胎为基础的培养技术器官及器官原基培养组织培养细胞培养原生质体培养及以原生质体为基础的培养技术第一章离体培养的基本操作方法1、外植体植物离体培养中的各种接种材料。
包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
2、外植体的选择选择优良的种质选择健壮的植株选择外植体的大小选取外植体的时期选择细胞培养材料3、培养材料的处理母株的预处理外植体休眠期的处理外植体的灭菌4、培养基外植体生长的营养物质，通常有两个水平，一是基本培养基，包括大量元素和微量元素、维生素和氨基酸，还有糖和水。
二是完全培养基，即在基本培养基的基础上，附加各种植物生长调节剂以及其它的复杂有机附加物。
5、固体培养基和液体培养基的比较固体培养基•设备简单，使用方便•不能充分利用培养容器中的养分•易造成自我毒害液体培养基•需要一定的的设备•有利于外植体的生长•避免上述固体培养基的缺点6、无菌室无菌室的要求无菌室的灭菌7、试材和器具的灭菌培养基的灭菌特殊药品的灭菌器皿(具)灭菌外植体的灭菌8、无菌操作无菌操作前10min先使超净工作台处于工作状态。
穿戴好工作衣帽后，用70％酒精擦拭双手和工作台面，操作期间也应再擦拭数次。
拔塞前，要用火焰灼烧瓶口。
用硫酸纸等做瓶盖的，应在火焰附近打开盖子。
操作时，试管口应略略向下，避免尘埃杂菌落入管内，又便于操作。
第二章胚胎培养和离体受精1、胚培养的意义促使发育不良或中途败育的胚发育成熟打破休眠期促进胚萌发克服多胚品种珠心胚的干扰快速繁殖良种砧木诱导胚性愈伤组织2、成熟胚的培养材料的消毒与接种培养基种胚培养的外界条件3、原胚培养基本培养基生长凋节剂及其它附加物的影响4、离体受精也称离体授粉或试管受精，它是把未授粉的胚珠或子房从母体上切离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌的花粉，使之在试管内受精，应用这种技术，可以使花粉不经柱头和花柱组织，直接进入子房中的胚珠，有可能克服所谓孢子体型的不亲合，从而得到远缘杂种。
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2.2.3 叶的培养
1.成苗途径与意义 2.材料选择与消毒 3.接种 4.培养
2.2.3.1 材料选择与灭菌
幼嫩叶片流水冲洗 70-75%酒精漂洗10s 饱和漂白粉液浸3-15min（或在0.1%升汞
液5-8min） 无菌水冲洗多次后，用无菌滤纸吸干水分
2.2.3.2 接种
外植体大小： 5×5mm薄片
2.4.2 试管苗的驯化
目的：提高试管苗的适应性，促其健壮，最 终提高移栽成活率
原则：从温、光、湿度及有无杂菌等环境因 素考虑。驯化开始数天内，与培养环境条 件相似；后期与预计栽培条件相似，逐步 适应。
方法：即炼苗。不开口自然光下2-3天，然 后开口1-2天。
2.4.3 移栽基质的选配
河砂:河砂分为粗砂、细砂两种类型。 粗砂即平常所说的河砂，其颗粒直径 为1-2mm。
2.1.2 试管苗快速繁殖的一般程序
一般选择根、茎、叶器官为培养 材料进行培养、壮苗与生根培养、 试管苗驯化与移栽几个环节。
2.2 器官培养
2.2.1 根的培养
①研究根系生理代谢的优良实验体系 ②研究营养吸收、生长和代谢的变化规律 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种
2.2.1.1 根无性繁殖性的建立
②茎尖流水冲洗2-4h ③75%酒精迅速漂洗30s ④0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液消毒 5-8min(取自老枝条上的可适当延长时间）
2.2.2.3 接种
接前可再剥去一些 叶片。然后随切随 接，动作迅速。亦 可将切下茎尖材料 在1-5% VC液中浸一 下。
2.2.2.4 培养
培养基
①基本培养基：MS、White、B5、Heller。
2.3.2 试管苗的生根培养
生根培养基：1／2或1／4MS基本培养 基；不加或少加CTK，适量添加NAA； 糖浓度1-1.5%。
培养条件：增加光强，达300010000lx。
2.3.2.1 生根方法与途径
将新梢基部浸入50 ppm或100 ppm IBA溶液中处 理 4-8h；
在含有生长素的培养基中培养 4-6d 直接移入含有生长素的生根培养基中。 容易生根的植物，延长在增殖培养基中的培养
2.4 试管苗的驯化与移载
试管苗生态环境与自然环境的差异 试管苗的特点 试管苗的驯化 试管苗的移栽
2.4.1 试管苗的特点
2.4.1.1试管苗的生态环境
（1）高温且恒温 （2）高湿 （3）弱光 （4）无菌
2.4.1.2 试管苗的特点
（1）生长细弱，角质层不发达 （2）光合作用差 （3）叶片气孔数少，活性差 （4）根吸收功能弱
接种
材料处理及 消毒
取材
2.2.2.1 取材
①直接取材：在生长旺
盛、枝条健壮、无病的母 株上选生长不久、杂菌污 染少的顶梢（1－2cm） （取前可喷杀菌药，可顶 芽或侧芽）。
②从试管苗获取。
取1-2㎝顶梢
2.2.2.2 材料处理及消毒
①顶梢切割成0.5-1.0cm的茎尖（除叶,剥 去休眠芽的鳞片）
②蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。
③激素和有机添加物有明显影响。但激素 浓度以0.1mg/L为宜，不要太高。
培养条件
①光强：1000－3000lx；光照时间：16h。 ②温度：25℃左右 ③ 昼夜温差有或无，以植物或培养过程来定 ④ 干燥季节注意保湿。
2.2.3 茎段的培养
2.2.3.1 材料选择与处理
嫩枝去叶，剪3-4cm长 水冲洗1-3h,75%酒精30-60s， 0.1%
升汞3-8min(饱和漂白粉液10-20min， 无菌水冲洗数次。
2.2.3.2 接种与培养
培养基：MS
腋芽增殖效果 ：BA KT、ZT，生长素改 善苗生长，GA促芽伸长。注意激素配比。 继代增殖途径：促腋芽快速生长；诱导形 成不定芽。
时间即可生根； 适当降低增殖倍率，减少细胞分裂素的用量，
即可增殖又可生根； 对易生根植物，切割粗壮的嫩枝用生长素溶液
浸醮处理后在营养钵中直接生根，此方法省去 了生根阶段，但只适于一些容易生根的植物。
2.3.2.2 影响试管苗生根的因素
植物材料 基本培养基 植物生长调节剂 培养条件 其它物质
2.2.4.4 植株再生途径
直接产生不定芽 形成愈伤组织 形成胚状体 其他途径
2.3 壮苗和生根培养
2.3.1 试管苗的壮苗培养
较高浓度的生长素与较低浓度的细胞分裂 素组合有利于形成壮苗.
在生产实际中，增殖系数控制在 3.0-5.0时 可实现增殖和壮苗的双重目的。另外，改善 培养室环境条件，如增加光照强度、降低湿 度等对培养壮苗也有一定帮助。
第2章 植物快速繁殖技术
2.1 试管苗快速繁殖意义和一般程序
2.1.1 试管苗快速繁殖意义
试管苗快速繁殖，是指利用植物组织培 养技术对外植体进行离体培养，使其短期 内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。
试管苗快速繁殖是植物组织培养技术在 农业生产中应用最广泛、产生经济效益最 大的研究领域，涉及的植物种类繁多，技 术日益成熟并程序化。
上表皮朝上接种 培养基。最好带 叶脉，注意极性
2.2.3.3 培养
培养基：MS、B5、White 、N6；蔗糖3%；
2.4－D利于愈伤组织形成，NAA抑制芽形 成，利于根发生，KT、6BA利于芽形成。
培养条件：25－28℃，10－14h光照，
1500-3000lx （不定芽分化和生长再强 些）。
概念：切取茎的先端或茎尖分生组织进
行无菌培养。
意义：微茎尖培养可获得脱毒苗；茎尖
培养技术简单，操作方便，易成活，成 苗时间短，加快繁殖。
茎尖培养的类型
类型：根据培养目的和取材大小分为： 微茎尖培养;普通茎尖培养
普通茎尖指几毫米到几 十毫米的芽尖及侧芽。
பைடு நூலகம்微茎尖为0.3-0.5mm
茎尖培养的方法
培养
草炭土:草炭土是由沉积在沼泽中的植 物残骸经过长时间的腐烂所形成，其 保水性好，蓄肥能力强
根无性繁殖系
无菌种子
接后1周 1.2cm
侧根 反复转接
2.2.1.2 培养
多为无机离子浓度低的怀特培养基。也可用2 ／3 MS或1／2MS、B5培养基 注：离体根生长要求
提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好， 加入B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。 培养温度25－27℃，暗光培养。
2.2.2 茎尖培养