人参多糖注射液体外诱导人白血病细胞株K562增殖抑制及分化
五加科人参属多糖免疫调节作用的研究进展
5人参研究GINSENG RESEARCH 2023年第5期,,,。
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1五加科人参属药用植物,。
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2五加科人参属药用植物主要化学成分、、,刘上靖1,张欣1,孙霞2,侯颖1,贾敏1*(1.西安医学院基础与转化医学研究所,西安710021;2.西安医学院基础医学部,西安710021)摘要:、,、、。
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关键词:;;;(2022JQ-864);(22JK0540)。
作者简介:,,,:。
*通信作者:,,,,:。
E-mail:*******************.cn.DOI:10.19403/ki.1671-1521.2023.05.01452。
2.1、、、、、、[1],,,[2],。
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3五加科人参属药用植物多糖提取分离方法,,。
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桂皮醛诱导K562细胞分化增强Mel18表达
桂皮醛诱导K562细胞分化增强Mel18表达刘黎琼;刘泽林;王欣;王淡瑜;崔海燕;金梦迪【摘要】目的探讨桂皮醛对慢性髓细胞白血病细胞株k562的诱导分化作用及其机制.方法以低浓度桂皮醛(30 μmol/L、60 μmol/L)作用于体外培养的K562细胞,流式细胞术检测桂皮醛作用前后K562细胞分化抗原和Mel18表达,western blot 检测K562细胞c-Myc表达.结果低浓度桂皮醛作用后K562细胞表面单核细胞分化抗原CD11b和CD14表达呈剂量依赖性增加,Mel18荧光明显增强,c-Myc表达明显下降.结论低浓度桂皮醛可诱导K562细胞向单核细胞分化,Mel18表达增加在桂皮醛诱导K562细胞分化中发挥重要作用.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2011(033)014【总页数】2页(P2133-2134)【关键词】桂皮醛;K562细胞;细胞分化;Mel18【作者】刘黎琼;刘泽林;王欣;王淡瑜;崔海燕;金梦迪【作者单位】518052,广东省深圳市第六人民医院(南山医院)血液科;518052,广东省深圳市第六人民医院(南山医院)血液科;518052,广东省深圳市第六人民医院(南山医院)血液科;518052,广东省深圳市第六人民医院(南山医院)血液科;518052,广东省深圳市第六人民医院(南山医院)血液科;518052,广东省深圳市第六人民医院(南山医院)血液科【正文语种】中文【中图分类】R965恶性肿瘤的诱导分化治疗已成为目前肿瘤生物学和肿瘤治疗学的前沿领域和研究热点，尤其是中药提取物的诱导分化研究是热点中的热点。
桂皮醛是食用香料肉桂提取物的主要活性成分，具有安全无毒特点。
桂皮醛可对多种恶性肿瘤调亡发挥抑制增殖、诱导凋亡的效应，我们的前期研究也显示桂皮醛可诱导慢性粒细胞性白血病细胞株K562凋亡，但尚无桂皮醛诱导分化效应研究的报道［1－3］。
本实验观察桂皮醛诱导K562细胞分化改变及探讨相关机制，以进一步研究桂皮醛抗肿瘤的机制。
肿瘤诱导分化治疗原理及临床应用
三、诱导肿瘤分化的研究
1.体外分化诱导模型 (1)白血病细胞分化诱导模型
急性髓性白血病细胞株HL-60： 形态:分化为中、晚幼粒、杆状核细胞和分叶核细胞；
生化:出现硝基蓝四氮唑还原性（NBT）；
功能:出现吞噬活性及趋化性；
生物学:丧失了在软琼脂培养基上形成集落及裸鼠体内移植成 活的能力。
(2)实体瘤分化诱导模型
1，发热，呼吸窘迫，心包与胸腔积液， 低血压和肾功能衰竭。
2，发生率：23-50% 3，死亡率：30%以上 4，治疗方法：1）立即停药
2）地塞米松 10mg iv，bid。 应用5天以上。
3、ATRA的副作用
1、高颅压综合症：1）停药 2）对症治疗
2、高组织胺综合症：1）停药 2）组织胺拮抗剂
4、砷剂及ATRA协同作用(体外)
人白血病细胞一般采用小鼠腹腔扩散法及裸鼠皮下移植 法;
人实体瘤采用小鼠肾包膜下移植和裸鼠移植建立分化诱 导模型。
疗效评价：根据肿瘤生长抑制和荷瘤鼠生命延长，细胞标记 酶、抗原以及形态的变化来判断。
四、诱导肿瘤细胞分化的调控机制
维甲酸包括多种同分异构体，其中最重 1.核内受体途径要的是13-顺式维甲酸（13-cis-RA）、
（2）巩固治疗： ① As2O3 0.15mg/kg/d D1-5,连续5周,共2周期
后续 ATRA 45mg/m2 D1-7 + DNR 50mg/m2 D1-3,共2周期 ② DNR 60mg/m2 D1-3 + Ara-c 200mg/m2 D1-7，共1周期
后续 Ara-c 1.5-2g/m2/q12h，D1-5，+ DNR45mg/m2 D1-3 ， 共1周期+IT 共5次 ③ ATRA 45mg/m2 D1-15，+Ara-c 200mg/m2 D1-4，共1周期， 后续 ATRA 15天，+MIT 10mg/m2/d，共5天，共1周期， 后续 ATRA 15天，+IDA 12mg/m2/d，共1周期， +Ara-c 150mg/m2/8h D1-4，共1周期
人参化学成分和药理研究进展_郭秀丽
-26- Clinical Journal of Chinese Medicine 2012 V ol.(4) No.14人参化学成分和药理研究进展A review on the ginseng chemical constituents and pharmacological郭秀丽高淑莲（泰安市中医医院，山东泰安，271000）中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1674-7860（2012）14-0026-02【摘要】人参在《神农本草经》中被列为上品药物，具有“多服久服不伤身、轻身益气不老延年”的作用。
其在中医药临床领域中具有悠久的历史，然传统研究进展十分缓慢，属于古代朴素研究阶段。
由于现代科技的飞速发展，对人参的研究也得到了突飞猛进的突破。
本文针对人参的化学成分以及药理作用的研究进展展开综述。
【关键词】人参；化学成分；药理作用；研究进展【Abstract】 In Shen Nong's Herbal Classic, the ginseng was listed as the top grade medicine, with the role of “multi-service Jiufu not damage the health and Qingshen Yiqi Yannian”. It has a long history in TCM in the clinical field, then the traditional research progress has been slow, belonging to the ancient simplicity stage. Due to the rapid development of modern science and technology, the study of ginseng has also been a rapid breakthrough. In this paper, the research progress of the chemical composition and pharmacological effects of ginseng were summarized.【Keywords】Ginseng; Chemical composition; Pharmacological effects; Research progress中药人参是五加科人参，属植物人参的干燥根，是一种名贵药材，同样为一种比较常见的药物。
天南星醇提取液诱导人K562细胞凋亡的实验研究
ｌ 键 词 ｌ 天 南 星 ； Ｋ５ ２ 胞 ； 胞 凋 亡 ； 式 细 胞 术 关 Ａ． ６ 细 细 流
Ｉ 中图分类 号】 １９ ５ １ ６
ｌ 文献标识码 】Ａ
Ｉ 文章编号 Ｊ ６ ２ １ ７２ １）４—０ １ ＿ １７ —８ ５ （０ １０ ２ ４－ ３ ０
Ｍ ｅ ｈ ｄｓ Ｔｈ ｎ ｉｉｏ ｆｅ ｔ ｆ ｌｏ ｏｉ ｘｒ ｃ ｆｒ ｉｏ ｒｓｅ ｔ ｎｈ ｍａ ６ ｅｌ ｉｅｗａ ｅｅｍｉｅ ｙ ＭＴＴ ａ ｓｙ ｔ ｏ ： ｅｉｈｂｔ ｎｅ ｃ ｃ ｈ ｌ ｅ ｔａｔｏ ｚ ｍａａｉａ ｍａｉ ｏ ｕ ｎＫ５ ２ｃ ｌｌ ｓｄ ｔｒ ｎ ｄｂ ｉ ｏ ａ ｃ ｈ ｓ ｎ ｓａ
Ｚ ＡＮＧ － ｎ ， ＡＮＧ ｉｎ ｈ ａ Ｙ Ｈ Ｈｅ ｍｉ ｇ Ｔ Ｊａ － ｕ ， ＡＮＧ ｈ ｎ － ｏ ｇ， Ｚ ｏ ｇ ｈ ｎ ＧＡＯ ｎ — ｎ Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔｆ ｌ ｉ ｌ ｈ ｒ ａｏ ｇ， ｉ ｔｆ ｌ ｔ Ｙｏ ｇ ｒ ｇ（ ｅａｔ ｎ ｏ Ｃｉ ｃ ａｍ ｃｌ ｙＦｒ ｆ ｉ ｅ ｏ ｍ ｎ ａＰ ｏ 士研究生， 男， 研究方向： 临扇 药理学。 － ａ ： Ｅｍ ｉ ｌ
ｊｔｎ ２ ０ ＠ｓｈ ．ｏ ｈａ ｇ ０ ２ ｏ ｕｔｍ 【 作者简介 ｌ 张鹤 鸣， ， 男 副主任药 师 ， 研究方向 ： 临床药学及药事 管理 。
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１ ． 天南星 醇提取液 （ ＡＥ） ．１ ３ Ｒ 的制备 除菌 ， 调浓度为 １ ０ｍｇ ～ ４℃保存 。 － ， ｍＬ
Ｔ ｅｄｆ ｒｎ ｅｂ ｔ ｅ ｅｅ ｐｒ ｎａ ｇｏ ｐａ ｄｃｎｒｌ ｒｕ ｓｓ ｔｔ ａ ｉｎｆ ａｃ 尸＜０ １．Ｃ ０ ａ ５ ７ 。 ～ ｈ ｉｅｅ ｃ ｅ ｗｅｎｔ ｘ ｅｉ ｔ ｒｕ ｎ ｏ ｔ ｏｐｗａ ｔ ｉ ｉ ｌ ｇ ｉ ｃｎ ｅ（ ｈ ｍｅ ｌ ｏｇ ａｓｃ ｓ ｉ ． ） Ｉ５ ｗ ｓ ． ｇｍＬ ． ０ ６０
中药抗肿瘤作用机理研究进展
中药抗肿瘤作用机理研究进展袁太宁（三峡大学医学院，湖北宜昌４４３００２）摘要中药在抗肿瘤方面显示出了明显的优势．其机理主要包括：抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤血管生长、逆转肿瘤细胞多药耐药和增强机体免疫力。
目前由于缺乏对中药药效物质的微观分析和作用规律的科学认识．势必影响中药的进一步应用，所以，对中草药抗肿瘤作用及其机理，还需要进行更为深入的研究。
关键词中药抗肿瘤综述中图分类号Ｒ．７３０．５２文献标识码Ａ文章编号１６７２－３９７Ｘ（２００９）０３－００７９—０２肿瘤已逐渐成为人类重大杀手之一．其死亡率仅次于心脑血管疾病．而且呈一卜升的态势。
目前化学药物抗肿瘤作用确切，疗效碌著．但毒剐作用大、长期应用易产生耐药性等，所以人们迫切希望找到疗效好且毒副作用小的药物，中药在这方面显示出了明显的优势．现将中药抗肿瘤作用机理研究进展概述如下。
１抑制肿瘤细胞增殖肿瘤的一个重要特征是无限制的增殖．体内外研究证实某些中药可直接抑制肿瘤细胞增殖．从而发挥抗肿瘤作用。
王刚等…研究发现中药半枝莲醇提物对移植性肿瘤（肉瘤Ｓ１８０和肝癌Ｈ２２）具有显著的抑制作用，而对小鼠脾细胞的增殖具有促进作用．并有较好的剂量依赖关系．胡旭东等１２ｌ发现半边莲具有显著抑制肝癌细胞ＢＥＬ一７４０２增殖的作用，且随浓度的增大而出现明显的量效关系，在１００ｍｇ／ｍＬ浓度下，其抑制效果与１００Ｉ，ｚｇ／ｍｌ。
的５ＦＵ相近，表现出较强的抑制肿瘤增殖的活性。
高凌等１３ｌ发现龙血胶囊对对小鼠移植性肝癌Ｈｅｐｓ、艾氏实体癌ＥＣ有较好的抑制作用。
体内外实验研究表明，一些中药如化椒［４１、白花蛇舌草、半边莲、冬凌草、龙葵、白英等均有不同程度的直接抑制肿瘤细胞增殖的作朋。
２诱导肿瘤细胞凋亡细胞凋亡．也称细胞程序性死亡，是有核细胞通过启动自身的遗传机制．主要通过激活内源性ＤＮＡ内切酶而发生的自动死亡过程。
它是机体清除无用或威胁机体生存细胞的莺要机制。
实体瘤细胞的诱导分化
实体瘤细胞的诱导分化用实体瘤研究诱导分化比白血病少，实体瘤细胞种类多，其特性不一，诱导分化判定标准各不相同，分化指标一般包括形态和功能的变化，增殖能力下降，致瘤性消失。
具体实例有以下几种。
（一）人黏液表皮样癌MEC-1细胞分化诱导实验：MEC-1细胞是一种低分化黏液表皮样癌细胞系，为上皮样细胞，体外增殖迅速，异型性明显，裸鼠体内致瘤性强，在体外培养中经0.8%～1.6% DMSO诱导3天后出现一些分化表型，主要表现为生长抑制，异型性降低，表面微绒毛减少，粗面内质网明显增加，胞浆中出现特征性成熟分泌颗粒，DNA含量减少，核型趋向二倍体，细胞表面抗原含量增加。
此外用1mmol/l的六亚甲基二乙酸胺（HMBA），体外诱导MEC-1细胞也表现出类似的分化表型。
（二）人肝癌细胞分化诱导试验：BEL-7402肝癌细胞系，甲胎蛋白（AFP）阳性，酪氨酸转氨酶活力低，6-磷酸葡萄糖脱氢酶活力升高，裸鼠体内能形成肿瘤。
诱导分化后可通过AFP分泌能力消失，y-谷氨酰转肽酶（y-GT）活力降低，酪氨酸转氨酶（TAT）活力升高等指标判断。
目前常用于肝癌细胞诱导分化的药物及其作用简述如下。
1、全反式维甲酸（ATRA）：ATRA除对白血病具有很好的诱导分化治疗作用外，对肝癌细胞SMMC-7721细胞系也有显著诱导分化作用，用10umol/L的ATRA处理后，可使SMMC-7721细胞生长受到抑制，S期细胞减少，细胞形态向正常细胞方向逆转，核变小，胞浆增多，二倍体细胞数由原先的4%上升至15%，可降低AFP分泌量和y-GT活性，可升高碱性磷酸酶（ALP）和TAT活性，增加白蛋白（ALB）的分泌量，使SMMC-7721细胞的恶性表型明显逆转。
在用二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌模型中，使用ATRA，则可延缓y-GT,谷胱甘肽S-转移酶降低，以阻断肝癌的发展。
此外，ATRA还可使SMMC-7721细胞膜表面的异常糖链结构发生改变，这很可能与接触抑制的恢复有关。
黄芪注射液对白血病K562细胞诱导分化作用的研究
Ｋ ５ ６ ２细胞 ， Ｍ １ ｔ ｒ 法观察黄芪注射液对 Ｋ ５ ６ ２细胞 活性 的影响 ； 瑞 氏 一吉姆 萨 染色观察 细胞形 态学改 变； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 和细胞免疫化 学方 法检 测分化相 关转 录因子 Ｇ Ａ Ｔ Ａ一１ 蛋 白的表达 水平。结 果： ＭＴ ｒ结 果显
来也有用 于非造血系统 肿瘤 如乳腺癌 、 鼻咽 癌的研究 ， 主要
为抑 制 肿 瘤 细 胞 增 殖 、 促 进 肿 瘤 细 胞 凋 亡 等 方 面 的 研 究［ Ｉ “】 ， 但应用于 白血病的报道较少 。本研究 旨在 观察 黄芪
Ⅱ Ｉ ｌ Ｋ ５ ６ ２细胞 接种于 ６孔 板 ， 分别 加入 ０ 、 ３ ７ ． ５ 、 ７ ５ 、 １ ５ ０ 、
Ｂ ｉ ｏ —Ｒ ａ ｄ公 司 。
黄芪注射液各浓度处理 Ｋ ５ ６ ２ 洗 ２次 ， 加 入含 Ｐ Ｍ Ｓ Ｆ的细 胞 裂 解 液 ， 冰上 裂解约 ３ Ｏ分
Ｉ Ｈ Ｒ Ｐ： Ｓ ｎｔ ａ ａ Ｃ ｒ ｕ ｚ 公司 ； Ｄ Ａ Ｂ显色检测试 剂盒 ： 北京 中山 生物技术有 限公 司。倒 置显微 镜 ： 日本 Ｏ ｌ ｙ ｍ ｐ ｕ ｓ 公司； 酶 标 仪： Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ公司 ； Ｂ ｉ ｏ —Ｒ ａ ｄ电泳 及 转膜 系统 ： 美 国
示 高 浓度 黄 芪 注射 液 （ ６ ０ ０ ｍｇ ／ ｍ １ ） 可 降低 Ｋ ５ ６ ２细胞 活 性 ， 并 且 呈 剂 量 一时 间依 赖 关 系。 瑞 氏 一吉姆 萨染
色显示 ， 随着 药物浓度增大 ， Ｋ ５ ６ ２细胞体积增 大， 胞浆丰 富， 核 浆比 降低 ， 胞 浆 内可见空泡 、 染 色质 固缩。
人参多糖的化学与药理学研究进展_赵俊
国外医学中医中药分册2004年第26卷第2期・79・089 人参多糖的化学与药理学研究进展赵俊综述吴宏王亚平审校重庆医科大学基础医学院组胚教研室（重庆 400016）人参多糖（GPS）为人参的主要成分之一，近年研究表明，GPS可明显增强免疫系统的功能并有免疫抗肿瘤和辅助抗肿瘤活性。
另外，GPS还有降血糖以及调控血细胞生成的作用。
本文对GPS的生物活性及其可能的药理机制进行综述。
1 GPS的化学人参的化学成分很复杂，除了人参皂苷外，还含有多种糖类（其总糖含量为4%～6%），包括单糖、低聚糖和多糖。
人参多糖由人参淀粉和人参果胶两部分组成，药理活性部分主要是人参果胶。
从人参根中提取的人参多糖，80%是人参淀粉，经淀粉酶脱去淀粉后的人参果胶主要由半乳糖醛酸（GalA）、半乳糖（Gal）、阿拉伯糖（Ara）残基组成，还有少量鼠李糖（Rha）残基。
该果胶经凝胶柱层析得到两种酸性杂多糖（SA、SB）。
SA的分子量约为180万，含26%的半乳糖醛酸和半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖三种中性糖。
从人参茎叶提取的人参茎叶总多糖是由半乳糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等组成的酸性杂多糖，对人参茎叶水溶性中性糖部分进行了研究，得到了具有抗补体活性的纯多糖5NUL、5NUH、5AUL、5AUH。
理化分析表明，它们的分子量分别为5 000、12 000、5 500和66 000。
多糖组分中总糖醛酸、蛋白质以及多糖主链中结构中心不同，生物学活性差异甚大［1］。
2 GPS的药理学研究2.1 GPS的抗肿瘤作用 GPS对B16黑素瘤和急性早幼粒细胞性白血病有杀伤肿瘤细胞和抑制肿瘤增殖作用。
谢遵江等［2］观察到在移植B16黑素瘤株小鼠的肿瘤周围皮下注射GPS，每隔3d注射1次，连续注射3次后测量瘤径和瘤重，发现GPS能明显减轻小鼠瘤重，缩小肿瘤体积，表明GPS对移植的B16黑素瘤有明显的杀伤作用。
戴勤等［3］的体外研究表明，GPS对人急性早幼粒细胞性白血病细胞株（HL-60）增殖有明显抑制作用，其抑制作用呈时间、剂量依赖性。
大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响
大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响目的探讨大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制。
方法体外培养的K562细胞，用不同浓度大蒜素处理24、48、72h，MTT法测定其对K562细胞增殖的影响；大蒜素（浓度分别为3、6、12μg/mL）处理K562细胞48h后，分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化、分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性、western blot法检测环氧合酶2（COX-2）表达情况。
结果大蒜素（浓度2~32 μg/mL）能抑制K562细胞的增殖，呈剂量和时间依赖性；大蒜素（浓度分别为3、6、12 μg/mL）作用K562细胞48 h后，细胞凋亡率分别为11.5%、21.4%、36.6%，对照组凋亡率为2.2%；Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加；COX-2的表达降低，呈剂量依赖性。
结论大蒜素能抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能与下调COX-2基因的表达、增加细胞Casepase-3、Casepase-9活性及降低线粒体膜电位有关。
大蒜素是一种前景广阔的抗肿瘤药物。
标签：大蒜素；K562细胞；Caspase-3；Caspase-9；环氧合酶-2大蒜素（Allicin）是大蒜中最重要的有效成分，其具有广泛的生物学作用，包括抗菌、抗炎、抗血栓、降血压、降血脂、降血糖、调节免疫力等。
流行病学表明，大蒜素的摄入能减少多种肿瘤的发生［1］；动物和细胞实验研究证实，大蒜素在体内外对多种肿瘤包括皮肤癌、肺癌、肝癌、结肠癌、食管癌、胃癌及前列腺癌等均有抗肿瘤作用［2］。
为探讨大蒜素对血液系统肿瘤的的影响及其机制，本研究以人白血病细胞系K562细胞为对象，观察大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡的影响，并检测大蒜素对K562细胞线粒体膜电位、Caspase-3、Caspase-9活性变化及western blot检测环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达的影响。
人白血病细胞K562增殖的作用
人白血病细胞K562增殖的作用白血病是造血系统的恶性肿瘤，其特征是骨髓、淋巴结等造血系统中一种或多种血细胞成分发生恶性增殖，并浸润体内各脏器组织，导致正常造血组织细胞受抑制，产生各种症状。
目前，对于此类疾病的治疗主要采取传统的化疗手段，标准的化疗方案仅能使40%~60%患者获得暂时缓解，中位生存期一般不超过3a。
大剂量化疗联合造血干细胞移植可使缓解率明显提升，但除了极少数患者以外，其余大多数仍难免会复发，其显著的不良反应使得患者的生活质量和治疗信心受到严重影响。
因此，寻找高效低毒的治疗药物，显得尤为重要。
我们以K562细胞作为研究对象，探讨力达霉素（LDM）抗白血病的可能机制。
1材料K562细胞（本室保存）；LDM（由中国医学科学院医药生物技术研究所甄永苏院士惠赠）；RPM-1640（美国Gibco公司）；胎牛血清（美国Biological公司）；MTT（噻唑蓝）法检测细胞增殖及细胞毒性试剂盒（南京凯基）；苔盼蓝；兔抗人肿瘤坏死因子（TNF-α）抗体（美国Affinity公司）；Betaactin（β肌动蛋白）抗体（美国Affinity公司）2方法2.1细胞培养K562细胞株从液氮中复苏后，用含10%胎牛血清的RPM-1640培养液在37℃，5%CO2恒温培养箱中培养，所有实验均采用对数生长期细胞。
2.2细胞增殖的检测在96孔板加入细胞100μl/孔（约1×104），置37℃，5%CO2细胞培养箱中培养24h后，加入不同浓度力达霉素（LDM），再于恒温培养箱孵育48h，加入50μlMTT，37℃孵育4h，使MTT还原为甲臜，1000g离心，吸出上清，每孔加入150μl二甲亚砜（DMSO）使甲臜溶解，平板摇床摇匀，于490nm波长处检测每孔的吸光度（A）值，计算细胞成活率。
2.3细胞的计数离心收集K562细胞，制备单细胞悬液并作适当稀释，细胞悬浮液与台盼蓝溶液以9∶1混合混匀，在3min内分别计数活细胞和死细胞，计算活细胞率。
《广东化工》征稿启事
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丁酸钠、Hemin及DMSO诱导K562红系分化作用的差异
网络出版时间：2041-4-416网络出版地址：httys：//kb uet/kcms/demil/34.1065.R.20210402.1394.O5.html丁酸钠、Hemin及DMSO诱导K562红系分化作用的差异刘含杨红兰、，莫晶张鹏范安然何志旭5摘要目的比较丁酸钠、氯化血红素（Hemin）及DMSO诱导K564红系分化作用的差异。
方法检测在/5mmol/P 丁酸钠,22imol/P Hemiu及4%DMSO处理下，K562细胞增殖、细胞周期、四甲基联苯胺（TMB）染色阳性率及CD235a 表达量的变化。
结果连续药物暴露507后结果显示，丁酸钠对K544细胞增殖有抑制作用,48~727细胞阻滞于G0/G1；96-507细胞阻滞于G4/M期,527TMB阳性率为（24.44±2.27）%。
Hemiu对K544细胞的增殖及细胞周期均无影响;527TMB阳性率为（90,83±2.69）%。
DMSO 处理的K544细胞其G0/G1期比例增多，但暴露时间大于74 7时，细胞增殖与对照组差异无统计学意义;527TMB阳性率为（1.84士0.48）%,相较于对照组阳性率（4.39士0.80%差异无统计学意义。
丁酸钠和Hemm处理1207后血型糖蛋白A（CD235a）的表达水平较对照组和DMSO处理组升高，且2组间差异无统计学意义。
DMSO处理组CD235a与对照组差异无统计学意义。
结论通过综合比较红系分化诱导前后K544细胞增殖、细胞周期、TMB阳性率及CD235a表达量的变化发现，Hemiu是较丁酸钠和DMSO 体外诱导K544红系分化更有效的化学试剂。
关键词丁酸钠;氯化血红素;DMSO；K562；红系分化中图分类号R33文献标志码A文章编号1000-1492（2021）05-0746-06 Poi：10.19405/ki.iss/1400-594.2021.05.45K562细胞最初源于一位慢性髓系白血病患者的腹水，该细胞内蛋白表达与胚胎期红系祖细胞相近1],是分析红白血病耐药性及Y珠蛋白表达调控2524-11-25接收基金项目：国家自然科学基金（编号：31960536、81665816）；贵州医科大学学术新苗计划（编号:黔科合平台人才12513]5774-74）作者单位:1贵州医科大学组织工程生物医药技术国家地方联合工程实验室，组织工程与干细胞实验中心，贵州省再生医学重点实验室，贵阳5500544贵州医科大学免疫学教研室，贵阳5540243中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室，贵阳554024作者简介:刘含，女,硕士研究生；范安然，男，副教授，责任作者,E-mail:fanauranU025@qq.com；何志旭，男，教授，博士生导师，责任作者，E-mail：hzx@gms edu.cs 的常用细胞系。
阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562的生长抑制作用
阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562的生长抑制作用王芳妹;杨子剑;韩梅;胡翔;丁小凤【摘要】为研究阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562生长的影响,采用光学显微镜和Hoechst 33258 染色观察阿司匹林处理后细胞的形态和数目变化,显示阿司匹林促进K562细胞的凋亡.MTT法、细胞计数、软琼脂克隆形成实验、FACS 和裸鼠成瘤实验在体外和体内检测阿司匹林对K562细胞增殖和存活的影响,发现阿司匹林明显抑制K562细胞的体外增殖和裸鼠体内成瘤能力.Western blot实验分析细胞信号通道下游基因的表达影响,显示β-catenin、STAT5A、PARP和NF-κB p65蛋白的表达量下调,而细胞周期抑制因子p21表达上调.这些结果提示阿司匹林从体外和体内抑制K562细胞的生长,其作用的机制复杂,可能影响β-catenin 信号通道、JAK蛋白酪氨酸激酶/STAT5A信号通道、NF-κB信号传导通道和细胞周期的进程.【期刊名称】《湖南师范大学自然科学学报》【年(卷),期】2013(036)005【总页数】6页(P75-80)【关键词】阿司匹林;慢性粒细胞白血病;细胞增殖;裸鼠成瘤【作者】王芳妹;杨子剑;韩梅;胡翔;丁小凤【作者单位】湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,中国长沙410081;湖南省产商品质量监督检验研究院,中国长沙410007;湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,中国长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,中国长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,中国长沙410081;湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,中国长沙410081【正文语种】中文【中图分类】Q78慢性粒细胞白血病(CML)是一种骨髓造血干细胞恶性增殖的造血系统肿瘤，约占全部白血病的20%左右.90%以上的慢性粒细胞白血病具有Ph染色体和BCR-ABL染色体易位融合基因的表达，主要表现为白细胞持续升高和脾脏显著肿大［1］.CML的病程可分为慢性期、加速期和急变期.目前可能彻底治疗慢性粒细胞白血病的方法是移植造血干细胞，但是可供者来源有限［2］.常规化学药物和生物制剂IFN治疗的不良反应大.近年来，分子靶向药物酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼为数万例CML患者显著延长早慢性期和IFN-α治疗失败的晚慢性期.但伊马替尼对于未分化的白血病干细胞无效，容易导致疾病复发且持续治疗费用高［3-4］.阿司匹林是一种非甾体抗炎药，主要用于解热镇痛、抗炎和抗血小板凝集，预防冠心病、中风等心脑血管疾病发作.近来研究发现长期小剂量服用阿司匹林可以降低多种癌症的发病率［5］.阿司匹林显著抑制结肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞的生长，促进细胞凋亡［6-9］.动物实验证明阿司匹林可以使人结肠肿瘤缩小到15%，而没有任何副作用［10］.阿司匹林对慢性粒细胞白血病的治疗研究却少有报道.本研究探讨阿司匹林对人慢性粒细胞白血病K562细胞株的抑制作用，并初步分析可能的分子机制，为白血病的临床治疗提供新的实验依据.1 材料和方法1.1 材料慢性粒细胞白血病K562细胞株为本实验室保存.3～4周BALb/c品系雌性裸鼠购自湖南斯莱克景达实验动物公司.DMEM培养液、胎牛血清购于GIBCO公司.四甲基偶氮唑盐(MTT)、Hoechst 33258和阿司匹林购于Sigma公司，蛋白质分子质量标准购自 Fermentas公司.鼠抗β-catenin、STAT5A、PARP、NF-κB p65和p21单克隆抗体购于Santa Cruz公司，鼠抗GAPDH单克隆抗体购于湖南远泰生物公司.Annexin V-FITC/PI双染色试剂盒购于美国BD公司.SuperSignal ECL发光试剂盒购于Pierce公司.其他常规试剂均购于上海生工公司.1.2 细胞培养人慢性粒细胞白血病K562半悬浮细胞培养于含10%(体积分数)胎牛血清、1.667 mkat/L(即105U/L)青霉素、1.667 mkat/L(即105U/L)链霉素的DMEM培养液中，置于37℃含体积分数为5%CO2的恒温培养箱中培养.1.3 K562细胞的形态学观察分别用0、10、20和30 mmol/L阿司匹林处理的K562细胞培养36 h后，用普通光学显微镜观察细胞形态并拍照.将余下的细胞离心收集于1.5 mL离心管，加入0.5 mL多聚甲醛(40 g/L)，缓缓悬起细胞，固定10 min.用PBS洗2遍.将细胞滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀.稍晾干，均匀滴上0.5 mL Hoechst 33258染色液，染色5 min.用PBS洗2遍.盖上盖玻片，用荧光显微镜观察细胞核.每组实验重复3次.1.4 细胞增殖分析1.4.1 MTT法 K562细胞在24孔板上培养至对数生长期，分别加入适当的药物处理24 h和48 h.加入50 μL MTT溶液，继续培养3～4 h后，离心，弃上清，加入二甲基亚砜200 μL，水平漩涡器振荡使结晶完全溶解，测定每孔波长490 nm的吸光值.每组实验设3个复孔，实验重复3次.1.4.2 细胞计数法将1×109个/L的K562细胞接种6孔板中，分别加入0、10、20和30 mmol/L阿司匹林处理24 h和48 h.将细胞用台盼蓝溶液染色，用计数板于低倍显微镜下计算各组细胞的密度.每组实验设3个复孔，实验重复3次. 1.4.3 软琼脂克隆形成实验 K562细胞经0、10、20和30 mmol/L阿司匹林处理24 h并加入含体积分数为10%FBS的DMEM的0.35%琼脂培养基，每孔2 000个细胞，共设3个平行组，轻轻转动6孔板使细胞分散均匀.置于37℃、5%CO2的培养箱中培养14 d.在低倍显微镜下计数大于30个细胞的克隆数，数码相机拍照.每组至少重复3次实验.1.5 细胞凋亡检测K562细胞经0、10、20和30 mmol/L阿司匹林处理36 h，收集细胞(每组至少1×106个细胞)，采用Annexin V-FITC/PI染色后上机操作，以未染色细胞进行机器调零，分别以Annexin V-FITC和PI单染管作为基准参照，测定每组细胞的数据，显示凋亡细胞的百分比.每组至少重复3次实验.1.6 裸鼠成瘤实验将1×107个细胞接种于8只BALb/c裸鼠背部皮下，接种后每天观察荷瘤小鼠的生长情况，当瘤体长到1 cm3左右，选取4只瘤体体积相同的裸鼠进行腹腔注射给药，实验组给予25 mg/kg的阿司匹林，对照组给予0.1 mL生理盐水，各组每两天测瘤体体积和给药1次，连续2周.末次给药24 h后以脱臼法将裸鼠处死，取出皮下移植瘤，称重和拍照.每组实验重复2次.1.7 Western 印迹收集0、10、20和30 mmol/L阿司匹林处理K562细胞36 h的蛋白裂解物，SDS-PAGE电泳后，电转移至PVDF膜上，置于5 mL含脱脂奶粉50 g/L的TBS 缓冲液中封闭1 h.加入一抗(1∶1 000稀释)，37℃孵育2 h，TTBS洗膜，5min×4次.加入羊抗鼠二抗(1∶2 000稀释)，37 ℃孵育45 min，TTBS洗膜，5 min×4 次，ECL显色，拍照分析.1.8 统计学分析应用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理，数据用均数±标准差表示，实验组与对照组样本进行均数比较的t检验.以P＜0.05为差异有统计学意义.2 结果与分析2.1 细胞形态学观察显微镜下可见正常K562细胞呈圆形或卵圆形，细胞饱满，大小不规则;而经10 mmol/L阿司匹林处理后的K562细胞形态改变不明显.当阿司匹林的浓度达到20 mmol/L时细胞变小，变圆形，细胞崩解成许多碎片，细胞数目明显减少.尤其经过30 mmol/L阿司匹林处理的细胞悬浮脱落，可见较多死细胞(图1A).Hoechst 33258染色结果显示阿司匹林处理后的K562细胞核内可见致密的蓝色荧光，核固缩出现，并呈阿司匹林浓度依赖性(图1B).结果表明，阿司匹林促进K562细胞的凋亡.图1 细胞形态学观察不同浓度阿司匹林对K562细胞的影响(A:光学显微镜下观察;B:Hoechst 33258染色观察)Fig.1 Effects of different concentrations of aspirin on the morphology of K562 cells(A:An optical microscopic observation;B:Hoechst 33258 staining observation)2.2 阿司匹林对细胞增殖的影响采用不同浓度的阿司匹林处理K562细胞，MTT法测定结果显示随着阿司匹林浓度的增大和作用时间的延长，K562细胞的存活数显著下降.阿司匹林处理24 h后细胞大多数凋亡，48 h后细胞基本都已死亡.与对照组相比，实验组的细胞增殖活性在24 h和48 h明显降低，具有显著统计学意义(P＜0.01)(图2A).细胞计数法结果显示10 mmol/L阿司匹林处理24 h后细胞数目呈减少趋势，与0 mmol/L阿司匹林对照组相比细胞数目差异无统计学意义(P＞0.05);20和30 mmol/L阿司匹林处理24 h后细胞数目明显低于对照组(P＜0.05).阿司匹林处理48 h后K562细胞数目随着阿司匹林浓度的增大和作用时间的延长迅速下降(P＜0.01)(图2B).软琼脂克隆形成实验也发现随着阿司匹林浓度的增大K562细胞的克隆形成能力急剧下降.阿司匹林各浓度与对照组相比差异都很显著，有统计学意义(P＜0.05)(图2C).图2 细胞增殖分析阿司匹林对K562细胞的影响A:MTT法检测不同浓度的阿司匹林处理K562细胞后的抑制曲线;B:细胞计数法检测不同浓度的阿司匹林处理K562细胞后的细胞数目变化;C:软琼脂克隆形成实验检测不同浓度的阿司匹林处理K562细胞后的克隆数，内置图是集落细胞的放大(*P＜0.05;＊＊P＜0.01).Fig.2 Effects of aspirin on the proliferation of K562 cellsA:MTT assays of K562 cells treated with different concentrations of aspirin.B:Cell counting assay of treated K562 cells.C:Soft agar colony formation assay of K562 cells treated with aspirin.The inset shows the amplification of colony cells.*P ＜0.05;＊＊P ＜0.01.2.3 阿司匹林对细胞凋亡的影响K562细胞用阿司匹林处理36 h后以流式细胞仪进行分析，结果表明K562的晚期凋亡及凋亡后死亡数量随着阿司匹林浓度的增加而增加，而相应的存活细胞呈现明显的下降趋势.尤其K562细胞在30 mmol/L的阿司匹林作用下，早期凋亡细胞所占比例为(11.71±4.84)%，晚期凋亡和死亡细胞所占比例为(58.01±5.19)%.浓度为20 mmol/L和30 mmol/L的阿司匹林组与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05);而10 mmol/L的阿司匹林组与对照组相比无显著差异(P＞0.05)(表1). 表1 流式细胞仪检测阿司匹林对K562细胞凋亡的影响Tab.1 Effects of aspirin on K562 cell apoptosis detected by FACS注:与正常对照组相比，*P ＜0.05.Groups Cell survival rate Early Apoptosis rate Late Apoptosis an 0 mmol/L 96.88 ±3.42 1.81 ±2.12 1.29 ±0 mmol/L 88.72 ±10.24 5.31 ±2.82 5.88 ±0 mmol/L 51.38 ±8.05* 7.54 ±0.37* 40.94 ±6 0 mmol/L * *d Necrotic rate 1.27 1 4.46 2.34*3 30.28 ±6.9811.71 ±4.8458.01 ±5.19*2.4 阿司匹林对裸鼠成瘤能力的影响裸鼠体内实验观察可见，腹腔注射阿司匹林后裸鼠的肿瘤生长明显减慢，瘤组织上的血管较少，肿瘤的抑制率为37% ～42%(图3A).与生理盐水对照组相比肿瘤的质量和体积差异显著，有显著统计学意义(P＜0.01)(图3B-3D).这些结果提示阿司匹林对K562细胞株在裸鼠中的成瘤有明显的抑制作用.2.5 细胞信号通道蛋白表达的影响提取正常对照组和阿司匹林处理实验组细胞的总蛋白，进行Western印迹分析细胞信号通道蛋白的表达量变化.结果显示，以GAPDH蛋白表达量为内参，随着阿司匹林浓度的增加Wnt信号通道的关键因子βcatenin的蛋白表达量逐渐降低，而细胞周期抑制因子p21蛋白表达明显增高.同时信号传导与转录激活因子5A(STAT5A)的蛋白水平下降;细胞内DNA修复系统的重要成员多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达下调;核转录因子-κB p65基因的表达降低(图4).由此可见，阿司匹林可能影响Wnt、STAT、NF-κB信号通道和细胞周期的进程，进而抑制慢性粒细胞白血病细胞的生长和增殖.图3 裸鼠成瘤实验(A:全身图;B:肿瘤图;C:肿瘤质量比较;D:肿瘤体积变化)Fig.3 Effect of aspirin on the in vivo tumorigenesis of K562 cells in nudemice(A:the whole-body images;B:the tumor image;C:the tumor weight measurement;D:the tumor volume measurement)图4 阿司匹林对细胞信号通道蛋白的表达影响Fig.4 Effects of aspirin on the protein levels of cell signaling pathways3 讨论阿司匹林是医学史上的经典药物，也是应用最广泛的药物.近来发现阿司匹林可以降低癌症的发病风险和远处转移风险［5］.阿司匹林在体内外对多种体内致癌物诱发性和移植性肿瘤均有明显的抑制作用，而且腹腔注射阿司匹林对小鼠等均有显著抗肿瘤的作用［6-9］.血栓可促进癌细胞的转移，阿司匹林对抗肿瘤转移和扩散可能跟阿司匹林预防和破坏肿瘤细胞周围的血栓从而防止癌细胞转移有关［11］.因而阿司匹林是一种很好的肿瘤化学预防剂［12-13］.白血病是起源于骨髓的恶性肿瘤，传统的化疗毒副作用大，易复发，高耐药性.作者的研究证实阿司匹林能够体外促进慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡性死亡，具有明显的细胞形态和细胞数目变化，而且存在浓度和作用时间的依赖性.采用Annexin V-FITC/PI标记流式细胞术检测发现30 mmol/L浓度的阿司匹林对K562细胞诱导凋亡作用最明显，细胞毒性作用最强.裸鼠成瘤实验也显示阿司匹林能有效抑制人K562裸鼠移植瘤的生长，实验组的肿瘤体积和质量明显低于对照组，抑瘤率为37% ～42%.本实验未发现有肿瘤转移，这可能与K562细胞在裸鼠中转移潜能低有关.阿司匹林能否抑制K562转移和扩散，需用不同的实验模型进行进一步的研究.总之，这些结果提示阿司匹林可能具有一定的治疗慢性粒细胞白血病的效果.近年来的研究表明阿司匹林抗癌的机制有下调抑制凋亡bcl-2基因的活性，上调促进凋亡的bax基因表达，促进细胞凋亡［14］;抑制NF-κB活性导致细胞生长停滞［15］;抑制环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达从而抑制炎症和细胞分裂或降低前列腺素的合成而发挥抗肿瘤效应［16］;诱导自杀相关因子Fas表达，下调Fas配体(FasL)表达，通过 Fas-FasL途径诱导肿瘤细胞的免疫杀伤［17］.本实验提示阿司匹林降低了β-catenin、STAT5A、PARP和NF-κB p65在K562细胞中的蛋白表达，而细胞周期抑制因子p21蛋白的表达增高.β-catenin是Wnt信号通道的关键蛋白，调节了癌细胞的增殖、分化和转移［18］.STAT通道持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化，目前发现STAT5A缺失可抑制癌细胞的存活率和延缓小鼠模型上乳腺癌的进展，提示降低STAT5A的活性可能是乳腺癌治疗的有效途径［19］.PARP主要在细胞过程如DNA修复和程序化细胞死亡中起作用，有研究表明PARP抑制剂引起DNA修复缺陷，这是肿瘤治疗的一类新药［20］.转录因子NF-κB p65与肿瘤转化、侵袭、转移、凋亡抵抗等密切相关，小干扰RNA沉默NF-κB p65基因表达可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖并诱导其凋亡［21］.p21是一个抑癌基因，与细胞周期蛋白及其激酶复合物结合抑制Rb蛋白质的磷酸化而调节转录因子E2F的活性，从而阻止细胞周期从G1过渡到S期，抑制细胞增殖.并且p21的低表达与多数肿瘤的预后不良密切相关［22］.这些提示阿司匹林影响慢性粒细胞白血病中的Wnt、STAT、NF-κB信号通道和阻滞细胞周期进程，其具体作用机制及其细胞信号途径有待更深入的研究.由此可见，阿司匹林对慢性粒细胞白血病的治疗具有重要的应用和开发前景.参考文献:［1］DEININGER M W，GOLDMAN J M，MELO J V.The molecular biology of chronic myeloid leukemia［J］.Blood，2000，96(10):3343-3356.［2］CLIFT R A，BUCKNER C D，THOMAS E D，et al.Marrow transplantation for patients in accelerated phase of chronic myeloid leukemia［J］.Blood，1994，84(12):4368-4373.［3］HOLTZ M S，SLOVAK M L，ZHANG F，et al.Imatinibmesylate(STI571)inhibits growth of primitive malignant progenitors in chronic myelogenous leukemia through reversal of abnormally 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breast cancer［J］.J Clin Oncol，2010，28(9):1467-1472.［10］CHATTOPADHYAY M，KODELA R，OLSON K R，et al.NOSH-aspirin(NBS-1120)，a novel nitric oxide-and hydrogen sulfide-releasing hybrid is a potent inhibitor of colon cancer cell growth in vitro and in a xenograft mouse model［J］.Biochem Biophys Res Comm，2012，419(3):523-528.［11］KORT W J，HULSMAN L O，VAN SCHALKWIJK W P，et al.Reductive effect of aspirin treatment on primary tumor growth and metastasis of implanted fibrosarcoma in rats［J］.J Natl Cancer Inst，1986，76(4):711-720.［12］ROTHWELL P M，WILSON M，ELWIN C E，et al.Long-term effect of aspirin on colorectal cancer incidence and mortality:20-year follow-up of five randomised trials［J］.Lancet，2010，376(9754):1741-1750.［13］THWELL P M，FOWKES F G，BELCH J F，et al.Effect of daily aspirin on long-term risk of death due to cancer:analysis of individual patient data from randomised trials［J］.Lancet，2011，377(9759):31-41.［14］KIM K Y，SEOL J Y，JEON G A，et al.The combined treatment of aspirin and radiation induces 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P65基因表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖与凋亡的影响［J］.南京医科大学学报:自然科学版，2008，28(2):184-189.［22］ABBAS T，DUTTA A.p21 in cancer:intricate networks and multiple activities［J］.Nat Rev Cancer，2009，9(6):400-414.。
低氧和缺氧诱导因子-1α对人白血病细胞株K562细胞血管相关生成因子的影响
低氧和缺氧诱导因子-1α对人白血病细胞株K562细胞血管相关生成因子的影响XIE Youbang;HOU Yan;YANG Hongyan;LI Wenqian;LI Jianping;SHEN Kuo;MENG Fang;WANG Li;HAN Guoxiong;AI Guo;JIANG Baili;ZHAO Qiangqiang【摘要】目的观察低氧和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对K562细胞分泌血管相关生成因子的影响.方法选用携带和干扰HIF-1α基因的慢病毒转染K562细胞,以转染携带和干扰HIF-1α基因的K562细胞分别作为过表达组、干扰组,同时以空载病毒转染K562细胞作为对照组,3组在低氧状态下培养72 h后收集细胞.通过荧光显微镜观察转染效率,采用RT-PCR法检测HIF-1α和血管相关生成因子mRNA表达水平;ELISA法检测培养上清液中血管相关生成因子蛋白水平.结果慢病毒转染K562细胞最佳感染复数(MOI)为10,转染效率约50％,经过嘌呤霉筛选后转染阳性细胞达90％以上.干扰组人血管生成素(ANG)-Ⅱ和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达均低于过表达组,而转化生长因子(TGF)-β mRNA表达高于对照组和过表达组,过表达组ANG-ⅡmRNA表达高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).培养上清液中TGF-α未检测到,过表达组ANG-Ⅱ水平低于对照组(P＜0.05);过表达组VEGF和TNF-α水平高于对照组,干扰组TGF-β和VEGF水平低于对照组(P＜0.05).干扰组TGF-β、VEGF和TNF-α水平低于过表达组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论低氧和HIF-1α可影响慢性白血病K562细胞血管生成相关因子的表达和自分泌,但在mRNA表达和蛋白分泌水平上存在差异.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2019(048)003【总页数】6页(P364-369)【关键词】白血病;K562细胞;缺氧诱导因子-1α;低氧;血管相关生成因子【作者】XIE Youbang;HOU Yan;YANG Hongyan;LI Wenqian;LIJianping;SHEN Kuo;MENG Fang;WANG Li;HAN Guoxiong;AI Guo;JIANG Baili;ZHAO Qiangqiang【作者单位】;;;;;;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】R557.+3骨髓中造血细胞不受控制地增殖是白血病的特征之一，慢性白血病细胞会导致更多造血功能正常的成熟细胞群的出现，临床进展比较慢，生存周期长[1]。
盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562增殖及分化的影响
盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562增殖及分化的影响
申屠杨萍;章炳都;袁琳波;杜友爱
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2010(50)11
【摘要】目的探讨盐酸肾上腺素在白血病发生、发展中的作用.方法采用MTT法集落培养实验观察盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562细胞增殖的影响;采用Gimesa染色观察细胞形态学变化,采用流式细胞术检测CD71分化抗原表达.结果盐酸肾上腺素可明显降低K562细胞增殖、集落生长,并呈浓度依赖性;在形态上可诱导细胞趋向红系分化,同时上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达.结论盐酸肾上腺素在白血病发生、发展中起重要作用,其机制为抑制K562细胞增殖和诱导其分化.
【总页数】3页(P10-12)
【作者】申屠杨萍;章炳都;袁琳波;杜友爱
【作者单位】温州医学院机能实验中心,浙江温州325035;温州市瓯海区第二人民医院;温州医学院生理学教研室;温州医学院教务处
【正文语种】中文
【中图分类】R733.7
【相关文献】
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2.花色素对白血病细胞株K562细胞增殖的影响 [J], 谭利利;徐俊英;龚珂;苏圣;张玉敏;朱文慧;侯毅鞠;
3.人参多糖注射液体外诱导人白血病细胞株K562增殖抑制及分化 [J], 何轩;姜蓉;李静;左国伟;雷翠蓉;王亚平;王建伟;陈地龙
4.甘草次酸对白血病细胞株K562增殖及其分化的影响 [J], 袁琳波;申屠杨萍;王静;朱林榆;刘重斌
5.ADAR1 shRNA对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响 [J], 胡彬;张蓉;刘小五;刘赞;王刚峰;梁英民
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U0126增强索拉非尼对K562细胞增殖抑制、凋亡及诱导分化作用
U0126增强索拉非尼对K562细胞增殖抑制、凋亡及诱导分化作用陈琰;肖若芝;王立琳;何程明;阮星星;熊慕珺n;林东军【摘要】目的:观察索拉非尼、索拉非尼联合MEK激酶抑制剂U0126对人慢性粒细胞白血病K562细胞株增殖、凋亡及分化的影响,并初步探讨其机制.方法:CCK-8法观察索拉非尼、U0126单用及不同浓度索拉非尼联合10 μmol/L U0126作用K562细胞48 h后细胞增殖活力变化;PI单染法及Hoechst 33342染色法观察索拉非尼、U0126单用及索拉非尼联合U0126对K562细胞株的凋亡诱导作用;细胞周期分析及联苯胺染色观察索拉非尼、U0126单用及低浓度索拉非尼联合U0126是否诱导K562细胞株向红系分化;采用免疫印迹法检测c-Myc蛋白表达.结果:MEK抑制剂U0126增强了索拉非尼对K562细胞增殖抑制、促凋亡及诱导分化作用.两药联用显著下调K562细胞c-Myc蛋白水平.结论:MEK抑制剂U0126增强索拉非尼对K562细胞增殖抑制、凋亡及诱导分化作用,这可能与其协同下调c-Myc蛋白有关.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)005【总页数】6页(P859-864)【关键词】索拉非尼;U0126;K562细胞;细胞凋亡;c-Myc【作者】陈琰;肖若芝;王立琳;何程明;阮星星;熊慕珺n;林东军【作者单位】中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学血液病研究所,广东广州,510630;中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学血液病研究所,广东广州,510630;中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学血液病研究所,广东广州,510630;中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学血液病研究所,广东广州,510630;中山大学附属第三医院血液科,广东,广州,510630;中山大学血液病研究所,广东广州,510630【正文语种】中文【中图分类】R733.7慢性粒细胞白血病特征性的分子生物学异常为BCR-ABL融合基因，其编码的BCR-ABL蛋白可持续活化多条同细胞增殖有关的信号通路分子。
生长抑素对人红白血病K562细胞的抑制作用
第33卷第6期2002年12月解剖学报ACTA ANATOMICA SINICAVoI.33，No.6Dec.2002生长抑素对人红白血病K562细胞的抑制作用陈红霞张圣明!吴洪娟李锋杰苗乃法李香群芦志红（潍坊医学院组织学胚胎学教研室，潍坊261042）［摘要］目的研究生长抑素对人红白血病K562细胞的抑制作用。
方法采用8肽生长抑素———奥曲肽（octreotide ，SMSZOL 1995，SMS ）在体外作用于K562细胞，经光镜、电镜观察、3H-TdR 掺入法和TdT 缺口末端标记（TUNEL ）技术检测K562细胞增殖、凋亡的变化。
结果光镜下观察到，加SMS 组培养72h 与空白对照组比较，细胞碎片增多；电镜下可见，SMS 处理组中部分细胞核染色质靠核膜边集，呈块状或新月形，部分细胞胞浆中见核碎裂团块与空泡，线粒体基质深染、空泡样变和髓样变；3H-TdR 掺入法显示，SMS 呈浓度依赖性地抑制K562细胞增殖，抑制范围为20%~50%，以10-6moI /L 最有效。
在10-10~10-6moI /L 范围内，与对照组比较有显著性差异（P <0.01）；TUNEL 检测见核深染的阳性细胞，10-6moI /L 组与对照组比较，凋亡细胞明显增多（P <0.01）。
结论生长抑素可抑制K562细胞增殖，诱导凋亡。
［关键词］生长抑素；奥曲肽；K562细胞；白血病［中图分类号］R733.7［文献标识码］A ［文章编号］0529-1356（2002）06-607THE INHIBITION EFFECT OF SOMATOSTATIN ANALOGUE ON K562LEUKEMIC CELL LINECHEN Hong-xia ，ZHANG Sheng-ming !，WU Hong-juan ，LI Feng-jie ，MIAO Nai-fa ，LI Xiang-gun ，LU ZHi-hong（Department of Histology and Embryology of Weifang Medical College ，Weifang261042，China ）［Abstract ］Objective To study the inhibition effect of somatostatin anaIogue （octreotide ，SMS 201995，SMS ）on the pro-Iiferation of K562Ieukemic ceII Iine.MethodsK562ceIIs were treated with SMS in uitro.Light microscope ，eIectron micro-scope ，3H-TdR incorporation and TUNEL were used to investigate the proIiferation and apoptosis.ResultsCompared with controIgroup ，the K562ceIIuIar fragments in SMS group increased after being cuItured for 72hours marginization of mitopIasm aIong membrane and nucIeonic fragments and vacuoIar degeneration ，hyperch romatism ，vacuoIar degeneration and puIpiform change of mitochondrion were seen under the eIectron microscope.SMS inhibited the proIiferation of K562ceIIs concentraton-dependentIy as determined by 3H-TdR incroporation by 20%-50%，in which the most effective inhibitory concentration was 10-6moI /L.There is a significant difference between the concentration ranging 10-10moI /L to 10-6moI /L and the controI group.Positive ceIIs of hy-perchromatin were seen with TUNEL.Apoptosis ceIIs increased significantIy in 10-6moI /L group comparing with controI group （P <0.01）.ConclusionSMS inhibited the proIiferation and induced the apoptosis of K562ceII Iine in uitro.［Key words ］Somatostatin ；Octreotide ；K562Ieukemic ceII Iine ；Leukemia［收稿日期］2001-08-28［修回日期］2001-11-16［基金项目］山东省自然科学基金资助项目（Y97CO4040）［作者简介］陈红霞（1974—），女（汉族），山东栖霞人，山东大学医学院在读博士。
Daxx抑制K562细胞向巨核细胞分化
Daxx抑制K562细胞向巨核细胞分化刘胜兵;潘魏巍;沈忠飞;徐营;郭燕君;王志坚;黄倩【摘要】目的:观察过表达死亡结构域相关蛋白(Daxx)对K562细胞活力和向巨核细胞分化的影响.方法:建立稳定过表达Daxx的K562细胞,荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR和Western blot检测Daxx的过表达效果,CCK-8法检测过表达后细胞活力的变化;佛波酯(PMA)诱导K562细胞向巨核细胞系分化,Westem blot检测在K562细胞向巨核细胞分化过程中Daxx和p-ERK的表达变化,流式细胞术检测CD41和CD61的表达变化;PMA处理过表达Daxx的K562细胞,NBT还原实验检测细胞分化情况,流式细胞术检测过表达Daxx后CD41和CD61的表达变化,Western blot检测p-ERK的蛋白水平.结果:建立了稳定的过表达Daxx的K562细胞,过表达Daxx抑制K562细胞的活力.PMA诱导K562细胞向巨核细胞分化,CD41和CD61表达水平增高,同时p-ERK的蛋白水平升高,Daxx表达水平下降.过表达Daxx可以抑制K562细胞向巨核细胞分化,CD41和CD61表达降低,同时p-ERK的蛋白水平降低.结论:过表达Daxx可以抑制K562细胞生长及向巨核细胞分化,同时抑制ERK的磷酸化.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2016(032)006【总页数】7页(P1004-1010)【关键词】死亡结构域相关蛋白;K562细胞;巨核细胞分化;佛波酯【作者】刘胜兵;潘魏巍;沈忠飞;徐营;郭燕君;王志坚;黄倩【作者单位】嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院,浙江嘉兴314001【正文语种】中文【中图分类】R329.21;R730.23白血病是严重危害人类生命健康的血液系统恶性肿瘤，其生物学特征表现为细胞增殖失控、分化成熟受阻、正常凋亡过程发生障碍，因而导致分化异常细胞大量增殖。