微生物检验常规鉴定技术

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微生物快速检测方法

检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
Biblioteka Baidu 培养膜法_快速检测纸片技术
优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。 ➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 金黄色葡萄球菌使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
酶联免疫技术—mini-Vidas全自动免疫分析仪

微生物的检测方法有哪些？

微生物是一类广泛存在于自然界中的生物，具有重要的生态和经济意义。而准确、快速地检测微生物是保障环境安全、食品安全和医疗健康的重要手段。微生物检测技术可分为传统的微生物培养法、免疫学方法、分子生物学方法等。随着科研的不断进步与发展，许多新颖快速的方法也不断涌出，比如阻抗法、免疫磁性微球、电化学基因传感技术、流式细胞术、代谢学技术、自动旋转平板和激光菌落扫描计数法等。下面我们将介绍几种常用的微生物检测方法：

1.传统微生物培养法

传统培养法是微生物检测中最常用的方法之一，是利用化学培养基和其他条件，将来自感染部位或其他来源的微生物细胞在人工环境中进行培养的方法，并通过形态、染色、生理和代谢特性等来鉴定和分类。在一定时间后，观察培养基上是否出现菌落并进行计数和形态鉴定，从而得到微生物种类和数量信息的一种方法。传统培养法的优点是成本低、易于操作，能够获取微生物的生长特性及药敏信息。然而，该方法需要较长的时间（3—5天或更长），不能检测异常生长的微生物或微生物的休眠状态，同时在培养过程中易受到外部环境的影响，具有一定局限性。

1.分子生物学方法

分子生物学检测方法是一种利用生物大分子（如DNA、RNA、蛋白质等）为基础，通过分子水平的技术手段来检测目标物质的一系列方法。在微生物检测中，分子生物学检测方法通常是指可以直接从样品中提取微生物的DNA或RNA进行检测，例如聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）、DNA芯片以及下一代测序等技术。其中，PCR是一种最常用的分子生物学检测方法之一，它可以扩增特定的DNA片段并进行定量和质量分析，适用于微生物数量检测、菌株检验、病原体检测等。qPCR技术是PCR的一种改进，可以进行实时检测，具有快速、高效、准确的特点，广泛应用于微生物定量分析。DNA芯片是另一种基于分子生物学的检测方法，在一个小型的芯片上集成多个不同的核酸探针，可以同时对多个

微生物化验方法

微生物化验的方法有很多，以下为您推荐：

１．琼脂平板培养法：因培养基不同，琼脂平板法分为选择性培养基检测法和显色培养基检测法。选择性培养基是在培养基中加入选择性抑制剂来抑制非目标微生物生长；显色培养基是在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，以菌落颜色区分目的菌落与非目的菌落。

２．显微镜镜检法：将待测样品中的微生物富集后，于油镜下直接计数。显微镜镜检法通常与琼脂平板培养法结合使用，通过琼脂平板培养法对菌落进行定性分析，再用显微镜进行定量计数。

３．微生物测试片检测技术：一般情况下，微生物测试片由印有网格的聚丙烯薄膜和覆盖有培养基和显色物质的聚乙烯薄膜组成。待测样品经过处理后可直接接种在微生物测试片上，然后放置在适宜的温度下培养——使固定在测试片上的显色物质与待检微生物生长产生的特异性酶发生显色反应，形成有颜色的菌落，通过对这些菌落进行计数便可实现检测。

对未知微生物分类鉴定的一般方法和步骤

一、动物系统分类法

1.鉴定未知微生物的分类类别：在进行分类鉴定时，首先要根据宏观形态和生理特性判断未知微生物的分类类别，一般形态特征和生理特征包括形态（大小、色泽）、营养和繁殖方式、体腔结构、细菌孢子形态等。

2.确定动物分类纲：根据未知微生物的分类类别，确定其分类系统纲名，包括属到了什么种，这个种归属于什么属，以及属属于什么科，然后可以将未知微生物很好的放到动物系统分类纲系统中。

3.准确鉴定未知物种：最后，根据未知微生物的形态特征、生理特性以及分类系统纲等信息，准确地鉴定未知物种，这也是实际的分类鉴定的最后过程。

二、分子生物学法

1.收集样本：首先，收集未知微生物样本，将其进行必要的实验检验。

2.提取DNA：通过基因工程技术，从未知微生物样本中提取出DNA 片段，以便进行分子鉴定。

3.PCR扩增：使用引物对DNA片段进行PCR扩增，以得到足够的片段区域。

4.测序：使用合成荧光标记技术，对PCR扩增出来的目的片段进行测序。

5.核酸分析：对测序出来的序列进行分析，以便判断未知微生物的种系归属。

6.结果确认：根据核酸分析结果，将得到的种系归属结果，结合实验室分析，以及实际应用环境等，最终确认鉴定结果。

微生物检验常用技术与方法—临床细菌检验技术与方法(微生物检验课件)

基质试验阳性
方法：将待检菌接种于蛋白胨水中，35℃培养24～48h，取出后沿试管壁加入靛基质试剂数滴，在
两液面观察结果。
结果
第三节细菌生化鉴定技术
二、蛋白质和氨基酸的代谢
2、硫化氢试验
原理：细菌产生酶，分解含硫氨基酸生成硫化氢，硫化氢与培养基中的亚铁盐
或铅盐结合生成黑色化合物
方法：将细菌穿刺接种到醋酸铅培养基中， 35℃、
验阳性
方法：把待检细菌接种在葡萄糖蛋白胨水中，35℃培养 48h后，按每毫升培养液加入 0.1ml含2％肌酸或肌酐的40 ％KOH溶液,数分钟或数小时
后观察结果
结果
空白对照阴性
阳性
第三节细菌生化鉴定技术
5、 β-半乳糖苷酶试验（ONPG）
原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D半乳糖苷 (ONPG)而生成黄色的邻硝基苯酚，
1.特殊结构染色法（4）异染颗粒染色法
异染颗粒亚甲蓝染色结果：白喉棒状杆菌， ×1000
第一节细菌形态检验技术
（三）其他染色法
2.负染色法
墨汁荚膜染色（脑脊液中的新型隐球菌，×400）
第一节细菌形态检验技术
二、不染色标本镜检
1.压滴法
第一节细菌形态检验技术
二、不染色标本镜检
2.悬滴法
第一节细菌形态检验技术二、不染色标本镜检

微生物学检验基本技术汇总

微生物学检验基本技术

随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。

第一节微生物形态学检查

细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。

一、显微镜检查

由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。常用显微镜有如下几种。

1．普通光学显微镜

采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。故用油（浸）镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。2．暗视野显微镜

常用于观察不染色微生物形态和运动。在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。

3．相差显微镜

相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。

微生物学的检验方法都有哪些

随着现代科技的飞速发展，各个学科之间存在着相互交叉和渗透，比如微生物学检验技术被广泛地应用到医学检验当中。微生物学检验技术的研究水平如今已经上升到细胞、分子、甚至基因，各种各样的新技术推动着医学技术的发展。微生物学检验在医学研究、治疗、诊断当中都扮演着重要的角色，接下来的内容就将向您微生物学的检验方法有哪些？

对微生物做形态学检查是微生物检验的重要方法之一，可以有效地对细菌进行分类和鉴定。其主要是根据细菌的形态、结构、染色反应等特性来判断细菌的状态，从而为接下来的鉴定提供有力的参考依据。

一、显微镜检查

我们都知道，细菌的体积是很小，仅通过肉眼是没有办法看到的，必须借助其它放大倍数比较大的设备（比如显微镜）才可以观察到。在显微镜下可以观察到细胞的一般形态和结构，如果想要观察细菌的内部结构，则需要借助电子显微镜。显微镜有很多种类，以下为常用的显微镜：

1.普通光学显微镜

普通的光学显微镜采用自然光或灯光作为光源，光源的波长在0.4微米左右，显微镜的分辨率是波长的一般，也就是0.2微米。但是人体肉眼能见的最小物质为0.2毫米，和显微镜的分辨率相差了很多，所以需要用油（浸）镜将目标物放大1000倍，这样才能比较清晰地进行观察。

普通的光学显微镜一般可用作观察细菌、真菌、放线菌等。

2.暗视野显微镜

暗视野显微镜，顾名思义就是在视野呈现暗色的显微镜，其原理是在普通光学显微镜中安一个暗视野聚光器，这样就使光线不能从中间直接透过。目标物接收到从聚光器边缘射出的光之后可以发生散射，就能在视野较暗的情况下观察光亮的微生物，形成一个明显的反差，观察结果会更清晰。

微生物学检验常用的技术方法

微生物形态学检查

细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。

一、显微镜检查

1.普通光学显微镜

采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。故用油(浸)镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。

2.暗视野显微镜

3.相差显微镜

微生物检验技术介绍

微生物检验技术是医学、生物学、化学等多个学科领域交叉融合的前沿技术，其主要目的是通过对微生物的形态、结构、生理生化特性等进行观察、测定和分析，为疾病诊断、病原体鉴定、流行病学调查等方面提供重要依据。以下是微生物检验技术的主要内容：

一、传统微生物学检验技术

传统微生物学检验技术是建立在经典微生物学的基础上，通过形态学、生理生化等特征对微生物进行鉴定和分类。该方法具有简单、直观、快速等优点，但易受主观因素和经验限制，且无法对某些微生物进行准确鉴定。

1、显微镜检查

显微镜检查是微生物检验的基本方法之一，通过观察微生物的形态、大小、结构等特征，对微生物进行初步鉴定。该方法主要用于细菌、真菌等微生物的观察。

2、培养基培养

培养基培养是一种常用的微生物分离培养方法，通过在培养基中接种

微生物，观察其生长情况，进行分离、鉴定和计数。该方法可用于细菌、真菌等微生物的培养。

3、生化鉴定

生化鉴定是通过测定微生物对各种生化试剂的反应，了解其生理生化特性，从而对微生物进行鉴定和分类。该方法可用于细菌、酵母菌等微生物的鉴定。

二、现代微生物学检验技术

随着科技的发展，现代微生物学检验技术越来越趋向于自动化、快速化和高精度化。以下是一些常见的现代微生物学检验技术：

1、免疫学检测技术

免疫学检测技术是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过制备特异性抗体，对样本中的抗原进行检测。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已被广泛应用于医学、食品等领域。

2、分子生物学检测技术

分子生物学检测技术是一种基于DNA或RNA等核酸分子的检测方法，通过分析核酸分子的序列、结构等特征，对微生物进行鉴定和分类。

微生物常规鉴定技术

一、形态结构和培养特性观察

１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结

定性。

霉菌

同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛

状和蜘蛛网状菌落。

二、生理生化试验

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。

微生物检验中常用的生化反应有：

１、糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产

气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半

因而每

指示剂。

天。然后

阳性反应

化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不

宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。

３、V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，

称V－P（+）反应。

试验方法：

１）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O’Meara 试剂1~2min，

水浴放

5°Cα萘酚（

微生物常规鉴定技术与方法

微生物常规鉴定技术与方法是指一系列用于鉴定微生物种类及其特征的实验方法和技术。通过对微生物的形态特征、生理特性、生化反应和分子生物学等方面的研究，可以进行微生物的鉴定和分类。以下将介绍常见的微生物常规鉴定技术与方法。

一、形态特征鉴定

形态特征鉴定是利用光学显微镜观察微生物的形态特征来进行鉴定的方法。包括观察细胞形态、大小、颜色、有无芽孢、纤毛、胞内结构等。形态特征鉴定主要用于细菌、真菌、微藻和鞭毛虫等微生物的鉴定。二、生理特性鉴定

生理特性鉴定是通过观察微生物生长特性和代谢反应来进行鉴定的方法。其中包括鉴定微生物的生长速度、产酸或产气能力、耐受盐浓度、耐温范围、对氧气的需求等。生理特性鉴定常用于细菌的分类和鉴定。三、生化反应鉴定

生化反应鉴定是利用微生物在特定条件下的代谢反应来进行鉴定的方法。通过观察微生物产生酶的能力和对特定底物的降解效果等生化特性，可以鉴定微生物的种类。常用的生化反应鉴定方法包括培养基的成分、酶活性测定、氧化还原反应等。

四、免疫学鉴定

免疫学鉴定是利用抗原与抗体的特异性反应来进行鉴定的方法。通过检测微生物的抗原或抗体反应，可以确定微生物的种类。免疫学鉴定主要用于病原微生物的鉴定，如细菌、病毒和寄生虫等。

五、分子生物学鉴定

分子生物学鉴定是通过检测微生物基因组的特异序列来进行鉴定的方法。主要包括核酸杂交、聚合酶链反应(PCR)和基因测序等技术。这些技术可以直接从微生物的DNA或RNA提取物中进行特异序列的扩增、测序和比对，从而确定微生物的种类。分子生物学鉴定方法具有高特异性和敏感性，已经成为微生物鉴定的重要工具。

微生物检验的基本操作技术分析

微生物检验是对于部分产品（只要是人类食用或直接接触使用的产品）进行

细菌污染的定性或定量检验，并对于产品中的微生物种类、数量、性质及其对于

人类产生的影响等进行检验，又被称为卫生检验。微生物检验主要负责具体样品

的微生物检验工作；检验数据统计、整理、分析并出具检验报告；微生物检验实

验室的日常管理和检验设备的维护工作；负责洁净车间的环境监控。微生物是以

微型原生生物为主的生物群，微生物与人类之间关系密切。同时，微生物还包括

有益和有害两类微生物。

微生物检验是产品检测中不可缺少的一部分。其一，微生物检验工作决定了

产品的卫生质量，是产品安全检验中的重要环节，微生物检验通过检验产品中微

生物的分布及含量，能够有效地展现产品的安全程度；其二，通过微生物检验，

可以使相关人员正确地了解产品的污染卫生程度，保证产品的卫生安全水平，有

效地防治由于微生物中毒造成社会公共安全卫生事件；此外，进行微生物检验工

作必须坚持“预防为主”的工作方针，有效减少或杜绝微生物中毒事件的发生，

有效地保障人们的身体健康安全；其三，微生物检验可以有效地促进产品质量，

确保产品安全。

首先，微生物检验需要遵循无菌操作原则。无菌操作是微生物检验中的首要

原则，无菌操作是保证微生物检验准确性的重要前提，在微生物检测过程中，检

验人员需要防止其他微生物对于人体造成侵害，同时，还要保证在无菌区或不受

污染的区域进行微生物检验，是保证微生物检验准确性和顺利完成的重要技术。

微生物检验无菌操作技术主要包括两方面：一方面，创造无菌的微生物培养环境。包括提供密闭的微生物培养容器、微生物培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；另

微生物常见检测方法

微生物与人类之间存在着密切的联系，对于人类的影响是双向的，有些益于

健康，还有些则是比较严重的病原体，可导致传染病的流行，危害人类的身体健

康和生命安全，所以微生物的检测十分重要。下面为大家介绍微生物及常见的检

测方法。

1.什么是微生物？

微生物是指个体难以用肉眼看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜才能观

察到的一切微小生物的总称，包括细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次氏体、支

原体、衣原体和螺旋体。有些微生物是可以用肉眼看见的，比如属于真菌的蘑菇、香菇和灵芝等。

微生物具有体小面大、结构简单，代谢旺盛，生物转化快、种类多且分布广泛，生长繁殖快等特征，体小面大是说微生物的体积比较小，如球菌的体积约为

1mm3，但其表面积却很大；与大型动物相比，微生物具有极高的生长繁殖速度，

以大肠杆菌为例，可以在12.5-20分钟内繁殖1次。

微生物有着拮抗和分解的作用，其中拮抗是针对人体来讲，微生物通过拮抗

作用，抑制并排斥过路菌群的入侵和群集，有效调整人体和微生物之间的平衡；

分解作用则是指对土壤产生的作用，土壤中含有大量的有机质，微生物可以分解

有机质，使土壤变得肥沃，同时微生物还可以分泌出多种酶和生长刺激素，促进

植物或农作物的生长。微生物对人类最严重、最重要的影响便是导致传染病的流行。根据世界卫生组织公布的资料显示：传染病的发病率和病死率在所有疾病中

占据第一位。

2.微生物常见检测方法

要想了解微生物的检测方法，首先要知道的是微生物鉴定的用途是什么？从

目前来看，微生物鉴定主要用于医疗保健、流行病学、制药工业以及刑事调查、

实验室微生物溯源鉴定方法

在实验室微生物鉴定中，形态学、生物化学、分子生物学、血清学、质谱学、基因型鉴定以及抗原抗体鉴定等方法都为微生物的溯源提供了有效的手段。这些方法的综合应用可以帮助我们更准确、更快速地鉴定微生物，进一步为疾病诊断、治疗以及公共卫生等方面提供依据。

1. 形态学鉴定：

形态学鉴定是利用显微镜观察微生物的形态和结构，从而鉴定不同种类的微生物。包括细菌、病毒、立克次体、衣原体和支原体等微生物都可以通过形态学方法进行鉴定。鉴定过程涉及样品的制备、染色和观察，可以观察到微生物的大小、形状、排列、鞭毛、芽胞等特点，根据这些特点判断微生物的种类。

2. 生物化学鉴定：

生物化学鉴定是通过分析微生物的生物化学特性，鉴定不同种类的微生物。主要包括糖类、脂肪、蛋白质等成分的分析。鉴定过程中，需要对微生物进行培养，然后分析其代谢产物、酶活性等生化指标，再根据这些指标判断微生物的种类。生物化学鉴定对于一些难以培养的微生物尤为重要。

3. 分子生物学鉴定：

分子生物学鉴定是基于微生物的DNA或RNA序列进行分析，从而鉴定不同种类的微生物。常用的方法包括DNA提取、PCR扩增和基因分型等。通过分析微生物的基因组序列，可以获得微生物的基因信息，进而判断其种属和亚种。此外，分子生物学鉴定还可以检测微生物的耐药性基因，为临床治疗提供指导。

4. 血清学鉴定：

血清学鉴定是通过分析血清中的抗体与微生物抗原的反应，鉴定不同种类的微生物。常用的方法包括凝集反应、沉淀反应、补体结合试验等。血清学鉴定的优点是特异性高，可以区分相似微生物种类。同时，血清学鉴定还可以用于流行病学调查和传染源追踪，有助于疾病的诊断和治疗。

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第一章微生物检验常规鉴定技术

课堂教学计划（1学时）

第一章微生物检验基本知识

包括显微镜、染色技术、培养基制备技术、接种、分离纯化和培养技术等。

接种、分离纯化和培养技术

一、接种

将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

１、接种工具和方法

接种和分离工具

1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀

常用的接种方法有以下几种：

１）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C 左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至

固体培养基中，都可称为液体接种。

７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

２、无菌操作

培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。

图5－４斜面接种时的无菌操作

(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞

二、分离纯化

含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

１、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成

一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。（图5－５，a）

图5－５倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解

1.菌悬液

2.熔化的培养基

3.培养物

4.无菌水

２、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图5－５，b）

３、平板划线法

最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图5－６）当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。（图5－７）

４、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。

图5－６平板划线分离法

1.斜线法

2.曲线法

3.方格法

4.放射法

5.四格法

５、厌氧法

在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

三、培养

1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。

好氧培养：也称“好气培养”。就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。

厌氧培养：也称“厌气培养”。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一点就是要除去培养基中的氧气。一般可采用下列几种方法：

a.降低培养基中的氧化还原电位：常将还原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等，加入到培养基中，便可达到目的。有的将一些动物的死的或活的组织如牛心、羊脑加入到培养基中，也可适合厌氧菌的生长。

b.化合去氧：这也有很多方法，主要有：用焦性没食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气；用植物组织如发芽的种子吸收氧气；

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