细胞培养操作过程
细胞培养基本步骤
细胞培养基本步骤细胞培养是一项重要的生物技术，涉及到多个步骤。
以下是细胞培养的基本步骤：1. 准备细胞培养环境：细胞培养需要在无菌的环境中进行，因此需要准备无菌操作台、培养箱、显微镜、细胞计数器等设备，确保培养环境符合要求。
2. 细胞复苏：从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的细胞，快速转移到37℃水浴中解冻。
然后将细胞移至培养瓶中，加入适量培养基，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布。
3. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代。
将原培养瓶中的培养基吸出，加入适量胰蛋白酶，轻轻摇动培养瓶，使胰蛋白酶与细胞接触。
等待几分钟，待细胞变圆并从瓶底脱落，将胰蛋白酶吸出。
然后加入新配置的培养基，用吸管吹打细胞团块，使其分散成单个细胞。
最后将细胞悬液移至新的培养瓶中，放在培养箱中继续培养。
4. 细胞冻存：当需要进行长期保存时，可以将细胞冻存。
将细胞从培养箱中取出，离心收集，用适量细胞冻存液重悬细胞。
然后将细胞悬液分装到冻存管中，放入-80℃冰箱或液氮中保存。
5. 细胞观察：在细胞培养过程中，需要定期观察细胞的生长情况。
通过显微镜观察细胞的形态、密度等指标，判断细胞的生长状态和是否发生异常。
如发现异常情况，应及时采取措施处理。
6. 细胞计数和活力检测：采用细胞计数器或血球计数板进行细胞计数，同时检测细胞的活力。
一般采用台盼蓝染色法或荧光染色法进行检测。
7. 细胞换液和传代：根据需要，定期更换新鲜的培养基，以保证细胞的营养需求。
同时，在传代过程中要注意细胞的消化程度和生长情况，避免过度生长或未充分消化导致细胞状态不佳。
总之，细胞培养是一项技术性很强的工作，需要严格的操作规程和细致的观察。
通过不断实践和总结经验，可以提高细胞培养的成功率和稳定性。
细胞培养过程
细胞培养过程：复苏、换液、传代、冻存1、复苏（1）取适量培养液加入离心管中；（2）将冻存的细胞在37℃水浴中快速使其融化；（3）将细胞吸入离心管中，1000r.min-1离心5 min,倒去上清液，规定加入培养液，打匀，转移到培养瓶中，即可。
2、换液（1）将培养瓶中已变色的培养液倒掉，余液用棉花蘸掉；（2）用PBS洗涤培养瓶（从没有细胞的一侧倒掉）（3）加入新鲜培养液，即可。
3、传代（细胞生长得较满、较好，分瓶后至少培养两天后再铺板）（1）将培养瓶中已变色的培养液倒掉；（2）用PBS洗涤培养瓶（细胞一侧）；（3）加入2 mL胰酶，静置，待细胞将脱落时，倒掉胰酶，加入培养液，打匀后，分至多个瓶中。
4、冻存（1）将培养瓶中已变色的培养液倒掉；（2）用PBS洗涤培养瓶（细胞一侧）；（3）加入胰酶，静置，待细胞将脱落时，倒掉胰酶（可不倒），加入适量培养液，将贴壁细胞吹落，吸入到离心管中，1000r.min-1×5min,倒掉上清液，加入900uL新生牛血清（营养来源）和100 uLDMSO（保护剂）打匀后，吸到冻存管中，密封，于-80℃冻存。
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS 冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；3.再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；然后转到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。
细胞复苏1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；3. 离心， 1000rpm，5min；4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；5. 次日更换一次培养液，继续培养。
细胞培养的操作步骤
细胞培养的操作步骤细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的方法，广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域。
下面是细胞培养的操作步骤，包括细胞的收获、传代和检测。
1.材料准备：- 细胞培养基：选择适合细胞类型和培养要求的培养基，常用的包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）和RPMI（Roswell Park Memorial Institute）等。
-细胞：选择合适的细胞系，如人类胚胎肺成纤维细胞（HELF）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）等。
-细胞培养器具：包括培养皿、细胞培养瓶、细胞离心管等。
2.细胞收获：-细胞培养器具消毒：用70%乙醇或其他消毒剂将培养器具进行消毒。
-细胞培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。
-细胞培养皿涂覆：将培养皿或瓶子内壁涂覆一层细胞黏附物，如明胶或聚-卵氨酸等，以增加细胞附着。
3.细胞传代：-培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。
-细胞收获：将细胞培养瓶中的培养基倒掉，用生理盐水等缓冲液洗涤细胞。
- 细胞分离：使用胰酶（Trypsin）或胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）将细胞从细胞培养瓶上析离下来。
-细胞计数：使用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，以确定细胞的密度。
-细胞培养：将细胞培养在新的细胞培养瓶中，加入适量的预热培养基。
4.细胞检测：-细胞形态观察：使用倒置显微镜或显微摄像系统观察细胞的形态变化和增殖情况。
- 细胞活力检测：使用细胞活力检测试剂，如MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）或CCK-8（Cell Counting Kit-8）等，评估细胞的存活率和代谢活力。
- 细胞凋亡检测：使用凋亡检测试剂盒，如Annexin V-FITC和PI （Propidium Iodide）等，评估细胞凋亡的程度。
细胞培养方法与步骤
细胞培养方法与步骤细胞培养是指将细胞从一个生物体中取出并在实验室中培养繁殖的过程。
细胞培养可用于各种实验研究，如细胞生物学、分子生物学、药物筛选等。
细胞培养的方法多种多样，下面将介绍常见的细胞培养方法及其步骤。
一、原代细胞培养方法原代细胞培养是指将从组织或器官中分离的细胞直接进行培养。
原代细胞培养是建立细胞株的重要步骤，一般需要一定的技术和设备。
步骤：1.组织分离：从动物或人体中取得组织，如肝脏、心脏等，并用生理盐水或细胞培养基洗刷组织的表面。
2.细胞分离：将组织切割成小块，并用胰蛋白酶或胰酶进行消化，使细胞分散。
3.细胞收集：用细胞培养基冲洗消化后的组织碎片，将细胞收集到离心管中。
4.离心：将离心管放入离心机中进行离心，分离出细胞沉淀。
5.细胞培养：将细胞沉淀重新悬浮在细胞培养基中，然后转移到培养皿中进行培养。
二、细胞株培养方法细胞株培养是指将原代细胞培养到一定数目并进行传代培养的过程。
步骤：1.细胞传代：细胞达到一定密度后，用胰蛋白酶或胰酶等对细胞进行消化，将细胞分离。
2.细胞计数：用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，得到细胞浓度。
3.细胞培养：将分散的细胞与新鲜的培养基混合，然后转移到培养皿中进行培养。
4.细胞增殖：培养皿中的细胞经过一段时间的培养，可以看到细胞开始增殖，形成细胞集落。
5.细胞传代：当细胞集落接近充满培养皿时，需进行细胞传代，即将细胞分散到新的培养皿中。
6.细胞冻存：当细胞达到所需数量后，可以进行细胞冻存，以备之后的使用。
三、细胞培养技术要点1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细菌或真菌的污染。
操作前需做好洗手消毒，使用无菌操作台，并加入适量的抗生素或抗菌剂到培养基中。
2.培养液选择：根据不同细胞的需要，选择适合的培养基和生长因子，以提供细胞的生长所需的营养物质。
3.培养条件控制：温度、湿度、CO2浓度等因素对细胞生长有重要影响，需根据具体要求进行调节。
4.细胞检测：在细胞培养过程中，需要定期观察和检测细胞的形态、生长情况、细胞浓度等指标，以确保细胞的正常生长和状态。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是在体外培养和维持生物细胞生长和繁殖的一种技术，它是生物学、医学研究和药物研发等领域的重要实验手段。
细胞培养的过程需要遵循一定的步骤和注意事项，以确保细胞的正常生长和繁殖。
细胞培养的详细过程如下：2.细胞分离：将组织或细胞样品分离，去除多余的组织或细胞，获得单个细胞的悬浮液。
分离的方法包括酶消化、机械或化学分离等。
3.细胞培养基准备：准备培养基，培养基的配制根据细胞的要求而定，可以是无血清培养基、低血清培养基或含血清的培养基。
培养基提供了细胞所需要的营养物质和生长因子。
4.细胞接种：将细胞悬浮液接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中，密度通常在1×105至1×106个细胞/mL之间。
接种后，培养皿或培养瓶需放入培养箱中，设定适当的温度、湿度和气体环境。
5.细胞培养条件控制：细胞的生长和繁殖需要适宜的培养条件。
常规的培养条件包括37℃、5%CO2和95%湿度。
通过调节培养基的pH值、温度和培养箱内的CO2和湿度等参数，来维持良好的培养环境。
6.细胞观察和培养基更换：培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态和形态，通过显微镜观察细胞的形态变化和细胞层的覆盖率等指标。
根据需要，定期更换培养基，以确保提供足够的营养物质和维持适宜的细胞密度。
7.细胞传代：当细胞达到充分生长的状态时，需要进行传代，即将细胞从当前培养皿或培养瓶中移至新的培养皿或培养瓶中，以保证细胞的健康和生长。
用一句话总结上述细胞培养的过程就是从细胞分离到细胞培养，并按照一定条件进行观察和传代。
在进行细胞培养时，需要注意以下事项：1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细胞被异物或外源性微生物污染。
操作前，材料和设备需要进行消毒。
2.培养基筛选：根据细胞的特性和需求选择合适的培养基，确保细胞能够获得必要的营养物质和生长因子。
3.冻存细胞库：定期将细胞进行冻存，以备后续使用，以避免病毒污染或细胞失活。
细胞培养操作流程
细胞培养操作流程细胞培养是一种人工环境中扩增和维持活细胞的技术。
它对于研究细胞生物学、药物筛选和治疗等方面有着重要的应用。
下面是一个常见的细胞培养操作流程，具体步骤如下：1.准备培养器具和试剂：首先需要准备好培养器具和所需试剂，包括培养皿、离心管、培养基、培养液、胶原蛋白贴士等。
2.细胞的分离和收获：将待培养的组织或细胞样品取出，用适当的方法将细胞分离开来。
可以使用酶消化、机械切割或筛选等方法。
分离好的细胞通过离心将细胞沉淀，将上清液吸掉，得到细胞沉淀。
3.细胞计数和浓度调整：使用细胞计数仪或血球计数室等工具，将细胞计数。
根据需要可以进行浓度调整，使其适合在培养器具中的扩增。
4.细胞的接种和培养：将得到的细胞沉淀重新悬浮于培养基中，并将其放置于培养皿中。
确定适宜的培养条件，包括温度、湿度、气体环境等。
定期观察细胞的生长情况，并更换培养基，以维持细胞的健康生长。
5.细胞的传代：当细胞在培养皿中达到一定密度时，需要进行传代，以防止细胞群体过于致密导致细胞生长受限。
传代前需先将细胞沉淀，并用如十倍的细胞培养基将其重新悬浮。
将悬浮的细胞分装至新的培养皿中，培养基的更换和细胞的观察也是相同的。
6.试验处理：在细胞培养过程中，可能需要对细胞进行各种试验处理，如药物处理、感染等。
根据需要，将试验处理物加入培养基中，确保细胞接触到试剂，并保持正常生长。
7.细胞固定和染色：进行一些试验或者观察时，对细胞进行固定和染色可以帮助观察或者分析细胞的形态、细胞器分布等。
选择适合的固定和染色方法，将细胞固定在培养皿中，并使用染色剂染色。
8.细胞的收集和保存：在实验完毕后，可以用适当的方法将培养皿中的细胞收集起来。
例如，轻轻洗涤细胞，然后加入适当的缓冲液，用吸管吸出，或者使用离心机离心沉淀。
收集好的细胞可以用于下一步的实验，或者进行冷冻保存。
9.培养器具的清洁和消毒：一旦细胞收集完毕，需要对使用过的培养器具进行清洗和消毒，以防止细菌、真菌、病毒等的传播。
细胞培养操作步骤
细胞培养操作步骤细胞培养是一项用于研究和生产生物技术产品的基础技术。
以下是细胞培养的一般操作步骤：1.实验室准备：-消毒：在开始实验之前，对实验室进行消毒处理，确保实验环境的无菌。
-工具准备：准备好所有需要的培养器具，如离心管、试管、培养皿、吸管等。
-培养基准备：根据实验需要，准备好适当的培养基，并对其进行消毒处理。
2.细胞准备：-细胞收获：收获细胞，并将其转移到一个装有细胞培养基的培养皿中。
-细胞计数：使用细胞计数器或显微镜对细胞进行计数和分析，以确定细胞的浓度和活性。
-细胞传代：如果需要，将细胞进行传代以维持其活性和数量。
3.培养条件：-培养温度：根据细胞的要求，将培养皿放置在适当的温度控制设备中，通常为37℃。
-CO2浓度：对于一些细胞（如哺乳动物细胞），需要提供适当的CO2浓度来维持其生长和代谢。
-培养液更换：根据具体要求，定期更换培养液，以保持细胞的健康生长。
4.细胞培养：-培养基添加：向培养皿中加入适当量的培养基，以提供细胞生长和繁殖所需的养分。
-培养皿处理：将培养皿放入恒温培养箱中，确保细胞在适宜的环境中生长。
-细胞观察：定期使用显微镜观察细胞的生长情况和形态变化，以评估细胞的健康状态。
-培养皿除菌：如果培养皿被发现有细菌或真菌污染，需要将其除菌，以保证细胞的无菌状态。
5.细胞传递：-细胞解离：当细胞达到所需密度或需要进行分离时，使用适当的酶或溶液将细胞从培养皿中解离。
-细胞收获：通过离心，将细胞收集到离心管中，并进行计数和分析。
-细胞传递：将细胞转移到新的培养皿中，重新开始培养过程。
细胞培养是一项复杂而精细的操作，需要高度的无菌技术和细心的操作。
在整个过程中，需要持续监测和调整培养条件，以确保细胞的健康生长和繁殖。
此外，注意遵循实验室的安全规范，保护自己和实验室的安全。
细胞培养的成功与否，将直接影响到后续实验的结果和应用。
细胞培养流程
细胞培养流程细胞培养是生物学实验中非常重要的一环，它可以用来研究细胞的生长、增殖、分化、凋亡等生命活动，也可以用来生产生物制品。
正确的细胞培养流程对于细胞的健康和实验结果的准确性至关重要。
下面将介绍一般的细胞培养流程。
1. 准备培养基和培养器具。
首先，准备所需的培养基和培养器具。
培养基是细胞生长所需的营养物质和生长因子的混合物，而培养器具包括细胞培养皿、离心管、移液器等。
在使用前，需要将培养器具进行高压蒸汽灭菌，以确保无菌状态。
2. 细胞解冻或传代。
如果是从冷冻状态中解冻细胞，首先需要将冻存管放入37°C 的水浴中迅速解冻，然后将细胞转移到含有培养基的离心管中。
如果是传代细胞，需要将旧的培养基和细胞废液倒掉，然后用新的培养基将细胞洗涤干净。
3. 细胞接种。
将细胞均匀地分散在培养皿中，并加入适量的培养基，然后将培养皿放入培养箱中。
培养箱中的环境需要保持恒定的温度、湿度和二氧化碳含量，以提供良好的生长条件。
4. 细胞观察和处理。
在细胞培养的过程中，需要定期观察细胞的形态和数量，以及培养基的颜色和透明度。
一旦发现细胞出现异常现象，如污染、凋亡等，需要及时处理，避免影响实验结果。
5. 细胞收获。
当细胞达到所需的数量和状态时，可以进行细胞的收获。
首先将培养基倒掉，然后用含有胰酶或无酶的PBS溶液洗涤细胞，最后用离心机将细胞沉淀下来。
6. 细胞冻存。
如果需要长期保存细胞，可以将细胞进行冻存。
首先将细胞悬浮在含有10% DMSO的冻存液中，然后将冻存管放入-80°C或液氮罐中保存。
以上就是一般的细胞培养流程，正确的操作和严格的无菌操作是保证细胞培养成功的关键。
希望本文对您有所帮助，谢谢阅读。
细胞培养的过程及注意事项
36细胞培养旳过程及注意事项细胞旳培养过程及注意事项；根据培养过程中与否需要分割培养物进行再培养而将细；一、原代培养；（一）过程；原代培养旳基本过程包括取材、培养材料旳制备、接种；1.组织块培养法；(1)基本操作过程；1）、用培养液湿润所取组织材料, 并用锋利旳眼科剪；2）、用湿润旳吸管吸取切碎旳组织块, 清清吹到培养；3）、将培养瓶翻转, 使瓶底朝上, 在种植了组织块一；4）、将种植了组织块细胞旳培养过程及注意事项根据培养过程中与否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。
一、原代培养（一）过程原代培养旳基本过程包括取材、培养材料旳制备、接种及培养等环节。
原代培养旳措施诸多, 基本和最常用旳是组织块培养法和分离细胞法。
1.组织块培养法(1)基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料, 并用锋利旳眼科剪将附在其上旳脂肪和结缔组织清除洁净。
再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利旳眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks液漂洗多次, 直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。
2）、用湿润旳吸管吸取切碎旳组织块, 清清吹到培养瓶皿中, 并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上, 量不要过多, 要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转, 使瓶底朝上, 在种植了组织块一侧旳对侧面加足培养液, 勿使组织块与培养液接触, 塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块旳一侧朝上, 静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1 h到3h后翻瓶, 使贴壁旳组织块浸没与培养液中, 静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液, 或者根据培养瓶种颜色旳变化确定换液时间。
2.注意事项1）、组织块接种后旳前3天, 从组织块向外迁徙旳细胞数很少, 组织块旳黏附不牢固, 在观测和移动旳过程中, 注意不要引起液体旳振荡。
要防止常常翻动和振动, 否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。
2）、加入旳培养液不适宜过多, 防止浸泡旳组织块受轻微旳波动而脱落下来。
实验室细胞培养的一般步骤
实验室细胞培养的一般步骤细胞培养是一项重要的实验室技术，广泛应用于生命科学研究以及医药产业中。
下面将为您介绍一般的细胞培养步骤，希望能为您提供一些指导意义。
第一步：制备培养基细胞培养的第一步是制备适合细胞生长的培养基。
培养基通常包括营养物质、氨基酸、维生素、生长因子等，可以为细胞提供足够的养分和环境条件。
根据不同的细胞类型和实验目的，制备不同种类和浓度的培养基。
第二步：分离细胞在细胞培养之前，需要将细胞从组织、器官或已有培养物中分离出来。
通常采用酶消化、机械剪切或离心等方法来分离细胞。
分离后，细胞可以在培养基中生长和繁殖。
第三步：细胞接种将分离出的细胞接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中。
接种密度要适当，不宜过稀或过密。
同时，需要将培养基中的氧气和二氧化碳平衡，通常使用CO2培养箱来提供适宜的气体环境。
第四步：细胞培养经过接种后，细胞开始在培养基中生长和分裂。
在培养过程中，需要控制细胞的温度、湿度和pH值，保持适宜的生长条件。
此外，定期更换新鲜的培养基可以提供足够的营养物质，维持细胞的正常生长。
第五步：细胞检测和观察细胞培养的过程中，需要定期对细胞进行检测和观察。
包括细胞数量的计数、形态的观察和生长曲线的绘制等。
通过这些检测和观察，可以了解细胞的健康状态、增殖速率以及其他相关参数。
第六步：细胞应用或冻存根据研究或实验的需要，可以选择将细胞用于进一步的实验、传代培养或冻存保存。
冻存细胞需要使用适当的冻存液，将细胞缓慢冷冻并存放在液氮罐中，以便长期保存。
细胞培养是一项需要耐心和细心的工作，每一步都需要严格控制条件和遵循操作规范。
只有如此，才能获得可靠的实验结果和高质量的细胞培养。
希望本文能为您提供参考，更好地开展细胞培养工作。
细胞培养工作流程
细胞培养工作流程细胞培养指的是将体外细胞放入适宜的培养基中，通过人工控制环境提供养分、温度、湿度和气氛等条件，使细胞能够在体外生长和繁殖的过程。
它是现代生物科学研究的重要手段之一、下面是细胞培养的基本工作流程：1.选择细胞系：根据研究目的，选择合适的细胞系进行培养。
常用的细胞系包括动物细胞系（如人类细胞系、小鼠细胞系）和植物细胞系（如拟南芥细胞系、水稻细胞系）等。
2.培养皿处理：将培养皿（常用的有细胞培养板、细胞培养瓶等）进行反应器瓶内蒸气温度消毒，消毒完后平行设置以备用。
3.准备培养基：根据细胞系的要求，配制适合的培养基。
培养基可以分为基本培养基和特殊培养基两种。
基本培养基是常规使用的培养基，包含至少4个组分：基础培养液（如DMEM、RPMI1640等）、热灭菌的胎牛血清、青霉素-链霉素溶液和培养液调节剂。
特殊培养基则根据细胞系的需要，添加特定的因子和配方，以满足特殊细胞的生长和繁殖要求。
4. 细胞接种：将细胞接入培养皿中。
首先需要将细胞接种得到的细胞进行计数，根据细胞密度和细胞系特性合理的安排接种密度。
常规的细胞接种密度为1×10^5 到5×10^5个细胞/ml。
然后将培养基加入培养皿中。
5.培养条件控制：将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的环境条件。
常见的条件有：温度通常为37℃，CO2浓度通常为5%，相对湿度约95%。
这样可以提供适宜的温度、气氛和湿度，保证细胞正常生长和繁殖。
6.细胞观察和维护：每天对细胞进行观察、记录和维护。
观察细胞的形态、增殖情况和污染情况等。
细胞一般分为贴壁生长和悬浮生长两种，贴壁细胞需要定期更换培养基，悬浮细胞则需要掌握细胞的密度从而进行传代。
7.细胞传代：当细胞密度到达一定程度（通常为80-90%）时，需要进行细胞传代，以维持细胞的生长和繁殖。
传代的方法包括机械切割、酶解等。
细胞传代的时机和方法由细胞的适应性和特性决定。
8.细胞冻存：为了保证细胞库的保存和维持，需要进行细胞的冻存。
细胞培养操作步骤及注意事项
细胞培养操作步骤及注意事项细胞培养操作步骤1. 准备培养基和培养器具：选择适合细胞生长的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。
准备培养器具，如细胞培养瓶、组织培养皿、离心管等。
2. 培养器具的消毒：将培养器具放入70%的乙醇或漂白水中浸泡约15-30分钟，然后用无菌PBS（磷酸盐缓冲液）清洗3次。
将培养器具在100摄氏度的烘箱中高温烘干或使用紫外线灯照射15-30分钟。
3. 细胞传代：将细胞从旧的培养瓶中移至新的培养瓶中，以防止细胞过度增殖和细胞衰老。
首先将培养瓶中的培养基抽吸掉，然后用PBS洗涤细胞2次，最后加入适量的胰酶消化细胞，使其与培养基充分接触，放置一段时间，观察细胞的离培情况，离心沉积细胞，弃去上清液，加入新的培养基。
4. 细胞培养条件控制：维持培养环境的适宜条件，包括温度、湿度、CO2浓度和培养基的pH值等。
通常细胞在37摄氏度、5%的CO2和95%湿度下生长。
定期检查培养器的培养基水平，保持培养基的适当量。
5. 细胞观察和记录：使用显微镜观察细胞的形态和数量，记录细胞培养的过程和实验结果。
注意控制细胞的密度，防止过度密集或过度稀疏。
6. 细胞分化和实验处理：根据需要，可以进行细胞的分化处理或实验处理，如加入药物、生化试剂等。
在处理时要注意药物的浓度、处理时间和处理温度等。
7. 细胞冻存：当需要长期保留细胞时，可以进行细胞冻存。
将细胞与冻存液混合，分装入冻存管中，置于液氮中冻存，以备将来使用。
细胞培养注意事项- 细胞培养实验应在无菌条件下进行，避免污染。
- 培养器具应事先消毒处理，防止细菌、真菌和病毒的污染。
- 培养基的配制要准确无误，严格按照操作手册或厂家提供的方法进行。
- 培养过程中要保持培养器的密闭性，以确保适宜的气体交换和温度控制。
细胞培养流程
细胞培养流程细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，通过细胞培养可以使细胞在体外环境中持续生长和繁殖。
细胞培养流程包括细胞的分离、传代、培养和检测等步骤，下面将详细介绍细胞培养的流程及注意事项。
1. 细胞分离。
细胞培养的第一步是从组织或细胞悬液中分离出需要的细胞种群。
常用的方法包括机械分离、酶消化和细胞筛选等。
在进行细胞分离时，需要注意避免对细胞造成损伤，保证细胞的完整性和活力。
2. 细胞传代。
细胞传代是指将细胞从一个培养皿中移植到另一个培养皿中，以维持细胞的生长和增殖。
在进行细胞传代时，需要注意细胞的密度和培养基的配比，以确保细胞的正常生长和分裂。
3. 细胞培养。
细胞培养是指将分离和传代后的细胞放置在含有营养物质和生长因子的培养基中进行培养。
培养基的选择和配制对细胞的生长和表型具有重要影响，需要根据不同类型的细胞进行合理选择。
4. 细胞检测。
在细胞培养过程中，需要对细胞进行定期的检测，包括形态学观察、生长曲线分析、细胞纯度检测等。
通过对细胞的检测，可以及时发现细胞的异常情况，并采取相应的措施进行处理。
细胞培养过程中需要注意的事项：保持无菌操作，细胞培养过程需要在无菌条件下进行，避免细胞受到外界污染。
控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等，确保细胞在适宜的环境中生长。
定期更换培养基，培养基中的营养物质和生长因子会随着时间逐渐耗尽，需要定期更换新的培养基。
避免细胞过度传代，过度传代会导致细胞老化和突变，影响细胞的生长和功能。
总之，细胞培养是一项复杂而又重要的实验技术，正确的细胞培养流程和操作规范对于细胞生物学研究具有至关重要的意义。
希望本文介绍的细胞培养流程及注意事项能够对您有所帮助，祝您的细胞培养工作顺利进行！。
细胞培养的操作步骤
细胞培养的操作步骤一、原代培养及其操作步骤原代分离细胞培养就是指从供体内取出组织后,经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群,使之在体外模拟人体生理环境,在无菌、适当温度与一定的营养条件下,生存、生长与繁殖。
原代培养细胞常有不同的细胞成分,生长缓慢,但就是更能代表所来源的组织细胞类型与表达组织的特异性特征。
利用原代细胞培养做各种实验,如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。
其操作步骤如下。
1、剪切组织先将所取得的组织,用D-Hankｓ或Hanks液清洗,以去除表面血污,并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。
再次清洗后,用手术刀将组织切成若干小块,移入青霉素小瓶或小烧杯中,加入适量缓冲液,用弯头眼科剪,反复剪切组织,直到组织成糊状,约１ｍm3大小。
静置片刻后,用吸管吸去上层液体,加入适当的缓冲液再清洗一次。
2、消化分离消化分离的目的就是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞,以利于进一步的培养,常用的消化酶有胰蛋白酶与胶原酶。
3、培养细胞悬液用计数板进行细胞计数。
用培养液将细胞数调整为(2～5)×１０5 ce ｌｌs／mｌ,或实验所需密度,分装于培养瓶中,使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。
置CO2培养箱内,５%CO２,37℃静置培养。
一般3～5d,原代培养细胞可以黏附于瓶壁,并伸展开始生长,可补加原培养液量1／2的新培养液,继续培养2~3ｄ后换液,一般7～14d可以长满瓶壁,进行传代。
4.注意事项(1)无菌操作:细菌或霉菌污染就是培养失败的常见原因,必须加强各个环节的无菌操作观念,以预防为主,一旦污染,一般很难消除。
(2)培养液:所用的培养液必须满足细胞生存与生长的必要条件。
由于细胞来源的动物种类、组织类型不同,对培养液的要求有一定的差异,必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。
(３)小牛血清:小牛血清对于维持培养细胞的生存与促进细胞增殖起着关键性作用。
医学实验中细胞培养的基本操作教程
医学实验中细胞培养的基本操作教程细胞培养是医学实验中常用的技术手段，可以通过培养细胞体外研究细胞结构、功能、代谢以及疾病的发病机制。
本文将介绍医学实验中细胞培养的基本操作教程，包括无菌操作、细胞传代和细胞培养基的制备。
一、无菌操作1. 器具准备：将工作区域和培养器具用70%乙醇喷雾消毒，将所需器具放入无菌工作台，待干燥后再进行后续操作。
2. 细胞培养基准备：将所需的细胞培养基放入无菌环境中，根据实验需求添加适量的血清、抗生素等。
3. 细胞取样：取出培养物中所需的细胞，使用吸管或移液器将细胞转移到无菌的培养基中。
4. 细胞传播：将细胞和培养基混合均匀后，转移到培养皿或培养瓶中，注意避免皿壁的污染。
5. 无菌操作结束：将使用过的培养器具进行无菌处理，清理工作区域并进行必要的消毒。
二、细胞传代1. 始代细胞收获：当细胞在培养器中达到一定密度后，使用细胞解离液将细胞从底物上解离下来。
2. 离心：将解离的细胞转移到离心管中，以适当的转速离心沉淀细胞。
3. 上清液去除：倒掉离心管中上清液，注意尽量不要干扰到细胞沉淀。
4. 细胞悬浮液制备：使用无菌PBS洗涤离心沉淀的细胞，再添加适量的细胞培养基将其悬浮均匀。
5. 细胞传代操作：将悬浮细胞转移到新的培养器具中，注意避免气泡的产生，并将培养基置于CO2孵化箱中培养。
三、细胞培养基的制备1. 培养基组成：根据实验需求，制备含有特定成分的培养基，如DMEM、RPMI 1640等。
2. 液体消毒：将容器进行高温高压灭菌，确保培养基的无菌。
3. 配方调整：按照实验需求向培养基中添加适量的血清、抗生素、谷氨酸等。
4. 混合均匀：使用无菌器具将添加好成分的培养基搅拌均匀，确保各成分充分溶解。
5. 培养基保存：将制备好的培养基用无菌器具装入培养瓶中，标明日期和成分，存放于4℃的冰箱中，避免阳光直射。
以上就是医学实验中细胞培养的基本操作教程，从无菌操作、细胞传代到培养基的制备，这些基本技术对于医学实验中的细胞研究至关重要。
细胞培养工作步骤
细胞培养工作步骤细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的技术。
它在生物学研究、药物筛选以及组织工程等领域有着广泛的应用。
下面将详细介绍细胞培养的工作步骤。
一、细胞株的选择和准备1.确定所需细胞株的种类和特性。
不同细胞株有不同的生物学特性和培养要求，因此需要选择合适的细胞株。
2.购买或获取合适的细胞株。
细胞株可以通过购买或从其他实验室获得。
确保细胞株的纯度和正常生长状态。
3.细胞株的复苏。
如果细胞株是冻存的，需要将其复苏并重新培养，以恢复其生长状态。
二、细胞传代1.收获细胞。
当细胞达到适当的生长程度时，可以通过离心或酶消化来将细胞从培养皿中收获。
2.细胞计数。
使用细胞计数仪对细胞进行计数，以确定细胞的密度。
3.传代细胞。
根据细胞株的生长速度和特点，将适量的细胞转移到新的培养皿中。
通常将细胞密度控制在适当的范围内，以避免过度或不足的细胞分离。
三、细胞培养与维持1.培养基的准备。
根据细胞株的要求配制合适的培养基，并确保培养基的无菌状态。
2.细胞接种。
在培养皿中加入适量的培养基和细胞，使细胞均匀分布在培养皿底部。
3.培养条件的控制。
控制培养室的温度、湿度和二氧化碳浓度，以提供适宜的生长环境。
定期检查培养皿中的细胞状态，并及时调整培养条件。
4.培养基的更换。
根据细胞的生长速度和代谢需求，定期更换培养基，以保持细胞的健康状态和生长活力。
5.细胞的分离和传代。
当细胞达到足够密度时，可以通过离心和酶消化将细胞从培养皿中收获，并进行传代培养。
四、细胞实验的准备1.细胞的收获和处理。
根据实验需求，收获和处理细胞，如离心、洗涤和冻存等。
2.细胞计数和分配。
根据实验要求对细胞进行计数，并将其均匀分配到不同的培养皿或器皿中。
3.细胞实验的操作。
根据具体实验的要求，进行相应的处理和操作，如细胞培养、细胞刺激、药物处理等。
4.实验的时间和条件控制。
根据实验需要，控制实验的时间、培养条件和实验室环境，以确保实验的可重复性和准确性。
简述细胞培养一般步骤
简述细胞培养一般步骤
细胞培养是指将细胞从生物体中分离出来，在适宜的培养基上进行体外培养的过程。
下面是细胞培养的一般步骤：
1. 细胞分离：将组织或器官中的细胞分离出来。
可以通过机械分离、酶消化、离心等方法进行。
2. 细胞计数：使用显微镜和计数板等工具，对分离出的细胞进行计数，以确定细胞的浓度。
3. 培养基准备：准备含有适当营养物质的培养基，以提供细胞所需的生长条件。
培养基通常包含生长因子、氨基酸、维生素、糖类、盐类等。
4. 细胞接种：将分离出的细胞加入到培养基中，使其悬浮或附着在培养器皿表面。
细胞接种密度通常根据细胞类型和实验需求进行调整。
5. 细胞培养：将培养器皿放置在恒温培养箱中，提供适当的温度、湿度和氧气等环境条件，以促进细胞的生长和繁殖。
培养过程中需要定期观察细胞的形态和生长情况。
6. 培养基更换：根据细胞的生长速度和代谢需求，定期更换培养基，以保持细胞的健康状态。
7. 细胞传代：当细胞密度达到一定程度时，需要将细胞分为若干个新的培养器皿中，以避免细胞过度拥挤和营养不足。
传代时需要用酶或其他方法将细胞从培养器皿中剥离。
8. 实验操作：根据实验需要，可以在细胞培养的基础上进行各
种实验操作，如药物筛选、基因转染、细胞凋亡检测等。
细胞培养的步骤可以根据具体实验的要求进行调整和优化，但以上步骤是细胞培养的一般过程。
细胞培养工艺操作
细胞培养工艺操作
细胞培养工艺操作是指在实验室中通过特定的操作步骤来培养和繁殖细胞。
以下是一般的细胞培养工艺操作流程：
1. 细胞培养容器消毒：将细胞培养器皿（如培养皿、培养瓶等）放入含有70%乙醇或其他适合的消毒液中浸泡一段时间，然
后用无菌工具或架起将其取出。
2. 细胞培养液的配制：根据需要选择适当的细胞培养液，加入所需的培养基、营养物质和生长因子等，按照指定比例和pH
值配制。
3. 细胞的接种：将已经培养好的细胞株加入到培养皿或培养瓶中，可以通过喷枪、注射或倒入法等方式进行接种。
4. 培养器的维持：将培养器置于恒温培养箱中，设定适当的温度、光照和通气条件，提供良好的培养环境，保持细胞的生长和繁殖。
5. 细胞的观察和检测：定期观察细胞的生长情况、形态和细胞密度，可以使用显微镜进行观察，并且可以通过细胞计数、增殖实验和细胞活力检测等方法来评估细胞的状态。
6. 细胞的分离和传代：当细胞数量增多时，可以进行细胞的分离和传代，将细胞移至新的培养器中，保持细胞活性和细胞株的纯度。
7. 检测细胞的纯度和品质：可以通过细胞鉴定方法，如PCR、免疫组化和染色体分析等来验证细胞的纯度和品质。
8. 储存和保存：将培养好的细胞冷冻保存或制备细胞冻存物，以备后续实验或重新培养使用。
以上是一般的细胞培养工艺操作流程，不同细胞类型和实验目的可能会有所不同，操作过程中需要遵循无菌操作原则和实验室安全规范。
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一、试剂1、培养基新买的培养基可直接使用，使用前加FBS(胎牛血清)至10 %终浓度(250mL 培基中加入25mL血清)。
自配的培养基使用前需进行无菌检测。
配制过程：（1）取出两张0.22μm微孔滤膜（上海半岛公司生产），用超纯水淋洗后再浸泡其中数小时。
（2）将滤器与试剂瓶洗净烘干。
（3）取出浸泡好的滤膜，组装滤器，包扎纱布与牛皮纸，高温高压灭菌滤器与试剂瓶。
（4）完成灭菌，待冷却后取出滤器和试剂瓶转入超净台中，组装滤器，连接好恒流泵，紫外灭菌半小时。
（5）灭菌期间取一袋培养基粉末溶于约980-990 mL超纯水中（注意超纯水冲洗包装袋1-2次，防止粉末残余），按产品说明添加所需的药品，搅拌溶解（注意用保鲜膜封口）。
（6）pH计测培养液pH（pH计使用前需进行校准，同时清洗探头），用1 M HCL 或1 M NaOH将pH调整至合适的数值。
（7）培养液定容至1000 mL。
（8）将培养液转入灭菌好的超净台中，恒流泵以橡皮管连接培养液，玻璃钟罩拆开牛皮纸与纱布后过火并连接试剂瓶（瓶口注意过火）。
（9）打开恒流泵，调整橡皮管的培养液抽取方向，开始过滤。
（10）当滤器下方橡皮管中出现培养液时，以止血钳夹住橡皮管，将滤器上部的气阀旋松；待气阀处溢出培养液后，拧紧气阀，取下止血钳，开始过滤。
（11）过滤开始和结束时分别取5 mL培养液转入小方瓶中，放入培养箱中检测（48 h），过滤好的培养液试剂瓶注明配制日期、培养基名称和配制者姓名，放入4 C冰箱中保存。
（12）取出恒流泵与滤器，将超净台清理干净，注意将滴撒有培养液的地方擦拭干净。
（13）拆开滤器，观察滤膜有无破损（若破损此次过滤作废，需重新过滤），清洗滤器。
（14）无菌检测合格后，方可添加血清使用。
2、胰酶按配方（0.25 g胰酶粉末与0.03 g EDTA溶于100 mL超纯水，NaHCO3溶液调节pH至7.6-7.8）配制胰酶溶液后，在超净台中用0.22 μm针头过滤器过滤分装无菌试剂瓶或离心管，4 ︒C冰箱保存使用，其余-20 ︒C冰箱保存。
3、PBS按配方（8.5 g NaCl，0.2 g KCl，2.85 g Na2HPO4-12H2O，0.27 g KH2PO4）配制1000 mL溶液，pH调至7.2左右，转入试剂瓶中，包扎好瓶口与瓶盖，高温高压灭菌。
灭菌完成后，在超净台中盖好瓶盖，放入干净处保存。
4、DMSO:二甲基亚砜购买的DMSO（Sigma公司生产，100 mL装）为无菌包装，可直接使用，使用前将其分装到15 mL无菌离心管中，放入干净处储存。
5、血清目前实验室血清使用的是购自Hyclone的胎牛血清（FBS，南美血缘，500 mL 液体），为冰冻状态。
购置后在-20 ︒C冰箱中冻存，使用前置于4 ︒C冰箱中解冻（按产品说明和使用需要，如需灭活则置于56 ︒C恒温水槽中灭活半小时）。
解冻的FBS转入超净台中，用无菌移液管将其分装到50 mL离心管中，标明FBS 与分装日期，按使用量添加FBS到培养液中，其余放入-20 ︒C冰箱冻存。
由于现在Hyclone的产品在中国市场比较混乱，出现一些假冒产品，且在肿瘤细胞的培养过程中使用新生牛血清亦可达到同样的培养效果，拟以后购买新生牛血清（Gibco产）；若需用到胎牛血清，则购买Hyclone FBS（新西兰血缘）。
6、MTT称取0.1044 g MTT粉末放入洗净的烧杯中，添加20 mL PBS溶解（试剂配制终浓度为5 mg/mL），转入超净台中用0.22 μm无菌针头滤器过滤至离心管中，过火盖盖后注明试剂名称、日期与使用者，以锡箔纸包裹住置于4 ︒C冰箱中避光保存。
7、双抗称取0.12 g青霉素G钠和0.31 g链霉素硫酸盐，加入10 mL PBS溶解，转入超净台中用针头滤器过滤至无菌离心管中，过火盖盖后注明试剂名称、日期与使用者，使用时按1:100比例加入培养基中。
二、耗材1、细胞培养瓶目前实验室中所用的细胞培养瓶为Corning公司生产的一次性塑料培养瓶（25 cm2和75 cm2两种规格），为无菌包装，可直接使用。
现有玻璃方瓶（购自中科院上海实生生物技术有限公司），使用前需进行预处理清洗。
清洗方法为：（1）将玻璃方瓶置于酸缸中浸泡过夜，以中和玻璃表面碱性物质。
使用后的玻璃方瓶应立即浸入清水中，避免器皿内蛋白质干涸后粘附于玻璃上导致难以清洗，浸泡一段时间后转入酸缸中。
浸泡时应将器皿完全浸入水中，使水浸入器皿内而无气泡空隙遗留。
（2）第二天取出玻璃方瓶，先用流水冲洗三次，再用超纯水冲洗三次，烘干备用。
（3）高温高压湿热消毒，为保证消毒效果，灭菌时不应装得太满，以便灭菌锅内气体流通。
2、离心管目前细胞间所用的15 mL和50 mL 离心管均为Corning公司生产的，为无菌包装，可直接使用。
同时拟购买一批国产离心管（10 mL规格），按不同要求选择使用。
3、移液管目前有可重复使用的玻璃移液管（需高温高压灭菌）和一次性的塑料移液管（Brand公司旗下Nunc产品，无菌包装，可直接使用）。
4、枪头买回的枪头摆放在枪头盒中高温高压灭菌，使用前放进超净台，盒子标明使用者，注意分开使用，长时间内未用完的枪头需再次灭菌；同时需注意尽量精简超净台的使用空间。
5、一次性无菌针头滤器一次性针头滤器为Millipore生产的0.22 μm无菌包装，可直接使用。
6、一次性无菌针头注射器一次性针头注射器为国产新苏公司生产的无菌包装，可直接使用。
三、细胞复苏（1）超净台紫外杀菌，取出培养液置于传递窗中。
（2）杀菌到时后，进入细胞间，穿好实验服，戴上口罩与乳胶手套。
（3）关闭紫外，培养液转入超净台前先喷洒酒精。
（4）酒精棉擦手后，先在超净台中取出10 mL含血清培养液，置于15 mL离心管中待用。
（5）准备一杯37 C左右的温水，将细胞取出液氮罐，放入温水中。
（6）用镊子夹住冻存管，轻轻摇晃，使其快速溶解。
（7）待冻存管中液体解冻后，迅速放入传递窗中。
（8）超净台中擦拭冻存管，过火旋松。
（9）将冻存管中液体转入事先准备好的完全培养液中，800 rpm离心4 min。
离心完成后弃上清（返回超净台后注意擦拭手套与管口，动作轻柔以防细胞散开重回到上清液中），加3 mL培养液重悬，转入细胞培养瓶中，再用3 mL培养液清洗离心管，防止细胞残余。
盖好瓶盖后放入培养箱中，24 h后观察，如有必要，进行换液。
（10）清理超净台，将培养液放回冰箱。
四、细胞传代（1）先将培养液与胰酶放入传递窗中预热，同时将废液缸和PBS放入超净台中紫外灭菌20-30 min（台面擦拭干净）。
（2）灭菌完成后，将细胞从培养箱中取出，放入传递窗中。
（3）进入缓冲间穿好实验服，戴上口罩和乳胶手套。
（4）关闭紫外，细胞、胰酶与培养液转入超净台前先喷洒酒精。
（5）超净台中酒精棉擦手，再将培养瓶和试剂瓶依次擦净，过火旋松。
（6）将培养瓶中液体轻轻倒去，注意与废液缸口保持距离。
（7）PBS清洗培养瓶1-2次（液体不要直接冲洗贴壁面瓶壁，移液枪枪身不要接触瓶口）。
（8）取适量胰酶加入到培养瓶中，盖上瓶盖，将培养瓶平放并轻轻摇晃，使胰酶覆盖整个瓶壁，随后倒去胰酶（注意瓶口过火）。
（9）以培养瓶中残余的胰酶消化细胞，待到瓶壁上的细胞可见将要脱落或已经开始脱落，即加入培养液终止消化。
（10）用5 mL枪头或10 mL移液管吸取培养瓶中液体轻轻吹打瓶壁，吹打干净后将培养液转入离心管中，800 rpm离心4 min。
（11）离心完成后弃上清（注意动作轻柔以防细胞损伤），加入新鲜培养液重悬，吹打均匀以防细胞团聚。
（12）按传代的接种密度将所需用量的重悬液转入培养瓶中，补加适量的培养液，盖好瓶盖。
（13）将其他的试剂瓶盖子盖好，并将超净台面收拾干净，取出废液缸。
（14）将培养瓶放入培养箱中培养，其他试剂瓶放回冰箱中；废液缸清空并冲洗。
五、细胞冻存（1）将小管装的FBS与DMSO置于传递窗中升至室温。
（2）PBS与废液缸放入超净台中紫外杀菌（台面擦拭干净），培养液与胰酶放入传递窗预热。
（3）灭菌完成后，将细胞从培养箱中取出，置于传递窗中。
（4）进入缓冲间，换好实验服，戴上乳胶手套和口罩。
（5）将细胞与试剂瓶转入超净台中，转入前注意喷洒酒精。
（6）酒精棉擦手，依次擦拭试剂瓶与培养瓶，过火旋松瓶盖。
（7）离心管中按所需用量配制冻存液：70 %培养液，20 % FBS（FBS比例可再提高），10 % DMSO。
吹打混匀，过火盖盖。
（8）倒去培养瓶中的培养液，PBS (5mL)冲洗1-2次。
（9）加入胰酶(1mL)，盖上盖子后平放轻摇瓶身，使胰酶覆盖贴壁面瓶壁，随后倒去胰酶。
（10）以残余胰酶消化细胞，待细胞将要脱落或已经开始脱落，即加入培养液终止消化。
（11）用移液枪或移液管轻轻吹打瓶壁，收集细胞。
（12）将培养瓶中液体转入离心管中，800 rpm离心4 min。
（13）离心完成后弃上清（返回超净台中注意擦拭手套与管口），注意动作轻柔，不要将已沉淀的细胞重新摇晃回液体中。
（14）加入冻存液，重悬细胞。
（15）打开准备好的冻存管，将重悬的细胞分别装入冻存管中。
（16）写上细胞名称、传代次数、冻存日期和冻存者姓名，封口膜封口。
（17）将试剂瓶瓶盖盖好，超净台擦拭干净。
（18）冻存管放入冻存盒中，转入-80 C冰箱中过夜。
（19）试剂瓶放回冰箱中，废液缸清理干净。
（20）第二天将冻存盒中的细胞转入液氮罐中保存，记下冻存位置。
（21）隔天后取出一管细胞复苏，检测冻存效果，并在保存记录中注明。
六、超净台使用平时超净台内仅可放置移液枪，待进行操作时将实验所需的试剂耗材等转入超净台中紫外杀菌，打开紫外前注意用酒精棉擦拭台面；实验操作过程中，注意物品在超净台中的摆放位置，不要使操作过程变得过长繁琐，以实际操作时间与细胞暴露于空气的时间达到最小为最佳；做完实验后，熄灭酒精灯，将所有物品移出超净台，清理台面。
七、培养箱使用培养箱所处房间平日需关上隔间门，每次打开培养箱前，需将手洗净或用酒精棉擦拭，打开过程应及时迅速，取出培养瓶后，瓶子应尽量保持平放状态，但同时需注意不要使瓶内培养液触及瓶口部位；显微镜下观察细胞，用时不要过长。
培养箱水盘中的纯水需定期更换，并清洗后用酒精棉擦拭水盘。
培养箱清理：如有培养液打翻，需及时清理，用酒精棉擦拭干净；每个月定期清理培养箱一次，用酒精棉擦拭；待到长假期间，细胞间所有人员均暂停细胞培养时，用84消毒液或新洁而灭溶液喷洒消毒，补喷氨水加速消毒液的散发。
八、冰箱使用培养液、双抗与PBS放置于海尔冰箱（4︒C）中，胰酶、MTT、DMSO（15 mL离心管分装）等其他试剂放置于西门子冰箱冷藏室（4︒C）中，购回分装好的FBS与配置的胰酶放置于西门子冰箱冷冻室（-20 ︒C）中，已解冻使用的FBS 与胰酶放置于4︒C冰箱中保存。