实验二 试管苗增殖与生根培养
苏教版选修三 植物细胞工程 学案
课题：第二节植物细胞工程（第一课时）一、学习目标1、说出细胞全能性的含义及其在植物组织培养中的应用（B）2、尝试进行植物组织培养，体验植物组织培养技术（B）3、简述植物体细胞杂交技术（B）4、例举植物细胞工程的实际应用（B）二、学习重点难点1、植物组织培养的原理和过程2、植物体细胞杂交的原则三、使用说明及方法指导1.完成教学案填空内容，习题。
2.可以合作探究与同学讨论。
四、自主复习内容：1．什么是细胞工程？它和基因工程有什么区别？2．什么是植物细胞的全能性？植物细胞具有全能性的原因是什么？思考与讨论：1.什么是细胞的分化？细胞分化的过程中，会发生遗传物质的改变2．在正常条件下，细胞的全能性都会表现出来吗？3．分析图2—5，概述植物组织培养技术的基本过程。
4．什么是脱分化？什么是再分化？什么是愈伤组织？愈伤组织的特点？5．什么是植物体细胞杂交技术？它具有什么优点？6．在进行植物体细胞杂交之前，为什么要去除细胞壁？通常用什么方法去除细胞壁？去除细胞壁以后的植物细胞叫什么？【分析】（1）由于植物细胞壁阻碍了植物细胞的融合，所以在进行植物体细胞杂交之前，必须要先去除细胞壁。
（2）去除细胞壁一般是采用酶解法，即用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞以得到具有活力的原生质体。
这里是利用了酶的专一性原理7．怎样诱导两个不同原生质体的融合？原生质体融合完成的标志是什么？这与细胞中哪种细胞器有关8．分析图2—9，概述植物体细胞杂交的基本过程。
（1）说出①～⑤步骤表示的含义。
（2）将植物细胞A和植物细胞B的得到的原生质体诱导融合，在培养基上至少存在几种类型的细胞（只考虑两个细胞的融合）？五、教学流程（一）、知识回顾，导入新课一、植物组织培养（必修1内容）1、植物细胞的全能性（1）生物细胞的全能性生物体细胞一般都是受精卵经有丝分裂形成，因而都含有生物一整套遗传物质，都具有发育成完整个体的潜能。
但在生物体上有时不能表现出其全能性，只能通过分化形成不同的组织、器官，这是在特定的环境、激素等的影响下基因选择性表达的结果。
不同培养基对紫薇试管苗的诱导·增殖·生根的影响
Ｚ ＩＨｏ ｇｊ ｔ ｌ （ ｅａｔｅｔ ｆ ｉｏｙＥ ｇｎｅｉｇⅪ ＨＡ ｎ －ｉ ｅ ｅ ａ Ｄ ｐｒ ｎ ｏ ｇ ｎｉｅｒ ， ｍ ｏＢ ｌ ｎ Ｖ ｃｔｎｌ ｅｈ ｉ ｌ ｏ ｅｅ Ｘａｇ ｎ Ｈ ｂ ｉ １２ ） ｏａｉ ａ Ｔｃｎｃ ￣ ｇ ， ｉ ｆ ， ｕｅ ０ １ ｏ ａＣ ｎａ ４ Ａ ｓ ａｔ ［ ｂ ｃ ｖ ］ ｈ ｍ ｕ ｔ ｔ ｖ ＇ ｔ ｉ ｒ ｓ ｔ ｏａ ｔｎｒ ｅ ｆ ａｅ ｕｅ ｉ ｉ ｉ ｎ ｔ ｌ ｈ １ ｉ ｒ ｉ ｐ ｐｇ￣ｎｓ — ｂｌ ｅ Ｏ ｅｔｅ Ｔ ｅ ｐ ｅｏ ｈ ｓ ｄ ｇ ｏ ｎ ｅ ｅ ｈ ｐ ｐｇ ｉ ｔ ｏ ｇｒ ｏ ａ ｎ ｅ ａｄｅ ａ ｉ 廿 ｓ ａ ｄ ｍ ａ ｏ ｓ ｒ ｉ ｐ ｓ ｆ ｅ ｕ ｗｓ ｃ ａ ｅ ｒ ａｏ ａ Ｌ ｓ ｍ ｄ ａ ｓｂ ｓ ｅ ｔ ｐ ａ ｙ ｔ ．『 ｔ ｄ ｔ 、ｉｄｃ ｅｄ ｓｔｅｅｐａｔ， － Ａ， Ａ ａｄＫ ｉ ｉｅ ｎ ｏｃ ． ｅ ｄｅ ｎｏ ｅ ｎ ｒ Ｍｅ ｏ １Ｗｉ Ｌ ｎ ｉ ｓｅ ｓ ｈ ｘｌ ｓ ６Ｂ Ｎ Ａ ｎ Ｔｗｔ ｄ ｒ ｔ ｎｎ ｗ ｒ ａｄｄｉｔＭＳｍｅｉｉ ｏｓ ｄ ｈｅｅｅｔ ｆ ｉｅ— ｈ ｈ ａ ａ ｎ ｈ ｆｅ ｃ ｅ ｄｕｎｔ ｔ ｙｔ ｆｃ ｄｆ ｒ ｕ ｏ
试管苗的增殖和生根培养
盐母液：80ml；钙盐母液160ml;有机物母液80ml。
1mg/L 6-BA取8ml，0.1mg/L NAA取16ml。
混匀。
c.待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（240g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即8L。
注意：a)、调节培养基的酸碱性至pH5.8b)、培养基的分装，配制好的培养基要趁热分装，培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧。
本次实验中4L分装到150个左右三角瓶，每人3瓶。
2. 培养基的灭菌培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。
消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。
同时将接种工具进行灭菌。
3．试管苗转接（1）准备：提前将经过灭菌的培养基、接种工具、吸水纸、器皿及待转接材料放入超净工作台内，打开紫外灯消毒20min。
（2）转接：对菊花、香石竹、马铃薯、月季等节间明显的多茎段嫩枝材料，采取切茎段的方式，茎段长1cm左右，带1-2个茎节，可将茎段垂直插入培养基中，或水平放入培养基表面，一刺激侧芽的萌动；对生姜，草莓等茎间不明显的芽从，采取分离芽从的方式扩繁。
c.待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（240g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即8L。
2. 培养基的灭菌培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。
消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。
同时将接种工具进行灭菌。
3．试管苗转接（1）准备：提前将经过灭菌的培养基、接种工具、吸水纸、器皿及待转接材料放入超净工作台内，打开紫外灯消毒20min。
植物组织培养实验指导
生物技术大实验第一部分植物组织培养实验一、母液的配制和保存（3学时）一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。
二、原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。
使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩10倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩100倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩100倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩100倍）等。
三、实验仪器设备和试剂冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(100ml，500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2•EDTA•2H2O，KI, FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水四、实验方法1、MS大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约350ml，放入500ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4•4H2O，ZnSO4•7H2O ，H2BO3，KI ，NaMoO4•2H2O，CuSO4•5H2O，CoCl2•6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
植物组织培养技术
楚雄师范学院化学与生命科学系生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：031106014课程中文名称：植物组织培养技术课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology课程性质：专业选修课使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业开课学期：第7学期总学时：36+27总学分：3预修课程：植物学、植物生理学课程简介植物组织培养技术是将植物的离体材料器官、组织、细胞、原生质体等）无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。
本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。
通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。
教材建议《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。
参考书《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。
《植物组织培养（第三版）》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。
《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。
《高等植物组织离体培养的形态建成及调控》，黄学林编著，北京：科学技术出版社，1995 年，标准书号：7-03-004377-4。
《植物组织培养》，王水琦编著，北京：中国轻工业出版社，2007年，标准书号：978-7-5019-5818-4。
《植物组织与细胞培养》，陈耀锋编著，北京：中国农业出版社，2007年，标准书号: 978-7-109-11844-7。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
添加IBA和6-BA对山桃试管苗增殖及生根的影响
添加IBA和6-BA对山桃试管苗增殖及生根的影响作者：张雪冰张帆吴鑫泉王鸿王立来源：《甘肃农业科技》2020年第06期摘要：研究了IBA和6-BA组合对山桃试管苗增殖及生根的影响。
结果表明，在改良QL 培养基中添加IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.6 mg/L最适宜山桃试管苗的增殖生长，增殖倍数可达到3.56倍。
IBA浓度为1.0 mg/L时，生根率达95.83 %。
关键词：山桃;组织培养;增殖;生根中图分类号：S662.1 文献标志码：A 文章编号：1001-1463（2020）06-0019-03doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2020.06.006Screening Test of Pepper Cultivars Cultivated on Substrate in Gobi Solar GreenhouseMA Yanxia， WANG Xiaowei， ZHANG Yuxin， KUAI Jialin， KANG Enxiang， ZHANG Junfeng（Institute of Vegetable， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou Gansu 730070， China）Abstract：In order to introduce the cultivar of pepper suitable for the substrate cultivation in the solar greenhouse of Hexi gobi， the experiment on the cultivation of the cultivar of pepper on the substrate of greenhouse was carried out in the gobi desert， Baba village， Heli town， Gaotai county. The results showed that the comprehensive performance of Longjiao 11 was better than other cultivars， with good growth potential. The fruit long was 26.6 cm， shoulder width 32.3 mm， flesh thickness 2.5 mm， weight of single pepper 54.6 g， and the yield per plant was 1.4 kg， equivalentyield reached 71 401.5 kg/hm2. The comprehensive analysis shows that Longjiao 11 is suitable for promoting cultivation in the substrate culture in solar greenhouse of Hexi gobi.Key words：Gobi greenhouse;Substrate culture;Pepper;Cultivar screening桃是我國主要栽培的果树之一，面积和产量均居世界首位。
植物组织培养试卷
植物组织培养试卷一、名词解释：（每小题3分，共15分）1．初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。
2．脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。
一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。
3．液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。
4．细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。
5．再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。
二、填空（每空1分，共40分）1．植物组织培养过程中，最常用的培养基是，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用和调节pH，大多数植物的pH要求调节在范围内。
2．可以通过、、、、等措施预防褐变的发生。
3．植物组织培养时，外植体可以是、、、。
4．应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为→ → → → 。
5．组织培养植株的再生途径有两条：一是发生，另一是发生。
6．在配制培养基时，可以在培养基中添加，利用其吸附能力，可以降低褐变的发生，但它对物质的吸附。
7．培养基的灭菌要求压力为、温度为、维持时间为。
8．组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为 > > > 。
9. 茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段，即、、、、。
10．茎尖分生组织培养的目的主要是，其茎尖一般取毫米。
为了使脱毒效果更好，可以将茎尖分生组织培养与结合起来。
脱毒处理的试管苗，在用于生产之前，必须进行。
11．污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、。
三、判断正误，并改错。
（每小题2分，共20分）1．一般将微量元素母液均配制成10倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。
植物组织培养的一些注意事项1
植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。
其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。
LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。
2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。
①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。
②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。
③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。
3 、中等无机盐含量的培养基①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。
适于花药培养。
②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比H 培养基高10 倍。
也适合于花药培养。
③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。
适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。
4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。
有以下几种:①改良怀特培养基(White 1963 )②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966)③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。
④贝尔什劳特液(Berthelot 1934)⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。
智慧树知到《植物组织培养》章节测试答案
智慧树知到《植物组织培养》章节测试答案绪论1、由一个成熟细胞转变为分生组织状态或胚性细胞状态的过程称为（）。
A:分化B:脱分化C:再分化D:转化答案:脱分化2、由离体器官直接产生小植株的发生途径属于（）。
A:直接器官发生型B:间接器官发生型C:胚胎发生型D:无菌短枝扦插答案:直接器官发生型3、大部分兰花的发生途径是（）。
A:直接器官发生型B:间接器官发生型C:胚胎发生型D:原球茎发生型答案:原球茎发生型4、木本植物常采用（）发生途径。
A:直接器官发生型B:间接器官发生型C:胚胎发生型D:无菌短枝扦插答案:无菌短枝扦插5、植物组织培养的特点有（）。
A:取材少，培养物经济B:培养条件XXX为掌握C:生长周期短，繁殖率高D:管理方便，有益于主动化掌握谜底:取材少，培养物经济,培养条件可儿为掌握,发展周期短，繁殖率高,管理方便，有益于主动化掌握6、下列具有细胞全能性的细胞是（）。
A:成熟的老细胞B:幼嫩的组织细胞C:愈伤组织细胞D:番茄的受精合子答案:成熟的老细胞,幼嫩的组织细胞,愈伤组织细胞,番茄的受精合子7、下列哪些属于愈伤组织的特点（）。
A:无组织结构B:高度液泡化C:细胞大而不规则D:没有次生细胞壁和胞间连丝谜底:无组织结构,高度液泡化,细胞大而不规则,没有次生细胞壁和胞间连丝8、按所用培养基类型可以划分为（）。
A:固体培养B:液体培养C:种子培养D:细胞培养答案:固体培养,液体培养9、按培养过程可以分别为（）。
A:固体培养B:液体培养C:初代培养D:继代培养答案:初代培养,继代培养10、胚胎培养的目的是克服败育和三倍体育种。
A:对B:错谜底:对11、将培养物转移到配方相同的新鲜培养基上进行培养称为初代培养。
A:对B:错答案:错12、所有的离体材料都可以称作为外植体。
A:对B:错答案:错第一章1、接种室里配备主要仪器设备有（）。
A:蒸馏水器B:XXX事情台C:药品柜D:培养基灌装机答案:超净工作台2、调整培养基pH所用到的仪器是（）。
植物组培 实验二
植物组培实验报告实验二、培养基的配制及灭菌一、实验目的1、熟悉植物组织培养的一般工作流程。
2、了解培养基的成分、类型及特点。
3、能正确进行培养基的配制及灭菌操作。
二、实验原理植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作，对场地有一定的要求，需配备必要的仪器设备和器皿、器械，还必须熟练掌握每个环节的操作技术。
植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽，其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。
三、实验内容1、培养基的成分以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
１．水作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中。
配制：培养基母液时要用蒸馏水：配培养基时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水。
２．无机元素大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。
其作用是：(1)N功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。
供应形式：含有ＮＯ3－N又含ＮＨ4－N。
ＮＨ4－N对植物生长较为有利。
在制备培养基时以这两种形式供应。
供应的物质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。
有时，也添加氨基酸。
(2)P功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。
磷也是核酸、ＡＴＰ、辅酶等的组成成分。
组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。
供应形式：常用的物质有ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。
(3)K功能：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。
Ｋ增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。
但浓度不易过大，一般为１～３mg/l 为好。
供应形式：制备培养基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。
第二章-试管苗快速繁殖课件
2.2.3.3 培养
培养基：MS、B5、White 、N6；蔗糖3%；
2.4－D利于愈伤组织形成，NAA抑制芽形 成，利于根发生，KT、6BA利于芽形成。
培养条件：25－28℃，10－14h光照，
1500-3000lx （不定芽分化和生长再强 些）。
（1）适当控制培养基中无机盐成分。 （2）适当提高蔗糖和琼脂浓度。 （3）适当降低CTK和GA的浓度。 （4）增加自然光照，控制光照时间； （5）适宜的培养温度。 （6）改善培养器皿的气体交换状况 。 （6）培养基中添加其它物质 。
2.7 植物无糖培养
植物无糖培养快繁技术又称为光自养微繁 殖技术，是指在植物组织培养中改变碳源的种 类，以CO2代替糖作为植物体的碳源，通过输 入CO2气体作为碳源，并控制影响试管苗生长 发育的环境因子，促进植株光合作用，使试管 苗由兼养型转变为自养型，进而生产优质种苗 的一种新的植物微繁殖技术。
②茎尖流水冲洗2-4h ③75%酒精迅速漂洗30s ④0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液消毒 5-8min(取自老枝条上的可适当延长时间）
2.2.2.3 接种
接前可再剥去一些 叶片。然后随切随 接，动作迅速。亦 可将切下茎尖材料 在1-5% VC液中浸一 下。
2.2.2.4 培养
培养基
①基本培养基：MS、White、B5、Heller。
2.2.4.4 植株再生途径
直接产生不定芽 形成愈伤组织 形成胚状体 其他途径
2.3 壮苗和生根培养
2.3.1 试管苗的壮利于形成壮苗.
在生产实际中，增殖系数控制在 3.0-5.0时 可实现增殖和壮苗的双重目的。另外，改善 培养室环境条件，如增加光照强度、降低湿 度等对培养壮苗也有一定帮助。
高考生物二轮复习学案：第17讲 细胞工程
高考生物二轮复习学案第17讲细胞工程自主梳理·再夯基础1. (2022·南通如皋一模)牛胚胎移植试验的主要流程如下，下列相关叙述正确的是()①供体超数排卵→②配种→③胚胎收集→④________→⑤胚胎移植→⑥子代小牛A. ①过程需要注射性激素，目的是获得更多的卵母细胞B. ③过程是以哺乳动物早期胚胎未与子宫建立组织上的联系为前提C. ④过程是“对胚胎进行质量检查”，可移植的胚胎应发育到囊胚或原肠胚D. ⑤过程成功率的高低主要取决于受体的排斥程度2. (2022·南京、盐城一模)下图是克隆猴的培育过程。
下列有关叙述错误的是( )A. a 细胞是卵母细胞B. 克隆猴的性状主要与乙相同C. 重组细胞具有全能性D. ①过程常用显微操作技术3. (2022·无锡期末)研究者应用原生质体融合技术，利用光合细菌与嗜热菌选育出了耐高温的光合细菌。
下列有关叙述正确的是( )A. 用纤维素酶和果胶酶处理可获得两种原生质体B. 两种细菌细胞核的融合是完成细胞融合的标志C. 用高渗溶液处理可在培养液中有效分离原生质体和细菌D. 选育成功的细菌能在一定的高温环境中进行光合作用4. (2022·连云港二模)近日，我国研究团队利用一种新方法将人的多能干细胞在体外诱导转化为全能性的8细胞期胚胎样细胞，类似于受精卵发育3 d 时的状态。
下列说法正确的是( )A. 该胚胎样细胞处于囊胚期阶段，理论上可以进行胚胎分割并移植B. 该成果将助力实现人体器官的体外再生，解决器官短缺，移植排斥反应等问题C. 该研究涉及生殖性克隆，需通过伦理审查，严格遵循我国法规和伦理准则D. 该过程中发生了细胞分化，体现了动物细胞核具有全能性5. (2022·南通通州区期末)(多选)SOD 是一种广泛分布于各种细胞中的抗氧化酶，它能催化超氧阴离子自由基形成H 2O 2，增强植物的抗逆性。
下图为培育能够产生SOD 农作物新品种的一种方式。
樱桃的组织培养
樱桃矮化砧木组培快繁技术及脱毒研究陶波（甘肃农业大学生命科学技术学院09级）摘要：本文综述了大樱桃矮化砧木组织培养及脱毒技术研究进展，重点对樱桃矮化砧木GD-1、GD-2外植体的初代培养、增殖培养、生根培养等环节进行了研究，也对樱桃茎尖脱毒技术进行了研究。
以大樱桃嫩梢芽为外植体进行茎尖组培脱毒研究，结果表明：(1)筛选出的增殖培养基为MS +6–B A1.0 mg/L +NAA0.2mg/L+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，丛生芽增殖数达到6个以上。
确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂3.5g/L，生根率可达75.1%。
(2)外植体进行暗培养能提高生根率，生根率达到了73%，而对照仅有57%，单株根数也从1.2条增加到了1.7条。
(3)采用特异引物的RT-PCR扩增方法，对3个大樱桃品种进行了李坏死环斑病毒(PNRSV)的检测。
结果表明，0.5～0.8mm 茎尖培养对李坏死环斑病毒(PNRSV)的脱毒率达78.5％；0.5mm 以下茎尖培养对PNRSV 的脱毒率达 93.3％，证明大樱桃试管苗0.5mm 以下的小茎尖培养能有效脱除 PNRSV病毒。
关键词：大樱桃；矮化砧木；组培快繁；脱毒技术Rearch On Tissue Culture Rapid Propation Technology And Virus-free Of Sweet CherryDwarfing RootstocksAbstract: The paper summarized research progress on tissue culture rapid propagation and virus-free of sweet cherry dwarfing rootstocks, mainly studied crucial technology of propagating, rooting, acclimatizating and transplanting on tissue culture of the sweet cherry dwarfing rootstocks GD-1.GD-2, elementarily discussed on virus-free of cherry. The results indicated：(1)The culture medium of MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L +sucrose 30g/L+agar 6.5g/L was screened out used to differentiate and multiply and differentiating quantities of buds up to more 6. Meanwhile, the inducing rate on culture medium of 1/2 MS +IBA 0.7mg /L +NAA0.2 mg/L+sucrose20g/L+agar3.5g/L being responsible for root growth up to 75.1% was accounted for the optim- umone.(2) The root percentage of shoots of GD-1,GD-2 was improbed by a dark treatment of explants.(3) Total RNA, isolated from three sweet cherry cultivars, was used as template to amplify PNRSV by polymerase chain reaction (PCR). The results showed the virus-free rate of PNRSV is 78.5% on 0.5～0.8mm shoot tip; The virus-free rate of PNRSV is 93.3% less than 0.5mm shoot tip, it was proved that PNRSV could be elimin -ated effectively from sweet cherry plantlets in vitro by culture of shoot tip less than 0.5mm.Key word: Sweet cherry; Dwarfing rootstocks; Tissue culture rapid propagation; Virus-free樱桃（Prunus）为蔷薇科樱属（Cerasus Mill.）的落叶乔木。
生物学选择性必修3同步学案：2-1 植物细胞工程 第1课时 植物细胞工程的基本技术
生物学选择性必修3同步学案2-1植物细胞工程第1课时植物细胞工程的基本技术学有目标——新课程标准必明记在平时——核心语句必背1.阐明细胞全能性的概念。
2．概述植物组织培养的基本过程。
3．描述植物体细胞杂交技术的基本过程。
4．尝试进行菊花的组织培养。
1.植物组织培养的基本过程：外植体――→脱分化愈伤组织――→再分化芽、根―→完整植株2．植物组织培养技术的理论基础是植物细胞的全能性，植物体细胞杂交技术的理论基础是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
3．去除细胞壁制备原生质体用到的酶是纤维素酶和果胶酶。
4．人工诱导原生质体融合的方法有物理法(电融合法和离心法)和化学法(聚乙二醇融合法、高Ca2＋高pH融合法)。
[理清主干知识]一、细胞工程的概念与分类原理和方法细胞生物学、分子生物学和发育生物学操作水平细胞器、细胞或组织水平目的获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品分类植物细胞工程和动物细胞工程二、细胞的全能性1．概念：细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。
2．生物体内细胞不能表现全能性的原因：在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达。
三、植物组织培养技术1．概念：将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。
2．理论基础：植物细胞的全能性。
3．基本过程(1)脱分化：在一定的激素和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞可以经过脱分化，即失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，进而形成愈伤组织的过程。
(2)愈伤组织：脱分化产生的不定形的薄壁组织团块。
(3)再分化：愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程。
4．菊花的组织培养四、植物体细胞杂交技术1．概念：将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。
2．过程 不同种的植物细胞――→①原生质体――→②融合后的原生质体――→③杂种细胞――→④愈伤组织――→⑤杂种植株 (1)过程①表示去除细胞壁。
生姜组织培养中增殖与生根同步培养技术研究
一
裹 １ 不同激素配比对生萎继代繁殖的影响
Ｏ 藏泵ｉ Ｏ — —Ｏ Ｏ
禾同培养时间下的增值 倍数
０ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ ０
ＮＡＡ
Ｏ
５
ＧＡ３
２ｄ ５
３ｄ ０
３ｄ ５
Hale Waihona Puke ４０ ｄ种， 生产上长期以成熟根状茎为种源进行无性繁殖 ， 造
Ｍ ＋ 一Ａ ２ ０ 单位 为 ｍ ／ ） Ｎ Ａ ０ ５ Ｇ ， ．５ Ｓ ６Ｂ ． （ ｇ Ｌ ＋ Ａ ． ＋ Ａ ００ ②增殖与生根培养。 Ｍ 为基本培养基 ， 以 Ｓ 附加不同激 素种类和浓度 （ 见表 １。将茎尖培养的丛生芽切成单 ） 芽， 接种在培养瓶 中， 每瓶植 ３ ， 次重复 ， 苗 ３ 每重复 １ ０ 瓶， 随机排列。分别于培养 ２ｄ ３ｄ ３ｄ ４ ｄ ， ５ 、０ 、５ 、０ 时 任意 调查其 中两瓶的芽苗数量、 根数和根长 ， 以平均值为 并
为最佳培养基 ， 继代繁殖周期为 ２ ３ ｄ 繁 殖系数 ７以上。 ５ ０， 生根 诱 导率迭 １０ ； ０％ 培养 ２ 后 ， 管苗移栽到菜园土： ０ｄ 将试 河沙 ；１ １ ： 的混合基质 中， 保湿培养， 移栽成活率迭 ９ ．％ 。 ６４ 关键词 ： 生姜 ； 同步培养 ； 快速繁 殖
参考文献
【】中华人 民共 和国药典委员会 ．中华人 民共和 国药 （ １ 一部） ．北京 ： 化学工业出版社 ，０ ５ ２ ０
３ 结论与讨论
３１ 广金钱草种子硬实 ，种子发芽试验的预处理 以 ．
浓硫酸腐蚀 ５ ６ ｉ 为最好。生产中用砂子摩擦破除 ｍｎ 硬实以提高发芽率的方法切实可行 ，以稍用力摩擦约
间 １ｈ 光照强度 １０ ｌ。 ４， ５０ ④炼苗与移栽 。 ｘ 在室外 自然 光下炼苗 ４ 后 ， ｄ 打开培养瓶盖 ， 出试管苗 ， 取 去除老叶 和黄叶 ， 洗净基部培养基 ， 分成带根的单株试管苗 ， 将
文心兰的快速繁殖和试管苗移栽
文心兰的快速繁殖和试管苗移栽
黎建玲;蒋波;徐敏慧;陶李华
【期刊名称】《玉林师范学院学报》
【年(卷),期】2004(025)005
【摘要】通过对文心兰试管苗的增殖、生根以及试管苗的移栽进行研究,结果表明:影响试管苗增殖和生根的最敏感的因素是培养物的生理状态,其次为激素的比例.其培养方案为:(1)增殖培养:选择原球茎为培养物,培养基为:MS+6-
BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+0.1%活性炭;(2)生根培养:选择具有3片叶子,高约6～7cm的小苗作为培养物,培养基为:MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+0.1%活性炭,并将发育形成的试管苗经"炼苗处理"后,移栽成活.
【总页数】4页(P73-75,79)
【作者】黎建玲;蒋波;徐敏慧;陶李华
【作者单位】玉林师范学院,化学与生物系,实验师,广西,玉林,537000;玉林师范学院,化学与生物系,副教授,广西,玉林,537000;玉林师范学院,化学与生物系,生物科学专业2001级本科生,广西,玉林,537000;玉林师范学院,化学与生物系,生物科学专业2001级本科生,广西,玉林,537000
【正文语种】中文
【中图分类】Q94
【相关文献】
1.卡特兰、文心兰和大花蕙兰组培快繁及移栽技术研究 [J], 王伯诚;赖小芳;陈银龙
2.文心兰、蝴蝶兰试管苗移栽技术研究 [J], 刘燕;李娟;祁翔;向立容;王济红
3.文心兰试管苗移栽技术 [J], 陈春满;郑贵朝;张善信;胡事君
4.文心兰试管苗分化及育苗技术研究 [J], 魏翠华;谢宇;陈沁
5.文心兰试管苗低温贮藏条件 [J], 王政;何松林
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植物组织培养过程
1
离体条件 5 2
3
4
White培养基配方（mg/L）
成份 Na2SO4 含量 200
KNO3
CaNO3.4H2O MgSO4.7H2O NaH2PO4.H2O
80
300 720 16.5
KCl
H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O MoO3 FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇
实验二
试管苗增殖与生根培养
一、实验目的
1.掌握试管苗增殖与生根的基本方法。 2.了解外源激素和营养物质对试管苗生长发 育的调节作用。
二、实验原理
1.增殖和生根是植物组织培养实现快速繁殖 的基本环节。 2.细胞分裂素能实现植物的增殖，生长素或 不加任何激素能够实现植物生根，很多时 候生根时会降低培养基的无机盐浓度。
文心兰试管苗继代增殖
3.操作步骤 3.1 铺开无菌纸，将一丛文心兰试管苗置于无菌纸 上，分离成单株。 3.2用手术刀认真清理基部的老叶、黄叶和残留培 养基。 3.3接种至增殖培养基上，4个单株/人。 3.4标签上记录姓名实验材料：滁菊 2.生根培养基配方： MS+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L
② White培养基（1963） White1963设计 特点 具有较低的无机盐。 细胞分化过程中对无机盐要求较低，有利于 分化。特别适用于根的分化。
三、实验操作
无菌操作同前
增殖培养基(有标签 Z)
生根培养基
三、实验操作
(一)试管苗增殖培养
1.实验材料：文心兰 2.增殖培养基配方： MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L
五、注意事项
(一)每位同学一张无菌纸。 (二)下次试验培养基由第二组配制。 (三)下次试验材料由每位同学自己摘取(大叶黄 杨—带有生长点)。 (四)第二组打扫卫生。
滁菊生根
3.操作步骤 3.1 铺开无菌纸，用剪刀将培养瓶中的滁菊单株从 基部分离，置于无菌纸上。 3.2用剪刀将滁菊单株剪成2-3段。 3.3接种至生根培养基上。 3.4贴上标签，记录姓名、日期。
四、实验记录
(一)增殖率、增殖数的计算
增殖率(%)=有新芽的外植体数/接种外植体数 平均增殖数=新芽数/接种外植体数 (二)生根率、生根数的计算
65
1.5 7
3
0.0001 5560 7460
100
0.3 0.1 0.1 3
盐酸硫胺素
甘氨酸
①MS培养基
1962年日本的Murashige 和美国的Skoog 二人为烟草 培养设计。是最常用的，也是最基本的培养基。
特点 无机盐含量较高，配比合理，符合植物细胞生长的营 养生理需求；硝酸盐含量和氨离子浓度较高。